測定鐵-碳水化合物絡合物中不穩定鐵含量的方法

2023-12-08 08:03:26 1

測定鐵-碳水化合物絡合物中不穩定鐵含量的方法
【專利摘要】本發明提供了一種測定鐵-碳水化合物絡合物中不穩定鐵含量的方法，包括步驟：使鐵-碳水絡合物與人血清接觸，將與人血清結合的不穩定鐵還原為二價鐵；將還原得到的二價鐵與顯色劑作用生成有色化合物，測量有色化合物的吸光度；與經過同樣還原及顯色反應處理的鐵標準液進行比較，計算得到鐵-碳水絡合物中不穩定鐵的含量。本發明方法的檢測靈敏度高、精密度好，準確度高，能夠快速、準確、定量地測定鐵-碳水化合物中不穩定鐵含量，可以對(尤其是靜脈)鐵補充製劑的質量進行科學和有效的控制，保障臨床用藥的安全。
【專利說明】測定鐵-碳水化合物絡合物中不穩定鐵含量的方法

【技術領域】
[0001] 本發明涉及鐵補充製劑的分析方法，具體涉及一種測定鐵-碳水化合物絡合物中 不穩定鐵（III)含量的方法。

【背景技術】
[0002] 鐵元素是人體必不可少的微量元素之一，是構成血紅蛋白、肌紅蛋白、細胞色素和 多種氧化酶的重要成分，作為氧的載體，保證機體組織內氧的正常輸送。
[0003] 鐵在許多組織細胞被吸收或攝取都是通過經典的轉鐵蛋白（transferrin, Tf)和 轉鐵蛋白受體（transferrin receptor, TfR)的途徑，即三價鐵首先與Tf結合，兩者的結合 物再與細胞表面的TfR結合，之後經過內吞、酸化、釋放和移位等步驟，鐵進入胞漿，最終被 細胞利用，合成血紅蛋白及其他物質。
[0004] 鐵缺乏時不能合成足夠的血紅蛋白，造成缺鐵性貧血。臨床上，缺鐵性貧血診斷成 立並查明病因後應立即給予補鐵治療。一般情況下，口服鐵劑為首選，但口服鐵劑常引發明 顯的胃腸道不適，有報導稱近1/5的病人因此而中斷治療。口服鐵劑還受到食物成分的幹 擾以及體內鐵儲備的影響，尤其是許多慢性病、腎臟疾病、心臟病和腫瘤患者，鐵的吸收和 利用也會受到影響。對於這部分患者，臨床醫生應考慮給予靜脈補鐵。此外，缺鐵性貧血伴 胃腸道疾病患者需要快速恢復體內鐵貯備而口服不足以達到這一目標時，也可將靜脈補鐵 作為首選。
[0005] 目前國內外已研製出多種含有鐵-碳水化合物絡合物的鐵補充靜脈注射製劑，包 括葡萄糖酸鐵鈉注射劑、蔗糖鐵注射液、注射用蔗糖鐵、右旋糖酐鐵注射液、山梨醇鐵注射 液等。以葡萄糖酸鐵鈉注射劑為例，它是一種葡萄糖酸鐵鈉複合物製備的膠體混懸液並作 為前藥使用，其中葡萄糖酸鐵鈉複合物包含與葡萄糖酸絡合的膠體氫氧化鐵顆粒（鐵核）。 這些鐵核通過將氯化鐵用鹼中和值PH為2獲得，在該pH下飽和氫氧根離子形成膠體氫氧 化鐵，其在形成後與葡萄糖酸原位絡合。所得的複合物被網狀內皮系統的細胞攝取，釋放出 鐵離子。鐵離子再與轉鐵蛋白結合，轉鐵蛋白進而將其轉運至骨髓用於紅細胞生成或者轉 運至鐵蛋白和骨髓、脾和肝中的的鐵貯存部位。一般來說，鐵核的結構遵循配位化學。碳水 化合物的羥基替換鐵核外表所結合的水分子，從而使碳水化合物與鐵核結合。
[0006] 然而，所述鐵補充靜脈注射製劑中也包含一些與複合物的核心未結合或者弱結合 的鐵元素，形成不穩定鐵。這些不穩定鐵很容易被化學反應或血漿中的絡合劑如蛋白所活 化，這會導致鐵補充製劑在靜脈給藥後鐵元素的快速釋放，即突釋作用。不穩定鐵的釋放可 以使轉鐵蛋白迅速飽和而造成非轉鐵蛋白結合鐵的出現，而非轉鐵蛋白結合鐵可以催化有 害的氧化應激反應，在臨床上引起甚至可能致命的急性不良反應。
