從槐花中提取的一種降糖活性物質的製作方法

2023-10-17 02:32:44 3

專利名稱：：從槐花中提取的一種降糖活性物質的製作方法
技術領域：
：本發明涉及醫藥領域，特別是一種從槐花中提取的一種降糖活性物質。二、
背景技術：
槐花為豆科植物槐(SophorajaponicaL.)的乾燥花及花蕾。前者習稱為"槐花"，後者習稱為"槐米"。始載於《日華子本草》，性味苦、微寒，歸肝、大腸經。2005版《中華人民共和國藥典》稱其涼血止血、清肝瀉火。通常用於便血，痔血，血痢，崩漏，吐血，衄血，肝熱目赤，頭痛眩暈等證。為中醫常用的止血藥。主要含有黃酮及其苷類、皂苷及其苷元、甾類等成分。其中黃酮-主要為蘆丁(Rutin),為槐花的主要成分。槐花(含槐米，以下同)的現代實驗研究主要有抗炎作用槐花中所含蘆丁及其苷元槲皮素對大白鼠因組胺、蛋清、5—羥色胺、甲醛、多乙烯吡咯酮引起的腳爪浮腫，以及透明質酸酶引起的足踝浮腫均有抑制作用。蘆丁能顯著抑制大白鼠創傷性浮腫，並能阻止結膜炎等炎症及肺水腫的發展。大鼠腹腔注射戶丁對植入羊毛球的發炎過程有明顯的抑制作用。抗病毒、抗真菌作用槐花有抗病毒、抗真菌作用。戶丁在200wg/ml濃度時對水皰性口炎病毒有抑制作用。槐花水浸劑(l:5)在試管內對堇色毛癬菌、奧杜盎氏小芽胞癬菌、羊毛狀小芽胞癬菌、星形奴卡氏菌等皮膚真菌均有不同程度的抑制作用。槐花水提物對病毒引起的小鼠肺炎有明顯的抑制作用，槐花水提物具有體內抗體流感病毒作用。抗腫瘤作用用體外細胞培氧3H—TDR參人法，芸香甙對腹水型肝癌細胞的平均抑制率為23.8%。所含染料木素對人體鼻咽癌(KB)細胞有細胞毒性作用。對心血管的作用槐花有降壓、擴冠等作用。槐花液對麻醉狗有短暫但顯著的降壓作用，對離體蛙心肌有輕度興奮作用，對心傳導系統有阻滯作用。槐花煎液對心臟的作用主要是降低其收縮性能、減慢心率，而對其舒張功能影響較小。提示槐花煎液具有降低血壓、減慢心率、減弱心肌收縮力、降低心肌耗氧量的作用、保護心功能的作用。槐花煎液使蛙心肌單相動作電位MAP的各項電學指標呈一致性減小(少)、心率減慢、心肌收縮力降低。槐花對家兔體外心房肌的作用表現在槐花對心肌具有負性肌力和負性頻率作用，其作用機制與其抑制Ca2+跨膜內流有關。對毛細血管的影響其所含主要成分蘆丁有維生素P樣作用，能夠降低毛細血管的異常通透性、脆性，可用於高血壓、腦溢血、出血等症的治療和預防，能維持血管抵抗力等;其所含的槲皮素有降低血壓、增強毛細血管抵抗力、減少毛細血管脆性、擴張冠狀動脈、增加冠脈血流量等作用。降血脂作用槐花的主要成分蘆丁對脂肪浸潤的肝有祛脂作用，與穀胱甘肽合用祛脂效果更明顯，所含槲皮素也有降血脂作用。其所含染料木素對三硝基甲苯WR1339引起的大鼠高血脂有降低其血中膽固醇和三苷油酸脂的作用，對後者作用尤為顯著。抗氧化性作用在兔RBC體外溫育自氧化試驗中，3.2X10mol/L芸香武可顯著抑制RBC自氧化，並可減少RBC自氧化過程中脂質過氧化產物MDA的含量，說明芸香武對RBC自氧化溶血損傷有一定的保護作用.並可能與抑制脂質過氧化反應有關；說明芸香武不僅可顯著減少小鼠血漿中MDA含量.也可顯著提高大鼠血液中SOD活性.並有一定的量效關係。實驗結果進一步提示芸香甙抗脂質過氧化作用可能與提高SOD活性有關。戸丁(0.02%)抗氧化性接近BHT，槲皮素的抗氧化性優於蘆丁，槲皮素(0.08%)的抗氧化性更接近BHT，甚或超過它也有可能.可見用蘆丁代替BHT作抗氧化劑，既能滿足抗氧化性能的要求，又能避免BHT帶來的毒性。