槓板歸藥材的質量檢測方法

2023-11-04 18:08:02

專利名稱：：槓板歸藥材的質量檢測方法
技術領域：
：本發明涉及一種槓板歸藥材的質量檢測方法，屬於對藥材進行質量控制的
技術領域：
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背景技術：
：我國傳統的中藥及其製劑大多缺乏嚴密的質量標準和科學的檢測手段，難以有效的控制其內在質量，不能保證用藥的安全、有效，也不符合國際醫藥市場的要求，嚴重製約了我國中藥行業的發展。加強中藥材質量控制研究是中藥規範化、標準化的關鍵問題。只有對中藥材進行科學的質量控制，才能保證中藥質量，實現中藥的"安全、有效、穩定、可控"。槓板歸為蓼科蓼屬植物槓板歸PolygonumperfoliatumLinn.的乾燥全草；生於山谷、灌木叢中或水溝旁；主產於貴州、江蘇、浙江、福建、江西、廣東、廣西、四川、湖南。夏季開花時採割，曬乾。別名河白草、蛇倒退、梨頭刺、蛇不過等。槓板歸為常用中藥材，也是常用苗藥。性味功能與主治酸；苦；性平；有清熱解毒；利溼消腫；散瘀止血之功效，常用於治療疔瘡癰腫；丹毒；癱腮；乳腺炎；聘耳；喉蛾；感冒發熱；肺熱咳嗽；百日咳;瘰癧；痔疾；魚口便毒；瀉痢；黃疸；臌脹；水腫；淋濁；帶下；瘧疾；風火赤眼；跌打腫痛；吐血；便血；蛇蟲咬傷。眾所周知，槓板歸藥材成分複雜，主要包括以下幾類生物鹼、苦味素、苯並色原酮類、萜類、黃酮、香豆精、木脂素、留類化合物、揮髮油和有機酸類。研究表明，槓板歸的多種化學成分有各種具體的藥理作用。但其質量控制方法文獻報導很少，僅在《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》2003年版中以咖啡酸為對照進行了薄層色譜鑑別研究。因此，為了使槓板歸的臨床應用更加安全、有效、科學、合理，必須加強其質量控制。
發明內容本發明的目的在於提供一種槓板歸藥材的質量檢測方法。本發明通過對槓板歸中槲皮素的含量進行定量研究並以槲皮素和槲皮素-3-o-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯為對照進行薄層色譜研究，完善了槓板歸藥材的質量檢測標準，彌補了現有質量檢測技術的不足，使槓板歸藥材的質量檢測技術更為科學、合理。本發明所述質量檢測方法包括性狀、鑑別、檢査、含量測定項目中的部分或全部，所述鑑別包括以槲皮素對照品為對照、以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=210:i3:o.5i.5:o.2o.7為展開劑的薄層色譜法和/或以槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品為對照、以甲醇甲酸水=711:o.2o.8:o.2o.6為展開劑的薄層色譜法；含量測定是對藥材中所含槲皮素的含量測定，槲皮素的含量測定方法是以槲皮素對照品為對照、以有機相水相=1040:9060的高效液相色譜法。具體的薄層色譜鑑別方法為(1)取槓板歸藥材2g，用7090。/。乙醇回流提取l2h，濾過，濾液蒸乾，殘渣用甲醇12mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素對照品適量，用甲醇製成0.10.5mgml—1的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素對照品溶液各25uL，分別點於同一矽膠G254薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=210:i3:o.51.5:o.2o.7為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1%2%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素對照品色譜相應的位置上顯相同顏色斑點；(2)取槓板歸藥材2g，用70%90%乙醇回流提取1211，濾過，濾液蒸乾，殘渣用甲醇12mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品適量，用甲醇製成O.10.5mgml4的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素-3-O-{3-0-葡萄糖醛酸正丁酯對照品溶液各25yL，分別點於同一聚醯胺薄層板上，以甲醇甲酸水=711:o.2o.8:o.2o.6為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1%2%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素-3-o-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品色譜相應的位置上顯相同顏色斑點。具體的槲皮素含量測定方法為照《中國藥典》一部附錄VID高效液相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基鍵合矽膠為填充劑；以有機相水相=1040:9060為流動相；柱溫為2535。C;檢測波長為340370nm;理論板數按槲皮素峰計算應不低於3000;對照品溶液的製備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇製成每lmL含O.010.05mg的溶液，即得；供試品溶液的製備取槓板歸藥材中粉lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入37呢鹽酸無水乙醇溶液2050mL，稱定重量，加熱回流提取36小時，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液l5mL，水浴揮幹，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各520uL，注入液相色譜儀，觀使，即得；槓板歸按乾燥品計算，含槲皮素C巧Hw07重量不得少於0.20%。以上所述的有機相為乙腈或甲醇，所述的水相為質量濃度0.001%5%的甲酸、乙酸或磷酸水溶液。流動相中的有機相優選為乙腈，水相優選為質量濃度O.02%磷酸溶液，有機相與水相的體積比優選為30:70。本發明最全面的質量檢測方法包括以下項目性狀莖略呈方形，有稜角，多分枝，直徑達0.2cm，表面紫紅色、棕黃色或黃綠色，稜角上有倒鉤刺，節略膨大，節間長26cm，斷面纖維性，黃白色，有髓或中空；葉互生，有長柄，盾狀著生；葉片多皺縮，展開後呈近等邊三角形，灰綠色至紅棕色，下表面葉脈及葉柄均有倒生鉤刺；託葉鞘包於莖節上或脫落；短穗狀花序頂生或生於上部葉腋，苞片圓形，花小，多萎縮或脫落；氣微，莖味淡，葉味酸；鑑別(1)莖橫切面表皮為一列厚壁細胞，內含紅棕色物質；皮層薄，35列細胞;嫩莖中柱鞘纖維束連續成環層，老莖被射線割斷成斷續環層，細胞壁厚，木化；韌皮部老莖具韌皮纖維，壁厚木化，形成層明顯；木質部導管大，單個或35個成群；髓部細胞大，有的中空；老莖在皮層、韌皮部、射線及髓部可見多數草酸鈣簇晶，嫩莖則少見或無；(2)葉的表面觀上表皮細胞不規則多角形，垂周壁近平直或微彎曲；其下有類圓形的分泌細胞，直徑65um;腺毛少數，頭部2-8細胞，柄短；下表皮細胞垂周壁波狀彎曲；氣孔平軸式或不等式，腺毛稍多；非腺毛多為單細胞；主脈和葉緣疏生由多列斜方形或長方形細胞組成的鉤狀刺；葉肉細胞含草酸鈣簇晶，直徑17-62um;(3)取槓板歸藥材2g，用7090。/。