一種礦化膠原人工骨膜及其製備方法

2023-12-03 06:59:11 1

一種礦化膠原人工骨膜及其製備方法
【專利摘要】本發明提供一種礦化膠原人工骨膜，該人工骨膜使用納米鈣磷鹽與膠原纖維有序排列的礦化膠原製成，具有與天然骨膜一致的物質組成和微觀及宏觀結構，並具備良好的力學性能和生物降解特性，可以用於骨膜的替代和修復。本發明的人工骨膜可以在修復過程中將其它植骨材料限制在骨缺損部位，避免植骨材料脫出及肌肉、脂肪等組織被擠壓進入骨缺損部位中，影響修復效果。該人工骨膜的孔隙結構有利於血管的再生和營養物質的輸送，從而有益於骨缺損的修復。由於礦化膠原人工骨膜由納米鈣磷鹽和膠原纖維組成，因此該人工骨膜在體內可隨骨組織及骨膜的再生而逐漸被降解。本發明還提供了該人工骨膜的製備方法。
【專利說明】
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物醫用材料領域，具體涉及一種用於骨膜的替代和修復的礦化膠原 人工骨膜及其製備方法。 一種礦化膠原人工骨膜及其製備方法

【背景技術】
[0002] 骨折、骨不連、骨延遲癒合等是臨床上常見的骨科疾病，除了存在骨組織缺損，這 些疾病還都涉及骨膜的缺損。因此，在進行骨缺損修復的同時，還應當對骨膜的缺損進行修 復，以達到更好的臨床修復效果。然而，目前還沒有可供臨床使用的人工骨膜產品。
[0003] 骨膜是覆蓋在除關節部位以外骨表面的薄膜，是一層堅固的結締組織包膜。天然 的骨膜可分為內外兩層：外層為纖維層，由膠原纖維緊密結合而成，含有成纖維細胞；內層 為發生層，含有較粗的膠原纖維，並含有骨祖細胞，可以在特定條件下向成骨細胞分化。成 纖維細胞和骨祖細胞都會分泌一定的細胞外基質，該細胞外基質主要是一種天然的礦化膠 原成分，其中膠原呈規則排列的多級結構，並為鈣磷鹽的礦化提供模板，從而形成有序排列 的礦化膠原複合體。骨膜可通過血管向骨組織提供營養物質，對骨組織的生長發育以及骨 組織缺損的修復起到至關重要的作用。
[0004] 目前，在手術中對於骨折、骨不連、骨延遲癒合及其它骨缺損的修復主要採用骨移 植的辦法，使用自體骨、同種異體骨或人工骨等各類骨植入材料對骨缺損進行填充，以期達 到修復的目的。然而，現行的手術方案在植骨後通常並不對骨膜進行修復，而是直接逐層縫 合肌肉和皮膚，使得植骨材料難以被很好地限制在缺損部位而產生脫出，或者肌肉、脂肪等 組織被擠壓進入骨缺損中，影響修復效果，甚至造成更嚴重的併發症(例如植骨材料脫出後 壓迫其它組織和神經)。
[0005] 因此，有必要在骨修復手術中對植骨後的骨缺損修復區域進行包覆，達到替代和 重建骨膜的目的，降低植骨材料脫出的風險，以及防止肌肉、脂肪等組織被擠壓進入骨缺損 部位，影響修復效果。目前臨床上並沒有專門的骨膜修復產品，一些膜狀植入材料可以被用 作骨膜的替代和修復，這類材料主要有脫細胞基質膜、可降解聚合物膜、膠原膜等，然而這 些材料均各自存在較大缺陷。
