抗人cd19鼠免疫球蛋白可變區基因及用途的製作方法

2023-10-11 15:32:04 2

專利名稱：抗人cd19鼠免疫球蛋白可變區基因及用途的製作方法
技術領域：
本發明屬生物技術，主要涉及鼠免疫球蛋白重鏈和輕鏈可變區基因，尤其涉及抗人CD19鼠免疫球蛋白可變區基因，及在製備B淋巴細胞惡性腫瘤靶向治療藥物中的用途。
背景技術：
血液系統腫瘤如白血病、淋巴瘤是嚴重危害人類健康的頑症，化學治療(化療)仍然是當前治療血液系統惡性腫瘤的主要方法，但常規化療對腫瘤細胞與正常細胞之間的選擇性較差，因而毒副作用較大，且反覆非根治性劑量的化療，又容易誘生腫瘤細胞的耐藥，最終，許多患者因耐藥腫瘤復發或大劑量化療致嚴重毒副作用如嚴重感染、出血、重要臟器功能衰竭等而告治療失敗。
與化療比較，單克隆抗體靶向治療具有良好的選擇性和特異性，它們只殺傷表達靶分子的細胞，而不損傷無靶分子表達的血細胞成分和組織器官細胞，從而可大大提高靶向治療的特異性，降低藥物的全身毒副作用。有效的靶向治療取決於良好的先導分子，系列特異性表面分化抗原單抗作為先導分子，將藥物或毒素特異地帶到腫瘤細胞膜上或細胞內，或通過完整抗體激活補體(CDC)或通過抗體介導細胞毒(ADCC)作用以達到殺滅白血病細胞的目的，有著無可替代的優勢。目前，大多數高親和力的單抗屬於鼠源性的，用鼠源性單抗進行臨床靶向治療可以發生嚴重的血清病或因產生人抗鼠免疫球蛋白(Ig)抗體(HAMA)而消除藥物的抗腫瘤作用等問題，限制了它們在臨床上的有效應用。為了在臨床上能大量重複使用鼠源性單抗治療血液系統惡性腫瘤，就必須最大限度地降低鼠源性單抗對人體的免疫原性。現知，抗體的免疫原性主要位於抗體恆定區(Fc)段，而識別抗原的部分(抗體的可變區)則抗原性較弱。通過適當的方法去除鼠Ig的Fc段而保留可變區Fv段，可以大大降低鼠單抗的免疫原性而保留其識別抗原的特異性。人鼠嵌合型鼠抗人B淋巴細胞表面抗原CD20單抗是該技術的典型代表，其研製方法是採用人B淋巴細胞來免疫Balb/C純種小白鼠，然後通過鼠-鼠雜交瘤技術研製出抗人CD20單抗雜交瘤細胞株。通過對該雜交瘤細胞株編碼抗人CD20免疫球蛋白可變區肽鏈的信使核糖核苷酸(mRNA)的擴增、克隆以及測序，並將編碼該抗體可變區基因與人免疫球蛋白恆定區基因進行重組表達，製成嵌合型人鼠CD20抗體(可變區為鼠源性，恆定區為人源性的基因工程抗體)，使該抗體保留識別CD20抗原的特性，從而特異性地識別人B系淋巴細胞包括表達該抗原的所有淋巴瘤細胞、白血病細胞以及正常細胞，而消除了由鼠源性恆定區對人體產生免疫反應的缺點，從而起到有效的治療作用。該抗體的臨床應用已經使B細胞系腫瘤的治療進入了一個嶄新的時代。該抗體雖然能用於B細胞惡性淋巴瘤的治療，但大多數急性B祖細胞白血病(B precursor leukemia，BPL)細胞卻不表達該抗原而無治療作用，CD19因它在99％以上的B系腫瘤細胞膜上表達，因而是一個更好的靶向治療B細胞腫瘤的靶點。要使一個鼠源性單抗能在臨床病人體內反覆使用的關鍵是鼠源性抗體的人源化基因改造，而人源化基因抗體研製的關鍵是該鼠源性抗體可變區基因的序列，因為抗體靶向作用的關鍵是該抗體的可變區，而編碼可變區基因序列是決定每一個單抗各自靶向作用的關鍵。

發明內容
本發明的一個目的是提供抗人CD19鼠免疫球蛋白(ZCH-4-2E8單抗)重鏈和輕鏈可變區基因，具有SEQ ID NO 1和SEQ ID NO 2的核苷酸序列，及SEQ IDNO 3和SEQ ID NO 4的胺基酸序列。
本發明的另一個目的是提供抗人CD19鼠免疫球蛋白(ZCH-4-2E8單抗)重鏈和輕鏈可變區基因在製備治療B淋巴細胞性惡性腫瘤藥物中的應用。B細胞性惡性腫瘤主要包括白血病、淋巴瘤。
採用單抗靶向治療某種特定血液腫瘤的基本條件是抗體必須能識別某種血液腫瘤細胞膜抗原。ZCH-4-2E8單抗具有良好的識別B淋巴細胞腫瘤細胞膜CD19抗原而不識別其他組織、細胞成分的特性，體外實驗表明，2E8免疫毒素對2E8陽性的急性B細胞性白血病細胞具有良好的選擇性殺傷作用，而對2E8陰性的細胞卻無作用，因此，該抗體具有潛在治療B細胞性惡性腫瘤包括白血病、淋巴瘤的應用前景。
