用作逆轉錄病毒的逆轉錄酶及dna聚合酶抑制劑的抗病毒藥的核苷類似物的製作方法

2023-10-21 04:04:12

專利名稱：用作逆轉錄病毒的逆轉錄酶及dna聚合酶抑制劑的抗病毒藥的核苷類似物的製作方法
技術領域：
本發明涉及核苷類似物，這些化合物作為包括B型肝炎病毒(HBV)的逆轉錄病毒的逆轉錄酶及DNA聚合酶抑制劑的抗病毒素。本發明提供了具有良好藥效參數的新型化合物、其製備方法、含這些化合物的藥物組合物以及用它們抑制包括HBV和HIV的病毒和瘤的方法。
背景技術：
國際專利申請WO88/00050描述了一系列3′-氟核苷，包括化合物2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷(FLG)和3′-氟胸苷(FLT)的抗逆轉錄病毒和抗-HBV的活性。作為抗-HIV劑，對後一化合物進行了臨床鑑定，儘管其抗病毒活性和藥物動力學良好，但它顯示了意想不到的毒性(Flexner等，J Inf Dis 170(6)1394-403(1994))。前一化合物FLG在體外具有良好的活性，但是本發明人已經檢測到其生物可利用率非常低，約4％，致使該化合物在活體內的用途至今仍限於腹膜內或皮下用藥的動物模型中。
美國專利4,963,662公開了一系列3′-氟核苷類及相應的三磷酸鹽化合物，並具體描述了FLT的5′-O-棕櫚醯衍生物，但沒有報導生物可利用率的任何改進。國際專利申請WO 93 13778描述了在基質的6位上改性的FLG衍生物，特別是用正丙氧基、環丁氧基、環丙基氨基、哌啶基或吡咯烷基改性。國際專利申請93 14103描述了在鳥嘌呤6位上的氧被氨基、醚、滷素或磺酸酯取代的FLG衍生物。
發明簡述本發明一方面提供了式I所示的化合物
其中R1選自羥基、氨基或羧基；任選在其上酯化/醯胺化的飽和或不飽和的C4-C22的、任選取代的脂肪酸或醇，或脂族L-胺基酸；R2為脂族L-胺基酸的殘基；L1為三官能連接基團；L2為不存在或雙官能連接基團；及其藥學上可接受的鹽。
本發明還提供了含有式I化合物或其鹽的藥物組合物及藥學上可接受的載體或稀釋劑。本發明另一方面提供了抑制HBV和逆轉錄病毒如HIV的方法，包括將式I化合物或鹽與逆轉錄病毒或HBV接觸，例如將有效量的化合物或鹽注入受逆轉錄病毒或HBV感染的人中。本發明也提供了式I化合物或鹽的用途，例如用於製備治療逆轉錄病毒或HBV感染的藥物。
在治療由逆轉錄病毒如HIV或HBV引起的病症中，式I化合物或鹽優選每天以50～1500毫克的量一次、兩次或三次給藥，優選每天二到三次以100～700毫克的量給藥。希望活性代謝物的血清濃度達到0.01～100微克/毫升的，優選0.1～5微克/毫升。
當R1為脂肪酸殘基，優選總共具有偶數個碳原子，有利的是癸醯(C10)、月桂醯(C12)、肉豆蔻醯(C14)、棕櫚醯(C16)、硬脂醯(C18)、二十烷醯(C20)或山嵛醯(C22)。脂肪酸優選總共具有10～22個碳原子，更優選16～20個碳原子，特別是18個碳原子。脂肪酸可以為不飽和並具有一個至三個雙鍵，特別是一個雙鍵。不飽和脂肪酸優選屬於n-3或n-6系列。常用的不飽和R1基團包括衍生自一元不飽和羧酸肉豆蔻腦酸、肉豆蔻反油酸(myristelaidic)、棕櫚油酸、棕櫚反油酸(palmiteladic)、n6-十八碳烯酸、油酸、反油酸、gandoic、芥酸、巴西烯酸或衍生自多元不飽和脂肪酸如亞油酸、γ-亞麻酸、花生四烯酸和α-亞麻酸。但是，當這些化合物要具有更強的穩定性和適用期時，作為脂肪酸的R1優選為飽和的。
作為脂肪醇的R1殘基優選對應於上述脂肪酸。脂肪醇也可含有短鏈醇，如甲醇、乙醇或丙醇的殘基。
R1為飽和或不飽和脂肪酸或醇時，可任選被至多五個相同或不同的取代基取代，取代基分別選自羥基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、C1-C6烷基醯基、氨基、滷素、氰基、疊氮基、氧代、巰基和硝基等。
適於R2和R1(如果存在R1的話)的脂族胺基酸包括L-丙氨酸、L-亮氨酸、L-異亮氨酸，最優選L-纈氨酸。為便於合成，優選R2和R1均為脂族胺基酸殘基，優選為相同的殘基。
第一個連接基團L1所表述的三官能是指連接基團具有至少三個官能團，包括至少兩個衍生自相應的羥基、氨基或羧基。其中氨基和羥基官能團是用於與R1和R2的羧基官能團酯化/醯胺化；連接基團中的羧基官能團是用於與R2中游離的α-氨基，或視情況而定與R1中游離的α-氨基醯胺化；或R1為脂肪醇時，與R1發生酯化。當R1本身定義為羥基、氨基或羧基時，其中羥基為三者中最適宜的，這時三官能連接基上某個官能團就是該羥基、氨基或羧基。
三官能連接基還含有第三個官能團，該官能團與下面將詳述的任選的第二個連接基團L2相連或母體核苷的5′位上的羥基相連，如2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷。合適的第三個官能團取決於任選的連接基團L2(如果存在的話)上相連官能團的性質，且可包括氨基、羥基、羰基、磺醯基、磷醯基、膦醯基、氨基甲醯基等。如果沒有L2，第一個連接基團L1上的第三個官能團一般含有可與核苷類似物的5′-O基團酯化的羧基。
與R1和R2相連的三官能連接基上的官能團優選為羥基官能團，並且該連接是與R1脂肪酸(如果是的話)和R2的羧基官能團的酯連接。進一步優選的實施方案是連接基上有一個游離的羥基作為R1，以及一個與R2的羧基酯化的羥基官能團。另一個實施方案是連接基上含有一個(任選被保護)的羧基R1，以及一個與R2的羧基酯化的羥基官能團。
有用的三官能L1基團，特別是能直接與核苷酯化的基團，包括式IIa或IIb所示的連接基 其中，A和A′定義為在連接基上的羥基與R1或R2的羧基之間不同的酯連接，或為在連接基上的羧基與脂肪醇R1的羥基之間的酯連接，或為在連接基上的氨基和在R1或R2的羧基之間的醯胺連接，或為在連接基的羧基與R1或R2的氨基之間的醯胺連接，或當R1本身為游離的羥基、氨基或羧基時，A和A′之一如上定義，另一為羥基、氨基或羧基，Rx為H或C1-C3烷基，T為鍵、-O-或-NH-；Alk為不存在、C1-C4烷基或C2-C4鏈烯基，任選如上所述是被取代的；以及m和n獨立地為0、1或2。
在本發明該方面的一個優選的實施方案中，R1或R2基團分別與式IIa最左邊的不同的功能性羥基酯化(通過A和A′)，同時右邊的羰基部分任選通過第二個連接基團L2，與核苷的5′-O-基酯化。
L1基團也可含有式IIb所示的連接基 其中Ar為飽和或不飽和，優選5或6個環原子的單碳環或雜環；A、A′、T、Alk、m和n如上定義。
式IIb中，Ar優選為芳基，如吡啶或特別為苯基，作為芳基部分其中帶R1和R2的臂，相對於連接基的剩餘部分分別為對和鄰、間和鄰、都為鄰、或優選對和間、均為對或均為間位。
式IIa和IIb中，下列m、n和Alk的組合是有利的mnAlk10亞甲基101，2-亞乙基11不存在11亞甲基111，2-亞乙基111，2-亞丙基12不存在12亞甲基111，2-亞乙基111，2-亞丙基由於R1和R2具有不同的結構，很明顯許多L1基團，特別是式IIa的基團，將定義為手性結構。因此本發明包括所有的對映體，如消旋體或＞80％對映純，優選＞95％對映純的化合物製劑。
特別優選的三官能連接基含有式IIc所示的甘油衍生物 其中，A為氫、脂族L-胺基酸酯的醯基殘基、或脂肪酸酯的醯基殘基，A′為脂族胺基酸殘基的醯基殘基，D為飽和或不飽和C2-C6二元羧酸殘基。式IIc所示的三官能連接在活體內水解或分解以釋放性能不變的化合物如甘油、L-胺基酸、脂肪酸(如果是的話)和二元羧酸，每一種通常均在身體安全地新陳代謝和/或排洩。A和A′優選均為脂族胺基酸殘基，最優選為相同的殘基，特別是L-纈氨酸或L-異亮氨酸的殘基。
當式IIc衍生物的二元羧酸部分直接與核苷的5′羥基官能團(或等同物)酯化時，可解析地將甘油部分定義為三官能連接L1，二元羧酸部分定義為二官能連接L2。
特別優選的二元羧酸殘基包括從草酸、丙二酸、丙醇二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、戊二酸、戊烯二酸、檸康酸、衣康酸、亞乙基丙二酸、中康酸、己二酸、烯丙基丙二酸、亞丙基丙二酸、氫化粘康酸、焦辛可酸和粘康酸等衍生的。二元羧酸殘基可任選被取代，例如被上述關於脂肪酸R1所列的取代基取代。羥基取代基可進一步與另一個L-胺基酸或脂肪酸殘基酯化。
一些上述二元羧酸本身可定義為三官能連接基。例如，羥基取代的二元羧酸如酒石酸或馬來酸提供了在本發明範圍內的許多構型。以酒石酸為例，羧基官能團可與核苷的5′-羥基官能團酯化(任選通過雙官能連接基L2)。羥基官能團可與R2和R1脂肪酸或胺基酸上不同的羧基進行酯化，同時剩餘的羧基可為游離或任選被保護，例如用常用的藥學上可接受的酯如甲酯或乙酯進行保護。可選的游離羧酸官能團的保護是與R1脂肪醇形成的酯，該酯含有一個或兩個與R2酯化的羥基官能團 上述酒石酸系列中有利的連接基通常如式IIe所述 以及其中R1和R2互換的異構體，其中R1和R2如上所示，p、q和r分別為0～5，優選0或1，且Ry是游離酸，R1酯或常用的藥學上可接受的羧基保護基，如甲酯、苄酯或特別是乙酯。
馬來酸系列的有利的連接具有式IIf 其中，Ry、p、q和R2如上定義，優選p和q為零。
本發明該方面優選的化合物包括5′-O-[3-甲氧基羰基-2-纈氨醯氧基-丙醯]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷，5′-O-[3-苄氧基羰基-2-纈氨醯氧基-丙醯]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷，5′-O-[3-甲氧基羰基-2-異亮氨醯氧基-丙醯]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷，5′-O-[3-苄氧基羰基-2-異亮氨醯氧基-丙醯]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷，5′-O-[4-甲氧基羰基-2，3-二纈氨醯氧基-丁醯]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷，5′-O-[4-苄氧基羰基-2，3-二纈氨醯氧基-丁醯]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷，5′-O-[4-甲氧基羰基-2，3-二異亮氨醯氧基-丁醯]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷，5′-O-[4-苄氧基羰基-2，3-二異亮氨醯氧基-丁醯]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷，特別優選衍生自L-馬來酸和L-酒石酸的化合物；以及相應地能在末端羧基官能團上構成常用的藥學上可接受的酯的衍生物。
特別有利的化合物包括5′-O-[3-乙氧基羰基-2-纈氨醯氧基-丙醯]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷，5′-O-[3-乙氧基羰基-2-異亮氨醯氧基-丙醯]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷，5′-O-[4-乙氧基羰基-2，3-二纈氨醯氧基-丁醯]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷，
5′-O-[4-乙氧基羰基-2，3-二異亮氨醯氧基-丁醯]-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷，特別是衍生自L-馬來酸和L-酒石酸的異構體。
在本發明另一相關方面中，R1和R2的一個可被刪除。
本發明該方面典型的化合物包括式Ia 其中Alk為任選取代的C1-C4烷基或C2-C4鏈烯基，R2為上述R1和R2定義的脂族L-胺基酸的酯殘基或脂肪酸的酯殘基。本發明該方面中的連接基可從α-羥基ω-羧酸如碳酸、乙醇酸、羥丙酸、羥丁酸、羥戊酸或羥己酸方便地製備。
式Ia的典型化合物包括2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5-O-[3-(L-纈氨醯氧基)-丙醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-纈氨醯氧基)-戊醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[6-(L-纈氨醯氧基)-己醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5-O-[3-(L-異亮氨醯氧基)-丙醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-異亮氨醯氧基)-戊醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[6-(L-異亮氨醯氧基)-己醯]鳥苷，及其藥學上可接受的鹽。
特別有利的式Ia化合物包括2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[4-(L-纈氨醯氧基)-丁醯]鳥苷，和2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5-O-[4-(L-異亮氨醯氧基)-丁醯]鳥苷，及其藥學上可接受的鹽。在活體內這些化合物中R2基團水解及脫除，遺留下活性端基，該端基能環化並促進母體核苷的有效釋放。
在本發明涉及的一方面中，脂肪酸殘基R1本身能用作連接基，將R2的脂族L-胺基酸殘基相連在脂肪酸烷基鏈的氨基、羥基或羧基上進行酯化/醯胺化，例如在β碳上。在該實施方案中，R1脂肪酸直接與核苷的5′-羥基(或等同物)酯化，通常此核苷具有已經酯化/醯胺化的R2基團。官能化的脂肪酸(羧基/羥基/氨基官能團被適當地保護)也可首先酯化到核苷上，然後在與R2偶聯前脫保護。根據該方面優選的實施方案中的連接基具有式IId所示結構 其中R2為脂族L-胺基酸殘基，p為0，1或2-20(任選包括雙鍵)，q為0-5，優選為0。典型的化合物包括2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-纈氨醯氧基)-丁醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-纈氨醯氧基)-己醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-纈氨醯氧基)-辛醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-纈氨醯氧基)-癸醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-纈氨醯氧基)-十二烷醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-纈氨醯氧基)-十四烷醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-纈氨醯氧基)-十六烷醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-纈氨醯氧基)-十八烷醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-纈氨醯氧基)-二十烷醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-纈氨醯氧基)-二十二烷醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-異亮氨醯氧基)-丁醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-異亮氨醯氧基)-己醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-異亮氨醯氧基)-辛醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-異亮氨醯氧基)-癸醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-異亮氨醯氧基)-十二烷醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-異亮氨醯氧基)-十四烷醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-異亮氨醯氧基)-十六烷醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-異亮氨醯氧基)-十八烷醯]鳥苷，2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-異亮氨醯氧基)-二十烷醯]鳥苷，
2′，3′-雙脫氧-3′-5-O-[2-(L-異亮氨醯氧基)-二十二烷醯]鳥苷，以及相應的n-3和n-6一元不飽和類似物，如6或9-十八烯醯基衍生物。
在式IId中，p和q優選為0，因此定義為乳酸衍生物，優選L-乳酸衍生物，如2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5-O-[2-(L-纈氨醯氧基)-丙醯]鳥苷；和2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5-O-[2-(L-異亮氨醯氧基)-丙醯]鳥苷及其藥學上可接受的鹽，其分解產物，乳酸和胺基酸均為生理上可很好接受的。
在第二連接基團L2所表述的雙官能是指具有兩個官能團的連接基，使得其在第一個連接基團L1和核苷的5′-O-基團之間作為間隔區或橋。例如任選的基團L2可含有式IIIa所示的連接基 其中R4和R4′為氫或C1-C4烷基。式IIIa中，R4優選氫、甲基、乙基或異丙基，R4′為氫。由於多種核苷類，如FLG母體化合物在其抑制病毒聚合酶之前，必須首先通過細胞酶磷醯化，式IIIa的連接基是有利的。本發明化合物的初級或其後的水解可在活體內釋放出一元磷醯化核苷，其能迅速轉化為二和三磷酸鹽。
任選的雙官能連接基團L2也可含有式IIIb所示的結構 其中R4和R4′分別為H或C1-C4烷基。
雙官能連接基的另一個基團具有式IIIc所示的結構
如上所述，優選的雙官能連接的基團含有α，ω-二羧酸C2-C6烷基衍生物，如琥珀酸，它們是任選取代的(例如用上述為脂肪酸R1定義的取代基)和/或為任選一元或多元不飽和，如n-3或n-6一元不飽和的。此類優選的基團如上所述。
儘管上述公開的內容集中在與二元羧酸L2基團相連的甘油L1基團，不難理解，大量的三官能連接基適用於和二羧酸L2基團一起，例如上述沒有最右端羰基的式IIa和IIb所示的結構。
本發明還包括含有常用的FLG前藥的R1(R2)L1L2-衍生物的雙重前藥，該常用的前藥可在活體內釋放FLG，如在FLG鳥苷基質的2和6位上的前藥衍生物。這種常用的FLG前藥的例子包括式IV所示的化合物 其中R1、R2、L1和L2如上定義；和R3為H、N3、NH2或OH或其藥學上可接受的醚或酯；和R3′為芳鍵或氫。
