人胰島素轉基因家蠅幼蟲生產口服降糖蛋白的方法
2023-10-23 03:00:12
專利名稱:人胰島素轉基因家蠅幼蟲生產口服降糖蛋白的方法
技術領域:
本發明涉及到一種人胰島素轉基因家蠅幼蟲生產口服降糖蛋白的方法。
背景技術:
由於胰島素在臨床上的重要性和巨大的市場需求,極大地吸引著人們通過DNA 重組技術生產胰島素。因此,有關基因工程中胰島素的報導很多,而生物反應器也成為近 年來許多生物技術研究部門十分關注的領域,諸如奶牛、奶山羊乳腺生產反應器生產人的 生長因子,在植物反應器中利用馬鈴薯生產B肝疫苗等。在人胰島素降糖方面,也有報 道,如中國專利資料庫公開號為CN1376778利用轉基因真菌生產胰島素的方法、公開號為 CN1295129利用轉基因番茄生產人胰島素的方法,公開號為CN1382734利用轉基因生菜生 產人胰島素的方法等,但尚未見到利用家蠅作為生物反應器表達人胰島素的報導。
發明內容
本發明旨在於克服現有技術的不足,在現有技術的基礎上,利用家蠅作為生物反
應器,研製出了一種人胰島素轉基因家蠅幼蟲生產口服降糖蛋白的方法。
本發明的人胰島素轉基因家蠅幼蟲生產口服降糖蛋白的方法,其製備方法如下
a、利用家蠅基因文庫構建人胰島素轉基因質粒,採用點轉移技術對家蠅的受精卵
進行轉基因操作,對子一代受精卵、子二代受精卵反覆轉基因操作,達到最大表達量後孵化
成成蛹;
b、選籽粒飽滿的蛹置於零上1 5°C的條件下儲藏備用;
c、取b步驟中的轉基因蛹置於28t:、相對溼度為60X環境下孵化成成蟲、產卵並 孵化幼蟲,培養4日齡幼蟲後從培養基取出,靜置12小時後依次進行清水漂洗、雙氧水浸 泡、含氯溶液浸泡、無菌水漂洗;
d、將經上述處理的幼蟲進行粉碎、乾燥、凍幹20小時,在10萬級淨化環境下粉碎 即製成成品。
通過本發明的方法製得的口服降糖蛋白,其降血糖效果顯著,對人體無副作用。
具體實施方式
本發明的人胰島素轉基因家蠅幼蟲生產口服降糖蛋白的方法,其製備方法如下 a、利用家蠅基因文庫構建人胰島素轉基因質粒,採用點轉移技術對家蠅的受精卵 進行轉基因操作,對子一代受精卵、子二代受精卵反覆轉基因操作,達到最大表達量後孵化 成成蛹;
b、選籽粒飽滿的蛹置於零上1 5°C的條件下儲藏備用;
c、取b步驟中的轉基因蛹置於28°C 、相對溼度為60 %環境下孵化成成蟲、產卵並 孵化幼蟲,培養成4日齡幼蟲後從培養基取出,靜置12小時後依次進行清水漂洗、雙氧水浸 泡、含氯溶液浸泡、無菌水漂洗;[0014] d、將經上述處理的幼蟲進入膠體磨粉碎後上真空冷凍乾燥機凍幹20小時取出, 在10萬級淨化環境下粉碎灌裝腸溶膠囊即製成成品。
權利要求
人胰島素轉基因家蠅幼蟲生產口服降糖蛋白的方法,其製備方法如下a、利用家蠅基因文庫構建人胰島素轉基因質粒,採用點轉移技術對家蠅的受精卵進行轉基因操作,對子一代受精卵、子二代受精卵反覆轉基因操作,達到最大表達量後孵化成成蛹;b、選籽粒飽滿的蛹置於零上1~5℃的條件下儲藏備用;c、取b步驟中的轉基因蛹置於28℃、相對溼度為60%環境下孵化成成蟲、產卵並孵化幼蟲,培養成4日齡幼蟲後從培養基取出,靜置12小時後依次進行清水漂洗、雙氧水浸泡、含氯溶液浸泡、無菌水漂洗;d、將經上述處理的幼蟲進行粉碎、乾燥、凍幹20小時,在10萬級淨化環境下粉碎即製成成品。
專利摘要
本發明的一種人胰島素轉基因家蠅幼蟲生產口服降糖蛋白的方法,是利用家蠅基因文庫構建人胰島素轉基因質粒,採用點轉移技術對家蠅的受精卵進行轉基因操作,對子一代受精卵、子二代受精卵反覆轉基因操作,達到最大表達量後孵化成成蛹;選籽粒飽滿的蛹置於零上1~5℃的條件下儲藏備用,再置於28℃、相對溼度為60%環境下孵化成成蟲,培養4日齡幼蟲後從培養基取出,靜置12小時後依次進行清水漂洗、雙氧水浸泡、含氯溶液浸泡、無菌水漂洗後進入膠體磨粉碎後上真空冷凍乾燥機凍幹20小時後取出,在10萬級淨化環境下粉碎即製成成品。通過本發明的方法製得的口服降糖蛋白,其降血糖效果顯著,對人體無副作用。
文檔編號C12N15/85GKCN101698679SQ200910308757
公開日2010年4月28日 申請日期2009年10月24日
發明者孟慶煜 申請人:孟慶煜導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan