一種葡萄糖響應性藥物控釋載體的製備方法

2023-10-07 18:33:54 1

專利名稱：一種葡萄糖響應性藥物控釋載體的製備方法
技術領域：
本發明涉及一種具有葡萄糖響應性、能夠根據環境葡萄糖濃度變化調節藥物釋放量的藥物載體的製備方法，尤其是基於伴刀豆球蛋白與糖單元特異性相互作用的葡萄糖響應性藥物控釋載體的製備方法，屬於藥物控釋與生物材料技術領域。
背景技術：
糖尿病是一種嚴重的終身性疾病(分為I型和II型)，患者血糖代謝失衡，通常表現為持續高血糖，主要病因是胰島β細胞受損而引起的胰島素絕對或相對分泌不足。糖尿病(I型以及嚴重的II型患者)最有效的治療方法是每天多次皮下注射胰島素，從而幫助人體血糖維持在正常水平。不幸的是，這種廣泛應用的治療方法常常會引發低血糖這一急性併發症，嚴重時甚至暈厥、休克，並且長期注射還會給病人帶來很大不便，還可能引起過敏、水腫等副作用。因此，為尋求更有效舒適的治療方法，人們致力於開發新的胰島素遞送體系，包括新的遞送路線，新的胰島素劑型等。葡萄糖響應性藥物釋放載體能夠根據環境葡萄糖濃度變化調節藥物釋放量，用它作為胰島素載體能模擬胰島的智能分泌胰島素功能，在降低血糖的同時能夠有效避免低血糖的發生，因而對控制血糖平衡有很大幫助。

目前文獻報導較多的葡萄糖響應性載體材料主要有三種(Progress in PolymerScience, 2010, 35:278-301)分別是葡萄糖氧化酶體系、伴刀豆球蛋白體系和苯硼酸基團體系。其中，基於伴刀豆球蛋白的葡萄糖響應性體系對於葡萄糖的專一性最強。伴刀豆球蛋白(Concanavalin A, Con A)是一種從刀豆中提取的植物凝集素,能夠與葡萄糖以及含糖單元的聚合物可逆地特異性結合。這種特性能夠使Con A與含糖單元聚合物(如右旋糖酐、聚蔗糖、葡萄糖基聚丙烯酸酯、葡萄糖基聚甲基丙烯酸酯)特異性結合形成凝膠網絡。當環境中葡萄糖濃度升高至一定水平時，由於游離的葡萄糖與Con A的特異性結合作用更強，因此游離的葡萄糖能夠競爭Con A-聚合物結合位點，從而使得凝膠網絡解離而釋放出包裹的藥物。而當環境中葡萄糖濃度低於一定值時，Con A能夠與聚合物再次結合，從而再次形成凝膠網絡，使得體系能夠根據血糖濃度變化可逆釋放藥物。然而，在上述伴刀豆球蛋白體系中，Con A在溶脹過程中很有可能流失，不僅造成體系的葡萄糖響應性減弱，影響載體的可重複性，而且流失的Con A量增加時有可能引發人體免疫反應。為解決這一問題，將Con A共價交聯到與其具有特異性糖結合作用的聚合物基體中是一種非常重要的方法。已有的文獻報導中(Biomaterials，2006，27:1586-1597; Carbohydrate Polymers, 2010，82:412-418)分別利用Con A與甲基丙烯酸酐的親核取代反應以及Con A與丙烯醯氧乙基甲基丙烯酸酯的麥可加成反應對Con A進行改性使其帶有可反應性碳碳雙鍵，進而通過紫外光聚合與同樣帶有可反應性雙鍵的右旋糖酐交聯，得到了葡萄糖響應性的右旋糖酐-Con A基水凝膠。但是，以上方法除需要對配體聚合物右旋糖酐進行改性外，對Con A也需要先進行化學改性，不僅成本高，不易實現大規模生產，而且對Con A改性過程中難免造成部分失活，影響最終載體的葡萄糖響應能力。

發明內容