鎮痛作用實驗研究發現芸香甙(6.25100mg/kg,ip)可劑量依賴性抑制小鼠扭體反應，芸香甙(50100mg/kg.ip)明顯提高小鼠電嘶叫刺激閾值，顯著延長小鼠熱板舔足反應潛伏期。結果表明芸香甙有鎮痛作用，其鎮痛怍用比阿斯匹林強但弱於嗎啡。在小鼠扭體模型上。iv芸香甙O.311.30rag/kg或ip芸香甙6.2525.00mg/kg均呈劑量依賴性鎮痛作用，中樞給藥所需劑量為外周用藥的1/20。icyeach或乙二胺四乙酸能拮抗或增強ip芸香甙的鎮痛作用。將小劑量芸香甙敷於復發性口瘡病人的潰瘍面上不產生明顯鎮痛效果。表明芸香甙鎮痛部位主要是中樞而不是外周.其中樞鎮痛機制可能與鈣拮抗有關。致突變作用槐花水提物(5.Omg/ml)的應用劑量和人血淋巴細胞姐妹染色單體互換(SCE)頻率之間存在明顯的量效關係，說明該藥對人血淋巴細胞具有致突變作用，而且能抑制人淋巴細胞的生長和分裂增殖。抗HIV—1活性:採用MTT比色法檢測化合物對各種細胞的毒性。用合胞體形成計數法，p24抗原捕獲ELISA法及RT—PCR等多種方法研究化合物體外抗HIV—1活性。結論槐花提取化合物K3體外有較好的抗HIV—1活性，能夠抑制病毒實驗株(HIV—IIIIB，耐藥株(HIV—174V)和臨床分離株(HIV-IKM018)等多種病毒株的複製，且其作用機制是多靶點的，不僅可以抑制病毒的進入，還可以抑制HIV—1逆轉錄酶活性。槐樹在我國分布廣泛，槐花(又稱槐花米)的資源極為豐富，河南是農業大省，也是槐花的主產區之一。如果將其開發出新的降糖新藥或保健食品，不僅可以充分利用資源，減少糖尿病病人痛苦，還可以創造出較大的經濟效益和社會效益。三、
發明內容針對上述情況，本發明之目的就是提供一種從槐花中提取的一種降糖活性物質，可有效用於製備降糖藥物，解決血糖高的治療問題，其解決的技術方案是，槐花降糖活性物質(總黃酮)的提取:取槐花(米)加8倍槐花重量體積的質量濃度為80%的乙醇，加熱回流提取2次，每次1.5小時，合併醇提液，過濾，濃縮成浸膏，加質量濃度為5%的NaOH溶液溶解，過濾，濾液加HCl調至PH2-3，過濾，沉澱水洗至中性即得槐花降糖活性物質(槐花總黃酮)，得率為0.6-0.9%,純度約為60%。所說的重量體積是指固體物質(槐花)用g，液體(乙醇)用ml，如槐花8倍體積重量的乙醇，即lg槐花加8ml乙醇，以下類同，本發明方法簡便，純度高，穩定性好，開闢了槐花製備藥物的新領域，是中醫藥學上的一大創新，造福於為類。四具體實施方式以下結合實際情況，對本發明的具體實施方式作詳細說明。在實施中，本發明以河南省武陟縣藥材公司供應的槐花(米)為例，首先取乾燥的槐花(含有槐米)lkg，加質量濃度為80%的乙醇8kml，加熱至60-8(TC，回流提取2次，每次1.5小時，合併醇提液，過濾，濃縮成浸膏，再用質量濃度為5W的NaOH溶液溶解，過濾後加HC1調PH為2.5，過濾後用水洗至中性即得7g±0.5g，槐花總黃酮含量約為60%的降糖活性物質。採用80%乙醇提取，並用鹼溶酸沉的方法得到槐花總黃酮。建立了HPLC法測定槐花總黃酮中蘆丁含量的方法，該方法簡便，專屬性強，精密度好，線性範圍寬、穩定性好、重複性好，樣品含量穩定，開闢了槐花(米)製備降糖藥物的新領域，造福於人類，其降糖之功效，為實驗所證明。一、槐花總黃酮對小鼠高血糖及糖尿病模型的影響1、試驗藥物本發明製得的槐花活性物質(由河南省中藥發展工程技術研究中心提供)；鹽酸二甲雙胍，上海醫藥(集團)有限公司信誼製藥總廠生產，批號060310;鹽酸腎上腺素注射液，上海禾豐製藥有限公司生產，批號5A09011;四氧嘧啶，sigma公司生產；鏈脲佐菌素，sigma公司生產；生理鹽水，鄭州永和製藥有限公司生產，批號060810012;濃硫酸，洛陽市化學試劑廠生產，批號051102;檸檬酸(分析純)，湖北省醫藥公司化玻站，批號050203;檸檬酸鈉(分析純)，天津市化學試劑批發部，批號050304;血糖試劑盒，浙江東甌生物工程有限公司生產，批號2006060350;肝糖元試劑盒，南京建成生物工程研究所生產，批號20060907;糖化血清蛋白(GSP)測定試劑盒，南京建成生物工程研究所第一分所生產，批號20061007。2、實驗動物小鼠昆明種，II級，雄性，由河北省醫學實驗動物中心提供，合格證號611040，608155。3、實驗儀器5UV-2000紫外可見分光光度計尤尼柯(上海)儀器有限公司生產；恆溫水浴鍋，北京市光明儀器廠生產；離心機，北京醫療儀器修理廠生產；FA(N)/JA(N)系列電子天平，上海民橋精密儀器有限公司生產；可調式移液器，上海雷勃分析儀器有限公司生產。4、實驗方法對腎上腺素致小鼠高血糖模型的影響取雄性小鼠60隻，體重2022g，隨機均勻分為6組，分別灌服大、中、小劑量的本發明物質(600mg/kg、300mg/kg、150mg/kg，配成濃度為30mg/ml、15mg/ml、7.5mg/ml，灌胃體積為0.2ml/10g)溶液，二甲雙胍混懸液(0.208g/kg，0.104mg/ml，0.2ml/10g)，模型組和空白組灌服同體積的生理鹽水液。每天給藥1次，連續給藥9天。于禁食後12h灌藥後90min，除空白組外每鼠迅速腹腔注射腎上腺素240ug/kg,空白對照組注射同體積生理鹽水，於給腎上腺素後30min、60min立即眼眶取血，分離血清，供測血糖用。然後處死小鼠後，稱取肝臟，制勻漿，供測肝糖元用。對四氧嘧啶致小鼠高血糖模型的影響取雄性小鼠60隻，體重200.776oz，隨機均勻分為6組，分別灌服大、中、小劑量的槐花總黃酮(600mg/kg、300mg/kg、150mg/kg，配成濃度為30mg/ml、15mg/ml、7.5mg/ml，灌胃體積為0.2ml/10g)溶液，二甲雙胍混懸液(0.208g/kg，0.104mg/ml，0.2ml/10g)，模型組和空白組灌服同體積的生理鹽水液。每天給藥1次，連續給藥10天。於第7天禁食後12h灌藥後90min，除空白組外每鼠尾靜脈注射8(kg/kg(0.05ml/10g)新配製的四氧嘧啶生理鹽水液，注射後72h，小鼠眼眶取血，分離血清，供測血糖用。然後處死小鼠後，稱取肝臟，制勻漿，供測肝糖元用。對鏈尿佐菌素致小鼠糖尿病模型的影響取雄性小鼠，正常飼養3天，禁食12h後，尾靜脈注射鏈脲佐菌素80(mg/kg，0.02ml/10g)，於注射第11天禁食12h後，尾部採血測空腹血糖值，選取血糖值〉11.lmmol/L並具有明顯多飲、多食、多尿症狀的小鼠50隻，按血糖值隨機均分為5組，即大、中、小劑量本發明物質組，陽性對照組和模型組，分別灌服大、中、小劑量本發明物質(600mg/kg、300mg/kg、200mg/kg，0.2ml/10g)，二甲雙胍(O.5g/kg,25mg/ml，0.2ml/10g)及同體積生理鹽水，另取10隻小鼠作為空白對照組，灌服同體積生理鹽水。每天給藥1次，連續給藥30天。於給藥第IO、20、30天尾部取血測血糖值。第30天在禁食12h末次給藥lh後，小鼠眼眶取血，分離血清，供測血糖用。然後處死小鼠後，稱取肝臟，制勻漿，供測肝糖元用；取胰腺，10%福馬林液固定，作病理切片，供光鏡觀察胰臟組織情況。