以纖維蛋白原和硫酸化多糖為基礎的製劑的製作方法

2023-10-05 21:05:14

專利名稱：以纖維蛋白原和硫酸化多糖為基礎的製劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及包含纖維蛋白原和硫酸化多糖的製劑、由其獲得的纖維蛋白凝塊樣構造物、止血敷片和使用它們的方法。
背景技術：
基於纖維蛋白原的組織粘合劑可用於無縫和/或有縫支撐性結合人或動物的組織或器官部分，用以封閉傷口、止血及促進傷口癒合。它們作用的模式是基於以下事實即用型液體組織粘合劑中所含有的(可溶性)纖維蛋白原，可被凝血酶轉化為(不溶性)纖維蛋白。在液體組織粘合劑中也包括因子XIII，在其內通過凝血酶的作用，因子XIII被活化為因子Xllla。這使得所形成的纖維蛋白發生交聯以便形成可提高組織粘合劑有效性的高分子量聚合物。所需要的凝血酶活性可以或者來源於待被粘附的組織(傷口表面)、或者可以在封閉過程中以凝血酶和包含Ca2+離子溶液的形式被添加至組織粘合劑中。可以從 AT-B-359 653、AT-B-359 652和AT-B-369 990知道基於纖維蛋白原的組織粘合劑。除了纖維蛋白原和因子XIII以外，組織粘合劑還可以進一步含有其他蛋白質，如纖連蛋白和白蛋白和任選的抗生素試劑。美國專利5，962，405(^^1化11;111111111110 AG公司)公開了呈凍幹形式或由超低溫冷凍液體製劑所產生的形式(超低溫冷凍型)的儲存穩定性纖維蛋白原製劑，上述形式可快速且以簡單方式復原並液化，以便形成即用型纖維蛋白原和/或組織粘合劑溶液。這種製劑由巴克斯特保健公司(加州，美國)作為Tisseel 纖維蛋白封閉劑銷
佳口。止血敷片，例如由膠原蛋白製成的止血敷片，可在各種外科程序中用於封閉組織和控制出血。它們可以和組織粘合劑如纖維蛋白膠的塗層一起使用。可供選擇地，可以得到由塗有凝血酶和纖維蛋白原的膠原蛋白海綿製成的止血敷片，比如TachoComb 或者 TachoSil (奈科明公司)。纖維蛋白封閉劑和止血敷片可以允許安全止血、封閉物良好地粘附於傷口和/或組織區域、高強度粘附和/或傷口封閉、粘合劑可以在傷口癒合過程中被完全再吸收，並且可具有促進傷口癒合的性質。儘管如此，通常有必要使得所封閉的組織部分固定在所期望的位置數分鐘，以便確保凝固的纖維蛋白封閉劑穩固地粘附於周圍組織。提高纖維蛋白凝塊形成和/或強化纖維蛋白凝塊結構的化合物可以改進纖維蛋白封閉劑和止血敷片。比如，強化的凝塊將不易發生纖維蛋白溶解，並且更加穩定和持續更長時間。本說明書中對先前公開的文獻的列舉和論述不應視為承認該文獻是現有技術或者是公知常識。

發明內容
在第一方面，本發明提供一種包含纖維蛋白原和硫酸化多糖的製劑，作為一種單組分組合物，或者作為包含纖維蛋白原和硫酸化多糖作為獨立組分的組件試劑盒(kit of parts) ο
在第二方面，本發明提供一種纖維蛋白凝塊樣構造物，其可以通過包括下述步驟的方法獲得(a)提供本發明的製劑作為溶液，(b)提供含陽離子的溶液作為獨立組分，任選地含有凝血酶；或者連同本發明的硫酸化多糖組分一起作為溶液，任選地含有凝血酶，(C)任選地提供凝血酶溶液，以及(d)將(a)和(b)以及任選的(C)同時混合、或者以任何順序相繼混合，以便得到纖維蛋白凝塊樣構造物。在第三方面，本發明提供一種止血敷片，該止血敷片包含(1)載體，和(2)至少一種其為硫酸化多糖的止血劑，其中，如果載體是一種硫酸化多糖，則該載體就不是與所述止血劑相同的另一種硫酸化多糖。在第四方面，本發明提供一種雙組分注射器系統，該雙組分注射器系統包含(a)在第一筒中的如權利要求1所述的單組分組合物，和(b)在第二筒中的含陽離子的製劑，任選地連同凝血酶一起；或者(a')在第一筒中的如權利要求1所述的獨立的硫酸化多糖和含陽離子的製劑， 任選地連同凝血酶一起，和(b')在第二筒中的纖維蛋白原製劑。在第五方面，本發明提供本發明的製劑、本發明的纖維蛋白凝塊樣構造物或者本發明的敷片用於增強止血的用途。在第六方面，本發明提供本發明的製劑、本發明的纖維蛋白凝塊樣構造物或者本發明的敷片用於傷口癒合的用途。在第七方面，本發明提供本發明的製劑、本發明的纖維蛋白凝塊樣構造物或者本發明的敷片用作釋藥系統的用途。在第八方面，本發明提供一種組織封閉或者組織粘合的方法，包括將本發明的製劑、本發明的纖維蛋白凝塊樣構造物或者本發明的的敷片施用在傷口表面上。


圖1.在恆定纖維蛋白原濃度(50mg/ml)和各種濃度的巖藻依聚糖及Ca2+離子下所獲得的凝塊樣聚集體的濁度及外觀。圖2.由纖維蛋白原、巖藻依聚糖/戊聚糖多硫酸酯和Ca2+離子的混合物獲得的凝膠樣物質的超微結構。濃度纖維蛋白原，50mg/ml ；Ca2+，20mM ；戊聚糖多硫酸酯(A)， 200μΜ;泡葉藻低分子量巖藻依聚糖(Β)，200μΜ;墨角藻巖藻依聚糖，20μΜ。橫線代表 5 μ m0圖3.和純膠原蛋白襯墊(Matristypt (A)相比，含泡葉藻巖藻依聚糖/CaCl2的膠原蛋白襯墊(B)在肝表面磨損模型中對肝素化兔子的止血效應。在將襯墊施用於出血傷口後15分鐘，拍取照片。圖4.在纖維蛋白凝塊形成期間巖藻依聚糖對濁度的影響。在凝塊形成期間的濃