[0007] 現有技術公開了鐵的四種測定原理：1)亞鐵嗪比色法原理：血清鐵和運鐵蛋白結 合成複合物，在酸性介質中鐵從複合物中解離出來，再被還原劑還原成二價鐵，並與亞鐵嗪 生成紫紅色化合物，在波長562nm處有一吸收峰，與同樣處理的標準液比較，即可求得血清 鐵的含量。2)雙聯吡啶比色法原理：在酸性條件下使鐵從與蛋白質結合狀態中游離出來。 用鹽酸羥胺作還原劑使血清中三價鐵還原成二價鐵，後者與雙聯吡啶顯色劑反應生成紅色 螫合物，在520nm處比色定量。本法簡便快速，但靈敏度差，幹擾因素較多，尤以鐵質汙染最 為嚴重，溶血也會影響結果。3)菲洛嗪比色法原理：三氯醋酸-鹽酸混合液使血清中的鐵 從運鐵蛋白中釋放並使蛋白沉澱，釋放出來的三價鐵可用硫代乙醇酸還原成二價鐵，後者 和菲洛嗪結合成紫紅色化合物，吸收峰為562nm。4)血清總鐵結合力（TIBC) :在血清樣品 中加足量的鐵標準液使運鐵鐵蛋白被鐵飽和，過量的鐵用MgCO3除出，離心取上清液，按測 血清鐵的方法求出鐵的含量，即為TIBC.(《生理學》，人民衛生出版社，2012)。然而，上述方 法僅涉及鐵含量測定的基本原理，實際在不同條件下對具體物質進行測定時仍會存在較大 偏差。目前還沒有關於測定鐵靜脈製劑中不穩定鐵含量方法的報導。因此，有必要開發一 種穩定、可靠的測定靜脈鐵製劑中不穩定鐵含量的方法，並以該方法為基礎對鐵補充製劑 的質量進行評估。


【發明內容】

[0008] 本發明的目的是提供一種測定鐵-碳水化合物絡合物中不穩定鐵含量的方法，特 別用於對含有鐵-碳水絡合物的製劑，例如靜脈鐵補充製劑進行體外質量的評價，保障臨 床用藥的安全。
[0009] 本發明通過以下技術方案實現上述目的：
[0010] 一種測定鐵-碳水化合物絡合物中不穩定三價鐵含量的方法，包括步驟：
[0011] 使鐵-碳水絡合物與人血清接觸，將與人血清結合的不穩定三價鐵還原為二價 鐵；將還原得到的二價鐵與顯色劑作用生成有色化合物，測量有色化合物的吸光度；與三 價鐵標準液經過同樣還原及顯色反應處理獲得的鐵濃度-吸光度標準曲線進行比較，計算 得到鐵-碳水絡合物中不穩定三價鐵的含量。
[0012] 所述鐵-碳水化合物絡合物中不穩定鐵為與所述絡合物的核心未結合或者弱結 合的三價鐵離子。所述弱結合鐵為絡合物中易於參與化學反應或與其他鐵絡合物構成組分 反應的鐵元素。
[0013] 本發明中，所述的鐵-碳水化合物絡合物可以溶液形式或者製劑形式存在。所述 的不穩定三價鐵可以存在於鐵-碳水化合物絡合物中，也可以存在於包含鐵-碳水化合物 絡合物的溶液或製劑中。
[0014] 在一種實施方式中，所述測定鐵-碳水化合物絡合物中不穩定三價鐵含量的方 法，包括步驟：
[0015] 使鐵-碳水絡合物與人血清混合，在混合的三個以上不同時間點分別獲取混合 物，加入蛋白變性劑中止反應，再將與人血清結合的三價鐵還原為二價鐵；然後將還原得到 的二價鐵與顯色劑作用生成有色化合物，測得其吸光度，以混合時間為橫坐標，吸光度為縱 坐標，得到曲線方程，求得時間為0時的吸光度數值，將該吸光度數值代入由三價鐵標準液 經過同樣還原及顯色反應處理獲得的鐵濃度-吸光度標準曲線方程，計算得到樣品中不穩 定三價鐵的含量。
[0016] 在一種實施方式中，所述測定鐵-碳水化合物絡合物中不穩定三價鐵含量的方 法，包括步驟：
[0017] 1)標準曲線的建立：
[0018] 配製三種以上不同濃度的三價鐵標準品系列溶液，分別吸取一定量的鐵標準品 系列溶液，在酸性介質中還原劑作用下將其還原為二價鐵，然後將顯色劑與二價鐵作用生 成有色化合物，測得吸光度，以三價鐵的濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，得到標準曲線方 程；
[0019] 2)鐵-碳水絡合物樣品的處理：