[0006] 脫細胞基質膜通過對人或其它動物來源的組織進行處理，獲得以細胞外基質為主 要成分的膜狀材料。該材料的免疫原性較大，植入體內易引起免疫排斥反應，不利於骨缺 損的修復。可降解聚合物膜包括可降解天然生物質材料(如殼聚糖)、可降解人工合成材料 (如聚乳酸）等，天然生物質材料作為外源性生物製品，普遍存在引發免疫排斥反應的風險， 而聚乳酸、聚羥基乙酸等人工合成材料的降解產物呈酸性，易引發無菌炎症，對骨的礦化不 利。現有的膠原膜產品則存在機械性能差、降解速率過快等缺陷，達不到臨床上對人工骨膜 的性能要求。因此，現有的膜狀植入材料均各自存在較大缺陷，不利於骨缺損癒合，不適合 用作骨膜的替代物或用於骨膜的修復。


【發明內容】

[0007] 針對上述現有技術的不足，本發明提供一種礦化膠原人工骨膜，該人工骨膜使用 納米鈣磷鹽與膠原纖維有序排列的礦化膠原製成，具有與天然骨膜一致的物質組成和微觀 及宏觀結構，並具備良好的力學性能和生物降解特性，可以用於骨膜的替代和修復。本發明 還提供了該人工骨膜的製備方法。
[0008] 本發明的第一方面，提供了一種礦化膠原人工骨膜。該人工骨膜在宏觀上呈扁平 膜狀結構，厚度〇. 1?0.5 mm，具有一定的孔隙結構，孔隙率為10%?30%。在微觀結構上， 該人工骨膜的基本結構單元為有序排列的納米鈣磷鹽與膠原纖維，其中納米鈣磷鹽晶體的 c軸沿膠原纖維的長軸方向排列。
[0009] 所述礦化膠原人工骨膜可自由彎曲和摺疊。
[0010] 所述礦化膠原人工骨膜中膠原與鈣磷鹽的質量比為2:1?5:1。
[0011] 所述納米鈣磷鹽的粒徑為20?200 nm，鈣元素和磷元素的摩爾比為1/1?2/1。 進一步地，所述納米鈣磷鹽為納米羥基磷灰石，粒徑為20?200 nm。
[0012] 本發明的第二方面，提供了本發明第一方面所述礦化膠原人工骨膜的製備方法， 包括以下操作步驟： 步驟S1、礦化膠原仿生複合材料製備，具體包括： 步驟S1-1、將膠原溶於鹽酸、硝酸或醋酸中的任何一種，配製成膠原的酸溶液，其中膠 原濃度為 5·0Χ10_5 ?5.0X10_3 g/mL; 步驟S1-2、持續攪拌步驟S1-1所得溶液，緩慢滴加含鈣離子的溶液，鈣離子的加入量 為每克膠原對應加入鈣離子〇. 002?0. 01 mol ; 步驟S1-3、持續攪拌步驟S1-2所得溶液，緩慢滴加含磷酸根離子的溶液，磷酸根離子 的加入量與步驟S1-2中鈣離子加入量的摩爾比為Ca/P = 1/1?2/1 ; 步驟S1-4、持續攪拌步驟S1-3所得溶液，緩慢滴加 NaOH溶液至混合體系pH = 6?8， 當pH = 5?6時，混合體系開始出現沉澱，當pH = 7時,混合體系出現白色懸池液； 步驟S1-5、將步驟S1-4所得混合體系靜置24?120小時，分離出沉澱並洗去雜質離 子，隨後對混合體系進行濃縮，直至獲得固液比為0.03?0.06 g/mL的礦化膠原膠凍。
[0013] 步驟S2、礦化膠原的灌模及冷凍乾燥，具體包括： 步驟S2-1、量取一定量步驟S1-5獲得的礦化膠原膠凍填入模具中並鋪平，根據所制 備礦化膠原人工骨膜的厚度，使得模具上每cm2裝填的礦化膠原膠凍中含有固體0. 006 ~ 0· 032 g ; 步驟S2-2、將步驟S2-1灌模後的礦化膠原膠凍進行充分冷凍乾燥，獲得礦化膠原海 綿。