R3中有可能的藥學上可接受的酯包括上述R1相關的脂肪酸，如硬脂醯酯或油醯酯等或更短的酯，如乙醯酯或丁醯酯。其它有可能的酯包括R2的胺基酸衍生物或磷酸酯，如一磷酸酯。酯也可包括相應的脂肪酸或烷基芳基碳酸酯、氨基甲酸酯或磺酸酯。
R3中合適的藥學上可接受的醚包括C1-C6烷基、環烷基、C6-C12烷基芳基如苄基或甲基吡啶基，任何這些醚可被上述R1所述的取代基取代。有利的醚包括在上述WO93 13778中提及的醚，如正丙氧基、環丁氧基、環丙基氨基、哌啶子基或吡咯烷基等。
本發明主要參照一羥基化核苷FLG來描述，但是，很顯然相應的衍生物可從其它一羥基化核苷類似物製備，特別是該羥基對應於核苷的5′羥基官能團的情形。因此本發明的另一方面提供了式Ic化合物 其中，R1、R2、L1和L2如上定義，-O-nuc為帶D-或L-核苷類似物的一羥基的殘基。根據本發明這方面典型的核苷類包括無環核苷類似物如無環鳥苷，和環核苷類似物如ddI(2′，3′-雙脫氧肌苷)、ddC(2′，3′-雙脫氧胞苷)、d4T(2′，3′-雙脫氧胸苷)、FTC、拉米夫定，2′-脫氧-3′-硫代胞苷(-)對映體(3TC)、1592U89(4-[2-氨基-6-(環丙基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-環戊烯-1-甲醇)、AZT(疊氮胸苷)、DAPD(D-2，6-二氨基嘌呤二氧戊環)、F-ddA等，每一種均是核苷領域已知的。大量的一羥基L-核苷類正處於發展中，本發明也發現了這些化合物的用途。本發明這方面的化合物將具有母體化合物所顯示的相應用途，例如皰疹病毒感染對應於無環鳥苷衍生物，HIV對應於ddI、雙脫氧胸苷、ddC、拉米夫定、AZT1592U89，HBV對應於拉米夫定、FTC等。
有利的式Ic子群含有式Ic′所示的一羥基核苷類的衍生物
其中A、A′、Alk和O-nuc如上定義。上述式Ic′描述了A和A′在甘油部分的1和3位上，且L2在甘油的2位的化合物。可能的異構體為A和A′分別在甘油1和2位上或2和3位上，L2分別為3或2位上。
本發明這方面典型的化合物包括4′-O-[3-((2，3-二-L-纈氨醯氧基)-1-丙氧羰基)丙醯]無環鳥苷(acyclovir)，4′-O-[3-((2-羥基-3-L-纈氨醯氧基)-1-丙氧羰基)丙醯]無環鳥苷，4′-O-[3-((2，3-二-L-異亮氨醯氧基)-1-丙氧羰基)丙醯]無環鳥苷，4′-O-[3-((2-羥基-3-L-異亮氨醯氧基)-1-丙氧羰基)丙醯]無環鳥苷，4′-O-[3-((1，3-二-L-纈氨醯氧基)-2-丙氧羰基)丙醯]無環鳥苷，4′-O-[3-((1-羥基-3-L-纈氨醯氧基)-2-丙氧羰基)丙醯]無環鳥苷，4′-O-[3-((1，3-二-L-異亮氨醯氧基)-2-丙氧羰基)丙醯]無環鳥苷，4′-O-[3-((1-羥基-3-L-異亮氨醯氧基)-2-丙氧羰基)丙醯]無環鳥苷，5′-O-[3-((2，3-二-L-纈氨醯氧基)-1-丙氧羰基)丙醯]拉米夫定，5′-O-[3-((2-羥基-3-L-纈氨醯氧基)-1-丙氧羰基)丙醯]拉米夫定，5′-O-[3-((2，3-二-L-異亮氨醯氧基)-1-丙氧羰基)丙醯]拉米夫定，5′-O-[3-((2-羥基-3-L-異亮氨醯氧基)-1-丙氧羰基)丙醯]拉米夫定，5′-O-[3-((1，3-二-L-纈氨醯氧基)-2-丙氧羰基)丙醯]拉米夫定，5′-O-[3-((1-羥基-3-L-纈氨醯氧基)-2-丙氧羰基)丙醯]拉米夫定，5′-O-[3-((1，3-二-L-異亮氨醯氧基)-2-丙氧羰基)丙醯]拉米夫定，5′-O-[3-((1-羥基-3-L-異亮氨醯氧基)-2-丙氧羰基)丙醯]拉米夫定，5′-O-[3-((2，3-二-L-纈氨醯氧基)-1-丙氧羰基)丙醯]DAPD，5′-O-[3-((2-羥基-3-L-纈氨醯氧基)-1-丙氧羰基)丙醯]DAPD，5′-O-[3-((2，3-二-L-異亮氨醯氧基)-1-丙氧羰基)丙醯]DAPD，5′-O-[3-((2-羥基-3-L-纈氨醯氧基)-1-丙氧羰基)丙醯]DAPD，5′-O-[3-((1，3-二-L-纈氨醯氧基)-2-丙氧羰基)丙醯]DAPD，5′-O-[3-((1羥基-3-L-纈氨醯氧基)-2-丙氧羰基)丙醯]DAPD，5′-O-[3-((1，3-二-L-異亮氨醯氧基)-2-丙氧羰基)丙醯]DAPD，5′-O-[3-((1-羥基-3-L-異亮氨醯氧基)-2-丙氧羰基)丙醯]DAPD，5′-O-[3-((2，3-二-L-纈氨醯氧基)-1-丙氧羰基)丙醯]-2′，3′-雙脫氧肌苷，5′-O-[3-((2-羥基-3-L-纈氨醯氧基)-1-丙氧羰基)丙醯]-2′，3′-雙脫氧肌苷，5′-O-[3-((2，3-二-L-異亮氨醯氧基)-1-丙氧羰基)丙醯]-2′，3′-雙脫氧肌苷，5′-O-[3-((2-羥基-3-L-異亮氨醯氧基)-1-丙氧羰基)丙醯]-2′，3′-雙脫氧肌苷，5′-O-[3-((1，3-二-L-纈氨醯氧基)-2-丙氧羰基)丙醯]-2′，3′-雙脫氧肌苷，5′-O-[3-((1-羥基-3-L-纈氨醯氧基)-2-丙氧羰基)丙醯]-2′，3′-雙脫氧肌苷，5′-O-[3-((1，3-二-L-異亮氨醯氧基)-2-丙氧羰基)丙醯]-2′，3′-雙脫氧肌苷，5′-O-[3-((1-羥基-3-L-異亮氨醯氧基)-2-丙氧羰基)丙醯]-2′，3′-雙脫氧肌苷，5′-O-[3-((2，3-二-L-異亮氨醯氧基)-1-丙氧羰基)丙醯]雙脫氧胸苷，5′-O-[3-((2-羥基-3-L-異亮氨醯氧基)-1-丙氧羰基)丙醯]雙脫氧胸苷，5′-O-[3-((2，3-二-L-異亮氨醯氧基)-1-丙氧羰基)丙醯]雙脫氧胸苷，5′-O-[3-((2-羥基-3-L-異亮氨醯氧基)-1-丙氧羰基)丙醯]雙脫氧胸苷，5′-O-[3-((1，3-二-L-纈氨醯氧基)-2-丙氧羰基)丙醯]雙脫氧胸苷，5′-O-[3-((1-羥基-3-L-纈氨醯氧基)-2-丙氧羰基)丙醯]雙脫氧胸苷，5′-O-[3-((1，3-二-L-異亮氨醯氧基)-2-丙氧羰基)丙醯]雙脫氧胸苷，5′-O-[3-((1-羥基-3-L-異亮氨醯氧基)-1-丙氧羰基)丙醯]雙脫氧胸苷，4-[2-氨基-6-(環丙基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-環戊烯-1-甲醇相應的衍生物及其藥學上可接受的鹽。
本發明這方面化合物的子集也可含有式Id所示的化合物
其中R2和Alk如式Ia中所定義的，O-nuc如上定義。
式Id典型的化合物包括4′-O-[4-(L-纈氨醯氧基)-丙醯]無環鳥苷，4′-O-[5-(L-纈氨醯氧基)-戊醯]無環鳥苷，4′-O-[6-(L-纈氨醯氧基)-己醯]無環鳥苷，4′-O-[4-(L-異亮氨醯氧基)-丙醯]無環鳥苷，4′-O-[5-(L-異亮氨醯氧基)-戊醯]無環鳥苷，4′-O-[6-(L-異亮氨醯氧基)-己醯]無環鳥苷，5′-O-[4-(L-纈氨醯氧基)-丙醯]ddI，5′-O-[5-(L-纈氨醯氧基)-戊醯]ddI，5′-O-[6-(L-纈氨醯氧基)-己醯]ddI，5′-O-[4-(L-異亮氨醯氧基)-丙醯]ddI，5′-O-[5-(L-異亮氨醯氧基)-戊醯]ddI，5′-O-[6-(L-異亮氨醯氧基)-己醯]ddI，5′-O-[4-(L-纈氨醯氧基)-丙醯]雙脫氧胸苷，5′-O-[5-(L-纈氨醯氧基)-戊醯]雙脫氧胸苷，5′-O-[6-(L-纈氨醯氧基)-己醯]雙脫氧胸苷，5′-O-[4-(L-異亮氨醯氧基)-丙醯]雙脫氧胸苷，5′-O-[5-(L-異亮氨醯氧基)-戊醯]雙脫氧胸苷，5′-O-[6-(L-異亮氨醯氧基)-己醯]雙脫氧胸苷，5′-O-[4-(L-纈氨醯氧基)-丙醯]DAPD，5′-O-[5-(L-纈氨醯氧基)-戊醯]DAPD，5′-O-[6-(L-纈氨醯氧基)-己醯]DAPD，5′-O-[4-(L-異亮氨醯氧基)-丙醯]DAPD，5′-O-[5-(L-異亮氨醯氧基)-戊醯]DAPD，5′-O-[6-(L-異亮氨醯氧基)-己醯]DAPD，5′-O-[4-(L-纈氨醯氧基)-丙醯]拉米夫定，
5′-O-[5-(L-纈氨醯氧基)-戊醯]拉米夫定，5′-O-[6-(L-纈氨醯氧基)-己醯]拉米夫定，5′-O-[4-(L-異亮氨醯氧基)-丙醯]拉米夫定，5′-O-[5-(L-異亮氨醯氧基)-戊醯]拉米夫定，5′-O-[6-(L-異亮氨醯氧基)-己醯]拉米夫定，以及4-[2-氨基-6-(環丙基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-環戊烯-1-甲醇相應的衍生物。
式Id特別優選的化合物包括4′-O-[4-(L-纈氨醯氧基)-丁醯]無環鳥核，4′-O-[3-(L-異亮氨醯氧基)-丁醯]無環鳥核，5′-O-[4-(L-纈氨醯氧基)-丁醯]ddI，5′-O-[3-(L-異亮氨醯氧基)-丁醯]ddI，5′-O-[4-(L-纈氨醯氧基)-丁醯]雙脫氧胸苷，5′-O-[3-(L-異亮氨醯氧基)-丁醯]雙脫氧胸苷，5′-O-[4-(L-纈氨醯氧基)-丁醯]DAPD，5′-O-[3-(L-異亮氨醯氧基)-丁醯]DAPD，5′-O-[4-(L-纈氨醯氧基)-丁醯]拉米夫定，5′-O-[3-(L-異亮氨醯氧基)-丁醯]拉米夫定，以及4-[2-氨基-6-(環丙基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-環戊烯-1-甲醇相應的衍生物，及其藥學上可接受的鹽。
這些化合物中R2基團在活體內水解並脫除後，遺留下的活性端基可環化並促進母體核苷的有效釋放。
同樣本發明提供式If所示的化合物 其中R1、R2、Ry、p、q、r和o-nuc如上定義。
本發明這方面有利的化合物包括
5′-O-[3-乙氧羰基-2-纈氨醯氧基-丙醯]-ddI，5′-O-[3-乙氧羰基-2-異亮氨醯氧基-丙醯]-ddI，5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二纈氨醯氧基-丁醯]-ddI，5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二異亮氨醯氧基-丁醯]-ddI，4′-O-[3-乙氧羰基-2-纈氨醯氧基-丙醯]-無環鳥苷，4′-O-[3-乙氧羰基-2-異亮氨醯氧基-丙醯]-無環鳥苷，4′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二纈氨醯氧基-丁醯]-無環鳥苷，4′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二異亮氨醯氧基-丁醯]-無環鳥苷，5′-O-[3-乙氧羰基-2-纈氨醯氧基-丙醯]-DAPD，5′-O-[3-乙氧羰基-2-異亮氨醯氧基-丙醯]-DAPD，5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二纈氨醯氧基-丁醯]-DAPD，5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二異亮氨醯氧基-丁醯]-DAPD，5′-O-[3-乙氧羰基-2-纈氨醯氧基-丙醯]-雙脫氧胸苷，5′-O-[3-乙氧羰基-2-異亮氨醯氧基-丙醯]-雙脫氧胸苷，5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二纈氨醯氧基-丁醯]-雙脫氧胸苷，5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二異亮氨醯氧基-丁醯]-雙脫氧胸苷，5′-O-[3-乙氧羰基-2-纈氨醯氧基-丙醯]-拉米夫定，5′-O-[3-乙氧羰基-2-異亮氨醯氧基-丙醯]-拉米夫定，5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二纈氨醯氧基-丁醯]-拉米夫定，5′-O-[4-乙氧羰基-2，3-二異亮氨醯氧基-丁醯]-拉米夫定，以及4-[2-氨基-6-(環丙基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-環戊烯-1-甲醇相應的蘋果酸和酒石酸衍生物，及其藥學上可接受的鹽；在每種情況下，衍生自L-酒石酸和L-蘋果酸的異構體是優選的。
本發明提供了式Ig所示的化合物 其中R2、p、q和O-nuc如上定義。
優選的式Ig化合物包括
4′-O-[2-(L-纈氨醯氧基)-丙醯]無環鳥苷，4′-O-[2-(L-異亮氨醯氧基)-丙醯]無環鳥苷，5′-O-[2-(L-纈氨醯氧基)-丙醯]ddI，5′-O-[2-(L-異亮氨醯氧基)-丙醯]ddI，5′-O-[2-(L-纈氨醯氧基)-丙醯]雙脫氧胸苷，5′-O-[2-(L-異亮氨醯氧基)-丙醯]雙脫氧胸苷，5′-O-[2-(L-纈氨醯氧基)-丙醯]拉米夫定，5′-O-[2-(L-異亮氨醯氧基)-丙醯]拉米夫定，5′-O-[2-(L-纈氨醯氧基)-丙醯]DAPD，5′-O-[2-(L-異亮氨醯氧基)-丙醯]DAPD，以及4-[2-氨基-6-(環丙基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-環戊烯-1-甲醇相應的衍生物，及其藥學上可接受的鹽。這些化合物分解產物，乳酸和胺基酸，均為生理上可良好接受的。
本發明的化合物可形成鹽，從而構成本發明的另一方面。合適的式I化合物的藥學上可接受的鹽包括有機酸鹽，特別是羧酸鹽，包括但不限於乙酸鹽、三氟乙酸鹽、乳酸鹽、葡萄糖酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、泛酸鹽、羥乙基磺酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、門冬酸鹽、苯甲酸鹽、丁酸鹽、二葡萄糖酸鹽、環戊酸鹽、葡萄庚糖酸鹽、磷酸甘油鹽、草酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、延胡索酸鹽、煙酸鹽、棕櫚酸鹽、果膠酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、酒石酸鹽、乳糖酸鹽、pivolate、樟腦酸鹽、十一烷酸鹽和琥珀酸鹽，有機磺酸鹽如甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、2-羥乙基磺酸鹽、樟腦磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、苯磺酸鹽、對氯苯磺酸鹽和對甲苯磺酸鹽；以及無機酸鹽如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、半硫酸鹽、硫氰酸鹽、過硫酸鹽、磷酸鹽和磺酸鹽。有時，式I化合物可以水合物分離。
此處所用的術語「N保護基團」或「N保護」是指那些用來保護胺基酸或肽的N-末端，或是在合成過程中，保護氨基不發生不希望的反應的基團。常用的N保護基團公開在Greene，「有機合成中的保護基」(John Wiley Sons，紐約，1981)，在此引作參考。N保護基團包括醯基如甲醯基、乙醯基、丙醯基、新戊醯基、叔丁基乙醯基、2-氯乙醯基、2-溴乙醯基、三氟乙醯基、三氯乙醯基、鄰苯二甲醯基、鄰硝基苯氧基乙醯基、α-氯丁醯基、苯甲醯基、4-氯苯甲醯基、4-溴苯甲醯基、4-硝基苯甲醯基等；磺醯基如苯磺醯基、對甲苯磺醯基等，形成氨基甲酸酯的基團如苄氧基羰基、對氯苯氧基羰基、對甲氧基苄氧基羰基、對硝基苄氧基羰基、2-硝基苄氧基羰基、對溴苄氧基羰基、3，4-二甲氧基苄氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、2-硝基-4，5-二甲氧基苄氧基羰基、3，4，5-三甲氧基苄氧基羰基、1-(對聯苯基)-1-甲基乙氧基羰基、α，α-二甲基-3，5-二甲氧基苄氧基羰基、二苯甲基氧基羰基、叔丁氧基羰基、二異丙基甲氧基羰基、異丙氧基羰基、乙氧基羰基、甲氧基羰基、烯丙氧基羰基、2，2，2-三氯乙氧基羰基、苯氧基羰基、4-硝基苯氧基羰基、芴基-9-甲氧基羰基、環戊氧基羰基、金剛烷氧基羰基、環己氧基羰基、苯基硫羰基等；烷基如苄基、三苯基甲基、苄氧基甲基等；以及甲矽烷基如三甲基甲矽烷基等。較好的N保護基團包括甲醯基、乙醯基、烯丙基、F-moc、苯甲醯基、新戊醯基、叔丁基乙醯基、苯磺醯基、苄基、叔丁氧基羰基(BOC)和苄氧基羰基(Cbz)。
在Green上述文獻中也廣泛論述了羥基和/或羧基保護基，包括醚如甲基醚，取代甲醚基如甲氧基甲醚、甲硫基甲醚、苄氧基甲醚、叔丁氧基甲醚、2-甲氧基乙氧基甲醚等，矽醚如三甲基矽醚(TMS)、叔丁基二甲基矽醚(TBDMS)、三苄基矽醚、三苯基矽醚、叔丁基二苯基矽醚、三異丙基矽醚等，取代乙基醚如1-乙氧基甲乙醚、1-甲基-1-甲氧基乙醚、叔丁基乙醚、烯丙基乙醚、苄乙醚、對甲氧基苯甲基乙醚、二苯基甲乙醚、三苯基甲乙醚等，芳烷基如三苯甲基和pixyl(9-羥基-9-苯基呫噸衍生物，特別是氯化物)。酯羥基保護基包括甲酸酯、甲酸苄酯、氯乙酸酯、甲氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、新戊酸酯、金剛烷羧酸酯、酮酸酯、苯甲酸酯等。碳酸酯羥基保護基包括甲基酯、乙烯基酯、烯丙基酯、肉桂基酯、苄基酯等。
為了與逆轉錄病毒和HBV抑制劑的常規用法保持一致，同時服用一至三種或更多的抗病毒素是有利的，如在HIV情況下服用AZT、ddI、ddC、d4T、3TC、H2G、膦甲酸、ritonavir、indinavir、沙矽那韋、奈韋拉平、delaviridine、Vertex VA478或Agouron AG1343等，或在HBV情況下服用拉米夫定、幹擾素、泛昔洛韋等。這些額外的抗病毒素將以大致能反映它們各自的治療價值的劑量給藥。相對於式I化合物或鹽，摩爾比通常為100∶1～1∶100，特別是25∶1～1∶25較為有利。對於治療皰疹感染的抗病毒核苷類，同時使用其它抗病毒素並不常見。
儘管活性劑可以單獨給藥，優選作為藥物製劑中的組分。這種製劑包括上述定義的活性劑以及一種或多種可接受的載體/賦形劑，以及任選的其它治療成分。載體必須與製劑中其它成分相容並對受體無害。
製劑包括那些適於直腸、鼻、局部(包括口和舌下)、鞘或腸胃外(包括皮下、肌肉內、靜脈內和表皮內)給藥的製劑，但優選口服製劑。製劑通常以單位劑量形式存在，如片劑和緩釋膠囊，並可通過藥學領域任何已知的方法製備。
這些方法包括將上述定義的活性劑與載體結合，通常製備製劑的方法是，首先均勻緊密地將活性劑與液態載體或細碎的固態載體或兩者結合，然後，如果需要的話，定型產物。本發明提供了製備藥學組合物的方法，包括將式I化合物或其藥學可接受的鹽與藥學可接受的載體或賦形劑結合或混合。如果製劑的製造涉及鹽式活性組分與藥物賦形劑的密切混合，則常優選使用非鹼性賦形劑，即酸性或中性賦形劑。
本發明中的口服製劑可以離散的單元存在，如膠囊、扁囊劑或片劑，每一種均含有預定量的活性劑；可以粉劑或顆粒劑存在；可以活性劑在水或非水液體中的溶液或懸浮液形式存在；或以水包油乳液或油包水乳液及丸劑等形式存在。