本發明提供的抗人CD19鼠免疫球蛋白(ZCH-4-2E8單抗)重鏈和輕鏈可變區基因，是以小兒未分化型急性淋巴細胞白血病作為免疫原，致敏Balb/C純種小白鼠，通過鼠-鼠雜交瘤單抗技術研製成功的鼠抗人B淋巴細胞膜抗原[國際分化簇(CD)命名為CD19]的單抗，該抗體已在第6屆國際人類白細胞分化抗原協作組會議(HLDA6)上進行了全面鑑定並獲得了分化簇(CD)命名。由於同一CD號的單抗，其鼠免疫球蛋白亞類、與細胞的反應譜及某些生物學特性有所不同，某個抗體有它的特殊性，如2E8抗體屬鼠免疫球蛋白Mκ輕鏈(IgMκ亞類)，而我國國內中國醫學科學院血液學研究所僅有的另一個CD19克隆(HIB19a)，屬IgG1亞類。由於IgM型抗體具有更強的激活補體的作用，因而在靶向殺傷腫瘤細胞方面更顯其有效性，為2E8單抗用於B細胞惡性腫瘤的診斷和霸向治療提供了分子基礎。
由於鼠抗人CD19抗體ZCH-4-2E8並非天然存在，而是需要刻意應用特定的抗原進行免疫致敏動物，然後通過細胞融合、篩選、鑑定等一系列繁瑣而複雜的技術過程研製而成，本發明完成了對該抗人CD19抗體(ZCH-4-2E8)重鏈和輕鏈可變區基因的克隆、測序和完整2E8抗體免疫毒素體外靶向殺傷急性B淋巴細胞白血病Nalm-6細胞。基於該基因序列所研製的人源化基因工程抗體將可能對臨床B淋巴細胞性白血病及其它B淋巴細胞惡性腫瘤靶向治療具有十分重要的應用價值。


圖1.高純度的2E8單克隆細胞株的篩選頂排左、中、右圖分別為設門策略、陰性對照、2E8抗體陽性；標有紅色箭頭者(6個)分別為不同陽性程度的2E8亞克隆，其中亞克隆67B11為最佳克隆。
圖2.VH2E8PCR擴增電泳圖，其中M核酸標誌物DL2000，1.模板為2E8cDNA，2.模板為NS-1cDNA；結果顯示，採用同一對引物(29號和34號)在2E8細胞cDNA模板中擴增出VH2E8條帶，而在NS-1細胞cDNA模板中未擴增出條帶，說明該條帶為2E8雜交瘤細胞所特有。
圖3.VL2E8PCR擴增電泳圖，其中M核酸標誌物DL2000，1.模板為2E8cDNA，2.模板為NS-1cDNA，引物為37號和44號；3.模板為2E8cDNA，4.模板為NS-1cDNA，引物為37號和42號。採用引物37號和44號在2E8細胞cDNA模板中擴增出VL2E8條帶，而在NS-1細胞cDNA模板中沒有擴增出條帶，說明該條帶系2E8雜交瘤細胞所特有；採用另一對引物(37號和42號)雖然在2E8細胞cDNA模板中也擴增出條帶，但在NS-1細胞cDNA模板中也擴增出相同大小的片斷，說明由該對引物擴增出來的條帶並非2E8細胞所特有，而是編碼NS-1細胞中非分泌型κ輕鏈的基因片斷。
圖4.酶切電泳圖。M核酸標誌物DL2000，1～4重組質粒(VH2E8)DNA酶切產物，5～8重組質粒(VL2E8)DNA酶切產物。所切出的基因片斷大小與目的基因相同，說明VH2E8和VL2E8已分別被成功克隆如載體中。其中2、4、6、7泳道分別為無基因片斷插入的空載體。
圖5.抗人CD19抗原單抗ZCH-4-2E8的可變區重鏈基因(VH2E8)序列(兩個紅色箭頭之間的序列)。
圖6.抗人CD19抗原單抗ZCH-4-2E8的可變區輕鏈基因(VL2E8)序列(兩個紅色箭頭之間的序列)。
圖7.2E8-Gen免疫毒素(IT)對CD19-的K562(圖7A)、Molt-3(圖7B)和CD19+的Nalm-6(圖7C)白血病細胞的靶向殺傷作用。NC為空白對照，PBS(磷酸鹽緩衝液)、Gen為毒素三羥甲基異黃酮、純2E8為未接毒素的純化2E8抗體三者為對照組，IT為2E8抗體與毒素耦合物2E8-Gen。
具體實施例方式
本發明結合實施例，作進一步的說明。
實施例一本發明2個基因的核苷酸序列及胺基酸序列1、抗人CD19鼠免疫球蛋白重鏈可變區基因(單抗ZCH-4-2E8VH2E8)的核苷酸序列(SEQ ID NO 1)及胺基酸序列(SEQ ID NO 3)。