[0014] 步驟S3、礦化膠原的交聯，具體包括： 步驟S3-1、配製0. 005?0. 25 wt%的戊二醛的乙醇溶液作為交聯劑； 步驟S3-2、將步驟S2-2獲得的礦化膠原海綿浸泡於步驟S3-1配製的交聯劑溶液中24 ~ 48小時，進行交聯； 步驟S3-3、將步驟S3-2獲得的礦化膠原海綿從交聯劑溶液中取出，置於層析柱中，以 流動的純水洗滌48 ~ 72小時，以除去殘留的交聯劑； 步驟S3-4、將步驟S3-3獲得的礦化膠原海綿進行真空乾燥或者冷凍乾燥，獲得交聯的 礦化膠原海綿。
[0015] 步驟S4、礦化膠原膜的成型，具體包括： 步驟S4-1、將步驟S3-4獲得的交聯的礦化膠原海綿置於輥壓機上，施加8?20 MPa的 壓力，並保壓5 ~ 20秒，獲得礦化膠原膜； 步驟S4-2、根據臨床需求對步驟S4-1獲得的礦化膠原膜進行切割、修剪，獲得礦化膠 原人工骨膜。
[0016] 其中，步驟S1-5所述分離出沉澱並洗去雜質離子的過程可以採用離心的方法，也 可以採用抽濾、超濾、透析等膜分離技術進行；所述濃縮可以採用離心的方法，也可以採用 抽濾、超濾、透析等膜分離技術進行，也可以採用低溫真空乾燥的方法進行。當採用透析方 法進行濃縮時，包括以下步驟： 步驟I、測定洗滌後混合體系沉澱的滲透壓n i，然後將該混合體系沉澱置於截留分子 量為10, 000?20, 000的透析袋中，將透析袋埠密封； 步驟II、將透析袋置於滲透壓為π 2的溶液D(如1，000, 000分子量聚環氧乙烷的水溶 液）中進行透析，其中π 2 > π 1; 步驟III、記錄透析袋剛放入溶液D時^12的下降變化率為r(l，監控透析過程中^1 2的 變化，當η 2的下降變化率小於iVlO時更換透析袋外的溶液D，並重新測定透析袋內的滲 透壓^ ; 步驟IV、重複步驟II和III，直到透析袋內獲得目標濃度的礦化膠原膠凍。
[0017] 其中，步驟S2-2中，灌模後的模具在冷凍乾燥的預凍步驟中必須使模具底面處於 水平狀態，以免冷凍乾燥後得到的礦化膠原海綿厚度不均勻。
[0018] 其中，步驟S3-3的交聯劑去除過程除了水洗，也可以採用乙醇洗，或者水洗和乙 醇洗相結合的方法。
[0019] 實施本發明，可以獲得與天然骨膜物質組成和微觀及宏觀結構均高度一致的礦化 膠原人工骨膜。該人工骨膜適用於骨缺損修復中骨膜的替代和修復，可以在修復過程中將 其它植骨材料限制在骨缺損部位，避免植骨材料脫出及肌肉、脂肪等組織被擠壓進入骨缺 損部位中，影響修復效果。該人工骨膜的孔隙結構有利於血管的再生和營養物質的輸送，從 而有益於骨缺損的修復。由於礦化膠原人工骨膜由納米鈣磷鹽和膠原纖維組成，因此該人 工骨膜在體內可隨骨組織及骨膜的再生而逐漸被降解。總而言之，本發明所提供的礦化膠 原人工骨膜具備高度仿生性，填補了目前臨床上骨膜替代和修復材料的一大空白，具有廣 闊的應用前景。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0020] 圖1為本發明的礦化膠原人工骨膜的製備方法流程圖； 圖2為本發明的礦化膠原人工骨膜產品照片； 圖3為本發明的礦化膠原人工骨膜與天然骨膜的X射線衍射圖譜對比。
[0021]

【具體實施方式】
[0022] 為了更好的說明本發明的內容，下面結合附圖和具體實施例對本發明作進一步說 明。