4度纖維蛋白原(稀釋的Tisseel VH S/D) :2. 5mg/ml ；凝血酶0. 125IU/ml。PPS-戊聚糖多硫酸酯，10 PM5FAN-泡葉藻巖藻依聚糖，低分子量10 μ M，高分子量0. 1 μ M ;FLJ-海帶巖藻依聚糖，0. 1 μ M ；FFV-墨角藻巖藻依聚糖，1 μ Μ。—Tisseel VHS/D ^m- PPS 一》—泡葉藻巖藻依聚糖/低分子量——泡葉藻巖藻依聚糖/高分子量一:海帶巖藻依聚糖—墨角藻巖藻依聚糖圖5.由未添加巖藻依聚糖㈧和添加ΙμΜ墨角藻巖藻依聚糖⑶的稀釋的 Tisseel VH S/D纖維蛋白封閉劑獲得的纖維蛋白凝塊的掃描電子顯微分析。濃度纖維蛋白原2. 5mg/m ；凝血酶0. 125IU/ml。
具體實施例方式在第一方面，本發明提供一種包含纖維蛋白原和硫酸化多糖的製劑，作為一種單組分組合物，或者作為包含纖維蛋白原和硫酸化多糖作為獨立組分的組件試劑盒。在現有技術中纖蛋白原製劑是已知的。典型地，所述纖蛋白原製劑是一種凍幹製劑或者一種冷凍溶液。可以按照在美國專利5，962，405中所描述的方法製備合適的製劑，該專利公開的物質用以提高纖維蛋白原溶解性、降低超低溫冷凍的濃縮纖維蛋白原和 /或組織粘合劑溶液的液化溫度以及室溫下它們的粘度。這些物質包括苯、吡啶、哌啶、嘧啶、嗎啉、吡咯、咪唑、吡唑、呋喃、噻唑、嘌呤化合物或者維生素、核酸鹼基、核苷或者核苷酸，該物質的含量優選是每克纖維蛋白原0. 03mmOl-3mmOl，最優選的含量是每克纖維蛋白原0.07mmOl-1.4mmOl。這些物質中例如是苯甲酸、對氨基苯甲酸(維生素H')、對氨基水楊酸.、羥基苯甲酸、羥基水楊酸苯基丙氨酸、普魯卡因、煙酸、煙醯胺、吡啶甲酸、維生素 B6(吡哆醇)、羥基吡啶、吡啶二羧酸、吡啶磺酸、哌啶羧酸酯、嘧啶、巴比妥酸、尿嘧啶、尿苷、 尿苷磷酸、胸腺嘧啶、胞嘧碇、胞苷、羥基嘧啶、硫胺素(維生素B》、嗎啉、吡咯烷酮、咪唑、 組氨酸、乙內醯脲、吡唑二羧酸、非那宗、腺苷、腺苷磷酸、肌苷、鳥苷磷酸、α-呋喃甲酸(呋喃-2-羧酸)、抗壞血酸(維生素C)和黃苷(xantosine)。尤其優選的物質是組氨酸和煙醯胺。在組織粘合劑溶液中具有效用的其他組分，比如關於本發明的第一方面所論述的那些組分可以包括在纖維蛋白原製劑中。如果纖維蛋白原製劑是凍幹的，則它必須被復原。典型地是通過添加水，典型地是添加注射用水，或者添加溶液來完成。該溶液可以提供有用的溶質，如抑酶肽，其為一種纖維蛋白酶溶解抑制劑。可進行加熱和/或攪動或攪拌以便促進組織粘合劑溶液的復原。當纖維蛋白原製劑是冷凍型時，典型地是通過加熱製劑來使其解凍，於是它變成組織粘合劑溶液。但是，在解凍期間或解凍後，可向纖維蛋白原製劑中添加其他物質。在美國專利5，962，405中描述過合適的纖維蛋白原溶液及其製造方法。即用型纖維蛋白原溶液一般每毫升含有60-120mg纖維蛋白原。纖維蛋白原組分可以任選地進一步含有因子XIII，以及可以任選地含有纖連蛋白或少量在傷口癒合過程中有利的血纖維蛋白溶酶原。可任選地包括血纖維蛋白溶酶原活化抑制劑和血纖維蛋白溶酶抑制劑，比如抑酶肽、Ci2-血纖維蛋白溶酶抑制劑、Ci2-巨球蛋白及其類似物。通常，這些組分可選地被包含在纖維蛋白原溶液中。纖維蛋白原溶液一般不含有游離的鈣離子，因為這些離子可能會引起殘餘的微量凝血酶原活化，並且因此引起過早的不希望有的凝塊現象。典型的是，在組織粘合劑溶液中包括鈣螯合劑以便絡合殘餘的鈣離子。合適地，包括呈生理學上可接受的鹽形式的檸檬酸鹽作為此類試劑，比如檸檬酸三鈉。因此，即用型纖維蛋白原溶液一般每毫升含有70-120mg的纖維蛋白原、任選地0. 5-50U因子XIII、任選地0. 5_15mg纖連蛋白、 0-150μ g纖維蛋白溶酶原和0-20000KIU抑酶肽，優選地是1000-15000KIU抑酶肽。示例性的組織粘合劑溶液是Tisseel 纖維蛋白封閉劑(巴克斯特保健公司，加州)的封閉劑蛋白質溶液，該組織粘合劑溶液包含67-106mg/ml人纖維蛋白原、2250_3750KIU/ml抑酶肽纖維蛋白溶液抑制劑、人白蛋白、25mmol/l檸檬酸三鈉、組氨酸、煙醯胺和聚山梨醇80以及注射用水。如本文所使用的術語「多糖」，是指包含多個(即兩個或兩個以上)共價連接的糖殘基的聚合物。連接鍵可以是天然的或非天然的。天然連接鍵包括比如糖苷鍵，而非天然連接鍵可以包括比如酯、醯胺或肟連接部分。多糖可以具有寬泛的平均分子量(MW)數值範圍內的任何分子量，但一般是至少約300道爾頓。舉例而言，多糖分子量可以是至少約500、 1000、2000、4000、6000、8000、10000、20000、30000、50000、100000、500000 道爾頓或甚至更高。多糖分子量可以利用高效大小排阻層析法測定。多糖可以具有直鏈或支鏈結構。多糖可以包括由較大多糖降解(比如水解)所產生的多糖片段。降解可由本領域的技術人員已知的各種方法中的任一種來完成，該方法包括用酸、鹼、熱或酶處理多糖來得到降解的多糖。多糖可以被化學改性並且可以具有修飾，包括但不限於硫酸化、多硫酸化、酯化和甲基化。原則上，多糖的單糖組分上的任何自由羥基均可以經硫酸化修飾，以便產生潛在的適用於本發明實踐的硫酸化多糖。舉例而言，這些硫酸化多糖可以包括但不限於硫酸化粘多糖(D-葡萄胺糖及D-葡糖醛酸殘基)、熱凝膠多糖(Curdlan，又名可德蘭)(羧甲基醚、硫酸氫酯、羧甲基化熱凝膠多糖)(西格瑪奧德裡奇公司)、硫酸裂褶多糖(Itoh 等人(1990) Int. J. Immunopharmaco 1. 