用於肺癌的微rna表達譜分析的組合物和方法

2023-11-08 05:05:57 1

專利名稱：用於肺癌的微rna表達譜分析的組合物和方法
技術領域：
本發明涉及用於肺癌(lung cancer)的微RNA(microRNA)表達譜分析的組合物和方法，特別是腺癌肺癌(adenocarcinoma lung cancer)、鱗狀細胞肺癌(squamous celllung cancer)和小細胞肺癌(small cell lung cancer)。
背景技術：
肺癌依舊是世界範圍內引起癌症相關死亡的最常見的原因之一。據估測2009年有140萬例新發病例，平均年增長速度為2. 51%(Frost&Sullivan estimates),且絕大多數2009年被診斷為肺癌的患者將死於肺癌(Higgins, M. J. et al. (2009)Expert RevAnticancer Ther 9，1365-1378)。儘管近幾十年來手術方式和相關治療手段取得了一定的進步，但在歐美，各期患者總體的五年生存率僅約15%。 肺癌分為小細胞肺癌(small cell lung cancer (SCLC))和非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer (NSCLC))。非小細胞肺癌是主要的組織學類型，佔80%以上，包括腺癌和鱗狀細胞癌。吸菸是肺癌最重要的危險因子，佔全球男性病例的約80%，女性病例的50%ο針對肺癌不同亞型的治療方式也各不相同。手術是早期NSCLC的治療方式，總的五年生存率為40%。但大部分患者確診時已處於中晚期，對這部分患者的一線治療局限於多藥化療，估計生存時間也僅為8個月以下。近來靶向治療的不斷發展，要求對NSCLC進行更為精確的亞型分類。腫瘤血管生成抑制劑在鱗狀細胞癌患者中極易引發副反應(Lebanoy，D. (2009) J Clin Oncol 27,2030-2037)。小細胞肺癌是死亡率最高的肺癌類型，死亡率高達90%以上。儘管常可觀察到高的最初反應率，局限期患者的中位生存率約為20個月。小細胞肺癌的治療一般為化療或者放化療結合，而不選擇手術治療。除了針對不同亞型不同病因的肺癌患者採取的治療手段各異外，觀察者之間判斷上的偏差和特異性標準化試驗的缺乏，限制了當前對患者進行準確的分類和選擇合適的治療。未來對單個肺癌患者的治療選擇將取決於具體的腫瘤和宿主特性。因此尋找特異的分子標記物來區分不同的肺癌亞型十分必要。許多診斷試驗由於只基於單一分子標記物，影響了結果的可靠性和精確性。此外，單一標記物往往不能具體預測潛伏期、腫瘤進展期等等。因此，依舊有必要尋找其他的分子標記物和試驗方法來克服這些局限。一種解決這一問題的方法可以基於小調節RNA分子，特別是微RNA (miRNA)，它們是一類進化保守的內源表達的小的非編碼RNA，大小為20-25個核苷酸(nt)，可以介導靶mRNA的表達。自從它們在大約10年前被發現就被認為在細胞發育、分化、增殖和凋亡中有重要功能(Bartel, D. P. (2004) Cell 116，281-297，Ambros, V. (2004)Nature 431, 350-355;He, L. et al. (2004)Nat Rev Genet 5,522-531)。此外，作為腫瘤標記物，miRNA優於mRNA，因其在體外更穩定，在體內半衰期更長(Lu，J. et al.，(2005)Nature435, 834-838; Lim, L. P. et al. , (2005)Nature 433,769-773)。miRNA是從初級轉錄物產生的,初級轉錄物被RNase III Drosha加工為莖-環結構前體(pre-miRNA)。在轉運到細胞質後,另一種稱為Dicer的RNase III切割pre_miRNA髮夾的環以形成短雙鏈(ds)RNA，其中一條鏈作為成熟miRNA摻入miRNA-蛋白質(miRNP)中。miRNA指導miRNP到達它們的靶mRNA，在此它們發揮功能(Bartel, D. P. (2004)Cell23, 281-292 ；He, L. and Hannon, G. J. (2004) Nat. Rev. Genet. 5, 522-531)。根據miRNA與其祀之間的互補性程度,miRNA可以指導不同的調節過程。與miRNA高度互補的靶mRNA通過與RNA幹擾(RNAi)相同的機制被特異切割。因此，在這種情況中，miRNA的功能是作為短幹擾RNA(siRNA)。與miRNA互補性較低的靶mRNA要麼被指引進入細胞降解途徑要麼被翻譯性阻遏而不影響mRNA水平。但是，miRNA如何阻遏它們的靶mRNA的翻譯的機制尚有爭論。高通量的miRNA定量技術，如miRNA微陣列、基於實時RT-PCR的TaqMan miRNA測定，為研究腫瘤全基因組中的總miRNA表達譜提供了有力的工具。可獲得的現有數據表明miRNA表達的調節異常(dysregulation)可能與某些類型癌症的發生和/或發展相 關。例如，已表明兩種miRNA，miR-15及miR-16-l定位在慢性淋巴性白血病(CLL)中缺失的遺傳基因座上，並且發現在大約70%的CLL患者中，兩種miRNA基因被缺失或下調。另外，在結腸直腸瘤形成中觀察到miR-143及miR-145的下調，而miRNA let-7的表達在肺癌中經常降低(Michael,M. Z. et al. (2003)Mol. Cancer Res. I, 882-891 ；Mayr, C. etal. (2007) Science 315,1576-1579)。事實上，基於miRNA表達中的癌症相關改變和miRNA通常位於參與癌症的基因組區域的觀察推測miRNA可能既作為抑癌基因也作為癌基因(Esquela-Kerscher, A. and Slack, F. J(2006)Nat. Rev. Cancer 6, 259-269 ；Calin, G. A. andCroce, C. M. (2007) J. Clin. Invest. 117, 2059-2066 ；Blenkiron, C. and Miska, E. A. (2007)Hum. Mol. Genet. 16，R106-R113) ^iRNA在人類癌症中異常表達譜的發現提示其有望成為有效的診斷和預後標記物。若干研究已報導了人類肺癌中的miRNA表達譜分析(Johnson, S. M. etal. (2005) Cell 120，635-647; Liang, Y. et al. (2008)BMC Med Genomics I, 61;Kumar, M.S. et al. (2008)Proc Natl Acad Sci USA 105, 3903-3908;Miko, E. et al. (2009)Exp Lung Res 35，646-664;Xie, Y et al. (2009)Lung CancerMay 13;Lebanony, D. etal. (2009)J Clin Oncol 27，2030-2037;Kauppinen, S. et al. (2009)Clin Cancer Res15, 1177-1183;Mascaux, C. et al. (2009) Eur Respir J33, 352-359)。同樣地，這些研究均顯示與非惡性肺組織相比，特異性miRNA在惡性組織中異常表達。研究還發現一些miRNA與預後有關(Yu, S. L. et al. (2008) Cancer Cell 13, 48-57; Raponi, M. et al (2009) Cancer Res69，5776-5783)。因此，這種miRNA可提供關於涉及惡性轉化和進展的細胞過程的認識。因此,仍需要(一組)診斷標記物，特別是「表達特徵(expression signature)」或「分子足跡(molecular footprint) 」形式，以使得可以快速、可靠和便宜地鑑定和/或治療顯示或具有發生不同類型肺癌傾向的細胞。另外，還持續需要相應的方法以鑑定和治療展示這種癌表型的靶細胞。發明目的和發明概述本發明的目的是提供通過確定多種核酸分子而診斷和/或治療肺癌、和/或發生這種病症的傾向的新方法，每種所述核酸分子編碼微RNA(miRNA)序列，其中與健康對照細胞相比，所述多種核酸分子的一或多種在所分析的靶細胞中差異表達，並且其中所述一或多種差異表達的核酸分子一起代表核酸表達特徵，該核酸表達特徵是存在肺癌或具有肺癌發生傾向的指徵。更具體地，本發明的目的是提供核酸表達特徵和/或組合物，用於鑑定展現出或具有發生肺癌傾向的一或多種哺乳動物靶細胞和/或區別不同類型的肺癌。肺癌的不同類型包括鱗狀細胞癌、腺癌肺癌和小細胞肺癌。另外，本發明的目的是提供相應的方法，以用於鑑定展現出或具有發生肺癌傾向的一或多種哺乳動物靶細胞、區別不同類型的肺癌、以及用於預防或治療這種病症。這些及其它目的從以下描述將變得清楚，它們由獨立權利要求的主題實現。本發明的一些優選實施方案由從屬權利要求的主題限定。在第一方面，本發明涉及用於鑑定展現出或具有發展肺癌傾向的一或多種哺乳動物靶細胞的分子標記的診斷試劑盒，所述試劑盒包含多種核酸分子，每種核酸分子編碼微 RNA序列，其中所述多種核酸分子的一或多種在靶細胞中和在一或多種對照細胞中差異表達，並且其中所述一或多種差異表達的核酸分子一起代表核酸表達特徵，該核酸表達特徵是存在肺癌或具有發展肺癌傾向的指徵。本文限定的核酸表達特徵可包括至少82種核酸分子，優選至少13種核酸分子，特別優選至少7種核酸分子。在優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與一或多種對照細胞相比被上調；以及包括至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與一或多種對照細胞相比被下調。在優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-183、hsa_miR-451、hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa-miR-96、hsa-miR-144、has_miR-200c、hsa-miR-486_5p、hsa-miR-338_3p、hsa-miR-218、hsa-miR-139_5p、 has_miR-130b、 hsa_miR-30a*、 hsa-miR-144' hsa-miR-425、hsa_miR-133b、hsa-miR-497、hsa-miR-182、hsa-miR-187' hsa_miR-30b、hsa-miR-93、hsa-miR-145' hsa-miR-429、hsa-miR-498、hsa_miR-200a、hsa-miR-625、hsa_miR-130a、hsa-miR-30c_2' hsa-miR-98、hsa-miR-l、hsa_miR-106b、hsa-miR-150' hsa-miR-25、hsa-miR-134、 hsa-miR-328、 hsa-miR-638、 hsa_miR-200b*、 hsa-miR-1225_5p、hsa-miR-1224_5p、 hsa_miR-557、 has_miR-15b、 hsa_miR-454、 hsa_miR-30la、hsa_miR-135b、hsa-miR-100、hsa-miR-223、has_miR-196b、hsa_miR-196a、hsa-miR-1226'hsa-miR-424、hsa-miR-21' hsa-miR-572、hsa_miR-18b、hsa_miR-18a、hsa-miR-9'hsa_miR-301b、hsa-miR-101、hsa-miR-143、hsa-miR-140_5p、hsa_miR-30d、hsa_miR-29c、hsa-miR-l99b-5pλ hsa-miR-224、has-miR-125a_3p、hsa-miR-9、hsa_miR-200b、hsa-miR-195、 hsa_miR-210、 hsa_miR-7、 has_miR-21、 hsa_miR-17、 hsa_miR-128、hsa-miR-141、hsa-miR-142_5p、hsa-miR-150、has-miR-205、hsa-miR-192、hsa-miR-215 和hsa_miR-106a的核酸分子。特別優選地，與所述一或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中編碼has-miR-183、hsa-miR-96、hsa_miR-200c、hsa_miR-130b、hsa-miR-425、hsa-miR-182、has-miR-93、hsa-miR-429、hsa_miR-200a、hsa-miR-625、hsa-miR-98、hsa_miR-106b、has-miR-25、hsa_miR-200b' hsa_miR-15b、hsa-miR-454、hsa_miR-301a、hsa_miR-135b、hsa_miR-196b、hsa_miR-196a、hsa-miR-424、hsa-miR-21' hsa_miR-18b、hsa_miR-18a、hsa—miR-9' hsa_miR-301b、hsa—miR-224、hsa—miR-9、hsa_miR-200b、hsa—miR-210、hsa-miR-7、 hsa_miR-21、 hsa_miR-17、 hsa_miR-128、 hsa-miR-141、 hsa_miR-205、hasniR-192、hsaniR-215、hsaniR-106a的任意一種或多種核酸分子的表達被上調，而編碼 hsa-miR-451、hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、 hsa-miR-144、 hsa-miR-486_5p、 hsa-miR-338_3p、 hsa-miR-218、hsa-miR-139_5p、 hsa_miR-30a*、 hsa-miR-144*、 hsa_miR-133b、 hsa-miR-497、hsa-miR-187' hsa_miR-30b、hsa-miR-145*、hsa-miR-498、hsa_miR-130a、hsa-miR-30c_2'hsa-miR-1、hsa-miR-150' hsa-miR-134、hsa-miR-328、has-miR-638、hsa-miR-1225_5p、hsa-miR-1224_5p、 hsa-miR-557、 hsa-miR-100、 hsa-miR-223、 hsa-miR-1226*、hsa-miR-572、hsa-miR-101 Λ hsa-miR-143、hsa-miR-140_5p、has_miR-30d、hsa_miR-29c、hsa-miR-199b_5p、hsa-miR-125a_3p、hsa-miR-195、hsa-miR-142_5p 和 hsa-miR-150 的任一或多種核酸分子的表達下調。在更優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-183、hsa-miR_451、·hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa-miR-96、hsa-miR-144、has_miR-200c、hsa-miR-486_5p、hsa-miR-338_3p 和 hsa-miR-218 的核酸分子。特別優選地，與所述一或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中編碼hsaniR-183、hsa-miR-96和hsaniR-200c的任意一種或多種核酸分子的表達被上調，而編碼 hsa-miR-451、hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa-miR-144、hsa-miR-486_5p、hsa-miR-338_3p 和 hsa-miR-218 的任一或多種核酸分子的表達下調。在更優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-183、hsa-miR_451、hsa-miR-126、hsa-miR-126*、hsa_miR-30a、hsa-miR-145 和 hsa-miR-140_3p 的任意一或多種核酸分子。特別優選地，與所述一或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中hsa-miR-183 的表達上調，而編碼 hsa-miR-451、hsa_miR-l26、hsa_miR-l26*、hsa_miR-30a、hsa-miR-145和hsa-miR-140_3p的任意一或多種核酸分子的表達下調。在第二方面，本發明涉及用於鑑定展現出或具有發展非小細胞肺癌傾向的一或多種哺乳動物靶細胞的分子標記的診斷試劑盒，所述非小細胞肺癌包括鱗狀細胞癌和腺癌肺癌。所述試劑盒包含多種核酸分子，每種核酸分子編碼微RNA序列，其中所述多種核酸分子的一或多種在靶細胞和在一或多種對照細胞中差異表達，並且其中所述一或多種差異表達的核酸分子一起代表一種核酸表達特徵，該核酸表達特徵是存在非小細胞肺癌或有非小細胞肺癌發生傾向的指徵，包括鱗狀細胞癌和腺癌肺癌。本文限定的核酸表達特徵可包括至少70種核酸分子，優選地至少14種核酸分子，特別優選地至少9種核酸分子。在優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與一或多種對照細胞相比被上調；以及包括至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與一或多種對照細胞相比被下調。
