一種三七止血膠囊及其製備方法和質量控制方法

2023-10-17 10:50:14

專利名稱：一種三七止血膠囊及其製備方法和質量控制方法
技術領域：
本發明屬於中藥技術領域，具體涉及一種三七止血膠囊及其製備方法和質量控制方法。
背景技術：
中華人民共和國衛生部《藥品標準中藥成方製劑》第十一冊第9頁三七止血片的質量標準提供了本發明的製劑基本處方。專利文獻CN1857370A、CN1114432C、CN1679786A、CN1876009A對三七止血類製劑已經進行了一定公開。
三七止血製劑(包括片劑和膠囊等劑型)臨床上用於消化道出血，血尿，便血，吐血，血痢等人體內外各種出血；跌打損傷，骨折，外傷出血，瘀血腫痛，創傷口久不癒合，胸腹刺痛，乳腺炎，脈管炎；月經不調，月經過多，人流能產後流血不止，功能性子宮出血，痛經，附件炎，宮頸糜爛等；還可以用於各種外科手術術前、術後以減少出血。三七止血製劑除了在治療婦科各種出血症及炎症外，能夠治療大面積軟組織創傷，跌打腫痛之損傷，瘀血阻滯所致的各種疼痛；抑制人體內處各種出血。
三七止血製劑由地錦草和三七配伍組成。
地錦草為大戟科植物地錦Euphorbia humifusa Willd.或斑地錦Euphorbiamaculata L.的乾燥全草。夏、秋二季採收，除去雜質，曬乾。地錦草常皺縮捲曲，根細小。莖細，呈叉狀分枝，表面帶紫紅色，光滑無毛或疏生白色細柔毛；質脆，易折斷，斷面黃白色，中空。單葉對生，具淡紅色短柄或幾無柄；葉片多皺縮或已脫落，展平後呈長橢圓形，長5～10mm，寬4～6mm；綠色或帶紫紅色，通常無毛或疏生細柔毛；先端鈍圓，基部偏斜，邊緣具小鋸齒或呈微波狀。杯狀聚傘花序腋生，細小。蒴果三稜狀球形，表面光滑。種子細小，卵形，褐色。無臭，味微澀。
地錦草含有有效成分有莨菪亭、傘形花內酯、阿亞品內酯、棕櫚酸、全草含棕櫚酸、沒食子酸、沒食子酸甲酸、鞣花酸和短葉蘇木酚等。其中沒食子酸是其中含量較高，且具有凝血止血作用的活性成分。
三七為五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的乾燥根。秋季花開前採挖，洗淨，分開主根、支根及莖基，乾燥。根據文獻資料報導，三七也叫田七，因枝分三叉，葉為七片，故稱為三七。三七在春冬兩季採挖，又分為″春七″和″冬七″。
三七屬五加科多年生宿草根人參屬植物，生用有止血強心，散瘀生新、消腫定痛的顯著功能，熟用有活血、補血、強壯補虛的效益。明代著名醫學家李時珍在《本草綱目》中譽之為″金不換。。清朝前期的醫學著作《本草綱目拾遺》中說″人參補氣第一，三七補血第一，味同而功亦等，故稱″北參南七″，為中藥之最珍貴者。
隨著醫學科學研究的發展，人們對三七的認識逐步加深，發現人參申最主要的有效成分和補養物質是四環三萜皂苷，而三七的含量比人參的還更高，三七所含黃酮類化合物，有調節血壓，擴張冠狀動脈，增加冠脈血流量，降低心臟耗氧量，減輕心肌工作負擔的作用。經過臨床驗證，證明三七在治療由冠心病引起的胸悶、心絞痛中有滿意的療效，對降低肥固醇及血脂的功能也很顯著。
三七中最有代表性的活性物質是皂苷及皂苷元三七的主要成分為三萜皂苷，是與人參皂苷類似的一類成分。經研究發現三七中的這類成分有人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg2、Rg320(S)-Rg3、Rh1、F2，20-O-葡萄糖人參皂苷R1，七葉膽甙IX、XVII，三七皂苷，R1、R2、R3、R4、R6、Fa、Fc、Fe等。

發明內容本發明的目的在於提供一種三七止血膠囊。
本發明的另一目的在於提供三七止血膠囊的製備方法。
本發明的另一目的在於提供三七止血膠囊的質量控制方法。
具體地說，本發明所述三七止血膠囊，是由地錦草850-2000重量份、三七50-200重量份和適量藥用輔料製成的膠囊劑，其中將三七粉碎為粒度90-125目的細粉；優選100目的三七細粉。
三七止血膠囊的製備方法，按照以下方法製備(一)稱量按照地錦草850-2000重量份、三七50-200重量份稱取原料；(二)煎煮和濃縮地錦草加水煎煮2次，第一次加10-12倍量水，煎煮1.5-2.5小時，第二次加8-12倍量水，煎煮0.5-1.5小時，合併濾液，濾液濃縮至相對密度為1.35-1.48的稠膏；(三)粉碎取三七，粉碎，過90-125目篩，得三七細粉；(四)混勻與制粒取上述稠膏、三七細粉及適量輔料，制粒，烘乾，整粒，得到膠囊顆粒；(五)將上述膠囊顆粒填充為膠囊。
上述三七止血膠囊的製備方法中步驟(二)可以優選為地錦草加水煎煮2次，第一次加10-12倍量水，煎煮1-2.5小時，第二次加8-12倍量水，煎煮0.5-1小時，合併濾液，濾液濃縮至相對密度為1.35-1.40的稠膏。
上述三七止血膠囊的製備方法中步驟(二)中地錦草加水煎煮2次，第一次加12倍量水，煎煮2小時，第二次加10倍量水，煎煮1小時，合併濾液，濾液濃縮至相對密度為1.40的稠膏。
本發明的三七止血膠囊的質量控制方法為1.取待測膠囊內容物0.5g，加水使溶解，濾過，濾液加無機酸，置水浴中加熱1小時，放冷，濾過，濾液用疏水有機溶劑振搖提取2次，合併有機溶劑，蒸乾，殘渣加甲醇使溶解，得到供試品溶液。
2.另取地錦草對照藥材1g，加水煎煮1小時，濾過，濾液加無機酸，置水浴中加熱1小時，放冷，濾過，濾液用疏水有機溶劑振搖提取2次，合併有機溶劑，蒸乾，殘渣加甲醇使溶解，得到對照藥材溶液。
3.吸取上述兩種相同體積的溶液，分別點於同一矽膠薄層板上，以氯仿-醋酸丁酯-甲酸-水(4∶4∶1∶1)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
本發明三七止血膠囊的質量控制方法也可以為1.取待測膠囊內容物0.5g，加甲醇，加熱回流，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水使溶解，用水飽和的正丁醇提取2次，合併正丁醇液，用氨試液洗滌2次，棄去氨液，再用正丁醇飽和的水洗滌2次，棄去水液，正丁醇液蒸乾，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液。
2.另取人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、三七皂苷R1對照品，加甲醇製成每1ml含0.5毫克的混合溶液，作為對照品溶液。
