一種沙丁胺醇定量檢測方法與流程

2023-10-11 10:47:34 1

本發明涉及一種檢測方法，具體是一種沙丁胺醇定量檢測方法。

背景技術：

沙丁胺醇屬於β-受體激動劑，能使動物體內的營養成分由脂肪向肌肉轉移，表現出營養再分配效應，進而調控動物體的物質代謝，增強脂肪分解，促進蛋白質合成，顯著提高胴體瘦肉率和飼料報酬。但是，β-受體激動劑易在動物組織，特別是內臟中蓄積殘留，其通過食物鏈進入人體後可引發肌肉震顫、心律失常、頭痛等症狀，嚴重者可能危及生命。鑑於以上原因，我國已於1997年將沙丁胺醇、克倫特羅、萊克多巴胺等β-受體激動劑列為禁止在飼料和養殖家畜飲用水中使用的藥品。但是，目前仍有養殖者將其違法使用在畜牧業中，引發藥物殘留，從而對消費者健康造成嚴重損害。中國專利CN104251898公開了一種膜透析-液相色譜串聯質譜測定畜產品中多種β-受體激動劑殘留的方法，具體步驟如下：(1)樣品前處理：準確稱取5g粉碎好的樣品，加入20ml0.02mol/L乙酸銨緩衝液(用乙酸調成pH4-5)，混勻，超聲20分鐘，8000轉離心5分鐘，上清液移入透析袋中，將透析袋浸入盛有400-500ml0.02mol/L乙酸銨緩衝液(pH4-5)的棕色燒杯中，放入轉子，將燒杯置於磁力攪拌器上進行透析，攪拌轉速以杯內形成渦旋帶動透析袋轉動，透析袋不下沉為準，杯外罩上不透明袋子，時間為6h。透析完成後取出透析袋，將燒杯中的透析液調至pH至9-10，移入1L的梨形分流漏鬥中，加入40ml溶劑(環己烷:乙酸乙酯＝4:1)，萃取2次，合併萃取液進行旋蒸，用0.1％甲酸水溶液(v/v)定容成1.0ml，供HPLC-MS/MS測定分析；(2)HPLC-MS/MS測定：採用外標法測定β-受體激動劑的含量，液相色譜柱採用Thermo Hypersil Gold(2.1mm×100mm,3μm)，填料選自十八烷基鍵合相矽膠，流動相為0.1％甲酸水溶液A-乙腈B，流速為0.2ml/min，梯度洗脫條件為：t＝0min，96％A，4％B；t＝2min，96％A，4％B；t＝5min，77％A，23％B；t＝12min，5％A，95％B；t＝28min，44％A，56％B；t＝24min，5％A，95％B；t＝24.1min，96％A，4％B；t＝32min，96％A，4％B；質譜條件為：電噴霧電離源正離子掃描ESI+，多反應監測模式MRM；電噴霧電壓：5.5kV；離子源溫度：550℃，霧化氣壓力GSI：40psi；輔助氣流速GS2：60psi，氣簾氣壓力CUR：40psi；碰撞室入口電壓EP：10V；碰撞室出口電壓CXP：13V，監測分析物的離子對進行藥物殘留確證分析。上述方法先採用膜透析進行樣品前處理，之後再採用液相色譜串聯質譜測定畜產品中多種β-受體激動劑，然而，上述檢測方法存在樣品前處理複雜、檢測過程繁瑣、分析成本高、檢測周期長、儀器昂貴、難以操作等問題，難以進行現場操作，在實際應用中受到限制。

技術實現要素：

本發明的目的在於提供一種沙丁胺醇定量檢測方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種沙丁胺醇定量檢測方法，將3，4，9，10-苝四甲酸二酐與氫氧化鈉在水溶液中95℃～100℃下回流反應5h-6h，再將反應液進行酸化，即可製得3，4，9，10-苝四酸；所述3，4，9，10-苝四甲酸二酐與氫氧化鈉的物質的量之比為1：3～5；3，4，9，10-苝四甲酸二酐在水溶液中的濃度為0.04～0.06mol/L；酸化所用溶液為鹽酸溶液，其與3，4，9，10-苝四甲酸二酐的物質的量之比為1：20～30；通過向3，4，9，10-苝四酸/十六烷基三甲基溴化銨的複合體系中加入不同濃度的沙丁胺醇，通過沙丁胺醇濃度與螢光淬滅比率(F0-F)/F0之間的線型關係定量檢測出沙丁胺醇的濃度。