本發明的目的是提供一種葡萄糖響應性藥物控釋載體的製備方法，採用一種能與羥基、氨基、巰基等多種官能團反應的二乙烯基碸將Con A與含糖單元的聚合物基體直接固定交聯，通過反相乳液分散法形成具有葡萄糖響應性的藥物控釋微凝膠載體，解決了現有技術中葡萄糖響應性藥物控釋載體的製備中需要對Con A及其糖配體聚合物改性，工藝複雜的不足。本發明的所採用的技術方案為:一種葡萄糖響應性藥物控釋載體的製備方法，具體步驟如下:I)將含糖單元的聚合物溶解於鹼液中並攪拌均勻，之後加入二乙烯基碸進行反應，用I 5mol/L的酸液調節pH值至4-5以停止反應,反應後的溶液於去離子水中透析4 7天，得到帶有乙烯基碸基團的含糖單元的聚合物；2)將上述製得的帶有乙烯基碸基團的含糖單元的聚合物溶解於pH7.0-8.0的緩衝溶液中，加入Con A活化液攪拌均勻，室溫下攪拌l_3h ；3)混合環己烷與乳化穩定劑；將步驟2)中得到的混合物緩衝溶液pH調節至
8.0-10.0，之後立即滴加到環己烷與乳化穩定劑混合溶液中，攪拌，靜置，之後去除上層油相，下層用異丙醇沉澱，離心、水洗3-5次，經冷凍乾燥即得葡萄糖響應性微凝膠載體。步驟I)所述的含糖單元的聚合物包括分子量為40 IOOkDa的葡聚糖、分子量為400 700kDa的聚蔗糖、分子量為10 40kDa的聚葡萄糖氧乙基丙烯酸酯或分子量為10 40kDa的聚葡萄糖氧乙基甲基丙烯酸酯；所述的鹼液為0.01 lmol/L的氫氧化鈉、氫氧化鉀；含糖聚合物溶於鹼液 中配成質量分數為1% 10%的溶液，攪拌速度為200 600rpm ；所述的酸為鹽酸，硫酸，硝酸，磷酸；所述的二乙烯基碸與聚合物中羥基的摩爾比為0.5
2.5:1 ;所述的加入二乙烯基碸後的反應條件為室溫下以攪拌速度為200 600rpm攪拌2 30min ;所述的透析採用截留分子量為3_5kDa的透析膜。步驟2)中所述的緩衝溶液為磷酸鹽緩衝液、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩衝液或磷酸鹽-檸檬酸緩衝液；所述的帶有乙烯基碸基團的含糖單元的聚合物溶於緩衝溶液後初始濃度為5 25mg/mL ;所述的帶有乙烯基碸基團的含糖單元的聚合物與Con A的質量比為I 10:1。步驟2)中所述的Con A活化液製備方法如下:將Con A溶於含有0.lmol/LKCl, 0.lmmol/L CaCl2, 0.lmmol/L MnCl2 的 ρΗ7.0 7.8 的緩衝溶液中，Con A 初始濃度為I 10mg/mL,靜置6h以上。上述所述的緩衝溶液為磷酸鹽緩衝液、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩衝液或磷酸鹽-檸檬酸緩衝液。步驟3)中所述的乳化穩定劑為吐溫85，司班80，司班60 ;所述的環己烷與乳化穩定劑的體積質量比為26 160ml/g ;所述的混合條件為以500 800rpm轉速於室溫下攪拌0.5-lh ;所述的混合溶液滴加到環己燒與乳化穩定劑混合溶液中後以500 800rpm轉速攪拌2 5h，之後靜置l-2h。本發明的有益效果:將二乙烯基碸引入Con A-含糖聚合物載體的製備中可以大大簡化載體的製備步驟，提高效率和降低成本。使用的交聯劑二乙烯基碸能夠與羥基、氨基、巰基等多種官能團反應，反應迅速，反應條件溫和，不需要對聚合物基體以及Con A進行改性即可直接交聯，也避免了 Con A改性過程造成的原料損失以及可能造成的葡萄糖敏感性下降的損失，同時該方法固定Con A簡單、高效,成本低,實施方便,利於大規模生產。
