唾液醯甘油脂及其製備方法

2023-10-17 05:28:29 3

專利名稱：唾液醯甘油脂及其製備方法
技術領域：
本發明是關於新的、含有唾液酸的脂衍生物的的鹼金屬鹽形式的唾液醯甘油脂(sialocylglycerolipids)及其製備方法。
一般說來，大多數神經病類疾病都被認為是難以治療或治癒的。再者，治療上述疾病的藥劑為數很少。
目前臨床上試用的上述藥劑例如有天然的神經節苷脂(其市售品的商品名為Cronassial;見日本專利未審公開(下文中記為「J.P.KOKAI」)號5234912)和甲鈷胺(通用藥名)，後者是一種維生素。但這兩種藥對神經病類疾病的療效都不能令人滿意，因此需要研製出性能更好的這類藥劑。
另外，眾所周知，象神經節苷脂一類的酸性神經節苷脂以及象磷脂醯肌醇和磷脂醯絲氨酸一類的酸性磷脂，在動物的神經傳遞系統中起著重要的作用。本發明的發明人已經發現，神經節苷脂類的混合物或其中某個單一成分能促使初始培養的神經細胞及成神經細胞瘤細胞增生，促使軸突形成和伸展，並且發現，上述混合物或單一成分在動物模型中的效果和甲鈷胺相似。本發明的發明人之一已經提交了一份專利申請(J.P.KAOKAI№59-222424)。
如上所述，神經節苷脂混合物目前已用於治療末梢神經紊亂或中樞神經紊亂。但由於這些神經節苷脂是從不同動物中提取得到的天然產品，因而會因這些神經節苷脂本身或因有雜質而產生抗原性問題。
此外，由於上述神經節苷脂並不總是醫藥上穩定和均勻的，所以很難為其規定出嚴格的標準。
另一方面，這些神經節苷脂中的唾液酸也在例如糖蛋白中找到了，或存在於動物或細菌細胞的細胞表面。最近，由於這些物質涉及免疫、癌、炎症、各種傳染病、細胞分化、激素受體等方面，在醫學及藥理方面引起了人們的重視。還無人報導過含有唾液酸的脂衍生物對於神經紊亂的治療效果。
在這種情況下，本發明的發明人發現，有一種唾液醯甘油脂具有促使軸突伸展的作用，此甘油脂也許可以用來治療神經疾病或使其好轉(見日本專利申請(以後簡記為「J.P.A」)61-214787)，這種唾液醯甘油脂是一種含有唾液酸的脂衍生物的鈉鹽，即3-O-(5-乙醯胺基-3，5-二脫氧-x-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸鈉)-1，2-二-O-十四烷基-Sn-丙三醇。
可以預期，其他唾液醯甘油脂也具有同上述唾液醯甘油脂相似的作用，但尚未見到合成這種脂的報導。
日本專利公告公報(以下簡記為「J.P.KOKOKU」)59-164798中披露，有若干種唾液酸衍生物可以這樣製得按已知方法將唾液酸轉變為糖給體，再使此糖給體與同樣按已知方法製得的糖受體反應。
但此方法是按照以下過程實施，因此在許多方面都必須改進
(式中Ac代表乙醯基)。
更具體地說，上述方法包括，將化合物(Ⅳ)溶於甲醇中，加1N Na OCH3，室溫下攪拌溶液1小時，再用Ambelist A-15(商標名，A-15大孔樹脂)將溶液中和，然後過濾溶液，減壓濃縮濾液使化合物(Ⅴ)析出，收率為67%。但此方法所得目的產物的收率很低;該產物需經以下三步才能得到能有效地治療神經疾病的化合物(Ⅵ)。
為了解決常規方法中的這些問題，本發明的發明人研究出下面所述的方法並就該方法申請了專利(J.P.A.61-189340)。該方法包括，使以下通式(Ⅶ)所示的化合物水解
(式中Ac為乙醯基，R代表低級烷基)，水解在NaOH的ROH溶液中或在四氫呋喃(THF)水溶液中進行，再用反相柱色譜法純化產物，得到以下通式(Ⅵ)所示的化合物
式中Ac為乙醯基。
但在申請上述專利時，製備具有高生物活性的唾液醯甘油脂的本方法適用的分子種類尚不清楚(見J.P.A.61-214787)，反應中可以使用的溶劑也未予說明。
本發明的主要目的是提供一類新的唾液醯甘油脂，它們是含有唾液酸的脂衍生物的鈉鹽。
本發明的另一個目的是提供製備這類新唾液醯甘油脂的方法。
因此，本發明的一個方面是提供以下通式(Ⅰ)所示的唾液醯甘油脂
式中R1為氫原子或基團CH3CO-，R2為鹼金屬、氫原子或低級烷基，R3代表氫原子或基團Cn H2n+1-(n為1～30的整數)，R4為基團Cm H2m+1-(m為1～30的整數)。
本發明的唾液醯甘油脂的較好實例有R2為鈉原子、R3為基團Cn H2n+1-(n為6、10、18或22)、R4為基團Cm H2m+1-(m為6、10、18或22)的通式(Ⅰ)化合物。
本發明化合物可按J.P.A.61-189340和61-214787中介紹的方法製備(上述日本專利是同一申請人，即本發明的受讓人申請的)，或者按下面詳述的本發明方法製備。
更具體些說，使Bn為苄基的化合物(1)與1-溴烷反應生成化合物(2)。再使化合物(2)脫去苄基得到化合物(3)(見Agric.Biol.Chem.，1982，Vol.46(1)，p.255;以及Biochemistry，1963，Vol.2，p.394)。
另一方面，按照Kuhn的方法(見Chem.Ber.，1966，Vol.99，p.611)，可由唾液酸(N-乙醯神經氨酸)製得化合物(4)(其中Ac為乙醯基)。