5、實驗結果表1本發明物質對腎上腺素致小鼠高血糖模型血糖水平及肝糖原含量的影響(X±S)tableseeoriginaldocumentpage7*與模型組比屍<0.05，**與模型組比/^<0.01從上表可看出，與空白對照組比，模型組在30分鐘和60分鐘血糖水平顯著升高(戶<0.01)，肝糖元水平顯著降低(屍<0.01)，說明造腎上腺素高血糖模型成功。與模型組比，大、中、小劑量槐花總黃酮組和二甲雙胍組可顯著降低30分鐘血糖水平(屍<0.01)、可顯著升高肝糖元水平(,<0.01)，二甲雙胍組可顯著性降低60分鐘血糖水平(屍<0.01)，大劑量槐花總黃酮組可明顯降低60分鐘血糖水平(屍<0.05)。表2本發明物質對四氧嘧I^C小鼠高血糖,血糖水平MF糖元含量的影響(x±s)tableseeoriginaldocumentpage7*與模型組比屍<0.05,**與模型組比/<0.01從上表可看出，與空白對照組比，模型組血糖水平顯著升高(,<0.01)，肝糖元水平顯著降低(戶<0.01)，說明造小鼠四氧嘧啶高血糖模型成功。與模型組比，大、中、小劑量本發明物質組和二甲雙胍組可顯著降低小鼠四氧嘧啶高血糖模型糖水平(,<o.01)，大、中劑量本發明物質組可顯著升高肝糖元水平(/^0.01)，小劑量本發明物質組和二甲雙胍組可明顯升高肝糖元水平(屍<0.05)。3.3對鏈尿佐菌素致小鼠糖尿病模型血糖及胰臟組織形態的影響表3本發明物質對鏈尿佐菌素致小鼠糖尿病模型血糖水平的影響(x士s,mmo1/1)組別動物劑量(只)(mg/kg)開始血糖10天血糖肝糖原(呢/g)空白對照組104.771±0.686**4.929土0.847**4.758±0.703**4.760±0.637**28.754±5.251林模型組二甲雙胍組101020815.696±2.15.424±2.31427320.496±2.88718.724±2.51120.740±4.03820.869±3.98111.477±1.98215.035土3.008林12.582±2.499**17.089±2.275**大劑量組1060015.506±2.37718.580±2.39016.237±2.252林14.665±2.353**19.257±3.409林中劑量組1030015,574±2.53518.666±2.48616.947±2.696*15.573±2.629林18.187±2.946林子路g1015015.478±2.38919.152±3.42018.045±3.39617.063±3.400*15.531±2.754***與模型組比/^0.05,**與模型組比屍<0.01從表3可看出，與空白對照組比，從開始給藥到給藥第30天，模型組血糖水平均顯著升高(屍<0.01)，肝糖元水平顯著降低(P<0.01)，說明造小鼠鏈尿佐菌素糖尿病模型成功。各給藥組開始血糖之間無明顯差異，說明分組均勻；給藥第10天，各給藥組比模型組均降低，但無明顯差異；給藥第20天，與模型組比，二甲雙胍組和大劑量本發明物質組小鼠血糖水平均顯著降低(屍<0.01)，中劑量本發明物質組明顯降低(屍<0.05);給藥第30天，與模型組比，大、中、小劑量本發明物質組和二甲雙胍組均可顯著降低模型小鼠血糖水平(屍<0.01)，小劑量本發明物質組明顯降低血糖水平(P<0.05);大、中、小劑量本發明物質組和二甲雙胍組均可顯著升高模型小鼠肝糖元水平(屍<0.01)。