在優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-183、hsa-miR-451、has-miR-497、hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-218、hsa-miR-145、has-miR-140_3p、 hsa-miR-96、 hsa-miR-144、 hsa_miR-200c、 hsa-miR-486_5p、hsa-miR-139_5p、 hsa-miR-5 338_3p、 hsa_miR-130b、 hsa-miR-144' hsa-miR-425、hsa_miR-133b、has-miR-182、hsa-miR-187' hsa_miR-30b、hsa-miR-93、hsa-miR-145'hsa-miR-429、 has-miR-498、hsa_miR-200a、hsa-miR-625、hsa-miR-I30a、hsa-miR-30c_2'hsa-miR-98、 hsa-miR-l、 hsa-miR-150' hsa-miR-25、 hsa-miR-134、 hsa-miR-328、hsa-miR-638、 has_miR-200b' hsa-miR-1225_5p、 hsa-miR-1224_5p、 hsa-miR-557、hsa_miR-135b、has-miR-100、hsa-miR-424、hsa-miR-21' hsa_miR-30a*、hsa-miR-494、hsa-miR-193b、has-miR-99a、hsa-miR-335、hsa-miR-106b、hsa-miR-140_5p、hsa-miR-101、hsa-miR-143、hsa_miR-30d、hsa_miR-29c、hsa-miR-224、hsa-miR-9、hsa_miR-200b、hsa-miR-195、hsa_miR-210、hsa-miR-7、hsa_miR-21、hsa_miR-128、hsa-miR-141、hsa-miR-142_5p、hsa-miR-150、hsa-miR-205、hsa-miR-192 和 hsa-miR-215 的任意一或多種核酸分子。特別優選地，與所述一或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中編碼·hsa-miR-183、hsa-miR-96、hsa_miR-200c、hsa_miR-130b、hsa-miR-425、hsa-miR-182、hsa-miR-93、hsa-miR-429、hsa_miR-200a、hsa-miR-625、hsa-miR-98、hsa-miR-25、hsa_miR-200b' hsa_miR-135b、hsa-miR-424、hsa-miR-21' hsa-miR-494、hsa_miR-193b、hsa_miR-106b、 hsa-miR-224、 hsa-miR-9、 hsa_miR-200b、 hsa-miR-210、 hsa-miR-7、hsa-miR-21、hsa_miR-128、hsa-miR-141、hsa-miR-205、hsa-miR-192、hsa-miR-215的任一或多種核酸分子表達上調，而編碼hsa-miR-451、hsa-miR-497、hsa-miR-126、hsa-miR-126' has_miR-30a、hsa-miR-218、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa-miR-144、hsa-miR-486_5p 和 hsa-miR-139_5p、hsa-miR-338_3p、hsa-miR-144' hsa_miR-133b、hsa-miR-187' hsa_miR-30b、hsa-miR-145*、hsa-miR-498、hsa_miR-130a、hsa-miR-30c_2'hsa-miR-1、hsa-miR-150' hsa-miR-134、hsa-miR-328、hsa-miR-638、hsa-miR-1225_5p、hsa-miR-1224_5p、hsa-miR-557、hsa-miR-100、hsa_miR-30a' hsa_miR-99a、hsa-miR-335、has-miR-140_5p、hsa-miR-101、hsa-miR-143、hsa_miR-30d、hsa_miR-29c、hsa-miR-195、hsa-miR-142_5p、hsa-miR-150的任一或多種核酸分子的表達下調。在更優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-183、hsa-miR_451、hsa-miR-497、hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-218、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、 hsa-miR-96、 hsa-miR-144、 hsa_miR-200c、 hsa-miR-486_5p 和has-miR-139-5p的任意一或多種核酸分子。特別優選地，與所述一或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中編碼hsa-miR-183、hsa-miR-96、hsa_miR-200c的任意一或多種核酸分子表達上調，而編碼hsa-miR-451、hsa-miR-497、hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-218、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa-miR-144、hsa-miR-486_5p 和 hsa-miR-139_5p 的任意一或多種核酸分子的表達下調。在更優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-183、hsa-miR_451、hsa-miR-497、hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-218、hsa-miR-145、hsa-miR-140-3p的任意一或多種核酸分子。
特別優選地，與所述一或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中hsa-miR-183 的表達上調，而編碼 hsa-miR-451、hsa-miR-497、hsa-miR-126、hsa-miR-126'hsa_miR-30a、hsa-miR-218、hsa-miR-145、hsa-miR-140~3p 的任意一或多種核酸分子的表達下調。
在第三方面，本發明涉及用於鑑定展現出或具有發展腺癌肺癌傾向的一或多種哺乳動物靶細胞的分子標記的診斷試劑盒，所述試劑盒包含多種核酸分子，每種核酸分子編碼微RNA序列，其中所述多種核酸分子的一或多種在靶細胞和在一或多種對照細胞中差異表達，並且其中所述一或多種差異表達的核酸分子一起代表一種核酸表達特徵，該核酸表達特徵是存在腺癌肺癌或有腺癌肺癌發展傾向的指徵。本文限定的核酸表達特徵可包括至少57種核酸分子，優選地至少13種核酸分子，特別優選地至少5種核酸分子。在優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與一或多種對照細胞相比被上調；以及包括至少一種編碼 微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與一或多種對照細胞相比被下調。在優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-96、hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-218、hsa-miR-21、hsa-miR-183、hsa-miR-144、hsa-miR-451、 hsa_miR-200c、 hsa-miR-135b、 hsa_miR-148a、 hsa-miR-625、hsa-miR-486_5p、hsa-miR-338_3p、hsa-miR-139_5p、hsa_miR-130b、hsa_miR-30a'hsa-miR-144' hsa-miR-425、hsa_miR-133b、hsa-miR-497、hsa-miR-182、hsa-miR-187'hsa_miR-30b、has-miR-145' hsa-miR-429、hsa-miR-498、hsa_miR-200a、hsa_miR-130a、hsa-miR-30c-2*、 hsa-miR-134、 hsa-miR-638、 hsa-miR-200b*、 hsa-miR-1225_5p、hsa-miR-557、hsa-miR-100、hsa-miR-223、hsa-miR-424、hsa-miR-21' hsa_miR-99a、hsa_miR-34a、 hsa_miR_542_3p、 hsa_miR-200a*、 hsa-miR-375、 hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、 hsa-miR-101、 hsa-miR-143、 hsa-miR-140_5p、 hsa-miR-224、hsa_miR-200b、hsa-miR-195、hsa-miR-210、hsa-miR-7、hsa-miR-141 和 hsa-miR-192 的任意一或多種核酸分子。特別優選地，與所述一或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中編碼hsa-miR-96、hsa-miR-21、hsa-miR-183、hsa_miR-200c、hsa_miR-135b、hsa_miR-148a、hsa-miR-625、hsa_miR-130b、hsa-miR-425、hsa-miR-182、has-miR-429、hsa_miR-200a、hsa_miR-200b*、 hsa-miR-424、 hsa-miR-21*、 hsa_miR-34a、 hsa_miR_542_3p、hsa_miR-200a' hsa—miR-375、hsa-miR-224、hsa_miR-200b、hsa-miR-210、hsa-miR-7Λhsa-miR-141、hsa-miR-192的任意一或多種核酸分子表達上調，而編碼hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-218、hsa-miR-144、hsa-miR-451、hsa-miR-486_5p、hsa-miR-338_3p、 hsa-miR-139_5p、 hsa_miR-30a' hsa-miR-144' hsa_miR-133b、hsa-miR-497、hsa-miR-187' hsa_miR-30b、hsa-miR-145' hsa-miR-498、hsa_miR-130a、hsa-miR-30c_2' has-miR-134、hsa-miR-638、hsa-miR-1225~5pΛ hsa-miR-557、hsa-miR-100、hsa-miR-223、hsa_miR-99a、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa-miR-101、hsa-miR-143、hsa-miR-140_5p、hsa-miR-195的任意一或多種核酸分子的表達下調。
在更優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-96、hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-218、hsa-miR-21、hsa-miR-183、hsa-miR-144、has-miR-451、hsa_miR-200c、hsa_miR-135b、hsa_miR-148a 和 hsa-miR-625 的任意一或多種核酸分子。特別優選地，與所述一或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中編碼hsa-miR-96、hsa-miR-21、hsa-miR-183、hsa_miR-200c、hsa_miR-135b、hsa_miR-148a、hsa-miR-625的任一或多種核酸分子表達上，而編碼hsa-miR-126、hsa-miR-126*、hsa-miR-30a、hsa_miR-218、hsa-miR-144、hsa-miR-451 的任意一或多種核酸分子的表達下調。在更優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-96、hsa-miR-126、hsa-miR-126'hsa_miR-30a、hsa-miR-218 的任意一或多種核酸分子。
特別優選地，與所述一或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中hsa-miR-96 的表達上調，而編碼 hsa-miR-126、hsa-miR-126*、hsa-miR-30a、hsa-miR-218 的任意一或多種核酸分子的表達下調。在第四方面，本發明涉及用於鑑定展現出或具有發展鱗狀細胞肺癌傾向的一或多種哺乳動物靶細胞的分子標記的診斷試劑盒，所述試劑盒包含多種核酸分子，每種核酸分子編碼微RNA序列，其中所述多種核酸分子的一或多種在靶細胞和在一或多種對照細胞中差異表達，並且其中所述一或多種差異表達的核酸分子一起代表一種核酸表達特徵，該核酸表達特徵是存在鱗狀細胞肺癌或有鱗狀細胞肺癌發展傾向的指徵。本文限定的核酸表達特徵可包括至少112種核酸分子，優選地至少16種核酸分子，特別優選地至少9種核酸分子。在優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與一或多種對照細胞相比被上調；以及包括至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與一或多種對照細胞相比被下調。在優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-144、hsa-miR-451、has_miR-200c、hsa-miR-486_5p、hsa-miR-338_3p、hsa-miR-497、hsa-miR-218、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa_miR-30b、hsa-miR-93、hsa-miR-126、hsa-miR-126'hsa_miR-30a、hsa-miR-143、hsa-miR-103、hsa-miR-183、hsa-miR-96、hsa-miR-139_5p、hsa_miR-130b、hsa_miR-30a*、hsa-miR-144' hsa-miR-425、hsa_miR-133b、hsa-miR-182、hsa-miR-187' hsa-miR-145' hsa-miR-429、hsa-miR-498、hsa_miR-130a、hsa-miR-30c_2'hsa-miR-98、hsa-miR-1 Λ hsa_miR-106b、hsa-miR-150' hsa-miR-25、hsa-miR-134、has-miR-328、 hsa-miR-638、 hsa-miR-1225_5p、 hsa-miR-1224_5p、 hsa-miR-557、hsa_miR-15b、hsa_miR-301a、hsa_miR-196b、hsa_miR-196a、hsa-miR-1226' hsa-miR-424、hsa-miR-21' hsa-miR-572、hsa_miR-18b、hsa_miR-18a、hsa-miR-9' hsa_miR-301b、has_miR-29c' hsa-miR-494、hsa_miR-193b、hsa-miR-375、hsa_miR-26a、hsa-miR-574_3p、hsa-miR-151-3pλ hsa-miR-149、hsa-miR-768_5p、hsa_miR-181a、hsa_miR-20a、has-miR-181c、hsa-miR-29a、hsa-miR-29b、hsa-miR-505、hsa-miR-939、 hsa-miR-769_5p、hsa_miR-30c、 hsa-miR-590_5p、 hsa-miR-590_5p、 hsa-miR-671_5p、 hsa-miR-625、has-miR-652、hsa-miR-139-3p、hsa-miR-28-5p、hsa-miR-623、hsa-miR-221、hsa-miR-19a、hsa-miR-944、hsa-miR-335、hsa-miR-125a_5p、hsa_miR-551b、hsa-let_7d' hsa-miR-31'hsa-miR-362-5p、hsa-miR-181a*、hsa-miR-940、hsa-miR-30b*、hsa-miR-601、has-miR-20b、hsa-miR-202、hsa-miR-101、hsa-miR-140_5p、hsa_miR-30d、hsa_miR-29c、hsa-miR-224、hsa-miR-9、 hsa_miR-200b、 hsa-miR-195、 hsa-miR-210、 hsa-miR-7、 has_miR-21、hsa-miR-17λhsa-miR-128λhsa-miR-141λhsa-miR-142-5pλhsa-miR-150 和 hsa-miR-205 的任意一或多種核酸分子。