一種白芨環菠蘿蜜烷型三萜的提取工藝及其應用的製作方法
2023-10-04 07:38:14
一種白芨環菠蘿蜜烷型三萜的提取工藝及其應用的製作方法
【專利摘要】本發明提供了一種白芨環菠蘿蜜烷型三萜的提取工藝及其應用。以白芨為原料，主要經過醇浸提，超聲處理，滲漉，蒸發濃縮，石油醚萃取，矽膠柱層析分離，薄層層析檢測以及結晶和重結晶等步驟，得到白芨環菠蘿蜜烷型三萜的純白色產物，純度可高達99%。本發明的提取工藝簡單，提取率高，可大規模生產。本發明首次公開了白芨環菠蘿密烷型三萜的提取工藝，有助於進一步研究白芨膠作為血管栓塞劑的抗腫瘤機理。本發明提取的環菠蘿密烷型三萜極有可能是一種潛在的抗癌小分子或血管生成抑制劑。
【專利說明】一種白芨環菠蘿蜜烷型三萜的提取工藝及其應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種以白芨為原料提取成分工藝，尤其涉及一種白芨環菠蘿蜜烷型三萜的提取工藝及其應用，屬於中醫藥【技術領域】。
【背景技術】
[0002]白芨(學名:Bletilla striata)是一種多年生草本球根植物，主要有收斂止血功效。在國內，多年來，白芨的主要用途是作為血管栓塞劑在腫瘤介入療法中的應用，對於治療原發性肝癌、移植性肝癌具有明顯療效並大量應用於臨床實踐。想要在分子水平上闡明白芨作為血管栓塞劑抑制腫瘤的分子機理，對白芨的生物學功能的研究最終必須深入到白芨化學組成的研究。但是，由於白芨的化學組成很複雜，目前在白芨及白芨膠中仍然存在還未被揭示新的化合物，對已發現的化合物的研究也不夠深入。如果能夠在白芨和白芨膠中找到抑制腫瘤生長和血管生成的小分子化合物，這將有助於在分子水平上闡明白芨及白芨膠作為血管栓塞劑在腫瘤介入療法中的分子基礎。
[0003]白芨及白芨膠中抗腫瘤或抑制血管生成的的小分子化合物的研究，集中於白芨天然化學產物的研究。白芨天然化學產物的研究始於1983年，經歷了三十年，國內外學者發現了眾多的天然產物。
[0004]由於白芨中含有大量多糖，在白芨天然化合物組成研究中，最引人關注的是白芨多糖的生物活性研究。但是，有研究表明，白芨多糖可促進人臍靜脈內皮細胞粘連及生長，以及血管內皮細胞生長因子(VEGF)表達,促進誘導性一氧化氮合酶(inducible nitricoxide synthase)。因此，白友多糖不是作為血管栓塞劑的白友膠中抑制腫瘤的天然小分子。
[0005]那麼，白芨及白芨膠中抑制腫瘤生長及血管生成的天然小分子化合物是什麼呢？這是迄今為止一直沒有解決的課題。
[0006]白友三職類化合物的發現始於日本學者於1997年在Natural medicines (J NatMed)上發表的 I 篇簡短論文 Yamaki M et al.The steroids and triterpenoids fromBletilla striata.Natural medicines, 1997，51 (5):493。論文僅有短短的 I 頁，報導了白芨中有2種留體(steroids)類化合物和5種環菠蘿密烷(又名:環阿屯烷，環阿爾廷烷等)型三職(triterpenoids),但未見對這5種三職化合物分離純化及功能研究的詳細報告
【發明內容】
[0007]針對現有技術存在的問題，一方面，本發明的目的在於提供一種上述白芨環菠蘿密烷型三萜的提取工藝，為白芨三萜化合物的深入研究提供前提條件。
[0008]本發明的目的可通過以下方案來實現:
[0009](I)取白芨塊根，粉碎，加醇浸溼，超聲處理0.5~2h ;
[0010](2)將醇浸溼的白芨粉置於滲漉器中，再加入1.5~2.5倍體積的醇浸提和滲漉，7~10天後，收集滲漉液，蒸發濃縮，獲得浸膏；[0011](3)浸膏用蒸餾水混懸，得提取物混懸溶液，加入石油醚萃取；