[0020] 將人血清與鐵-碳水絡合物樣品混合進行共孵育，其中所述樣品中鐵的總含量換 算為人血清鐵濃度優選為50?180 μ g/mL，在孵育的三個以上不同時間點分別獲取一定量 的樣品，加入蛋白變性劑中止反應，在酸性介質中還原劑作用下將與人血清結合的三價鐵 還原為二價鐵，顯色劑與二價鐵作用生成有色化合物，測得吸光度，以孵育時間為橫坐標， 吸光度為縱坐標，得到曲線方程，求得時間為〇時的吸光度數值，將該吸光度數值代入標準 曲線方程，計算得到鐵-碳水絡合物樣品中不穩定三價鐵的含量。
[0021] 上述鐵的總含量中的鐵為樣品中穩定和不穩定鐵的總含量；更具體地，為穩定和 不穩定的三價鐵的總含量。
[0022] 所述配製三價鐵標準液的標準品可以是結晶硫酸鐵銨（分子式FeNH4(SO 4)2 " 12H20)。所述三價鐵標準品系列溶液的濃度可以是0. 1?100 μ g/ml，優選5?80 μ g/ml， 例如5、10、20、30、40、50、60、70、8(^8/1111以及上述範圍內的其他數值。鐵標準品系列標準 液優選為上述濃度範圍內的3種以上不同濃度，例如配製3種、4種、5種、6種不同濃度的標 準液。
[0023] 所述鐵-碳水絡合物中的碳水化合物選自葡萄糖酸鹽、蔗糖、右旋糖酐、糊精和山 梨醇中的一種或多種。
[0024] 所述鐵-碳水絡合物的樣品與人血清混合的比例是，樣品中鐵的總含量以人血清 鐵濃度計為 50 ?180μ g/ml，優選 65 ?170μ g/ml，例如 70、80、90、100、110、120、130、140、 150、160 μ g/ml等上述範圍內的任意數值。
[0025] 所述鐵-碳水絡合物的樣品與人血清的共孵育時間為10?60min，優選30? 60min〇
[0026] 所述測量的時間點為在孵育的三個不同時間點，例如10、20或60分鐘；還可以是 孵育的四個不同時間點，如10、20、30、45min。還可以是4個以上時間點。不同時間點測量 可以提高準確性，且易於監控。
[0027] 所述蛋白變性劑選自尿素、硫脲、3-[3_(膽醯胺丙基）二甲氨基]丙磺酸內鹽 (CHAPS)、二硫蘇糖醇（DTT)、IPG緩衝液中的一種或多種。優選硫脲，在起到蛋白變性作用 的同時屏蔽銅離子幹擾。
[0028] 所述酸性介質的加入量以使體系pH控制為1?4為宜，保證還原反應完全。酸性 介質優選為朽 1檬酸。
[0029] 所述還原劑選自抗壞血酸、還原性黃素單核苷酸、連二亞硫酸鹽、羥基乙酸鹽、氫 醌、乳酸或乳酸鹽、檸檬酸或檸檬酸鹽、碳酸氫鹽、丙酮酸鹽、琥珀酸或琥珀酸鹽、果糖、半胱 氨酸和山梨醇中的一種或多種。優選為弱酸性還原劑抗壞血酸。還原劑存在的量為相對於 鐵-碳水化合物絡合物至少約10倍過量，優選30倍過量，更優選50倍過量。
[0030] 所述顯色劑為亞鐵嗪。
[0031] 在一種優選實施方式中，將酸性介質和蛋白變性劑同時加入，以及將還原劑和顯 色劑同時加入，這樣即不會影響檢測結果，還可以簡化步驟，方便操作。此外，所述顯色劑與 還原劑同時加入，可以使還原產生的二價鐵立即與顯色劑發生反應生成有色化合物，同時 促進還原反應的進行。所述還原反應和顯色反應的時間約為30?60min，優選60min。
[0032] 所述有色化合物是在用分光光度計在波長562nm處測定吸光度。
[0033] 在一種具體的實施方式中，所述測定鐵-碳水化合物絡合物中不穩定三價鐵含量 的方法，包括步驟：
[0034] 1)標準曲線的建立：
[0035] 在室溫下，配製0. 1?100 μ g/mL範圍3種以上不同濃度的鐵標準品系列溶液， 分別在所述鐵標準品系列溶液（如100 μ 1)中加入含有檸檬酸（如200mM)的水溶液（如 700 μ 1)，再加入含抗壞血酸（如150mM)和亞鐵嗪（如6mM)的水溶液（如350 μ L)，反應後 (如60min)用分光光度計於562nm處測定吸光度，以鐵濃度為橫坐標X，吸光度為縱坐標Υ， 得到標準曲線方程Y = aX+b;