特別優選地，與所述一或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中編碼hsa_miR-200c、hsa-miR-93、hsa-miR-103、hsa-miR-183、hsa-miR-96、hsa_miR-130b、hsa-miR-425、hsa-miR-182、hsa-miR-429、hsa-miR-98、hsa_miR-106b、hsa-miR-25、hsa_miR-15b、hsa_miR-301a、hsa_miR-196b、hsa_miR-196a、has-miR-424、hsa-miR-21'hsa_miR-18b、hsa_miR-18a、hsa-miR-9' hsa_miR-301b、has-miR-494、hsa_miR-193b、hsa-miR-15l_3p、 hsa-miR-149、 hsa_miR-20a、 hsa_miR-505、 hsa-miR-769_5p、hsa-miR-590_5p、 hsa-miR-590_5p、 hsa-miR-625、 hsa-miR-28_5p、 has-miR-221、hsa_miR-19a、hsa-miR-944Λ hsa-miR-31' hsa-miR-362_5p、hsa_miR-20b、hsa-miR-224、hsa-miR-9、 hsa_miR-200b、 hsa-miR-210、 hsa-miR-7、 hsa-miR-21、 has_miR-17、 hsa-miR-128、hsa-miR-141、hsa-miR-205的任一或多種核酸分子表達上調，而編石馬 hsa-miR-144、hsa-miR-451、hsa-miR-486_5p、hsa-miR-338_3p、hsa_5miR-497、hsa-miR-218、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa_miR-30b、hsa-miR-126、hsa-miR-126'hsa_miR-30a、hsa-miR-143、hsa-miR-139-5p、hsa_miR-30a*、hsa-miR-144*、hsa-miR-133b、hsa-miR-187*、 hsa-miR-145*、 hsa-miR-498、 hsa_miR-130a、 hsa-miR-30c_2*、hsa-miR-1、hsa-miR-150' has-miR-134、hsa-miR-328、hsa-miR-638、hsa-miR-1225_5p、hsa-miR-1224_5p、 hsa-miR-557、 hsa-miR-1226*、 hsa-miR-572、 hsa_miR-29c'hsa-miR-375、hsa_miR-26a、hsa-miR-574~3pΛ hsa-miR-768_5p、hsa_miR-181a、hsa_miR-181c、hsa_miR-29a、hsa_miR-29b、hsa-miR-939、hsa_miR-30c、hsa-miR-671_5p、hsa-miR-652、 hsa-miR-l39_3p、 has-miR-623、 hsa-miR-335、 hsa-miR-125a_5p、hsa_miR-551b、hsa-let_7d' hsa_miR-181a*、hsa-miR-940、hsa_miR-30b' hsa-miR-601、hsa-miR-202、hsa-miR-101、hsa-miR-140_5p、hsa_miR-30d、hsa_miR-29c、hsa-miR-195、hsa-miR-142_5p、hsa-miR-150的任意一或多種核酸分子的表達下調。在更優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-144、hsa-miR_451、hsa_miR-200c、 hsa-miR-486_5p、 hsa-miR-338_3p、 hsa-miR-497、 hsa-miR-218、has-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa_miR-30b、hsa-miR-93、hsa-miR-126、hsa-miR-126'hsa_miR-30a、hsa-miR-143 和 hsa-miR-103 的任意一或多種核酸分子。特別優選地，與所述一或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中編碼hsa-miR_200c、hsa-miR-93、hsa-miR-103的任意一或多種核酸分子表達上調，而編碼 hsa-miR-144、hsa-miR-451、hsa-miR-486_5p、hsa-miR-338_3p、hsa-miR-497、hsa-miR-218、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa_miR-30b、hsa-miR-126、hsa-miR-126'hsa-miR_30a、has-miR-143的任意一或多種核酸分子的表達下調。在更優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-144、hsa-miR_451、hsa_miR-200c、 hsa-miR-486_5p、 hsa-miR-338_3p、 hsa-miR-497、 hsa-miR-218、has-miR-145和hsa-miR-140_3p的任意一或多種核酸分子。特別優選地，與所述一或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中hsa-miR-200c 的表達上調，而編碼 hsa-miR-144、hsa-miR-451、hsa-miR-486_5p、hsa-miR-338_3p、hsa_miR-497、hsa-miR-218、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p 的任意一或多種核酸分子的表達下調。在第五方面，本發明涉及用於鑑定展現或具有發展小細胞肺癌傾向的一或多種哺乳動物靶細胞的分子標記的診斷試劑盒，所述試劑盒包含多種核酸分子，每種核酸分子編碼微RNA序列，其中所述多種核酸分子的一或多種在靶細胞和在一或多種對照細胞中差異表達，並且其中所述一或多種差異表達的核酸分子一起代表一種核酸表達特徵，該核酸表達特徵是存在小細胞肺癌或有小細胞肺癌發展傾向的指徵。本文限定的核酸表達特徵可包括至少116種核酸分子，優選地至少16種核酸分子，特別優選地至少11種核酸分子。·在優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與一或多種對照細胞相比被上調；以及包括至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與一或多種對照細胞相比被下調。在優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-96、hsa-miR-144、has-miR-93、hsa_miR-106b、hsa-miR-25、hsa_miR-15b、hsa-miR-145、hsa-miR-375、has-miR-103、hsa_miR-20a、hsa-miR-107、hsa-miR-451、hsa_miR-130b、hsa-miR-454、has_miR-30a、 hsa-miR-17、 hsa-miR-183、 hsa-miR-486_5p、 hsa-miR-338_3p、hsa-miR-139-5p、hsa_miR-30a*、hsa-miR-144*、hsa-miR-425、hsa-miR-133b、hsa-miR-497、hsa-miR-182、hsa-miR-187' hsa_miR-30b、hsa-miR-145' hsa-miR-429、hsa-miR-498、hsa_miR-200a、hsa_miR-130a、hsa-miR-30c_2' hsa-miR-98、hsa-miR-1 Λ hsa-miR-150'has-miR-134、 hsa-miR-328、 hsa-miR-638、 hsa_miR-200b*、 hsa-miR-1225_5p、hsa-miR-1224_5p、hsa-miR-557、hsa-miR-152、hsa_miR-30la、hsa-miR-100、hsa-miR-223、has_miR-196b、hsa-miR-1226' hsa-miR-572、hsa_miR-18b、hsa-miR-9' hsa_miR-301b、hsa-miR-199b_3p、 hsa_miR-34a、 hsa_miR-200a' hsa_miR-26a、 hsa-miR-574_3p、has_miR_768_5p、 hsa_miR-29a、 hsa_miR-29b、 hsa_miR-505、 hsa-miR-939、hsa-miR-769-5pλ hsa-miR-625、hsa-miR-139-3pΛ hsa_miR-19a、hsa_miR-55Ib、hsa-miR-362_5p、has_miR-181a*、hsa-miR-940、hsa-miR-601、hsa_miR-20b、hsa_miR-23a、hsa_miR-27a、has-miR-199a_5p、hsa_let_7i、hsa_miR-19b、hsa_miR-20a' hsa-miR-17'hsa-miR-22、has-miR-340' hsa-miR-214、hsa-miR-592、hsa-miR-335' hsa_miR-29c'hsa-miR-421、 hsa-miR-886_3p、 hsa-miR-16_2*、 hsa_miR-135a、 hsa-miR-183'hsa-miR-7-1' has_miR-26b、hsa-miR-455_3p、hsa-miR-222、hsa-miR-95、hsa-miR-564、hsa-miR-636、has_miR-34b' hsa_miR-18a、hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa-miR-140_3p、hsa-miR-101、hsa-miR-143、hsa-miR-140_5p、hsa_miR-29c、hsa-miR-199b_5p、hsa-miR-125a~3pλ has-miR-9、hsa_miR-200b、hsa-miR-210、hsa-miR-7Λ hsa-miR-128 和hsa-miR-106a的任意一或多種核酸分子。特別優選地，與所述一或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中編碼hsa-miR-96、hsa-miR-93、hsa_miR-106b、hsa-miR-25、hsa_miR-15b、hsa-miR-375、hsa-miR-103、hsa_miR-20a、hsa-miR-107、hsa_miR-130b、hsa-miR-454、hsa-miR-17、hsa-miR-183、hsa-miR-425、hsa-miR-182、hsa-miR-429、hsa_miR-200a、hsa-miR-98、hsa_miR-200b*、 hsa_miR-301a、 hsa_miR-196b、 hsa-miR-505、 hsa-miR-769_5p、hsa-miR-625、hsa_miR-19a、hsa-miR-362_5p、hsa_miR-20b、hsa-let_7i、has_miR-19b、hsa_miR-20a*、hsa-miR-17' hsa-miR-340' hsa-miR-592、hsa-miR-335' hsa-miR-421 Λhsa-miR-16-2' hsa_miR-135a、hsa-miR-183' hsa-miR-7-1' hsa-miR-95、hsa_miR-18a、hsa-miR-9、hsa_miR-200b、hsa-miR-210、hsa-miR-7Λ hsa-miR-128 和 hsa_miR-106a的任一或多種核酸分子表達上調，而編碼hsa-miR-144、hsa-miR-145、hsa-miR-451、hsa_miR-30a、 hsa-miR-486_5p、 hsa-miR-338_3p、 hsa-miR-139_5p、 hsa_miR-30a'hsa-miR-144、hsa_miR-133b、hsa-miR-497、hsa-miR-187' hsa_miR-30b、hsa-miR-145'hsa-miR-498、has_miR-130a、hsa-miR-30c_2' hsa-miR-1 Λ hsa-miR-150' hsa-miR-134、hsa-miR-328、hsa-miR-638、hsa-miR-1225~5pΛ hsa-miR-1224_5p、hsa-miR-557、hsa-miR-152、hsa-miR-100、hsa-miR-223、hsa-miR-1226' hsa-miR-572、hsa_miR-18b、hsa-miR-9*、hsa-miR-301b、hsa-miR-199b-3p、hsa-miR-34a、hsa-miR-200a*、hsa-miR-26a、hsa-miR-574_3p、 hsa-miR-768_5p、 hsa_miR-29a、 hsa_miR-29b、 hsa-miR-939、·hsa-miR-139_3p、hsa-miR-55Ib、hsa-miR-18la*、hsa-miR-940、hsa-miR-601、hsa_miR-23a、hsa_miR-27a、hsa-miR-199a_5p、hsa-miR-22、hsa-miR-214、hsa_miR-29c'hsa-miR-886_3p、 hsa_miR-26b、 hsa-miR-455_3p、 hsa-miR-222、 hsa-miR-564、hsa-miR-636、hsa_miR-34b'hsa-miR-126、hsa_5miR-l 26'hsa-miR-140_3p、hsa-miR-101、hsa-miR-143、hsa-miR-140_5p、hsa_miR-29c、hsa-miR-199b_5p、hsa-miR-125a~3p 的任一或多種核酸分子的表達下調。在更優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-96、hsa-miR-144、hsa-miR-93、hsa_miR-106b、hsa-miR-25、hsa_miR-15b、hsa-miR-145、hsa-miR-375、hsa-miR-103、hsa_miR-20a、hsa-miR-107、hsa-miR-451、hsa_miR-130b、hsa-miR-454、hsa_miR-30a、hsa-miR-17的任一或多種核酸分子。特別優選地，與所述一或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中編碼hsa-miR-96、hsa-miR-93、hsa_miR-106b、hsa-miR-25、hsa_miR-15b、hsa-miR-375、hsa-miR-103、hsa_miR-20a、hsa-miR-107、hsa-miR-130b、hsa-miR-454、hsa-miR-17 的任一或多種核酸分子表達上調，而編碼 hsa-miR-144、hsa-miR-145、hsa-miR-451、hsa_miR-30a的任一或多種核酸分子的表達下調。