[0012](4)將步驟(3)所得的石油醚萃取物進行矽膠柱色譜法分離，以石油醚/乙酸乙酷混合液作為洗脫溶劑梯度洗脫；
[0013](5)將步驟(4)所得洗脫液再次進行矽膠柱色譜法分離，以純石油醚作為洗脫溶劑洗脫，洗脫液經蒸發濃縮後，得到略帶黃色的白色粉狀物；
[0014](6)將粉狀物置於乾淨的燒杯中，加少量石油醚溶解，靜置I~2天，待觀察到黃色固體物吸附於燒杯壁和白色粉狀物的表面時，用乾淨的刀片將黃色固體物小心刮去；
[0015](7)重複步驟(6)多次，直到最後不出現黃色固體物為止，即得到純白色的目標產物。
[0016]作為對上述技術方案的改進，其中所述醇為70~95%的乙醇。
[0017]作為對上述技術方案的改進，所述步驟(2)中的醇浸溼的白芨粉在置於滲漉器之前，還經過70~90°C水浴加熱I~3個小時，以加速白芨粉中有效活性成分的溶解。
[0018]作為對上述技術方案的改進，在進行所述步驟(3)中的萃取之前，對提取物混懸溶液70~90°C水浴保溫I~3個小時，以進一步加速白芨粉中有效活性成分的溶解；所述石油醚與提取物混懸溶液體積比為1:3~3:1，萃取次數為3~5次。
[0019]作為對上述技術方案的改進，步驟(4)中所述石油醚/乙酸乙酯混合液中石油醚與乙酸乙酯的體積比為95:5。
[0020]純化的白芨三萜經質譜和核磁共振檢測，發現其中的主要成分為如式I所示的化
合物:
【權利要求】
1.一種白芨環菠蘿蜜烷型三萜的提取工藝，其特徵在於包括以下步驟: (1)取白芨塊根，粉碎，加醇浸溼，超聲處理0.5~2h ; (2)將醇浸溼的白芨粉置於滲漉器中，再加入1.5~2.5倍體積的醇浸提和滲漉，7~10天後，收集滲漉液，蒸發濃縮，獲得浸膏； (3)浸膏用蒸餾水混懸，得提取物混懸溶液，加入石油醚萃取； (4)將步驟(3)所得的石油醚萃取物進行矽膠柱色譜法分離，以石油醚/乙酸乙酷混合液作為洗脫溶劑梯度洗脫； (5)將步驟(4)所得洗脫液再次進行矽膠柱色譜法分離，以純石油醚作為洗脫溶劑洗脫，洗脫液經蒸發濃縮後，得到略帶黃色的白色粉狀物； (6)將粉狀物置於乾淨的燒杯中，加少量石油醚溶解，靜置I~2天，待觀察到黃色固體物吸附於燒杯壁和白色粉狀物的表面時，用乾淨的刀片將黃色固體物小心刮去； (7)重複步驟(6)多次，直到最後不出現黃色固體物為止，即得到純白色的目標產物。
2.如權利要求1所述的白芨環菠蘿蜜烷型三萜的提取工藝，其特徵在於:所述醇為70~95%的乙醇。
3.如權利要求1所述的白芨環菠蘿蜜烷型三萜的提取工藝，其特徵在於:所述步驟(2)中的醇浸溼的白芨粉在置於滲漉器之前，還經過70~90°C水浴加熱I~3個小時。
4.如權利要求1所述的白芨環菠蘿蜜烷型三萜的提取工藝，其特徵在於:在進行所述步驟(3)中的萃取之前，對 提取物混懸溶液70~90°C水浴保溫I~3個小時；所述石油醚與提取物混懸溶液體積比為1:3~3:1，萃取次數為3~5次。
5.如權利要求1所述的白芨環菠蘿蜜烷型三萜的提取工藝，其特徵在於:所述石油醚/乙酸乙酷酷混合液中石油醚與乙酸乙酯的體積比為95:5。
6.如權利要求1所述的白芨環菠蘿蜜烷型三萜的提取工藝，其特徵在於:所述白芨環菠蘿蜜烷型三萜含有重量百分比為10~100%的如式I所示的化合物:
7.按照權利要求1所述的提取工藝提取的白芨環菠蘿蜜烷型三萜在製備抑制血管生成的藥物中的應用。
8.按照權利要求1所述的提取工藝提取的白芨環菠蘿蜜烷型三萜在製備抗腫瘤的藥物中的應用。
【文檔編號】A61P35/00GK103665086SQ201310728077
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年12月25日 優先權日:2013年12月25日
【發明者】劉明志 申請人:惠州學院