乙醇回流提取l2h，濾過，濾液蒸乾，殘渣用甲醇12mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素對照品適量，用甲醇製成0.10.5mgml—1的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素對照品溶液各25uL，分別點於同一矽膠G254薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=210:i3:o.51.5:o.2o.7為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1%2%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素對照品色譜相應的位置上顯相同顏色斑點；(4)取槓板歸藥材2g，用70%90%乙醇回流提取1211，濾過，濾液蒸乾，殘渣用甲醇12mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品適量，用甲醇製成O.10.5mgml—i的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素-3-O-{3-0-葡萄糖醛酸正丁酯對照品溶液各25yL，分別點於同一聚醯胺薄層板上，以甲醇甲酸水=711:o.2o.8:o.2o.6為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1%2%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素-3-o-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品色譜相應的位置上顯相同顏色斑點檢査(1)水分照《中國藥典》一部附錄IXH第一法水分測定法測定，不得超過14.0%;(2)總灰分照《中國藥典》一部附錄IXK測定，不得超過10.0%;(3)浸出物水溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA水溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，不得少於13.0%;醇溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA醇溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，乙醇作為溶劑，不得少於11.0%;含量測定照《中國藥典》一部附錄VID高效液相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基鍵合矽膠為填充劑；以有機相水相=1040:9060為流動相；柱溫為2535。C;檢測波長為340370nm;理論板數按槲皮素峰計算應不低於3000;對照品溶液的製備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇製成每lmL含O.010.05mg的溶液，即得；供試品溶液的製備取槓板歸藥材中粉lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入37呢鹽酸無水乙醇溶液2050mL，稱定重量，加熱回流提取36小時，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液l5mL，水浴揮幹，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各520uL，注入液相色譜儀，觀使，即得；槓板歸按乾燥品計算，含槲皮素C巧Hw07重量不得少於0.20%。優選的質量檢測方法包括以下項目性狀莖略呈方形，有稜角，多分枝，直徑達0.2cm，表面紫紅色、棕黃色或黃綠色，稜角上有倒鉤刺，節略膨大，節間長26cm，斷面纖維性，黃白色，有髓或中空；葉互生，有長柄，盾狀著生；葉片多皺縮，展開後呈近等邊三角形，灰綠色至紅棕色，下表面葉脈及葉柄均有倒生鉤刺；託葉鞘包於莖節上或脫落；短穗狀花序頂生或生於上部葉腋，苞片圓形，花小，多萎縮或脫落；氣微，莖味淡，葉味酸；鑑別(1)莖橫切面表皮為一列厚壁細胞，內含紅棕色物質；皮層薄，35列細胞;嫩莖中柱鞘纖維束連續成環層，老莖被射線割斷成斷續環層，細胞壁厚，木化；韌皮部老莖具韌皮纖維，壁厚木化，形成層明顯；木質部導管大，單個或35個成群；髓部細胞大，有的中空；老莖在皮層、韌皮部、射線及髓部可見多數草酸鈣簇晶，嫩莖則少見或無；(2)葉的表面觀上表皮細胞不規則多角形，垂周壁近平直或微彎曲；其下有類圓形的分泌細胞，直徑65um;腺毛少數，頭部2-8細胞，柄短；下表皮細胞垂周壁波狀彎曲；氣孔平軸式或不等式，腺毛稍多；非腺毛多為單細胞；主脈和葉緣疏生由多列斜方形或長方形細胞組成的鉤狀刺；葉肉細胞含草酸鈣簇晶，直徑17-62um;(3)取槓板歸藥材2g，用90。/。乙醇回流提取2h，濾過，濾液蒸乾，殘渣用甲醇lmL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素對照品適量，用甲醇製成0.lmgml4的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素對照品溶液各5uL，分別點於同一矽膠G254薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=8:2:l:0.5為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素對照品色譜相應的位置上顯相同顏色斑點；(4)取槓板歸藥材2g，用90。/。乙醇回流提取2h，濾過，濾液蒸乾，殘渣用甲醇lmL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品適量，用甲醇製成0.lmgml4的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素-3-O-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯對照品溶液各5yL，分別點於同一聚醯胺薄層板上，以甲醇甲酸水=9:0.5:0.4為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素-3-O-P-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品色譜相應的位置上顯相同顏色斑點；檢査(1)水分照《中國藥典》一部附錄IXH第一法水分測定法測定，不得超過14.0%;(2)總灰分照《中國藥典》一部附錄IXK測定，不得超過10.0%;(3)浸出物水溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA水溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，不得少於13.0%;醇溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA醇溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，乙醇作為溶劑，不得少於11.0%;含量測定照《中國藥典》一部附錄VID高效液相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基鍵合矽膠為填充劑；以乙腈0.02%磷酸溶液=30:70為流動相；柱溫為25'C;檢測波長為370nm;理論板數按槲皮素峰計算應不低於3000;對照品溶液的製備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇製成每lmL含O.02mg的溶液，即得；供試品溶液的製備取槓板歸藥材中粉lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入5%鹽酸無水乙醇溶液25mL，稱定重量，加熱回流提取4小時，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液2mL，水浴揮幹，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20uL，注入液相色譜儀，測定，即得；槓板歸按乾燥品計算，含槲皮素C巧Hw07重量不得少於0.20%。