表4本發明物質對鏈尿佐菌素致小鼠糖尿病模型胰臟組織的影響組別動物數(只)劑量(mg/kg)一++++++空白對照組1010000模型組100019二甲雙胍組102080280大劑量組106000910中劑量組103000820小劑量組101500730"一"胰島細胞胞漿豐富，未出現萎縮，水腫和空泡變性，均正常；"+"胰島細胞呈現萎縮現象，而無水腫和空泡變性；"++"胰島細胞大部分出現萎縮，細胞少數出現水腫而無空泡變性；"+++"胰島細胞出現萎縮，同時出現水腫和空泡變性明顯者。從上表可看出，經Ridit檢驗，與空白對照組比，模型組胰臟病理變化顯著(,<0.01)，說明造小鼠糖尿病模型成功。二、本發明物質對大鼠糖尿病模型的影響1、藥物試劑本發明物質，即槐花總黃酮(由河南省中藥發展工程技術研究中心提供)；鏈脲佐菌素，sigma公司生產；鹽酸二甲雙胍，上海醫藥(集團)有限公司信誼製藥總廠生產，批號060310;生理鹽水，鄭州永和製藥有限公司生產，批號060810012;濃硫酸，洛陽市化學試劑廠生產，批號051102;檸檬酸(分析純)，湖北省醫藥公司化玻站，批號050203;檸檬酸鈉(分析純)，天津市化學試劑批發部，批號050304;血糖試劑盒，浙江東甌生物工程有限公司生產，批號2006060350;肝糖元試劑盒，南京建成生物工程研究所生產，批號20060907;糖化血清蛋白(GSP)測定試劑盒，南京建成生物工程研究所第一分所生產，批號20061007;SOD試劑盒(測總)，南京建成生物工程研究所生產，批號20070131;丙二醛(MDA)測試盒，南京建成生物工程研究所生產，批號20070206;低密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒(LDL-C)，浙江東甌生物工程有限公司生產，批號2006080265;高密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒(HDL-C)，浙江東甌生物工程有限公司生產，批號2006120002;甘油三脂測定試劑盒(TG)，浙江東甌生物工程有限公司生產，批號2006110001;總膽固醇測定試劑盒(TCH)，浙江東甌生物工程有限公司生產，批號2006090002;胰島素(INS)放射免疫分析藥盒，北京科美東雅生物技術有限公司生產，批號20063082;消脂素(L印tin)放射免疫分析藥盒，中國人民解放軍總醫院科技開發中心生產，批號070126;C-肽(C-P)放射免疫分析藥盒(RIA),北京科美東雅生物技術有限公司生產，批號20070125;胰島素抗體(INS-Ab)放射免疫分析藥盒，北京科美東雅生物技術有限公司生產，批號20070125。2、實驗動物大鼠Wistar,II級，雄性，體重180200g;由河北省實驗動物中心提供，合格i正號:701022。3、實驗儀器UV-2000紫外可見分光光度計尤尼柯(上海)儀器有限公司生產；恆溫水浴鍋，北京市光明儀器廠生產；離心機，北京醫療儀器修理廠生產；FA(N)/JA(N)系列電子天平，上海民橋精密儀器有限公司生產；可調式移液器，上海雷勃分析儀器有限公司生產。4、實驗方法取大鼠100隻，禁食12h後，其中90隻尾靜脈注射鏈脲佐菌素60mg/kg(用pH為4.2的枸櫞酸緩衝液配製)，另10隻設為完全空白對照組，尾靜脈注射等體積的枸櫞酸緩衝液。第10天尾部取血測血糖值，選取血糖值〉11.lmmol/L並具有明顯多飲、多食、多尿症狀的大鼠50隻，按血糖值隨機均分為5組，分別灌服大、中、小劑量的本發明物質(600mg/kg、300mg/kg、150mg/kg，配成濃度為30mg/ml、15mg/ml、7.5mg/ml，灌胃體積為2ml/100g)溶液，二甲雙胍片208mg/kg(20.8mg/ml，2ml/100g)，模型組與空白對照組給予同體積生理鹽水，每天給藥1次，連續給藥30天，分別於給藥的第IO、20、30天測空腹血糖值，於最後1次測血糖前1天禁食12h;灌藥2h後，取血，分離血清，按試劑盒說明書分別測定各種指標。