2、抗人CD19鼠免疫球蛋白輕鏈可變區基因(抗原單抗ZCH-4-2E8VL2E8)的核苷酸(SEQ ID NO 2)及胺基酸序列(SEQ ID NO 4)。
實施例二本發明提供的2個抗人CD19鼠免疫球蛋白可變區基因通過下列步驟獲得1、ZCH-4-2E8單抗的研製基本按KollerMilstein報告的鼠-鼠雜交瘤經典方法進行，以小兒急性未分化型淋巴細胞性白血病(uALL)細胞(其免疫表型為HLA-DR+，CD19+，CD10-，CD33-，TdT+，CD7-，CD41a-)作為免疫原，將107白血病細胞給8周齡雌性Balb/C小鼠作腹腔注射，每周一次，共4次，於第4次注射後第3天，脫臼殺死小鼠，無菌取脾細胞與處於對數生長期的小鼠骨髓瘤細胞株NS-1細胞按6∶1混合，以50％聚乙二醇(PEG，美國Sigma公司，分子量3350道爾頓)溶液作為融合媒介進行細胞融合，於96孔板(美國Falcon公司)中進行選擇性培養。於融合後第9～20天，隔日用免疫原細胞對培養上清進行間接免疫螢光法(IIF)篩選。陽性孔細胞經3次克隆化並連續2次100％孔達到陽性，即建立了能持續分泌2E8單抗的雜交瘤細胞系。經8個多月的連續傳代培養和反覆凍融，其分泌2E8單抗的能力穩定。以其腹水(螢光法效價1∶3200)或培養上清(螢光法效價1∶16)作為2E8單抗的來源。
2、最佳克隆的篩選將凍存於液氮(-196℃)中的2E8細胞復甦後進行亞克隆培養，獲得6孔單克隆細胞群，分別命名為67A10，67B8，67B11，67D2，67F9，67G10，通過異硫氰酸螢光素(FITC)標記的羊抗鼠免疫球蛋白(GAMIg-FITC)間接標記法比較各單克隆細胞群培養上清在Nalm-6細胞上的平均螢光強度，參見圖1。根據兩者平均螢光強度的對比，從中篩選出1個最佳亞單克隆細胞株67B11，再次克隆化得到亞克隆83C5，選用83C5作進一步的實驗。
3、2E8重、輕鏈基因(VH2E8、VL2E8)的擴增3.1總RNA的抽提和處理收集最佳克隆(83C5)的2E8雜交瘤細胞及鼠骨髓瘤細胞系NS-1細胞分別約8×106，以核糖核酸(RNA)抽提試劑盒(TRIZOL液)按說明書步驟抽提總RNA。最後溶於25μl DEPC(diethyl-pyrocarbonate，焦碳酸二乙酯)水中，並加入RNasin (核糖核苷酸酶抑制劑)至終濃度為1U/μl(單位/微升)。紫外分光光度計測定A260、A280及其比值，1％瓊脂糖電泳觀察總RNA。進行逆轉錄-多聚酶鏈反應(RT-PCR)前，各取2μl 2E8及NS-1總RNA，按照RQ1(無RNA酶的DNA酶試劑盒)說明的方法，消化總RNA中汙染的基因組DNA。
3.2總RNA的抽提(1)計數細胞，共8×106個活細胞；(2)常溫下1000轉/分鐘(rpm)離心15分鐘，棄上清；(3)沉澱中加入無菌生理鹽水後在1000rpm條件下離心15分鐘，重複洗滌2次；(4)向沉澱中加入8ml TRIZOL(1ml/106細胞)，立即用5ml無菌針筒反覆抽打剪切數分鐘；(5)將上述TRIZOL溶液按1ml/管轉入1.5ml帶蓋小塑料(eppendorf)管中，室溫下靜置5分鐘；(6)每管加入0.2ml氯仿，劇烈搖動15秒，室溫下靜置10分鐘；(7)4℃下12000g離心15分鐘，將水相轉入新的1.5ml的eppendorf管中，每管加入0.5ml異丙醇，立即搖勻，室溫下靜置10分鐘；(8)4℃下，12000g離心10分鐘；(9)棄上清，每管加入1.5ml 75％乙醇，混勻，4℃下，7500g離心5分鐘，棄上清；(10)真空乾燥機中晾乾，每管加入25μl無RNA酶的DEPC水溶解沉澱，-80℃冰箱保存。
3.3總RNA濃度的測定取出2μl新抽提的總RNA，加入98μl DEPC水混勻，紫外分光光度計(GeneQuant II)測定260吸光值(A260)及280吸光值(A280)，RNA實際濃度用如下公式計算 3.4總RNA凝膠電泳取新抽提的總RNA 3μl加入電泳上樣緩衝液5μl，1％瓊脂糖凝膠內含溴乙啶(EB)濃度0.5μg/ml，經100V直流電壓下電泳5分鐘，凝膠成像系統觀測結果並攝像保存。