12 :225-223 ；Hirata 等人(1994)Pharm. Bull. 17 739-741)、硫酸化粘多糖、硫酸化多糖-肽聚糖複合物、硫酸化烷基麥芽寡糖(Katsuraya等人(1994) Carbohydr Res. 260 :51-61)、硫酸支鏈澱粉、N-乙醯基-肝素(NAH)(西格瑪奧德裡奇公司)、N-乙醯基-脫氧-硫酸化肝素(NA-de-o-SH)(西格瑪奧德裡奇公司)、脫氮-硫酸化肝素(De-NSH)(西格瑪奧德裡奇公司)以及脫氮-硫酸化乙醯基化肝素(De-NSAH)(西格瑪奧德裡奇公司)。硫酸化多糖作為一類，其特徵是在動物和人體內的生物活性過多並且具有通常有利的耐受性分布。這些多陰離子分子通常來源於植物和動物組織，並且涵蓋較寬範圍的亞類，包括肝素、粘多糖、巖藻依聚糖、角叉菜膠、戊聚糖多硫酸酯以及硫酸皮膚素或硫酸葡聚糖(Toida等人糖科學和糖鏈工程的趨勢15 :29-46)。已經報導了分子量較低、異質程度較小並且化學合成的硫酸化多糖，並且這些硫酸化多糖已經達到藥物開發的不同階段(Sinay (1999)Nature 398 :377-378 ；Orgueira 等人(2003)化學 9 :140-169 ；Williams 等人(1998)Gen. Pharmacol. 30 :337-341)合適地，對於每毫克纖維蛋白原，製劑包含0. Olyg-SOOOyg硫酸化多糖。典型地，對於每毫克纖維蛋白原，製劑包含0. 01,0. 02,0. 05,0. 10,0. 15,0. 25,0. 5、1、2、5、10、 20、50、100、200 或 300 μ g 硫酸化多糖。在第二方面，本發明提供一種纖維蛋白凝塊樣構造物，其可以通過包括下述步驟的方法獲得
(a)提供本發明的製劑作為溶液，(b)提供含陽離子的溶液作為獨立組分，任選地含有凝血酶；或者連同本發明的硫酸化多糖組分一起作為溶液，任選地含有凝血酶，(c)任選地提供凝血酶溶液，以及(d)將(a)和(b)以及任選的(C)同時混合或者以任何順序相繼混合，以便得到纖維蛋白凝塊樣構造物。陽離子為至少二價，優選選自由鈣、鎂、鋇和鍶構成的組，最優選鈣，比如CaCl2。通過將纖維蛋白原溶液、硫酸化多糖溶液、含陽離子如鈣離子的溶液和任選地連同凝血酶溶液一起混合(同時或按任何順序相繼混合)，以便形成纖維蛋白凝塊樣構造物， 從而獲得纖維蛋白凝塊樣構造物。也可通過將含纖維蛋白原和硫酸化多糖的溶液、含陽離子如鈣離子的溶液和任選地連同凝血酶溶液一起混合(同時或按任何順序相繼混合)，以便形成纖維蛋白凝塊樣構造物，從而獲得纖維蛋白凝塊樣構造物。也可通過將纖維蛋白原溶液、含硫酸化多糖和陽離子如鈣離子的溶液和任選地連同凝血酶溶液一起混合(同時或按任何順序相繼混合)，以便形成纖維蛋白凝塊樣構造物， 從而獲得纖維蛋白凝塊樣構造物。也可通過將纖維蛋白原溶液、硫酸化多糖溶液(該兩種溶液作為獨立的溶液或者一種溶液)、和含凝血酶和陽離子如鈣離子溶液混合(同時或按任何順序相繼混合)，以便形成纖維蛋白凝塊樣構造物，從而獲得纖維蛋白凝塊樣構造物。凝血酶可以作為凍幹製劑或者冷凍溶液而被提供。凍幹製劑可以在進行或不進行加熱和/或攪動/攪拌的情況下通過添加水或溶液來復原。典型地，呈生理學上可以接受的鹽形式的鈣離子被包含在凍乾物中、或在用於復原凝血酶製劑的溶液中。典型地是解凍冷凍溶液以便提供凝血酶溶液，雖然其他添加性物質如CaCl2可以在解凍期間或解凍後添加。凝血酶溶液典型地可包含鈣離子，適合的是CaCl2,優選其濃度是36-44 μ mol/mL。含有所需凝血酶活性的凝血酶溶液可以來源於待被封閉的組織(傷口表面)， 或者其可以以外源性方式添加。適合的外源性凝血酶溶液在本領域是已知的。雖然用於形成纖維蛋白封閉劑的凝血酶溶液的最佳凝血酶濃度取決於臨床適應症，但是典型地在 l-1000IU/ml範圍內。現在，將含凝血酶溶液的凝血酶活性與根據定義每安瓿具有110IU的第二國際標準相比較(Whitton等人，Thromb Haemost 2005;93:261-6)。可利用數種用於分析凝血酶活性的試驗，包括以凝塊為基礎的試驗和顯色試驗(Gaffney和Edgell，Thromb Haemost 1995;74:900-3)。為了實現快速止血，使用可引起幾乎瞬時凝結的高凝血酶濃度。實例為Tisseel 纖維蛋白原封閉劑(巴克斯特保健公司，加州)的凝血酶溶液，它包括400-625IU/ml的人凝血酶；和Quixil 和Evicel 纖維蛋白封閉劑(Omrix)的凝血酶溶液，該溶液的人凝血酶活性是1000IU/ml。如果想使用纖維蛋白封閉劑作為膠粘物(比如在整容或重建外科手術中)，則使用較低凝血酶濃度以便在凝塊出現之前留出更多時間給外科醫生來操作。對於這些適應症，在許多國家的市場上銷售含有4IU/ml凝血酶的纖維蛋白封閉劑變體。在過去，凝血酶濃度低得多(低於lIU/ml)的纖維蛋白封閉劑並不實用，因為凝血時間將會太長。然而，當根據本發明的第一方面包括硫酸化多糖時，使用具有比如IIU/