具體實施方式
:實施例1:I)將葡聚糖(分子量70kDa)溶解於0.0lmol/L的氫氧化鈉水溶液中配成質量分數為10%的溶液，以300rpm的轉速攪拌均勻，之後加入二乙烯基碸，二乙烯基碸與葡聚糖中羥基的摩爾比為0.5:1，保持相同轉速室溫下反應IOmin後用lmol/L的鹽酸調節pH值至5以停止反應。反應後的溶液於去離子水中透析(透析膜截留分子量5kDa) 7天，經冷凍乾燥得到取代度為20% (取代度通過核磁譜圖計算得到)的帶有乙烯基碸基團的葡聚糖。2) Con A 活化液製備:將 Con A 溶於含有 0.lmol/L KCl, 0.lmmol/LCaCl2, 0.lmmol/L MnCl2的pH7.0的磷酸鹽緩衝溶液中，Con A初始濃度為5mg/mL，靜置6h。3)將帶有乙烯基碸基團的葡聚糖溶解於pH7.0的磷酸鹽緩衝溶液中，初始濃度為25mg/mL,加入Con A活化液攪拌均勻,帶有乙烯基碸基團的含糖單元聚合物與Con A的質量比為5:1，室溫下攪拌lh。4)在圓底燒瓶中加入50mL環己燒並混合0.8g乳化穩定劑吐溫85,以800rpm轉速於室溫下攪拌30min ;將步驟3)中得到的混合物緩衝溶液pH調節至8.0，之後立即用5#注射器針頭緩慢滴加到燒瓶中，保持相同轉速攪拌2h之後靜置lh，去除上層油相，下層用異丙醇沉澱，離心、水洗3-5次，經冷凍乾燥即得葡萄糖響應性微凝膠載體。實施例2:I)將葡聚糖(分子量IOOkDa)溶解於0.lmol/L的氫氧化鈉水溶液中配成質量分數為2%的溶液，以500rpm的轉速攪拌均勻，之後加入二乙烯基碸，二乙烯基碸與葡聚糖中羥基的摩爾比為1.25:1，保持相同轉速室溫下反應15min後用5mol/L的硫酸調節pH值至4以停止反應。反應後的溶液於去離子水中透析(透析膜截留分子量3kDa) 7天，經冷凍乾燥得到取代度為40%的帶有乙烯基碸基團的葡聚糖。2) Con A 活化液製備:將 Con A 溶於含有 0.lmol/L KCl, 0.lmmol/LCaCl2, 0.1mmoVLMnCl2的pH7.0的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩衝溶液中，Con A初始濃度為10mg/mL,靜置 6h。3)將帶有乙烯基碸基團的葡聚糖溶解於pH7.0的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩衝溶液中，初始濃度為10mg/mL,加入Con A活化液攪拌均勻，帶有乙烯基碸基團的含糖單元聚合物與Con A的質量比為8:1，室溫下攪拌lh。4)在圓底燒瓶中加入60mL環己燒並混合1.1g乳化穩定劑司班80,以800rpm轉速於室溫下攪拌Ih ;將步驟3)中得到的混合物緩衝溶液pH調節至9.0，之後立即用5#注射器針頭緩慢滴加到燒瓶中，保持相同轉速攪拌3h之後靜置2h，去除上層油相，下層用異丙醇沉澱，離心、水洗3-5次，經冷凍乾燥即得葡萄糖響應性微凝膠載體。實施例3:I)將葡聚糖(分子量40kDa)溶解於lmol/L的氫氧化鈉水溶液中配成質量分數為5%的溶液，以500rpm的轉速攪拌均勻，之後加入二乙烯 基碸,二乙烯基碸與葡聚糖中輕基的摩爾比為2.5:1，保持相同轉速室溫下反應30min後用5mol/L的硝酸調節pH值至5以停止反應。反應後的溶液於去離子水中透析(透析膜截留分子量5kDa) 7天，經冷凍乾燥得到取代度為90%的帶有乙烯基碸基團的葡聚糖。2) Con A 活化液製備:將 Con A 溶於含有 0.lmol/L KCl, 0.lmmol/LCaCl2, 0.1mmoVLMnCl2的ρΗ7.4的磷酸鹽-檸檬酸緩衝溶液中，Con A初始濃度為10mg/mL，