3.吸取上述相同體積兩種溶液，分別點於同一矽膠薄層板上，以氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
本發明三七止血膠囊的質量控制方法還可以為1.對照品溶液的製備精密稱取沒食子酸對照品適量，加50％甲醇製成每1ml含0.02毫克的溶液。
2.供試品溶液的製備取本品裝量差異項下的內容物，研細，混勻，取約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，密塞，稱定重量，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續濾液，即得。
3.用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；甲醇-0.05％磷酸溶液(15∶85)為流動相；檢測波長為250-290nm；柱溫為25-35℃。理論板數按沒食子酸峰計算不低於3000。測定法分別吸取對照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定。
上述三七止血膠囊的質量控制方法中，三七止血膠囊中沒食子酸含量介於14.8到21.2毫克之間。
當前日本、韓國、美國以及歐洲等西方發達國家研究的天然藥物，大都以傳統工藝為主，採用水提取，把中藥複方全部活性成分留下。雖然這是保證臨床療效的兩難選擇，但對於遵循中醫藥君臣佐使理論，提高組方的有效成分，最大限度減少藥物副作用是有積極意義的。中藥的現代化生產工藝並非化學提取次數越多越好，而應該有更合理的標準，臨床療效應成為尺子。為了更加有效保證三七止血製劑的臨床療效的重現性，需要從產品的原料、製備方法和質量控制方法方面進行全面的優化，用科學的實證方法保證藥品的療效。
三七止血膠囊，顧名思義，其臨床藥效最直接就是用於出血的治療，本發明中通過測定對不同工藝、處方下膠囊內容物的小鼠凝血時間的數據發現當在對比例中三七的粉碎粒度為60目時，膠囊內容物的凝血效果變得不明顯，而且不穩定，這提示三七全粉入藥時應該將其粉碎達到一定粒度時，效果比較明顯，本發明中，當粉碎粒度為90-150目時，凝血效果較好。鑑於三七粉碎粒度為150目時，膠囊內容物流動性不好，所以粉碎粒度為90-125目較好，其中優選100目。
具體實施方式下面實施例進一步描述本發明，但所述實施例僅用於說明本發明而不是限制本發明。
實施例1處方地錦草850g 三七50g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過100目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加14倍量水，煎煮2小時，第二次加12倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.41(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量糊精，混勻，製成顆粒，乾燥，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
實施例2處方地錦草850g 三七50g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過125目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加10倍量水，煎煮2小時，第二次加8倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.38(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量澱粉，混勻，製成顆粒，乾燥，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
實施例3處方地錦草850g 三七50g
製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過90目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加14倍量水，煎煮2小時，第二次加12倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.40(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量糊精，混勻，製成顆粒，乾燥，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
實施例4處方地錦草850g 三七200g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過100目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加10倍量水，煎煮2小時，第二次加8倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.43(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量澱粉，混勻，製成顆粒，乾燥，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
實施例5處方地錦草850g 三七200g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過125目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加14倍量水，煎煮2小時，第二次加12倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.35(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量糊精，混勻，製成顆粒，乾燥，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