使所得化合物(4)與按上述方法得到的化合物(3)反應，生成化合物(5)(α構型)和化合物(6)(β構型)，再分離出化合物(5)，將其脫乙醯並水解，生成本發明的化合物(7)。這裡水解一步可在THF或在醇如甲醇或乙醇中進行。水解最好在上述溶劑中，在鹼性條件下進行。此外，如果在合成中使用其它囟代烷，如溴代烷，可製得化合物(13)、(19)、(25)等化合物。
這些反應的細節如下面所示
因此，本發明的另一方面是提供製備由下述式(Ⅲ)所表示的新的唾液醯甘油脂的方法，
(其中，M為鹼金屬，R3和R4與上述式(Ⅰ)中的定義相同)，該方法包括在鹼性含水溶劑中處理由下述式(Ⅱ)所表示的化合物
(其中，R5為CH3CO-，R6為氫原子或低級烷基，R3和R4與上述定義相同)。
在上式中，M最好為鈉原子，R3最好為氫原子或基團Cn H2n+1-(n為整數6、10、18或22)，R4最好為基團CHm H2m+1-(m為整數6、10、18或22)。
水解最好在四氫呋喃中，於上述鹼性條件下進行。
現通過下述非限制作用的實施例來進一步詳細地說明本發明。
實施例1(ⅰ)化合物(2)(1，2-二-O-己基-3-O-苄基-sn-丙三醇)的合成
C22H38O3(Mw＝350.52)將化合物(1)(3-O-苄基-sn-丙三醇，11.3g，62.1mmol)溶於150ml二甲基甲醯胺中，加入7.5g(187.5mmol)60%NaH並於冰-甲醇浴中冷卻，混合物於室溫下攪拌20分鐘。然後向反應混合物中加入1-溴己烷(51.2g)，在室溫下攪拌6小時。用鈰矽石層過濾反應溶液，將濾液蒸發至幹。將殘餘物再次溶於乙醚中，用0.1NHCl溶液和2.5%碳酸氫鈉溶液洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，濃縮至幹。用柱色譜(Kieselgel60，MerckCo.;洗脫液∶己烷/乙酸乙酯(50∶1)提純殘餘物，得到26.3g化合物(2)。
(ⅱ)化合物(3)(1，2-二-O-己基-sn-丙三醇)的合成
C15H32O3(Mw＝260.41)
將化合物(2)(26.3g)溶於400ml乙酸乙酯中，向溶液中加入2.6g10%的披鈀木炭。在氮氣氛下，於室溫下將溶液攪拌4天。從反應溶液中濾去披鈀木炭，從濾液中蒸去溶劑，用柱色譜(Kieselgel 60，Merck Co.;洗脫液CHCl3-甲醇系統)提純得到的殘餘物，得到12.86g(49.38mmol)化合物(3)。按反應(1)→(2)→(3)計算，總產率為79.5%。
化合物(3)的物理性質[α]30℃D-17.1(c＝1.1，CHCl3)1H NMR(500 MHz;CDCl3，四甲基矽烷(TMS))δH0.886(3H，t，J＝7.0Hz，-CH3)，0.889(3H，t，J＝7.0Hz，-CH3)，1.271-1.370(12H，m，-CH2x 6)，1.530-1.604(4H，m，-OCH2CH2x 2)，3.405-3.746(9H琺，CH2)CH-O-CH2CH2-O-CH2(ⅲ)化合物(5)和(6)的合成
向攪拌中的粉末狀分子篩4A(8.0g)、氰化汞(Ⅱ)(2.87g，11.4mmol)和溴化汞(Ⅱ)(4.11g，11.4mmol)的混合物中，加入於CHCl(100ml)中的化合物(3)並在氬氣氛中於室溫下攪拌。用冰浴冷卻反應溶液，加入30ml化合物(4)(8.0g，15.6mmol)的氯仿溶液，隨後在室溫下將溶液攪拌3天。將反應溶液過濾，用氯仿洗滌得到的殘餘物，隨後將濾液與洗滌液合併，再從中蒸去溶劑。用柱色譜(WecogelC-300，WakoChemicals，洗脫液∶乙醚/乙醇系統和甲苯/乙酸乙酯系統)提純得到的殘餘物，得到2.6gα-型化合物(5)、1.51gβ-型化合物(6)和2.0g兩者的混合物(共計6.11g)。產率為45.7%。
化合物(5)(3-O-｛(5-乙醯胺基-4，7，8，9-四-O-乙醯基-3，5-二脫氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯｝-1，2-二-O-己基-sn-丙三醇)的物理性質Rf＝0.48(Merck高效薄層色譜，乙醚/乙醇＝50/1)[α]30℃D＝-12.1(c＝1.0，CHCl3)1H NMR(500 MHz;CDCl3，TMS)δ3H0.886(6H，t，-CH3x 2)，1.330(12H，m，-CH2- x 6)，1.888(3H，s，CH3CONH-)，1.975(1H，t，J＝12.5Hz，H-3ax)，2.025(3H，s，CH3COO-)，2.038(3H，s，CH3COO-)，2.131(3H，s，CH3COO-)，2.186(3H，s，CH3COO-)，2.602(1H，dd，J＝4.4，12.8Hz，H-3eq)，3.791(3H，s，-COOCH3)，4.298(1H，dd，J＝2.6，12.5Hz，H-9)，4.853(1H，ddd，H-4)，5.100(1H，d，-CONH)，5.321(1H，dd，J＝1.5，8.4Hz，H-7)，和5.371(1H，ddd，H-8).