在更優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-96、hsa-miR-144、hsa-miR-93、hsa_miR-106b、hsa-miR-25、hsa_miR-15b、hsa-miR-145、hsa-miR-375、hsa-miR-103、hsa_miR-20a 和 hsa-miR-107 的任一或多種核酸分子。特別優選地，與所述一或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中編碼hsa-miR-96、hsa-miR-93、hsa_miR-106b、hsa-miR-25、hsa_miR-15b、hsa-miR-375、hsa-miR-103、hsa_miR-20a和hsa-miR-107的任一或多種核酸分子表達上調，而編碼hsa-miR-144、hsa-miR-145的任一或多種核酸分子的表達下調。在第六方面，本發明涉及用於區別非小細胞肺癌和小細胞肺癌的分子標記的診斷試劑盒，所述試劑盒包含多種核酸分子，每種核酸分子編碼微RNA序列，其中所述多種核酸分子的一或多種在靶細胞和在一或多種對照細胞中差異表達，並且其中所述一或多種差異表達的核酸分子一起代表一種核酸表達特徵，該核酸表達特徵是存在非小細胞肺癌或小細胞肺癌的指徵。本文限定的核酸表達特徵可包括至少17種核酸分子，優選地至少8種核酸分子。在優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與一或多種對照細胞相比被上調；以及包括至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與一或多種對照細胞相比被下調。在更優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-375、hsa-miR-335、hsa_miR-23a、hsa_miR-27a、hsa-miR-22、hsa-miR-592、hsa_miR-135a、hsa—miR-24、hsa-miR-454、hsa_miR-301a、hsa-miR-199b_5p、hsa-miR-9、hsa_miR-34a、hsa-miR-199a_5p、hsa-miR-335*、hsa-miR-152 和 hsa_miR-216b 的任一或多種核酸分子。特別優選地，與所述一或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中編碼 hsa_miR-23a、hsa_miR-27a、hsa-miR-22、hsa_miR-135a、hsa-miR-199b_5p、hsa_miR-34a、hsa-miR-199a_5p、hsa-miR-152的任一或多種核酸分子表達上調，而編碼hsa-miR-375、hsa-miR-335、hsa-miR-592、hsa-miR-24、hsa-miR-454、hsa_miR-301a、hsa-miR-9、has-miR-335*> hsa_miR-216b的任一或多種核酸分子的表達下調。在更優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-375、hsa-miR_335、hsa_miR-23a、hsa_miR-27a、hsa-miR-22、hsa-miR-592、hsa_miR-135a 和 hsa-miR-24 的任一或多種核酸分子。特別優選地，與所述一或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中編碼hsa-miR-23a、hsa_miR-27a、hsa-miR-22、hsa-miR-135a 的任一或多種核酸分子表達上調而編碼 hsa-miR-375、hsa-miR-335、hsa-miR-592、hsa-miR-24 的任一或多種核酸分子的表達下調。在第七方面，本發明涉及用於將腺癌肺癌、鱗狀細胞肺癌或小細胞肺癌與其它兩種區別開的分子標記的診斷試劑盒，所述試劑盒包含多種核酸分子，每種核酸分子編碼微RNA序列，其中所述多種核酸分子的一或多種在靶細胞和在一或多種對照細胞中差異表達，並且其中所述一或多種差異表達的核酸分子一起代表一種核酸表達特徵，該核酸表達特徵是存在腺癌肺癌、鱗狀細胞肺癌或小細胞肺癌的指徵。本文限定的核酸表達特徵可包括至少23種核酸分子，優選地至少7種核酸分子。在優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與一或多種對照細胞相比被上調；以及包括至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與一或多種對照細胞相比被下調。在更優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-25、hsa-miR-205、hsa_miR-34a、hsa-miR-375、hsa_miR-29a、hsa_miR-27a、hsa_miR-29b、hsa-miR-93、hsa_miR-106b、hsa_miR-15b、hsa-miR-454、hsa_miR-301a、hsa-miR-145、hsa_miR-29c、hsa-miR-221、hsa-miR-335、hsa_miR-23a、hsa-miR-199a_5p、hsa-miR-22、hsa-miR-592、hsa-miR-95、hsa-miR-24 和 hsa_miR-92a 的任一或多種核酸分子。特別優選地，與鱗狀細胞肺癌和小細胞肺癌相比，在腺癌肺癌中編碼hsa_miR-34a、hsa_miR-29a、hsa_miR-29b、hsa-miR-145、hsa_miR-29c 的任一或多種核酸分子表達上調，而編碼 hsa-miR-25、hsa-miR-93、hsa_miR-301a、hsa_miR-106b、hsa-miR_15b、has_miR-92a的任一或多種核酸分子的表達下調。在腺癌肺癌中編碼hsa-miR-205、hsa_miR-27a、hsa-miR-221的任一或多種核酸分子,與小細胞肺癌相比表達上調，與鱗狀細胞肺癌相比表達下調。在腺癌肺癌中編碼hsa-miR-375的核酸分子，與鱗狀細胞肺癌相比表達上調，與小細胞肺癌相比表達下調。與小細胞肺癌相比，在腺癌肺癌中編碼 hsa-miR-24、hsa_miR-23a、hsa-miR-22、hsa-miR-199a_5p 的任一或多種核酸分子表達上調，而編碼 hsa-miR-592、hsa-miR-335、hsa-miR-95、hsa-miR-454 的任一或多種核酸分子的表達下調。在更優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-25、hsa-miR-205、hsa-miR-34a、hsa-miR-375、hsa-miR-29a、hsa-miR-27a、hsa-miR-29b 的任一或多種核酸分子。
特別優選地，與鱗狀細胞肺癌和小細胞肺癌相比，在腺癌肺癌中編碼hsa-miR_34a、hsa_miR-29a、hsa_miR-29b的任一或多種核酸分子表達上調，而編碼hsa-miR-25的核酸分子表達下調。在腺癌肺癌中編碼hsa-miR-205、hsa_miR-27a的任一或多種核酸分子，與小細胞肺癌相比表達上調，與鱗狀細胞肺癌相比表達下調。在腺癌肺癌中編碼hsa-miR-375的核酸分子，與鱗狀細胞肺癌相比表達上調，與小細胞肺癌相比表達下調。在第八方面，本發明涉及用於區別腺癌肺癌和鱗狀細胞肺癌的分子標記的診斷試劑盒，所述試劑盒包含多種核酸分子，每種核酸分子編碼微RNA序列，其中所述多種核酸分子的一或多種在祀細胞和在一或多種對照細胞中差異表達，並且其中所述一或多種差異表達的核酸分子一起代表一種核酸表達特徵，該核酸表達特徵是存在腺癌肺癌或鱗狀細胞肺癌的指徵。本文限定的核酸表達特徵可包括至少14種核酸分子，優選地至少8種核酸分子。在優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與一或多種對照細胞相比被上調；以及包括至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與一或多種對照細胞相比被下調。在更優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-497、hsa-miR-93、hsa-miR-25、hsa_miR-29c、hsa-miR-205、hsa-miR-375、hsa-miR-149、hsa_miR-29a、hsa-miR-1、hsa_miR-15b、hsa_miR-181c、hsa_miR-29b、hsa-miR-769_5p 和 hsa-miR-221的任一或多種核酸分子。特別優選地，與所述一或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中編碼hsa-miR-497、hsa_miR-29c、hsa-miR-375、hsa_miR-29a、hsa-miR-l、hsa_miR-181c、hsa-miR-29b的任一或多種核酸分子表達上調，而編碼hsa-miR-93、hsa-miR-25、hsa-miR-205、hsa-miR-149、hsa_miR-15b、hsa-miR-769_5p、hsa-miR-221 的任一或多種核酸分子的表達下調。在更優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-497、hsa-miR-93Λhsa-miR-25、hsa_miR-29c、hsa-miR-205、hsa-miR-375、hsa-miR-149 和 hsa_miR-29a 的任一或多種核酸分子。特別優選地，與所述一或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中編碼hsa-miR-497、hsa_miR-29c、hsa-miR-375、hsa_miR-29a 的任一或多種核酸分子表達上調，而編碼 hsa-miR-93、hsa-miR-25、hsa-miR-205、hsa-miR-149 的任一或多種核酸分子的表
達下調。在第九方面，本發明涉及一種鑑定顯示或具有發生肺癌傾向的一或多種靶細胞的方法，所述方法包括(a)在一或多種靶細胞中確定多種核酸分子的表達水平，每種核酸分子編碼微RNA序列；(b)在一或多種健康對照細胞中確定所述多種核酸分子的表達水平；及(c)通過比較在步驟(a)和(b)中獲得的各自表達水平而從所述多種核酸分子中鑑定在靶細胞和對照細胞中差異表達的一或多種核酸分子，其中所述一或多種差異表達的核酸分子一起代表了本文限定的核酸表達特徵，該核酸表達特徵是存在肺癌或有肺癌發生傾向的指徵。在本發明的更優選的實施方案中，所述方法進一步用於區別肺癌中的腺癌肺癌、鱗狀細胞肺癌和小細胞肺癌。
在第十方面，本發明涉及一種預防或治療肺癌的方法，所述方法包括所述方法包括(a)用本文限定的方法在一或多種靶細胞中鑑定核酸表達特徵；和(b)在所述一或多種細胞中改變在所述核酸表達特徵中所包含的編碼微RNA序列的一或多種核酸分子的表達，所述改變以如下的方式進行，即其表達在所述一或多種靶細胞中被上調的核酸分子的表達被下調，而其表達在所述一或多種靶細胞中被下調的核酸分子的表達被上調。在第十一方面，本發明涉及用於預防和/或治療肺癌的藥物組合物，所述組合物包含一或多種核酸分子，每種核酸分子編碼序列，所述序列與本文限定的其表達在肺癌患者中被上調的核酸分子編碼的微RNA序列至少部分互補，和/或所述序列對應於本文限定的其表達在肺癌患者中被下調的核酸分子編碼的微RNA序列的序列。最後，在第十二方面，本發明涉及所述藥物組合物在製備用於預防和/或治療肺癌的藥物中的用途。本發明的其它實施方案從以下詳細描述中將變得明了。附圖簡述圖I :描繪了流程圖，示意性示出用於確定本發明的表達特徵的關鍵方法步驟，所述表達特徵用於鑑定顯示或具有發生肺癌傾向的一或多種靶細胞。圖2 :示出在正常肺組織和不同類別肺癌中差異表達的miRNA的一個非監督層次分類。該分類將大部分正常樣本歸為一組，大部分肺癌樣本歸為另一組。肺癌的不同類別，包括小細胞肺癌、鱗狀細胞肺癌、腺癌肺癌，也清楚地彼此區分開來。圖3 :示出本發明的第一方面中的前7個miRNA表達特徵，用於鑑定顯示肺癌的一或多種靶細胞。還示出該交叉驗證分類的精確度，以及這些miRNA作為分類標記，與正常肺組織相比，在肺癌組織中的表達調節(即上調或下調)。圖4:示出本發明的第二方面中的前9個miRNA表達特徵，用於鑑定顯示非小細胞肺癌的一或多種靶細胞，包括鱗狀細胞肺癌和腺癌肺癌。還示出該交叉驗證分類的精確度，以及這些miRNA作為分類標記，與正常肺組織相比，在非小細胞肺癌中的表達調節(即上調或下調)。圖5 :示出本發明的第三方面中的前5個miRNA表達特徵，用於鑑定顯示腺癌肺癌的一或多種靶細胞。還示出該交叉驗證分類的精確度，以及這些miRNA作為分類標記，與正常肺組織相比，在腺癌肺癌中的表達調節(即上調或下調)。圖6 :示出本發明的第四方面中的前9個miRNA表達特徵，用於鑑定顯示鱗狀細胞肺癌的一或多種靶細胞。還示出該交叉驗證分類的精確度，以及這些miRNA作為分類標記，與正常肺組織相比，在鱗狀細胞肺癌中的表達調節(即上調或下調)。圖7 :示出本發明的第五方面中的前11個miRNA表達特徵，用於鑑定顯示小細胞肺癌的一或多種靶細胞。還示出該交叉驗證分類的精確度，以及這些miRNA作為分類標記，與正常肺組織相比，在小細胞肺癌中的表達調節(即上調或下調)。圖8 :示出本發明的第六方面中的前8個miRNA表達特徵，用於區別非小細胞肺癌(NSCLC)和小細胞肺癌(SCLC)。還示出該交叉驗證分類的精確度，以及這些miRNA作為分類標記，與小細胞肺癌相比，在非小細胞肺癌中的表達調節(即上調或下調)。圖9 :示出基於不同類別肺癌中差異表達的miRNA的一個非監督層次分類，顯示小細胞肺癌、鱗狀細胞肺癌和腺癌肺癌，清楚地彼此區分開來。·

圖10 :示出本發明的第八方面中的前8個miRNA表達特徵，用於區別腺癌肺癌(AC)和鱗狀細胞肺癌(SQ)。還示出該交叉驗證分類的精確度，以及這些miRNA作為分類標記，與鱗狀細胞肺癌相比，在腺癌肺癌中的表達調節(即上調或下調)。發明詳細描述本發明基於如下出乎意料的發現，即基於特定的miRNA表達特徵，可以高精確性和靈敏性可靠地鑑定肺癌，並區分不同類型的肺癌，其中所述表達特徵如本文定義典型地包括被上調和下調的人類m i RNA。更特別地,所述m i RNA表達特徵一通過分析整體m i RNA表達模式和/或各個miRNA表達水平一使得能檢測早期疾病狀態下的肺癌以及區分不同類型的肺癌。本發明的以下例證可以在缺少本文中未具體揭示的任何一或多個元件、一或多種限制的條件下適當地實施。本發明將根據特定的實施方案並參照附圖加以描述，但是本發明不受其限制，僅受權利要求書限制。所描述的附圖僅是示意性的，被認為是非限制性的。當術語「包含」被用於本發明說明書和權利要求書中時，其不排除其它元件或步驟。為本發明目的，術語「由…組成」被認為是術語「包含」的優選實施方案。如果在下文中組被限定為包含至少一定數目的實施方案，這也被理解為揭示了優選地僅由這些實施方案組成的組。當指代單數形式名詞使用不定冠詞或定冠詞，例如「一個」或「一種」，「所述」時，包括該名詞的複數形式，除非特別指出。術語「大約」在本發明中是指本領域技術人員理解仍能保證目的特徵的技術效果的精確性區間。該術語通常表示偏離指示值的±10%，優選±5%。另外，術語第一、第二、第三、(a)、(b)、(C)等在說明書和權利要求書中用於區分類似的元件，不是描述順序或時間次序必須的。應理解如此應用的術語在合適情況下可互換，並且本發明描述的實施方案能以不同於本文所述或例證的其它順序操作。術語的進一步定義在以下使用術語時給出。以下術語或定義僅為了理解本發明而提供。這些定義不應被認為具有小於本領域技術人員理解的範圍。
本發明的目的之一是提供通過確定多種核酸分子而診斷和/或治療肺癌和/或發生這種病症的傾向的新方法，每種核酸分子編碼一個微RNA(miRNA)序列，其中與健康對照細胞相比，所述多種核酸分子的一或多種在所分析的靶細胞中差異表達，並且其中所述一或多種差異表達的核酸分子一起代表一種核酸表達特徵，該核酸表達特徵是存在肺癌或有肺癌發生傾向的指徵。更具體地，本發明的目的之一是提供核酸表達特徵和/或組合物，用於鑑定顯示或具有發生肺癌傾向的一或多種哺乳動物靶細胞和/或區別肺癌的不同類型。肺癌的不同類型包括鱗狀細胞癌、腺癌和小細胞肺癌。本文所用術語「癌症」(也稱為「癌(carcinoma)」)，通常指任何類型的惡性贅生物，即與未受影響的(健康)野生型對照細胞相比顯示或具有發生癌特徵傾向的靶細胞的任何形態學和/或生理學改變(基於遺傳重編程(genetic re-programming)) 這種改變的例子可涉及細胞大小和形狀(變大或變小)、細胞增殖(細胞數增加)、細胞分化(生理學狀態變化)、凋亡(程序性細胞死亡)或細胞存活。·