7ml的低凝血酶濃度的凝血酶溶液可能切實可行。在美國專利5，714，370 (Eibl和Lirmau ； Immuno AG)中公開了凝血酶溶液及其製造方法。在本發明的第一方面的方法中，典型地在凝血酶溶液中提供鈣離子。雖然典型地以CaCl2提供鈣離子，但是除了 CaCl2以外或作為 CaCl2的另一選擇，可以使用其他可溶性並且生理學上相容的鈣鹽(比如乳酸鈣和/或葡萄糖酸鈣)。凝血酶溶液中的鈣濃度典型地是約40mM。舉例而言，Tisseel 纖維蛋白封閉劑 (巴克斯特保健公司，加州)含有36-44mM CaCl20典型地是在混合之前加熱凝血酶溶液和組織粘合劑溶液，典型地加熱至37°C。本發明的製劑可以作為局部製劑形式使用。「局部製劑」是指在個體的特定部位 (典型地是組織或傷口表面)形成纖維蛋白凝塊樣構造。為達到此效果，在局部部位混合在陽離子(比如鈣)存在下包含纖維蛋白原、硫酸化多糖的溶液和任選地凝血酶溶液， 或者在外部將其混合，隨後在凝塊形成完成之前引入局部部位。後者的一個實例是如WO 96/22115(巴克斯特國際保健公司，伊利諾斯州)中所示，當使用纖維蛋白凝塊作為膠粘物將交聯的纖維蛋白的自撐式薄片樣物質粘附於某一部位以便阻止或減少術後粘附的形成時。在將薄片樣物質引入局部部位之前一定不能完全形成凝塊，或該物質不會粘附於該部位。通過本發明的第一方面的方法在原位形成的凝塊可能用作外科手術中的止血佐劑，該外科手術包括心肺分流術和由腹部鈍傷或穿透傷所造成的脾損傷的治療；或者用作結腸造口閉合術的佐劑。纖維蛋白凝塊樣構造物比如可以用作貼壁細胞(尤其是哺乳動物細胞)培養的培養基，用於增強止血或用於粘合或封閉組織。在第三方面，本發明提供一種止血敷片，該止血敷片包含(1)載體，和(2)至少一種其為硫酸化多糖的止血劑，其中，如果該載體是一種硫酸化多糖，則載體就不是與所述止血劑相同的另一種硫酸化多糖。載體是生物相容性物質，比如選自由膠原蛋白、明膠、纖維蛋白原、纖維蛋白及多糖、或它們的衍生物或混合物所構成的組。優選使用膠原蛋白或其衍生物。多糖包括例如纖維素及其衍生物，諸如甲基纖維素、羧甲基纖維素、氧化纖維素、 幾丁質、殼聚糖、軟骨素、透明質酸和澱粉等。術語「衍生物」包括以化學或物理方式如通過熱處理改性的物質。優選地，硫酸化多糖以每平方釐米止血敷片活性表面20ng-3mg的量存在。硫酸化多糖可以存在於止血敷片的活性表面，或者分布在止血敷片的基質內部。敷片可以在止血敷片的活性表面上進一步包含凝血酶和纖維蛋白原。術語「止血敷片」指的是可選地包含一種或多種在當施用於傷口表面時可促進止血的止血劑的載體。根據本發明，止血敷片包含其為硫酸化多糖的止血劑。術語「止血劑」 指的是可促進止血的試劑，例如抗纖維蛋白溶解劑或凝塊促進劑。雖然載體典型地是固體， 但可供選擇地是凝膠。在美國專利6，733，774B2 (Stimmeder ;Nycomed Pharma AS)和美國專利7，399，483B2 Gtimmeder ；Nycomed Pharma AS)中描述了合適的載體，並且包括膠原蛋白海綿和由可生物降解的聚合物製得的載體，該可生物降解的聚合物比如是聚透明質酸、 聚羥基酸(例如聚乳酸、聚乙醇酸、聚羥基丁酸)、纖維素或明膠。該載體典型地具有柔韌性，密度是1-lOmg/cm3，並且彈性模數是5-lOON/cm2。尤其優選的載體在施用後約4_6個月內酶促降解，從而免除用外科手術來移除的需要。載體典型地呈纖維(包括微纖維)、織物、 泡沫或凝膠形式。載體可以是硫酸化多糖，諸如硫酸化纖維素。然而，它可能和其為硫酸化多糖的止血劑相同的硫酸化多糖。合適地，根據本發明的第三方面，如果載體包含一種硫酸化多糖，則該載體不是與止血劑相同的另一種硫酸化多糖。經塗布的載體的製備可以基本上由以下步驟組成製備活性成分的懸浮液、均勻分布該懸浮液於載體上、乾燥經塗布的載體直至形成固體組成物或凝膠/使活性成分固定在載體上。該懸浮液典型地包含平均直徑是25-100 μ m的粒子。硫酸化多糖的懸浮液典型地是在有機溶劑中製備。在美國專利5，942，278 (Hagedom等人，Nycomed Arzneimittel GmbH, DE)中公開了在載體上均勻分布懸浮液的方法。美國專利6，733，774B2公開了一種用纖維蛋白原和凝血酶塗布載體的方法。本領域的技術人員可以容易地調整該方法以便獲得含有硫酸化多糖的止血敷片。可供選擇地，可以進行硫酸化多糖與止血敷片的纖維諸如氧化的纖維素薄片之間的共價連接。進行該共價連接的方法在本領域中是已知的。比如美國專利 2004/0101546 (Gorman和Pendharkar)描述了止血劑與氧化的用醛改性的纖維素薄片之間的共價連接。可供選擇地，除了塗布在止血敷片表面以外，硫酸化多糖也可以分布在整個止血敷片中。比如，可將固體載體浸泡在硫酸化多糖的溶液中，接著乾燥。或者，可將硫酸化多糖的溶液或懸浮液和單體溶液合併，隨後發生聚合，以便形成整個內部均勻地分布有硫酸化多糖的固體載體。舉例而言，可以在PH 2-3下使硫酸化多糖與酸溶性膠原蛋白一起溶解。在中和後，形成由膠原蛋白纖維網狀結構組成的膠原蛋白凝膠，在該凝膠的液相中含有硫酸化多糖。在冷凍乾燥膠原蛋白凝膠後，獲得一種包含海綿狀膠原蛋白襯墊的止血敷片， 該襯墊內含有均勻分布的硫酸化多糖。在美國專利6，773，699(組織粘合劑技術公司)中描述了酸溶性膠原蛋白單體的製備及其在中性PH值下的沉澱和凍幹。膠原蛋白膜綜述在 Bunyaratavej P 禾口 Wang HL (2001) J. Periodontol. 72 :215-29 中。一種可供選擇的載體是W096/22115 (Delmotte和rack ；巴克斯特國際保健公司， 伊利諾州)中公開的交聯纖維蛋白的自撐式薄片的材料。