實施例6處方地錦草850g 三七200g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過90目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加10倍量水，煎煮2小時，第二次加8倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.42(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量澱粉，混勻，製成顆粒，乾燥，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
實施例7處方地錦草2000g 三七200g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過100目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加14倍量水，煎煮2小時，第二次加12倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.42(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量糊精，混勻，製成顆粒，乾燥，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
實施例8處方地錦草2000g 三七200g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過125目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加10倍量水，煎煮2小時，第二次加8倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.44(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量澱粉，混勻，製成顆粒，乾燥，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
實施例9處方地錦草2000g 三七200g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過90目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加10倍量水，煎煮2小時，第二次加8倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.44(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量澱粉，混勻，製成顆粒，乾燥，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
實施例10處方地錦草1875g 三七93g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過100目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加14倍量水，煎煮2小時，第二次加12倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.41(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量糊精，混勻，製成顆粒，乾燥，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
實施例11處方地錦草1875g 三七93g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過125目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加10倍量水，煎煮2小時，第二次加8倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.38(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量澱粉，混勻，製成顆粒，乾燥，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
實施例12
處方地錦草1875g 三七93g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過90目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加12倍量水，煎煮2小時，第二次加10倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.40(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量澱粉，混勻，製成顆粒，60℃條件下乾燥3小時，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
實施例13處方地錦草1 875g三七93g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過125目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加12倍量水，煎煮2小時，第二次加10倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.40(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量澱粉，混勻，製成顆粒，60℃條件下乾燥3小時，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