對於口服組合物(如片劑和膠囊)，合適的術語「載體」包括載體如普通的賦形劑，如粘合劑，例如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、黃蓍膠、聚乙烯吡咯烷酮(Povidone)、甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉鹽、羥丙基甲基纖維素、蔗糖和澱粉；填料和載體，如玉米澱粉、明膠、乳糖、蔗糖、微晶纖維素、高嶺土、甘露糖醇、磷酸二鈣、氯化鈉和藻酸；以及潤滑劑如硬脂酸鎂、硬脂酸鈉和其它硬脂酸金屬鹽，硬脂酸甘油酯、硬脂酸、聚矽氧烷流體、滑石、石蠟、油和膠態矽石，調味劑如薄荷、冬青油、櫻桃調味劑等也可採用。需要的話，或加入一種使製劑易於辨認的著色劑。片劑也可通過本領域已知方法包衣。
片劑可以通過壓制或模塑法製備，任選帶有一種或多種輔助組份。壓片可通過在合適的機器中，壓制以任意流動形式(如粉末或粒狀)存在的活化劑來製備，任選與粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑混合。塑片可通過在合適的機器中，將惰性液體稀釋劑潤化的粉狀混合物成型來製備。片劑可任選被包衣或標記，且配成後能達到緩慢釋放或受控釋放活性劑。
其它適用口服的製劑包括含有在調味基質中的活性劑的錠劑，調味基質通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠；含有在惰性基質中的活化劑的軟錠劑，惰性基質如明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠，以及含有在合適液體載體中的活性劑的漱口藥。
本發明另一方面提供了一種製備式I或Ic化合物的方法，該方法包括核苷的醯化，此處為分子式V所示的FLG，一般在5′羥基 其中，R1(R2)L1X代表活化酸，如式IIa或IIb所示的羧酸衍生物，其中R1、R2和L1如上定義或其被保護的衍生物。另外，活化酸也可包括式R1(R2)甘油-D-X的化合物，其中R1，R2和D如式IIc定義，或者在製備Ia化合物的情況下，活化酸包括活化的Rz-O-Alk-C(＝O)X衍生物。在後者中，連接基可通過下述方法依次構建首先將適度保護的D或ω-羥基羧酸酯化至核苷上，將末端羧基或羥基脫保護，然後酯化其上適度保護的甘油或Rz部分。
醯化反應中所用的活化衍生物含有例如醯滷、酸酐、活化酸酯或以偶聯劑存在的酸，例如二環己基碳化二亞胺。典型的活化酸衍生物包括醯滷，烷氧基羰基滷化物衍生的酐，如異丁氧基羰基氯化物等，N-羥基琥珀醯胺衍生的酯，N-羥基酞醯亞胺衍生的酯，N-羥基-5-降冰片烯-2，3-二醯亞胺衍生的酯，2，4，5-三氯苯酚衍生的酯等。活化酸還可包括分子式為RX的化合物，其中X代表OR′部分，其中R如R2所定義，R′為例如COCH3、COCH2CH3或COCF3，或者X為苯並三唑。
當本發明用於其它一元羥基化核苷類時，可應用相應的方法，即活化衍生物相應地酯化至一元羥基核苷類的游離5′羥基上(或等同物)，一元羥基核苷類如無環鳥苷、ddI、FTC、拉米夫定、1592U89、DAPD、F-ddA等。
上述方法中所用的中間體本身定義了新的化合物，特別是那些式IIc′所示的化合物 其中A、A′和Alk如上定義(A和A′優選用常用的保護基保護)，X代表游離酸或上述活化酸。
式IIc′的典型化合物包括丙二酸2，3-二-(L-纈氨醯氧基)-丙基酯丙二酸2，3-二-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-丙基酯丙二酸2，3-二-(N-Fmoc-L-纈氨醯氧基)-丙基酯丙二酸2，3-二-(N-Boc-L-纈氨醯氧基)-丙基酯丙二酸2，3-二-(L-異亮氨醯氧基)-丙基酯丙二酸2，3-二-(N-CBZ-L-異亮氨醯氧基)-丙基酯丙二酸2，3-二-(N-Fmoc-L-異亮氨醯氧基)-丙基酯丙二酸2，3-二-(N-Boc-L-異亮氨醯氧基)-丙基酯丁二酸2，3-二-(L-纈氨醯氧基)-丙基酯丁二酸2，3-二-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-丙基酯丁二酸2，3-二-(N-Fmoc-L-纈氨醯氧基)-丙基酯丁二酸2，3-二-(N-Boc-L-纈氨醯氧基)-丙基酯丁二酸2，3-二-(L-異亮氨醯氧基)-丙基酯丁二酸2，3-二-(N-CBZ-L-異亮氨醯氧基)-丙基酯丁二酸2，3-二-(N-Fmoc-L-異亮氨醯氧基)-丙基酯丁二酸2，3-二-(N-Boc-L-異亮氨醯氧基)-丙基酯戊二酸2，3-二-(L-纈氨醯氧基)-丙基酯戊二酸2，3-二-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-丙基酯戊二酸2，3-二-(N-Fmoc-L-纈氨醯氧基)-丙基酯戊二酸2，3-二-(N-Boc-L-纈氨醯氧基)-丙基酯戊二酸2，3-二-(L-異亮氨醯氧基)-丙基酯戊二酸2，3-二-(N-CBZ-L-異亮氨醯氧基)-丙基酯戊二酸2，3-二-(N-Fmoc-L-異亮氨醯氧基)-丙基酯戊二酸2，3-二-(N-Boc-L-異亮氨醯氧基)-丙基酯及其相應的醯滷，特別是醯氯、酸酐和上述各化合物的二酯，例如丁二酸2，3-二-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-丙基酯，4-甲氧基苄酯丁二酸2，3-二-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-丙基酯，1，1-二甲基乙酯，中間體優選的基團還含有式IIa′基團 其中Rx、Alk、m、n和T如上所述，A和A′代表與連接基上羥基酯化的L′-脂族胺基酸(如果需要，保護N)的醯基殘基，或者A和A′之一為醯基殘基，另一為游離羥基，X代表上述的游離酸或活化酸，A和A′優選為相同的胺基酸殘基。
其它新的中間體包括式Ia所示化合物的游離或活化酸前體，如3-N-Boc-L-纈氨醯氧基丙酸、3-N-Fmoc-L-纈氨醯氧基丙酸、3-N-CBZ-L-纈氨醯氧基丙酸、3-N-Boc-L-異亮氨醯氧基丙酸、3-N-Fmoc-L-異亮氨醯氧基丙酸、3-N-CBZ-L-異亮氨醯氧基丙酸、4-N-Boc-L-纈氨醯氧基丁酸、3-N-Fmoc-L-纈氨醯氧基丁酸、4-N-CBZ-L-纈氨醯氧基丁酸、4-N-Boc-L-異亮氨醯氧基丁酸、3-N-Fmoc-L-異亮氨醯氧基丁酸、3-N-CBZ-L-異亮氨醯氧基丁酸等，以及活化衍生物，如醯滷。
新的中間體還包括上述式IIe和IIf所示化合物的前體，特別是那些從「天然」構型(如L-蘋果酸和L-酒石酸)衍生的化合物，例如
3-乙氧基羰基-2-纈氨醯氧基-丙酸3-乙氧基羰基-2-異亮氨醯氧基-丙酸4-乙氧基羰基-2，3-二-纈氨醯氧基-丁酸4-乙氧基羰基-2，3-二-異亮氨醯氧基-丁酸3-苄氧基羰基-2-纈氨醯氧基-丙酸3-苄氧基羰基-2-異亮氨醯氧基-丙酸4-苄氧基羰基-2，3-二-纈氨醯氧基-丁酸4-苄氧基羰基-2，3-二-異亮氨醯氧基-丁酸等；和相應的活化衍生物，如酸酐。
新的中間體還包括對應於式IId所示結構的前體，如2-(L-纈氨醯氧基)丙酸、2-(N-Boc-L-纈氨醯氧基)丙酸、2-(N-Fmoc-L-纈氨醯氧基)丙酸、2-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)丙酸、2-(L-異亮氨醯氧基)丙酸、2-(N-Boc-L-異亮氨醯氧基)丙酸、2-(N-Fmoc-L-異亮氨醯氧基)丙酸、N-(CBZ-L-異亮氨醯氧基)丙酸、2-(L-纈氨醯氧基)丁酸、2-(N-Boc-L-纈氨醯氧基)丁酸、2-(N-Fmoc-L-纈氨醯氧基)丁酸、2-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)丁酸、2-(L-異亮氨醯氧基)丁酸、2-(N-Boc-L-異亮氨醯氧基)丁酸、2-(N-Fmoc-L-異亮氨醯氧基)丁酸、N-(CBZ-L-異亮氨醯氧基)丁酸等；及其活化衍生物，如醯滷。
3′氟核苷如式V化合物的製備方法已經由Herdiwijn等在《核苷和核苷酸》8(1)，65-96(1989)詳細論述，該文獻在此引作參考。其它一元羥基核苷如無環鳥苷、ddI(2′，3′-雙脫氧肌苷)、ddC(2′，3′-雙脫氧胞苷)、d4T(2′3′-雙脫氧胸苷)、FTC、拉米夫定(3TC)、1592U89(4-[2-氨基-6-(環丙氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-環戊烯-1-甲醇)、AZT(疊氮胸苷)、DAPD(D-2，6-二氨基嘌呤二氧戊環)、F-ddA等是已知的，並在該文獻中詳細論述。
R1(R2)L1L2X基團的活性衍生物可以預先製備或通過用試劑如二環己基碳化二亞胺(DDDC)或O-(1H-苯並三唑-1-基)N，N，N′，N′四甲基脲四氟硼酸鹽(TBTU)在原位生成。當使用醯滷，如醯氯時，叔胺催化劑，如三乙胺、N，N′-二甲基苯胺、吡啶或二甲氨基吡啶可加到反應混合物中，與釋放出的氫滷酸結合。
反應優選在非反應性溶劑如N，N-二甲基甲醯胺、四氫呋喃、二烷、乙腈或滷代烴如二氯甲烷中進行，如果需要的話，上述提及的任何一種叔胺催化劑均可作為溶劑，只需注意保持適當的過量。反應溫度一般在0～60℃內變化，但優選保持在5～50℃。1～60小時後，反應通常基本上完成，然後用薄層色譜(TLC)和合適的溶劑體系跟蹤反應過程，通常當用TLC確定反應完成時，用有機溶劑萃取產物並用色譜純化和/或用合適的溶劑體系重結晶。
核苷基質上發生醯化反應所產生的副產物可用色譜法分離，但是這種錯位的醯化作用可通過控制反應條件而使之最小。例如通過控制試劑濃度或加料速率，特別是醯化劑；通過降低溫度或通過選擇溶劑可達到控制條件。用TLC跟蹤反應以監測控制條件。用常用的保護基保護基質上的6-氧基，特別是2-氨基，可以防止錯位的醯化作用。
R3為氫時，式IV所示的化合物可按下述方法製備用一種活化基如滷素將式I所示相應的鳥嘌呤化合物在6位活化(其中R2胺基酸殘基中裸露的氨基官能團任選用常用的N保護基團保護)。得到的活化6-嘌呤隨後還原為嘌呤，例如用鈀催化劑，然後脫去保護得到所需的式IV或式V化合物。
R3為R1或其它的酯的化合物可通過相應的式I或式IV羥基化合物的酯化(類似於上述的酯化反應)來製備，任選在R2和/或R3胺基酸殘基中裸露的氨基官能團被N保護之後。R3為醚時的化合物可通過類似於上述WO9313778公開的方法製備，同樣任選裸露氨基的N保護。當R3為疊氮化物時，如WO9709052所述的方法製備。
式IId所示的中間體可使用適當活化的及N保護的R2衍生物，如N-CBZ纈氨醯基或異亮氨醯基衍生物結合常用偶聯劑如DMAP/DCC；或者使用胺基酸醯氯，將羧基一保護的羥基鏈烷酸醯化，一般是2-羥基-1-鏈烷酸來製備。然後除去羧基保護基，例如通過酸解。得到的中間體按上述方法活化，或者游離酸和偶聯劑一起在常用的酯化條件下酯化核苷。
式Ia化合物通常可用前一段所述的方法製備，即羧基保護的α-羥基、ω-羧酸如乙醇酸、乳酸、羥基丁酸等和合適的N保護的R2衍生物酯化。也可用游離酸和偶聯劑一起或活化的酸，如相應的醯滷。除去羧基保護基，將得到的中間體用上述方法和核苷進行酯化。
含有式IIe或IIf結構的化合物可通過一般的羧基保護基團如苯甲醯基，對不同的二元羧酸，如L-酒石酸或L-蘋果酸，的末端羧基進行羧基保護來製備。然後游離的羥基用普通的酯化技術來酯化，如在DMF中DMAP DCC，用適當的N保護的R2胺基酸，如N-Boc-L-纈氨醯或N-Boc-L-異亮氨醯酯化。除去苯甲醯基羧基保護基，並用常規的方法，如實施例中的方法，將得到的產物與一羥基核苷的5′-羥基官能團酯化。最後，游離的羧基官能團與R1基團酯化，或更優選酯化為常用的藥學上可接受的酯-如乙酯。
含有磷醯化部分III的化合物可通過2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥嘌呤-5-一磷酸鹽與式VIa化合物反應製備， 其中Ha為滷素，如氯、碘或溴，條件類似於那些在US 4 337 201、US5227 506、WO 94/13682 WO94/13324，Starret等在J Med Chem 371857-1864(1994)和Iyer等在Tetrahedron Lett 307141-7144(1989)所描述的條件，這些文獻在此引作參考。一磷酸鹽可通過常用的FLG的磷酸化作用製備，例如，在Herdwyn等上述文獻所述的。相應的技術將用於其它一元羥基核苷的一磷酸鹽。
另一種得到磷酸酯的酯化反應也可分兩個步驟進行，包括第一步在FLG-一磷酸酯與式VII化合物之間的反應 其中R4和R4′如上定義，PG為如上所述的常規羧基保護基，然後脫保護並與第三個，最右端官能團為羥基的連接基L1酯化。這種連接基團的兩個例子如下線路圖1(每系列中倒數第二個化合物)所述。在該實施方案中，式Va最左邊的羰基與式IIa連接的連接基的羰基相同。
含有任選連接基L2的化合物也可通過兩步法製備。特別是式ClC(＝O)OC(R4)(R4′)Cl的化合物可與FLG的5′羥基(任選在基質上用常用保護基保護)發生反應，這在頭孢菌素領域是已知的。得到的FLG-5′-O-C(＝O)OC(R4)(R4′)鹽酸鹽隨後與R1以及帶三官能團連接基的R2進行反應，其中第三個官能團含有羧基官能團，如鉀鹽。
應當理解，式IIa的三官能L1基團，其中n和m為1，Alk為不存在時，可如下線路圖1所示，參見硬脂醯/L-纈氨醯基的組合，徑區域選擇性酯化反應從甘油製備。簡而言之，R1和R2選擇性與甘油的1和3位酯化，然後2位轉化為合適的-T-C(＝O)-基團，該基團隨後與氟核苷的5′位酯化，或與L2(未標出)的協同基團酯化。甘油衍生物的2位上的羥基也可以與在其左手端含協同羰基官能團的L2基團進行酯化。
式IIa的L1基團，其中m為1，n為0，Alk為亞甲基時，也可以通過區域選擇性地將R1和R2酯化至甘油的1和2位上而製備，如下線路圖1所示，然後3位的羥基轉化為合適的-T-C(＝O)-基團。線路圖1中最右端的一系列的反應顯示了R1與甘油的1位酯化以及R2與2位酯化的情況。其中R1與2位酯化，R2與1位酯化的相應排列可通過下述方法得到首先用CBz-L-纈氨酸/DCC/DMAP/DMF處理甘油，然後在脂肪酸R1與甘油的2位酯化前，用pixyl氯化物保護3位，最後脫保護，如果需要的話，轉化3位。

儘管線路1已經通過參考R1為硬脂醯，R2為L-纈氨醯基的組合而進行闡明，可認為這種基本的框圖也可適用於其它胺基酸，其中可使用其它脂肪酸；或採用常規保護基團，也適用於R2為胺基酸衍生物，R1為羥基的組合。當T含有一個-NH-基團時，連接基可通過類似的區域選擇性酯化反應進行製備，然後將游離的羥基轉化為氨基，再還原為疊氮化物，最後與光氣反應以生成相應的氨基甲醯氯。
改變線路圖I可製備式IIc所示的連接基。在這種改動中，上述光氣反應步驟用與活化二元羧酸如琥珀酸酐進行的反應來代替。這樣得到甘油三酯(含(任選保護的)R1酯，保護的R2酯和二元羧酸的酯)，然後將二元羧酸上的游離羧基活化並按常用方式酯化到核苷上。式IIc所示的連接基也可在核苷原位生成，在這種改動中，二元羧酸酯化到被適當保護的甘油衍生物上。這種琥珀酸單酯隨後按常用的方式酯化到核苷的5′-羥基官能團上。最終甘油部分中一個或二個保護基被L-胺基酸酯代替。另外，如果存在的話，剩餘的保護基被脂肪酸酯所代替，或被除去而餘下游離羥基。線路圖IA所示說明了一個實施例，其中核苷是環鳥苷(虛影表示FLG)，二元羧酸為琥珀酸，R1和R2都為CBZ-保護的纈氨醯基，當然它也可應用到式Ic的其它變化。在每一種情況下，偶聯條件是指常規酯化條件，如偶聯劑DMAP、DCC等或把相關的羧基官能團轉化為活性衍生物如醯氯，或者活化的琥珀酸部分中含有酸酐。
在線路圖IA的一種改動，是將琥珀酸酐直接與核苷反應，從而避免了第一步保護和脫保護過程。另一種方法是用N保護的胺基酸部分來區域選擇性地酯化甘油部分，一般同時將偶聯到核苷的羥基予以保護，然後將該羥基脫保護並和核苷偶聯。

m和n為1，Alk為亞烷基或亞烯基，T為單鍵時，連接基可如上線路圖II所示的方法製備。式IIa的三官能連接基團L1中的m、n、Alk和各種官能團的其它組合方式可用相應的原料，通過類似於上述的方法製備。原料如1，2，4-三羥基丁烷(CA登記號3968-00-6)、3，4-二羥基丁酸(1518-61-222329-74-4)、(S)-3，4-二羥基丁酸(51267-44-8)、(R)-3，4-二羥基丁酸(158800-76-1)、1，2，5-戊三醇(51064-73-414697-46-2)、(S)-1，2，5-戊三醇(13942-73-9)、(R)-1，2，5-戊三醇(171335-70-9)、4，5-二羥基戊酸(66679-29-6129725-14-0)、1，3，5-戊三醇(4328-94-3)和3-(2-羥乙基)-1，5-戊二醇(53378-75-9)。每一種原料的製備方法參照各自的登記號。Ohsawa等在Chem.Pharm.Bull.41(11)1906-1909(1993)中和Terao等在Chem.Pharm.Bull.39(3)823-825(1991)中描述了用脂肪酶P控制三官能連接基的立體化學。
R2的胺基酸衍生物和R1(如果存在的話)也可以通過2-氧雜-4-氮雜-環烷-1，3-二酮法酯化到連接基上，該方法在國際專利申請WO94/29311中描述，該文獻在此引作參考。
通過常用的肽化學，將R1和/或R2的羧基官能團連接到連接基衍生的氨基上，一般同時用常用的N保護基保護α-氨基。在連接基的羧基和R2的α-氨基之間，通過常用的肽化學形成醯胺鍵，一般同時進行α-羧基官能團的保護。脂肪醇R1酯化到連接基上的羧基官能團的類似於上述R1為脂肪酸的的酯化方法，但是酯化是反方向的。


現在舉例說明本發明的各個方面，以下實施例及其附圖僅作為參考，其中圖1所示為經過治療和未經治療的血清病毒-DNA濃度，感染DHBV的鴨子作為時間函數，如生物實施例3所示；圖2所示為經過治療的體重增值，感染DHBV的鴨子作為時間函數，如生物實施例3所示。
實施例12-(硬脂醯氧基甲基)-2-(N-(芴基甲氧基羰基)-L-纈氨醯氧基甲基)-丙酸向2，2-二(羥甲基)丙酸(28.16克，210毫摩爾)的水(50毫升)溶液中加入氫氧化鉀(11.78克，210毫摩爾)。5分鐘後，在真空中蒸發溶液，並用無水DMF共蒸發殘餘物三次。然後將殘餘物溶解在DMF(500毫升)中，向該溶液中加入苯甲醯溴(3.57毫升，30毫升)。攪拌30分鐘後，通過Celite過濾反應混合物，倒入碳酸氫鈉水溶液中，並用二氯甲烷萃取。收集有機相，然後用碳酸氫鈉的水溶液洗滌。隨後在真空中蒸發得到2，2-二(羥甲基)丙酸苄酯(4.37克)，1H-NMR(CDCl3)7.35(s，5H)，5.20(d，2H)，3.91-3.71(m，4H)，1.10(s，3H)。
在40分鐘時間，向2，2-二(羥甲基)丙酸苄酯(4.37克，19.5毫摩爾)的吡啶(50毫升)溶液中滴加硬脂醯氯(4.13克，13.6毫摩爾)的二氯甲烷溶液。然後反應保持16小時，並倒入碳酸氫鈉水溶液中，用二氨甲烷萃取。收集有機相併在真空中蒸發。通過矽膠柱色譜分離產物2-(羥乙基)-2-(硬脂醯氧基甲基)丙酸苄酯(1.97克)，1H-NMR(CDCl3)7.34(s，5H)，5.17(d，2H)，4.28(dd，2H)，3.69(dd，2H)，2.24(t，2H)，1.57(m，2H)，1.25(s，28H)，1.22(s，3H)，0.87(t，3H)。
