純化10-脫乙醯基漿果赤黴素Ⅲ除去10-脫乙醯基-2-脫苯甲醯基-2-戊烯醯基漿果赤黴素...的製作方法

2023-10-11 19:58:19 2

專利名稱：純化10-脫乙醯基漿果赤黴素Ⅲ除去10-脫乙醯基-2-脫苯甲醯基-2-戊烯醯基漿果赤黴素 ...的製作方法
純化10-脫乙醯基漿果赤黴素III除去10-脫乙醯基-2-脫苯甲醯基-2-戊烯醯基漿果赤黴素III的方法本發明涉及不含有10-脫乙醯基-2-脫苯曱醯基-2-戊烯醯基漿果赤黴素 III的10-脫乙醯基漿果赤黴素III的製備。該雜質的除去是通過將10-脫乙醯基漿果赤黴素III轉化為相應的 7，10-二-三氯乙酸酯、然後進行色語純化和羥基解封閉來實現的。根據該方 法純化的10-脫乙醯基漿果赤黴素III可以方便地用於半合成具有紫杉烷骨 架的抗腫瘤藥物，避免了純化除去相應的2-脫苯曱醯基-2-戊烯醯基類似物 的麻煩。 引言10-脫乙醯基漿果赤黴素III Ol是用於半合成具有有效抗腫瘤活性的藥 物如多西他賽和紫杉醇的起始物。10-脫乙醯基漿果赤黴素III由紫杉 (7kx:附)屬植物提取分離得到。提取產物還含有可變量的相關化合物(參見下 表)，這取決於植物材料的來源。 一般而言，可商購獲得的10-脫乙醯基漿 果赤黴素III中含有的雜質在14-或19-位具有另外的羥基或在7-和13-位具 有相反的構型。其它雜質在13-位被苯基異絲氨酸殘基取代，其胺官能團與丙酸、丁 酸、惕各酸或苯曱酸殘基連接。而且，IO-脫乙醯基漿果赤黴素III含有一種另外的代謝物im，其在2-位不具有苯甲醯基官能團，而是攜帶有戊烯醯基殘基，其特別是被鑑定為惕各酸殘基(B. Gabetta等，J. Nat. Prod. 58, 1508,1995)。由於其具有與IO-脫乙醯基漿果赤黴素III共結晶的傾向，通 常這種雜質不能通過結晶除去，其在商購的IO-脫乙醯基漿果赤黴素III中 的含量為0.3-1%。而且，昂貴的色語純化僅能實現其含量的部分且不令人 滿意的降低。當由10-脫乙醯基漿果赤黴素III製備抗腫瘤藥時，這種雜質經歷與10- 脫乙醯基漿果赤黴素III相同的半合成過程，產生相應的2-脫苯甲醯基-2-戊烯醯基衍生物，將其除去極為麻煩。為此，例如，美國藥典允許在半合成紫杉醇中存在相關量(至多0.7%) 的2-脫苯甲醯基-2-戊烯醯基紫杉醇。(i) r-h(m) r=cci3co表-商購的10-脫乙醯基漿果赤黴素中含有的主要雜質RiR2R3 4RsBz(i-OHOHa-OHHInEtCOIbBza-OHOHa-OHHIbPrCOIcBzp-OHHp-OHHIcTiglIdBzp-OHHot-OHOHIdBzleBza^)HHa-OHHIITiglp-OHHa-OHH發明內容本發明涉及純化10-脫乙醯基漿果赤黴素III除去10-脫乙醯基-2-脫苯
甲醯基-2-戊烯醯基漿果赤黴素iiiO]Q的方法，其中戊烯醯基殘基是惕各酸 殘基。因此，才艮據本發明純化的io-脫乙醯基漿果赤黴素m使得可獲得不骨架的抗腫瘤藥物。10-脫乙醯基漿果赤黴素III可容易地被轉化為7，10-二-三氯乙醯基衍生物an)。該轉化可根據已知的酯化方法通過用三氯乙酸活性衍生物處理來進行。優選地，IIL通過在約O'C、優選-5至+5。C的溫度下使用吡咬或吡 啶-二氯甲烷混合物作為溶劑與三氯乙醯氯反應來獲得。HPLC分析顯示 (III)含有約2%作為雜質的相應的10-和7-單乙醯化產物以及雜質(II) 7,10-二-三氯乙酸酯，其量與用作起始原料的io-脫乙醯基漿果赤黴素in中的oi)的量成比例。