取胰臟和腎臟，福馬林固定，切片，供光鏡和電鏡檢査。5、實驗結果表5本發明物質對鏈尿佐菌素致大鼠糖尿病模型血糖水平的影響(x士s，mmol/L)動物劑量開始第io天第20天第30天組別(只)(mg/kg)血糖血糖血糖血糖空白對照組104.832±0.858**4.982±0.766**4.735±1.094**4.862±0.718**模型組1015.473±2.60017.755±2.49218.484±2.35519.766±2.754二甲雙胍組1020815,870±2.93615.663±2.09013.585±2.061**11.548±1.992**大劑量組1060015.97±2.98016.619±2.69214.852±3.186**13.130±2.937**中劑量組1030015.933±2.81317.477±2.64015.429±3.126*13.744±2.832**小劑量組1015016.057±2.68517.828±2.44217.549±1.97417.113±1.919**與模型組比屍<0.05，**與模型組比屍<0.01從上表可看出，與空白對照組比，模型組從實驗開始至實驗第30天血糖水平均顯著升高(,<0.01)，說明造鏈尿佐菌素大鼠糖尿病模型成功。在實驗開始，各給藥組血糖與模型組比無明顯差異，說明分組均勻；在給藥第10天，與模型組比，給藥組有一定降血糖水平的趨勢；在給藥第20天，與模型組比，大劑量本發明物質組和二甲雙胍組可顯著降低大鼠鏈尿佐菌素糖尿病模型血糖水平(屍<0.01)，中劑量本發明物質組可明顯降低血糖水平(,<0.05);在給藥第30天，與模型組比，大、中劑量本發明物質組和二甲雙胍組可顯著降低大鼠鏈尿佐菌素糖尿病模型血糖水平(屍<0.01)，小劑量本發明物質組可明顯降低血糖水平(屍<0.05)。表6-1本發明物質對鏈尿佐菌素所致大鼠糖尿病模型血脂及抗氧化能力的影響(x±s)tableseeoriginaldocumentpage11表6-2本發明物質對鏈尿佐菌素所致大鼠糖尿病模型血脂及抗氧化能力的影響(；±s)tableseeoriginaldocumentpage11*與模型組比,<0.05,**與模型組比屍<0.01從表6-1、表6-2可看出，與空白對照組比，模型組血清總膽固醇水平、甘油三酯水平、低密度脂蛋白水平和MDA水平菌顯著升高(屍<0.01)，血清高密度脂蛋白水平和紅細胞S0D活力顯著降低(屍<0.01)，說明大鼠糖尿病模型出現顯著的血脂升高和抗氧化能力降低，造模型成功。與模型組比，大、中劑量槐花總黃酮組和二甲雙胍組可顯著降低血總膽固醇水平和甘油三酯水平(屍<0.01)，小劑量本發明物質組可明顯降低血清總膽固醇水平(屍<0.05);大、中、小劑量本發明物質組和二甲雙胍組均可顯著降低血清低密度脂蛋白水平(屍〈0.01);大、中劑量本發明物質組均可顯著降低血清MDA水平(屍<0.01)，小劑量本發明物質組可明顯降低血清MDA水平(,<0.05);大、中、小劑量本發明物質組和二甲雙胍組均可顯著升高血清高密度脂蛋白水平和紅細胞S0D活力(屍<0.01)。