將2-(羥乙基)-2-(硬脂醯氧基甲基)丙酸苄酯(1.86克，3.8毫摩爾)溶解在吡啶(30毫升)中。向溶液中加入甲苯磺酸(73毫克，0.39毫摩爾)、N-芴基甲氧基羰基-L-纈氨酸(3.94克，11.6毫摩爾)和DCC(3.58克，17.4毫摩爾)。反應在4℃保持16小時，然後通過Celite(硅藻土)過濾。將濾液倒入碳酸氫鈉水溶液中，並用二氯甲烷萃取。收集有機相併在真空中蒸發。通過矽膠柱色譜分離產物2-(N-芴基-甲氧基羰基)-L-纈氨醯氧基甲基)-2-(硬脂醯氧基甲基)丙酸苄酯，產量2.38克，1H-NMR(CDCl3)7.78-7.25(m，13H)，5.29(m，1H)，5.15(d，2H)，4.38-4.23(m，7H)，2.19(t，2H)，2.10(m，1H)，1.55(m，2H)，1.24(m，31H)，0.94-0.83(m，9H)。
向THF/甲醇(16毫升/8毫升)混合溶劑中的2-(N-芴基-甲氧基羰基)-L-纈氨醯氧基甲基)-2-(硬脂醯氧基甲基)丙酸苄酯(1.86克，3.8毫摩爾)溶液中加入甲酸銨(376毫克，6毫摩爾)、甲酸(1.87毫升)和鈀黑(40毫克)。反應在室溫中保持16小時，然後通過Celite過濾。蒸發後，通過矽膠柱色譜分離產物，產量1.05克。
實施例2
1-O-硬脂醯-2-O-(N-CBz-L-纈氨醯)甘油a)製備1-O-硬脂醯甘油向溶解在DMF(300毫升)中的甘油(30克，326毫摩爾)和吡啶(25毫升)混合物中滴加溶解在DMF(100毫升)中的硬脂醯氯(10克，33毫摩爾)。混合物在冰浴上冷卻直至滴加完成。反應在N2氣氛下保持過夜。15小時後加入CH2Cl2(300毫升)和飽和的NaHCO3(水溶液)。分相併用水(50毫升)洗滌有機相，Na2SO4乾燥並在真空下蒸發溶劑和吡啶，在二氧化矽柱上進行色譜分離(CH2Cl2-MeOH，20∶1)粗產物並重結晶(CH2Cl2-乙醚)，產量約7克。
b)製備pixyl氯化物將乙醯氯(150毫升，2.1摩爾)加入到磁力攪拌下的9-羥基-9-苯基呫噸(20克，72毫摩爾)的苯懸浮液中。得到均勻的深紅色溶液，該溶液在20℃攪拌30分鐘。在減壓下除去揮發性物質。仔細加入乙醇，中和過量的AcCl。殘餘物和甲苯(2×30毫升)及環己烷(2×30毫升)共蒸發，得到結晶殘餘物，該殘餘物密閉保存。也可從Aldrich買到Pixyl氯化物。
c)製備1-O-硬脂醯，3-O-pixyl甘油混合從上述a)得到的產物(2.28克)和吡啶(25毫升)，並加熱直至溶解。在冰浴中冷卻後加入從步驟b)中得到的pixyl氯化物(1.92克)。攪拌下，氬氣氣氛下在冰浴中保持混合物半小時，然後在室溫下保持1.5小時。在真空下蒸發吡啶，殘餘物溶解在CH2Cl2(70毫升)中並用0.5M檸檬酸洗滌以除去剩餘吡啶。用Na2SO4乾燥殘餘物，蒸發並色譜分離(乙醚-己烷1∶3)，得到1.25克純產物，TLC Rf約0.2。
d)製備1-O-硬脂醯，2-O-(N-CBz-L-纈氨醯)，3-O-pixyl甘油步驟c)的產物(237毫克，0.39毫摩爾)、CBz-L-纈氨酸(116毫克，0.46毫摩爾)、DCC(96毫克，0.46毫摩爾)和DMAP(4.7毫克，0.04毫摩爾)溶解在CH2Cl2(4毫升)中。在攪拌下，氮氣氣氛中混合物保持過夜。18小時後用玻璃過濾器過濾混合物，通過矽膠柱(乙醚-己烷1∶4)色譜分離得到產率為230毫克，TLC Rf為0.2。
e)製備1-O-硬脂醯-2-O(N-CBz-L-纈氨醯)甘油用實施例3描述的方法，通過選擇性脫保護除去步驟d)的產物中的pixyl基團得到標題化合物，1H-NMR(CDCl3)δ7.35(m，5H)，5.3-4.9(m，4H)，4.35-4.25(m，3H)，3.8-3.6(m，2H)，2.31-2.25(m，2H)，2.20-2.10(m，1H)，1.60(m，2H)，1.02-0.86(m，9H)。
實施例31-O-(N-CBz-L-纈氨醯)-2-O-硬脂醯甘油a)製備1-O-(N-CBz-L纈氨醯)甘油在室溫下，將CBz-L-纈氨酸(4.35克，17.3毫摩爾)、二環己基碳化二亞胺(4.29克，20.8毫摩爾)和4-二甲基氨基吡啶(0.212克)一起加入到五倍過量的甘油中(8毫升，86.9毫摩爾)。攪拌過夜後，過濾懸浮液，在真空中從濾液中除去DMF。將殘餘物溶解在CH2Cl2中，連續用飽和NaHCO3、鹽水和水洗滌，然後乾燥。粗產物在矽膠上以4/1EtOAc-己烷作為洗脫液進行色譜純化，產量為2.465克，Rf(4/1EtOAc-己烷)0.17，(20/1CH2Cl2-甲醇)0.12。
b)製備1-O-(N-CBz-L-纈氨醯)-3-O-pixyl甘油在氮氣下，將步驟a)的產物(0.672克，20.1毫摩爾)溶解在幹的吡啶(3.5毫升)中。加入9-氯-9-苯基呫噸(如上製備的pixyl氯化物，0.65克，22.0毫摩爾，1.1當量)，混合物在室溫下攪拌1.5小時。加入MeOH(1.5毫升)，將混合物在10毫升Et2O和10毫升飽和NaHCO3之間分配。水層用更多的乙醚萃取，合併有機層，乾燥並用甲苯濃縮數次，得到白色固體。粗產物在矽膠上以3/1己烷-EtOAc作為洗脫液進行色譜純化，得到0.681克。
pixyl基團也可通過Gaffney等，在Tetrahedron Lett 1997，38，2539-2542描述的步驟用PxOH和乙酸載上。
c)製備1-O-(N-CBz-L-纈氨醯)-2-O-硬脂醯-3-O-pixyl甘油在冰浴，氮氣中，攪拌下向步驟b)的產物(0.658克，1.13毫摩爾)的11毫升吡啶溶液中滴加在1.5毫升CH2Cl2中的硬脂醯氯(496毫升，1.3當量)。15分鐘後，混合物在室溫下攪拌過夜。混合物用20毫升Et2O稀釋，並用10毫升飽和NaHCO3洗滌。用更多的Et2O萃取水層，合併有機層，用鹽水(20毫升)洗滌，Na2SO4乾燥，並用甲苯濃縮數次、粗產物(1.37克)在130克矽膠上以6/1己烷-EtOAc進行色譜純化。第一段取500毫升，隨後各取100毫升，所需的物質在2-5段中洗脫，產量0.748克。
d)製備1-O-(N-CBz-L-纈氨醯)-2-O-硬脂醯甘油在室溫下，向溶解在35毫升中的CH2Cl2的步驟c)的產物(0.748克，872毫摩爾)的0.025M溶液中加入吡咯(16.5摩爾當量)和二氯乙酸(5.5摩爾當量)。5分鐘後TLC顯示反應完成。混合物用300毫升CH2Cl2稀釋，並用30毫升飽和NaHCO3洗滌。水層用更多的CH2Cl2萃取。合併有機相，用鹽水(30毫升)洗滌，Na2SO4乾燥並濃縮。粗產物用矽膠以2/1己烷-EtOAc(含0.3％乙酸)作為洗脫液進行色譜純化，產量0.363克，Rf(2/1己烷-EtOAc)0.21，1H NMR(CDCl3)δppm 0.86-0.99(m，9H)，1.25(s，28H)，1.61(m，2H)，2.16(m，1H)，2.32(m，2H)，3.74(br s，2H)，4.28-4.44(m，3H)，5.09(m，1H)，5.11(s，2H)，5.22(d，1H)，7.36(m，5H)。
實施例41-O-硬脂醯-3-O-(N-CBz-L-纈氨醯)甘油實施例2部分a)的產物(2.86克，7.99毫摩爾)、DCC(0.9克，4.36毫摩爾)、4-(N，N-二甲基)氨基吡啶(DMAP)(0.048克，0.39毫摩爾)和N-CBz-L-纈氨酸(1克，3.98毫摩爾)溶解在CH2Cl2(60毫升)和DMF(6毫升)中。反應在環境溫度下放置18小時，然後過濾，在減壓下蒸發溶劑，殘餘物溶解在CH2Cl2(100毫升)中並過濾。粗標題化合物用色譜[SiO2，乙醚/己烷(1∶2)]純化，得到1.3克所需產物。未反應的1-硬脂醯甘油可用CH2Cl2/MeOH(20∶1)洗脫回收，1H-NMR(CDCl3)δ5.25(d，1H)，5.11(s，2H)，4.30-4.05(m，6H)，2.65(d，1H)，2.35(t，2H)，2.06(m，1H)，1.62(m，2H)，1.26(s，28H)，1.00-0.84(m，9H)。
實施例5 向冰冷卻的氯甲酸1-氯乙基酯(1.89克，13.2毫摩爾)的無水CH2Cl2(5毫升)的溶液中加入在CH2Cl2(20毫升)中的實施例4化合物，然後加入無水吡啶(1.2毫升，29.6毫摩爾)。在氬氣氣氛中冷卻下攪拌反應混合物，直至TLC(乙醚/己烷1∶2)表明原料耗盡。1.5小時後，混合物用水(3×5毫升)、飽和NaHCO3(5毫升)洗滌並乾燥(Na2SO4)。用色譜[SiO2，乙醚/己烷(1∶2)]純化，得到標題化合物(4.0克)，1H-NMR(CDCl3)δ7.36-7.32(m，5H)，6.40(m，1H)，5.24(m，1H)，5.11(s，2H)，4.30(m，6H)，2.32(m，2H)，2.15(m，1H)，1.82(m，3H)，1.60(m，2H)，1.25(br s，28H)，0.97(m，3H)，0.86(m，6H)。
實施例6 向實施例5的化合物(3.4克，4.87毫摩爾)的無水乙腈(47毫升)溶液中加入碘化鈉(3.65克，24.3毫摩爾)。得到的溶液在氬氣氣氛下回流直至NMR表明原料耗盡。4.5小時後，加入乙醚(50毫升)並過濾混合物。蒸發除去溶劑，粗產物溶解在乙醚(50毫升)中。乙醚溶液用水(2×10毫升)洗滌並乾燥(Na2SO4)，在減壓下蒸發。用色譜[SiO2，乙醚/己烷(1∶2)]純化，得到標題化合物(2.15克)，1H-NMR(CDCl3)δ7.37(m，5H)，6.75(m，1H)，5.22(m，1H)，5.15(s，1H)，4.3(m，6H)，2.32(m，1H)，2.22(m，2H)，1.6(m，2H)，1.25(s，28H)，0.95(m，9H)。
實施例7 在冰浴，氬氣中，攪拌下冷卻實施例3化合物(810毫克，1.37毫摩爾)的2.2毫升無水二氯甲烷溶液。加入氯甲酸1-氯乙基酯(298微升，2.74毫摩爾)，再滴加2.5毫升二氯甲烷中的吡啶(665微升，8.22毫摩爾)。2.5小時後，混合物用25毫升二氯甲烷稀釋，並連續用10毫升水和10毫升鹽水洗滌。有機相用無水硫酸鈉乾燥並用甲苯濃縮數次得到黃色油。用閃蒸塔色譜在矽膠上以40/1二氯甲烷-二乙醚純化得到油狀標題化合物(96毫克，定量收率)。
1H-NMR(CDCl3)δppm 0.85-0.98(m，9H)，1.25(s，28H)，1.60(m，2H)，1.83(d，3H，J＝5.8Hz)，2.17(m，1H)，2.31(t，2H)，4.19-4.48(m，5H)，5.11(s，2H)，5.22(d，1H)，5.27(m，1H)，6.38-6.43(m，1H)，7.36(m，5H)。
實施例8 在氮氣下，實施例7的化合物(1.896克，2.71毫摩爾)和碘化鈉(1.80克，12.0毫摩爾)的乙腈溶液(27毫升)在80℃回流。4.5小時後，反應混合物用100毫升1/1己烷-二乙醚稀釋，並用25毫升水洗滌。水相用更多溶劑(25毫升)萃取，合併有機相，連續用5％硫代硫酸鈉水溶液(25毫升)和鹽水(25毫升)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，並在真空下濃縮。用閃蒸塔色譜在矽膠上以80/1二氯甲烷-甲醇作為洗脫液純化得到含有90％標題化合物和10％實施例7化合物的油(1.45克)，1H-NMR(CDCl3)δppm 0.85-0.99(m，9H)，1.25(s，28H)，1.60(m，2H)，2.17(m，1H)，2.23(d，3H，J＝6Hz)，2.31(t，2H)，4.16-4.49(m，5H)，5.10(s，2H)，5.20-5.29(m，2H)，6.69-6.79(m，1H)，7.36(m，5H)。
實施例94-苄氧基-2-(N-三苯甲基-L-纈氨醯氧基甲基)-1-硬脂醯氧基丁烷a)合成二乙基-2-(2-苄氧基乙基)丙二酸酯向新製備的鈉(0.95克，41.4毫摩爾)的50毫升乙醇溶液中加入丙二酸二乙酯(6.4克，40毫摩爾)的10毫升乙醇溶液，混合物攪拌15分鐘。然後滴加入2-苄氧基-1-碘乙烷(11.5克，41.35毫摩爾)溶液。混合物回流4小時，在真空中蒸發。加入100毫升的水，混合物用50毫升的二乙醚萃取三次，有機相用硫酸鈉乾燥，並在真空中蒸發，用矽膠柱色譜分離產物，產率8.6克，1H-NMR(CDCl3)1.26(m，6H)2.26(m，2H)3.54(m，3H)4.16(m，4H)4.57(s，2H)7.32(m，5H)。
b)合成4-苄氧基-2-羥甲基-丁醇-1。
在約15℃，向攪拌的氫化鋁鋰(3.0克，80毫摩爾)的100毫升二乙醚的懸浮液中滴加二乙基-2-(2-苄氧基乙基)丙二酸酯(8.5克，28.8毫摩爾)的20毫升二乙醚溶液。混合物回流2小時，冷卻下滴加約4毫升水，過濾混合物並用二烷洗滌。在減壓下蒸發濾液，用矽膠柱色譜分離產物，產量3.4克，1H-NMR(CDCl3)1.60(m，2H)1.82(m，1H)3.00(m，2H)3.56(t，2H)3.69(m，4H)4.50(s，2H)7.32(m，5H)。
c)合成4-苄氧基-2-(N-三苯甲基-L-纈氨醯氧基甲基)-丁醇-1向N-三苯甲基-L-纈氨酸(4.66克，13毫摩爾)和4-苄氧基-2-羥甲基-丁醇-1(3.3克，15.6毫摩爾)的50毫升二氯甲烷溶液中加入DCC(3.0克，14.5毫摩爾)和DMAP(0.18克，1.45毫摩爾)。混合物攪拌三天，混合物冷卻至5℃，過濾尿烷。溶液在減壓下蒸發，用矽膠柱色譜分離產物，產量2.5克，1H-NMR(CDCl3)1.00(m，6H)1.55(m，4H)1.72(m，1H)2.18(m，1H)2.70(m，1H)3.27(m，2H)3.43(m，3H)4.50(s，2H)7.26(m，20H)。
d)合成4-苄氧基-2-(N-三苯甲基-L-纈氨醯氧基甲基)-1-硬脂醯氧基丁烷向4-苄氧基-2-(N-三苯甲基-L-纈氨醯氧基甲基)-丁醇-1(2.4克，4.35毫摩爾)的50毫升二氯甲烷溶液中加入吡啶(1.72克，21.7毫摩爾)。溶液冷卻至10℃，在10～15℃之間滴加硬脂醯氯(2.64克，8.7毫摩爾)的10毫升二氯甲烷溶液。在室溫下混合物攪拌過夜。加入100毫升5％碳酸氫鈉溶液，混合物攪拌30分鐘。分離有機相，用二氯甲烷萃取水相兩次。合併的有機相用硫酸鈉乾燥，並在真空中濃縮。用矽膠柱色譜分離產物，產量3.0克，1H-NMR(CDCl3)0.98(m，9H)1.26(m，28H)1.54(m，2H)1.94(m，1H)2.25(m，2H)3.23(m，2H)3.44(m，2H)3.58(m，1H)3.91(m，2H)4.10(m，1H)4.47(s，2H)7.28(m，20H)。
實施例105-(N-三苯甲基-L-纈氨醯氧基甲基)-6-硬脂醯氧基己酸a製備2-烯丙基1，3-丙二醇在0℃將在無水乙醚(100毫升)中的烯丙基丙二酸二乙酯(20毫升，101毫摩爾)滴加至攪拌的氫化鋁鋰(9.6克，253毫摩爾)溶液中。反應加熱至室溫，並保持5小時。冷卻至0℃，仔細滴加水(12毫升)。攪拌30分鐘後，通過Celite過濾混合物，然後用乙醇(2×500毫升)洗滌，在真空下乾燥溶液得到9.5克產物，1H-NMR(CDCl3)5.78(m，1H)，5.03(m，2H)，3.78(m，2H)，3.69(m，2H)，2.06(t，2H)，1.87(m，1H)。
b)製備1-O-(N-三苯甲基-L-纈氨醯)-2-烯丙基-1，3-丙二醇向N-三苯甲基-L-纈氨酸(5.5克，15.2毫摩爾)、2-烯丙基-1，3丙二醇(4.4克，38毫摩爾)、N，N-二甲基氨基吡啶(183毫克，1.5毫摩爾)的二氯甲烷(120毫升)溶液中加入DCC(3.5克，16.7毫摩爾)。反應在回流下保持過夜。用Celite過濾後，有機相用碳酸氫鈉水溶液洗滌並乾燥。矽膠柱色譜得到4.6克中間體1-O-(N-三苯甲基-L-纈氨醯)-2-烯丙基-1，3-丙二醇。
c)製備1-O-(N-三苯甲基-L-纈氨醯)-2-烯丙基-3-硬脂醯-1，3-丙二醇在0℃，向1-O-(N-三苯甲基-L-纈氨醯)-2-烯丙基-1，3-丙二醇(1.83克，4毫摩爾)的二氯甲烷(40毫升)和吡啶(3.2毫升，40毫摩爾)溶液中滴加在二氯甲烷中的硬脂醯氯(3.62克，12毫摩爾)。溶液加熱至室溫並保持3小時，用碳酸氫鈉水溶液洗滌並乾燥，用矽膠柱色譜分離產物1.9克，1H-NMR(CDCl3)7.30(m，15H)，5.70(m，1H)，4.99(m，2H)，3.93(m，2H)，3.55(m，1H)，3.27(m，2H)，2.68(m，1H)，2.30(m，2H)，2.33(m，1H)，2.01(m，2H)，1.85(m，1H)，1.62(m，2H)，1.3(m，28H)，0.98(dd，6H)，0.91(t，3H)。
d)製備3-(N-三苯甲基-L-纈氨醯氧基甲基)-4-硬脂醯氧基-丁醛將1-O-(N-三苯甲基-L-纈氨醯)-2-烯丙基-3-硬脂醯-1，3-丙二醇(580毫克，0.8毫摩爾)溶解在二烷(5毫升)中。向溶液中加入四氧化鋨(20毫克，0.08毫摩爾)和吡啶(0.05毫升，0.64毫摩爾)。將過碘酸鈉的水(3.5毫升)溶液加入至反應混合物中。反應保持過夜，然後冷卻至0℃。加入亞硫酸酸氫鈉水溶液，用二氯甲烷萃取混合物。乾燥有機相併用矽膠柱色譜純化，產率250毫克，1H-NMR(CDCl3)9，68(s，1H)，7.25(m，15H)，3.92(m，2H)，3.58(m，1H)，2.32(m，2H)，2.68(m，1H)，2.34(m，7H)，1.58(m，2H)，1.53(m，28H)，0.96(dd，6H)，0.86(t，3H)。
f)製備3-(N-三苯甲基-L-纈氨醯氧基甲基)-4-硬脂醯氧基己烯-2-酸苄酯向3-(N-三苯甲基-L-纈氨醯氧基甲基)-4-硬脂醯氧基-丁醛(15.8克，21.8毫摩爾)的二氯甲烷溶液中加入(苄氧基羰基甲基)三苯基溴化磷(10.7克，21.8毫摩爾)和三乙胺(2.21克，21.8毫摩爾)。反應在室溫下保持過夜並蒸發混合物。向殘餘物中加入二乙醚(200毫升)，並在4℃保持兩小時。然後過濾，蒸發濾液，產物用矽膠柱色譜純化，產量10克，1H-NMR(CDCl3)7.30(m，20H)，6.89(m，1H)，5.88(d，1H)，5.19(d，2H)，3.95(m，2H)，3.57(m，1H)，3.29(2H)，2.68(m，1H)，2.23(m，5H)，1.93(m，1H)，1.60(m，2H)，1.32(m，28H)，0.95(dd，6H)，0.89(t，3H)。
g)製備3-(N-三苯甲基-L-纈氨醯氧基甲基)-4-硬脂醯氧基己酸酯向3-(N-三苯甲基-L-纈氨醯氧基甲基)-4-硬脂醯氧基己烯-2-酸苄酯(70毫克，0.08毫摩爾)的甲醇(3毫升)和乙酸乙酯(1毫升)溶液中加入碳酸氫鈉(10毫克)和鈀黑(20毫克)。反應在氫氣，大氣壓下保持2小時。過濾混合物並蒸發。將殘餘物溶解在二氯甲烷中並連續用EDTA水溶液和冷的2％檸檬水溶液洗滌，蒸發有機相得到61毫克產物，1H-NMR(CDCl3)7.30(m，15H)，3.93(m，2H)，3.57(m，1H)，3.25(m，2H)，2.30(dt，4H)，2.20(m，1H)，1.70(m，1H)，1.62(m，4H)，1.30(m，28H)，0.95(dd，6H)，0.87(t，3H)。