已經令人驚奇地發現後一種雜質Oil的二-三氯乙醯基衍生物具有與二 -三氯乙醯基io-脫乙醯基漿果赤黴素in (ni)顯著不同的色諳行為。事實上，當三氯乙醯化產物在少量珪膠、優選10-20重量份、更優選 15重量份的矽膠上進行柱色鐠處理並使用二氯甲烷或二氯甲烷-乙酸乙酯 混合物洗脫時，7，10-二-三氯乙醯基10-脫乙醯基漿果赤黴素III (TI睡洗 脫，而相應的2-苯甲醯基-2-戊烯醯基類似物與單乙醯化產物一起保留在固 定相上。使用比二氯甲烷極性更高的溶劑例如丙酮或曱醇能夠回收這些雜 質。所得的7，10-二-三氯乙醯基漿果赤黴素III腿可這樣被用於通過13-位與適宜活化的側鏈的酯化來半合成抗腫瘤藥物。因此，所獲得的色鐠純度高於99。/o的衍生物HL的用途是本發明的另一個實施方案。實際上，它 的優勢在於在7-位和10-位均存在三氯乙醯基保護基團，而且不存在2-脫苯甲醯基-2-戊烯醯基類似物。這就避免了與所選擇的側鏈在7-和/或10-位 發生另外的且不希望的酯化和形成不能容易地被除去的雜質。因此，13-位與適宜側鏈酯化後從7-和10-位上和從側鏈上除去保護基團使得可獲得 不含有二(苯基異絲氨醯基)-類似物的多西他賽或其前體(具有適宜的被保護的側鏈)。
另一方面，可通過鹼處理、優選通過與氫氧化銨在適宜的溶劑如甲醇或甲醇-二氯甲烷混合物或四氫呋喃中反應由產物am(如上所述純化)來再生不含有2-苯曱醯基-2-戊烯醯基類似物和其它雜質的10-脫乙醯基漿果赤黴素m。通過用適宜的溶劑如乙腈、丙酮或甲醇結晶，獲得色鐠純度高於99。/。且不含有作為雜質的化合物(H)的10-脫乙醯基漿果赤黴素III。因此，所獲得的IO-脫乙醯基漿果赤黴素III可方便地用於製備不含有 2-脫苯甲醯基-2-戊烯醯基-紫杉醇的半合成紫杉醇。紫杉醇可通過任何^f吏得可將io-脫乙醯基漿果赤黴素in轉化為N-脫苯甲醯基紫杉醇的方法、然後進行苯甲醯化來獲得。例如在US 20050049297中公開了一種用於製備 N-脫苯曱醯基紫杉醇的便利方法。因此，本發明的一個另外的目的是不含有2-脫苯甲醯基-2-戊烯醯基-紫杉醇的半合成紫杉醇和含有其的藥物組合物。使用以下所迷實施例對本發明進行更為詳細的說明。 實施例1 — 10-脫乙醯基-7,10-二三氯乙醯基漿果赤黴素III am在攪拌下，在0-5。C下用在60ml吡啶中的6.6ml三氯乙醯氯處理含有 0.4% 2-脫苯甲醯基-2-戊烯醯基類似物作為雜質的10-脫乙醯基漿果赤黴素 III (15 g)。使用100ml 二氯甲烷和100ml 4N的鹽酸稀釋該混合物。分離各 相，用100ml 4N的鹽酸、然後用500ml用氯化鈉飽和的水洗滌有機相。 將有機相濃縮至幹，用100ml曱苯吸收殘餘物。通過過濾回收固體(24.9g)， 重新溶解在125ml 二氯曱烷中並通過在375g Kieselgel 60 Merck上用二氯 甲烷洗脫進行柱色譜處理來進行純化。收集含有III的級分並加入甲苯: 將所得的沉澱物濾出並在50'C真空乾燥，得到17.8gHPLC純度高於99% 的辺。HPLC-MS分析顯示沒有(II)二-三氯乙酸酯存在。 實施例2-不含有2-脫苯甲醯基-2-戊烯醯基類似物的10-脫乙醯基漿果赤 黴素III在惰性氣氛下，將如實施例1中所述獲得的10-脫乙醯基-7，10-二-三氯 乙醯基漿果赤黴素III (17.8 g)溶解在36ml四氫呋喃中並在攪拌下用3.9ml 濃氫氧化銨處理30分鐘。用乙腈稀釋該溶液，然後濃縮直到開始結晶，此 後將產物過濾並用丙酮重結晶，得到iog io-脫乙醯基漿果赤黴素ni，其HPLC純度高於99%且不含有2-脫苯甲醯基-2-戊烯醯基漿果赤黴素III。 