槓板歸(Polygo皿mperfoliatumL.)藥材收載於《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》2003年版，該標準對槓板歸的性狀、莖葉的顯微鑑別進行了描述，同時採用咖啡酸為對照品，建立了槓板歸的薄層色譜鑑別方法。這些方法均是從定性的角度建立的，已經不能滿足槓板歸應用發展的需要，為此，本發明人對其質量標準進行了提升研究。通過査閱國內外文獻資料發現槓板歸的化學成分研究報導很少，活性成分不明確，為此，發明人對槓板歸的化學成分進行了系統的研究，研究結果表明黃酮類化合物是其主要化學成分。黃酮類化合物具有抗氧化、清除氧自由基作用；調節心血管系統作用；抗炎免疫及抗衰老等作用。為了更有效的控制藥材質量，根據槓板歸所含的主要成分之一槲皮素的特點，採用高效液相色譜法進行了含量測定，並對含量測定進行了方法學研究。以下是本發明人對槓板歸的質量檢測方法進行實驗研究並優選的過程一、檢査項目l.水分照水分測定法(《中國藥典》一部附錄IXH第一法)測定。發明人測定了20個不同產地的槓板歸藥材中水分的含量，結果見表l:表l不同產地槓板歸藥tableseeoriginaldocumentpage13各產地槓板歸藥材的水分含量平均值為11.9%，最高值為13.5%。由於不同產地的地域差異性，暫定水分含量不得超過14.0%，將其列入質量檢測標準。2.灰分照灰分測定法《中國藥典》一部附錄IXK測定，發明人測定了20個不同產地的槓板歸藥材中灰分的含量，結果見表2:表2不同產地槓板歸藥jtableseeoriginaldocumentpage13各產地槓板歸藥材的灰分含量平均值為8.06%，最高值為8.8%。由於不同產地的地域差異性，暫定灰分含量不得超過IO.0%，將其列入質量檢測標準。3.浸出物按照浸出物測定法項下的冷浸法(《中國藥典》一部附錄XA)分別對槓板歸的水溶性浸出物和醇溶性浸出物進行了測定，測定結果如下(1)水溶性浸出物照水溶性浸出物測定法項下的冷浸法(《中國藥典》一部附錄XA)分別測定了20個不同產地的槓板歸藥材，測定結果見表3:表3不同產J也槓板歸藥材水溶性浸出物測定結果表(n=3)tableseeoriginaldocumentpage14各產地槓板歸藥材的水溶性浸出物含量平均值為16.61%，由於不同產地的地域差異性，按平均值下浮20%作為水溶性浸出物的最低限，g卩16.61%X(1-20%)=13.29%^13.0%，將其列入質量檢測標準。(2)醇溶性浸出物照醇溶性浸出物測定法項下的冷浸法(《中國藥典》一部附錄XA)，以乙醇作為溶劑，分別測定了20個不同產地的槓板歸藥材，測定結果見表4:表4不同產地槓板歸藥材醇溶性浸出物測定結果表(n=3)tableseeoriginaldocumentpage14各產地槓板歸藥材的醇溶性浸出物含量平均值為13.56%，由於不同產地的地域差異性，按平均值下浮20%作為醇溶性浸出物的最低限，g卩13.56%X(1-20%)=10.85%^11.0%，將其列入質量檢測標準。二、薄層色譜鑑別方法的建立l.試藥薄層層析矽膠G254，分析純(青島海洋化工廠)；聚醯胺薄層層析板(安徽皖西矽源材料廠);定量毛細管(DrummondScientificCo.USA.);槲皮素和槲皮素-3-0-P-D-葡萄糖醛酸正丁酯(自製)通過波譜解析技術(IR、"H-NMR、"C-NMR、MS)分析，鑑定其結構；甲醇、氯仿、醋酸乙酯等均為分析純。2.實驗材料共收集了20批樣品，來自貴州花溪、牛郎關大興田、貴州沿河、貴州貞豐、河南省光山縣文殊鄉、湖南辰溪等地，經貴陽中醫學院何順志研究員鑑定為Polygo皿mperfoliatumL.。3.方法與結果3.1方法取槓板歸藥材(三號篩)2g，用90。/。乙醇回流提取2h，濾過，濾液蒸乾，殘渣用甲醇lmL溶解，作為供試品溶液。另分別精密稱取槲皮素和槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品適量，分別用甲醇製成O.lmgml4的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液和槲皮素對照品溶液各5uL，分別點於同一矽膠G254薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酉^甲醇-甲酸(8:2:1:0.5)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置紫外燈(254nm)下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素對照品色譜相應的位置上顯相同顏色斑點。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液和槲皮素-3-0-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯對照品溶液各5yL，分別點於同一聚醯胺薄層板上，以甲醇-甲酸-水(9:0.5:0.4)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置紫外燈(254nm)下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素-3-O-{3-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品色譜相應的位置上顯相同顏色斑點。3.2結果供試品色譜在與對照品色譜相應位置上顯相同顏色的斑點。同時不同產地的槓板歸藥材在薄層色譜上有所區別。三、槲皮素含量測定方法的建立1.儀器與試藥高效液相色譜儀AglientIIOO高效液相色譜儀(四元泵，DAD檢測器，自動進樣器);CT0-10Asvp柱溫箱(美國)；十萬分之一天平(梅特勒託利多)。色譜乙腈(天津市科密歐化學試劑開發中心)；水(重蒸水，臨用前製備)；鹽酸、磷酸等(分析醇)；槲皮素對照品(中國生物製品鑑定所，批號110257-200201);槓板歸藥材(20個不同產地)。2.色譜條件色譜柱HypersilODS(4.6X250mm)柱，乙腈-0.02%磷酸(30:70)為流動相，流速為lmlmin—\檢測波長370nm，柱溫25。C。3.提取條件的選擇(1)提取溶劑的選擇取同一批槓板歸(貴州黔西縣)藥材3份，每份lg，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，分別精密加入無水乙醇(含5%鹽酸)、50%甲醇(含5%鹽酸)、甲醇(含5%鹽酸)各25mL，稱定重量，超聲提取30min，分別用所加溶劑補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液2mL，水浴揮幹，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，即得。按上述含量測定方法測定，計算，結果見表5。表5提取溶劑的選擇tableseeoriginaldocumentpage16由表5可知，各種不同溶劑的提取效果相比較，無水乙醇效果最好，甲醇次之，50%甲醇最差，故選擇無水乙醇作為提取溶劑。