該類載體典型地是用作內部創傷性病變治療中的生物-機械屏障，尤其用於預防作為術後併發症的粘連形成。當載體根據本發明的第九方面含有硫酸化多糖時，其可具有止血特性。硫酸化多糖的存在可以提高止血敷片的止血效能。如本文所述，硫酸化多糖可以促進纖維蛋白產生，並且因而可以促進傷口表面處的凝塊形成。纖維蛋白原以及凝血酶可以在傷口表面處獲得，或者可以以外源性方式添加。合適地，硫酸化多糖以如下的量存在 可通過促進凝血酶調節的纖維蛋白產生而影響纖維蛋白凝塊的形成。該止血敷片相比無硫酸化多糖但具有其他類似成分的止血敷片在促進止血上更加有效。該止血敷片的止血效能可以相對於動物身上試驗性傷口來測試，諸如根據美國專利6，733，774B2中描述的測試。 舉例而言，可在對狗進行脾切開及刺穿或前肝頁尖端切除後48小時進行屍體檢驗，並且通過大體觀察及組織學檢查來尋找繼發性出血的跡象。止血敷片可施用於豬的實驗性脾病變處，並且測定出血停止的時間。典型地，硫酸化多糖存在於止血敷片的活性表面上，其量典型地是20ng-3mg/Cm2， 典型地是0. 2-300 μ g/cm2,例如3-300 μ g/cm2。舉例而言，可用硫酸化多糖塗布載體。典型地，硫酸化多糖呈固體形式並被均勻地分布且固定在載體上。可供選擇地，硫酸化多糖可分布在止血敷片的基質內，其量典型地是每平方釐米止血敷片的活性表面20ng-;3mg，典型地是0. 2-300 μ g/cm2，例如3-300 μ g/cm2。止血敷片的「基質」是載體的終止於活性表面部分或數個部分。如果基質的深度是1cm，則硫酸化多糖的存在量典型地是20ng/cm3基質-!Mg/cm3基質。如果基質的深度是1mm，則硫酸化多糖存在的量典型地是200ng/cm3基質-30mg/cm3基質。應理解，硫酸化多糖可以分布在止血敷片的基質中，並且也可存在於活性表面上。 在此情況下，合併在活性表面上以及合併在基質中的硫酸化多糖典型地是每平方釐米活性表面 20ng-;3mg，並且典型地是 0. 2-300 μ g/cm2，例如 3-300 μ g/cm2。止血敷片可以不含除了硫酸化多糖以外的可促進止血的試劑。可供選擇地，止血敷片可以含有一種或多種其他活性試劑，例如抗纖維蛋白溶解劑或可促進凝塊形成的試劑。在一個優選的實施方式中，止血敷片的活性表面可進一步包含凝血酶及纖維蛋白原。合適地，凝血酶以1. 0-5. 5IU/cm2的量存在，優選約2. 0IU/cm2 ；並且纖維蛋白原以2-lOmg/cm2 的量存在，優選4. 3-6. 7mg/cm2。美國專利6，733，774B2中公開了一種製造包含凝血酶和纖維蛋白原的止血敷片的方法。在進一步的方面，本發明提供一種組織封閉或組織粘合的方法，該方法包括在傷口表面上施用本發明的第三方面的止血敷片。在進一步的方面，本發明提供一種實現止血的方法，該方法包括在漏血區域上施用本發明的第三方面的止血敷片。本發明的止血敷片適用於止血、組織粘合以及組織封閉，尤其適用於胃腸系統 (諸如食道、胃、小腸、大腸、直腸)、實質器官(諸如肝、脾、胰、腎、肺、腎上腺、甲狀腺及淋巴結)的外科手術介入；心血管外科手術；胸外科手術(包括對氣管、支氣管或肺進行的外科手術)；耳鼻喉(ENT)區域的外科手術介入，包括牙科手術；婦科、泌尿科、骨科(例如骨松質切除術)及急診外科手術；神經外科手術；淋巴、膽及腦脊髓(CSF)瘻管；及胸部及肺部外科手術期間的漏氣。因此，本發明也涉及本發明的第九方面的止血敷片用於上述目的的用途。另外，止血敷片可以是基本上不透液體的，從而使得其高度適用於高度出血性器官 (諸如肝以及脾)的手術中，且適用於諸如胃腸道的外科手術。本發明的止血敷片典型地應當在出血不能用常規的方法控制時、或者在這些方法將會產生不利結果時施用。在進一步的方面，本發明提供一種製造本發明的止血敷片的方法，該方法包括用硫酸化多糖塗布載體和/或將硫酸化多糖分布於載體內部。適合的方法如上所述。在第四方面，本發明提供一種雙組分注射器系統，該雙組分注射器系統包含(a)在第一筒中的如權利要求1所述的單組分組合物，和(b)在第二筒中的含陽離子的製劑，任選地連同凝血酶一起；或者(a')在第一筒中的如權利要求1所述的獨立的硫酸化多糖和含陽離子的製劑， 任選地連同凝血酶一起，和(b')在第二筒中的纖維蛋白原製劑。在另一個方面，本發明提供一種注射器，其包含在一個筒中的凝血酶溶液、在第二筒中的含纖維蛋白原的溶液、和在第三筒中的硫酸化多糖溶液、以及在凝血酶溶液中的或硫酸化多糖溶液中的鈣離子。在第五方面，本發明提供本發明的製劑、本發明的纖維蛋白凝塊樣構造物或者本發明的敷片用於提高止血的用途。在第六方面，本發明提供本發明的製劑、本發明的纖維蛋白凝塊樣構造物或者本發明的敷片用於傷口癒合的用途。在第七方面，本發明提供本發明的製劑、本發明的纖維蛋白凝塊樣構造物或者本發明的敷片用作釋藥系統的用途。在第八方面，本發明提供一種組織封閉或者組織粘合的方法，包括將本發明的製劑、本發明的纖維蛋白凝塊樣構造物或者本發明的敷片施用在傷口表面上。在另一個方面，本發明提供一種使用根據本發明方法所體外形成的凝塊塗布的體外表面。該體外表面可用作貼壁細胞尤其是哺乳動物細胞培養的培養基。美國專利2006/134093 (Ronfard ；DFB製藥公司，美國)公開了通過纖維蛋白原與凝血酶的混合而形成的用於細胞培養的纖維蛋白細胞支撐物。