作為本發明進一步的方案：F0、F分別為3，4，9，10-苝四酸/十六烷基三甲基溴化銨的複合體系加入沙丁胺醇前後在488nm處的螢光強度值。

作為本發明再進一步的方案：還包括如下步驟：A.配置多組3，4，9，10-苝四酸/十六烷基三甲基溴化銨的複合溶液：分別將3，4，9，10-苝四酸水溶液與十六烷基三甲基溴化銨水溶液混合，反應2～5分鐘；B.向上述複合溶液中依次加入濃度範圍在0～60Um的沙丁胺醇水溶液與pH值為9.0～10.6的Na2HPO4-Na3PO4緩衝溶液，並用去離子水稀釋至10mL，繼續攪拌反應20～30分鐘，測量體系的螢光強度；C.以沙丁胺醇濃度為X軸，對應的螢光淬滅比率(F0-F)/F0為Y軸作圖，得到沙丁胺醇濃度與螢光猝滅比率(F0-F)/F0之間的線性方程，根據線性方程可計算出任意螢光強度F所對應的沙丁胺醇濃度；所述3，4，9，10-苝四酸與十六烷基三甲基溴化銨的終濃度分別為2.75×10-7mol和2.5×10-6mol；所述沙丁胺醇的終濃度分別為0、1.0Um、2.0Um、2.75Um、3.5Um、4.7Um、5.5Um和6.0Um。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：本發明沙丁胺醇定量檢測方法具有成本低，檢測精度高、操作簡單等優點。

具體實施方式

下面對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。

本發明實施例中，一種沙丁胺醇定量檢測方法，將3，4，9，10-苝四甲酸二酐與氫氧化鈉在水溶液中95℃～100℃下回流反應5h-6h，再將反應液進行酸化，即可製得3，4，9，10-苝四酸；所述3，4，9，10-苝四甲酸二酐與氫氧化鈉的物質的量之比為1：3～5；3，4，9，10-苝四甲酸二酐在水溶液中的濃度為0.04～0.06mol/L；，酸化所用溶液為鹽酸溶液，其與3，4，9，10-苝四甲酸二酐的物質的量之比為1：20～30；通過向3，4，9，10-苝四酸/十六烷基三甲基溴化銨的複合體系中加入不同濃度的沙丁胺醇，通過沙丁胺醇濃度與螢光淬滅比率(F0-F)/F0之間的線型關係定量檢測出沙丁胺醇的濃度。F0、F分別為3，4，9，10-苝四酸/十六烷基三甲基溴化銨的複合體系加入沙丁胺醇前後在488nm處的螢光強度值。還包括如下步驟：A.配置多組3，4，9，10-苝四酸/十六烷基三甲基溴化銨的複合溶液：分別將3，4，9，10-苝四酸水溶液與十六烷基三甲基溴化銨水溶液混合，反應2～5分鐘；B.向上述複合溶液中依次加入濃度範圍在0～60Um的沙丁胺醇水溶液與pH值為9.0～10.6的Na2HPO4-Na3PO4緩衝溶液，並用去離子水稀釋至10mL，繼續攪拌反應20～30分鐘，測量體系的螢光強度；C.以沙丁胺醇濃度為X軸，對應的螢光淬滅比率(F0-F)/F0為Y軸作圖，得到沙丁胺醇濃度與螢光猝滅比率(F0-F)/F0之間的線性方程，根據線性方程可計算出任意螢光強度F所對應的沙丁胺醇濃度；所述3，4，9，10-苝四酸與十六烷基三甲基溴化銨的終濃度分別為2.75×10-7mol和2.5×10-6mol；所述沙丁胺醇的終濃度分別為0、1.0Um、2.0Um、2.75Um、3.5Um、4.7Um、5.5Um和6.0Um。