[0036] 2)鐵-碳水絡合物樣品的不穩定鐵含量的測定：
[0037] 在室溫下，將人血清與鐵-碳水絡合物樣品混合進行孵育，其中樣品中鐵的總含 量換算為血清鐵濃度為50?180 μ g/mL，分別在孵育過程中的三個或以上的不同時間點取 樣品（如100 μ 1)加入含硫脲（如115mM)和檸檬酸（如200mM)的水溶液（如700 μ 1)， 然後加入含抗壞血酸（如150mM)和亞鐵嗪（如6mM)的水溶液（如350 μ L)，反應後（如 60min)用分光光度計於562nm處測定吸光度，以孵育時間為橫坐標X1，吸光度為縱坐標Y 1 進行線性回歸，得到方程Y1 = S1XJb1，由此得到時間為0時的吸光度數值為Id1 ;將樣品吸光 度數值h代入標準曲線方程，計算求出樣品中不穩定鐵的含量。
[0038] 同上所述，優選地，所述標準品為結晶硫酸鐵銨；所述鐵標準品系列溶液的濃度優 選為5?80 μ g/ml ;所述鐵-碳水絡合物樣品與人血清混合的比例是，樣品中鐵的總含量 以人血清鐵濃度計為65?170 μ g/ml。
[0039] 本發明中，鐵-碳水絡合物中不穩定三價鐵的還原符合一級動力學，本發明的上 述檢測方法，可以檢測任意含有鐵-碳水絡合物的製劑，可以是口服或注射等劑型，如葡萄 糖酸鐵鈉注射液、蔗糖鐵注射液、山梨醇鐵注射液、右旋糖酐鐵注射液、糊精鐵注射液、複方 卡鐵注射液等，檢測靈敏度高、精密度好，準確度高，能夠快速、準確、定量地測定鐵-碳水 化合物中不穩定鐵含量，可以對（尤其是靜脈）鐵補充製劑的質量進行科學和有效的控制， 保障臨床用藥的安全。

【具體實施方式】
[0040] 以下實施例可以用於進一步了解本發明的特點和優點，但不應理解為限制本發明 的保護範圍。任何在本發明基礎上做出的改進和變化，都在本發明的保護範圍之內。
[0041] 除特別標明外，實施例所用的儀器和試劑均為普通市售產品。
[0042] 實施例1 :
[0043] 鐵貯備液的配製（100 μ g/ml):精確稱取結晶硫酸鐵銨[FeNH4(SO4)2 " 12H20] (Aladdin Industrial Corporation)0.860g，用去離子水溶解後加濃硫酸（AR) 2. 0ml，移入 IL容量瓶中加去離子水稀釋至刻度作為貯備液。
[0044] 鐵標準系列溶液配製：分別移取鐵貯備液5,10,20,30,40ml，分別加入到IOOml 容量瓶中，加去離子水定容至刻度，搖勻作為鐵標準系列溶液，濃度分別為5,10, 20, 30， 40 μ g/ml〇
[0045] 鐵標準曲線建立：在室溫下，於I. 5mlEP管中分別加入鐵標準系列溶液各100 μ 1， 然後加入含200禮檸檬酸的水溶液（試劑1)70(^1，最後加入含151111抗壞血酸和61111亞 鐵嗪的水溶液（試劑Π ) 350 μ L，反應60min後用分光光度計（島津UV2401)於562nm處 測定吸光度。以濃度為橫坐標X，吸光度為縱坐標y進行線性回歸，繪製得出標準曲線方程 為：y = 0· 0158χ+0· 0023, r = 0· 9985。