(2)提取方法考査方法一超聲提取取同一批槓板歸(貴州黔西縣)藥材lg，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇(含5%鹽酸)25mL，稱定重量，超聲提取2次，每次30min，濾過，合併濾液，濃縮，用無水乙醇定容至25mL，搖勻，濾過，取續濾液2mL，水浴揮幹，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，即得。方法二回流提取取同一批槓板歸(貴州黔西縣)藥材lg，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇(含5%鹽酸)25mL，稱定重量，回流提取3小時，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液2mL，水浴揮幹，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，即得。按上述含量測定方法測定，計算，結果見表6。表6提取方法白tableseeoriginaldocumentpage16由表6可知，回流提取效果明顯優於超聲提取，故採用回流提取作為提取方法。(3)回流時間的考査取同一批槓板歸(貴州黔西縣)藥材5份，每份lg，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇(含5%鹽酸)25mL，稱定重量，分別回流提取2、3、4、5、6小時，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液2mL，水浴揮幹，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，即得。按上述含量測定方法測定，計算，結果見表7。表7回流時間考査結果表tableseeoriginaldocumentpage17由表7可知，回流提取4小時即可將槓板歸中的槲皮素提取完全。(4)提取溶劑酸度考査取同一批槓板歸(貴州黔西縣)藥材4份，每份lg，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，分別精密加入無水乙醇25mL(無水乙醇中含鹽酸的濃度分別為4%、5%、6%、7%)，稱定重量，回流提取4小時，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液2mL，水浴揮幹，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，即得。按上述含量測定方法測定，計算，結果見表8。表8提取溶劑酸度考査結果表tableseeoriginaldocumentpage17由表8結果可知，選擇5.0%的鹽酸無水乙醇作為提取溶劑，提取效果與6.0%及7.0%的鹽酸無水乙醇相似，沒有明顯差異，考慮到實際情況，選擇5.0%的鹽酸無水乙醇作為提取溶劑(5)藥材粒度的考察取同一批槓板歸(貴州黔西縣)藥材4份，分別粉碎成粗粉、中粉、細粉、最細粉，稱取各種規格的藥粉約lg，分別精密加入無水乙醇(含5%鹽酸)25mL，稱定重量，回流提取4小時，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液2mL，水浴揮幹，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，製備成供試品溶液，按照本發明所述的色譜條件測定槲皮素的含量，結果表明，把槓板歸藥材粉碎成中粉後測定其中槲皮素的含量最為適宜，試驗結果見tableseeoriginaldocumentpage184.系統適應性試驗分別精密吸取槲皮素對照品溶液、槓板歸藥材供試品溶液和試劑空白溶液各20uL，注入液相色譜儀，測定，槲皮素的保留時間約為11.7分鐘，本試驗條件下槲皮素與其他組分峰的分離度大於1.5，陰性無幹擾，理論板數按槲皮素峰計均高於3000，故規定理論板數按槲皮素峰計不低於3000。5.檢測波長的選擇在液相色譜儀上，於200400nm範圍內進行全波掃描，結果顯示槲皮素的最大吸收波長為370nm，故選定370nm為槓板歸中槲皮素的檢測波長。6.槲皮素的純度檢査經過面積歸一化法計算，其純度為99.78%。7.線性關係的考察精密稱取經五氧化二磷乾燥至恆重的槲皮素對照品IO.26mg置100mL容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，製成每lmL含槲皮素O.1026mg的對照品貯備液。分別精密吸取該對照品貯備液O.5mL、l.OmL、1.5mL、2.OmL、2.5mL、3.OmL、3.5mL於10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，製成系列對照品溶液。分別精密吸取該對照品系列溶液各20uL，注入高效液相色譜儀，按本發明所述色譜條件測定峰面積，記錄色譜圖，結果見表IO，並以對照品的進樣量X(yg)為橫坐標，峰面積值Y為縱坐標，繪製標準曲線，結果表明，槲皮素在O.10260.7182yg範圍內線性關係良好。表IO槲皮素線性關係考査結果表tableseeoriginaldocumentpage18回歸方程y=3817.60x-110.86，g=0.9998。經擬合過原點的方程為y=3601.50x，相關係數g4.9997。將一樣品的峰面積代入上兩式，結果相對偏差為0.14%，可認為截距為零，可用外標一點法計算含量，槲皮素在O.10260.7182yg範圍內有良好的線性關係。8.精密度試驗精密量取槲皮素對照品溶液(濃度0.4104mg/mL)20uL，重複進樣6次，記錄色譜圖，結果列於表ll，其RSD為0.05y。，說明該方法具有良好的精密度。表ll槲皮素精密度實驗結果tableseeoriginaldocumentpage199.重複性試驗取同一批槓板歸(貴州黔西縣)藥材中粉各lg，共6份，按本發明所述含量測定方法中供試品溶液的製備方法製備供試液。精密吸取供試品溶液各20yL，注入高效液相色譜儀，按本發明所述色譜條件測定槲皮素峰面積積分值，計算含量，求相對標準偏差。結果表明，此方法測定槲皮素的重現性良好，RSD=1.89%。結果見表12。表12重現性試驗結果表tableseeoriginaldocumentpage19io.穩定性試驗取同一批槓板歸(貴州黔西縣)藥材中粉lg，按本發明所述含量測定方法中供試品溶液的製備方法製備供試液，在室溫下按表13規定時間進樣，測定槲皮素峰面積，求相對標準偏差。結果表明，槲皮素至少在36小時內基本穩定，RSD=1.2%。結果見表13。表13槲皮素穩定性實驗結果表tableseeoriginaldocumentpage19ll.準確度試驗採用加樣回收試驗，取已知含量的重複性試驗的同一批樣品(貴州黔西縣，槲皮素平均含量為O.264%，g卩2.64mg/g)9份，精密稱取各約O.5g，13份分別加入槲皮素對照品溶液(0.50mg/mL)2.OmL，46份分別加入槲皮素對照品溶液(0.50mg/mL)2.6mL，79份分別加入槲皮素對照品溶液(0.50mg/mL)3.2mL，按供試品溶液的製備方法製備成供試品溶液，照上述色譜條件，進樣、測定，記錄色譜圖，計算含量，求相對標準偏差。結果表明，此方法具有較好的加樣回收率，結果見表14。表14回收率試驗結果表tableseeoriginaldocumentpage2012.耐用性試驗取同一批槓板歸(貴州黔西縣)藥材中粉lg，共3份，按本發明所述方法處理樣品，得供試品溶液，備用，進行以下色譜條件的對比考査研究流動相組成及比例變化、不同色譜柱比較、不同柱溫比較、不同流速比較、不同檢測波長比較，考査結果見表15-19。表15流動相組成及比例變化考査結果表tableseeoriginaldocumentpage20表18不同流速比較考査結果表tableseeoriginaldocumentpage2113.樣品測定按本發明所述方法製備供試品和對照品溶液，分別進樣，記錄色譜圖，計算槲皮素的含量，結果見表20。