化合物(6)(3-O-(5-乙醯胺基-4，7，8，9-四-O-乙醯基-3，5-二脫氧-β-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯)-1，2-二-O-己基-sn-丙三醇的物理性質Rf＝0.54(Merck高效薄層色譜，乙醚/乙醇＝50/1)[α]30℃D＝-17.2(c＝0.95，CHCl3)1H NMR(500MHz;CDCl3，TMS)δH0.889(3H，t，-CH3)，0.902(3H，t，-CH3)，1.310(12H，r -CH2- x 6)，1.882(3H，s，CH3CONH-)，1.900(1H，t，J＝12.8Hz，H-3ax)，2.013(3H，s，CH3COO-)，2.023(3H，s，CH3COO-)，2.064(3H，s，CH3COO-)，2.140(3H，s，CH3COO-)，2.454(1H，dd，J＝4.8，12.8Hz，H-3eq)，3.794(3H，s，-COOCH3)，4.722(1H，dd，J＝2.6，12.5Hz，H-9)，5.122(1H，d，-CONH)，5.220-5.290(2H，H-4，H-8)，和5.378(1H，dd，J＝1.5，4.4Hz，H-7).
(ⅳ)化合物(7)(3-O-(5-乙醯胺基-3，5-二脫氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸鈉｝-1，2-二-O-己基-sn-丙三醇)的合成
將化合物(5)(1.69g，2.30mmol)溶於3ml四氫呋喃中，向溶液中加入11ml 1N NaOH溶液，在室溫下攪拌7小時。用陽離子交換樹脂(Amberlite IRC-50，Rohm and Hass Co.)(PH＝7)中和反應溶液，隨後濾去樹脂，用蒸餾水洗滌樹脂，將濾液與洗滌液合ⅲ彌祝∣D S60
，YAMAMURA CHEM ICAL LABORATORIES，60/200目，溶劑水，甲醇)提純，收集甲醇組分，蒸去溶劑，冷凍乾燥殘餘物，得到986.8mg(1.72mmol)白色粉末狀化合物(7)。產率＝74.8%。
化合物(7)的物理性質Rf＝0.47(Merck高效薄層色譜，CHCl3/甲醇/CH3COOH＝5/3/0.5)[α]30℃D＝-1.96(c＝1.0，THF)1H NMR(500MHz;D2O，TS)δH0.880(6H，t，J＝6.6Hz，-CH3x 2)，1.340(12H，s，-CH2- x 6)，1.580(4H，m，-OCH2CH2- x 2)，1.691(1H，t，J＝12.5Hz，H-3ax)，2.730(1H，dd，J＝4.8，12.5Hz，H-3eq).
(ⅴ)化合物(8)(3-O-(5-乙醯胺基-3，5-二脫氧-β-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸鈉)-1，2-二-O-己基-sn-丙三醇)的合成
將1.15g(1.56mmol)化合物(6)溶於3ml四氫呋喃，然後加入10ml 1N NaOH溶液，在室溫下攪拌混合物7小時。用陽離子交換樹脂(Amberlite IR C-50，PH＝7)中和反應溶液，然後濾去樹脂，用蒸餾水洗滌樹脂，將洗滌液與濾液合併，用柱色譜(ODS 60
，YAMAMURA CHEMICAL LABORATORIES，60/200目，溶劑水，甲醇)提純合併液，收集甲醇組分，蒸去溶劑，冷凍乾燥殘餘物，得到748.0mg(1.30mmol)白色粉末狀化合物(8)。產率＝83.3%。
化合物(8)的物理性質
Rf＝0.54(Merck 高效薄層色譜，CHCl3/甲醇/CH3COOH＝5/3/0.5)[α]30℃D＝-32.4(c＝0.97，THF)1H NMR(500MHz;D2O，TSP)δH0.880(6H，-CH3x 2)，1.330(12H，s，-CH2- x 6)，1.600(4H，m，-OCH2CH2- x 2)，1.626(1H，t，J＝12.8Hz，H-3ax)，2.057(3H，s，CH3CONH-)，2.408(1H，dd，J＝4.8，12.8Hz，H-3eq).