實施例3 -不含有2-脫苯甲醯基-2-戊烯醯基類似物的紫杉醇如US 2005/0049297 Al的實施例V-VII中所述製備N-脫苯甲醯基紫杉 醇(700g),用根據上文實施例2純化的10-DAB III (因此不含有2-脫苯甲醯 基-2-戊烯醯基類似物)作為原料，此後將其溶解在14L乙腈中，加入120ml 三乙胺並用107ml苯甲醯氯處理。將反應混合物在室溫下攪拌半小時並用21L含有0.1%乙酸的水稀釋。 過濾固體物質，用3L 3:2的水-乙腈混合物洗塗並在50。C真空乾燥。 獲得約700g乾燥的固體物質，將其用2:1的環己烷-丙酮結晶並真空乾燥， 獲得600g不含有2-脫苯甲醯基-2-戊烯醯基紫杉醇的紫杉醇。
權利要求
1.HPLC純度高於99％且不含有2-脫苯甲醯基-2-戊烯醯基漿果赤黴素III 7，10-二-三氯乙醯基衍生物的10-脫乙醯基-7，10-二-三氯乙醯基漿果赤黴素III。
2. 純度高於99%且不含有2-脫苯甲醯基-2-戊烯醯基漿果赤黴素III 的10-脫乙醯基漿果赤黴素III。
3. 製備權利要求1的不含有10-脫乙醯基-2-脫苯甲醯基-2-戊烯醯基 7，10-二-三氯乙醯基漿果赤黴素III的10-脫乙醯基-7，10-二-三氯乙醯基漿 果赤黴素III的方法，其包括-用三氯乙酸活性衍生物處理粗品10-脫乙醯基漿果赤黴素III;-進行矽膠色鐠處理並使用二氯甲烷或二氯甲烷-乙酸乙酯混合物洗脫7，10-二-三氯乙醯基-10-脫乙醯基漿果赤黴素III; -任選的使用比二氯甲烷極性更高的溶劑如丙酮或甲醇回收相應的2-脫苯甲醯基-2-戊烯醯基雜質和單乙醯化產物。
4. 權利要求3所述的方法，其中第一步通過在-5至+5。C的溫度下在吡 啶中或在吡啶-二氯曱烷混合物中與三氯乙醯氯反應來進行。
5. 權利要求3或4所述的方法，其中三氯乙醯化產物的色諳處理使用 相對於權利要求3或4中獲得的粗製7，10-二-三氯乙醯基-10-脫乙醯基漿果 赤黴素III的重量而言10至20重量份的矽膠進行。
6. 製備純度高於99。/。且不含有2-脫苯甲醯基-2-戊烯醯基漿果赤黴素 III的10-脫乙醯基漿果赤黴素III的方法，其通過將權利要求3的10-脫乙 醯基-7，10-二-三氯乙醯基漿果赤黴素III進行鹼處理、然後進行結晶來實 現。
7. 權利要求6所述的方法，其中鹼處理通過在適宜溶劑如甲醇、甲醇 -二氯甲烷混合物或四氫呋喃中與氫氧化銨反應來進行。
8. 權利要求6或7所述的方法，其中10-脫乙醯基漿果赤黴素III的結 晶使用選自乙腈、丙酮或甲醇的溶劑來進行。
9. 製備紫杉醇的方法，其包括根據權利要求6-8中任一項製備10-脫 乙醯基漿果赤黴素III並將其轉化成N-脫苯甲醯基紫杉醇，然後進行苯甲 醯化。
10. 不含有2-脫苯甲醯基-2-戊烯醯基-紫杉醇的半合成紫杉醇。
11. 含有與適宜載體混合的權利要求10的紫杉醇的藥物組合物。
全文摘要
通過純化10-脫乙醯基-7，10-二-三氯乙醯基漿果赤黴素Ⅲ、隨後鹼水解7和10位的保護基團來製備HPLC純度高於99％且不含有2-脫苯甲醯基-2-戊烯醯基漿果赤黴素Ⅲ的10-脫乙醯基-7，10-二-三氯乙醯基漿果赤黴素Ⅲ的方法。
文檔編號C07D305/14GK101163688SQ200680011848
公開日2008年4月16日 申請日期2006年4月7日 優先權日2005年4月12日
發明者A·甘比尼, B·加貝塔 申請人:因德納有限公司