表2020批藥材中槲皮素含量測定結果表(n=2)tableseeoriginaldocumentpage21與現有技術相比，本發明通過建立槓板歸藥材中槲皮素的含量測定方法和以槲皮素及槲皮素-3-o-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯為對照的薄層色譜鑑別方法，完善了槓板歸藥材的質量檢測標準，彌補了現有質量檢測技術的不足，使槓板歸藥材的質量檢測技術更為科學、合理；本發明所述質量檢測方法的精密度高，重現性好，穩定性好，回收率高，測量結果準確，可有效控制槓板歸藥材的質量，從而確保其臨床應用的安全性和有效性。具體實施例方式以下通過實施例進一步說明本發明，但不作為對本發明的限制。本發明的實施例l:槓板歸藥材的質量檢測方法包括以下項目性狀莖略呈方形，有稜角，多分枝，直徑達0.2cm，表面紫紅色、棕黃色或黃綠色，稜角上有倒鉤刺，節略膨大，節間長26cm，斷面纖維性，黃白色，有髓或中空；葉互生，有長柄，盾狀著生；葉片多皺縮，展開後呈近等邊三角形，灰綠色至紅棕色，下表面葉脈及葉柄均有倒生鉤刺；託葉鞘包於莖節上或脫落；短穗狀花序頂生或生於上部葉腋，苞片圓形，花小，多萎縮或脫落；氣微，莖味淡，葉味酸。鑑別(1)莖橫切面表皮為一列厚壁細胞，內含紅棕色物質；皮層薄，35列細胞;嫩莖中柱鞘纖維束連續成環層，老莖被射線割斷成斷續環層，細胞壁厚，木化；韌皮部老莖具韌皮纖維，壁厚木化，形成層明顯；木質部導管大，單個或35個成群；髓部細胞大，有的中空；老莖在皮層、韌皮部、射線及髓部可見多數草酸鈣簇晶，嫩莖則少見或無。(2)葉的表面觀上表皮細胞不規則多角形，垂周壁近平直或微彎曲；其下有類圓形的分泌細胞，直徑65um;腺毛少數，頭部2-8細胞，柄短；下表皮細胞垂周壁波狀彎曲；氣孔平軸式或不等式，腺毛稍多；非腺毛多為單細胞；主脈和葉緣疏生由多列斜方形或長方形細胞組成的鉤狀刺；葉肉細胞含草酸鈣簇晶，直徑17-62um。(3)取槓板歸藥材2g，用90。/。乙醇回流提取2h，濾過，濾液蒸乾，殘渣用甲醇lmL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素對照品適量，用甲醇製成0.lmgml4的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素對照品溶液各5uL，分別點於同一矽膠G254薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=8:2:1:0.5為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素對照品色譜相應的位置上顯相同顏色斑點。(4)取槓板歸藥材2g，用90。/。乙醇回流提取2h，濾過，濾液蒸乾，殘渣用甲醇lmL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品適量，用甲醇製成0.lmgml4的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素-3-O-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯對照品溶液各5yL，分別點於同一聚醯胺薄層板上，以甲醇甲酸水=9:0.5:0.4為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素-3-O-P-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品色譜相應的位置上顯相同顏色斑點。檢査(1)水分照《中國藥典》一部附錄IXH第一法水分測定法測定，不得超過14.0%。(2)總灰分照《中國藥典》一部附錄IXK測定，不得超過10.0%。(3)浸出物水溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA水溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，不得少於13.0%;醇溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA醇溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，乙醇作為溶劑，不得少於11.0%。含量測定照《中國藥典》2005年版一部附錄VID高效液相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基鍵合矽膠為填充劑；以乙腈0.02%(質量濃度)磷酸溶液=30:70為流動相；柱溫為25。C;檢測波長為370nm;理論板數按槲皮素峰計算應不低於3000。對照品溶液的製備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇製成每lmL含O.02mg的溶液，即得。供試品溶液的製備取槓板歸藥材中粉lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入5%鹽酸無水乙醇溶液25mL，稱定重量，加熱回流提取4小時，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液2mL，水浴揮幹，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20uL，注入液相色譜儀，測定，即得。槓板歸按乾燥品計算，含槲皮素(C15H1907)重量不得少於0.20%。本發明的實施例2:槓板歸藥材的質量檢測方法可以僅含以下項目鑑別(1)莖橫切面表皮為一列厚壁細胞，內含紅棕色物質；皮層薄，35列細胞;嫩莖中柱鞘纖維束連續成環層，老莖被射線割斷成斷續環層，細胞壁厚，木化；韌皮部老莖具韌皮纖維，壁厚木化，形成層明顯；木質部導管大，單個或35個成群；髓部細胞大，有的中空；老莖在皮層、韌皮部、射線及髓部可見多數草酸鈣簇晶，嫩莖則少見或無。(2)取槓板歸藥材2g，用80。/。乙醇回流提取lh，濾過，濾液蒸乾，殘渣用甲醇2mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素對照品適量，用甲醇製成0.3mgml4的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素對照品溶液各2uL，分別點於同一矽膠G254薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=10:3:1.5:0.7為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以2%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素對照品色譜相應的位置上顯相同顏色斑點。檢査(1)水分照《中國藥典》一部附錄IXH第一法水分測定法測定，不得超過14.0%。(2)浸出物水溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA水溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，不得少於13.0%;醇溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA醇溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，乙醇作為溶劑，不得少於11.0%。含量測定照《中國藥典》2005年版一部附錄VID高效液相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基鍵合矽膠為填充劑；以乙腈0.01%(質量濃度)乙酸溶液=35:65為流動相；柱溫為3(TC;檢測波長為350nm;理論板數按槲皮素峰計算應不低於3000。