實施例2(ⅰ)化合物(9)(1，2-二-O-癸基-3-O-苄基-sn-丙三醇)的合成
C30H54O3(Mw＝462.73)將13.6g(74.7mmol)化合物(1)(3-O-苄基-sn-丙三醇)溶於20ml無水二甲基甲醯胺中，加入8.96g(224.1mmol)60%NaH，同時在冰-甲醇浴中冷卻溶液，在室溫下攪拌20分鐘。向溶液中加入66.4g1-溴癸烷或300.22mmol1-氯癸烷，然後將得到的溶液於室溫下攪拌6小時。用鈰矽石層過濾反應溶液，然後用乙醚洗滌殘餘物，將洗滌液與濾液合併，減壓蒸發至幹。將殘餘物再次溶於乙醚中，依次用0.1NHCl溶液和2.5%碳酸氫鈉溶液洗滌，然後用無水硫酸鎂乾燥，蒸去溶劑，用柱色譜(Kieselgel60，MerckCo.，洗脫液∶己烷/乙酸乙酯(50∶1))提純得到的殘餘物，得到33.5g產物(通過薄層色譜分析得知，其中包括1-溴癸烷)。將該產物直接用於隨後的脫苄基反應而無需進一步提純。
(ⅱ)化合物(10)(1，2-二-O-癸基-sn-丙三醇)的合成
C23H48O3(Mw＝372.61)將化合物(9)(33.5g，通過薄層色譜分析得知，其中包括1-溴癸烷)溶於450ml乙酸乙酯中，加入3.5g 10%披鈀活性炭。在氫氣流中，於室溫下將反應溶液攪拌4天。從溶液中濾去披鈀活性炭，然後蒸去溶劑，用柱色譜(Kieselgel 60，Merck Co.，洗脫液CHCl3)提純得到的殘餘物。將得到的產物用石油醚重結晶，得到26.2g(70.31mmol)化合物(10)。根據反應(1)→(9)→(10)計算，產率為94.1%。
化合物(10)的物理性質[α]30℃D＝-11.7(c＝1.1，CHCl3)1H NMR(500MHz;CDCl3，TMS);δH0.880(3H，t，J＝7.0Hz，-CH3)，0.884(3H，t，J＝7.0Hz，-CH3)，1.200-1.400(28H，m，-CH2- x 14)，1.500-1.600(4H，m，-OCH2CH2- x 2)，3.400-3.750(9H，m，
)(ⅲ)化合物(11)(3-O-(5-乙醯胺基-4，7，8，9-四-O-乙醯基-3，5-二脫氧-α-D-甘油-D-半乳-6-吡喃壬糖酮酸甲酯)-1，2-二-O-癸基-sn-丙三醇)和化合物(12)的合成
在氬氣氛下，向由粉末狀分子篩4A(4.0g)，氰化汞(Ⅱ)(1.65g，6.5mmol)和溴化汞(Ⅱ)(2.35g，6.5mmol)組成的混合物中加入於CHCl3(80ml)中的化合物(10)(4.0g，10.7mmol)，在室溫下攪拌2小時。
將反應混合物在冰浴中於0～5℃冷卻，加入於氯仿(20ml)中的化合物(4)(4.0g，7.8mmol)，於室溫下攪拌溶液3天。過濾反應溶液，用氯仿洗滌殘餘物，將濾液與洗滌液合併，真空濃縮。用柱色譜(WacogelC-300，洗脫液∶乙醚/乙醇系統和甲苯/乙酸乙酯系統)提純油狀殘餘物，得到388.7mgα-型化合物(11)，469.5mgβ-型化合物(12)和2.23g兩者的混合物(共計3.09g)。產率為46.8%。
化合物(11)的物理性質Rf＝0.54(Merck高效薄層色譜，乙醚/乙醇＝50/1)30℃D＝-9.9(c＝1，CHCl3)1H NMR(500MHz;CDCl3，TMS)δH0.878(6H，t，J＝7.0Hz，-CH3x 2)，1.810(28H，m，-CH2- x 14)，1.881(3H，s，CH3CONH-)，1.975(1H，t，J＝12.5Hz，H-3ax)，2.025(3H，s，CH3COO-)，2.038(3H，s，CH3COO-)，2.131(3H，s，CH3COO-)，2.137(3H，s，CH3COO-)，2.602(1H，dd，J＝4.8，12.8Hz，H-3eq)，3.791(3H，s，-COOCH3)，4.299(1H，dd，J＝2.6，12.5Hz，H-9)，4.856(1H，ddd，H-4)，5.102(1H，d，-CONH-)，5.321(1H，dd，H-7)和5.371(1H，ddd，H-8).
化合物(12)(3-O-(5-乙醯胺基-4，7，8，9-四-O-乙醯基-3，5-二脫氧-β-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯)-1，2-二-O-癸基-sn-丙三醇)的物理性質Rf＝0.68(Merck高效薄層色譜，乙醚/乙醇＝50/1)[α]30℃D＝-13.3(c＝1，CHCl3)1H NMR(500MHz;CDCl3，TMS)δH0.881(6H，t，-CH3x 2)，1.285(28H，m，-CH2- x 14) .882(3H，s，CH3CONH-)，2.012(3H，s，CH3COO-)，2.023(3H，s，CH3COO-)，2.063(3H，s，CH3COO-)，2.141(3H，s，CH3COO-)，2.454(1H，dd，J＝4.9，13.2Hz，H-3eq)，3.794(3H，s，-COOCH3)，4.723(1H，dd，J＝2.4，12.2Hz，H-9)，5.138(1H，d，-CONH-)，5.200-5.290(2H，H-4，H-8)，和5.376(1H，H-7).
(ⅳ)化合物(13)(3-O-(5-乙醯胺基-3，5-二脫氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸鈉)-1，2-二-O-癸基-sn-丙三醇)的合成
將化合物(11)(343.3mg，0.41mmol)溶於1ml四氫呋喃，然後加入3ml 1N Na OH溶液。將得到的溶液在室溫下攪拌5小時。用陽離子交換樹脂(Amberlite IRC-50 Rhom and Haas Co.)(pH＝7)中和反應溶液，濾去樹脂，用蒸餾水洗滌樹脂，將洗滌液與濾液合併，用柱色譜(ODS60 ，YAMAMURA CHEMICAL LABORATORIES，60/200目，溶劑水，甲醇)提純。收集甲醇組分，從中蒸去溶劑，冷凍乾燥殘餘物，得到218.9mg(0.32mmol)化合物(13)。產率為78.0%。
化合物(13)的物理性質Rf＝0.54(Merck高效薄層色譜，氯仿/甲醇/乙酸＝5/3/0.5)[α]30℃D＝-2.25(c＝0.93，THF)1H NMR(500MHz;D2O，TSP)δH0.885(6H，m，-CH3x 2)，1.310(28H，s，-CH2- x 14)，1.583(4H，br.s，-OCH2CH2-x2)，1.700(1H，t，J＝12.5Hz，H-3ax)，2.049(3H，s，CH3CONH-)和2.733(1H，br.d，J＝8.4Hz，H-3eq).