[0023] 實施例1，30 _ X 25 _ X 0. 25 mm人工骨膜的製備 圖1所示為本發明礦化膠原人工骨膜的製備方法流程圖。根據圖1所示步驟，長30 mm、 寬25 mm、厚0. 25 mm的礦化膠原人工骨膜的製備步驟為： 步驟S1-1、將1 g膠原溶於2 L濃度為0. 5 mol/L的醋酸溶液，配製成膠原的酸溶液； 步驟S1-2、持續攪拌步驟S1-1所得溶液，緩慢滴加30 mL濃度為0. 2 mol/L的CaCl2 溶液； 步驟S1-3、持續攪拌步驟S1-2所得溶液，緩慢滴加30 mL濃度為0. 12 mol/L的Na2HP04 溶液； 步驟S1-4、持續攪拌步驟S1-3所得溶液，緩慢滴加0. 5 mol/L的NaOH溶液至混合體系 pH = 7 ； 步驟S1-5、將步驟S1-4所得混合體系靜置48小時，過濾出沉澱，並用純水離心洗滌5 次，隨後採用離心的方法進行濃縮，至混合體系總體積為25 mL時停止濃縮，獲得礦化膠原 膠凍； 步驟S2-1、量取2.6 mL步驟S1-5獲得的礦化膠原膠凍填入長33 mm、寬27 mm的模具 中並鋪平； 步驟S2-2、將步驟S2-1灌模後的礦化膠原膠凍進行充分冷凍乾燥，獲得礦化膠原海 綿； 步驟S3-1、配製0. 1 wt%的戊二醛的乙醇溶液作為交聯劑； 步驟S3-2、將步驟S2-2獲得的礦化膠原海綿浸泡於步驟S3-1配製的交聯劑溶液中48 小時，進行交聯； 步驟S3-3、將步驟S3-2獲得的礦化膠原海綿從交聯劑溶液中取出，置於層析柱中，以 流動的純水洗滌72小時，以除去殘留的交聯劑； 步驟S3-4、將步驟S3-3獲得的礦化膠原海綿進行冷凍乾燥，獲得交聯的礦化膠原海 綿； 步驟S4-1、將步驟S3-4獲得的交聯的礦化膠原海綿置於輥壓機上，施加10 MPa的壓 力，並保壓10秒，獲得礦化膠原膜； 步驟S4-2、根據臨床需求對步驟S4-1獲得的礦化膠原膜進行切割、修剪，獲得礦化膠 原人工骨膜。
[0024] 經灼燒實驗檢測，實施例1所獲得的礦化膠原人工骨膜中膠原與鈣磷鹽的質量比 為3:1;經ICP-MS測定，鈣磷鹽中的鈣元素和磷元素的摩爾比為Ca/P = 1.62,稍低於羥基 磷灰石中理論的鈣磷摩爾比1.67。可知步驟S1的礦化膠原複合材料製備過程中，添加到 混合體系中的鈣元素和磷元素並沒有完全轉變成產物人工骨膜的鈣磷鹽，所形成鈣磷鹽中 鈣磷摩爾比也與投料比例不完全一致。這是因為步驟S1-4的礦化膠原的仿生礦化過程中， 體系的pH值最終被調節為7. 0,呈中性環境，因而所加入的鈣元素和磷元素並未全部轉變 成磷酸鹽，有部分鈣元素和磷元素依然以離子形式存在於仿生礦化的混合體系中，並在步 驟S1-5的離心洗滌過程中被除掉。同時，也有少量膠原存在於步驟S1-5所述靜置之後的 上清液中，並在離心洗滌過程中被除掉。由於人工骨膜的製備在空氣中進行，受到C0 2的影 響，形成含碳酸根的鈣磷鹽，導致其鈣磷比相對於投料的比例偏低。因此，本發明所述礦化 膠原人工骨膜製備工藝的產率並不能達到100%，所獲得的產品中膠原與鈣磷鹽的比例以及 鈣磷鹽中的鈣磷比也不能完全通過原料的投料量來確定，還需要通過對實際產物進行表徵 分析，指導生產中工藝參數的確定。
[0025] 經檢測，實施例1所獲得的礦化膠原人工骨膜的孔隙率為21%。