3.5總RNA的處理取總RNA 1μl+無RNA酶的DNA酶(RNase-freeDnase)(1U/μl)10μl+RNasin(40U/μl)1μl+氯化鎂(25mM)1μl，總量達13μl，經37℃×1小時，90℃×5分鐘孵浴後立即置冰上待用。
3.6RT-PCR按照說明書，將RQ1無RNA酶的DNA酶處理過的總RNA進行逆轉錄(25μl體系)，並用DNA純化試劑盒(QIAquick)純化mRNA/cDNA雜交雙鏈。取純化的cDNA2.5μl進行PCR。
3.6.1RT反應體系取RQ1處理過的總RNA 13μl+寡聚脫氧胸苷[Oligo(dT)]1.5μl，總量達14.5μl，經65℃預變性5分鐘，立即置冰上，加入以下試劑DEPC水2.5μl+5倍緩衝液5μl+25mM dNTP(脫氧核苷混合物)0.5μl+RNA酶抑制劑1.5μl+逆轉錄酶(200U/μL)1μl至總體積25μl，經37℃，30分鐘孵浴以合成互補脫氧核糖核苷酸(cDNA)，置95℃5分鐘，然後移至4℃冰浴備用。
3.6.2PCR體系(1)50μl的PCR反應體系2.5μl純化的2E8或NS-1cDNA，10pmol的輕鏈或重鏈可變區上下遊引物各1μl，0.5μl 25mM的dNTP，5μl 10×高保真PCR緩衝液，2μl 50mM×MgSO4(硫酸鎂)溶液，0.2μl高保真Taq聚合酶(Platinum TaqHigh Fidelity)；引物序列如下重鏈可變區5』引物序列(SEQ ID NO 5)GAGGTGAAGCTGGTGGAGTC重鏈可變區3』引物序列(SEQ ID NO 6)
GGAGACGAGGGGGAAAAGCTTTGGGAAGGACTGACTCTC輕鏈可變區5』引物序列(SEQ ID NO 7)GATATCCAGATGACACAGACT輕鏈可變區3』引物序列(SEQ ID NO 8)GGATACAGTTGGTGCAGCATC(2)反應條件94℃預變性2分鐘，94℃變性30秒，57℃退火30秒，72℃延伸30秒，共38個循環；(3)最後一個循環完成後，加入1μl Taq DNA Polymerase(Taq DNA聚合酶)72℃延伸7分鐘；(4)取5μl PCR產物進行1％瓊脂糖凝膠電泳，同時加標準分子量標誌物DL2000，鑑定PCR產物片斷大小，分別命名為VL2E8和VH2E8基因。結果可觀察到350鹼基對(bp)左右的VL2E8條帶和400bp左右的VH2E8條帶。將前述陽性條帶切膠回收純化得到VL2E8和VH2E8基因。以作為該雜交瘤融合對象的NS-1細胞cDNA為模板的PCR產物電泳結果未見擴增條帶(參見圖2，圖3)。
4.VH2E8、VL2E8基因擴增產物的克隆和鑑定將VH2E8和VL2E8基因片段通過連接酶分別與克隆載體pGEM-T Easy連接，獲得的連接產物pGEM-TEasy/VH和pGEM-T Easy/VL，通過轉化DH5α感受態細菌，得到數十個白色菌落和數個藍色菌落，分別挑取4個白色菌落進行質粒擴增，抽提後進行核酸限制性內切酶EcoRI酶切處理，1％瓊脂糖電泳結果均可見350bp和400bp左右的目的片段(圖4)，其中M低核糖核苷酸(DNA)標準分子量標誌物；1VH2E8基因；2NS-1重鏈可變區基因(VHNS-1)；3VL2E8基因；4NS-1輕鏈可變區基因(VLVS-1)；5～8重組質粒pGEM-T Easy/VL的EcoRI酶切；9～12重組質粒pGEM-T Easy/VH的EcoRI酶切。