纖維蛋白細胞支撐物可用於製備諸如角化細胞的細胞培養基、以再生組織形式回收該培養物、和輸送該培養基。再生組織尤其適合用作皮膚移植物。本發明的第七方面及第八方面的凝塊及體外表面可按照美國專利2006/134093中所公開的那樣來使用。合適的表面可由以下物質組成由一種或多種以下物質(聚酯、PTFE或聚亞胺酯)製成的合成膜；由一種或多種可生物降解的聚合物(例如透明質酸、聚乳酸或膠原蛋白)製成的合成膜；或者矽樹脂或凡士林紗布敷料，或者適用於傷口敷料的任何其他物質。在本發明的任何方面，優選硫酸化多糖是非抗凝血性的硫酸化多糖(NASP)。如本文所使用的術語「NASP」是指在稀釋凝血酶原時間(dPT)或活化部分凝血酶時間(aPTT)凝血試驗中所展現的抗凝血活性不超過未分組肝素(分子量範圍是8000-30000道爾頓；平均是18000道爾頓)的摩爾抗凝血(凝血時間在統計上有顯著增加)活性的三分之一、且優選是小於後者活性十分之一的硫酸化多糖。NASP可從天然來源(例如褐藻、樹皮、動物組織)純化和/或修飾而來、或者可重新合成且分子量可在100道爾頓-1000000道爾頓的範圍內。作為預防措施，希望與不是NASP的硫酸化多糖相比，體內抗凝血效應的傾向減小，這是因為由此可使抗凝血效應對患者的任何風險降至最小。在任何情況下，纖維蛋白封閉劑及止血敷片僅僅意圖用於在局部使用，並且因此硫酸化多糖應是逐步滲入血液系統中，從而使任何不期望的抗凝血效應降至最低。因此，可使用尤其低濃度的具有抗凝血效應的硫酸化多糖。NASP是「非抗凝血劑」，因為它們在所研究的濃度範圍內不會顯著增加凝血時間。 具有潛在NASP活性的硫酸化多糖包括但不限於糖胺聚糖(GAG)、肝素樣分子包括N-乙醯肝素(西格瑪奧德裡奇公司，聖路易斯，密蘇裡州)和N-脫硫酸肝素(西格瑪奧德裡奇公司)、 類硫酸酯(sulfatoid)、多硫酸寡糖(Karst 等人(2003)Curr. Med. Chem. 10 :1993-2031 ； Kuszmann等人Q004) Wiarmazie. 59 :344-348)、硫酸軟骨素(西格瑪奧德裡奇公司)、硫酸皮膚素(Celsus Laboratories Cincinnati，俄亥俄州)、巖藻依聚糖(西格瑪奧德裡奇公司)、戊聚糖多硫酸酯(PPS) (Ortho-McNeil藥物公司，Raritan，N. J.)、巖藻吡喃硫酸酯 (fucopyranon sulfate) (Katzman 等人(1973) J. Biol. Chem. 248 :50-55)、及新穎的類硫酸酯諸如 GM1474 (Williams 等人(1998)普通藥理學 30 :337)和 SR80258A(Burg 等人(1997)實驗室研究76:505)、新穎類肝素及它們的類似物。NASP可從天然來源(例如褐藻、樹皮、 動物組織)純化和/或修飾而來，或者可重新合成，其分子量可在100道爾頓-1000000道爾頓的範圍內。具有潛在NASP活性的其他化合物包括高碘酸氧化肝素(ΡΟΗ(Neoparin公司，聖萊安德羅，加利福尼亞州)、化學硫酸化的海帶多糖(CSL)(西格瑪奧德裡奇公司)、化學硫酸化的褐藻酸(CSAA)(西格瑪奧德裡奇公司)、化學硫酸化的果膠(CSP)(西格瑪奧德裡奇公司)、硫酸葡聚糖(DXQ (西格瑪奧德裡奇公司)和肝素來源的寡糖(HDO) (Neoparin 公司，聖萊安德羅，加利福尼亞州)。優選的NASP是巖藻依聚糖及戊聚糖多硫酸酯。巖藻依聚糖是主要由巖藻糖的硫酸化酯組成、且具有可變的分支度的多糖。連接鍵可以主要是α (1 —幻或α (1 —幻。也可存在α (1 — 4)連接鍵。巖藻糖酯主要在位置4和/或2和/或3處被硫酸化。單硫酸化巖藻糖佔主導，雖然也可存在去硫酸化巖藻糖。除了硫酸化巖藻糖酯之外，巖藻依聚糖也可含有非硫酸化巖藻糖、D-木糖、D-半乳糖、糖醛酸、葡糖醛酸或一種以上這些物質的組合。F-巖藻依聚糖> 95%由巖藻糖的硫酸化酯組成，而U-巖藻依聚糖則約20%是葡糖醛酸。本發明還提供一種製備纖維蛋白凝塊的方法，該方法包含在鈣離子及硫酸化多糖存在下混合包含纖維蛋白原的組織粘合劑溶液和凝血酶溶液。硫酸化多糖的存在尤其可引起纖維蛋白凝塊的凝塊不透明性增加。在一個優選的方面，該方法用於纖維蛋白凝塊的局部製劑。在一個優選的方面，組織粘合劑溶液包含硫酸化多糖，該硫酸化多糖在混合該組織粘合劑溶液和凝血酶溶液後所形成的組合物中的濃度例如在1. 2μ g/ml和20mg/ml之間，比如在0. 6 μ g/ml和10mg/ml之間。在一個優選的方面，組織粘合劑和凝血酶溶液各自在多筒注射器的單獨的注射器筒中提供。本發明還提供一種包含硫酸化多糖的纖維蛋白原製劑。優選地，纖維蛋白原製劑是這樣一種製劑其中包含纖維蛋白原製劑的組織粘合劑溶液能夠在37°c下、在與等體積的每毫升包含4IU凝血酶及40 μ mol CaCl2的溶液混合之後在不超過10分鐘內會形成纖維蛋白凝塊。對於每毫克纖維蛋白，本發明的纖維蛋白原製劑優選包含0. 01 μ g-300 μ g硫酸
化多糖。本發明還提供一種包含硫酸化多糖的凝血酶製劑。凝血酶製劑優選是這樣一種製劑其中包含凝血酶製劑的凝血酶溶液能夠在 37°C下、在與等體積的組織粘合劑溶液混合後在不超過10分鐘內會引起包含50mg/ml纖維蛋白原的組織粘合劑溶液形成纖維蛋白凝塊，其中任一溶液包含鈣離子，優選該凝血酶製劑是每國際單位(IU)凝血酶包含1. 2ng-20mg硫酸化多糖。在另一個方面，本發明的纖維蛋白原製劑或凝血酶製劑是凍幹製劑或冷凍溶液。本發明還提供一種注射器，其在一個筒中包括含有本發明的纖維蛋白原製劑的組織粘合劑溶液。該注射器優選包含另一個筒，該筒包含凝血酶溶液。在另一個方面，本發明提供一種注射器，其包含在一個筒中的凝血酶溶液、在第二