對照品溶液的製備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇製成每lmL含O.Olmg的溶液，即得。供試品溶液的製備取槓板歸藥材中粉lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入4%鹽酸無水乙醇溶液35mL，稱定重量，加熱回流提取3小時，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液3mL，水浴揮幹，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各8uL，注入液相色譜儀，觀使，即得槓板歸按乾燥品計算，含槲皮素(C15H1907)重量不得少於0.20%。本發明的實施例3:槓板歸藥材的質量檢測方法可以僅含以下項目鑑別(1)葉的表面觀上表皮細胞不規則多角形，垂周壁近平直或微彎曲；其下有類圓形的分泌細胞，直徑65um;腺毛少數，頭部2-8細胞，柄短；下表皮細胞垂周壁波狀彎曲；氣孔平軸式或不等式，腺毛稍多；非腺毛多為單細胞；主脈和葉緣疏生由多列斜方形或長方形細胞組成的鉤狀刺；葉肉細胞含草酸鈣簇晶，直徑17-62ym。(2)取槓板歸藥材2g，用80。/。乙醇回流提取lh，濾過，濾液蒸乾，殘渣用甲醇2mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品適量，用甲醇製成0.3mgml4的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》2005年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素-3-O-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯對照品溶液各2yL，分別點於同一聚醯胺薄層板上，以甲醇甲酸水=11:0.8:o.e為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以2%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素-3-O-P-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品色譜相應的位置上顯相同顏色斑點。檢査(1)水分照《中國藥典》一部附錄IXH第一法水分測定法測定，不得超過14.0%。(2)總灰分照《中國藥典》一部附錄IXK測定，不得超過10.0%。含量測定照《中國藥典》2005年版一部附錄VID高效液相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基鍵合矽膠為填充劑；以甲醇0.03%(質量濃度)甲酸溶液=20:80為流動相；柱溫為35。C;檢測波長為360nm;理論板數按槲皮素峰計算應不低於3000。對照品溶液的製備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇製成每lmL含O.03mg的溶液，即得。供試品溶液的製備取槓板歸藥材中粉lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入6%鹽酸無水乙醇溶液45mL，稱定重量，加熱回流提取5小時，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液4mL，水浴揮幹，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各15uL，注入液相色譜儀，測定，即得。槓板歸按乾燥品計算，含槲皮素(C15H1907)重量不得少於0.20%。本發明的實施例4:槓板歸藥材的質量檢測方法可以含以下項目性狀莖略呈方形，有稜角，多分枝，直徑達0.2cm，表面紫紅色、棕黃色或黃綠色，稜角上有倒鉤刺，節略膨大，節間長26cm，斷面纖維性，黃白色，有髓或中空；葉互生，有長柄，盾狀著生；葉片多皺縮，展開後呈近等邊三角形，灰綠色至紅棕色，下表面葉脈及葉柄均有倒生鉤刺；託葉鞘包於莖節上或脫落；短穗狀花序頂生或生於上部葉腋，苞片圓形，花小，多萎縮或脫落；氣微，莖味淡，葉味酸。鑑別(1)取槓板歸藥材2g，用70。/。乙醇回流提取1.5h，濾過，濾液蒸乾，殘渣用甲醇1.5mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素對照品適量，用甲醇製成0.5mgml4的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素對照品溶液各5uL，分別點於同一矽膠G254薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=3:1:0.5:0.2為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素對照品色譜相應的位置上顯相同顏色斑點。(2)取槓板歸藥材2g，用70。/。乙醇回流提取1.5h，濾過，濾液蒸乾，殘渣用甲醇1.5mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品適量，用甲醇製成0.5mgml4的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素-3-O-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯對照品溶液各5yL，分別點於同一聚醯胺薄層板上，以甲醇甲酸水=7:0.2:0.2為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素-3-O-P-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品色譜相應的位置上顯相同顏色斑點。檢査浸出物水溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA水溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，不得少於13.0%;醇溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA醇溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，乙醇作為溶劑，不得少於11.0%。含量測定照《中國藥典》一部附錄VID高效液相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基鍵合矽膠為填充劑；以乙腈0.05%(質量濃度)磷酸溶液=25:75為流動相；柱溫為25。C;檢測波長為340nm;理論板數按槲皮素峰計算應不低於3000。對照品溶液的製備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇製成每lmL含O.05mg的溶液，即得。供試品溶液的製備取槓板歸藥材中粉lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入3%鹽酸無水乙醇溶液30mL，稱定重量，加熱回流提取6小時，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液5mL，水浴揮幹，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10uL，注入液相色譜儀，測定，即得。槓板歸按乾燥品計算，含槲皮素(C15H1907)重量不得少於0.20%。權利要求1.