靜置6h。3)將帶有乙烯基碸基團的葡聚糖溶解於pH7.0的磷酸鹽-檸檬酸緩衝溶液中，初始濃度為20mg/mL,加入Con A活化液攪拌均勻，帶有乙烯基碸基團的含糖單元聚合物與Con A的質量比為1:1，室溫下攪拌3h。4)在圓底燒瓶中加入80mL環己燒並混合1.5g乳化穩定劑司班60,以800rpm轉速於室溫下攪拌30min ;將步驟3)中得到的混合物緩衝溶液pH調節至10.0，之後立即用5#注射器針頭緩慢滴加到燒瓶中，保持相同轉速攪拌5h之後靜置2h，去除上層油相，下層用異丙醇沉澱，離心、水洗3-5次，經冷凍乾燥即得葡萄糖響應性微凝膠載體。實施例4:I)將聚蔗糖(分子量400kDa)溶解於0.0lmol/L的氫氧化鈉水溶液中配成質量分數為2%的溶液，以600rpm的轉速攪拌均勻，之後加入二乙烯基碸，二乙烯基碸與聚合物中羥基的摩爾比為1.5:1，保持相同轉速室溫下反應20min後用lmol/L的磷酸調節pH值至5以停止反應。反應後的溶液於去離子水中透析(透析膜截留分子量5kDa) 7天，經冷凍乾燥得到取代度為25%的帶有乙烯基碸基團的聚蔗糖。2) Con A 活化液製備:將 Con A 溶於含有 0.lmol/L KCl, 0.lmmol/LCaCl2, 0.1mmoVLMnCl2的pH7.8的磷酸鹽緩衝溶液中，Con A初始濃度為2mg/mL，靜置6h以上。3)將帶有乙烯基碸基團的聚蔗糖溶解於pH8.0的磷酸鹽緩衝溶液中，初始濃度為10mg/mL,加入Con A活化液攪拌均勻，帶有乙烯基碸基團的含糖單元聚合物與Con A的質量比為8:1，室溫下攪拌lh。4)在圓底燒瓶中加入50mL環己燒並混合0.8g乳化穩定劑吐溫85,以600rpm轉速於室溫下攪拌30min ;將步驟3)中得到的混合物緩衝溶液pH調節至9.0，之後立即用5#注射器針頭緩慢滴加到燒瓶中，保持相同轉速攪拌4h之後靜置lh，去除上層油相，下層用異丙醇沉澱，離心、水洗3-5次，經冷凍乾燥即得葡萄糖響應性微凝膠載體。實施例5:I)將聚葡萄糖氧乙基丙烯酸酯(分子量IOkDa)溶解於0.0lmol/L的氫氧化鈉水溶液中配成質量分數為1%的溶液，以300rpm的轉速攪拌均勻，之後加入二乙烯基碸，二乙烯基碸與聚葡萄糖氧乙基丙烯酸酯中羥基的摩爾比為1.5:1，保持相同轉速室溫下反應25min後用lmol/L的鹽酸調節pH值至4以停止反應。反應後的溶液於去離子水中透析(透析膜截留分子量3kDa)7天，經冷凍乾燥得到取代度為30%的帶有乙烯基碸基團的聚葡萄糖氧乙基丙烯酸酯。2) Con A 活化液製備:將 Con A 溶於含有 0.lmol/L KCl, 0.lmmol/LCaCl2, 0.1mmoVLMnCl2的 ρΗ7.0的磷酸鹽緩衝溶液中，Con A初始濃度為10mg/mL，靜置6h以上。3)將帶有乙烯基碸基團的聚葡萄糖氧乙基丙烯酸酯溶解於pH8.0的磷酸鹽緩衝溶液中，初始濃度為10mg/mL,加入Con A活化液攪拌均勻,帶有乙烯基碸基團的含糖單元聚合物與Con A的質量比為10:1，室溫下攪拌lh。