12筒中的組織粘合劑溶液、和在第三筒中的硫酸化多糖溶液。本發明還提供一種凝塊，其是根據上述方法形成。本發明進一步提供使用根據本發明的方法所形成的凝塊塗布的體外表面。本發明還提供-一種組織封閉或組織粘合的方法，該方法包含在傷口表面上施用本發明的止血敷片；-一種實現止血的方法，該方法包含在漏血區域上施用本發明的止血敷片；-一種製造本發明的止血敷片的方法，該方法包含用硫酸化多糖塗布載體和/或將硫酸化多糖分布在載體內部；-硫酸化多糖在止血敷片例如本發明的敷片中提供止血功能的用途，優選地，上述製劑、上述敷片及用於所述方法和用途的硫酸化多糖是非抗凝血性的硫酸化多糖(NASP)。本發明將在以下實施例中做進一步說明，但本發明不受這些實施例的任何限制。實施例1:令人驚訝的是，我們已經觀察到在高纖維蛋白原濃度下，在巖藻依聚糖和Ca2+存在下，可快速形成肉眼可見的凝膠樣聚集體。所有這三種化合物均是對於獲得這些自我組裝的聚集體所必需的。在50mg/ml的纖維蛋白原濃度下所獲得的物質的稠度會隨巖藻依聚糖和Ca2+濃度的增加而從輕微乳白到凝塊樣外觀變化(圖1)。在實驗中，首先將0. 5ml具有指定濃度的巖藻依聚糖的Tisseel VH S/D封閉劑蛋白質溶液放置在M孔細胞培養板的各孔中。添加0. 5ml的CaCl2溶液以便獲得圖1中指示的最終濃度，並且快速與纖維蛋白原溶液混合。評估所獲得的混合物的濁度和稠度。在50mg/ml的恆定纖維蛋白原濃度下， 混合物的濁度隨著巖藻依聚糖或戊聚糖多硫酸酯的濃度增加而增加。然而，該增加具有很強的Ca2+離子依賴性。其在ImM Ca2+濃度下的增幅較低，但在20mM Ca2+濃度下很明顯。在高濃度的巖藻依聚糖/戊聚糖多磷酸酯和Ca2+下所獲得的混合物是凝膠狀，並且粘附在細胞培養板的壁上，而在低濃度下所獲得的那些混合物具有粘性流體的稠度。為獲得凝膠樣物質，巖藻依聚糖/戊聚糖多硫酸酯和Ca2+離子的濃度均必須較高。在較高濃度的巖藻依聚糖/戊聚糖多硫酸酯和Ca2+離子下所獲得的混合物缺乏均一性，這可以解釋為由於因自我組裝而太快地凝固所引起的不良混合及混入空氣氣泡。實施例2:利用掃描電子顯微法(SEM)分析實施例1中在最高濃度的巖藻依聚糖/戊聚糖多硫酸酯和Ca2+離子下所獲得的凝膠樣物質(圖1A、B和C的右上方)的結構。在37°C下1.5 小時的凝塊形成時間後，將凝塊轉移至由2. 5%戊二醛在0. 1 二甲胂酸鹽緩衝液(pH7. 3)中組成的固定溶液中。凝塊和固定溶液的重量比是1 10。在4°C下12小時後，用0. IM 二甲胂酸鹽緩衝液(PH 7. 3)使用和之前相同的重量比洗滌凝塊3次。在含亞鐵氰化鉀的 0.5%四氧化鋨中進行後固定(post-fixation) 2小時。以蒸餾水洗滌凝塊，並且用2，2-二甲氧基丙烷脫水。將樣品轉移至丙酮中，並且在液氮中破碎。用六甲基二矽氮烷以化學方式乾燥樣品，安裝在短柱上並且用鈀金合金塗布。所獲得影像顯示在圖2中。顯然，由纖維蛋白原、巖藻依聚糖/戊聚糖多硫酸酯和 Ca2+離子的組合所獲得新穎凝膠樣物質與圖5A中所示的纖維蛋白凝塊相比具有極其不同的組織構造。在以經三種化合物聚集一起為開始的快速且自發的自我組裝過程中，形成具有粘附性小泡的三維結構。實施例3:由於對巖藻依聚糖和Ca2+離子的組合與纖維蛋白原一起形成凝膠樣物質所觀察到的性質，所以可製備基於膠原蛋白的止血襯墊。其所體現的設計理念是膠原蛋白襯墊中所含的這些添加劑可與血纖維蛋白原相互作用，並且因此增強膠原蛋白襯墊的止血性質。 用含有泡葉藻(A. nodosum)低分子量巖藻依聚糖和CaCl2的溶液浸泡2mm厚的膠原蛋白海綿(Matristypt ，Dr. Suwelack，德國)，並且冷凍乾燥。浸泡溶液含有具有一定濃度的成分，使得在冷凍乾燥後該襯墊中泡葉藻低分子量巖藻依聚濃度為0. 3mg/cm2並且CaCl2濃度為0.9mg/cm2。在兔子止血模型中施用該襯墊來評估其止血性質。以每公斤體重1000IU 使兔子肝素化。通過用研磨旋轉工具磨損肝囊來設置圓形出血區域(直徑1. 8cm)。用上述襯墊處理該傷口。將乾燥的襯墊施用於出血傷口上。通過經生理鹽水浸泡的紗布將襯墊壓敷在傷口上2分鐘。作為對照組，以相同的方式將Matristypt. 施用在同一動物的另一肝葉上。對第二隻動物重複操做此試驗。在兩隻動物中結果相同，並且一隻動物的結果示範性地顯示在圖3中。由圖3可以觀察到，浸入含有巖藻依聚糖和CaCl2的膠原蛋白襯墊中的血液看起來比對照組要暗。這可解釋為由於各成分的作用在襯墊中引起較快的凝血。實施例4:在凝血酶催化的纖維蛋白原凝塊形成期間，巖藻依聚糖對濁度的動力學影響增大，並且另外，使用稀釋的纖維蛋白封閉劑Tisseel VH S/D (巴克斯特)作為纖維蛋白原基質來證實所獲得凝塊的最終濃度。按1/20稀釋Tisseel VH S/D封閉劑蛋白質溶液(對應於5mg/ml的纖維蛋白原濃度)並且調節巖藻依聚糖濃度至20 μ M(戊聚糖多硫酸酯、泡葉藻低分子量)、2 μ Μ(墨角藻)和0. 