[0026] 圖2所示為本發明實施例1的礦化膠原人工骨膜產品照片。可以看到該人工骨 膜厚度均一，表面平整，並有一定的粗糙度，有利於新生骨膜組織中成纖維細胞的貼附和增 殖。
[0027] 圖3所示為本發明實施例1的礦化膠原人工骨膜與天然骨膜的X射線衍射圖譜對 t匕。可以看到，本發明的礦化膠原人工骨膜與天然骨膜的物相組成高度一致，其中無機成分 的物相均為羥基磷灰石。根據X射線衍射結果計算，礦化膠原人工骨膜中的羥基磷灰石的 平均粒徑為100 nm。
[0028] 實施例2, 50 mm X 20 mm X 0. 4 mm人工骨膜的製備 根據圖1所示步驟，長50 mm、寬20 mm、厚0.4 mm的礦化膠原人工骨膜的製備步驟為： 步驟S1-1、將1 g膠原溶於1 L濃度為1 mol/L的醋酸溶液，配製成膠原的酸溶液； 步驟S1-2、持續攪拌步驟S1-1所得溶液，緩慢滴加100 mL濃度為0. 05 mol/L的CaCl2 溶液； 步驟S1-3、持續攪拌步驟S1-2所得溶液，緩慢滴加100 mL濃度為0. 03 mol/L的 Na2HP04 溶液； 步驟S1-4、持續攪拌步驟S1-3所得溶液，緩慢滴加0. 5 mol/L的NaOH溶液至混合體系 pH = 7 ； 步驟S1-5、將步驟S1-4所得混合體系靜置60小時，過濾出沉澱，並用純水離心洗滌5 次，隨後採用低溫真空乾燥的方法進行濃縮，至混合體系總體積為40 mL時停止濃縮，獲得 礦化膠原膠凍； 步驟S2-1、量取11 mL步驟S1-5獲得的礦化膠原膠凍填入長52 mm、寬27 mm的模具 中並鋪平； 步驟S2-2、將步驟S2-1灌模後的礦化膠原膠凍進行充分冷凍乾燥，獲得礦化膠原海 綿； 步驟S3-1、配製0. 05 wt%的戊二醛的乙醇溶液作為交聯劑； 步驟S3-2、將步驟S2-2獲得的礦化膠原海綿浸泡於步驟S3-1配製的交聯劑溶液中48 小時，進行交聯； 步驟S3-3、將步驟S3-2獲得的礦化膠原海綿從交聯劑溶液中取出，置於層析柱中，以 流動的純水和無水乙醇交替洗滌共72小時，以除去殘留的交聯劑； 步驟S3-4、將步驟S3-3獲得的礦化膠原海綿進行冷凍乾燥，獲得交聯的礦化膠原海 綿； 步驟S4-1、將步驟S3-4獲得的交聯的礦化膠原海綿置於輥壓機上，施加16 MPa的壓 力，並保壓20秒，獲得礦化膠原膜； 步驟S4-2、根據臨床需求對步驟S4-1獲得的礦化膠原膜進行切割、修剪，獲得礦化膠 原人工骨膜。
[0029] 經檢測，實施例2所獲得的礦化膠原人工骨膜中膠原與鈣磷鹽的質量比為2. 6:1， 鈣磷鹽中的鈣元素和磷元素的摩爾比為Ca/P = 1.63,人工骨膜的孔隙率為12%。
[0030] 實施例3, 30 mm X 20 mm X 0. 2 mm人工骨膜的製備 根據圖1所示步驟，長30 mm、寬20 mm、厚0.2 mm的礦化膠原人工骨膜的製備步驟為： 步驟S1-1、將2 g膠原溶於5 L濃度為0. 25 mol/L的醋酸溶液，配製成膠原的酸溶液； 步驟S1-2、持續攪拌步驟S1-1所得溶液，緩慢滴加50 mL濃度為0. 15 mol/L的CaCl2 溶液； 步驟S1-3、持續攪拌步驟S1-2所得溶液，緩慢滴加50 mL濃度為0. 