表7本發明物質對鏈尿佐菌素所致大鼠糖尿病模型胰島素、胰島素抗體、消脂素和C肽水平的影響(x土s)tableseeoriginaldocumentpage12*與模型組比屍<0.05，**與模型組比屍<0.01表7可看出，與空白對照組比，模型組胰島素水平和(:一肽水平顯著降低(屍<0.01)，消脂素水平顯著升高(屍<0.01)，說明出現明顯糖尿病病變。與模型組比，大劑量本發明物質組和二甲雙胍組可顯著升高血清胰島素水平(/^0.01)，中劑量本發明物質組可明顯升高血清胰島素水平(屍<0.05);大、中、小劑量本發明物質組和二甲雙胍組均可顯著降低血清消脂素水平(P<0.01);大、中、小劑量本發明物質組均可顯著升高血清C—肽水平(屍〈0.01);二甲雙胍組均可明顯升高血清C一肽水平(屍<0.01)。大、中、小劑量本發明物質組對胰島素抗體水平影響不明顯。表8本發明物質對鏈尿佐菌素所致大鼠糖尿病模型胰臟組織的影響tableseeoriginaldocumentpage12"一"胰島細胞胞漿豐富，未出現萎縮、水腫和空泡變性，均正常；"+"胰島細胞呈現萎縮現象，而無水腫和空泡變性；"++"胰島細胞大部分出現萎縮，少數細胞出現變性水腫現象；"+++"胰島細胞出現萎縮，出現顯著的水腫和空泡變性。從上表可看出，經Ridit檢驗，與空白對照組比，模型組胰臟病理變化顯著(/^0.01),說明造模大鼠出現胰臟損傷。與模型組比，大、中劑量本發明物質組均可顯著減輕前胰臟的病理變化(屍<0.01)。各組大鼠胰臟組織光鏡觀察可見空白對照組大鼠胰島細胞胞漿豐富、胞體較大，細胞核疏散分布；模型組大鼠胰島細胞部分出現明顯萎縮，胞眾明顯減少、胞體縮小、細胞核密集，部分細胞出現水腫和空泡變；二甲雙胍組大鼠胰島細胞少部分細胞得到明顯恢復，細胞胞漿較豐富，胞體增大，大部分細胞出現萎縮，胞漿減少胞體縮小，細胞較密集；大劑量本發明物質組大鼠胰臟組織的大部分細胞已得到恢復，胞柴豐富，胞體增大，少部分細胞呈萎縮狀態，細胞核叫密集；中劑量本發明物質組大鼠胰臟組織中部分細胞呈萎縮狀，部分已恢復，胞漿豐富，胞體增大；小劑量本發明物質組大鼠胰臟組織中的胰島細胞出現明顯的萎縮狀態，細胞體積縮小，胞漿明顯減少，細胞核密集，個別細胞胞漿豐富。各組大鼠胰島細胞亞微結構觀察可見空白對照組大鼠胰島細胞中的線粒體和線粒體嵴排列整齊密集，嵴間腔不擴張；內質網排列整齊而密集，未出現擴張、囊泡現象。模型組大鼠胰島細胞中的線粒體明顯減少而線粒體嵴明顯變短或消失，嵴間腔呈空泡狀；內質網排列紊亂，內質網擴張或呈囊泡狀。二甲雙胍組大鼠胰島細胞中的線粒體有所增多，線粒體嵴大部分排列較整齊，部分排列紊亂，嵴變短或呈空泡狀；內質網排列紊亂，內質網擴張或呈囊泡狀。本發明物質大劑量組大鼠胰島細胞中的線粒體有所增多，線粒體嵴部分排列整齊，部分嵴變短，或呈空泡狀；內質網排列整齊密集，少部分內質網有擴張現象。本發明物質中劑量組大鼠胰島細胞中的線粒體有所增多，線粒體少部分嵴排列紊亂，部分嵴變短，或呈空泡狀；內質網排列紊亂、擴張或呈囊泡狀。本發明物質小劑量組大鼠胰島細胞中的線粒體有所增加，少部分線粒體嵴排列紊亂，嵴變短或消失、呈空泡狀；內質網排列紊亂，大部分擴張或呈囊泡狀。表9本發明物質對鏈尿佐菌素所致大鼠糖尿病模型腎臟組織的影響tableseeoriginaldocumentpage13"_"腎小球、腎小囊、腎小管上皮細胞均正常；"+"腎小球細胞稍有增生、腎小囊小部分擴張、壁層細胞呈扁平，腎小管上皮小部分水腫；"++"腎小球細胞25%增生、腎小囊小部分擴張、壁層細胞呈扁平，腎小管上皮部分水腫空泡變；"+++"腎小球細胞50%增生、腎小囊小75%擴張、壁層細胞呈扁平，腎小管上皮大部分呈空泡變。