(ⅴ)化合物(14)(3-O-(5-乙醯胺基-3，5-二脫氧-β-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸鈉)-1，2-二-O-癸烷-sn-丙三醇)的合成
將化合物(12)(397.0mg，0.47mmol)溶於1ml四氫呋喃，然後加入3.5ml 1NaOH溶液，將得到的溶液在室溫下攪拌5小時。用Amberlite IRC-50(PH＝7)中和反應溶液，然後濾去樹脂，用蒸餾水洗滌，將濾液與洗滌液合併，用柱色譜(ODS 60 ，YAMAMURA CHEMICAL LABORATORIES，60/200目，溶劑水，甲醇)提純，收集甲醇組分，從中蒸去溶劑，將殘餘物冷凍乾燥得到155.0mg(0.23mmol)白色粉末狀化合物(14)。產量為48.9%。
化合物(14)的物理性質Rf＝0.68(Merck高效薄層色譜，氯仿/甲醇/乙酸＝5/3/0.5)[α]30℃D＝-47.7(c＝1，THF)1H NMR(500MHz;D2O，TSP)δH0.897(6H，m，-CH3x 2)，1.323(28H，s，-CH2- x 14)，1.602(4H，br.s，-OCH2CH2- x 2)，2.074(3H，s，CH3CONH-)和2.430(1H，m，H-3eq).
實施例3(ⅰ)化合物(15)(1，2-二-O-十八烷基-3-O-苄基-sn-丙三醇)的合成
C46H86O3(Mw＝687.15)將化合物(1)(4.0g，22.0mmol，3-O-苄基-sn-丙三醇)溶於10ml二甲基甲醯胺中，加入2.7g(66.0mmol)60%NaH，將得到的溶液在室溫下攪拌10分鐘。向溶液中加入25g1-溴十八烷或75.0mmol1-氯十八烷，在室溫下攪拌溶液6小時。通過鈰矽石層過濾反應溶液，用乙醚洗滌得到的殘餘物，將濾液與洗滌液合併，減壓蒸發至幹。將殘餘物再次溶於乙醚，用0.1NHCl溶液和2.5%碳酸氫鉀溶液洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，然後蒸去溶劑，得到16.0g油狀物質。用柱色譜(WacogelC-300，550g，甲苯/乙醚系統)提純該油狀物質，得到9.25g(13.46mmol)化合物(15)。產率為61.3%。可將其直接用於下述步驟而無需進一步提純。
(ⅱ)化合物(16)(1，2-二-O-十八烷基-sn-丙三醇)的合成
C39H80O3(Mw＝597.03)將化合物(15)(8.8g，13.0mmol)溶於150ml乙酸乙酯中，加入800mg10%披鈀活性炭，在氫氣流下，將溶液於室溫下攪拌40小時。
濾去披鈀活性炭，從濾液中蒸去溶劑，得到6.21g(10.4mmol)化合物(16)。產率為79.8%。
化合物(16)的物理性質[α]30℃D＝-7.5(c＝1，CHCl3)1H NMR(500MHz，CHCl3;TMS)δH0.880(6H，t，J＝7.0Hz，-CH3x 2)，1.150-1.380(60H，m，-CH2- x 90)，1.540-1.590(4H，m，-OCH2CH2- x 2)，3.400-3.750(9H，m，
)(ⅲ)化合物(17)(3-O-(5-乙醯胺基-4，7，8，9-四-O-乙醯基-3，5-二脫氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯)-1，2-二-O-十八烷基-sn-丙三醇)和化合物(18)的合成
將已於180℃加熱減壓條件下乾燥過的粉狀4A分子篩(5.0g)懸浮於50mlTHF中，或之後將2.82g(4.72mmol)化合物(16)加入其中並於室溫下將所得溶液攪拌30分鐘。反應液於冰-甲醇浴中冷卻後再於氬氣流保護下避光加入3.65g(14.23mmol)AgOTf，或氰化汞(Ⅱ)和溴化汞的混合物，攪拌15分鐘後再加入20ml4.83g(9.49mmol)化合物(4)的THF溶液並於室溫下攪拌3小時。反應液過濾後剩餘物用氯仿洗滌並從合併的濾液和洗滌液中蒸出溶劑。將所得殘餘物溶於氯仿中，用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和氯化鈉溶液洗滌後用無水硫酸鎂乾燥，再蒸出溶劑。所得剩餘物用柱色譜法提純(WacogelC-300;洗脫劑採用乙醚/甲苯/乙酸乙酯體系)，得到640mgα-型(化合物(17))、221mgβ-型(化合物(18))和515mgα-和β-型的混合物。以化合物(16)計算的收率為27.3%。
化合物(17)的物理性質Rf＝0.70(MerckHPTLC;乙醚/乙醇＝50/1)[α]30℃D＝-8.4(c＝1，CHCl3)1H NMR(500MHz;CDCl3，TMS)δH0.879(6H，t，-CH3x 2)，1.315(60H，m，-CH2- x 30)，1.880(3H，s，CH3CONH-)，1.975(1H，t，J＝12.5Hz，H-3ax)，2.025(3H，s，CH3COO-)，2.038(3H，s，CH3COO-)，2.132(3H，s，CH3COO-)，2.136(3H，s，CH3COO-)，2.603(1H，dd，J＝4.4，12.8Hz，H-3eq)，3.789(3H，s，-COOCH3)，4.308(1H，dd，J＝2.9，12.5Hz，H-9)，4.856(1H，ddd，H-4)，5.254(1H，d，-CONH-)，5.328(1H，dd，H-7)and5.371(1H，ddd，H-8).