1 mol/L的Na2HP04 溶液； 步驟S1-4、持續攪拌步驟S1-3所得溶液，緩慢滴加0. 5 mol/L的NaOH溶液至混合體系 pH = 7 ； 步驟S1-5、將步驟S1-4所得混合體系靜置72小時，過濾出沉澱，並用純水離心洗滌5 次，隨後採用離心的方法進行濃縮，至混合體系總體積為50 mL時停止濃縮，獲得礦化膠原 膠凍； 步驟S2-1、量取1. 8 mL步驟S1-5獲得的礦化膠原膠凍填入長33 mm、寬22 mm的模具 中並鋪平； 步驟S2-2、將步驟S2-1灌模後的礦化膠原膠凍進行充分冷凍乾燥，獲得礦化膠原海 綿； 步驟S3-1、配製0. 16 wt%的戊二醛的乙醇溶液作為交聯劑； 步驟S3-2、將步驟S2-2獲得的礦化膠原海綿浸泡於步驟S3-1配製的交聯劑溶液中36 小時，進行交聯； 步驟S3-3、將步驟S3-2獲得的礦化膠原海綿從交聯劑溶液中取出，置於層析柱中，以 流動的純水洗滌60小時，以除去殘留的交聯劑； 步驟S3-4、將步驟S3-3獲得的礦化膠原海綿進行冷凍乾燥，獲得交聯的礦化膠原海 綿； 步驟S4-1、將步驟S3-4獲得的交聯的礦化膠原海綿置於輥壓機上，施加12 MPa的壓 力，並保壓15秒，獲得礦化膠原膜； 步驟S4-2、根據臨床需求對步驟S4-1獲得的礦化膠原膜進行切割、修剪，獲得礦化膠 原人工骨膜。
[0031] 經檢測，實施例3所獲得的礦化膠原人工骨膜中膠原與鈣磷鹽的質量比為4. 1:1， 鈣磷鹽中的鈣元素和磷元素的摩爾比為Ca/P = 1.48,人工骨膜的孔隙率為20%。
【權利要求】
1. 一種礦化膠原人工骨膜，其特徵在於，該人工骨膜在宏觀上呈扁平膜狀結構，厚度 0.1?0.5 mm，具有一定的孔隙結構，孔隙率為10%?30%;在微觀結構上，該人工骨膜的基 本結構單元為有序排列的納米鈣磷鹽與膠原纖維。
2. 權利要求1所述的一種礦化膠原人工骨膜，其特徵在於，該礦化膠原人工骨膜可自 由彎曲和摺疊。
3. 權利要求1所述的一種礦化膠原人工骨膜，其特徵在於，該礦化膠原人工骨膜中膠 原與鈣磷鹽的質量比為2:1?5:1。
4. 權利要求1所述的一種礦化膠原人工骨膜，其特徵在於，所述納米鈣磷鹽的粒徑為 20?200 nm，鈣元素和磷元素的摩爾比為1/1?2/1，進一步地，所述納米鈣磷鹽為納米羥 基磷灰石，粒徑為20?200 nm。
5. -種礦化膠原人工骨膜的製備方法，包括以下操作步驟： 步驟S1、礦化膠原仿生複合材料製備，具體包括： 步驟S1-1、將膠原溶於鹽酸、硝酸或醋酸中的任何一種，配製成膠原的酸溶液，其中膠 原濃度為 5. 0X10-5 ?5.0X10-3 g/mL; 步驟S1-2、持續攪拌步驟S1-1所得溶液，緩慢滴加含鈣離子的溶液，鈣離子的加入量 為每克膠原對應加入鈣離子0.002?0.01 mol ; 步驟S1-3、持續攪拌步驟S1-2所得溶液，緩慢滴加含磷酸根離子的溶液，磷酸根離子 的加入量與步驟S1-2中鈣離子加入量的摩爾比為Ca/P = 1/1?2/1; 步驟S1-4、持續攪拌步驟S1-3所得溶液，緩慢滴加NaOH溶液至混合體系pH = 6?8， 當pH = 5?6時，混合體系開始出現沉澱，當pH = 7時,混合體系出現白色懸池液； 步驟S1-5、將步驟S1-4所得混合體系靜置24?120小時，分離出沉澱並洗去雜質離 子，隨後對混合體系進行濃縮，直至獲得固液比為0.03?0.06 g/mL的礦化膠原膠凍； 步驟S2、礦化膠原的灌模及冷凍乾燥，具體包括： 步驟S2-1、量取一定量步驟S1-5獲得的礦化膠原膠凍填入模具中並鋪平，根據所制 備礦化膠原人工骨膜的厚度，使得模具上每cm2裝填的礦化膠原膠凍中含有固體0. 