實施例113-(N-苄氧基羰基-L-纈氨醯氧基甲基)-4-硬脂醯氧基-丁酸a)製備1-O-(N-苄氧基羰基-L-纈氨醯)-2-烯丙基-1，3-丙二醇向2-烯丙基-1，3-丙二醇(4.6克，40毫摩爾)和N-苄氧基羰基-L-纈氨酸(5.02克，20毫摩爾)的二氯甲烷溶液中加入二甲基氨基吡啶(244毫克，2毫摩爾)和DCC(4.5克，22毫摩爾)。兩小時後，用Celite過濾混合物，蒸發，分離產物1-O-(N-苄氧基羰基-L-纈氨醯)-2-烯丙基-1，3-丙二醇，產量5.01克。
1H-NMR(CDCl3)7.36(m，5H)，5.78(m，1H)，5.26(d，1H)，5.11(s，2H)，5.06(d，2H)，4.22(m，3H)，3.59(m，2H)，2.13(m，3H)，1.98(m，2H)，0.94(dd，6H)。
b)製備1-O-(N-苄氧基羰基-L-纈氨醯)-2-烯丙基-3-O-硬脂醯-1，3-丙二醇在冰浴中，向1-O-(N-苄氧基羰基-L-纈氨醯)-2-烯丙基-1，3-丙二醇(4.46克，12.7毫摩爾)的二氯甲烷(70毫升)和吡啶(6.1毫升，76毫摩爾)溶液中加入硬脂醯氯(7.8克，26毫摩爾)。反應混合物加熱至室溫並保持一小時。然後倒入碳酸氫鈉水溶液中，乾燥有機相，用矽膠柱色譜純化產物1-O-(N-苄氧基羰基-L-纈氨醯)-2-烯丙基-3-O-硬脂醯-1，3-丙二醇6.7克，1H-NMR(CDCl3)7.34(m，5H)，5.77(m，1H)，5.30(d，1H)，5.11(s，2H)，5.08(d，2H)，4.32(m，1H)，4.10(m，4H)，2.29(t，2H)，2.13(m，4H)，1.62(m，3H)，1.25(m，28H)，0.90(m，9H)。
c)製備3-(N-苄氧基羰基-L-纈氨醯氧基甲基)-4-硬脂醯氧基-丁酸將高錳酸鉀(756毫克，4.8毫摩爾)溶解在水(7.5毫升)中。該溶液在劇烈攪拌下保持10分鐘。加入在苯(5毫升)中的1-O-(N-苄氧基羰基-L-纈氨醯)-2-烯丙基-3-O-硬脂醯-1，3-丙二醇(1克，1.6毫摩爾)和溴化四丁銨(77毫克，0.24毫摩爾)溶液。漿液攪拌1.5小時，加入二氯甲烷。將酸式亞硫酸鈉水溶液加入到漿液中直至混合物褪色。有機相用乙酸酸化，並用水洗滌。蒸發後，用矽膠柱色譜分離產物3-(N-苄氧基羰基-L-纈氨醯氧基甲基)-4-硬脂醯氧基-丁酸(390毫克)，1H-NMR(CDCl3)7.33(m，5H)，5.38(d，1H)，5.11(s，2H)，4.14(m，5H)，2.60(m，1H)，2.45(m，2H)，2.29(t，2H)，2.18(m，1H)，1.58(m，2H)，1.25(m，28H)，0.90(m，9H)。
實施例122′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-纈氨醯氧基甲基)-6-硬脂醯氧基己醯基]鳥苷a)製備2′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(N-三苯甲基-L-纈氨醯氧基甲基)-6-硬脂醯氧基己醯基]鳥苷向5-(N-三苯甲基-L-纈氨醯氧基甲基)-6-硬脂醯氧基己酸(462毫克，0.6毫摩爾)和2′3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷(340毫克，1.25毫摩爾)的DMF(3毫升)溶液中加入二甲基氨基吡啶(7毫克，0.06毫摩爾)和DCC(136毫克，0.66毫摩爾)。反應在室溫下保持過夜，然後在40℃保持2小時。用Celite過濾反應混合物，並倒入二氯甲烷中，用碳酸氫鈉水溶液洗滌。通過矽膠柱色譜分離產物2′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(N-三苯甲基-L-纈氨醯氧基甲基)-6-硬脂醯氧基己醯基]鳥苷(93毫克)，1H-NMR(DMSO d-6)7.88(s，1H)，7.29(m，15H)，6.52(s，2H)，6.17(dd，1H)，5.45(m，1H)，4.35(m，1H)，4.20(m，2H)，3.82(m，2H)，3.502.60(m，5H)，2.30(m，4H)，2.10(m，1H)，1.70(m，1H)，1.50(m，4H)，1.22(m，28H)，0.85(m，9H)。
b)製備2′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-纈氨醯氧基甲基)-6-硬脂醯氧基己醯基]鳥苷在室溫下，通過用80％乙酸(5毫升)處理30分鐘，以脫去步驟b)的化合物(90毫克，0.088毫摩爾)的N保護。蒸發，產物用矽膠柱色譜純化，得到標題化合物72毫克，1H-NMR(DMSO d-6)7.88(s，1H)，6.54(s，2H)，6.18(dd，1H)，5.48(dd，1H)，4.27(dt，1H)，4.19(m，2H)，3.98(m，4H)，3.17-2.55(m，4H)，2.29(m，4H)，1.95(m，1H)，1.75(m，1H)，1.50(m，4H)，1.21(m，28H)，0.84(m，9H)。
實施例132′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(L-纈氨醯氧基甲基)-4-硬脂醯氧基丁醯基]鳥苷a)製備2′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(N-苄氧基羰基-L-纈氨醯氧基)-4-硬脂醯氧基丁醯]鳥苷向2′3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷(113毫克，0.42毫摩爾)和3-(N-苄氧基羰基-L-纈氨醯氧基甲基)-4-硬脂醯氧基-丁酸(140毫克，0.21毫摩爾)的DMF(2毫升)溶液中加入二甲基氨基吡啶(3毫克，0.02毫摩爾)和DCC(52毫克，0.25毫摩爾)。兩天後，加入二氯甲烷(10毫升)和數滴乙酸，用Celite過濾有機相。濾液用碳酸氫鈉水溶液洗滌，用矽膠柱色譜分離產物2′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(N-苄氧基羰基-L-纈氨醯氧基甲基)-4-硬脂醯氧基-丁醯]鳥苷，產量51毫克，1H-NMR(CDCl3)7.79(d，1H)，7.26(m，5H)，6.38(s，2H)，6.23(t，1H)，5.44(m，2H)，5.08(s，2H)，4.50-4.10(m，8H)，3.15-2.40(m，5H)，2.30(t，2H)，2.14(m，1H)，1.58(m，2H)，1.24(m，28H)，0.87(m，9H).
b)製備2′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(L-纈氨醯氧基甲基)-4-硬脂醯氧基丁醯]鳥苷步驟a)的產物(76毫克，0.084毫摩爾)溶解在甲醇(3毫升)、乙酸乙酯(0.5毫升)和乙酸(0.01毫升)的混合溶劑中。向該溶液中加入鈀黑(10毫克)，2小時後，再加入10毫克鈀黑。3小時後，過濾混合物並蒸發，將殘餘物溶解在二氯甲烷中並用EDTA水溶液洗滌。乾燥有機相併和甲苯共蒸發得到標題化合物的乙酸鹽，產量65毫克，1H-NMR(DMSO d-6+D2O)7.87(s，1H)5.16(dd，1H)，5.37(dd，1H)，4.24(m，3H)，4.01(m，4H)，3.10-2.60(m，3H)，2.40(m，2H)，2.24(t，2H)，1.70(m，1H)，1.48(m，2H)，1.25(m，28H)，0.82(m，9H)。
實施例14氯甲酸3-[1-(N-CBz-L-纈氨醯)-2-硬脂醯]丙基酯1-(N-CBz-L-纈氨醯)-2-硬脂醯甘油(300毫克，0.5毫摩爾)溶解在20％光氣的甲苯(15毫升)中。18小時後，蒸發溶液，殘餘物和甲苯共蒸發數次，定量得到了標題產物。該產物和目標核苷用常規方法生成碳酸酯，例如在0℃，10∶1DMF/吡啶溶液中反應3-24小時，注入至NaHCO3溶液中，用二氯甲烷萃取。胺基酸脫保護，例如用鈀黑的甲醇、乙酸乙酯、乙酸溶液，以得到核苷-O-[1-(L-纈氨醯)-2-硬脂醯-3-丙氧基羰基]，1H-NMR(CDCl3)7.40(m，5H)，5.28(m，2H)5.10(s，2H)，4.35(m，5H)，2.35(m，2H)，2.17(m，1H)，1.56(m，2H)，1.30(m，28H)，0.95(m，9H)。
實施例155-(N-FMOC-L-纈氨醯氧基)-4-硬脂醯氧基-戊酸a)4，5-二羥基-2-戊烯酸苄酯
DL-甘油醛(4.5克，50毫摩爾)和(苄氧基羰基甲基)-三苯基-溴化磷(24.57克，50毫摩爾)的100毫升1，2-環氧丁烷的混合物回流過夜。在真空下蒸發混合物，用矽膠柱色譜分離產物，產率8克＝71％，1H-NMR(CDCl3)2.50(s，1H)2.96(s，1H)3.54(m，1H)3.70(m，1H)4.38(m，1H)5.12(s，2H)6.14(m，1H)6.90(m，1H)7.30(m，5H)。
b)5-(N-FMOC-L-纈氨醯氧基)-4-羥基-2-戊烯酸苄酯4，5-二羥基-2-戊烯酸苄酯(4.4克，20毫摩爾)、N-FMOC-L-纈氨酸(5.8克，17毫摩爾)和DMAP(0.21克，1.7毫摩爾)的100毫升二氯甲烷混合物冷卻至約10℃。在相同溫度下滴加DCC(4.2克，20毫摩爾)的25毫升二氯甲烷溶液，混合物在室溫下攪拌過夜。將混合物冷卻至5℃，過濾尿烷。在減壓下蒸發濾液，用矽膠柱色譜分離產物，產率6.6克＝71％，1H-NMR(CDCl3)0.91(m，6H)2.12(m，1H)4.38(m，5H)，5.14(s，2H)5.24(m，1H)6.20(m，1H)6.92(m，1H)7.30(m，13H)。
c)5-(N-FMOC-L-纈氨醯氧基)-4-硬脂醯氧基-2-戊烯酸苄酯在10℃，向5-(N-FMOC-L-纈氨醯氧基)-4-羥基-2-戊烯酸苄酯(6.5克，12毫摩爾)和吡啶(2.0克，25毫摩爾)的100毫升二氯甲烷溶液中滴加硬脂醯氯(4.55克，15毫摩爾)的25毫升二氯甲烷溶液，混合物攪拌過夜。加入100毫升5％碳酸氫鈉溶液，混合物攪拌30分鐘。分離有機相，用二氯甲烷兩次萃取水相。用硫酸鈉乾燥合併的有機相，並在真空下濃縮。用矽膠柱色譜分離產物。
產率7.8克＝80％，1H-NMR(CDCl3)0.88(m，9H)1.25(m，28H)1.58(m，2H)2.14(m，1H)2.32(m，2H)4.22(m，5H)5.19(s，2H)5.25(m，1H)6.12(m，1H)6.85(m，1H)7.35(m，13H)。
d)5-(N-FMOC-L-纈氨醯氧基)-4-硬脂醯氧基-戊酸室溫，常壓下，5-(N-FMOC-L-纈氨醯氧基)-4-硬脂醯氧基-2-戊烯酸苄酯(3.8克，4.69毫摩爾)的50毫升乙酸乙酯溶液用10％鈀炭(0.5克)氫化5小時。過濾催化劑，用乙酸乙酯和1，4-二烷洗滌，在減壓下蒸發溶液，產率3.3克＝99％1H-NMR(CDCl3)0.92(m，9H)1.25(m，28H)1.54(m，2H)1.98(m，2H)2.18(m，1H)2.28(m，2H)2.41(m，2H)4.32(m，5H)5.13(m，1H)5.33(m，1H)7.50(m，8H)。
實施例163-(N-FMOC-L-纈氨醯氧基)-2-硬脂醯氧基丙酸a)2，3-二羥基丙酸苄酯D，L-甘油酸鈣鹽二水合物(2.9克，10毫摩爾)和苄基溴(3.8克，22毫摩爾)的25毫升DMF混合物在60℃攪拌過夜。在減壓下蒸發混合物，用矽膠柱色譜分離產物，產率4克＝100％，1H-NMR(CDCl3)3.26(s，1H)3.90(m，2H)4.32(m，1H)5.25(s，2H)7.28(m，5H)。
b)3-(N-FMOC-L-纈氨醯氧基)-2-羥基丙酸苄酯2，3-二羥基丙酸苄酯(4.0克，20毫摩爾)、N-FMOC-L-纈氨酸(5.4克，16毫摩爾)和DMAP(0.2克，1.6毫摩爾)的80毫升二氯甲烷溶液冷卻至約10℃。在相同溫度下滴加DCC(4.12克，20毫摩爾)的25毫升二氯甲烷溶液，混合物在室溫下攪拌過夜。將混合物冷卻至5℃，過濾尿烷。在減壓下蒸發溶液，用矽膠柱色譜分離產物。產率4.7克＝45％1H-NMR(CDCl3)0.88(m，6H)2.05(m，1H)4.40(m，6H)5.23(m，3H)7.50(m，13H)c)3-(N-FMOC-L-纈氨醯氧基)-2-硬脂醯氧基丙酸苄酯向攪拌的3-(N-FMOC-L-纈氨醯氧基)-2-羥基丙酸苄酯(4.6克，8.89毫摩爾)和吡啶(1.41克，17.8毫摩爾)的80毫升二氯甲烷溶液中滴加硬脂醯氯(3.64克，12毫摩爾)的20毫升二氯甲烷溶液，混合物在室溫下攪拌過夜。加入100毫升5％碳酸氫鈉溶液，混合物攪拌30分鐘。分離有機相，用二氯甲烷兩次萃取水相。用硫酸鈉乾燥合併的有機相，並在真空在濃縮。用矽膠柱色譜分離產物，產率6.1克＝87％，1H-NMR(CDCl3)0.88(m，9H)1.26(m，28H)1.56(m，2H)2.06(m，1H)2.34(m，2H)4.36(m，6H)5.19(s，2H)5.32(m，1H)7.50(m，13H)d)3-(N-FMOC-L-纈氨醯氧基)-2-硬脂醯氧基丙酸室溫，常壓下，3-(N-FMOC-L-纈氨醯氧基)-2-硬脂醯氧基丙酸苄酯(0.78克，1毫摩爾)的20毫升乙酸乙酯溶液用10％鈀炭(0.2克)氫化3小時。過濾催化劑，用乙酸乙酯和1，4-二烷洗滌。在減壓下蒸發溶液，產率0.63克＝90％，1H-NMR(CDCl3)0.88(m，9H)1.24(m，28H)1.40(m，2H)2.12(m，3H)4.30(m，5H)5.16(m，1H)5.60(m，1H)7.40(m，8H)。
實施例171-(N-苄氧基羰基-L-纈氨醯氧基甲基)-2-硬脂醯氧基乙氧基羰基氯化物室溫，攪拌下將碳酸二(三氯甲基)酯(160毫克，0.54毫摩爾)加入至1-(N-苄氧基羰基-L-纈氨醯)-3-硬脂醯甘油/1-(N-苄氧基羰基-L-纈氨醯氧基)-3-硬脂醯氧基-2-丙醇/實施例4製備的(660毫克，1.12毫摩爾)和三乙胺(200毫克，2.0毫摩爾)的二氯甲烷(5毫升)溶液中。1小時後，加入正己烷(10毫升)，經短矽膠柱濾掉沉澱的鹽酸三乙胺，產物再用正己烷洗脫，在真空中蒸發溶劑，得到650毫克(89％)的標題化合物，13C NMR(CDCl3，62.975MHz)δ172.8(stea-COO)，171.2(Val-COO)，155.9(CONH)，154.1(COCl)，136.0(Ph-Cl-Val)，128.1-127.7(Ph)，67.2(CHOH)，66.7(PH CH2)，63.1(ValCOOCH2)，61.8(stea-COOCH2)，58.7(Val-αC)，33.7(stea-C2)，31.6(stea-C16)，31.0(Val-βC)，29.3-28.8(stea-C4-15)，24.5(stea-C3)，18.6和17.1(Val 2 CH3)，13.8(stea-C18)。
實施例18氯甲酸3-(N-CBz-L-纈氨醯氧基甲基)-4-硬脂醯氧基丁基酯a)3-(N-CBz-L-纈氨醯氧基甲基)-4-硬脂醯氧基丁醇在10℃下，向攪拌的4-硬脂醯氧基-3-(N-CBz-L-纈氨醯氧基甲基丁醛(按類似於實施例6的方法製備，步驟d用CBz保護纈氨酸)(2.0克，3.2毫摩爾)的25毫升甲醇溶液中少量分次地加入硼氫化鈉(0.6克，16毫摩爾)。混合物攪拌30分鐘，然後用乙酸酸化。混合物用水稀釋並用二氯甲烷萃取三次。用硫酸鈉乾燥有機相併在真空中濃縮。產物用矽膠柱色譜分離。產率1.5克＝75％，1H-NMR(CDCl3)0.88(m，9H)1.25(m，28H)1.52(m，4H)2.24(m，3H)3.68(m，2H)4.12(m，1H)4.24(m，1H)5.08(s，2H)5.22(m，1H)7.36(m，5H)
b)氯甲酸3-(N-CBz-L-纈氨醯氧基甲基)-4-硬脂醯氧基丁基酯步驟中間體a)在20毫升20％光氣的甲苯溶液中攪拌過夜。混合物在減壓下蒸發得到標題化合物，產率1.5克＝97％，1H-NMR(CDCl3)0.88(m，9H)1.28(m，28H)1.58(m，2H)1.72(m，2H)2.15(m，1H)2.31(m，2H)4.08-4.42(m，5H)5.10(s，2H)5.22(m，1H)7.36(m，5H)。
實施例192′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[L-(L-纈氨醯氧基)-2-硬脂醯氧基-3-丙氧基羰基]鳥苷a)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[1-(N-CBz-L-纈氨醯氧基)-2-硬脂醯氧基-3-丙氧基羰基]鳥苷在0℃，向2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷(270毫克，1毫摩爾)的DMF(10毫升)和吡啶(1毫升)溶液中加入氯甲酸3-{1-(N-CBz-L-纈氨醯)-2-硬脂醯}丙酯(619毫克，0.5毫摩爾)。3小時後，反應混合物倒入碳酸氫鈉溶液中，並用二氯甲烷萃取。有機相在真空中乾燥，用矽膠柱色譜分離2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[1-(N-CBz-L-纈氨醯氧基)-2-硬脂醯氧基-3-丙氧基羰基]鳥苷(195毫克)，1H-NMR(CDCl3)7.69(s，1H)，7.31(m，5H)，6.50(m，2H)，6.32(m，1H)，5.3(m，2H)，5.09(m，2H)，4.35(m，7H)，2.60(m，2H)，2.31(t，2H)，2.20(m，1H)，1.58(m，2H)，1.23(m，28H)，0.92(m，9H)。
b)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[1-(L-纈氨醯氧基)-2-硬脂醯氧基-3-丙氧基羰基]鳥苷將2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[1-(N-CBz-L-纈氨醯氧基)-2-硬脂醯氧基-3-丙氧基羰基]鳥苷(190毫克)溶解在甲醇(6毫升)、乙酸乙酯(2毫升)和乙酸(1毫升)的混合溶劑中。向該溶液中加入鈀黑(30毫克)，反應混合物在氫氣下保持2小時，然後過濾，蒸發濾液，用矽膠柱色譜分離標題產物110毫克，1H-NMR(DMSO-δ6)7.86(ds，1H)，6.51(s，2H)，6.17(dd，1H)，5.48(m，1H)，5.20(m，1H)，4.25(m，7H)，2.70(m，2H)，2.27(m，2H)，1.72(m，1H)，1.47(m，2H)，1.22(m，28H)，0.84(m，9H).
