高效液相色譜法在測定米力農中有關物質含量中的應用的製作方法
2023-11-12 02:11:42
專利名稱：高效液相色譜法在測定米力農中有關物質含量中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及高效液相色譜法的應用，更具體的說，涉及高效液相色譜法在測定米力農中有關物質含量中的應用。
背景技術：
米力農化學名為2-甲基-6-氧-1，6-二氫-(3，4-雙吡啶)-5-甲腈。按乾燥品計算，其中含C12H9N3O不少於98.5％。為類白色或微黃色結晶性粉末，無臭，在水或乙醇中幾乎不溶，在稀鹽酸中略溶。
米力農適用於充血性心力衰竭短期靜脈用藥。米為農注射液可用適量生理鹽水或葡萄液稀釋後，先按37.5μg/kg-50μg/kg緩慢靜脈注射10分鐘(注射過快，可能出現室性早搏)，繼續以0.375μg-0.75μg/kg/min靜脈滴注，此後根據臨床效應調整用量。
由於米力農的不良反應主要是由其產品中的雜質而產生，嚴格控制其中的有關物質含量具有非常重要的意義。雖然現在已經有用薄層色譜法測定米力農中有關物質含量的方法，但是只能控制單個有關物質峰(溶劑峰、乳酸峰除外)的峰面積不大於對照溶液主峰面積的1/5，總和不大於對照品主峰面積的1.5％。如果能夠使用一種新的測定方法，使有關物質峰總和不大於對照品主峰面積的0.5％，提高米力農的質量標準，將具有重要的現實意義。
發明內容
本發明提供了高效液相色譜法在測定米力農中有關物質含量中的應用。
在上述的高效液相色譜法中，使用的流動相可以是由硼砂緩衝液、甲醇和水組成。所述的硼砂緩衝液的濃度優選為0.05M，pH優選為7.0。
在上述的高效液相色譜法中，所述的硼砂緩衝液、甲醇和水的比例優選為(1-5)∶(20-50)∶(50-80)，更優選為(1-3)∶(20-40)∶(60-70)。
高效液相色譜法與薄層色譜法相比，具有下述優點(1)薄層色譜法中採用「濾過」處理供試品溶液欠妥，樣品加甲醇超聲處理後溶液澄清，加流動相稀釋即出現渾濁，須再超聲方能完全溶解；本方法採用米力農製劑標準中有關物質項下的流動相直接處理樣品，經超聲可使樣品完全溶解，再用流動相定容，得到澄清透明的溶液；(2)高效液相色譜法測定樣品含量，並進行方法學驗證，得到了良好的線性關係，且重現性及回收率良好，溶液的日內穩定性良好。
圖1是酸破壞性實驗高效液相色譜圖；圖2是鹼破壞性實驗高效液相色譜圖；圖3是熱破壞性實驗高效液相色譜圖；圖4是氧化破壞性實驗高效液相色譜圖。
具體實施例方式
下面以實施例進一步解釋本發明，但是本發明的保護範圍並不限於這些實施例。
實施例1色譜條件的建立儀器高效液相色譜儀(美國Waters)，配515泵，2487檢測器，化學工作站。
試劑米力農和對照品(含量為99.7％)；甲醇；色譜純；水；純水；硼砂；硼酸。
色譜柱Hypersil BDS C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；
流動相0.05mol·L-1硼砂緩衝液(pH＝7.0)∶甲醇∶水＝2∶30∶70；流速1.0ml·min-1；檢測波長254nm；進樣量20μl(定量管)。
理論板數按米力農峰計算不低於3000。
線性範圍取105℃乾燥至恆重的米力農對照品適量，精密稱定，加流動相溶解並稀釋成1ml含0.5mg的溶液作為標準儲備液。精密量取標準儲備液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5m1分別置7個10ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，分別進樣20μl，記錄色譜圖，以米力農濃度(c，mg·ml-1)為橫坐標，對應峰面積為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程為Y＝51821577.14286X+80825.57143，r＝0.9999(n＝7)。結果表明，米力農在0.025～0.175mg·ml-1範圍內，峰面積與濃度線性關係良好。
回收率試驗精密量取己知含量的米力農樣品30mg(3份)，分別置3個100ml量瓶中，再分別加入對照品10、20、30mg，加適量流動相溶解並稀釋至刻度，搖勻；分別取5ml置25ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，分別測定，計算回收率，得平均回收率為100.5％，RSD＝0.71％，說明準確度良好，見表1。
表1
精密度試驗照前述色譜條件，取濃度為0.1mg·ml-1的標準溶液重複進樣6次，計算RSD為0.11％，結果表明其精密度良好。