實施例1：

本發明沙丁胺醇定量檢測方法，將3，4，9，10-苝四甲酸二酐與氫氧化鈉在水溶液中95℃～100℃下回流反應5h，再將反應液進行酸化，即可製得3，4，9，10-苝四酸；所述3，4，9，10-苝四甲酸二酐與氫氧化鈉的物質的量之比為1：3；3，4，9，10-苝四甲酸二酐在水溶液中的濃度為0.04～0.06mol/L；，酸化所用溶液為鹽酸溶液，其與3，4，9，10-苝四甲酸二酐的物質的量之比為1：20；通過向3，4，9，10-苝四酸/十六烷基三甲基溴化銨的複合體系中加入不同濃度的沙丁胺醇，通過沙丁胺醇濃度與螢光淬滅比率(F0-F)/F0之間的線型關係定量檢測出沙丁胺醇的濃度。F0、F分別為3，4，9，10-苝四酸/十六烷基三甲基溴化銨的複合體系加入沙丁胺醇前後在488nm處的螢光強度值。還包括如下步驟：A.配置多組3，4，9，10-苝四酸/十六烷基三甲基溴化銨的複合溶液：分別將3，4，9，10-苝四酸水溶液與十六烷基三甲基溴化銨水溶液混合，反應2分鐘；B.向上述複合溶液中依次加入濃度範圍在0～60Um的沙丁胺醇水溶液與pH值為9.0的Na2HPO4-Na3PO4緩衝溶液，並用去離子水稀釋至10mL，繼續攪拌反應20分鐘，測量體系的螢光強度；C.以沙丁胺醇濃度為X軸，對應的螢光淬滅比率(F0-F)/F0為Y軸作圖，得到沙丁胺醇濃度與螢光猝滅比率(F0-F)/F0之間的線性方程，根據線性方程可計算出任意螢光強度F所對應的沙丁胺醇濃度；所述3，4，9，10-苝四酸與十六烷基三甲基溴化銨的終濃度分別為2.75×10-7mol和2.5×10-6mol；所述沙丁胺醇的終濃度分別為0、1.0Um、2.0Um、2.75Um、3.5Um、4.7Um、5.5Um和6.0Um。

實施例2：

本發明沙丁胺醇定量檢測方法，將3，4，9，10-苝四甲酸二酐與氫氧化鈉在水溶液中95℃～100℃下回流反應6h，再將反應液進行酸化，即可製得3，4，9，10-苝四酸；所述3，4，9，10-苝四甲酸二酐與氫氧化鈉的物質的量之比為1：5；3，4，9，10-苝四甲酸二酐在水溶液中的濃度為0.04～0.06mol/L；，酸化所用溶液為鹽酸溶液，其與3，4，9，10-苝四甲酸二酐的物質的量之比為1：30；通過向3，4，9，10-苝四酸/十六烷基三甲基溴化銨的複合體系中加入不同濃度的沙丁胺醇，通過沙丁胺醇濃度與螢光淬滅比率(F0-F)/F0之間的線型關係定量檢測出沙丁胺醇的濃度。F0、F分別為3，4，9，10-苝四酸/十六烷基三甲基溴化銨的複合體系加入沙丁胺醇前後在488nm處的螢光強度值。還包括如下步驟：A.配置多組3，4，9，10-苝四酸/十六烷基三甲基溴化銨的複合溶液：分別將3，4，9，10-苝四酸水溶液與十六烷基三甲基溴化銨水溶液混合，反應5分鐘；B.向上述複合溶液中依次加入濃度範圍在0～60Um的沙丁胺醇水溶液與pH值為10.6的Na2HPO4-Na3PO4緩衝溶液，並用去離子水稀釋至10mL，繼續攪拌反應30分鐘，測量體系的螢光強度；C.以沙丁胺醇濃度為X軸，對應的螢光淬滅比率(F0-F)/F0為Y軸作圖，得到沙丁胺醇濃度與螢光猝滅比率(F0-F)/F0之間的線性方程，根據線性方程可計算出任意螢光強度F所對應的沙丁胺醇濃度；所述3，4，9，10-苝四酸與十六烷基三甲基溴化銨的終濃度分別為2.75×10-7mol和2.5×10-6mol；所述沙丁胺醇的終濃度分別為0、1.0Um、2.0Um、2.75Um、3.5Um、4.7Um、5.5Um和6.0Um。