從上表可看出，經Ridit檢驗，與空白對照組比，模型組腎臟病理變化顯著(屍<0.01)，說明造模大鼠出現腎臟損傷。與模型組比，大、中劑量本發明物質組和二甲雙胍組均可顯著減輕腎臟的病理變化(屍<0.01)。各組大鼠腎臟組織光鏡觀察可見空白對照組大鼠腎臟中的腎小球、腎小囊和腎小管生皮細胞均為正常；模型組大鼠腎臟中的腎小球內皮細胞和繫膜稍有增生，腎小囊腔擴張，壁層細胞變扁平狀，腎小管上皮細胞出現空泡變；二甲雙胍組大鼠腎臟中的腎小球內皮細胞和繫膜細胞明顯減少，腎小囊腔大部分不擴張，只有少部壁層細胞呈扁平狀，腎小管上皮細胞也得到一定恢復，少數細胞出現空泡變；大劑量本發明物質組大鼠腎臟中腎小球部分內皮細胞和繫膜細胞得到抑制，腎小囊腔大部分不擴張，少部分擴張，壁層細胞呈扁平狀，腎小管上皮細胞輕度水腫、少部分呈空泡變；中劑量本發明物質組大鼠腎臟中的腎小球細胞部分增生，腎小囊腔部分擴張，壁層細胞呈扁平狀，腎小管上皮細胞部分水腫，少數細胞出現空泡變；小劑量本發明物質組大鼠腎臟的腎小球細胞增生明顯，腎小囊腔擴張，壁層細胞呈扁平狀，腎小管上皮細胞水腫，部分出現空泡變。四、總結本發明物質具有明顯的降血糖作用，主要活性部位是槐花總黃酮，含量97%左右，純度高，效果好，本發明方法簡便，結果可靠，槐花總黃酮能使腎上腺素、四氧嘧啶和鏈脲佐菌素所致高血糖動物的血糖水平下降，對四氧嘧啶和鏈脲佐菌素誘導的高血糖小鼠和大鼠的高血糖均有明顯的降低作用，槐花總黃酮對胰島P細胞有一定的保護作用，促進了胰島e細胞釋放胰島素，這種作用與其抗氧化能力有關，其降脂和保護腎臟作用也與其抗氧化能力有關，本發明研製之前，尚未見有對槐花降血糖作用的系統研究報導，本試驗表明槐花降血糖作用確切，為尋找降糖新藥開闢了一條新的途徑，為槐花應用於糖尿病及併發症的治療提供理論依據，為進一步開發利用槐花資源打下基礎，是中醫藥上的一大創造。1權利要求1、一種從槐花中提取的一種降糖活性物質，其特徵在於，該物質是由槐花加8倍槐花重量體積的質量濃度為80％的乙醇，加熱回流提取2次，每次1.5小時，合併醇提液，過濾，濃縮成浸膏，加質量濃度為5％的NaOH溶液溶解，過濾，濾液加HCl調至PH2-3，過濾，沉澱水洗至中性所得槐花降糖活性物質，得率為0.6-0.9％，純度為60％。2、根據權利要求1所述的從槐花中提取的一種降糖活性物質，其特徵在於，所說的該物質是首先取乾燥的槐花lkg，加質量濃度為8(^的乙醇8kml，加熱至60-80'C，回流提取2次，每次1.5小時，合併醇提液，過濾，濃縮成浸膏，再用質量濃度為5%的NaOH溶液溶解，過濾後加HC1調m為2.5,過濾後用水洗至中性即得7g±0.5g，槐花總黃酮含量為60%的降糖活性物質。3、權利要求1或2所述的從槐花中提取的一種降糖活性物質為在製備治療降糖藥物的應用。全文摘要本發明涉及一種從槐花中提取的一種降糖活性物質，可有效用於製備降糖藥物，解決血糖高的治療問題，其解決的技術方案是，槐花降糖活性物質的提取取槐花加8倍槐花重量體積的質量濃度為80％的乙醇，加熱回流提取2次，每次1.5小時，合併醇提液，過濾，濃縮成浸膏，加質量濃度為5％的NaOH溶液溶解，過濾，濾液加HCl調至pH2-3，過濾，沉澱水洗至中性即得槐花降糖活性物質，得率為0.6-0.9％，純度為60％，本發明方法簡便，純度高，穩定性好，開闢了槐花製備藥物的新領域，是中醫藥學上的一大創新，造福於人類。文檔編號A61P3/10GK101297861SQ20081014040公開日2008年11月5日申請日期2008年6月30日優先權日2008年6月30日發明者苗明三申請人:河南中醫學院