實施例202′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-纈氨醯氧基)-4-硬脂醯氧基-戊醯基]鳥苷向2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷(0.27克，1毫摩爾)和5-(N-FMOC-L-纈氨醯氧基)-4-硬脂醯氧基戊酸(0.94克，1.3毫摩爾)的30毫升DMF溶液中加入DMAP(16毫克，0.13毫摩爾)、HOBT(0.176克，1.3毫摩爾)和DCC(0.248克，1.2毫摩爾)。在室溫下攪拌混合物三天。加入4克矽膠，在真空中蒸發混合物。用矽膠柱色譜分離產物2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(FMOC-L-纈氨醯氧基)-4-硬脂醯氧基-戊醯基]鳥苷，產量0.45克，1H-NMR(DMSO-δ6)0.88(m，9H)1.20(m，28H)1.45(m，2H)1.78(m，2H)2.18(m，2H)2.36(m，1H)2.62(m，2H)3.88(m，1H)4.22(m，6H)4.92(m，1H)5.45(m，1H)6.19(m，1H)6.52(s，2H)7.26-7.88(m，8H)。
被保護的中間體如上述方法脫保護得到標題化合物。
實施例202′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(N-FMOC-L-纈氨醯氧基)-2-硬脂醯氧基-丙醯基]鳥苷向攪拌的3-(N-FMOC-L-纈氨醯氧基)-2-硬脂醯氧基丙酸(0.61克，0.88毫摩爾)的5毫升無水二乙醚混合物的加入一滴DMF和亞硫醯氯(0.52克，4.4毫摩爾)。混合物回流兩小時，然後在減壓下蒸發。產物溶解在無水二氯甲烷中並滴加2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷(0.215克，0.8毫摩爾)和吡啶(0.35克，4.4毫摩爾)的20毫升DMF溶液中。溶液攪拌過夜。加入兩克矽膠，混合物在真空中蒸發。用矽膠柱色譜分離產物，產率0.19克＝25％，1H-NMR(CDCl3)0.88(m，9H)1.25(m，28H)1.62(m，2H)2.12(m，1H)2.38(m，2H)2.58(m，2H)4.12-4.76(m，6H)5.32(m，2H)6.12(m，1H)6.26(m，1H)6.44(m，1H)7.12-7.78(m，8H)。
實施例21丁二酸1-(N-CBz-L-纈氨醯)-3-硬脂醯-2-丙基單酯1-(N-CBz-L-纈氨醯)-3-硬脂醯甘油(886毫克，1.5毫摩爾)和丁二酸酐(450毫克，4.5毫摩爾)溶解在DMF(15毫升)和吡啶(1毫升)的混合溶劑中。反應在室溫下保持3小時，然後在60℃保持5小時。反應混合物倒入乙酸和水的溶液中，並用二氯甲烷萃取。用水洗滌有機相，並蒸發，用矽膠柱色譜分離產物，產量900毫克，
1H-NMR(CDCl3)7.43(m，5H)，5.27(m，1H)，5.09(m，2H)，4.21(m，5H)，2.54(m，4H)，2.29(t，2H)，2.13(m，1H)，1.59(m，2H)，1.25(m，28H)，0.90(m，9H)。
實施例222′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1-(L-纈氨醯氧基)-3-硬脂醯氧基-2-丙氧基羰基]-丙醯基}鳥苷向2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷(351毫克，1.3毫摩爾)和丁二酸1-(N-CBz-L-纈氨醯)-3-硬脂醯-2-丙基單酯(900毫克，1.3毫摩爾)的DMF(15毫升)溶液中加入二甲基氨基吡啶(24毫克，0.2毫摩爾)、1-羥基苯並三唑(175毫克，1.3毫摩爾)、DCC(321毫克，1.56毫摩爾)。48小時後，過濾反應混合物，濾液倒入碳酸氫鈉溶液中，並用二氯甲烷萃取。用矽膠柱色譜分離產物2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1-(N-CBz-L-纈氨醯)-3-硬脂醯-甘油氧基羰基]-丙醯基}鳥苷780毫克，1H-NMR(DMSO-d6)7.89(s，1H)，7.34(m，5H)，6.50(s，2H)，6.17(dd，1H)，5.46(m，1H)，5.38(m，1H)，5.02(s，2H)，4.22(m，7H)，3.32(s，4H)，2.80(m，2H)，2.57(m，2H)，2.31(t，2H)，2.05(m，1H)，1.48(m，2H)，1.21(m，28H)，0.84(m，9H)。
向2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1-(N-CBz-L-纈氨醯)-3-硬脂醯-2-丙氧基羰基]-丙醯基}鳥苷(460毫克，0.5毫摩爾)的甲醇(10毫升)、乙酸乙酯(3毫升)和乙酸(2毫升)的混合溶劑的溶液中加入鈀黑(50毫克)。在氫氣氣氛下反應2小時後，過濾混合物，乾燥濾液，用矽膠柱色譜分離目標產物360毫克，1H-NMR(DMSO-d6)7.89(s，1H)，6.51(s，2H)，6.16(dd，1H)，5.48(m，1H)，5.17(m，1H)，4.28(m，7H)，2.90(m，2H)，2.58(m，4H)，2.28(t，2H)，1.85(m，1H)，1.49(m，2H)，1.22(m，28H)，0.85(m，9H)。
實施例23
在室溫下，將硬脂醯氯(12.1克，40毫摩爾，1.0當量)的CH2Cl2(100毫升)溶液緩慢地(1小時)加入到2，2-二(羥甲基)丙酸(26.8克，200毫摩爾，5.0當量)的吡啶(400毫升)溶液中。反應混合物在室溫下攪拌過夜，然後在真空下濃縮(100毫升)。反應混合物慢慢用飽和NaHCO3(400毫升)處理，然後用CH2Cl2(3×300毫升)萃取。合併有機相，用鹽水洗滌，Na2SO4乾燥，並在真空中濃縮。粗產物在矽膠上(500克)以19/1～4/1 CH2Cl2-MeOH作為洗脫劑進行色譜分離，得到硬脂酸單酯，Rf(9/1 CH2Cl2-MeOH)0.33，產率12.5克(78％)。
將N-Cbz-L纈氨酸(18.85克，75毫摩爾，2.4當量)和DMAP(855毫克，7毫摩爾，0.22當量)的CH2Cl2(800毫升)溶液冷卻至0℃，並用DCC(14.4克，70毫摩爾，2.2當量)處理。反應混合物在室溫下攪拌30分鐘，然後慢慢地(1小時)用上述硬脂酸單酯(12.5克，31.2毫摩爾，1當量)的CHCl3(200毫升，不含醇)溶液處理。攪拌過夜後，過濾懸浮液，用鹽水洗滌濾液，Na2SO4乾燥，並在真空中濃縮。粗產物在矽膠上(500克)以19/1～4/1 CH2Cl2-MeOH作為洗脫劑進行色譜純化，得到上述二酯，Rf(9/1 CH2Cl2-MeOH)0.46，產率13.8克(70％)，1H-NMR(250MHz，CDCl3)δ7.35-7.3(m，5H，ArH)，5.32(d，1H，CH)，5.10(s，2H，CH2Ph)，4.33-4.18(m，4H，CH2)，2.28(t，2H，CH2)，2.22-2.05(m，1H，CH)，1.65-1.50(m，2H，CH2)，1.35-1.15(m，31H)，1.00-0.82(m，9H，Me)。
實施例242′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-纈氨醯氧基)-4-硬脂醯氧基-戊醯基]鳥苷a)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(N-FMOC-L-纈氨醯氧基)-4-硬脂醯氧基-戊醯基]鳥苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷(269毫克，1.0毫摩爾)、5-(N-FMOC-L-纈氨醯氧基)-4-硬脂醯氧基-戊酸(940毫克，1.3毫摩爾)、DMAP(16毫克，0.13毫摩爾)和HOBT(176毫克，1.3毫摩爾)和DMF共蒸發二次，減至30毫升。加入DCC(248毫克，1.2毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過夜。過濾混合物，在減壓下蒸發溶液。加入乙酸乙酯(50毫升)，用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌兩遍。用硫酸鈉乾燥有機相併在減壓下蒸發。用矽膠柱色譜分離產物。產量450毫克，1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，9H)1.22(m，28H)1.45(m，2H)1.83(m，2H)2.21(m，2H)2.37(m，1H)3.90(m，1H)5.36-5.58(m，1H)6.18(m，1H)6.50(s，2H)7.28-7.91(m，10H)。
b)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-纈氨醯氧基)-4-硬脂醯氧基-戊醯基]鳥苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-4-硬脂醯氧基-戊醯基]鳥苷(300毫克，0.308毫摩爾)的5毫升N，N-二異丙基乙胺和5毫升DMF的混合物在室溫下攪拌三天。加入乙酸(5毫升)，混合物在減壓下蒸發，用矽膠柱色譜以乙酸鹽形式分離產物，產量90毫克，1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，9H)1.24(m，28H)1.55(m，2H)1.91(m，2H)2.31(m，2H)2.44(m，1H)2.56-3.08(m，2H)3.15(m，1H)4.00-4.49(m，5H)5.08(m，1H)5.40-5.62(m，1H)6.24(m，1H)6.54(s，2H)7.96(s，1H)。
實施例252′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(L-纈氨醯氧基)-2-硬脂醯氧基-丙醯基]鳥苷a)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(N-CBz-L-纈氨醯氧基)-2-硬脂醯氧基-丙醯基]鳥苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷(404毫克，1.5毫摩爾)、3-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-2-硬脂醯氧基-丙酸(1.06克，1.75毫摩爾)、DMAP(24毫克，0.2毫摩爾)和HOBT(264毫克，1.82毫摩爾)的混合物與DMF共蒸發二次，減至約30毫升。加入DCC(372毫克，1.8毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過夜。過濾混合物，在減壓下蒸發溶液。加入乙酸乙酯(50毫升)，用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌有機相兩遍，用硫酸鈉乾燥有機相併在減壓下蒸發，通過用矽膠柱色譜分離產物，產率0.73克，1H-NMR(DMSO d-6)0.82(m，9H)1.22(m，28H)1.48(m，2H)2.31(m，2H)2.50-3.00(m，2H)3.91(m，1H)4.18-4.52(m，5H)5.00(s，2H)5.30-5.61(m，2H)6.16(m，1H)6.50(s，2H)7.32(m，5H)7.71(m，1H)7.92(s，1H)10.18(s，1H)。
b)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(L-纈氨醯氧基)-2-硬脂醯氧基-丙醯基]鳥苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(N-CBz-L-纈氨醯氧基)-2-硬脂醯氧基-丙醯基]鳥苷(350毫克，0.4毫摩爾)的乙酸乙酯(25毫升)、甲醇(5毫升)和乙酸(5毫升)的溶液用鈀黑(300毫克)在常壓下氫化三小時.濾掉催化劑，用乙酸乙酯和甲醇洗滌。在減壓下蒸發溶液，用矽膠柱色譜以乙酸鹽形式分離產物，產量120毫克，1H-NMR(DMSO d-6)0.84(m，9H)1.22(m，28H)1.50(m，2H)2.32(m，2H)2.50-3.00(m，2H)3.07(m，1H)4.21-4.59(m，5H)5.38-5.59(m，2H)6.17(m，1H)6.0(s，2H)7.90(s，1H)。
實施例262′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3，3-二(L-纈氨醯氧基甲基)-丙酸]鳥苷a)合成4，4-二(N-CBZ-L-纈氨醯氧基甲基)丁-1-烯向2-烯丙基-1，3-丙二醇(2.32克，20毫摩爾)、N-CBZ-L-纈氨酸(10.06克，40毫摩爾)和DMAP(0.488克，4毫摩爾)的120毫升二氯甲烷溶液中分批加入DCC(9.08克，44毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過夜，將混合物冷卻至5℃，濾掉尿烷。蒸發濾液，用矽膠柱色譜分離產物，產量9.0克，1H-NMR(CDCl3)0.89(m，12H)5.11(s，2H)5.73(m，1H)b)合成3，3-二(N-CBZ-L-纈氨醯氧基甲基)丙酸向冷卻的4，4-二(N-CBZ-L-纈氨醯氧基甲基)-丁-1-烯(14.6克，25毫摩爾)和四丁基溴化銨(1.3克，4毫摩爾)的120毫升苯溶液中加入100毫升水。劇烈攪拌下分批加入高錳酸鉀(15.8克，100毫摩爾)，混合物在15-20℃間攪拌2小時。向漿液中加入酸式亞硫酸鹽水溶液直至混合物褪色。混合物用2N鹽酸酸化，並用乙酸乙酯萃取四次。用水洗滌有機相兩次，碳酸鈉乾燥並在減壓下蒸發。產物用矽膠柱色譜分離，產量7.5克，1H-NMR(CDCl3)0.89(m，12H)2.05(m，2H)2.46(m，2H)2.62(m，1H)4.20(m，6H)5.11(s，4H)5.30(m，2H)7.35(m，10H)c)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3，3-二(N-CBZ-L-纈氨醯氧基甲基)-丙醯]鳥苷
2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷(1.35克，5毫摩爾)、3，3-二-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基甲基)-丙酸(3.6克，6毫摩爾)、DMAP(0.061克，0.5毫摩爾)和HOBT(0.81克，6毫摩爾)的溶液與DMF共蒸發二次，減至約120毫升。加入DCC(1.24克，6毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過夜。過濾混合物，在減壓下蒸發溶劑。加入乙酸乙酯(200毫升)，用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌有機相兩遍。用硫酸鈉乾燥有機相併在減壓下蒸發。用矽膠柱色譜分離產物。產量2.7克。
1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，12H)2.00(m，2H)2.50-3.00(m，2H)3.90-4.43(m，10H)5.08(s，4H)5.32-5.59(m，1H)6.17(m，1H)6.50(s，2H)7.28(m，10H)7.72(m，2H)7.90(s，1H)d)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3，3-二(L-纈氨醯氧基甲基)-丙酸]鳥苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3，3-二(N-CBZ-L-纈氨醯氧基甲基)-丙醯]鳥苷(2.6克，3.1毫摩爾)的80毫升乙酸乙酯、20毫升甲醇和20毫升乙酸的溶液用鈀黑(0.3克)在常壓下氫化兩小時。濾掉催化劑，用乙酸乙酯和甲醇洗滌。在減壓下蒸發溶液，用矽膠柱色譜以二乙酸鹽形式分離產物，產量1.2克。
1H-NMR(DMSO d-6)0.90(m，12H)1.78(m，2H)2.50-3.00(m，2H)3.09(m，2H)4.02-4.45(m，8H)5.34-5.59(m，1H)6.17(m，1H)6.62(s，2H)7.88(s，1H)。
實施例272′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(L-纈氨醯氧基甲基)-4-硬脂醯氧基-丁氧基醯基]鳥苷a)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(N-CBz-L-纈氨醯氧基甲基)-4-硬脂醯氧基-丁氧基羰基]鳥苷向2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷(269毫克，1.0毫摩爾)的絕對DMF溶液中加入吡啶(198毫克，2.5毫摩爾)和3-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基甲基)-4-硬脂醯氧基-丁氧基羰基氯化物(750毫克，1.1毫摩爾)的5毫升二氯甲烷溶液。混合物在室溫下攪拌三天，在減壓下蒸發溶液。用矽膠柱色譜分離產物，產量120毫克，1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，9H)1.24(m，28H)5.08(，2H)6.24(m，1H)8.00(s，1H)。
b)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(L-纈氨醯氧基甲基)-4-硬脂醯氧基-丁氧基羰基]鳥苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(N-CBz-L-纈氨醯氧基甲基)-4-硬脂醯氧基-丁氧基羰基]鳥苷的15毫升乙酸乙酯、2毫升甲醇和2毫升乙酸的混合物用鈀黑(40毫克)在常壓下氫化兩小時。濾掉催化劑，用乙酸乙酯和甲醇洗滌，在減壓下蒸發溶液，產物以乙酸鹽形式用矽膠柱色譜分離，產量78毫克，1H-NMR(DMSO d-6)0.87(m，9H)1.22(m，28H)1.48(m，2H)1.68(m，2H)2.12(m，1H)2.26(m，2H)2.50-3.00(m，2H)4.00-4.42(m，10H)5.34-5.58(m，1H)6.18(m，1H)6.52(s，2H)7.82(s，1H)。
實施例282′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[2-(L-纈氨醯氧基)硬脂醯]鳥苷a)合成2-羥基硬脂酸苄酯向攪拌的DL-2-羥基硬脂酸(3.0克，10毫摩爾)的20毫升無水DMF溶液中加入叔丁醇鉀(1.23克，11毫摩爾)，混合物在60℃攪拌一小時，加入苄基溴(2.14克，12.5毫摩爾)，混合物在80℃攪拌六小時，在減壓下蒸發混合物並加入100毫升乙酸乙酯。分離有機相併用水洗滌四次，用硫酸鈉乾燥有機相併在真空中濃縮，通過矽膠柱色譜分離產物，產量3.3克，1H-NMR(CDCl3)0.88(m，3H)1.26(m，28H)1.62(m，2H)4.20(m，1H)5.20(s，2H)7.36(m，5H)。