4)在圓底燒瓶中加入40mL環己烷並混合0.5g乳化穩定劑吐溫85，以500rpm轉速於室溫下攪拌30min ;將步驟3)中得到的混合物緩衝溶液pH調節至9.0，之後立即用5#注射器針頭緩慢滴加到燒瓶中，保持相同轉速攪拌5h之後靜置lh，去除上層油相，下層用異丙醇沉澱，離心、水洗3-5次，經冷凍乾燥即得葡萄糖響應性微凝膠載體。實施例6:I)將聚葡萄糖氧乙基甲基丙烯酸酯(分子量IOkDa)溶解於0.0lmol/L的氫氧化鉀水溶液中配成質量分數為1%的溶液，以200rpm的轉速攪拌均勻，之後加入二乙烯基碸，二乙烯基碸與聚葡萄糖氧乙基甲基丙烯酸酯中羥基的摩爾比為1.5:1，保持相同轉速室溫下反應30min後用lmol/L的鹽酸調節pH值至5以停止反應。反應後的溶液於去離子水中透析(透析膜截留分子量3kDa) 7天，經冷凍乾燥或旋轉蒸發得到取代度為30%的帶有乙烯基碸基團的聚葡萄糖氧乙基甲基丙烯酸酯。2) Con A 活化液製備:將 Con A 溶於含有 0.lmol/L KCl, 0.lmmol/LCaCl2, 0.1mmoVLMnCl2的ρΗ7.0的磷酸鹽緩衝溶液中，Con A初始濃度為10mg/mL，靜置6h以上。3)將帶有乙烯基碸基團 的聚葡萄糖氧乙基甲基丙烯酸酯溶解於pH8.0的磷酸鹽緩衝溶液中，初始濃度為15mg/mL，加入Con A活化液攪拌均勻，帶有乙烯基碸基團的含糖單元聚合物與Con A的質量比為5:1,室溫下攪拌lh。4)在圓底燒瓶中加入45mL環己燒並混合0.7g乳化穩定劑吐溫85,以600rpm轉速於室溫下攪拌30min ;將步驟3)中得到的混合物緩衝溶液pH調節至10.0，之後立即用5#注射器針頭緩慢滴加到燒瓶中，保持相同轉速攪拌5h之後靜置lh，去除上層油相，下層用異丙醇沉澱，離心、水洗3-5次，經冷凍乾燥即得葡萄糖響應性微凝膠載體。實施例7:I)將聚蔗糖(分子量700kDa)溶解於0.0lmol/L的氫氧化鈉水溶液中配成質量分數為2%的溶液，以600rpm的轉速攪拌均勻，之後加入二乙烯基碸，二乙烯基碸與聚合物中羥基的摩爾比為1.5:1，保持相同轉速室溫下反應2min後用lmol/L的鹽酸調節pH值至5以停止反應。反應後的溶液於去離子水中透析(透析膜截留分子量4kDa) 4天，經冷凍乾燥得到取代度為5%的帶有乙烯基碸基團的聚蔗糖。2) Con A 活化液製備:將 Con A 溶於含有 0.lmol/L KCl, 0.lmmol/LCaCl2, 0.1mmoVLMnCl2的pH7.8的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩衝溶液中，Con A初始濃度為lmg/mL,靜置6h以上。3)將帶有乙烯基碸基團的聚蔗糖溶解於pH8.0的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩衝液中，初始濃度為5mg/mL,加入Con A活化液攪拌均勻,帶有乙烯基碸基團的含糖單元聚合物與Con A的質量比為6:1，室溫下攪拌lh。4)在圓底燒瓶中加入40mL環己燒並混合1.5g乳化穩定劑吐溫85,以600rpm轉速於室溫下攪拌30min ;將步驟3)中得到的混合物緩衝溶液pH調節至10.0，之後立即用5#注射器針頭緩慢滴加到燒瓶中，保持相同轉速攪拌4h之後靜置lh，去除上層油相，下層用異丙醇沉澱，離心、水洗3-5次，經冷凍乾燥即得葡萄糖響應性微凝膠載體。