5.VH2E8、VL2E8基因序列測定和分析對陽性重組質粒純化後進行測序，VH2E8(圖5)和VL2E8(圖6)基因均符合小鼠Ig可變區框架結構。VH2E8基因全長366bp(見序列SEQ ID NO 1)，編碼122個胺基酸(見序列SEQ ID NO 3)，在美國國家生物技術信息中心(NCBI)上進行檢索，發現此重鏈可變區基因與小鼠免疫球蛋白重鏈的同源性達98％，胺基酸序列與小鼠Ig重鏈的同源性達86％，歸屬於小鼠Ig的VH基因。胺基酸序列分析結果顯示，重鏈可變區含有明確的4個框架區(FR)和3個抗原決定簇互補區(CDR)，在第22位和第96位為特徵性Cys(半胱氨酸)。VH2E8胺基酸序列結構框架如下1～25 FR126～33CDR134～50FR251～58CDR259～96FR397～110 CDR3111～122 FR4VL2E8基因全長321bp(見序列SEQ ID NO 2)，編碼107個胺基酸(見序列SEQ ID NO 4)，在NCBI上進行檢索，發現此輕鏈可變區基因與小鼠Igκ鏈的同源性達97％，胺基酸序列與小鼠Igκ鏈的同源性達95％，歸屬於小鼠Ig的Vκ基因。胺基酸序列分析結果顯示，輕鏈可變區含有明確的4個框架區(FR)和3個抗原決定簇互補區(CDR)，在第23位和第88位為特徵性半胱氨酸(Cys)。VL2E8胺基酸序列框架如下1～26 FR127～32 CDR133～49 FR250～52 CDR253～88 FR389～97 CDR398～107 FR4實施例三為證實2E8抗體的潛在臨床治療應用前景，我們將純化的2E8鼠源性完整抗體與三羥基異黃酮(Genistein，簡稱Gen)偶合製成2E8抗體的免疫毒素(2E8-Gen)，觀察其對2E8陽性(急性B淋巴細胞性白血病，Nalm-6)和陰性(急性T細胞白血病細胞系Mplt-3和髓性白血病細胞系)細胞進行靶向殺傷研究，結果發現，2E8-Gen對Nalm-6細胞(B細胞系白血病/淋巴瘤細胞株)具有很強的選擇性殺傷作用，經37℃48小時孵浴培養後，2E8-Gen組的細胞存活率僅5％，明顯高於對照組，且2E8-Gen對2E8陰性的Molt-3和K562細胞卻無殺傷作用，說明2E8-Gen具有良好的靶向殺傷B細胞白血病細胞的作用(參見圖7)，其中PBS為磷酸鹽緩衝液，Gen為游離三羥基異黃酮，純化2E8為純化的2E8鼠免疫球蛋白IgMκ。
無需進一步詳細闡述，相信採用前面所公開的內容，本領域技術人員可最大限度地應用本發明。因此，前面的實施方案應理解為僅是舉例說明，而非以任何方式限制本發明的範圍。
本發明涉及的序列120抗人CD19鼠免疫球蛋白可變區基因及用途1606170Patent In Version 2.12101211366213人工序列220
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223101a 79c 102g 84t4001GAGGTGAAGC TGGTGGAGTC GGGACCTGAG CTGAAGAAGC CTGGAGAGAC AGTCAAGATC 60TCCTGCAAGG CTTCCGGGTA TTCCTTCAGA AACTATGGAA TGAACTGGGT GAAGCAGGCT 120CCAGGAAAGG GTTTAAAGTG GATGGGCTGG ATAAACACCT ACAGTGGAGA GCCAACACAT 180GCTGATGACT TCAAGGGACG GTTTGCCTTC TCTTTGGAAA CCTCAGCTAG TACTGCCTAT 240TTGCAGATCA ACAACCTCAA AAATGAGGAC ATGGCTACAT ATTTCTGTGC AAGACGGGAT 300TTCGACGGAT ATTACTATGC TATGGACTAC TGGGGTCAAG GAACCTCAGT CACCGTCTCC 360TCAGAG 3662102211321212DNA213人工序列220
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22392a 71c 74g 84t4002GATATCCAGA TGACACAGAC TTCATCCTAC TTGTCTGTAT CTCTAGGAGG CAGAGTCACC 60ATTACTTGCA AGGCAAGTGA CCACATTAAT AATTGGCTAG CCTGGTATCA GCAGAAACCA 120GGAAATGCTC CTAGGCTCTT AATATCTGGT GCAACCAGTT TGGCAACTGG GATTCCTTCA 180AGATTCAGTG GCAGTGGATC TGGAAAGGAT TACACTCTCA GCATTACCAG TCTTCAGACT 240GAAGATGATG CTACTTATTA CTGTCAACAG TATTGGAGTA CTCCGTGGAC GTTCGGTGGA 300