樣品含量測定精密量取樣品50mg，置100ml量瓶中，加流動相適量，超聲使溶解並用流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml置25ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；精密量取20μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖；另取經105℃乾燥至恆重的米力農對照品適量，加流動相製成每1ml中含0.1mg的溶液，同法測定，以外標法按峰面積計算，即得。3批樣品測定結果見表2。
表2
樣品液穩定性考察取供試品溶液1份，分別在0，2，4，6，8，10h進行測定，記錄峰面積，計算得RSD＝0.75％，表明米力農的流動相溶液穩定性較好，日內誤差較小。
檢測限測定取2.5μg·ml-1的米力農對照品溶液，用稀釋法測其檢測限(S/N＝2)，按2倍信噪比計算，在本色譜系統條件下，檢測限為2.5×10-5mg·ml-1。
樣品有關物質測定精密量取米力農適量，用流動相分別製成0.5mg·ml-1的供試品溶液和2.5μg·ml-1的對照溶液。在前述色譜條件下，取對照溶液20μl注入高效液相色譜儀，調節儀器靈敏度，使主成分峰約為滿量程的20％。精密量取供試品溶液20μl進樣，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍。供試品溶液如顯有關物質峰，量取各有關物質峰面積總和，不得大於對照溶液主峰面積(0.5％)。3批樣品(031201，031202，031203)中均檢出多種有關物質，有關物質的總量均小於0.5％。
實施例2高效液相色譜法的穩定性實驗高效液相色譜法與薄層色譜法相比，具有靈敏度高、準確性好的優點，對於有關物質不但可以定性，而且可以定量，可以更好的控制米力農的質量。有關該品具體的有關物質在文獻中未見具體報導，故設計了酸、鹼、熱、氧化破壞等試驗，以考察本方法系統的可靠性、穩定性。
空白溶劑的幹擾取流動相適量，濾過，取過濾液依法測定，溶劑對米力農有關物質測定無幹擾。
酸破壞性實驗取米力農約20mg，加0.1mol/L鹽酸溶液10ml，水浴加熱回流20min，冷卻，加流動相至50ml，搖勻，濾過，取過濾液依法檢查，高效液相色譜圖見圖1。結果表明酸對本方法無影響。
鹼破壞性試驗取米力農約20mg，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液10ml，水浴加熱回流20min，冷卻，加流動相至50ml，搖勻，濾過，取過濾液依法檢查，高效液相色譜圖見圖2。結果表明鹼對本方法無影響。
熱破壞性試驗取米力農約20mg，加水10ml，加熱回流30min，冷卻，加流動相至50ml，搖勻，濾過，取過濾液依法檢查，高效液相色譜圖見圖3。結果表明高溫對本方法無影響。
氧化破壞件試驗取米力農約20mg，加10％H2O2溶液10ml，水浴加熱回流20min，冷卻，加流動相至50ml，搖勻，濾過，取過濾液依法檢查，高效液相色譜圖見圖4。結果表明氧化劑對本方法無影響。
結論由附圖1～4可見，本法最低至少可檢查0.01μg/ml的米力農；米力農峰可與破壞後的產物峰分開，分離度符合要求。
對比例取米力農三批，分別用高效液相色譜法與薄層色譜法測定，結果見表3。
表3 可見高效液相色譜法與薄層色譜法相比，具有靈敏度高、準確度高，對雜質不但可以定量測定，且幹擾小的特點。
權利要求
1.高效液相色譜法在測定米力農中有關物質檢測或含量測定中的應用。
2.如權利要求1的應用，其特徵在於，所述的高效液相色譜法中使用的流動相由硼砂緩衝液、甲醇和水組成。
3.如權利要求2的應用，其特徵在於，所述的硼砂緩衝液的濃度為0.05M。
4.如權利要求3的應用，其特徵在於，所述的硼砂緩衝液、甲醇和水的比例為(1-5)∶(20-50)∶(50-80)。
5.如權利要求3的應用，其特徵在於，所述的硼砂緩衝液、甲醇和水的比例為(1-3)∶(20-40)∶(60-70)。
6.如權利要求2-5中任一項的應用，其特徵在於，所述的硼砂緩衝液的pH為7.0。
全文摘要
本發明提供了高效液相色譜法在測定米力農中有關物質檢測或含量測定中的應用。其中，使用的流動相可以是由硼砂緩衝液、甲醇和水組成。所述的硼砂緩衝液的濃度優選為0.05M，pH優選為7.0。硼砂緩衝液、甲醇和水的比例優選為(1－5)∶(20－50)∶(50－80)，更優選為(1－3)∶(20－40)∶(60－70)。
文檔編號G01N30/00GK1621834SQ20041009872
公開日2005年6月1日 申請日期2004年12月15日 優先權日2004年12月15日
發明者趙志全 申請人:魯南製藥股份有限公司