本文所用術語「肺癌」是指肺組織中失控的細胞生長，或肺的癌性生長。本文所用術語「肺癌的不同類型」包括腺癌肺癌、鱗狀細胞肺癌和小細胞肺癌。「腺癌肺癌」(「Adenocarcinoma lung cancer，，或「adenocarcinoma lungcarcinoma」)是一種非小細胞肺癌。80%的肺癌是非小細胞肺癌，其中約50%是腺癌。肺的腺癌源起於肺的外周部位，可在確診之前長時間內存在。最常見於女性的一種肺癌類型，且多見於非吸菸者。「鱗狀細胞肺癌」(「Squamous cell lung cancer，，或「squamous cell lungcarcinoma」)是一種非小細胞肺癌。約30%的NSCLC是鱗狀細胞肺癌。鱗狀細胞肺癌通常源起於肺中央部位的支氣管(大氣道)。多數患者早期即出現症狀，常見咯血(hemoptysis(coughing up blood))。「小細胞肺癌」(「Small cell lung cancer，，或「small cell lung carcinoma，，)被認為起源於組成支氣管(氣道)上皮的一部分(內襯)的神經內分泌細胞。SCLC約佔所有肺癌病例的18%。SCLC具有強侵襲性。生長迅速，可經由血流到達肝臟、肺、骨和腦。診斷時往往已可在這些器官發現腫瘤。本文所用術語「患者」是指至少被認為患有肺癌，或某種類型肺癌的人類。而術語「健康個體」或「健康對照」通常指代不具有該種癌性表型的健康人。但在一些應用中，例如比較肺癌的不同類別時，患有其他類別的肺癌的個體也通常被作為「對照」。在本發明的體外方法中用於檢測的樣品通常應以臨床可接受的方式收集，優選以保護核酸(特別是RNA)或蛋白質的方式收集。待分析的樣品典型地來源於組織。另外，血液及其它類型樣品也可以使用。樣品，特別在最初加工之後可以合併。但是也可以使用未合併的樣品。本文所用術語「微RNA」(或「miRNA」)是其在本領域的普通含義(Bartel，D.P. (2004) Cell 23，281-292 ；He, L. and Hannon, G. J. (2004)Nat. Rev. Genet. 5，522-531)。因此，「微RNA」是指衍生自基因組基因座的RNA分子，其從可以形成局部RNA前體miRNA結構的轉錄物加工而來。成熟miRNA通常長度為20、21、22、23、24或25個核苷酸，其它數目的核苷酸也可存在，例如18、19、26或27個核苷酸。
miRNA編碼序列具有與側翼基因組序列配對的潛力，將成熟miRNA置於非完全配對的RNA雙鏈體之內(本文也稱作莖-環或髮夾結構或pre-miRNA)，所述雙鏈體作為從更長的前體轉錄物進行miRNA加工的中間體。這一加工典型地通過分別稱為Drosha和Dicer的兩種特異的內切核酸酶的連續作用而發生。Drosha從初級轉錄物(本文也稱作「pri-miRNA」)產生典型地摺疊成髮夾或莖-環結構的miRNA前體(本文也稱作「pre-miRNA」)。從這個miRNA前體，通過Dicer切割miRNA雙鏈體，其在髮夾或莖-環結構的一條臂包含成熟miRNA，在另一條臂包含類似大小的節段(通常稱為miRNA*)。miRNA然後被導向其靶mRNA以發揮其功能，而miRNA*被降解。另外，miRNA典型地衍生自與預測的蛋白質編碼區不同的基因組節段。本文所用術語「miRNA前體」(或「前體miRNA」或「pre-miRNA」 )是指從其加工成熟miRNA的miRNA初級轉錄物的部分。典型地,pre-miRNA摺疊成穩定的髮夾(即雙鏈體)或莖-環結構。髮夾結構典型地長度為50-80個核苷酸，優選60-70個核苷酸(計數miRNA殘基，與miRNA配對的殘基，及任何間插節段，但排除更遠端的序列)。
本文所用術語「編碼微RNA序列的核酸分子」是指編碼微RNA (miRNA)的任何核酸分子。因此，該術語不僅指成熟miRNA,也指相應的如上所述的前體miRNA及初級miRNA轉錄物。另外，本發明不限於RNA分子，也包括相應的編碼微RNA的DNA分子，例如通過逆轉錄miRNA序列產生的DNA分子。編碼本發明的微RNA序列的核酸分子典型地編碼單個miRNA序列(即個體miRNA)。但是，也可能這種核酸分子編碼兩個或多個miRNA序列(即兩個或多個miRNA)，例如一個轉錄單位包含在常用調節序列如啟動子或轉錄終止子控制下的兩個或多個miRNA序列。本文所用術語「編碼微RNA序列的核酸分子」也被理解為包括「有義核酸分子」(即核酸序列(5』 一3』)匹配或相應於所編碼的miRNA(5』 一3』)序列的分子)及「反義核酸分子」(即核酸序列互補於所編碼的miRNA(5』 一 3』)序列或者換句話說匹配所編碼的miRNA序列的反向互補序列(3』 一5』)的分子)。本文所用術語「互補」是指「反義」核酸分子序列與相應的「有義」核酸分子序列(具有互補於反義序列的序列)形成鹼基對、優選Watson-Crick鹼基對的能力。在本發明範圍內，兩個核酸分子(即「有義」和「反義」分子)可以完全互補，即它們不含有任何鹼基錯配和/或額外的或缺失的核苷酸。或者，兩個分子包含一或多個鹼基錯配或者在它們的核苷酸總數上不同(由於添加或缺失導致)。優選地，「互補」核酸分子包含與包含在相應的「有義」核酸分子中的序列顯示完全互補性的至少10個連續核苷酸。因此，包含在本發明的診斷試劑盒中的編碼miRNA序列的多種核酸分子可包括一或多種「有義核酸分子」和/或一或多種「反義核酸分子」。有時，診斷試劑盒包括一或多種「有義核酸分子」(即miRNA序列本身)，所述分子被認為組成了差異表達的miRNA(即分子標記)的全體或至少亞集合，所述差異表達的miRNA是存在或發生特定病症傾向的指徵，本文是肺癌。另一方面，當診斷試劑盒包括一或多種「反義核酸分子」(即與miRNA序列互補的序列)時，所述分子可包含適合用於檢測和/或定量給定樣品中的一或多種特定(互補)miRNA序列的探針分子(用於進行雜交測定)和/或寡核苷酸引物(例如用於逆轉錄或PCR應用)。在本發明中定義的多種核酸分子可以包含至少2種、至少10種、至少50種、至少100種、至少200種、至少500種、至少1000種、至少10000種或至少100000種核酸分子，每種分子編碼一個miRNA序列。本文所用術語「差異表達」是指特定miRNA在靶細胞中的表達水平相比於健康對照細胞是改變的，其可以是上調(即在靶細胞中miRNA濃度增加)或下調(即在靶細胞中miRNA濃度降低或消失)。換句話說，核酸分子在靶細胞中被激活至比在對照細胞中更高或更低的水平。在本發明範圍內，核酸分子被認為是差異表達的，如果該核酸分子在靶細胞和對照細胞中的相應表達水平典型地相差至少5%或至少10%，優選地至少20%或至少25%，最優選地至少30%或至少50%。因此，後者的值相應於給定核酸分子在靶細胞中的表達水平相比於對照細胞分別上調至少I. 3倍或至少I. 5倍，或者反之在靶細胞中的表達水平下調至少O. 7倍或至少O. 5倍。本文所用術語「表達水平」是指特定的miRNA序列從其基因組基因座被轉錄的程度，即miRNA在一或多種被分析細胞中的濃度。如上所述，術語「對照細胞」典型地是指收集自(健康)個體的不具有肺癌表型特徵的細胞樣本。但是，在一些應用中，例如比較肺癌的不同類別時，收集自其他類別的肺癌個體的細胞也通常被作為「對照細胞」。表達水平的確定典型地遵循本領域熟知的已建立的標準程序(Sambrook，J.et al. (1989)Molecular Cloning:A Laboratory Manual. 2nd Ed. , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY ；Ausubel, F. M. et al. (2001)CurrentProtocols in Molecular Biology. ffiley&Sons, Hoboken, NJ) 確定可以在 RNA 水平進行，例如使用miRNA特異性探針進行Northern印跡分析,或者在逆轉錄(及克隆)RNA群後例如通過定量PCR或實時PCR技術在DNA水平進行。本文所用術語「確定」包括分析編碼上述微RNA序列的任何核酸分子。但是，由於pri-miRNA及pre-mRNA半壽期短,典型地僅測量成熟miRNA的濃度。在特異的實施方案中，在給定樣品的若干獨立測量(例如兩個、三個、五個或十個測量)和/或在一群靶細胞或對照細胞內的若干測量中獲得的表達水平的標準值被用於分析。標準值可以用本領域已知的任何方法獲得。例如，平均值±2SD(標準差)或平均值±3SD的範圍可被用作標準值。所獲得的病變細胞和對照細胞的表達水平之間的差異可以歸一化至進一步的對照核酸的表達水平，例如已知管家基因的表達水平不根據樣本來源個體的疾病狀態而不同。舉例的管家基因包括β_肌動蛋白、甘油醛-3-磷酸脫氫酶和核糖體蛋白Pl等。在優選的實施方案中，對照核酸是已知在樣本來源個體的不同非癌和癌(前)狀態中穩定表達的另一種miRNA。但是，代替在任何實驗中確定一或多種對照細胞的表達水平，也可以基於實驗證據和/或現有技術數據定義針對特定細胞表型(即疾病狀態)的一或多個截斷值。在這種情況中，一或多種靶細胞的相應表達水平可以用用於歸一化的穩定表達的對照miRNA確定。如果計算的「歸一化」的表達水平高於相應定義的截斷值，則這一發現是基因表達上調的指徵。反之，如果計算的「歸一化」的表達水平低於相應定義的截斷值，則這一發現是基因表達下調的指徵。
在本發明中，術語「鑑定顯示或具有發生肺癌傾向的一或多種哺乳動物靶細胞」也包括預測和可能性分析(「診斷」意義上)。本文公開的組合物和方法意在臨床應用，以決定治療形式，包括治療性幹預，診斷標準如疾病階段，和疾病監控和疾病監視。根據本發明，可提供用於檢查對象狀態的中間結果。這種中間結果可與額外信息組合以幫助醫生、護士或其它從業人員診斷出該對象患有該疾病。或者，本發明可用於從細胞樣本中檢測癌性改變，並提供有用信息給醫生以進行診斷。另外，本發明還用於區別不同類型的肺癌。在本發明中，所鑑定的一或多種差異表達的核酸分子一起代表一種核酸表達特徵，該核酸表達特徵是存在肺癌的指徵。本文所用術語「表達特徵」是指一組核酸分子(例如miRNA)，其中各個核酸分子的表達水平在收集自肺癌患者的細胞和健康對照之間不同。本文中，核酸表達特徵也指一組標記並代表最低數目的(不同)核酸分子，每種核酸分子編碼能鑑定一個個體的表型狀態的miRNA序列。在第一方面，本發明涉及用於鑑定顯示或具有發生肺癌傾向的一或多種哺乳動物靶細胞的分子標記的診斷試劑盒，所述試劑盒包含多種核酸分子，每種核酸分子編碼微RNA序列，其中所述多種核酸分子的一或多種在靶細胞和在一或多種對照細胞中差異表達，並 且其中所述一或多種差異表達的核酸分子一起代表一種核酸表達特徵，該核酸表達特徵是存在肺癌或有肺癌發生傾向的指徵。本文限定的核酸表達特徵可包括至少82種核酸分子，優選地至少13種核酸分子，特別優選地至少7種核酸分子。在優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與一或多種對照細胞相比被上調；以及包括至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與一或多種對照細胞相比被下調。在更優選的實施方案中，所述核酸表達特徵包括編碼hsa-miR-183(SEQ IDNO: I)、hsa-miR-451 (SEQ ID NO: 4)、hsa-miR-126 (SEQ ID NO: 54)、hsa-miR-126* (SEQ IDN0:55)、hsa-miR-30a(SEQ ID NO:56)、hsa-miR-145(SEQ ID NO:58)、hsa-miR-140_3p(SEQID NO: 59)、hsa-miR-96 (SEQ ID NO: 2)、hsa-miR-144 (SEQ ID NO: 3)、hsa_miR-200c (SEQID NO:5)、hsa-miR-486-5p (SEQ ID NO :6)、hsa-miR-338_3p (SEQ ID NO:7),hsa-miR-218 (SEQ ID NO: 57)、hsa-miR-139_5p (SEQ ID N0:8)、hsa_miR-130b (SEQ IDN0:9)、hsa-miR-30a*(SEQ ID NO:10)、hsa-miR-144* (SEQ ID NO:11)、hsa-miR-425(SEQ IDN0:12)、hsa-miR-133b(SEQ ID NO:13),hsa-miR-497(SEQ ID NO:14),hsa-miR-182(SEQ IDN0:15)、hsa-miR-187*(SEQ ID NO: 16)、hsa_miR-30b (SEQ ID NO: 17)、hsa-miR-93 (SEQ IDNO:18),hsa-miR-145*(SEQ ID NO:19)、hsa-miR-429(SEQ ID NO:20)、hsa-miR-498(SEQ IDN0:21)、hsa-miR-200a (SEQ ID NO :22),hsa-miR-625(SEQ ID NO:23)、hsa_miR-130a(SEQ ID N0:24)、hsa-miR-30c-2*(SEQ ID NO: 25)、hsa-miR-98 (SEQ ID NO: 26)、hsa-miR-1 (SEQ ID NO:27)、hsa_miR-106b(SEQ ID NO:28),hsa-miR-150*(SEQ ID NO:29)、hsa-miR-25(SEQ ID NO:30)、hsa-miR-134(SEQ ID NO:31)、hsa-miR-328(SEQ ID NO:32)、hsa-miR-638 (SEQ ID NO: 33)、has_miR-200b*(SEQ ID NO: 34)、hsa-miR-1225_5p (SEQID NO: 35) , hsa-miR-1224-5p(SEQ ID NO:36)、hsa-miR-557 (SEQ ID NO:37)、hsa-miR-15b(SEQ ID NO: 38)、has-miR-454 (SEQ ID NO: 39)、hsa_miR-301a (SEQ IDN0:40)、hsa-miR-135b(SEQ ID NO:41),hsa-miR-100(SEQ ID NO:42),hsa-miR-223(SEQ IDN0:43)、hsa-miR-196b(SEQ ID N0:44)、hsa_miR-196a(SEQ ID N0:45)、hsa_miR-1226*(SEQID N0:46)、hsa-miR-424(SEQ ID NO:47)、hsa-miR-21*(SEQ ID NO:48)、hsa-miR-572(SEQID N0:49)、hsa-miR-18b(SEQ ID N0:50)、hsa_miR-18a(SEQ ID NO:51)、hsa_miR-9*(SEQ IDN0:52)、hsa-miR-301b(SEQ ID N0:53)、hsa_miR-101(SEQ ID N0:63)、has_miR-143(SEQ IDN0:61)、hsa-miR-140-5p(SEQ ID N0:62)、hsa_miR-30d(SEQ ID N0:63)、hsa_miR-29c(SEQID N0:64)、hsa-miR-199b-5p (SEQ ID NO:65)、hsa-miR-224 (SEQ ID N0:66)、hsa-miR-125a-3p (SEQ ID NO: 67)、hsa-miR-9 (SEQ ID N0:68)、hsa_5miR-200b (SEQ IDNO:69) ^ hsa-miR-195 (SEQ ID NO: 70)、hsa-miR-210 (SEQ ID NO: 71)、hsa-miR-7 (SEQ IDNO: 72) ^ hsa-miR-21 (SEQ ID NO: 73)、hsa-miR-17 (SEQ ID NO: 74)、hsa-miR-128 (SEQ IDNO:75)、hsa-miR-141(SEQ ID NO:76)、hsa-miR-142_5p(SEQ ID NO:77)、hsa-miR-150(SEQID NO:78)、hsa-miR-205(SEQ ID NO:79)、hsa-miR-192(SEQ ID NO:80)、hsa-miR-215(SEQID NO:81)和 hsa-miR-106a(SEQ ID NO:82)的核酸分子。特別優選地，與所述一或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中編碼has-miR-183、hsa-miR-96、hsa_miR-200c、hsa_miR-130b、hsa-miR-425、hsa-miR-182、has-miR-93、hsa-miR-429、hsa_miR-200a、hsa-miR-625、hsa-miR-98、hsa_miR-106b、·has-miR-25、hsa_miR-200b' hsa_miR-15b、hsa-miR-454、hsa_miR-301a、hsa_miR-135b、hsa_miR-196b、hsa_miR-196a、hsa-miR-424、hsa-miR-21' hsa_miR-18b、hsa_miR-18a、hsa—miR-9' hsa_miR-301b、hsa-miR-224、hsa—miR-9、hsa_miR-200b、hsa-miR-210、hsa-miR-7、 hsa-miR-21、 hsa-miR-17、 hsa-miR-128、 hsa-miR-141、 hsa-miR-205、hsa-miR-192、hsa-miR-215、hsa_miR-106a 的核酸分子表達上調，而編碼 hsa-miR-451、hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa-miR-144、hsa-miR-486_5p、 hsa-miR-338_3p、 hsa-miR-218、 hsa-miR-139_5p、 hsa_miR-30a'hsa-miR-144' hsa_miR-133b、hsa-miR-497、hsa_miR-187' hsa_miR-30b、hsa-miR-145'hsa-miR-498、hsa_miR-130a、hsa-miR-30c_2' hsa-miR-1 Λ hsa-miR-150' hsa-miR-134、hsa-miR-328、 has-miR-638、 hsa-miR-1225_5p、 hsa-miR-1224_5p、 hsa-miR-557、hsa-miR-100、hsa-miR-223、hsa-miR-1226' hsa-miR-572、hsa-miR-101、hsa-miR-143、hsa-miR-140_5p、has_miR-30d、hsa_miR-29c、hsa-miR-199b_5p、hsa-miR-125a_3p、hsa-miR-195、hsa-miR-142_5p和hsa-miR-150的任一或多種核酸分子的表達下調。上述miRNA的核酸序列列於表I。表I