GGCACCAAGC TGGAAATCAA A3212103211122212
213人工序列220
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223按照大腸桿菌偏愛的密碼子，設計了酶切位點和接頭肽的編碼hPTH(1-34)的合成基因4003EVKLVESGPE LKKPGETVKI SCKASGYSFR NYGMNWVKQA PGKGLKWMGW INTYSGEPTH 60ADAFKGRFAF SLETSASTAY LQINNLKNED MATYFCARRD FDGYYYAMDY WGQGTSVTVS 120SE 1222104211107212
213人工序列220
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4004DIQMTQTSSY LSVSLGGRVT ITCKASDHIN NWLAWYQQKP GNAPRLLISG ATSLATGIPS 60RFSGSGSGKD YTLSITSLQT EDDATYYCQQ YWSTPWTFGG GTKLEIK107210521120212
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223重鏈可變區5』引物序列
4005GAG GTG AAG CTG GTG GAG TC210621139212
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223重鏈可變區3』引物序列4006GGA GAC GAG GGG GAA AAG CTT TGG GAA GGA CTG ACT CTC210721121212
213人工序列220
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223輕鏈可變區5』引物序列4007GAT ATC CAG ATG ACA CAG ACT210821121212
213人工序列220
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223輕鏈可變區3』引物序列4008GGA TAC AGT TGG TGC AGC ATC
權利要求
1.抗人CD19鼠免疫球蛋白可變區基因，具有SEQ ID NO 1和SEQ ID NO 2的核苷酸序列。
2.抗人CD19鼠免疫球蛋白可變區基因，具有SEQ ID NO 3和SEQ ID NO 4的胺基酸序列。
3.根據權利要求1或2所述的抗人CD19鼠免疫球蛋白可變區基因在製備治療B淋巴細胞性惡性腫瘤藥物中的應用。
4.根據權利要求3所述的抗人CD19鼠免疫球蛋白可變區基因的用途，其特徵是在製備治療白血病藥物中的應用。
5.根據權利要求3所述的抗人CD19鼠免疫球蛋白可變區基因的用途，其特徵是在製備治療淋巴瘤藥物中的應用。
全文摘要
本發明提供抗人CD19鼠免疫球蛋白可變區基因，具有SEQ ID NO 1和SEQID NO 2的核苷酸序列，及SEQ ID NO 3和SEQ ID NO 4的胺基酸序列。本發明提供的單抗具有良好的識別B淋巴細胞腫瘤細胞膜CD19抗原而不識別其他組織、細胞成分的特性，體外實驗表明，該抗體對急性B細胞性白血病細胞具有良好的選擇性殺傷作用，因此，該抗體具有潛在治療B淋巴細胞性惡性腫瘤包括白血病、淋巴瘤的應用前景。可在製備治療B淋巴細胞性惡性腫瘤藥物中的應用。
文檔編號C07K16/18GK1884535SQ200610052289
公開日2006年12月27日 申請日期2006年7月4日 優先權日2006年7月4日
發明者湯永民 申請人:浙江大學