實施例14處方地錦草1875g 三七93g以上兩味，三七粉碎成細粉，地錦草加水煎煮二次，第一次加10倍量水，煎煮2小時，第二次加10倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.40(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量澱粉，混勻，製成顆粒，60℃條件下乾燥3小時，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
對比例1處方地錦草850g 三七50g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過60目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加12倍量水，煎煮2小時，第二次加10倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.35(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量澱粉，混勻，製成顆粒，乾燥，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
對比例2處方地錦草850g 三七50g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過150目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加10倍量水，煎煮2小時，第二次加8倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.48(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量澱粉，混勻，製成顆粒，乾燥，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
對比例3處方地錦草850g 三七200g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過60目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加12倍量水，煎煮2小時，第二次加10倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.45(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量澱粉，混勻，製成顆粒，乾燥，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
對比例4處方地錦草850g 三七200g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過150目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加10倍量水，煎煮2小時，第二次加8倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.45(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量澱粉，混勻，製成顆粒，乾燥，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
對比例5處方地錦草2000g 三七50g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過60目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加12倍量水，煎煮2小時，第二次加10倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.40(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量澱粉，混勻，製成顆粒，乾燥，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
對比例6處方地錦草2000g 三七50g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過150目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加10倍量水，煎煮2小時，第二次加8倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.44(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量澱粉，混勻，製成顆粒，乾燥，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
對比例7
處方地錦草2000g 三七200g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過60目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加12倍量水，煎煮2小時，第二次加10倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.40(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量澱粉，混勻，製成顆粒，乾燥，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