2 μ M(泡葉藻高分子量、海帶)。在96孔微板的各孔中混合100 μ 1這些稀釋的Tisseel VH S/D溶液(含有纖維蛋白原、纖連蛋白和因子XIII) 和100 μ 1含有40mM CaCl2的0. 25IU/ml凝血酶溶液(巴克斯特)。在630nm下記錄對在混合後1. 5小時的時間內37°C下凝塊形成期間濁度增加的測量結果。結果顯示在圖4中。 觀察到，一些巖藻依聚糖以及戊聚糖多硫酸酯皆可加速凝血酶催化的凝塊形成反應，並且影響纖維蛋白凝塊的形成，同時濁度增加。實施例5:纖維蛋白凝塊的濁度增加與「粗」凝塊，S卩，纖維直徑增加的纖維蛋白凝塊有關聯 (Oenick MD在纖維蛋白聚合和纖維蛋白結構上的研究-回顧，Biophys Chem. 2004 Dec20 ； 112(2-3) :187-92)。按照實施例4中所述的方法製備來自墨角藻的巖藻依聚糖和無巖藻依聚糖的纖維蛋白凝塊。按照實施例2中所述方法進行用於SEM的樣品的製備。實施例6:已開發了一種研究受凝血酶調節的纖維蛋白形成和硫酸化多糖對該過程影響的測試方法。簡而言之，在含有纖維蛋白原的溶液中通過添加凝血酶來啟動凝塊形成，接著進行分光光度測定。405nm下的吸光度可指示凝塊的不透明性，該不透明性取決於纖維蛋白凝塊的數量和/或性質。向 96 孔微孔板(聚苯乙烯，平底(F-bottom) ；Greiner Bio-One GmbH,Kremsmuenster，奧地利)的各孔中添加55 μ 1被稀釋緩衝液05mM Hepes pH 7. 35，175mM NaCl,2. 5mM CaCl2, 5mg/ml HSA)稀釋的人纖維蛋白原(纖維蛋白溶酶原，纖連蛋白，因子 XIII缺乏，American Diagnostica公司，斯坦福，康乃狄克州，美國)。纖維蛋白原在100 μ 1 試驗體積中的最終濃度是2. 5mg/ml。向混合物中添加被稀釋緩衝液稀釋的10 μ 1硫酸化多糖測試樣品(或單獨稀釋緩衝液)，並且在37°C下在微孔板培育箱中培育15分鐘。通過添加35 μ 1被稀釋緩衝液稀釋並且預熱至37°C的預熱人凝血酶(酶研究實驗室，南本德，印第安納州，美國)(或單獨稀釋緩衝液)來啟動纖維蛋白凝塊形成。立即將微孔板轉移至預熱 (370C )的酶標儀ire2 酶標儀；Tecan Trading AG, CH)中，接著在405nm下對凝塊形成讀數，歷時60分鐘，每30秒讀一次。在各時間點，通過減去僅含纖維蛋白原的孔的讀數來校正各樣品孔的吸光度的讀數。在最初試驗中，凝血酶的濃度從0. InM變化至8nM，並且在試驗中不包括硫酸化多糖。405nm下的吸光度最初快速增加，但在約20分鐘和30分鐘之間達到穩定值。記錄各凝血酶濃度的60分鐘時的A4tl5t5結果顯示在下表1中。表權利要求
1.一種包含纖維蛋白原和硫酸化多糖的製劑，其作為單組分組合物，或者作為包含纖維蛋白原和硫酸化多糖作為獨立組分的組件試劑盒。
2.—種纖維蛋白凝塊樣構造物，其通過包括下述步驟的方法獲得(a)提供如權利要求1所述的製劑作為溶液，(b)提供含陽離子溶液作為獨立組分，任選地包含凝血酶；或者提供含陽離子溶液連同如權利要求1所述的硫酸化多糖組分一起作為溶液，任選地包含凝血酶，(c)任選地提供凝血酶溶液，以及(d)將(a)和(b)以及任選的(c)或者同時混合、或者以任何順序相繼混合，以便得到纖維蛋白凝塊樣構造物。
3.—種止血敷片，其包含(1)載體，和(2)至少一種其為硫酸化多糖的止血劑，其中，如果所述載體是一種硫酸化多糖，那它就不是與所述止血劑相同的硫酸化多糖。
4.如權利要求3所述的止血敷片，其特徵在於，所述載體是生物相容性材料，選自於由膠原蛋白、明膠、纖維蛋白原、纖維蛋白及多糖、或它們的衍生物或混合物所構成的組。
5.一種雙組分注射器系統，其包括(a)在第一筒中，如權利要求1所述的單組分組合物，及(b)在第二筒中，含陽離子的製劑，任選地連同凝血酶一起；或者(a')在第一筒中，如權利要求1所述的獨立的硫酸化多糖和含陽離子的製劑，任選地連同凝血酶一起，和(b')在第二筒中，纖維蛋白原製劑。
6.如權利要求1所述的製劑、如權利要求2所述的纖維蛋白凝塊樣構造物或者如權利要求3所述的敷片用於增強止血的用途。
7.如權利要求1所述的製劑、如權利要求2所述的纖維蛋白凝塊樣構造物或者如權利要求3所述的敷片用於傷口癒合的用途。
8.如權利要求1所述的製劑、如權利要求2所述的纖維蛋白凝塊樣構造物或者如權利要求3所述的敷片用作藥物釋放系統的用途。
9.一種組織封閉或者組織粘合的方法，該方法包括將如權利要求1所述的製劑、如權利要求2所述的纖維蛋白凝塊樣構造物或者如權利要求3所述的敷片施用在傷口表面上。
全文摘要
本發明提供一種包含纖維蛋白原和硫酸化多糖的製劑，作為一種單組分組合物或者作為包含纖維蛋白原和硫酸化多糖作為獨立組分的組件試劑盒。本發明進一步提供一種可由所限定的方法獲得的纖維蛋白凝塊樣構造物、止血敷片、雙組分注射器系統，以及提供所述製劑、纖維蛋白凝塊樣構造物和敷片的各種用途。
文檔編號A61L26/00GK102307600SQ200980156826
公開日2012年1月4日 申請日期2009年12月11日 優先權日2008年12月11日
發明者A·戈佩爾特, F·沙伊夫林格爾, H·C·黑德裡希, K·蔡徹蔡科維斯基, M·多奇卡爾 申請人:巴克斯特保健股份有限公司, 巴克斯特國際公司