化合物(18)(3-O-(5-乙醯胺基-4，7，8，9-四-O-乙醯基-3，5-二脫氧-β-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯)-1，2-二-O-十八烷基-sn-丙三醇)的物理性質Rf＝0.80(MerckHPTLC;乙醚/乙醇＝50/1)30℃D＝-10.8(c＝1，CHCl3)1H NMR(500MHz;CDCl3，TMS)δH0.880(6H，t，-CH3x 2)，1.250(60H，m，-CH2- x 30)，1.881(3H，s，CH3CONH-)，1.900(1H，t，J＝11.7Hz，H-3ax)，2.011(3H，s，CH3COO-)，2.022(3H，s，CH3COO-)，2.063(3H，s，CH3COO-)，2.140(3H，s，CH3COO-)，2.454(1H，dd，J＝4.8，12.8Hz，H-3eq)，3.793(3H，s，-COOCH3)，4.726(1H，dd，J＝2.6，12.5Hz，H-9)，5.138(1H，d，-CONH-)，5.200-5.300(2H，H-4，H-8)and 5.376(1H，H-7).
(ⅳ)化合物(19)(3-O-(5-乙醯胺基3，5-二脫氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸鈉)-1，2-二-O-十八烷基-sn-丙三醇)的合成
將化合物(17)(520.0mg;0.49mmol)溶於3ml THF中，然後加入6ml 1N NaOH溶液並於室溫下將溶液攪拌5小時。反應液用Amberlite IRC-50(PH＝7)中和後，濾出樹脂，並用蒸餾水洗滌樹脂，濾液和洗滌液合併後用柱色譜法提純(ODS 60
，YAMAMURA CHEMICAL LABORATORIES;60/200目，溶劑水，甲醇)，然後收集甲醇組分，蒸出溶劑並凍幹殘餘物，得到362mg(0.40mmol)白色粉狀化合物(19)，收率81.6%。
化合物(19)的物理性質
Rf＝0.60(MerckHPTLC;氯仿/甲醇/乙酸＝5/3/0.5)[α]30℃D＝-1.98(c＝0.96，THF)1H NMR(500MHz，DMSOd6+D2O，TMS)δH0.852(6H，t，J＝7.0Hz，-CH3x 2)，1.100-1.350(60H，m，-CH2- x 30)，1.400-1.500(4H，m，-OCH2CH2- x 2)and1.896(3H，s，CH3CONH-)(ⅴ)化合物(20)(3-O-(5-乙醯胺基-3，5-二脫氧-β-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸鈉)-1，2-二-O-十八烷基-sn-丙三醇)的合成
將化合物(18)(140.0mg;0.13mmol)溶於2ml THF中，加入4ml 1N NaOH溶液，於室溫下將溶液攪拌6小時。反應液用Amberlite IRC-50(PH＝7)中和後，濾出樹脂並用蒸餾水洗滌樹脂，濾液和洗滌液合併後用柱色譜法提純(ODS 60
，YAMAMURA CHEMICAL LABORATORIES;60/200目，溶劑＝水，甲醇)，然後收集甲醇組分，蒸出溶劑並凍幹剩餘物，得到50mg(0.05mmol)白色粉狀化合物(20)，收率38.5%。
化合物(20)的物理性質Rf＝0.70(MerkHPTLC，氯仿/甲醇/乙酸＝5/3/0.5)
1H NMR(500MHz，DMSOd6+D2O，TMS)δH0.853(6H，t，J＝7.3Hz，-CH3x 2)，1.100-1.360(60H，m，-CH2- x 30)，1.400-1.500(4H，m，-OCH2CH2- x 2)，1.882(3H，s，CH3CONH-)and 2.122(1H，m，H-3eq).
實施例4(ⅰ)化合物(21)的合成
C54H102O3(Mw＝799.36)將化合物(1)(5.8g;32.0mmol)溶於20ml無水二甲基甲醯胺(DMF)中，然後加入3.1g(96.0mmol)60%NaH，並於室溫下將溶液攪拌10分鐘。向溶液中加50.0g(128.4mmol)1-溴二十二烷並於室溫下攪拌溶液6小時。反應液通過鈰矽石層過濾，剩餘物用乙醚洗滌並於減壓條件下將合併起來的濾液和洗滌液蒸發至幹。剩餘物重新溶於乙醚中，所得溶液用0.1NHCl溶液和2.5%碳酸氫鈉溶液洗滌，並用無水硫酸鎂乾燥，然後蒸出溶劑，得到28.3g油狀物。該油狀物用柱色譜法提純(800gWacogelC-300;洗脫劑＝己烷/乙酸乙酯＝50/1)，從而得到17.3g化合物(21)(其中含1-溴二十二烷)。產物無需提純即可用於後續步驟。
(ⅱ)化合物(22)的合成
C47H96O3(Mw＝709.24)將化合物(21)(17.3g;其中含1-溴二十二烷)溶於200ml乙醚/乙酸乙酯/甲醇(1/1/1)混合溶劑中，然後加入1.7g10%披鈀活性炭並於室溫下和氫氣氛中將溶液攪拌2天。反應液過濾後的剩餘物用氯仿洗滌，並從合併起來的濾液和洗滌液中蒸出溶劑。所得剩餘物用柱色譜法提純(MerckCo.，Kieselgel60;洗脫劑＝己烷/乙酸乙酯(5∶1-3∶1))，蒸出溶劑，剩餘物用己烷/乙醚重結晶得到14.5g(20.4mmol)化合物(22)。總收率(從化合物(1)到化合物(22)為63.4%。
化合物(22)的物理性質1H NMR(500MHz，CDCl3，TMS)δH0.880(6H，t，J＝7.0Hz，-CH3x 2)，1.150-1.450(76H，m，-CH2- x 38)，1.500-1.650(4H，m，-OCH2CH2- x 2)and 3.400-3.750(9H，m，
)(ⅲ)化合物(23)和(24)的合成