[0046] 葡萄糖酸鐵鈉製劑中不穩定鐵含量的檢測：在室溫下，於I. 5mL EP管中，人血清 (Biosharp)與葡萄糖酸鐵鈉蔗糖複合物注射液（SANOFI AVENTIS US LLC)孵育，鐵劑加入 量換算為血清鐵濃度為166. 70μ g/mL，分別在孵育時間10、20、30、4511^11，取10(^1樣品加 入含115mM硫脲和200mM檸檬酸的水溶液（試劑I)700ul，然後加入含150mM抗壞血酸和 6mM亞鐵嗪的水溶液（試劑II) 350 μ L，反應60min後用分光光度計於562nm處測定吸光度。 [0047] 結果計算：以孵育時間為橫坐標X1，吸光度為縱坐標yi進行線性回歸，繪製得出曲 線方程為Y1 = 〇. 0118XJ0. 0869，r = 0. 9978。由此得到時間為0時吸光度為0. 0869,帶入 鐵標準曲線計算得出不穩定鐵濃度為5. 354 μ g/ml。
[0048] 取同批次葡萄糖酸鐵鈉製劑樣品共重複上述實驗過程5次，進行測定和數據計 算，結果如表1所示。
[0049] 表 1
[0050] L0051」 買施例2 :

【權利要求】
1. 一種測定鐵-碳水化合物絡合物中不穩定三價鐵含量的方法，其特徵在於，所述方 法包括如下步驟： 使鐵-碳水絡合物與人血清接觸，將與人血清結合的不穩定三價鐵還原為二價鐵；將 還原得到的二價鐵與顯色劑作用生成有色化合物，測量有色化合物的吸光度；與三價鐵標 準液經過同樣還原及顯色反應處理獲得的鐵濃度-吸光度標準曲線進行比較，計算得到 鐵-碳水絡合物中不穩定三價鐵的含量。
2. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述方法包括如下步驟： 使鐵-碳水絡合物與人血清混合，在混合的三個以上不同時間點分別獲取混合物，力口 入蛋白變性劑中止反應，再將與人血清結合的三價鐵還原為二價鐵；然後將還原得到的二 價鐵與顯色劑作用生成有色化合物，測得其吸光度，以混合時間為橫坐標，吸光度為縱坐 標，得到曲線方程，求得時間為〇時的吸光度數值，將該吸光度數值代入由三價鐵標準液經 過同樣還原及顯色反應處理獲得的鐵濃度-吸光度標準曲線方程，計算得到樣品中不穩定 鐵的含量。 進一步優選的，包括如下步驟： 1) 標準曲線的建立： 配製三種以上不同濃度的三價鐵標準品系列溶液，在酸性介質中還原劑作用下將其還 原為二價鐵，然後將顯色劑與二價鐵作用生成有色化合物，測得吸光度，以三價鐵的濃度為 橫坐標，吸光度為縱坐標，得到標準曲線方程； 2) 鐵-碳水絡合物樣品的處理： 將人血清與鐵-碳水絡合物樣品混合進行共孵育，其中所述樣品中鐵的總含量換算為 人血清鐵濃度優選為50?180 μ g/mL，在孵育的三個以上不同時間點分別獲取一定量的 樣品，加入蛋白變性劑中止反應，在酸性介質中還原劑作用下將與人血清結合的鐵還原為 二價鐵，顯色劑與二價鐵作用生成有色化合物，測得吸光度，以孵育時間為橫坐標，吸光度 為縱坐標，得到曲線方程，求得時間為0時的吸光度數值，將該吸光度數值代入標準曲線方 程，計算得到樣品中不穩定鐵的含量。
3. 如權利要求1或2所述的方法，其中所述蛋白變性劑選自尿素、硫脲、3-[3-(膽醯胺 丙基）二甲氨基]丙磺酸內鹽、二硫蘇糖醇、IPG緩衝液中的一種或多種；優選硫脲。 所述酸性介質為檸檬酸。 所述還原劑選自還原性黃素單核苷酸、連二亞硫酸鹽、羥基乙酸鹽、氫醌、乳酸或乳酸 鹽、檸檬酸或檸檬酸鹽、碳酸氫鹽、丙酮酸鹽、琥珀酸或琥珀酸鹽、果糖、半胱氨酸、山梨醇和 抗壞血酸中的一種或多種。優選為弱酸性還原劑抗壞血酸。 所述顯色劑為亞鐵嗪。
4. 如權利要求1-3任一項所述的方法，其中所述酸性介質和蛋白變性劑同時加入，然 後顯色劑與還原劑同時加入，使還原產生的二價鐵立即與顯色劑發生反應生成有色化合 物；所述還原反應和顯色反應的時間約為60min。 所述還原反應和顯色反應的時間分別約為30?60min，優選60min。 優選地，所述酸性介質的加入量使體系pH控制為1?4。 所述還原劑用量為相對於鐵-碳水化合物絡合物至少約10倍過量，優選30倍過量，更 優選50倍過量。