實施例8:I)將聚葡萄糖氧乙基丙烯酸酯(分子量40kDa)溶解於0.0lmol/L的氫氧化鈉水溶液中配成質量分數為5%的溶液，以300rpm的轉速攪拌均勻，之後加入二乙烯基碸，二乙烯基碸與聚葡萄糖氧乙基丙烯酸酯中羥基的摩爾比為1:1，保持相同轉速室溫下反應25min後用lmol/L的鹽酸調節pH值至5以停止反應。反應後的溶液於去離子水中透析(透析膜截留分子量5kDa)6天，經冷凍乾燥得到取代度為40%的帶有乙烯基碸基團的聚葡萄糖氧乙基丙烯酸酯。2) Con A 活化液製備:將 Con A 溶於含有 0.lmol/L KCl, 0.lmmol/LCaCl2, 0.1mmoVLMnCl2的pH7.0的磷酸鹽緩衝溶液中，Con A初始濃度為8mg/mL，靜置6h以上。3)將帶有乙烯基碸基團的聚葡萄糖氧乙基丙烯酸酯溶解於pH8.0的磷酸鹽緩衝溶液中，初始濃度為8mg/mL,加入Con A活化液攪拌均勻,帶有乙烯基碸基團的含糖單元聚合物與Con A的質量比為5:1，室溫下攪拌lh。

4)在圓底燒瓶中加入80mL環己燒並混合0.5g乳化穩定劑吐溫85,以500rpm轉速於室溫下攪拌30min ;將步驟3)中得到的混合物緩衝溶液pH調節至10.0，之後立即用5#注射器針頭緩慢滴加到燒瓶中，保持相同轉速攪拌5h之後靜置lh，去除上層油相，下層用異丙醇沉澱，離心、水洗3-5次，經冷凍乾燥即得葡萄糖響應性微凝膠載體。實施例9:I)將聚葡萄糖氧乙基甲基丙烯酸酯(分子量40kDa)溶解於0.5mol/L的氫氧化鈉水溶液中配成質量分數為6%的溶液，以200rpm的轉速攪拌均勻，之後加入二乙烯基碸，二乙烯基碸與聚葡萄糖氧乙基甲基丙烯酸酯中羥基的摩爾比為2:1，保持相同轉速室溫下反應:25min後用1.5mol/L的鹽酸調節pH值至5以停止反應。反應後的溶液於去離子水中透析(透析膜截留分子量4kDa) 7天，經冷凍乾燥或旋轉蒸發得到取代度為35%的帶有乙烯基碸基團的聚葡萄糖氧乙基甲基丙烯酸酯。2) Con A 活化液製備:將 Con A 溶於含有 0.lmol/L KCl, 0.lmmol/LCaCl2, 0.1mmoVLMnCl2的pH7.0的磷酸鹽緩衝溶液中，Con A初始濃度為8mg/mL，靜置6h以上。3)將帶有乙烯基碸基團的聚葡萄糖氧乙基甲基丙烯酸酯溶解於pH8.0的磷酸鹽緩衝溶液中，初始濃度為20mg/mL，加入Con A活化液攪拌均勻，帶有乙烯基碸基團的含糖單元聚合物與Con A的質量比為5:1,室溫下攪拌lh。4)在圓底燒瓶中加入60mL環己燒並混合Ig乳化穩定劑吐溫85,以600rpm轉速於室溫下攪拌30min ;將步驟3)中得到的混合物緩衝溶液pH調節至9.0，之後立即用5#注射器針頭緩慢滴加到燒瓶中，保持相同轉速攪拌5h之後靜置lh，去除上層油相，下層用異丙醇沉澱，離心、水洗3-5次，經冷凍乾燥即得葡萄糖響應性微凝膠載體。
權利要求
1.一種葡萄糖響應性藥物控釋載體，其特徵在於由下法製得: 1)將含糖單元的聚合物溶解於鹼液中並攪拌均勻，之後加入二乙烯基碸進行反應，用I 5mol/L的酸液調節pH值至4_5以停止反應,反應後的溶液於去離子水中透析4 7天，得到帶有乙烯基碸基團的含糖單元的聚合物； 2)將上述製得的帶有乙烯基碸基團的含糖單元的聚合物溶解於pH7.0-8.0的緩衝溶液中，加入Con A活化液攪拌均勻，室溫下攪拌l_3h ； 3)混合環己烷與乳化穩定劑；將步驟2)中得到的混合物緩衝溶液pH調節至8.0-10.0，之後立即滴加到環己烷與乳化穩定劑混合溶液中，攪拌，靜置，之後去除上層油相，下層用異丙醇沉澱，離心、水洗3-5次，經冷凍乾燥即得葡萄糖響應性微凝膠載體。