b)合成2-(N-FMOC-L-纈醯氨氧基)硬脂酸苄酯向2-羥基硬脂酸苄酯(3.2克，8.2毫摩爾)、N-FMOC-L-纈氨酸(3.4克，10毫摩爾)和DMAP(0.12克，1毫摩爾)的80毫升二氯甲烷溶液中加入DCC(2.5克，12毫摩爾)溶液，混合物在室溫下攪拌過夜，將混合物冷卻至5℃，並濾掉尿烷。蒸發濾液，用矽膠柱色譜分離產物，產量4.5克，1H-NMR(CDCl3)0.90(m，6H)1.26(m，6H)1.82(m，2H)2.16(m，1H)4.21(m，1H)4.36(m，2H)5.10(m，1H)5.18(s，2H)5.28(m，1H)7.20-7.80(m，13H)。
c)合成2-(N-FMOC-L-纈醯氨氧基)硬脂酸2-(N-FMOC-L-纈醯氨氧基)硬脂酸苄酯(4.4克，6.2毫摩爾)的50毫升乙酸乙酯溶液用10％的鈀炭(0.5克)在常壓下氫化兩小時。濾掉催化劑，用乙酸乙酯和1，4-二烷洗滌。在減壓下蒸發溶液，產物以乙酸鹽形式通過矽膠柱色譜分離，產量3.4克，1H-NMR(CDCl3)0.88(m，6H)1.26(m，28H)1.82(m，2H)2.28(m，1H)4.20(m，1H)4.40(m，2H)5.00(m，1H)5.41(m，1H)7.26-7.82(m，8H)。
d)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[2-(N-FMOC-L-纈氨醯氧基)硬脂醯]鳥苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷(404毫克，1.5毫摩爾)、2-(N-FMOC-L-纈氨醯氧基)-硬脂酸(1.24克，2毫摩爾)、DMAP(24毫克，0.2毫摩爾)和HOBT(264毫克，1.95毫摩爾)的混合物與DMF共蒸發二次，減至約30毫升。加入DCC(372毫克，1.8毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過夜。過濾混合物，在減壓下蒸發溶液。加入乙酸乙酯(50毫升)，用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌有機相兩次，用硫酸鈉乾燥有機相併在減壓下蒸發，產物以乙酸鹽形式通過矽膠柱色譜分離，產量1.2克，1H-NMR(DMSO d-6)0.80-0.90(m，9H)1.22(m，28H)2.12(m，1H)2.50-3.00(m，2H)3.98(m，1H)4.96(m，1H)6.17(m，1H)6.50(s，2H)7.32-7.95(m，10H)e)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[2-(L-纈氨醯氧基)硬脂醯]鳥苷向2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[2-(N-FMOC-L-纈氨醯氧基)硬脂醯]鳥苷(800毫克，0.89毫摩爾)的15毫升DMF溶液中加入DBU(1.35克，8.9毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌5分鐘。加入乙酸(2毫升)，混合物在減壓下蒸發。加入水(20毫升)，混合物用二氯甲烷萃取三次。用硫酸鈉乾燥有機相併在減壓下蒸發，通過矽膠柱色譜分離產物，產量165毫克，1H-NMR(DMSO d-6)0.87(m，9H)1.22(m，28H)1.70(m，2H)1.88(m，1H)2.50-3.00(m，2H)3.20(m，1H)4.32(m，3H)4.94(m，1H)5.32-5.54(m，1H)6.14(m，1H)6.49(s，2H)7.89(s，1H)實施例292′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-3-[13-二-(L-纈氨醯氧基)-2-丙氧基羰基丙醯基]鳥苷a)合成丁二酸1，3-二苄氧基-2-丙基單酯在60℃下，1，3-二苄氧基丙-2-醇(6.8克，25毫摩爾)和丁二酸酐(7.5克，75毫摩爾)和DMAP(12.2克，100毫摩爾)攪拌一小時。混合物在減壓下蒸發，用2N HCl酸化並用乙酸乙酯萃取兩次。用水洗滌合併的有機相三次，用硫酸鈉乾燥有機相併在減壓下蒸發，通過矽膠柱色譜分離產物，產量7.8克，b)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(1，3-二苄氧基-2-丙氧基羰基)丙醯基]鳥苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷(1.61克，6毫摩爾)、HOBT(0.972克，7.2毫摩爾)、DMAP(73.3毫克，0.6毫摩爾)和丁二酸單1，3-二苄氧基-2-丙酯(2.68克，7.2毫摩爾)的混合物與DMF共蒸發二次，減至約150毫升。加入DCC(1.55克，7.5毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌72小時。過濾混合物，在減壓下蒸發溶劑。加入乙酸乙酯(200毫升)，用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌有機相兩遍，硫酸鈉乾燥有機相併在減壓下蒸發，通過矽膠柱色譜分離產物，產量3.3克。
c)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(1，3-二羥基-2-丙氧基羰基)丙醯基]鳥苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(1，3-二苄氧基-2-丙氧基羰基)丙醯基]鳥苷(3.2克，5.13毫摩爾)的50毫升乙酸乙酯、50毫升甲醇和10毫升乙酸溶液用鈀黑(0.6克)在40psi壓力下氫化過夜。濾掉催化劑，用甲醇洗滌。在減壓下蒸發溶液，用矽膠柱色譜分離產物，產量1.64克。
d)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1，3-二(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-2-丙氧基羰基]丙醯基}鳥苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(1，3-二羥基-2-丙氧基羰基)丙醯基]鳥苷(1.93克，2.93毫摩爾)、N-CBZ-L-纈氨酸(1.76克，7毫摩爾)、HOBT(0.95克，7毫摩爾)和DMAP(85.5毫克，0.7毫摩爾)的混合物與DMF共蒸發二次，減至約60毫升。加入DCC(1.55克，7.5毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過夜，混合物在60℃保溫四小時，然後冷卻至10℃。過濾混合物，在減壓下蒸發溶劑。加入乙酸乙酯(150毫升)，用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌有機相兩次，硫酸鈉乾燥有機相併在減壓下蒸發，通過矽膠柱色譜分離產物，產量1.6克。
e)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1，3-二(L-纈氨醯氧基)-2-丙氧基羰基]丙醯基}鳥苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1，3-二(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-2-丙氧基羰基]丙醯基}鳥苷(1.6克，1.75毫摩爾)的80毫升乙酸乙酯、20毫升甲醇和20毫升乙酸溶液用鈀黑(0.3克)在室溫和常壓下氫化兩小時。濾掉催化劑，用甲醇洗滌。在減壓下蒸發溶液，產物以二乙酸鹽形式用矽膠柱色譜分離，產量1.02克，1H-NMR(DMSO d-6)0.84(m，12H)1.85(m，2H)2.58(m，4H)2.60-3.10(m，2H)3.11(m，2H)3.61-4.39(m，7H)5.19(m，1H)5.35-5.56(m，1H)6.16(m，1H)，6.62(s，2H)7.89(s，1H)。
實施例302′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1-(L-纈氨醯氧基)-3-羥基-2-丙氧基羰基]丙醯基}鳥苷a)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-3-羥基-2-丙氧基羰基]丙醯基}鳥苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[3-(1，3-羥基-2-丙氧基羰基)丙醯基]鳥苷(1.3克，2.93毫摩爾)、N-CBZ-L-纈氨酸(1.00克，4毫摩爾)、HOBT(0.54克，4毫摩爾)和DMAP(48.8毫克，0.4毫摩爾)的混合物與DMF共蒸發兩次，減至約60毫升。加入DCC(0.91克，4.4毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌72小時。過濾混合物，在減壓下蒸發溶液。加入乙酸乙酯(150毫升)，有機相用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌兩次，硫酸鈉乾燥有機相併在減壓下蒸發。通過矽膠柱色譜分離產物，產量0.99克。
b)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1-(L-纈氨醯氧基)-3-羥基-2-丙氧基羰基]丙醯基}鳥苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-3-羥基-2-丙氧基羰基]丙醯基}鳥苷(0.82克，1.21毫摩爾)的30毫升乙酸乙酯、15毫升甲醇和15毫升乙酸溶液用鈀黑(0.15克)在室溫和常壓下氫化兩小時。濾掉催化劑，用甲醇洗滌。在減壓下蒸發溶液，產物以乙酸鹽形式通過矽膠柱色譜分離，產量0.5克，1H-NMR(DMSO d-6)0.84(m，6H)1.86(m，1H)2.58(m，4H)2.63-3.02(m，2H)3.10-4.38(m，9H)5.34-5.55(m，1H)6.16(m，1H)6.56(s，2H)7.90(s，1H)。
實施例315′-L-纈氨醯-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷向2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷(810毫克，3毫摩爾)和4-二甲基氨基吡啶(73毫克，0.6毫摩爾)、N-CBz-L纈氨酸(1.5克，6毫摩爾)和1-羥基苯並三唑(810毫克，6毫摩爾)的DMF(20毫升)溶液中加入DCC(1.36克，6.6毫摩爾)。72小時後，過濾反應混合物，在真空中濃縮。用矽膠柱色譜分離5′-(N-CBz-L-纈氨醯)-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷(1.15克)。
將該中間體(503毫克，1毫摩爾)溶解在乙酸乙酯(10毫升)、甲醇(20毫升)和乙酸(2毫升)的混合溶劑中。向混合物中加入鈀黑(100毫克)，在氫氣中，常壓下保持反應混合物3小時。過濾和濃縮後，用矽膠柱色譜分離目標產物(370毫克)，1H-NMR(DMSO d-6)7.94(s，1H)，6.52(s，2H)，6.17(dd，1H)，5.47(dd，1H)，4.15(m，3H)，3.15(d，1H)3.01-2.62(m，2H)1.80(m，1H)0.82(dd，6H)。
實施例322′，3′-雙脫氧-3′-氟-5-O-[2-(L-纈氨醯氧基)丙醯基]鳥苷a)合成2-羥基丙酸4-甲氧基苄酯向攪拌的DL-2-羥基丙酸(9.0克，100毫摩爾)的100毫升無水DMF溶液中加入叔丁醇鉀(12.34克，110毫摩爾)，在60℃下攪拌混合物一小時。加入4-甲氧基苯甲醯氯(18.8克，120毫摩爾)，在60℃下攪拌混合物8小時。混合物在減壓下蒸發，加入250毫升乙酸乙酯。用水洗滌有機相四次，硫酸鈉乾燥並在真空中濃縮，產量16.8克，1H-NMR(CDCl3)1.40(m，3H)3.81(s，3H)4.26(m，1H)5.14(s，2H)6.90(d，2H)7.28(d，2H)。
b)合成2-(N-CBZ-L纈氨醯氧基)丙酸4-甲氧基苄酯向2-羥基丙酸4-甲氧基苄酯(4.2克，20毫摩爾)、N-CBZ-L纈氨酸(5.02克，20毫摩爾)和DMAP(0.24克，2毫摩爾)的100毫升二氯甲烷溶液中加入DCC(4.54克，22毫摩爾)溶液，混合物在室溫下攪拌過夜，將混合物冷卻至5℃，濾掉尿烷。蒸發濾液並用矽膠柱色譜分離產物，產量7.9克，1H-NMR(CDCl3)0.88(m，6H)1.50(m，3H)2.26(m，1H)3.81(s，3H)4.34(m，1H)5.04-5.30(m，6H)6.88(d，2H)7.26(m，7H)。
c)合成2-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-丙酸向2-(N-CBZ-L纈氨醯氧基)丙酸4-甲氧基苄酯(7.8克，17.5毫摩爾)的二氯甲烷(100毫升)溶液中加入三氟乙酸(10毫升)，在室溫下攪拌溶液一小時。在減壓下蒸發溶液，用矽膠柱色譜分離產物，產量5.0克，1H-NMR(CDCl3)0.94(m，6H)1.56(d，3H)2.30(m，1H)4.42(m，1H)5.12-5.30(m，4H)7.28(m，5H)。
d)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5-O-[2-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)丙醯基]鳥苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷(404毫克，1.5毫摩爾)、2-(N-CBZ-L纈氨醯氧基)丙酸(0.582克，1.8毫摩爾)、DMAP(22毫克，0.18毫摩爾)和HOBT(243毫克，1.8毫摩爾)的混合物與DMF共蒸發兩次，減至約30毫升。加入DCC(412毫克，2.0毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過夜。過濾混合物，在減壓下蒸發溶液。加入乙酸乙酯100毫升，有機相用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌兩次，硫酸鈉乾燥有機相併在減壓下蒸發。通過矽膠柱色譜分離產物，產量0.72克，1H-NMR(DMSO d-6)0.92(m，6H)1.40(d，3H)2.10(m，1H)2.50-3.06(m，2H)4.03(m，1H)4.20-4.44(m，3H)5.04(s，2H)5.12(m，1H)5.44-5.58(m，1H)6.18(t，1H)6.52(s，2H)7.36(m，5H)7.70(d，2H)7.92(s，1H)e)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5-O-[2-(L-纈氨醯氧基)丙醯基]鳥苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5-O-[2-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)丙醯基]鳥苷(0.6克，1.04毫摩爾)的20毫升乙酸乙酯、10毫升甲醇和10毫升乙酸溶液用鈀黑(0.1克)在室溫和常壓下氫化兩小時。濾掉催化劑，用甲醇洗滌，在減壓下蒸發溶液，得到乙酸鹽形式的標題化合物，產量0.5克，1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，6H)1.40(d，3H)1.92(m，4H)2.52-3.04(m，2H)3.18(m，1H)4.18-4.42(m，3H)5.06(m，1H)5.32-5.58(m，2H)6.18(m，1H)6.52(s，2H)7.90(s，1H)。
實施例332′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-3-[2，3-二-(L-纈氨醯氧基)-1-丙氧基羰基]丙醯基鳥苷a)合成丁二酸4-甲氧基苄基單酯向丁二酸酐(75克，750毫摩爾)和4-甲氧基苄醇(69.1克，500毫摩爾)的1，4-二烷(300毫升)混合物中加入吡啶(79.1克，1000毫摩爾)，混合物在80℃攪拌5小時。在減壓下蒸發混合物，加入600毫升乙酸乙酯和60毫升乙酸。用水洗滌有機相三次，硫酸鈉乾燥並在減壓下蒸發。產物用甲苯進行重結晶，產量104克，1H-NMR(DMSO d-6)2.48(m，4H)3.72(s，3H)5.00(s，2H)6.90(d，2H)7.28(d，2H)。
b)合成丁二酸2，3-二羥基-丙酯，4-甲氧基苄酯向甘油(23.0克，250毫摩爾)、丁二酸4-甲氧基苄基單酯(5.96克，25毫摩爾)和DMAP(0.36克，3毫摩爾)的DMF(200毫升)溶液中加入DCC(6.2克，30毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過夜，在減壓下蒸發混合物，加入150毫升二氯甲烷。過濾混合物，溶液用水洗滌兩次。水相用二氯甲烷萃取兩次，合併的有機相用硫酸鈉乾燥。溶液在減壓下蒸發，用矽膠柱色譜分離產物，產量3.0克，1H-NMR(CDCl3)2.65(m，4H)3.61(m，2H)3.80(s，3H)3.90(m，1H)4.18(m，2H)5.05(s，2H)6.89(d，2H)7.26(d，2H)。
c)合成丁二酸2，3-二-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-丙酯，4-甲氧基苄酯向攪拌的丁二酸2，3-二羥基-丙酯，4-甲氧基苄酯(2.9克，9.28毫摩爾)、N-CBZ-L-纈氨酸(5.03克，20毫摩爾)和DMAP(0.244克，2毫摩爾)的二氯甲烷(60毫升)溶液中加入DCC(4.5克，22毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過夜，過濾混合物，溶液在減壓下蒸發，用矽膠柱色譜分離產物，產量2.5克，1H-NMR(CDCl3)0.90(m，12H)2.16(m，2H)2.62(m，4H)3.80(s，3H)4.32(m，4H)5.05-5.52(m，9H)6.89(d，2H)7.30(m，12H)。
d)合成丁二酸2，3-二-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-丙酯向上述中間體(2.3克，2.95毫摩爾)的二氯甲烷(25毫升)溶液中加入三氟乙酸(2.5毫升)，溶液在室溫下攪拌兩小時。在減壓下蒸發溶液，用矽膠柱色譜分離產物，產量1.8克，1H-NMR(CDCl3)0.92(m，12H)2.12(m，2H)2.64(m，4H)4.32(m，4H)5.10(s，4H)5.22-5.50(m，3H)7.34(m，10H)。