沙丁胺醇定量檢測方法，將3，4，9，10-苝四甲酸二酐與氫氧化鈉在水溶液中95℃～100℃下回流反應5h-6h，再將反應液進行酸化，即可製得3，4，9，10-苝四酸；所述3，4，9，10-苝四甲酸二酐與氫氧化鈉的物質的量之比為1：3～5；3，4，9，10-苝四甲酸二酐在水溶液中的濃度為0.04～0.06mol/L；，酸化所用溶液為鹽酸溶液，其與3，4，9，10-苝四甲酸二酐的物質的量之比為1：20～30；通過向3，4，9，10-苝四酸/十六烷基三甲基溴化銨的複合體系中加入不同濃度的沙丁胺醇，通過沙丁胺醇濃度與螢光淬滅比率(F0-F)/F0之間的線型關係定量檢測出沙丁胺醇的濃度。F0、F分別為3，4，9，10-苝四酸/十六烷基三甲基溴化銨的複合體系加入沙丁胺醇前後在488nm處的螢光強度值。還包括如下步驟：A.配置多組3，4，9，10-苝四酸/十六烷基三甲基溴化銨的複合溶液：分別將3，4，9，10-苝四酸水溶液與十六烷基三甲基溴化銨水溶液混合，反應2～5分鐘；B.向上述複合溶液中依次加入濃度範圍在0～60Um的沙丁胺醇水溶液與pH值為9.0～10.6的Na2HPO4-Na3PO4緩衝溶液，並用去離子水稀釋至10mL，繼續攪拌反應20～30分鐘，測量體系的螢光強度；C.以沙丁胺醇濃度為X軸，對應的螢光淬滅比率(F0-F)/F0為Y軸作圖，得到沙丁胺醇濃度與螢光猝滅比率(F0-F)/F0之間的線性方程，根據線性方程可計算出任意螢光強度F所對應的沙丁胺醇濃度；所述3，4，9，10-苝四酸與十六烷基三甲基溴化銨的終濃度分別為2.75×10-7mol和2.5×10-6mol；所述沙丁胺醇的終濃度分別為0、1.0Um、2.0Um、2.75Um、3.5Um、4.7Um、5.5Um和6.0Um。

實施例3：

本發明沙丁胺醇定量檢測方法，將3，4，9，10-苝四甲酸二酐與氫氧化鈉在水溶液中95℃～100℃下回流反應6h，再將反應液進行酸化，即可製得3，4，9，10-苝四酸；所述3，4，9，10-苝四甲酸二酐與氫氧化鈉的物質的量之比為1：4；3，4，9，10-苝四甲酸二酐在水溶液中的濃度為0.05mol/L；，酸化所用溶液為鹽酸溶液，其與3，4，9，10-苝四甲酸二酐的物質的量之比為1：25；通過向3，4，9，10-苝四酸/十六烷基三甲基溴化銨的複合體系中加入不同濃度的沙丁胺醇，通過沙丁胺醇濃度與螢光淬滅比率(F0-F)/F0之間的線型關係定量檢測出沙丁胺醇的濃度。F0、F分別為3，4，9，10-苝四酸/十六烷基三甲基溴化銨的複合體系加入沙丁胺醇前後在488nm處的螢光強度值。還包括如下步驟：A.配置多組3，4，9，10-苝四酸/十六烷基三甲基溴化銨的複合溶液：分別將3，4，9，10-苝四酸水溶液與十六烷基三甲基溴化銨水溶液混合，反應4分鐘；B.向上述複合溶液中依次加入濃度範圍在0～60Um的沙丁胺醇水溶液與pH值為10.6的Na2HPO4-Na3PO4緩衝溶液，並用去離子水稀釋至10mL，繼續攪拌反應25分鐘，測量體系的螢光強度；C.以沙丁胺醇濃度為X軸，對應的螢光淬滅比率(F0-F)/F0為Y軸作圖，得到沙丁胺醇濃度與螢光猝滅比率(F0-F)/F0之間的線性方程，根據線性方程可計算出任意螢光強度F所對應的沙丁胺醇濃度；所述3，4，9，10-苝四酸與十六烷基三甲基溴化銨的終濃度分別為2.75×10-7mol和2.5×10-6mol；所述沙丁胺醇的終濃度分別為0、1.0Um、2.0Um、2.75Um、3.5Um、4.7Um、5.5Um和6.0Um。

對於本領域技術人員而言，顯然本發明不限於上述示範性實施例的細節，而且在不背離本發明的精神或基本特徵的情況下，能夠以其他的具體形式實現本發明。因此，無論從哪一點來看，均應將實施例看作是示範性的，而且是非限制性的，本發明的範圍由所附權利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權利要求的等同要件的含義和範圍內的所有變化囊括在本發明內。此外，應當理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但並非每個實施方式僅包含一個獨立的技術方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領域技術人員應當將說明書作為一個整體，各實施例中的技術方案也可以經適當組合，形成本領域技術人員可以理解的其他實施方式。