2.根據權利要求1所述的葡萄糖響應性藥物控釋載體的製備方法，其特徵在於:步驟1)所述的含糖單元的聚合物包括分子量為40 IOOkDa的葡聚糖、分子量為400 700kDa的聚蔗糖、分子量為10 40kDa的聚葡萄糖氧乙基丙烯酸酯或分子量為10 40kDa的聚葡萄糖氧乙基甲基丙烯酸酯；所述的鹼液為0.01 lmol/L的氫氧化鈉或氫氧化鉀；所述的含糖聚合物溶於鹼液中配成質量分數為1% 10%的溶液並以攪拌速度為200 600rpm攪拌均勻；所述的酸為鹽酸，硫酸，硝酸或磷酸；所述的二乙烯基碸與聚合物中羥基的摩爾比為0.5 2.5:1 ;所述的加入二乙烯基碸後的反應條件為室溫下以攪拌速度為200 600rpm攪拌2 30min ;所述的透析採用截留分子量為3_5kDa的透析膜。
3.根據權利要求1所述的葡萄糖響應性藥物控釋載體的製備方法，其特徵在於:步驟 2)中所述的緩衝溶液為磷酸鹽緩衝液、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩衝液或磷酸鹽-檸檬酸緩衝液；所述的帶有乙烯基碸基團的含糖單元的聚合物溶於緩衝溶液後初始濃度為5 25mg/mL ;所述的帶有乙烯基碸基團的含糖單元的聚合物與Con A的質量比為I 10:1。
4.根據權利要求1所述的葡萄糖響應性藥物控釋載體的製備方法，其特徵在於:步驟2)中所述的ConA活化液製備方法如下:將Con A溶於含有0.lmol/L KCl, 0.1mmoI/L CaCl2和0.lmmol/L MnCl2的ρΗ7.0 7.8的緩衝溶液中，Con A初始濃度為I 10mg/mL，靜置6h以上。
5.根據權利要求4所述的葡萄糖響應性藥物控釋載體的製備方法，其特徵在於:所述的緩衝溶液為磷酸鹽緩衝液、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩衝液或磷酸鹽-檸檬酸緩衝液。
6.根據權利要求1所述的葡萄糖響應性藥物控釋載體的製備方法，其特徵在於:步驟3)中所述的乳化穩定劑為吐溫85，司班80或司班60;所述的環己烷與乳化穩定劑的體積質量比為26 160ml/g ;所述的混合條件為以500 800rpm轉速於室溫下攪拌0.5_lh ;所述的混合溶液滴加到環己燒與乳化穩定劑混合溶液中後以500 800rpm轉速攪拌2 5h,之後靜置l-2h。
全文摘要
本發明提供一種葡萄糖響應性藥物控釋載體的製備方法，解決了現有技術中需要對ConA及其糖配體改性的不足。本發明方法步驟如下1)將含糖單元的聚合物溶於鹼液中並加入二乙烯基碸，調節pH停止反應，經透析得到帶有乙烯基碸基團的含糖單元的聚合物；2)將製得的物質溶解於緩衝溶液中，加入Con A活化液；3)將步驟2)中得到的混合物用緩衝溶液調節pH之後滴加到環己烷與乳化穩定劑混合溶液中，反應後去除上層油相，下層經沉澱即得葡萄糖響應性載體。將二乙烯基碸引入Con A-含糖聚合物載體可以簡化載體的製備步驟，可將含糖單元聚合物及Con A直接交聯，固定Con A簡單、高效，成本低，實施方便，利於大規模生產。
文檔編號A61K47/42GK103191437SQ20131006883
公開日2013年7月10日 申請日期2013年3月5日 優先權日2013年3月5日
發明者王克敏, 殷瑞雪 申請人:常州大學