miRNA序列(5，一 3』)
hsa-miR-183uauggcacugguagaauucacu
hsa-miR-96uuuggcacuagcacauuuuugcu
hsa-miR-144uacaguauagaugauguacu
hsa-miR-451aaaccguuaccauuacugaguu
hsa—miR—200cuaauacugccggguaaugaugga
hsa—miR—486—5puccuguacugagcugccccgag
hsa—miR—338—3puccagcaucagugauuuuguug
hsa—miR—139—5pucuacagugcacgugucuccag
hsa—miR—130bcagugcaaugaugaaagggcau
hsa-miR-30a*cuuucagucggauguuugcagc
權利要求
1.用於鑑定展現出或具有發展肺癌的傾向的一或多種哺乳動物靶細胞的分子標記診斷試劑盒，所述試劑盒包含多種核酸分子，每種核酸分子均編碼微RNA序列， 其中所述多種核酸分子中的一或多種在所述靶細胞和在一或多種對照細胞中差異表達，及 其中所述一或多種差異表達的核酸分子一起代表核酸表達特徵，所述核酸表達特徵是存在肺癌和/或不同類型肺癌的指徵、或者是具有發展肺癌和/或不同類型肺癌傾向的指徵；並且 其中所述不同肺癌由腺癌肺癌、鱗狀細胞肺癌和小細胞肺癌所組成。
2.權利要求I的試劑盒，其中所述核酸表達特徵可包含至少82種核酸分子，優選至少13種核酸分子，特別優選至少7種核酸分子。
3.權利要求1-2的試劑盒，其中所述核酸表達特徵包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與在一或多種對照細胞中相比被上調；以及包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子,其表達在一或多種祀細胞中與在一或多種對照細胞中相比被下調。
4.權利要求1-3任一項的試劑盒,其中所述核酸表達特徵包含編碼hsa-miR-183、has-miR-451、hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa-miR-96、 hsa-miR-144、 hsa_miR-200c、 hsa-miR-486_5p、 hsa-miR-338_3p、has-miR-218、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-130b、hsa-miR-30a*、hsa-miR-144*、hsa-miR-425、hsa_miR-133b、hsa-miR-497、hsa-miR-182、hsa-miR-187' hsa_miR-30b、hsamiR-93、hsa-miR-145' hsa-miR-429、hsa-miR-498、hsa_miR-200a、hsa-miR-625、has_miR-130a、hsa-miR-30c_2' hsa-miR-98、hsa-miR-l、hsa_miR-106b、hsa-miR-150' hsa-miR-25、hsa-miR-134、 hsa-miR-328、 hsa-miR-638、 hsa_miR-200b*、 hsa-miR-1225_5p、hsa-miR-l224~5pλ hsa_miR-557、 hsa_miR-15b、 hsa_miR-454、 hsa_miR-30la、hsa_miR-135b、hsa-miR-100、hsa-miR-223、hsa_miR-196b、hsa_miR-196a、hsa-miR-1226'hsa-miR-424、hsa-miR-21' hsa-miR-572、hsa_miR-18b、hsa_miR-18a、has-miR-9'hsa_miR-301b、hsa-miR-101、hsa-miR-143、hsa-miR-140_5p、hsa_miR-30d、hsa_miR-29c、hsa-miR-l99b-5pλ hsa-miR-224、hsa-miR-125a_3p、hsa-miR-9、has_miR-200b、hsa-miR-195、 hsa_miR-210、 hsa_miR-7、 hsa_miR-21、 hsa_miR-17、 has_miR-128、hsa-miR-141、hsa-miR-142_5p、hsa-miR-150、hsa-miR-205、hsa-miR-192、hsa-miR-215 和hsa-miR-106a的任意一種或多種核酸分子。
5.權利要求4的試劑盒，其中與所述一種或多種正常對照細胞相比，在所述一或多種革巴細胞中，編碼 has-miR-183、hsa-miR-96Λ hsa_miR-200c、hsa_miR-130b、hsa-miR-425、hsa-miR-182、has-miR-93、hsa-miR-429、hsa_miR-200a、hsa-miR-625、hsa-miR-98、hsa_miR-106b、has-miR-25、hsa_miR-200b' hsa_miR-15b、hsa-miR-454、hsa_miR-301a、hsa_miR-135b、hsa_miR-196b、hsa_miR-196a、hsa-miR-424、hsa-miR-21' hsa_miR-18b、hsa_miR-18a、hsa-miR-9' hsa_miR-301b、hsa-miR-224、hsa-miR-9、hsa_miR-200b、hsa-miR-210、 hsa-miR-7、 hsa-miR-21、 hsa-miR-17、 hsa-miR-128、 hsa-miR-141Λhsa-miR-205、hsa-miR-192、hsa-miR-215、hsa-miR-106a 的核酸分子的表達被上調，而編碼hsa-miR-451、hsa-miR-126、has-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa-miR-144、 hsa-miR-486_5p、 hsa-miR-338_3p、 hsa-miR-218、 hsa-miR-139_5p、hsa_miR-30a*、hsa-miR-144' hsa_miR-133b、hsa-miR-497、hsa-miR-187' hsa_miR-30b、hsa-miR-145' hsa-miR-498、hsa_miR-130a、hsa-miR-30c_2*，hsa-miR-l、hsa-miR-150'hsa-miR-134、 has-miR-328、 hsa-miR-638、 hsa-miR-1225_5p、 hsa-miR-1224_5p、hsa-miR-557、hsa-miR-100、hsa-miR-223、hsa-miR-1226' hsa-miR-572，、hsa_miR-101、hsa-miR-143、 has-miR-140_5p、 hsa_miR-30d、 hsa_miR-29c、 hsa-miR-199b_5p、hsa-miR-125a_3p、has-miR-195、hsa-miR-142_5p 和 hsa-miR-150 的任意一種或多種核酸分子的表達被下調。
6.權利要求1-3任一項的試劑盒，其中所述核酸表達特徵包含編碼hsa-miR-183、hsa-miR-451、hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa-miR-96、hsa-miR-144、hsa_miR-200c、hsa-miR-486_5p、hsa-miR-338_3p 和hsa-miR-218的核酸分子。
7.權利要求6的試劑盒，其中與所述一種或多種正常對照細胞相比，在所述一或多種革E細胞中，編碼hasniR-183、hsa-miR-96和hsaniR-200c的核酸分子的表達被上調，而編碼 hsa-miR-451、hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-145、hsa-miR-140-3p、hsa-miR-14、hsa-miR-486-5p、hsa-miR-338-3p 和 hsa-miR-218 的任意一種或多種核酸分子的表達被下調。
8.權利要求1-3任一項的試劑盒，其中所述核酸表達特徵包含編碼hsa-miR-183、has-miR-451、hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-145 和 hsa-miR-140_3p的任意一種或多種核酸分子。
9.權利要求8的試劑盒，其中與所述一種或多種正常對照細胞相比，在所述一或多種革巴細胞中，hsa-miR-183 的表達被上調，而編碼 has-miR-451、hsa-miR-126、hsa-miR-126*、hsa-miR-30a、hsa_miR-145和hsa-miR-140_3p的任意一種或多種核酸分子的表達被下調。
10.權利要求I的試劑盒，其中所述肺癌為非小細胞肺癌，包括鱗狀細胞肺癌和腺癌肺癌。
11.權利要求I或10的試劑盒，其中所述核酸表達特徵可包含至少70種核酸分子，優選至少14種核酸分子，特別優選至少9種核酸分子。
12.權利要求1、10或11的試劑盒，其中所述核酸表達特徵包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與在一或多種對照細胞中相比被上調；以及包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種祀細胞中與在一或多種對照細胞中相比被下調。
13.權利要求I或10-12任一項的試劑盒，其中所述核酸表達特徵包含編碼hsa-miR-183、has-miR-451、hsa-miR-497、hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-218，hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa-miR-96、hsa-miR-144、hsa_miR-200c、hsa-miR-486_5p、hsa-miR-139_5p、hsa-miR-338_3p、hsa_miR-130b、hsa-miR-144'hsa-miR-425、hsa_miR-133b、hsa-miR-182、hsa-miR-187' hsa_miR-30b、hsa-miR-93、has-miR-145' hsa-miR-429、hsa-miR-498、hsa_miR-200a、hsa-miR-625、hsa_miR-130a、hsa-miR-30c_2' hsa_miR-98、hsa-miR-l、hsa-miR-150' hsa_miR-25、hsa-miR-134、hsa-miR-328、hsa-miR-638Λ hsa-miR-200b*、hsa-miR-1225_5p、hsa-miR-1224_5p、hsa-miR-557、hsa_miR-135b、hsa-miR-lOO、hsa-miR-424、hsa-miR-21' hsa_miR-30a'hsa-miR-494、hsa-miR-193b、hsa-miR-99a、hsa-miR-335、hsa-miR-106b、hsa-miR-140-5p、hsa-miR-101、hsa-miR-143、hsa_miR-30d、hsa_miR-29c、hsa_miR-224、has_miR-9、hsa_miR-200b、hsa_miR-195、hsa_miR-210、hsa_miR-7、hsa_miR-21、hsa_miR-128、hsa-miR-141、hsa-miR-142_5p、hsa-miR-150、hsa-miR-205、hsa-miR-192 和 hsa-miR-215的任意一種或多種核酸分子。
14.權利要求13的試劑盒，其中與所述一種或多種正常對照細胞相比，在所述一或多種革巴細胞中，編碼 hsa-miR-183、hsa-miR-96、hsa_miR-200c、hsa_miR-130b、has-miR-425、hsa-miR-182、hsa-miR-93、hsa-miR-429、hsa_miR-200a、hsa-miR-625、has-miR-98、hsa-miR-25、hsa_miR-200b' hsa_miR-135b、hsa-miR-424、hsa-miR-21' hsa-miR-494、hsa_miR-193b、hsa_miR-106b、hsa—miR-224、hsa—miR-9、hsa_miR-200b、hsa—miR-210、hsa-miR-7、hsa_miR-21、hsa_miR-128、hsa-miR-141、hsa-miR-205、has_miR-192、hsa-miR-215的任意一種或多種核酸分子的表達被上調，而編碼hsa-miR-451、hsa-miR-497、hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-218、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa-miR-144、has-miR-486_5p 和 hsa-miR-139_5p、hsa-miR-338_3p、hsa-miR-144*、hsa_miR-133b、hsa-miR-187' hsa_miR-30b、hsa-miR-145' hsa-miR-498、hsa_miR-130a、hsa-miR-30c_2' hsa-miR-lΛ hsa-miR-150' hsa-miR-134、hsa-miR-328Λhsa-miR-638、has-miR-1225_5p、hsa-miR-l224~5pΛ hsa-miR-557、hsa-miR-100、hsa_miR-30a*、hsa_miR-99a、hsa_miR-335、hsa-miR-140_5p、hsa-miR-101 Λ hsa-miR-143、hsa_miR-30d、has_miR-29c、hsa-miR-195、hsa-miR-142_5p、hsa-miR-150 的任意一種或多種核酸分子的表達被下調。
15.權利要求I或10-12任一項的試劑盒，其中所述核酸表達特徵包含編碼hsa-miR-183、has-miR-451、hsa-miR-497、hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-218、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa-miR-96、hsa-miR-144、hsa_miR-200c、hsa-miR-486_5p和hsa-miR-139_5p的任意一種或多種核酸分子。
16.權利要求15的試劑盒，其中與所述一種或多種正常對照細胞相比，在所述一或多種革E細胞中，編碼hsa-miR-183、hsa-miR-96Λ hsaniR-200c的任意一種或多種核酸分子的表達被上調，而編碼 has-miR-451、hsa-miR-497、hsa-miR-126、hsa-miR-126*、hsa_miR-30a、hsa-miR-218、hsa-miR-145，hsa-miR-140_3p、hsa-miR-144、hsa-miR-486_5p和hsa-miR-139_5p的任意一種或多種核酸分子的表達被下調。