e)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[2，3-二-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-1-丙氧基羰基]丙醯基}鳥苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷(0.538克，2毫摩爾)、HOBT(0.327克，2.42毫摩爾)、DMAP(29.3毫克，0.24毫摩爾)和丁二酸2，3-二-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-1-丙酯(1.6克，2.42毫摩爾)的混合物與DMF共蒸發兩次，減至約50毫升。加入DCC(0.536克，2.6毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌72小時。過濾混合物，在減壓下蒸發溶液。加入乙酸乙酯100毫升，有機相用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌兩次，硫酸鈉乾燥有機相併在減壓下蒸發。通過矽膠柱色譜分離產物，產量0.65克，1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，12H)2.08(m，2H)2.58-3.04(m，6H)3.92(m，2H)4.10-4.46(m，7H)5.00(s，4H)5.22(m，1H)5.32-5.56(m，1H)6.17(m，1H)6.50(s，2H)7.32(m，10H)7.70(d，2H)7.92(s，1H)。
f)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[2，3-二-(L-纈氨醯氧基)-1-丙氧基羰基]丙醯基}鳥苷上述中間體(0.57克，0.626毫摩爾)的20毫升乙酸乙酯、10毫升甲醇和10毫升乙酸溶液用鈀黑(0.1克)在室溫和常壓下氫化兩小時。濾掉催化劑，用甲醇洗滌。在減壓下蒸發溶液，用矽膠柱色譜分離產物，產物溶解在二氯甲烷中，並加入1M鹽酸的乙醚溶液(1.1毫升)。混合物在減壓下蒸發，在真空中乾燥得到二鹽酸鹽形式的標題化合物，產量0.37克，1H-NMR(DMSO d-6)0.92(m，12H)2.12(m，2H)2.58-3.04(m，6H)3.75(m，2H)4.16-4.50(m，7H)5.19-5.60(m，2H)6.18(m，1H)6.76(s，2H)7.92(s，1H)。
實施例34
2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-3-[1，3-二-(L-纈氨醯氧基)-2-丙氧基羰基]丙醯基鳥苷二鹽酸鹽a)合成丁二酸1，3-二溴-2-丙酯，4-甲氧基苄酯在約10℃，向1，3-二溴丙-2-醇(21.8克，100毫摩爾)、丁二酸4-甲氧基苄酯(28.6克，120毫摩爾)和DMAP(1.22克，10毫摩爾)的二氯甲烷(400毫升)溶液中分批加入DCC(24.8克，120毫摩爾)。混合物在室溫下攪拌過夜，並冷卻至約5℃。過濾混合物，溶液在減壓下蒸發。加入600毫升乙酸乙酯，有機相用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌兩次，硫酸鈉乾燥溶液，並在減壓下蒸發。通過矽膠柱色譜分離產物，產量34.8克，1H-NMR(CDCl3)2.69(m，4H)3.57(m，4H)3.81(s，3H)5.07(s，2H)5.14(m，1H)6.88(d，2H)7.26(d，2H)。
b)合成丁二酸1，3-二-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-2-丙酯，4-甲氧基苄酯向N-CBZ-L-纈氨酸(58.5克，232.8毫摩爾)的無水DMF(300毫升)溶液中加入叔丁醇鉀(24.68克，220毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌一小時。加入丁二酸1，3-二溴-2-丙酯，4-甲氧基苄酯(34克，77.6毫摩爾)的無水DMF(50毫升)溶液，混合物在60℃攪拌18小時。濾掉溴化鉀，溶液在減壓下蒸發。加入600毫升乙酸乙酯，有機相用5％碳酸氫鈉和水洗滌兩次，硫酸鈉乾燥有機相併在減壓下蒸發。通過矽膠柱色譜分離產物，產量45克，1H-NMR(CDCl3)0.90(m，12H)2.16(m，2H)2.61(m，4H)3.80(s，3H)4.12-4.42(m，6H)5.02(s，2H)5.10(s，4H)5.43(m，3H)6.88(d，2H)7.32(m，12H)。
c)合成丁二酸1，3-二-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-2-丙酯在5-10℃，向上述冷卻的中間體(44.5克，57.1毫摩爾)的二氯甲烷(500毫升)的溶液中加入三氟乙酸(50毫升)，該溶液在10℃攪拌兩小時。在減壓下蒸發溶液，和甲苯共蒸發兩次。加入400毫升乙醇，混合物在40℃攪拌30分鐘。冷卻混合物，濾掉副產物。溶液在減壓下蒸發，用矽膠柱色譜分離產物，產量33克，1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，12H)2.04(m，2H)2.46(m，4H)，3.94-4.40(m，6H)5.02(s，4H)5.18(m，1H)7.32(m，10H)7.74(d，2H)。
d)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1，3-二-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-2-丙氧基羰基]丙醯基}鳥苷2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷(17.8克，66毫摩爾)、HOBT(10.64克，78.8毫摩爾)、丁二酸1，3-二-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-2-丙酯(52克，78.8毫摩爾)和DMAP(0.96克，7.88毫摩爾)的混合物與DMF共蒸發兩次，減至約500毫升。加入DCC(17.3克，84毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過夜。混合物在60℃保溫6小時，然後冷卻到約10℃。過濾混合物，在減壓下蒸發溶液。加入乙酸乙酯1200毫升，有機相用5％乙酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌兩次，硫酸鈉乾燥有機相併在減壓下蒸發。通過矽膠柱色譜分離產物，產量42克，1H-NMR(DMSO d-6)0.90(m，12H)2.02(m，2H)2.5-3.02(m，6H)3.94(m，2H)4.22(m，7H)5.02(s，4H)5.18(m，1H)5.22-5.50(m，1H)6.16(m，1H)6.50(s，2H)7.32(m，10H)7.72(d，2H)7.92(s，1H)。
e)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1，3-二-(L-纈氨醯氧基)-2-丙氧基羰基]丙醯基鳥苷二鹽酸鹽2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-{3-[1，3-二-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-2-丙氧基羰基]丙醯基}鳥苷(5.0克，5.9毫摩爾)的75毫升乙酸乙酯和75毫升甲醇溶液用載在活性碳上的10％鈀(1克)在室溫和常壓下氫化一小時。濾掉催化劑，用甲醇洗滌。在減壓下蒸發溶液，產物溶解在二氯甲烷中，並在冷卻下加入1M鹽酸的乙醚溶液(6毫升)。混合物在減壓下蒸發，產量3.5克，1H-NMR(DMSO d-6)0.94(m，12H)2.18(m，2H)2.5-3.04(m，6H)4.20-4.54(m，7H)5.24(m，1H)5.34-5.64(m，1H)6.22(m，1H)6.92(s，2H)8.30(s，1H)8.62(s，6H)。
實施例35合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-3-[1，3-二-(L-纈氨醯氧基)-2-丙氧基羰基]丙醯基鳥苷a)合成丁二酸1，3-二溴-2-丙酯，1，1-二甲基乙酯在約10℃，向1，3-二溴丙-2-醇(10.9克，50毫摩爾)、丁二酸1，1-二甲基乙酯(J.Org.Chem 59(1994)4864)(10.45克，60毫摩爾)和DMAP(0.61克，5毫摩爾)的二氯甲烷(180毫升)溶液中分批加入DCC(12.4克，60毫摩爾)。混合物在室溫下攪拌過夜，並冷卻至約5℃。過濾混合物，溶液在減壓下蒸發。加入250毫升乙酸乙酯，有機相用5％檸檬酸、5％碳酸氫鈉和水洗滌兩次。用硫酸鈉乾燥溶液，並在減壓下蒸發。在真空中蒸餾產物(沸點0.5135-140℃)，產量16.8克，1H-NMR(CDCl3)1.45(s，9H)2.58(m，4H)3.61(m，4H)5.12(m，1H)。
b)合成丁二酸1，3-二-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-2-丙酯，1，1-二甲基乙基酯向N-CBZ-L-纈氨酸(18.85克，75毫摩爾)的無水DMF(100毫升)溶液中加入叔丁醇鉀(7.85克，70毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌一小時。加入丁二酸1，3-二溴-2-丙酯，1，1-二甲基乙酯(9.35克，25毫摩爾)的無水DMF(20毫升)溶液，混合物在60℃攪拌18小時。濾掉溴化鉀，溶液在減壓下蒸發。加入300毫升乙酸乙酯，有機相用5％碳酸氫鈉和水洗滌兩次。用硫酸鈉乾燥有機相，並在減壓下蒸發。用矽膠柱色譜分離產物，產量14克。
1H-NMR(CDCl3)0.90(m，12H)1.42(s，9H)2.14(m，2H)2.52(m，4H)4.32(m，6H)5.10(s，4H)5.32(m，3H)7.26(m，10H)c)合成丁二酸1，3-二-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-2-丙基單酯向上述冷卻的丁二酸1，3-二-(N-CBZ-L-纈氨醯氧基)-2-丙酯，1，1-二甲基乙酯(13克，18.18毫摩爾)的二氯甲烷(100毫升)溶液中加入三氟乙酸(20毫升)，溶液在室溫下攪拌六小時。在減壓下蒸發溶液，加入200毫升乙酸乙酯，有機相用5％碳酸氫鈉和水洗滌，溶液在減壓下蒸發，產量11.7克，1H-NMR(DMSO d-6)0.88(m，12H)2.04(m，2H)2.46(m，4H)，3.94-4.40(m，6H)5.02(s，4H)5.18(m，1H)7.32(m，10H)7.74(d，2H)。
d)合成2′，3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-3-[1，3-二-(L-纈氨醯氧基)-2-丙氧基羰基]丙醯基鳥苷如實施例34步驟b)所示的方法，將步驟c)的中間體酯化到FLG上，並用常用的技術，如實施例35步驟e)或實施例29步驟e)，除去纈氨醯部分上的N保護基。
生物學實施例藥動學在老鼠模型中可以確認本發明口服的前藥在活體內釋放FLG，該模型被認為是用於評價核苷類藥物的藥動學參數的有用模型。口服組合物可以藥學賦形劑給藥，賦形劑包括丙二醇，或對於更易溶解的化合物，如實施例26或實施例34所述的化合物，用水給藥，以0.1毫摩爾/千克的劑量對抗食動物重複實驗。為了進行比較，一組老鼠靜脈注射0.01毫摩爾/千克代謝物2′，3′-雙脫氧-3′氟鳥苷。給藥0.5-12小時後(對於FLG為5分鐘-6小時)，通過不斷地從各個動物體內收集的血清監測血清代謝物的濃度。
按類似於Stahle等1995，J Pharm，Biomed.Anal，13，369-376的方法，用帶254納米UV檢測的HPLC分析代謝物，HPLC體系基於緩衝值為pH4.5的含1.2％ 2-丙醇溶劑的0.05M磷酸二氫銨緩衝溶液，或基於緩衝值為pH7.0的含2％乙腈溶劑的30mM磷酸二氫鈉緩衝溶液。柱子為帶7有微米C18防護柱的100×2.1毫米BAS C18 5微米粒徑或150×4.6毫米的Zorbax SB-CN C18，5微米柱。本發明化合物的蛋白鍵合力可忽略，同樣代謝物的鍵合力也可被忽略，Amicon或Microcon 30過濾器的超濾作用對於血清樣品是有用的。有利的是主峰可再進行柱色譜，以更利於提高FLG對低分子量血清組分的解析度。將iv值乘以10，以達到能與口服值相比的AUC值，。絕對口服的生物利用率以在0→∞AUCiv和0→∞AUC口服間的比率測定。
表1

*測定值 **文獻值因此，相對於代謝物2′3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷，本發明的化合物提供了明顯改進的口服生物利用率。特別是，化合物在血中以相對持續的方式釋放，而不是以間峰(immediate peak)的方式。這意味著活性代謝物在血中的有效量能持續很多小時，從而有助於每日一次的劑量。另外，持續釋放避免了化合物快速釋放時產生的急性毒性問題。
儘管大鼠可認為是一種很好的用於預測人體內核苷的生物利用率的動物模型，但是本發明化合物(實施例34)的各自的生物利用率的確定是通過≈11.5千克雄性和雌性警犬進行的，以0.05毫摩爾/千克(38毫克/千克)化合物水劑口服或以0.005毫摩爾/千克(1.35毫克/千克)代謝物水劑靜脈注射。血漿的收集和分析如上所述。
雄犬12小時後絕對生物利用率51％雌犬12小時後絕對生物利用率74％生物實施例2抗病毒活性-逆轉錄病毒通過生物實施例1所描述的方法證明本發明的化合物在活體內釋放了代謝物2′3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷。因此，該代謝物在體外測定的抗病毒活性將反映本發明化合物的實際活性。
Koshide等在Antimicrob Agents Chemother 33 778-780(1989)中所述的XTT染料攝入分析中利用了MT4細胞的XYY染料攝入分析，上述生物實施例1測定的代謝物顯示了下列在體外的抗逆轉錄病毒活性。
表2

*引起50％抑制病毒複製的代謝物濃度。
因此很明顯，攝入本發明的化合物對抗逆轉錄病毒HIV-l，HIV-2和SIV產生了強大的抗病毒活性。同時根據HIV-12441AZTr和HIV-lIIIBTIBOr的結果，應注意到本發明化合物的抗病毒活性沒有顯示抗HIV菌株的交叉阻力，而這些菌株對其它HIV劑如核苷類AZT或非核苷逆轉錄酶抑制劑TIBO是抗藥性的。
生物實施例3抗病毒活性-HBV在鴨子體內對於鴨子的B型肝炎病毒(DHBV)的抗病毒活性是一種驗證人體內B型肝炎病毒活性的公認的動物模型。上述生物實施例2中測定的活體內代謝物的活性已按照Sherker等在(1986)Gastroenterology 91，818-824頁所描述的DHBV模型進行了測定。結果如附圖1和2所示，4隻對照的鴨子用磷酸鹽緩衝生理鹽水(PBS)處理，另4隻鴨子以5毫克/千克/天的量攝入活性代謝物，當種入DHBV後，鴨子能活兩天，而得到治療的鴨子能活18天。十天內每天兩次，早8點和下午4點腹膜內注射代謝物和PBS(對照)。治療持續33天，動物在治療結束後仍活了5周。
用放射性探針，通過DHBV DNA的斑點印跡雜交，進行療效跟蹤，並以測定的放射性雜交的量作為DHBV的量。附圖1繪製了治療之前，期間以及之後的不同時間點血清中DHBV DNA的量。
如附圖1所示，在用PBS(對照，實線)處理期間DHBV的量沒有降低。給予生物實施例2中測定的代謝物(虛線)的動物顯示了在治療的前十天內，血清中DHBV量急劇降低，此後，在治療的剩餘時間中，以5毫克/千克/天給藥的DHBV的濃度低於檢測限。以30和3毫克/千克/天劑量重複實驗，在先天感染的鴨子中(未顯示)也得到了同樣的結果，即血清中DHBV DNA急劇降至檢測限以下。儘管以3毫克/千克/天的低劑量，代謝物也能在活體內產生了相當大的DHBV抑制作用。治療完畢後，病毒在血清中再次出現，如附圖1所示，在慢性B型肝炎病毒感染的人類和動物中很早就觀察到用常用的抗病毒劑短期治療後，HBV重新出現。
如附圖2所示，鴨子的重量和對照組(用PBS治療)動物同樣增加。在治療期間觀察到重量從約270克增至約800克，其增重之大，使人認為，假如存在毒性的話，其生長速率會有顯而易見的變化。對於接受30毫克/千克/天的更高劑量的鴨子也可觀察到相同的生長曲線。因此該代謝物很明顯是無毒的。由於本發明的化合物在活體內水解生成這種代謝物，如上述實施例2所述，以及與性質相同、易於代謝的脂肪酸，可以推斷，給藥本發明化合物不會引起長期的毒性問題。
口給藥本發明的化合物而不引起急性(短期)毒性在上述生物實施例2得到證實。
製劑實施例1片劑製劑用0.15毫米的篩將下述組分過篩，並幹法混合10克2′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-3-[1，3-二-(L-纈氨醯氧基)-2丙氧基羰基丙醯基]鳥苷40克乳糖49克結晶纖維素1克 硬脂酸鎂用壓片儀將混合物壓製成含250毫克活性組分的片劑。
製劑實施例2腸溶衣片劑在片劑包衣器中用含下述組分的溶液將製劑實施例1的片劑噴塗包衣120克乙基纖維素30克 丙二醇10克 脫水由梨醇一油酸酯加入1000毫升蒸餾水製劑實施例3控釋製劑50克 2′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-纈氨醯氧基甲基)-6硬脂醯氧基己醯基]鳥苷12克 羥丙基甲基纖維素(Methocell K15)4.5克乳糖幹法混合，並用聚維酮的水糊成粒。加入硬脂酸鎂(0.5克)，混合物在壓片儀中製成含500毫克活性劑的13毫米直徑的片劑。
製劑實施例4軟膠囊50克 2′3′-雙脫氧-3′-氟-5′-O-[5-(L-纈氨醯氧基甲基)-6硬脂醯氧基己醯基]鳥苷100克卵磷脂100克花生油本發明化合物分散在卵磷脂和花生油中，並裝入軟凝膠的膠囊中。
權利要求
1.5′-L-纈氨醯-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷所指的化合物。
2.5′-L-纈氨醯-2′，3′-雙脫氧-3′-氟鳥苷所指的化合物在製備用於治療或者預防HBV或者逆轉錄酶病毒感染的藥物中的用途。
全文摘要
本發明涉及5′－L－纈氨醯－2′，3′－雙脫氧－3′－氟鳥苷所指的化合物及其在製備用於治療或者預防HBV或者逆轉錄酶病毒感染的藥物中的用途。
文檔編號A61P1/16GK1872869SQ20061009972
公開日2006年12月6日 申請日期1998年8月14日 優先權日1997年8月15日
發明者周曉雄, N·-G·約翰松, H·瓦林 申請人:美迪維爾公司