5. 如權利要求1-4任一項所述的方法，其中所述有色化合物是在用分光光度計在波長 562nm處測定吸光度。
6. 權利要求1-5任一項所述的方法，包括步驟： 1) 標準曲線的建立： 在室溫下，配製〇. 1?100 μ g/mL範圍3種以上不同濃度的鐵標準品系列溶液，分別在 所述鐵標準品系列溶液（如100 μ 1)中加入含有檸檬酸（如200mM)的水溶液（如700 μ 1)， 再加入含抗壞血酸（如150mM)和亞鐵嗪（如6mM)的水溶液（如350μ L)，反應後（如 60min)用分光光度計於562nm處測定吸光度，以鐵濃度為橫坐標X，吸光度為縱坐標Υ，得到 標準曲線方程Y = aX+b ; 2) 鐵-碳水絡合物樣品的不穩定鐵含量的測定： 在室溫下，將人血清與鐵-碳水絡合物樣品混合進行孵育，其中樣品中鐵的總含量換 算為血清鐵濃度為50?180 μ g/mL，分別在孵育過程中的三個或以上的不同時間點取樣品 (如100 μ 1)，加入含硫脲（如115mM)和檸檬酸（如200mM)的水溶液（如700 μ 1)，然後加 入含抗壞血酸（如150mM)和亞鐵嗪（如6mM)的水溶液（如350 μ L)，反應後（如60min) 用分光光度計於562nm處測定吸光度，以孵育時間為橫坐標Xi，吸光度為縱坐標Yi進行線 性回歸，得到方程t = aJi+bi，由此得到時間為0時的吸光度數值為h ;將樣品吸光度數值 匕代入標準曲線方程，計算求出樣品中不穩定鐵的含量。 同上所述，優選地，所述標準品為結晶硫酸鐵銨；所述鐵標準品系列溶液的濃度優選為 5?80μ g/ml ;所述鐵-碳水絡合物樣品與人血清混合的比例是，樣品中鐵的總含量以人血 清鐵濃度計為65?170 μ g/ml。
7. 如權利要求1-6任一項所述的方法，其中所述鐵-碳水化合物絡合物中的碳水化合 物選自葡萄糖酸鹽、蔗糖、右旋糖酐、糊精和山梨醇中的一種或多種。 所述配製三價鐵標準液的標準品可以是結晶硫酸鐵銨（分子式FeNH4(S04)2 · 12H20)。 所述三價鐵標準品系列溶液的濃度可以是〇. 1?100 μ g/ml，優選5?80 μ g/ml，例如 5、10、20、30、40、50、60、70、80μ g/ml以及上述範圍內的其他數值。鐵標準品系列標準液優 選為上述濃度範圍內的3種以上不同濃度，例如配製3種、4種、5種、6種不同濃度的標準 液。 所述鐵-碳水絡合物的樣品與人血清混合的比例是，樣品中鐵的總含量以人血清鐵濃 度計為 50 ?180μ g/ml，優選 65 ?170μ g/ml，例如 70、80、90、100、110、120、130、140、150、 160 μ g/ml等上述範圍內的任意數值。
8. 如權利要求1-7任一項所述的方法，其中所述鐵-碳水化合物絡合物樣品與人血清 的共孵育時間為10?60min，優選30?60min。
9. 如權利要求1-8任一項所述的方法，其中所述標準品為結晶硫酸鐵銨；所述鐵標準 品系列溶液的濃度為5?80 μ g/ml。
10. 如權利要求1-9任一項所述的方法，其中所述鐵-碳水絡合物樣品與人血清混合的 比例是，樣品中鐵的總含量以人血清鐵濃度計為65?170 μ g/ml。
【文檔編號】G01N21/31GK104237223SQ201410526312
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年10月8日 優先權日:2014年10月8日
【發明者】趙俊, 陳祥峰, 蔡繼蘭, 宗在偉, 於歡, 金雪鋒, 李豔芝, 劉留成 申請人:江蘇奧賽康藥業股份有限公司