17.權利要求I或10-12任一項的試劑盒，其中所述核酸表達特徵包含編碼hsa-miR-183、has-miR-451、hsa-miR-497、hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-218、hsa-miR-145 和 hsa-miR-140_3p 的任意一種或多種核酸分子。
18.權利要求17的試劑盒，其中與所述一種或多種正常對照細胞相比，在所述一或多種革G細胞中，hsa-miR-183的表達被上調，而編碼has-miR-451、hsa-miR-497、hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-218、hsa-miR-145 和 hsa-miR-140_3p的任意一種或多種核酸分子的表達被下調。
19.權利要求I的試劑盒，其中所述肺癌為腺癌肺癌。
20.權利要求I或19的試劑盒，其中所述核酸表達特徵可包含至少57種核酸分子，優選至少13種核酸分子，特別優選至少5種核酸分子。
21.權利要求I或19-20的試劑盒，其中所述核酸表達特徵包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與在一或多種對照細胞中相比被上調；以及包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子,其表達在一或多種祀細胞中與在一或多種對照細胞中相比被下調。
22.權利要求I或19-21任一項的試劑盒，其中所述核酸表達特徵包含編碼hsa-miR-96、has-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-218、hsa-miR-21 Λhsa-miR-183、has-miR-144、hsa-miR-451 Λ hsa_miR-200c、hsa_miR-135b、hsa_miR-148a、hsa-miR-625、hsa-miR-486_5p、hsa-miR-338_3p、hsa-miR-139_5p、hsa_miR-130b、hsa_miR-30a*、hsa-miR-144' hsa-miR-425、hsa_miR-133b、hsa-miR-497、hsa-miR-182、hsa-miR-180187'hsa_miR-30b、hsa-miR-145'hsa-miR-429、hsa-miR-498、hsa_miR-200a、has_miR-130a、hsa-miR-30c_2*、hsa-miR-134、hsa-miR-638Λ hsa_miR-200b*、hsa-miR-1225_5p、hsa-miR-557、hsa-miR-100、hsa-miR-223、hsa-miR-424、hsa-miR-21'has_miR-99a、hsa_miR-34a、hsa-miR-542_3p、hsa_miR-200a' hsa-miR-375、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、 hsa-miR-101、 hsa-miR-143、 hsa-miR-140_5p、 hsa-miR-224、has_miR-200b、hsa-miR-195、hsa-miR-210、hsa-miR-7、hsa-miR-141 和 hsa-miR-192 的任意一種或多種核酸分子。
23.權利要求22的試劑盒，其中與所述一種或多種正常對照細胞相比，在所述一或多種革巴細胞中，編碼 hsa-miR-96、hsa-miR-21 Λ hsa-miR-183、hsa_miR-200c、hsa_miR-135b、hsa_miR-148a、hsa-miR-625、hsa_miR-130b、hsa-miR-425、hsa-miR-182、has-miR-429、hsa_miR-200a、hsa_miR-200b*、hsa-miR-424、hsa_miR-21*、hsa-miR-34a、hsa-miR-542_3p、hsa_miR-200a' hsa—miR-375、hsa-miR-224、hsa_miR-200b、has—miR-210、hsa-miR-7Λhsa-miR-141、hsa-miR-192的任意一種或多種核酸分子的表達被上調，而編碼hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-218、hsa-miR-144、hsa-miR-451、hsa-miR-486_5p、hsa-miR-338_3p、hsa-miR-139_5p、hsa_miR-30a' hsa-miR-144'hsa_miR-133b、hsa-miR-497、hsa-miR-187' hsa_miR-30b、hsa-miR-145' hsa-miR-498Λhsa_miR-130a、hsa-miR-30c_2' hsa-miR-134、hsa-miR-638、hsa-miR-l225~5pΛhsa-miR-557、hsa-miR-100、hsa-miR-223、hsa_miR-99a、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa-miR-101、hsa-miR-143、hsa-miR-140_5p、hsa-miR-195 的任意一種或多種核酸分子的表達被下調。
24.權利要求I或19-21任一項的試劑盒，其中所述核酸表達特徵包含編碼hsa-miR-96、has-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-218、hsa-miR-21 Λhsa-miR-183、has-miR-144、hsa-miR-451、hsa_miR-200c、hsa_miR-135b、hsa_miR-148a 和hsa-miR-625的任意一種或多種核酸分子。
25.權利要求24的試劑盒，其中與所述一種或多種正常對照細胞相比，在所述一或多種革巴細胞中，編碼 hsa-miR-96、hsa-miR-21 Λ hsa-miR-183、hsa_miR-200c、hsa-miR_135b、hsa_miR-148a、hsa-miR-625的任意一種或多種核酸分子的表達被上調，編石馬 hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-218、hsa-miR-144、hsa-miR-451 的任意一種或多種核酸分子的表達被下調。
26.權利要求I或19-21任一項的試劑盒，其中所述核酸表達特徵包含編碼hsa-miR-96、has_miR-126、hsa-miR-126*、hsa_miR-30a 和 hsa-miR-218 的任意一種或多種核酸分子。
27.權利要求26的試劑盒，其中與所述一種或多種正常對照細胞相比，在所述一或多種革巴細胞中，hsa-miR-96 的表達被上調，而編碼 has-miR-126、hsa-miR-126*、hsa_miR-30a和hsa-miR-218任意一種或多種核酸分子的表達被下調。
28.權利要求I的試劑盒，其中所述肺癌為鱗狀細胞肺癌。
29.權利要求I或28的試劑盒，其中所述核酸表達特徵包含至少112種核酸分子，優選至少16種核酸分子，特別優選至少9種核酸分子。
30.權利要求1、28或29的試劑盒，其中所述核酸表達特徵包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與在一或多種對照細胞中相比被上調；及包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與在一或多種對照細胞中相比被下調。
31.權利要求I或28-30任一項的試劑盒，其中所述核酸表達特徵包含編石馬 hsa-miR-144、has-miR-451、hsa_miR-200c、hsa-miR-486_5p、hsa-miR-338_3p、hsa-miR-497、hsa-miR-218、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa_miR-30b、hsa-miR-93、hsa-miR-126、has-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-143、hsa_miR-103、hsa-miR-183、hsa-miR-96、has-miR-139_5p、hsa_miR-130b、hsa_miR_30a*、hsa-miR-144*、hsa-miR-425、hsa_miR-133b、hsa-miR-182、hsa-miR-187' hsa-miR-145' hsa-miR-429、hsa-miR-498、has_miR-130a、hsa-miR-30c_2' hsa-miR-98、hsa-miR-lΛ hsa_miR-106b、hsa-miR-150' hsa-miR-25、hsa-miR-134、hsa-miR-328、hsa-miR-638、hsa-miR-1225_5p、hsa-miR-1224_5p、hsa-miR-557、hsa-miR-l5bΛ hsa_miR-301a、hsa_miR-196b、hsa_miR-196a、hsa-miR-1226' hsa-miR-424、hsa-miR-21' hsa-miR-572、hsa_miR-18b、hsa_miR-18a、hsa-miR-9' hsa_miR-301b、hsa_miR-29c' hsa-miR-494、hsa_miR-193b、hsa-miR-375、hsa_miR-26a、hsa-miR-574_3p 、hsa-miR-151_3p 、hsa-miR-149、hsa-miR-768-5p、has-miR-181a、hsa-miR-20a、hsa-miR-181c、hsa-miR-29a、hsa-miR-29b、hsa-miR-505、 hsa-miR-939、 hsa-miR-769_5p、 hsa_miR-30c、 hsa-miR-590_5p、hsa-miR-590_5p、has-miR-671_5p、hsa-miR-625、hsa-miR-652、hsa-miR-l39~3pΛhsa-miR-28_5p、hsa-miR-623、hsa-miR-221、hsa_miR-19a、hsa-miR-944、hsa-miR-335、hsa-miR-125a_5p、 has-miR-55Ib、 hsa-let_7d' hsa-miR-31*、 hsa-miR-362_5p、hsa_miR-181a' hsa—miR-940、hsa_miR-30b' hsa—miR-601、hsa_miR-20b、hsa—miR-202、hsa-miR-101、hsa-miR-140_5p、hsa_miR-30d、hsa_miR-29c、hsa-miR-224、hsa-miR-9、hsa_miR-200b、 hsa_miR195、 hsa_miR-210、 hsa-miR-7、 hsa_miR-21、 hsa_miR-17、hsa-miR-128、hsa-miR-141、hsa-miR-142_5p、hsa-miR-150 和 hsa-miR-205 的任意一種或多種核酸分子。
32.權利要求31的試劑盒，其中與所述一種或多種正常對照細胞相比，在所述一或多種祀細胞中，編碼 hsa_miR-200c、hsa-miR-93、hsa-miR-103、hsa-miR-183、hsa-miR-96、hsa_miR-130b、hsa-miR-425、hsa-miR-182、hsa-miR-429、hsa—miR-98、hsa_miR-106b、hsa-miR-25、hsa_miR-15b、hsa_miR-301a、hsa_miR-196b、hsa_miR-196a、has-miR-424、hsa-miR-21' hsa_miR-18b、hsa_miR-18a、hsa-miR-9' hsa_miR-301b、has-miR-494、hsa_miR-193b、hsa-miR-151_3p、hsa-miR-149、hsa_miR-20a、hsa-miR-505、hsa-miR-769_5p、hsa-miR-590_5p、hsa-miR-590_5p、hsa-miR-625、hsa-miR-28_5p、hsa-miR-221、hsa_miR-19a、hsa-miR-944、hsa-miR-31' hsa-miR-362_5p、hsa_miR-20b、hsa-miR-224、 hsa-miR-9、 hsa_miR-200b、 hsa-miR-210、 hsa-miR-7、 hsa-miR-21、hsa-miR-17、hsa-miR-128、hsa-miR-141、hsa-miR-205 的任意一種或多種核酸分子的表達被上調，而編碼 hsa-miR-144、hsa-miR-451、hsa-miR-486_5p、hsa-miR-338_3p、hsa-miR-497 λ hsa-miR-218、has-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa_miR-30b、hsa-miR-126、hsa-miR-126*、 hsa_miR-30a、 hsa-miR-143、 hsa-miR-139_5p、 hsa_miR_30a*、hsa-miR-144' hsa_miR-133b、has-miR-187' hsa-miR-145' hsa-miR-498Λ hsa_miR-130a、hsa-miR-30c_2' hsa-miR-lΛ hsa-miR-150' hsa-miR-134、hsa-miR-328、hsa-miR-638、hsa-miR-1225_5p、 hsa-miR-1224_5p、 hsa-miR-557、 hsa-miR-1226' hsa-miR-572、hsa_miR-29c*、 hsa-miR-375、 hsa_miR-26a、 hsa-miR-574_3p、 hsa-miR-768_5p、hsa_miR-181a、hsa_miR-181c、has_miR-29a、hsa_miR-29b、hsa-miR-939、hsa_miR-30c、hsa-miR-67l_5p、 hsa-miR-652、 hsa-miR-139_3p、 hsa-miR-623、 hsa-miR-335、 hsa-miR-125a_5p、 hsa-miR-55Ib、 has-let_7cT、 hsa-miR-18la*、 hsa-miR-940、hsa_miR-30b*、hsa-miR-601、hsa-miR-202、hsa-miR-101 Λ hsa-miR-140_5p、hsa_miR-30d、hsa_miR-29c、hsa-miR-195、hsa-miR-142_5p、hsa-miR-150 的任意一種或多種核酸分子的表達被下調。
33.權利要求I或28-30任一項的試劑盒，其中所述核酸表達特徵包含編石馬 hsa-miR-144、has-miR-451 Λ hsa_miR-200c、hsa-miR-486_5p、hsa-miR-338_3p、hsa-miR-497、hsa-miR-218、hsa-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa_miR-30b、hsa-miR-93、hsa-miR-126、has-miR-126*、hsa_miR-30a、hsa-miR-143 和 hsa-miR-103 的任意一種或多種核酸分子。
34.權利要求35的試劑盒，其中與所述一種或多種正常對照細胞相比，在所述一或多種革E細胞中，編碼hsa-miR_200c、hsa-miR-93、hsa-miR-103的任意一種或多種核酸分子的表達被上調，而編碼 hsa-miR-144、hsa-miR-451、hsa-miR-486_5p、hsa-miR-338_3p、hsa-miR-497 λ hsa-miR-218、has-miR-145、hsa-miR-140_3p、hsa_miR-30b、hsa-miR-126、hsa-miR-126' hsa_miR-30a、hsa-miR-143的任意一種或多種核酸分子的表達被下調。
35.權利要求I或28-30任一項的試劑盒，其中所述核酸表達特徵包含編石馬 hsa-miR-144、has-miR-451 Λ hsa_miR-200c、hsa-miR-486_5p、hsa-miR-338_3p、hsa-miR-497、hsa-miR-218、hsa_miR-145 和 hsa-miR-140_3p 的任意一種或多種核酸分子。
36.權利要求35的試劑盒，其中與所述一種或多種正常對照細胞相比，在所述一或多種祀細胞中，hsa-miR-200c的表達被上調，而編碼hsa-miR-144、has-miR-451、hsa-miR-486_5p、 hsa-miR-338_3p、 hsa-miR-497、 hsa-miR-218、 hsa-miR-145 和hsa-miR-140-3p的任意一種或多種核酸分子的表達被下調。