將已於180℃下加熱減壓乾燥後的粉狀4A分子篩(7.1g)，氰化汞(Ⅱ)(2.06g;8.1mmol)和溴化汞(Ⅱ)(2.94g;8.1mmol)懸浮於60ml無水氯仿中，然後加入化合物(22)(5.31g;7.5mmol)並於室溫和氬氣流保護條件下攪拌反應液2小時。反應液用冰冷卻後加10ml化合物(4)(2.55g;5.0mmol)的氯仿溶液並於室溫下攪拌溶液24小時。反應液過濾後所得剩餘物用氯仿洗滌並從合併起來的濾液和洗滌液中蒸出溶劑。所得剩餘物用柱色譜法提純(WacogelC-300，洗脫劑採用乙醚/乙醇和甲苯/乙酸乙酯體系)，從而得到1.95gα-型(化合物(23))、1.38gβ-型(化合物(24))和1.0g其混合物(總產量4.33g)，收率為73.2%化合物(23)的物理性質Rf＝0.68(MerckHPTLC;乙醚/乙醇＝24/1)
1H NMR(500MHz;CDCl3，TMS)δH0.880(6H，t，J＝7.0Hz，-CH3x 2)，1.253(76H，m，-CH2- x 38)，1.882(3H，s，CH3CONH-)，1.976(1H，t，J＝12.5Hz，H-3ax)，2.025(3H，s，CH3COO-)，2.039(3H，s，CH3COO-)，2.132(3H，s，CH3COO-)，2.137(3H，s，CH3COO-)，2.601(1H，dd，J＝4.8，12.8Hz，H-3eq)，3.791(3H，s，-COOCH3)，4.298(1H，dd，J＝2.9，12.5Hz，H-9)，4.852(1H，ddd，H-4)，5.120(1H，d，-CONH-)，5.322(1H，dd，H-7)and 5.371(1H，ddd，H-8).
化合物(24)的物理性質Rf＝0.73(MerckHPTLC;乙醚/乙醇＝24/1)1H NMR(500 MHz;CDCl3，TMS)δH0.880(6H，t，-CH3x 2)，1.253(76H，m，-CH2- x 38)，1.882(3H，s，CH3CONH-)，1.898(1H，t，J＝11.7Hz，H-3ax)，2.013(3H，s，CH3COO-)，2.024(3H，s，CH3COO-)，2.064(3H，s，CH3COO-)，2.143(3H，s，CH3COO-)，2.455(1H，dd，J＝4.8，12.8Hz，H-3eq)，3.794(3H，s，-COOCH3)，4.468(1H，dd，J＝2.6，12.5Hz，H-9)and 5.379(1H，dd，H-7).
(ⅳ)化合物(25)的合成
將化合物(23)(1.59g;1.35mmol)溶於約30mlTHF中，然後加入11ml1NNaOH溶液並於室溫下將溶液攪拌7小時。反應液用Amberlite IRC-50(PH＝7)中和，然後濾出樹脂，用蒸餾水洗滌樹脂，通過填充(ODS 60 ，YAMAMURA CHEMICAL LABORATORIES;60/200目;溶劑＝水，甲醇)的柱提純合併的濾液和洗滌液，收集甲醇部分，蒸出溶劑並凍幹所得剩餘物，得到1.19g白色粉狀化合物(25)，收率為86.7%。
化合物(25)的物理性質1H NMR(500MHz;CDCl3+CD3OD(1∶1)，TMS)δH0.889(6H，t，J＝7.3Hz，-CH3x 2)，1.150-1.400(76H，m，-CH2- x 38)，1.500-1.700(4H，m，-OCH2CH2- x 2)and 2.030(3H，s，CH3CONH-).
(ⅴ)化合物(26)的合成
將化合物(24)(1.04g;0.88mmol)溶於約20mlTHF中，然後加入5.3ml 1N NaOH溶液並於室溫下將溶液攪拌7小時。反應液用Amberlite IRC-50(PH＝7)中和，然後濾出樹脂，用蒸餾水洗滌樹脂，用柱色譜法提純合併的濾液和洗滌液(ODS 60 ，YAMAMURACHEM ICAL LABORATORIES;60/200目，溶劑＝水，甲醇)，收集甲醇部分，蒸出溶劑並凍幹所得殘餘物得到748mg白色粉狀化合物(26)，收率為83.6%。
化合物(26)的物理性質1NMR(500MHz，CDCl3+CD3OD(1∶1)，TMS)δH0.888(6H，t，J＝7.0Hz，-CH3x 2)，1.100-1.450(76H，m，-CH2- x 38)，1.500-1.700(4H，m，-OCH2CH2- x 2)，2.046(3H，s，CH3CONH-).
實施例5(ⅰ)化合物(28)和(29)的合成
將已於180℃加熱減壓乾燥過的粉狀4A分子篩(5.0g)、溴化汞(Ⅱ)(2.09g;5.8mmol)和氰化汞(Ⅱ)(1.46g;5.8mmol)或三氟甲烷磺酸銀懸浮於50ml無水氯仿、THF或二氯甲烷中，然後向懸浮液中加入0.92g(2.7mmol)鯊肝醇(S-構型)並於室溫和氬氣流保護條件下將溶液攪拌2小時。
反應液用冰冷卻後加15ml化合物(27)(2.03g;4.0mmol)的無水氯仿溶液，並於室溫下將溶液攪拌3天。反應液過濾後殘餘物用氯仿洗滌並從合併的濾液和洗滌中蒸出溶劑。所得殘餘物用柱色譜法提純(WacogelC-300;洗脫劑＝乙醚/乙醇體系和甲苯/甲醇體系)，得到1.2g化合物(27)(α-，β-和脫氫-型混合物)。
向化合物(27)中加入30ml乙酸酐和40ml無水吡啶並於室溫下將溶液攪拌18小時。反應液減壓蒸發至幹，然後將所得殘餘物重新溶於乙酸乙酯中，用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和氯化鈉溶液洗滌，溶液再用無水硫酸鎂乾燥後蒸出溶劑，得到1.6g殘餘物。
所得殘餘物用柱色譜法提純(MerckCo.，Kieselgel60;洗脫劑＝乙醚/甲醇(60/1))，然後讓其通過C型lobar柱(洗脫劑＝甲苯/甲醇(15∶1)，得到193.4mgα-型(化合物(28))、171.3mgβ-型(化合物(29))和513.1mg其混合物(共877.8mg)。以鯊肝醇計算的收率為37.8%。
α-型的物理性質1H NMR(500MHz，CDCl3，TMS)δH0.884(3H，t，-CH3)，1.888(3H，s，-NHCOCH)，1.949(1H，t，H-3ax)，2.586(1H，dd，H-3eq)，3.817(3H，s，-COOCH3)and 1.870(1H，m，H-4).