一種槓板歸藥材的質量檢測方法，所述質量檢測方法包括性狀、鑑別、檢查、含量測定項目中的部分或全部，其特徵在於所述鑑別包括以槲皮素對照品為對照、以三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶甲酸＝2～10∶1～3∶0.5～1.5∶0.2～0.7為展開劑的薄層色譜法和/或以槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品為對照、以甲醇∶甲酸∶水＝7～11∶0.2～0.8∶0.2～0.6為展開劑的薄層色譜法；含量測定是對藥材中所含槲皮素的含量測定，槲皮素的含量測定方法是以槲皮素對照品為對照、以有機相∶水相＝10～40∶90～60的高效液相色譜法。2.按照權利要求l所述槓板歸藥材的質量檢測方法，其特徵在於具體的薄層色譜鑑別方法為(1)取槓板歸藥材2g，用7090。/。乙醇回流提取l2h，濾過，濾液蒸乾，殘渣用甲醇12mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素對照品適量，用甲醇製成0.10.5mgml-l的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素對照品溶液各25uL，分別點於同一矽膠G254薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=210:i3:o.51.5:o.2o.7為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1%2%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素對照品色譜相應的位置上顯相同顏色斑點；(2)取槓板歸藥材2g，用70%90%乙醇回流提取1211，濾過，濾液蒸乾，殘渣用甲醇l2mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素-3-O-6-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品適量，用甲醇製成O.10.5mgml-l的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素-3-O-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯對照品溶液各25yL，分別點於同一聚醯胺薄層板上，以甲醇甲酸水=711:o.2o.8:o.2o.6為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1%2%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素-3-o-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品色譜相應的位置上顯相同顏色斑點。3.按照權利要求l所述槓板歸藥材的質量檢測方法，其特徵在於具體的槲皮素含量測定方法為照《中國藥典》一部附錄VID高效液相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基鍵合矽膠為填充劑；以有機相水相=1040:9060為流動相；柱溫為2535。C;檢測波長為340370nm;理論板數按槲皮素峰計算應不低於3000;對照品溶液的製備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇製成每lmL含O.010.05mg的溶液，即得；供試品溶液的製備取槓板歸藥材中粉lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入37呢鹽酸無水乙醇溶液2050mL，稱定重量，加熱回流提取36小時，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液l5mL，水浴揮幹，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各520uL，注入液相色譜儀，測定，即得；槓板歸按乾燥品計算，含槲皮素C15H1907重量不得少於0.20%。4按照權利要求3所述槓板歸藥材的質量檢測方法，其特徵在於所述的有機相為乙腈或甲醇，所述的水相為質量濃度O.001%5%的甲酸、乙酸或磷酸水溶液。5按照權利要求3或4所述槓板歸藥材的質量檢測方法，其特徵在於:流動相中的有機相為乙腈，水相為質量濃度O.02%磷酸溶液，有機相與水相的體積比為30二706按照權利要求l、2或3所述槓板歸藥材的質量檢測方法，其特徵在於所述質量檢測方法包括以下項目性狀莖略呈方形，有稜角，多分枝，直徑達0.2cm，表面紫紅色、棕黃色或黃綠色，稜角上有倒鉤刺，節略膨大，節間長26cm，斷面纖維性，黃白色，有髓或中空；葉互生，有長柄，盾狀著生；葉片多皺縮，展開後呈近等邊三角形，灰綠色至紅棕色，下表面葉脈及葉柄均有倒生鉤刺；託葉鞘包於莖節上或脫落；短穗狀花序頂生或生於上部葉腋，苞片圓形，花小，多萎縮或脫落；氣微，莖味淡，葉味酸；鑑別(1)莖橫切面表皮為一列厚壁細胞，內含紅棕色物質；皮層薄，35列細胞;嫩莖中柱鞘纖維束連續成環層，老莖被射線割斷成斷續環層，細胞壁厚，木化；韌皮部老莖具韌皮纖維，壁厚木化，形成層明顯；木質部導管大，單個或35個成群；髓部細胞大，有的中空；老莖在皮層、韌皮部、射線及髓部可見多數草酸鈣簇晶，嫩莖則少見或無；(2)葉的表面觀上表皮細胞不規則多角形，垂周壁近平直或微彎曲；其下有類圓形的分泌細胞，直徑65ym;腺毛少數，頭部2-8細胞，柄短；下表皮細胞垂周壁波狀彎曲；氣孔平軸式或不等式，腺毛稍多；非腺毛多為單細胞；主脈和葉緣疏生由多列斜方形或長方形細胞組成的鉤狀刺；葉肉細胞含草酸鈣簇晶，直徑17-62um;(3)取槓板歸藥材2g，用7090。/。乙醇回流提取l2h，濾過，濾液蒸乾，殘渣用甲醇12mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素對照品適量，用甲醇製成0.10.5mgml-l的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素對照品溶液各25uL，分別點於同一矽膠G254薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=210:i3:o.51.5:o.2o.7為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1%2%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素對照品色譜相應的位置上顯相同顏色斑點；(4)取槓板歸藥材2g，用70%90%乙醇回流提取1211，濾過，濾液蒸乾，殘渣用甲醇l2mL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素-3-O-6-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品適量，用甲醇製成O.10.5mgml-l的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素-3-O-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯對照品溶液各25yL，分別點於同一聚醯胺薄層板上，以甲醇甲酸水=711:o.2o.8:o.2o.6為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1%2%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素-3-o-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品色譜相應的位置上顯相同顏色斑點；檢査(1)水分照《中國藥典》一部附錄IXH第一法水分測定法測定，不得超過14.0%;(2)總灰分照《中國藥典》一部附錄IXK測定，不得超過10.0%;(3)浸出物水溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA水溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，不得少於13.0%;醇溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA醇溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，乙醇作為溶劑，不得少於11.0%;含量測定照《中國藥典》一部附錄VID高效液相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基鍵合矽膠為填充劑；以有機相水相=1040:9060為流動相；柱溫為2535。