37.權利要求I的試劑盒，其中所述肺癌為小細胞肺癌。
38.權利要求I或37的試劑盒，其中所述核酸表達特徵包含至少116種核酸分子，優選至少16種核酸分子，特別優選至少11種核酸分子。
39.權利要求1、37-38的試劑盒，其中所述核酸表達特徵包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與在一或多種對照細胞中相比被上調；及包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達在一或多種靶細胞中與在一或多種對照細胞中相比被下調。
40.權利要求I或37-39任一項的試劑盒，其中所述核酸表達特徵包含編碼hsa-miR-96、has-miR-144、hsa-miR-93、hsa_miR-106b、hsa-miR-25、hsa_miR-15b、hsa-miR-145、has_miR-375、hsa-miR-103、hsa_miR-20a、hsa_miR-107、hsa-miR-451、hsa_miR-130b、has-miR-454、hsa_miR-30a、hsa-miR-17、hsa-miR-183、hsa-miR-486_5p、hsa-miR-338_3p、 hsa-miR-139_5p、 hsa_miR-30a' hsa-miR-144' hsa-miR-425、hsa_miR-133b、has-miR-497、hsa-miR-182、hsa-miR-187' hsa_miR-30b、hsa-miR-145'hsa-miR-429、hsa-miR-498、hsa_miR-200a、hsa_miR-130a、hsa-miR-30c_2' hsa-miR-98、hsa-miR-1、hsa-miR-150' hsa-miR-134、hsa-miR-328、hsa-miR-638、hsa_miR-200b'hsa-miR-1225_5p、 hsa-miR-1224_5p、 hsa-miR-557、 hsa-miR-152、 hsa_miR-30la、hsa—miR-100、hsa—miR-223、hsa_miR-196b、hsa—miR-1226*、hsa-miR-572、hsa_miR-18b、hsa-miR-9*、hsa-miR-301b、hsa-miR-199b-3p、hsa-miR-34a、hsa-miR-200a*、hsa-miR-26a、hsa-miR-574_3p、 hsa-miR-768_5p、 hsa_miR-29a、 hsa_miR-29b、 hsa-miR-505、has-miR-939、 hsa-miR-769_5p、 hsa-miR-625、 hsa-miR-139_3p、 hsa_miR-19a、hsa-miR-55Ib、hsa-miR-362_5p、hsa-miR-18la*、hsa_miR-940、hsa_miR-601、hsa_miR-20b、hsa_miR-23a、hsa_miR-27a、hsa-miR-199a_5p、hsa_let_7i、hsa_miR-19b、hsa_miR-20a' hsa-miR-17' hsa_miR-22、hsa_miR-340' hsa_miR-214、hsa_miR-592、hsa-miR-335*、 hsa_miR-29c' hsa-miR-421、 hsa-miR-886_3p、 hsa-miR-16-2*、hsa-miR-135a、has-miR-183'hsa-miR-7-l'hsa-miR-26b、hsa-miR-455-3p、hsa-miR-222、hsa-miR-95、hsa-miR-564、hsa-miR-636、hsa_miR-34b' hsa_miR-18a、hsa-miR-126、hsa-miR-126*、 hsa-miR-140_3p、 hsa-miR-101、 hsa-miR-143、 hsa-miR-140_5p、hsa_miR-29c、has-miR-199b_5p、hsa-miR-125a_3p、hsa-miR-9、hsa_miR-200b、hsa-miR-210、hsa-miR-7、hsa-miR-128 和 hsa_miR-106a 的任意一種或多種核酸分子。
41.權利要求40的試劑盒，其中與所述一種或多種正常對照細胞相比，在所述一或多種祀細胞中，編碼 hsa-miR-96、hsa-miR-93、hsa_miR-106b、hsa-miR-25、hsa_miR-15b、hsa-miR-375、hsa-miR-103、hsa_miR-20a、hsa_miR-107、hsa_miR-130b、hsa-miR-350、hsa-miR-454、hsa-miR-17、hsa-miR-183、hsa-miR-425、hsa-miR-182、hsa-miR-429、hsa_miR-200a、hsa-miR-98、hsa_miR-200b' hsa_miR-301a、hsa_miR-196b、hsa-miR-505、 has-miR-769_5p、 hsa-miR-625、 hsa_miR-19a、 hsa-miR-362_5p、hsa_miR-20b、hsa-let_7i、hsa_miR-19b、hsa_miR-20a' hsa-miR-17' hsa-miR-340'hsa-miR-592、hsa-miR-335' hsa-miR-421 Λ hsa-miR-16-2' hsa_miR-135a、hsa-miR-183'hsa-miR-7-1' hsa-miR-95、hsa_miR-18a、hsa-miR-9、hsa_miR-200b、hsa-miR-210、hsaniR-7、hsa-miR-128和hsaniR-106a的任意一種或多種核酸分子的表達被上調，而編石馬 hsa-miR-144、hsa-miR-145、hsa-miR-451、has_miR-30a、hsa-miR-486_5p、hsa-miR-338_3p、 hsa-miR-139_5p、 hsa_miR-30a' has-miR-144、 hsa_miR-133b、hsa-miR-497、hsa_miR-187' hsa_miR-30b、hsa-miR-145' hsa-miR-498、hsa_miR-130a、hsa-miR-30c_2' hsa-miR-lΛ hsa-miR-150' hsa-miR-134、hsa-miR-328、hsa-miR-638、hsa-miR-l225~5pΛ hsa-miR-l224~5pΛ hsa-miR-557、hsa-miR-152、hsa-miR-100、hsa-miR-223、hsa-miR-1226' hsa-miR-572、hsa_miR-18b、hsa-miR-9' hsa_miR-301b、hsa-miR-199b_3p、 hsa_miR-34a、 hsa_miR-200a' hsa_miR-26a、 hsa-miR-574_3p、hsa-miR-768_5p、 hsa_miR-29a、 hsa_miR-29b、 has-miR-939、 hsa-miR-139_3p、hsa_miR-551b、hsa_miR-181a*、hsa-miR-940、hsa-miR-601 Λ hsa_miR-23a、hsa_miR-27a、hsa-miR-l99a~5pΛ hsa-miR-22、hsa-miR-214、has_miR-29c*、hsa-miR-886_3p、hsa_miR-26b、hsa-miR-455_3p、hsa-miR-222、hsa-miR-564、hsa-miR-636、hsa_miR-34b'hsa-miR-126、 hsa-miR-126*、 hsa-miR-140_3p、 has-miR-101、 hsa-miR-143、hsa-miR-140_5p、hsa_miR-29c、hsa-miR-199b_5p、hsa-miR-l25a~3p 的任意一種或多種核酸分子的表達被下調。
42.權利要求I或37-39任一項的試劑盒，其中所述核酸表達特徵包含編碼hsa-miR-96、has-miR-144、hsa-miR-93、hsa_miR-106b、hsa-miR-25、hsa_miR-15b、hsa-miR-145、has_miR-375、hsa-miR-103、hsa_miR-20a、hsa_miR-107、hsa-miR-451、hsa_miR-130b、has-miR-454、hsa_miR-30a 和 hsa-miR-17 的任意一種或多種核酸分子。
43.權利要求42的試劑盒，其中與一或多種正常對照細胞相比，在所述一或多種革巴細胞中，編碼 hsa-miR-96、hsa-miR-93、hsa_miR-106b、hsa-miR-25、hsa_miR-15b、hsa-miR-375、hsa-miR-103、hsa_miR-20a、hsa-miR-107、hsa_miR-130b、hsa-miR-454、hsa-miR-17的任意一種或多種核酸分子的表達被上調，而編碼hsa-miR-144、hsa_miR-145、hsa-miR-451 λ hsa-miR-30a的任意一種或多種核酸分子的表達被下調。
44.權利要求I或37-39任一項的試劑盒，其中所述核酸表達特徵包含編碼hsa-miR-96、hsamiR-144、hsa-miR-93、hsa_miR-106b、hsa-miR-25、hsa_miR-15b、hsa-miR-145、hsa-miR-375、hsa-miR-103、hsa-miR-20a 和 hsa-miR-107 的任意一種或多種核酸分子。
45.權利要求44的試劑盒，其中與所述一種或多種正常對照細胞相比，在所述一或多種革巴細胞中，編碼 hsa-miR-96、hsa-miR-93、hsa_miR-106b、hsa-miR-25、hsa_miR-15b、hsa-miR-375 λ hsa-miR-103 λ hsa-miR-20a 和 hsa-miR-107 的任意一種或多種核酸分子的表達被上調，而編碼hsa-miR-144、hsa-miR-145的任意一種或多種核酸分子的表達被下調。
46.權利要求1-45的試劑盒，進一步用於區分非小細胞肺癌和小細胞肺癌，以及 其中所述核酸表達特徵包含編碼hsa-miR-375、hsa-miR-335、hsa_miR-23a、hsa_miR-27a、hsa-miR-22、hsa-miR-592、hsa_miR-135a、hsa-miR-24、hsa-miR-454、hsa—miR-30la、 hsa-miR-199b_5p、 hsa—miR-9、 hsa_miR-34a、 hsa-miR-199a_5p、hsa-miR-335' hsa-miR-152 和 hsa_miR-216b 的任意一種或多種核酸分子。
47.權利要求46的試劑盒，其中與一種或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中，編碼 hsa_miR-23a、hsa_miR-27a、hsa-miR-22、hsa_miR-135a、hsa-miR-199b_5p、hsa_miR-34a、hsa-miR-199a_5p、hsa-miR-152的任意一種或多種核酸分子的表達被上調，而編碼 hsa-miR-375、hsa-miR-335、hsa-miR-592、hsa-miR-24、hsa-miR-454、hsa_miR-301a、hsa-miR-9、hsa-miR-335' hsa_miR-216b 的任意一種或多種核酸分子的表達被下調。
48.權利要求1-47的試劑盒，進一步用於將腺癌肺癌、小細胞肺癌或鱗狀細胞肺癌與其它兩種區別開，其中所述核酸表達特徵包含編碼hsa-miR-25、hsa-miR-205、hsa_miR-34a、hsa-miR-375、hsa_miR-29a、hsa_miR-27a、hsa_miR-29b、hsa-miR-93、hsa_miR-106b、hsa_miR-15b、hsa-miR-454、hsa_miR-301a、hsa-miR-145、hsa_miR-29c、hsa-miR-221、hsa-miR-335、hsa_miR-23a、hsa-miR-199a_5p、hsa-miR-22、hsa-miR-592、hsa-miR-95、has-miR-24和hsa_miR-92a的任意一種或多種核酸分子。
49.權利要求48的試劑盒，其中與小細胞肺癌和鱗狀細胞肺癌相比，在腺癌肺癌中編碼 hsa_miR-34a、hsa_miR-29a、hsa_miR-29b、hsa-miR-145、hsa_miR-29c 的任意一種或多種核酸分子的表達被上調，而編碼 hsa-miR-25、hsa-miR-93、hsa_miR-30la、hsa_miR-106b、has-miR_15b、hsa-miR_92a的任意一種或多種核酸分子的表達被下調； 在腺癌肺癌中編碼hsa-miR-205、hsa_miR-27a、hsa-miR-221的任意一種或多種核酸分子的表達與小細胞肺癌相比被上調，而與鱗狀細胞肺癌相比被下調；在腺癌肺癌中hsa-miR-375的表達與鱗狀細胞肺癌相比被上調，而與小細胞肺癌相比被下調； 與小細胞肺癌相比，在腺癌肺癌中編碼hsaniR-24、hsaniR-23a、hsa-miR-22>hsa-miR-199a-5p的任意一種或多種核酸分子的表達被上調，而編碼hsa-miR-592、hsa-miR-335、hsa-miR-95、hsa-miR-454的任意一種或多種核酸分子的表達被下調。
50.權利要求1-49的試劑盒，進一步用於區分腺癌肺癌和鱗狀細胞肺癌，並且 其中所述核酸表達特徵包含編碼hsa-miR-497、hsa-miR-93、hsa-miR-25、hsa_miR-29c、hsa-miR-205、hsa-miR-375、hsa-miR-149、hsa_miR-29a、hsa-miR-1 >hsa-miR-15b、hsa-miR-181c、hsa-miR-29b、hsa-miR-769-5p 和 hsa-miR-221 的任意一種或多種核酸分子。
51.權利要求50的試劑盒，其中與一或多種對照細胞相比，在所述一或多種靶細胞中，編石馬 hsa-miR-497、hsa_miR-29c、hsa-miR-375、hsa_miR-29a、hsa-miR-1、hsa_miR-181c、hsa-miR-29b的任意一種或多種核酸分子的表達被上調，而編碼hsa-miR-93、hsa-miR-25、hsa-miR-205、has-miR-149、hsa_miR-15b、hsa-miR-769_5p、hsa-miR-221 的任意一種或多種核酸分子的表達被下調。
52.用於鑑定展現出或具有發展肺癌傾向的一或多種哺乳動物靶細胞的方法，所述方法包括 (a)在所述一或多種靶細胞中確定多種核酸分子的表達水平，每種核酸分子均編碼微RNA序列； (b)在一或多種對照細胞中確定所述多種核酸分子的表達水平；及 (c)通過對比在步驟(a)和(b)中獲得的各自的表達水平，從所述多種核酸分子中鑑定出在所述靶細胞中和所述對照細胞中差異表達的一或多種核酸分子， 其中所述一或多種差異表達的核酸分子一起代表如權利要求1-51任一項中所定義的核酸表達特徵，所述核酸表達特徵是存在肺癌或發展肺癌的傾向的指徵。
53.權利要求52的方法，進一步用於區分選自腺癌肺癌、鱗狀細胞肺癌和小細胞肺癌的肺癌。
54.用於在一或多種哺乳動物靶細胞中預防或治療肺癌的方法，所述方法包括 (a)通過使用權利要求52-53的方法在一或多種靶細胞中鑑定核酸表達特徵 '及(b)在所述一或多種細胞中改變在所述核酸表達特徵中所包含的編碼微RNA序列的一或多種核酸分子的表達，所述改變以如下的方式進行，即其表達在所述一或多種靶細胞中被上調的核酸分子的表達被下調，而其表達在所述一或多種靶細胞中被下調的核酸分子的表達被上調。
55.用於預防和/或治療一或多種哺乳動物靶細胞中肺癌的藥物組合物，所述組合物包含一或多種核酸分子，每種核酸分子均編碼序列， 所述序列與如權利要求1-54任一項所定義的其表達在所述一或多種靶細胞中被上調的核酸分子編碼的微RNA序列至少部分互補， 和/或所述序列對應於如權利要求1-54任一項所定義的其表達在所述一或多種靶細胞中被下調的核酸分子編碼的微RNA序列。
56.權利要求55的藥物組合物在製備用於預防和/或治療肺癌的藥物中的用途。
全文摘要
本發明提供鑑定展現出肺癌的一或多種哺乳動物靶細胞的分子標記的診斷試劑盒，所述試劑盒包含編碼miRNA序列的多種核酸分子。所述編碼miRNA序列的核酸分子中的一或多種在靶細胞中及在一或多種對照細胞中差異表達。本發明還提供了使用所述微RNA來鑑定展現或具有發生肺癌傾向的一或多種哺乳動物靶細胞的方法，以及預防或治療肺癌的方法和藥物組合物。
文檔編號A61K31/7105GK102892897SQ201080064797
公開日2013年1月23日 申請日期2010年12月24日 優先權日2009年12月24日
發明者李健, 吳瑩, 盧韶華, 朱虹光, 黃威, 任一萍, 李兆勇 申請人:復旦大學