對比例8處方地錦草2000g 三七200g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過150目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加10倍量水，煎煮2小時，第二次加8倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.40(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量澱粉，混勻，製成顆粒，乾燥，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
對比例9處方地錦草1875g 三七93g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過60目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加12倍量水，煎煮2小時，第二次加10倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.35(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量澱粉，混勻，製成顆粒，乾燥，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
對比例10處方地錦草1875g 三七93g製法以上兩味，三七粉碎成細粉，過150目篩，地錦草加水煎煮二次，第一次加10倍量水，煎煮2小時，第二次加8倍量水，煎煮1小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.48(40℃)的稠膏，加入三七細粉及適量澱粉，混勻，製成顆粒，乾燥，灌裝膠囊，製成1000粒，即得。
實驗例1-本發明中三七粉碎粒度的優化實驗預實驗表明三七粉碎粒度目數小於60目時，不利於藥品的制粒(顆粒粒度極不均勻)和有效成分的溶出，所以實施例中的粉碎粒度在60目以上。
休止角(angle of repose)是粒子在粉體堆積層的自由斜面上滑動時受到重力和粒子間摩擦力的作用，當這些力達到平衡時處於靜止狀態。休止角是此時粉體堆積層的自由斜面與水平面所形成的最大角。休止角是檢驗粉體流動性好壞的最簡便的方法。休止角越小，說明摩擦力越小，流動性越好，一般認為休止角θ≤30°時流動性好，休止角30°≤θ≤40°時可以基本滿足生產過程中流動性的需求，當θ＞40°將不利於膠囊顆粒的灌裝，這會引發灌裝不均勻的現象。
本發明採用固定漏鬥法(奚念朱主編《藥劑學》第三版248頁-249頁)測定實施例1-20的灌裝前顆粒(中間體)的休止角；實施例1-20裝量差異測試採用(奚念朱主編《藥劑學》第三版頁，326頁)所述方法，數據如表1。
表1本發明中膠囊內容物顆粒的休止角和膠囊的裝量差異數據
如上表所示實施例1-20的測試表明，當三七粉碎粒度介於90-125目時，其休止角降低到30°以下，這有利於膠囊裝量的穩定，從實際灌裝的差異也可以說明這一點。而當三七粉碎粒度達到150目時，膠囊劑中顆粒的休止角增大，裝量差異較大這都不利於膠囊劑的生產，而當三七粉碎粒度為60目-125目時，其休止角降低到30°以下，膠囊裝量也比較穩定。
實驗例2-本發明中地錦草提取時加水比例的優化1.評價指標的測定方法地錦草主含黃酮類化學成分和沒食子酸等有效成分。研究表明，地錦草有較好的止血作用。浸膏得率在一定的程度上能夠反映提取效果的優劣，對製劑的成型、服用劑量的確定具有參考價值，所以選擇提取液中沒食子酸的含量和浸膏得率為指標成分，通過試驗確定二次煎煮的加水量。
浸膏得率測定照中國藥典2000年版一部附錄X A浸出物測定法，精密量取提取液20ml，置已乾燥至恆重的蒸發皿中，在水浴上蒸乾後，於105℃乾燥3小時，移置乾燥器中，冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量，以乾燥品計算供試品中水溶性浸出物的含量。按下列公式計算浸膏得率。結果見表2、3。
浸膏得率(％)＝浸膏重量/20ml藥液相當於藥材量×100％。
沒食子酸含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；甲醇-0.05％磷酸溶液(15∶85)為流動相；檢測波長為271nm；柱溫為25℃。理論板數按沒食子酸峰計算應不低於3000。對照品溶液的製備精密稱取沒食子酸對照品適量，加50％甲醇製成每1ml含0.02毫克的溶液，即得。供試品溶液的製備精密量取定容到刻度的浸漬液2m1，置10ml棕色量瓶中，加水稀釋到刻度，搖勻，濾過，即得。
測定法分別吸取對照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。結果見表1、2。
2.第一次加水量的確定取地錦草藥材125g，5份，第一次加水量分別為藥材量的8，10，12，14，16倍，煎煮2小時，濾過，濾液另存備用，測定濾液中沒食子酸的含量和浸膏得率，結果見表2。
表2確定第一次加水量的因素
由表1可知，加水16倍量時，沒食子酸含量最高，但加10、12、14倍量水時沒食子酸量相近，但與8倍量水相差較大，由於沒食子酸為處方中的有效成分，故以沒食子酸含量為主要考察指標，為了減少藥物成分受熱時間，節約能源，考慮還需繼續加水煎煮，選擇第一次加水量的最佳條件為10-12倍量水，優選12倍量水。
3.第二次加水量的確定取地錦草藥材125g，四份，在第一次加水量確定的條件下，煎煮2小時，濾過，濾液棄去，煎煮第二次，加水量分別為藥材量的6、8、10、12、14倍，煎煮1小時，濾過，濾液另存備用，測定濾液中沒食子酸的含量和浸膏得率，結果見表3。
表3確定第二次加水量的因素
由表2可知，確定第一次加水量為12倍水，來考察第二次加水量，加水量為14倍水時沒食子酸的含量最高，但浸膏得率也是最高，但是與8-12倍量水水煎煮液的浸膏得率和沒食子酸含量無差別，與6倍量水比較，相差較大。綜合考慮，考慮到節約用水和能源，此第二次加水量選擇8-12倍為宜，優選10倍。
綜上所述，該提取工藝中二次煎煮的加水量的最優選比例分別為第一次加水量為12倍水，第二次加水量為10倍水。
實驗例3-本發明薄層色譜的定性鑑別方法取(實施例1-14)膠囊內容物各0.5g，加水20ml使溶解，濾過，濾液加鹽酸3ml，置水浴中加熱1小時，放冷，濾過，濾液用醋酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合併醋酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。