C;檢測波長為340370nm;理論板數按槲皮素峰計算應不低於3000;對照品溶液的製備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇製成每lmL含O.010.05mg的溶液，即得；供試品溶液的製備取槓板歸藥材中粉lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入37呢鹽酸無水乙醇溶液2050mL，稱定重量，加熱回流提取36小時，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液l5mL，水浴揮幹，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各520uL，注入液相色譜儀，測定，即得；槓板歸按乾燥品計算，含槲皮素C15H1907重量不得少於0.20%。7.按照權利要求6所述槓板歸藥材的質量檢測方法，其特徵在於所述質量檢測方法包括以下項目性狀莖略呈方形，有稜角，多分枝，直徑達0.2cm，表面紫紅色、棕黃色或黃綠色，稜角上有倒鉤刺，節略膨大，節間長26cm，斷面纖維性，黃白色，有髓或中空；葉互生，有長柄，盾狀著生；葉片多皺縮，展開後呈近等邊三角形，灰綠色至紅棕色，下表面葉脈及葉柄均有倒生鉤刺；託葉鞘包於莖節上或脫落；短穗狀花序頂生或生於上部葉腋，苞片圓形，花小，多萎縮或脫落；氣微，莖味淡，葉味酸；鑑別(1)莖橫切面表皮為一列厚壁細胞，內含紅棕色物質；皮層薄，35列細胞;嫩莖中柱鞘纖維束連續成環層，老莖被射線割斷成斷續環層，細胞壁厚，木化；韌皮部老莖具韌皮纖維，壁厚木化，形成層明顯；木質部導管大，單個或35個成群；髓部細胞大，有的中空；老莖在皮層、韌皮部、射線及髓部可見多數草酸鈣簇晶，嫩莖則少見或無；(2)葉的表面觀上表皮細胞不規則多角形，垂周壁近平直或微彎曲；其下有類圓形的分泌細胞，直徑65um;腺毛少數，頭部2-8細胞，柄短；下表皮細胞垂周壁波狀彎曲；氣孔平軸式或不等式，腺毛稍多；非腺毛多為單細胞；主脈和葉緣疏生由多列斜方形或長方形細胞組成的鉤狀刺；葉肉細胞含草酸鈣簇晶，直徑17-62um;(3)取槓板歸藥材2g，用90。/。乙醇回流提取2h，濾過，濾液蒸乾，殘渣用甲醇lmL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素對照品適量，用甲醇製成0.lmgml-l的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素對照品溶液各5uL，分別點於同一矽膠G254薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=8:2:l:0.5為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素對照品色譜相應的位置上顯相同顏色斑點；(4)取槓板歸藥材2g，用90。/。乙醇回流提取2h，濾過，濾液蒸乾，殘渣用甲醇lmL溶解，作為供試品溶液；精密稱取槲皮素-3-0-e-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品適量，用甲醇製成0.lmgml-l的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和槲皮素-3-O-6-0-葡萄糖醛酸正丁酯對照品溶液各5yL，分別點於同一聚醯胺薄層板上，以甲醇甲酸水=9:0.5:0.4為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與槲皮素-3-O-P-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品色譜相應的位置上顯相同顏色斑點；檢査(1)水分照《中國藥典》一部附錄IXH第一法水分測定法測定，不得超過14.0%;(2)總灰分照《中國藥典》一部附錄IXK測定，不得超過10.0%;(3)浸出物水溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA水溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，不得少於13.0%;醇溶性浸出物照《中國藥典》一部附錄XA醇溶性浸出物測定法項下的冷浸法測定，乙醇作為溶劑，不得少於11.0%;含量測定照《中國藥典》一部附錄VID高效液相色譜法測定色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基鍵合矽膠為填充劑；以乙腈0.02%磷酸溶液=30:70為流動相；柱溫為25'C;檢測波長為370nm;理論板數按槲皮素峰計算應不低於3000;對照品溶液的製備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇製成每lmL含O.02mg的溶液，即得；供試品溶液的製備取槓板歸藥材中粉lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入5%鹽酸無水乙醇溶液25mL，稱定重量，加熱回流提取4小時，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液2mL，水浴揮幹，殘渣加甲醇溶解，定容至10mL，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20uL，注入液相色譜儀，測定，即得；槓板歸按乾燥品計算，含槲皮素C15H1907重量不得少於0.20%。全文摘要本發明公開了一種槓板歸藥材的質量檢測方法，所述質量檢測方法包括性狀、鑑別、檢查、含量測定項目中的部分或全部，所述鑑別包括以槲皮素對照品和/或以槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸正丁酯對照品為對照的薄層色譜法；含量測定是對藥材中所含槲皮素的含量測定，槲皮素的含量測定方法是以槲皮素對照品為對照、以有機相∶水相＝10～40∶90～60的高效液相色譜法。與現有技術相比，本發明通過建立槓板歸中槲皮素的含量測定方法和以槲皮素及槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸正丁酯為對照的薄層色譜鑑別方法，完善了槓板歸藥材的質量檢測標準，彌補了現有質量檢測技術的不足，使槓板歸藥材的質量檢測技術更為科學、合理，可有效確保其臨床應用的安全性和有效性。文檔編號A61P7/10GK101549021SQ20091030286公開日2009年10月7日申請日期2009年6月3日優先權日2009年6月3日發明者欣周,超趙,趙鴻賓,陳華國申請人:貴州師範大學