006 ~ 0· 032 g ; 步驟S2-2、將步驟S2-1灌模後的礦化膠原膠凍進行充分冷凍乾燥，獲得礦化膠原海 綿； 步驟S3、礦化膠原的交聯，具體包括： 步驟S3-1、配製0. 005?0. 25 wt%的戊二醛的乙醇溶液作為交聯劑； 步驟S3-2、將步驟S2-2獲得的礦化膠原海綿浸泡於步驟S3-1配製的交聯劑溶液中24 ~ 48小時，進行交聯； 步驟S3-3、將步驟S3-2獲得的礦化膠原海綿從交聯劑溶液中取出，置於層析柱中，以 流動的純水洗滌48 ~ 72小時，以除去殘留的交聯劑； 步驟S3-4、將步驟S3-3獲得的礦化膠原海綿進行真空乾燥或者冷凍乾燥，獲得交聯的 礦化膠原海綿； 步驟S4、礦化膠原膜的成型，具體包括： 步驟S4-1、將步驟S3-4獲得的交聯的礦化膠原海綿置於輥壓機上，施加8?20 MPa的 壓力，並保壓5 ~ 20秒，獲得礦化膠原膜； 步驟S4-2、根據臨床需求對步驟S4-1獲得的礦化膠原膜進行切割、修剪，獲得礦化膠 原人工骨膜。
6. 權利要求5所述一種礦化膠原人工骨膜的製備方法，其特徵在於，步驟S1-5所述分 離出沉澱並洗去雜質離子的過程包括採用離心的方法，或者採用抽濾、超濾、透析等膜分離 技術進行；所述濃縮包括採用離心的方法，或者採用抽濾、超濾、透析等膜分離技術，或者採 用低溫真空乾燥的方法進行。
7. 權利要求6所述一種礦化膠原人工骨膜的製備方法，其特徵在於，當採用透析方法 進行濃縮時，包括以下步驟： 步驟I、測定洗滌後混合體系沉澱的滲透壓n i，然後將該混合體系沉澱置於截留分子 量為10, 000?20, 000的透析袋中，將透析袋埠密封； 步驟II、將透析袋置於滲透壓為π 2的溶液D中進行透析，其中π 2 > π 1; 步驟III、記錄透析袋剛放入溶液D時^12的下降變化率為r(l，監控透析過程中^1 2的 變化，當η 2的下降變化率小於iVlO時更換透析袋外的溶液D，並重新測定透析袋內的滲 透壓^ ; 步驟IV、重複步驟II和III，直到透析袋內獲得目標濃度的礦化膠原膠凍。
8. 權利要求5所述一種礦化膠原人工骨膜的製備方法，其特徵在於，步驟S2-2中，灌模 後的模具在冷凍乾燥的預凍步驟中必須使模具底面處於水平狀態，以免冷凍乾燥後得到的 礦化膠原海綿厚度不均勻。
9. 權利要求5所述一種礦化膠原人工骨膜的製備方法，其特徵在於，步驟S3-3的交聯 劑去除的方法包括水洗、乙醇洗、水洗和乙醇洗相結合的方法。
【文檔編號】A61L27/12GK104096268SQ201410275022
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年6月19日 優先權日:2014年6月19日
【發明者】陶春生, 仇志燁, 宋天喜, 張自強, 崔福齋 申請人:北京奧精醫藥科技有限公司