另取地錦草對照藥材1g，加水煎煮1小時，濾過，濾液濃縮至約20ml，加鹽酸3ml，同法製備對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以氯仿-醋酸丁酯-甲酸-水(4∶4∶1∶1)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
實驗例4-本發明薄層色譜的定性鑑別方法取(實施例1-14)膠囊內容物各0.5g，加水20ml使溶解，濾過，濾液加鹽酸6ml，置水浴中加熱1小時，放冷，濾過，濾液用正丁醇振搖提取2次，每次15ml，合併正丁醇液，蒸乾，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液。
另取地錦草對照藥材1g，加水煎煮1小時，濾過，濾液濃縮至約20ml，加鹽酸6ml，同法製備對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以氯仿-醋酸丁酯-甲酸-水(4∶4∶1∶0.5)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
實驗例5-本發明薄層色譜的定性鑑別方法取(實施例1-14)內容物各0.5g，加甲醇50ml，加熱回流2小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水20ml使溶解，用水飽和的正丁醇提取2次，每次20ml，合併正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨液，再用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20ml，棄去水液，正丁醇液蒸乾，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、三七皂苷R1對照品，加甲醇製成每1ml含0.5毫克的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
實驗例6-本發明薄層色譜的定性鑑別方法取(實施例1-14)內容物各0.5g，加乙醇50ml，加熱回流2小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合併乙酸乙酯液，用氨試液洗滌2次，每次20ml，棄去氨液，再用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20ml，棄去水液，正丁醇液蒸乾，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、三七皂苷R1對照品，加甲醇製成每1ml含0.5毫克的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(7∶3∶1)10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
實驗例7-本發明高效液相色譜的定性和定量分析方法照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；甲醇-0.05％磷酸溶液(15∶85)為流動相；檢測波長為250-290nm；柱溫為25-35℃。理論板數按沒食子酸峰計算不低於3000。
對照品溶液的製備精密稱取沒食子酸對照品適量，加50％甲醇製成每1ml含0.02毫克的溶液，即得。
供試品溶液的製備取本品裝量差異項下的內容物，研細，混勻，取約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續濾液，即得。
測定法分別吸取對照品溶液(實施例1-14)和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
實驗例8-本發明高效液相色譜的定性和定量分析方法照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；甲醇-0.05％磷酸溶液(20∶80)為流動相；檢測波長為250-280nm；柱溫為25-30℃。理論板數按沒食子酸峰計算不低於3000。
對照品溶液的製備精密稱取沒食子酸對照品適量，加50％甲醇製成每1ml含0.02毫克的溶液，即得。
供試品溶液的製備取本品裝量差異項下的內容物，研細，混勻，取約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續濾液，即得。
測定法分別吸取對照品溶液(實施例1-14)和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
實驗例9-本發明膠囊中沒食子酸含量限定的確定測定取本品10批，按正文中供試品溶液的製備方法操作，並按實驗例7中色譜條件測定沒食子酸的含量，結果見表4。
表4樣品測定結果(n＝3)
根據上述5批樣品的測定結果，每粒沒食子酸平均含量為21.2毫克，考慮藥材來源、操作過程等因素的差異，因此，以平均含量的70％為下限，規定本品每粒膠囊含沒食子酸(C7H605)計，不得少於14.8毫克，即每粒膠囊含以沒食子酸含量介於14.8-21.2毫克之間。
實驗例10-本發明實驗效果目的觀察本發明膠囊內容物對凝血時間的影響。
原理血液離體後，VII因子被異物(玻面接觸)所活化，在血小板因子及鈣離子的參與下，經過一系列反應生成纖維蛋白而凝血。
器材注射器、內徑1毫米、長10釐米的試管、載玻片、毛細玻管(內徑1毫米、長10釐米)、灌胃針頭、大頭針、秒表、眼科彎鑷、棉花、鼠籠。
試劑生理鹽水、本發明膠囊水相混旋液(1.25克/毫升)、苦味酸。
動物小白鼠18-22g。
方法(一)毛細玻管法取小白鼠80隻，隨機分為16組，苦味酸標記。給藥組灌胃本發明膠囊水相混旋液0.4毫升/20克，60分鐘後，用玻璃毛細管插入小鼠內眥球後靜脈叢，深約4-5毫米。自血液流進管內開始計時。血液注滿後取出毛細管平放於桌上。每隔30秒，折斷兩端毛細管約0.5釐米，並緩慢向左右拉開，觀察折斷處是否有血凝絲至血凝絲出現為止，所歷時間即為血凝時間。空白對照組灌胃同等體積生理鹽水，測定並記錄其凝血時間。