β-型的物理性質1H NMR(500MHz，CDCl3，TMS)δH0.878(3H，t，-CH3)，1.885(3H，s，-NHCOCH3)，1.898(1H，t，H-3ax)，2.465(1H，dd，H-3eq)，3.800(3H，s，-COOCH3)and 5.219(1H，m，H-4)。
(ⅱ)化合物(30)的合成
向化合物(28)(163.4mg;0.19mmol)中加入1.14ml 1N NaOH溶液並於室溫下將溶液攪拌8小時。反應液用陽離子交換樹脂(Amberlite IRC-50;PH＝7)中和，然後濾出樹脂，用蒸餾水洗滌樹脂，將濾液與洗滌液合併後用柱色譜提純(ODS 60
，YAMAMURA CHEMICAL LABORATOR IES，60/200目，溶劑＝水，甲醇)，收集甲醇部分，蒸出溶劑並凍幹殘餘物，得到112.3mg白色粉狀化合物(30)，收率為89.9%。
化合物(30)的物理性質1H NMR(500MHz，C5D5N，TMS)δH0.883(s，-CH3)，2.066(s，-NHCOCH3)，2.349(t，H-3ax)and3.737(q，H-3eq).
(ⅲ)化合物(31)的合成
向147.6mg(0.17mmol)化合物(29)中加入1.02ml 1N NaOH溶液並於室溫下將溶液攪拌8小時。反應液用陽離子交換樹脂(Amberlite IRC-50;PH＝7)中和，然後濾出樹脂，用蒸餾水洗滌樹脂，濾液與洗滌液合併後用柱色譜提純(ODS 60 ，YAMAMURA CHEMICAL LABORATORIES;60/200目，溶劑＝水，甲醇)佔狀疾糠鄭又姓舫鋈薌斂⒍掣傷貌杏轡錚玫槳諮圩椿銜錚 1)(90mg)，收率為79.5%。
化合物(31)的物理性質1H NMR(500MHz，C5D5N，TMS)δH0.892(s，-CH3)，2.010(s，-NHCOCH3)，2.400(t，H-3ax)and3.079(q，H-3eq)。
如上所詳述，已確證可按本發明方法製得含唾液酸的脂衍生物的鈉鹽形式的新型唾液醯甘油脂。
還已證明，本發明方法可簡化唾液醯甘油脂的製備步驟並提高其收率。
權利要求
1.以下通式(Ⅰ)的唾液醯甘油脂
是式中R1為氫原子或基團CH3CO-；R2為鹼金屬、氫原子或低級烷基；R3為氫原子或基團CnH2n+1-(n為1～30的整數)；R4為基團CmH2m+1(m為1～30的整數)。
2.權利要求1所述唾液醯甘油脂，其中R2為鈉原子。
3.權利要求1所述唾液醯甘油脂，其中R3為氫原子或基團Cn H2n+1-(n為整數6、10、18或22)。
4.權利要求1所述唾液醯甘油脂，其中R4為基團Cm H2m+1-(m為整數6、10、18、或22)。
5.權利要求1所述唾液醯甘油脂，其中R2為鈉原子，R3為氫原子或基團Cn H2n+1-(n為整數6、10、18或22)，R4為基團Cm H2m+1-(m為整數6、10、18或22)。
6.製備以下通式(Ⅲ)所示的唾液醯甘油脂的方法
式中M為鹼金屬，R3為氫原子或基團Cn H2n+1-(n為1～30的整數)，R4為基團Cm H2m+1-(m為1～30的整數)，該方法包括，在鹼性含水溶劑中處理以下通式(Ⅱ)所示的化合物
式中R5為基團CH3CO-;R6為氫原子或低級烷基;R3、R4定義同上。
7.權利要求6所述方法，其中M為鈉原子。
8.權利要求6所述方法，其中R3為氫原子或基團Cn H2n+1-(n為整數6、10、18或22)。
9.權利要求6所述方法，其中R4為基團Cm H2m+1-(m為整數6、10、18或22)。
10.權利要求6所述方法，其蠷2為鈉原子，R3為氫原子或基團Cn H2n+1-(n為整數6、10、18或22)，R4為基團Cm H2m+1-(m為整數6、10、18或22)。
11.權利要求6所述方法，其中水解在鹼性條件下，在四氫呋喃、甲醇或乙醇中進行。
全文摘要
本發明提供下式(I)的唾液醯甘油脂，式中R
文檔編號A61P25/00GK1033056SQ8810772
公開日1989年5月24日 申請日期1988年11月10日 優先權日1987年11月10日
發明者吉村昌治, 松崎祐二, 杉本守, 伊藤正善, 志馬善保, 小川智也 申請人:美克德株式會社