表5本發明對小鼠凝血時間的影響(毛細玻管法)
注與空白對照組比較**P＜0.001*P＜0.01(二)玻片法小鼠分組，標記及給藥方法和劑量同上。給藥後60分鐘，用眼科彎鑷迅速摘去小鼠一側眼球，即有血液流出。於載玻片的兩端各滴一滴血，血滴直徑約5毫米，立即用秒表計時。每隔30秒用清潔大頭針自血滴邊緣向裡輕輕拔動一次，並觀察有無血絲挑起。從採血開始至挑起血絲止，所歷時間即凝血時間。另一滴血供後復驗。記錄凝血時間。空白對照組方法平行操作。
表6本發明對小鼠凝血時間的影響(玻片法)
注與空白對照組比較**P＜0.001*P＜0.01三七止血膠囊，顧名思義，其臨床藥效最直接就是用於出血的治療，本發明中通過測定對不同工藝、處方下膠囊內容物的小鼠凝血時間的數據發現當在對比例中三七的粉碎粒度為60目時，膠囊內容物的凝血效果變得不明顯，而且不穩定，這提示三七全粉入藥時應該將其粉碎達到一定粒度時，效果比較明顯，本發明中，當粉碎粒度為90-150目時，凝血效果較好。鑑於三七粉碎粒度為150目時，膠囊內容物流動性不好，所以粉碎粒度為90-125目較好，其中優選100目。
權利要求
1.一種三七止血膠囊，是由地錦草850-2000重量份、三七50-200重量份和適量藥用輔料製成的膠囊劑，其特徵在於將三七粉碎為粒度90-125目的細粉。
2.根據權利要求1所述三七止血膠囊，其特徵在於三七粉碎為粒度100目的細粉。
3.權利要求1-2所述三七止血膠囊的製備方法，其特徵在於按照以下步驟製備(一)稱量按照上述用量稱取地錦草和三七；(二)煎煮和濃縮地錦草加水煎煮2次，第一次加10-12倍量水，煎煮1.5-2.5小時，第二次加8-12倍量水，煎煮0.5-1.5小時，合併濾液，濾液濃縮至相對密度為1.35-1.48的稠膏；(三)粉碎取三七，粉碎，過90-125目篩，得三七細粉；(四)混勻與制粒取上述稠膏、三七細粉及適量輔料，制粒，烘乾，整粒，得到膠囊顆粒；(五)將上述膠囊顆粒填充為膠囊。
4.根據權利要求3所述三七止血膠囊的製備方法，其特徵在於所述步驟(二)中地錦草加水煎煮2次，第一次加10-12倍量水，煎煮1-2.5小時，第二次加8-12倍量水，煎煮0.5-1小時，合併濾液，濾液濃縮至相對密度為1.35-1.40的稠膏。
5.根據權利要求4所述三七止血膠囊的製備方法，其特徵在於所述步驟(二)中地錦草加水煎煮2次，第一次加12倍量水，煎煮2小時，第二次加10倍量水，煎煮1小時，合併濾液，濾液濃縮至相對密度為1.40的稠膏。
6.權利要求1-2所述三七止血膠囊的質量控制方法，其特徵在於按照以下步驟進行(一)取待測膠囊內容物0.5g，加水使溶解，濾過，濾液加無機酸，置水浴中加熱1小時，放冷，濾過，濾液用疏水有機溶劑振搖提取2次，合併有機溶劑，蒸乾，殘渣加甲醇使溶解，得到供試品溶液；(二)另取地錦草對照藥材1g，加水煎煮1小時，濾過，濾液加無機酸，置水浴中加熱1小時，放冷，濾過，濾液用疏水有機溶劑振搖提取2次，合併有機溶劑，蒸乾，殘渣加甲醇使溶解，得到對照藥材溶液；(三)吸取上述兩種相同體積的溶液，分別點於同一矽膠薄層板上，以氯仿-醋酸丁酯-甲酸-水(4∶4∶1∶1)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
7.權利要求1-2所述三七止血膠囊的質量控制方法，其特徵在於按照以下步驟進行(一)取待測膠囊內容物0.5g，加甲醇，加熱回流，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水使溶解，用水飽和的正丁醇提取2次，合併正丁醇液，用氨試液洗滌2次，棄去氨液，再用正丁醇飽和的水洗滌2次，棄去水液，正丁醇液蒸乾，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；(二)另取人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、三七皂苷R1對照品，加甲醇製成每1ml含0.5毫克的混合溶液，作為對照品溶液；(三)吸取上述相同體積兩種溶液，分別點於同一矽膠薄層板上，以氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
8.權利要求1-2所述三七止血膠囊的質量控制方法，其特徵在於按照以下步驟進行(一)對照品溶液的製備精密稱取沒食子酸對照品適量，加50％甲醇製成每1ml含0.02毫克的溶液，即得；(二)供試品溶液的製備取本品裝量差異項下的內容物，研細，混勻，取約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，密塞，稱定重量，放冷，再稱定重量，用50％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續濾液，即得；(三)用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；甲醇-0.05％磷酸溶液(15-30∶70-85)為流動相；檢測波長為250-290nm；柱溫為25-35℃；理論板數按沒食子酸峰計算不低於3000；測定法分別吸取對照品溶液和供試品溶液注入液相色譜儀，測定。
9.根據權利要求8所述三七止血膠囊的質量控制方法，其特徵在於所述三七止血膠囊中沒食子酸含量介於14.8到21.2毫克之間。
全文摘要
本發明公開了一種三七止血膠囊及其製備方法和質量控制方法，本發明所述的三七止血膠囊是地錦草、三七和藥用輔料組成，本發明的藥物採用科學優化的優化工藝，通過對工藝和質量標準的改進。發明中採用地錦草850－2000重量份、三七50－200重量份和適量藥用輔料製成的膠囊劑，將三七粉碎為粒度90－125目的細粉。本發明的膠囊具有療效好、適用人群廣、使用方便的優點，可以行瘀止血，消腫，定痛。用於吐血，衄血，血痢血崩，產後流血不止，月經過多及外傷出血。
文檔編號A61P7/04GK101019915SQ20071009006
公開日2007年8月22日 申請日期2007年3月27日 優先權日2007年3月27日
發明者楊文龍 申請人:楊文龍