一種胃蛋白酶原Ⅱ生物素-鏈黴親和素酶聯免疫檢測試劑盒的製作方法

2023-05-28 02:46:01 2

專利名稱：一種胃蛋白酶原Ⅱ生物素-鏈黴親和素酶聯免疫檢測試劑盒的製作方法
技術領域：
一種胃蛋白酶原II生物素-鏈黴親和素酶聯免疫檢測試劑盒，本實用新型涉及一種血清(血漿)中胃蛋白酶原II檢測試劑盒 ，屬於體外試劑診斷領域中血清(漿)抗原的酶聯免疫檢測(ELISA)。
背景技術：
胃蛋白酶原II (簡稱PG II)來源於全胃腺和遠端十二指腸Brunner氏腺，胃黏膜合成的PGII約為總量的25%，PG II大部分進入消化道，少量進入血液循環，因此被稱為「反映胃部狀態和功能的指針」。國內外臨床研究指出，PG II與胃底黏膜病變的相關性較大，其升高與胃底腺管萎縮、腸上皮化生或假幽門腺化生、異型增生有關。測定PG II含量有助檢測出十二指腸潰瘍、萎縮性胃炎、胃炎、胃癌等其他消化道疾病，供臨床檢測和體檢篩查需求。在人群胃病篩查中，每個人做胃鏡是不現實的，可通過非侵入性血清PG檢測將淺表性胃炎、糜爛性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃癌等高危人群篩查出來，再進行胃鏡檢查是一種切實可行的方案。目前，PG的檢測方法主要有TRFIA、ELISA、生化法及化學發光法。但是或是存在檢測儀器價格昂貴，或是檢測準確度不能達到臨床要求等問題，推廣使用困難。而本實用新型選用了技術成熟、價格低廉，無技術壁壘的ELISA雙抗夾心方法，其特點是加入了生物素-鏈黴親和素放大體系，提高檢測靈敏度和特異度，增加測量量程，能達到和符合臨床使用要求。

實用新型內容本實用新型的目的是提供一種新型的PG II的生物素-鏈黴親和素酶聯免疫檢測試劑盒，運用生物素-(鏈黴)親和素的放大效應，將雙抗夾心法的信號放大，達到高靈敏、特異性好、量程範圍寬的目的。該試劑盒能夠實現快速、簡便的檢測。本實用新型的技術方案一種血清胃蛋白酶原II生物素-鏈黴親和素酶聯免疫檢測試劑盒，試劑盒內設有抗體反應板(1)，PG II標準品(2)，生物素-PG II單克隆抗體(3)，鏈黴親和素-HRP酶工作液(4)，顯色液A液與B液各一瓶(5)，反應終止液(6)，樣品稀釋液，濃縮洗滌液(8)和盒體(9)組成；抗體反應板(I)為胃蛋白酶原II單克隆抗體包被，可拆卸96孔酶標板；生物素-PG II單克隆抗體(3)為連有生物素的另一株胃蛋白酶原II單克隆抗體；PG II標準品
(2)為不同濃度的胃蛋白酶原II抗原凍幹品一套；鏈黴親和素-HRP酶工作液(4)是辣根過氧化物酶標記的親和素。該血清(漿)PG II酶聯免疫檢測試劑盒，另附操作說明書。每個試劑盒的試劑足夠96次測定，檢測時包被抗體與生物素化另一株抗體與樣本中的抗原構成夾心複合物，加入酶標鏈黴親和素工作液後，用顯色液顯色，樣品OD值與樣品PG II含量成正相關，根據標準曲線即獲得相應PG II濃度，操作簡便。本實用新型的有益效果一、靈敏度高，血清(漿)樣本不需要稀釋，比普通ELISA方法高十倍左右；二、量程寬，樣品濃度值介於0-50ng/mL的都能準確檢測；三、檢測時間短，從樣品孵育到顯色，I. 5小時完成；四、加樣量少，每次僅20 μ L。

圖I本實用新型的結構示意圖。圖中1、包被有PG II單克隆抗體的微孔板，即抗體反應板 I 塊(96Τ) ;2、PG II 標準品(0、5、10、20、30、50ng/mL，6 瓶);3、生物素-PG II 單克隆抗體(另一株，與包被抗體成對)1X0. 5mL/瓶(用時I : 50稀釋);4、鏈黴親和素-HRP酶工作液IX 15mL/瓶；5、顯色液A液與B液各一瓶；6、反應終止液I X IOmL/瓶；7、樣 品稀釋液lX20mL/瓶；8、濃縮洗滌液lX40mL/瓶；9、盒體。
具體實施方式
實施例I :PG II的ELISA樣品測定檢測I、加樣先向微孔板中加入20 μ L標準品或血清(漿)樣品，再加入100 μ L/孔已稀釋的生物素-PG II單克隆抗體溶液。2、37。(孵育4511^11。3、加入洗滌液(使用時蒸餾水25倍稀釋)洗板4次，拍幹。4,100 μ L/孔依次加入鏈黴親和素-HRP酶工作液，37°C孵育15min。5、加入洗滌液(使用時蒸餾水25倍稀釋)洗板4次，拍幹。6、顯色液A液、B液各一滴，37°C避光，孵育15min。7、每孔依次滴加終止液,靜置Imin。8、加入終止液後，20min內讀數，酶標儀測量每孔螢光計數0D45(I。 結果處理根據標準品濃度和對OD值繪製標準曲線，將樣品的OD值代入標準曲線中，計算得到樣品中PG II含量(表I)。表I
PG II標準點樣品
Γ> ττ f t、， O 5 10 20 30 !>0 11 PG Ii mm________
OD 值0—070—4S OJ 1—29 1.95 OjT本實用新型所述實施例是指導性的，非限定性的，只是幫助理解本實用新型，因此本實用新型並不限於具體實施方式
中所述的實施例，凡是由本領域技術人員根據本實用新型的技術方案得出的其他具體實施方式
，同樣屬於本實用新型保護的範圍。
權利要求1. ー種血清胃蛋白酶原II生物素-鏈黴親和素酶聯免疫檢測試劑盒，其特徵是試劑盒內設有抗體反應板(1)，PG II標準品(2)，生物素-PG II單克隆抗體(3)，鏈黴親和素-HRP酶工作液(4)，顯色液A液與B液各一瓶(5 )，反應終止液(6 )，樣品稀釋液(7 )，濃縮洗滌液(8)和盒體(9)組成； 抗體反應板(I)為胃蛋白酶原II單克隆抗體包被，可拆卸96孔酶標板；生物素-PG II單克隆抗體(3)為連有生物素的另ー株胃蛋白酶原II單克隆抗體；PG II標準品(2)為不同濃度的胃蛋白酶原II抗原凍幹品ー套；鏈黴親和素-HRP酶工作液(4)是辣根過氧化物酶標記的親和素。
專利摘要一種胃蛋白酶原Ⅱ生物素-鏈黴親和素酶聯免疫檢測試劑盒，屬於體外試劑診斷技術領域。本實用新型基於雙抗夾心方法，利用了抗原抗體特異性免疫反應，定量檢測血清(漿)中胃蛋白酶原Ⅱ含量。試劑盒內組成包括抗體反應板、PGⅡ標準品、生物素標記抗體、反應稀釋液、鏈黴親和素-HRP酶工作液、濃縮洗滌液、顯色液和終止液。利用生物素-鏈黴親和素的放大效應和高效價的單克隆抗體，達到血清不需要稀釋直接反應檢測，減輕工作量的目的；同時獲得寬的測量範圍，便於臨床使用。本實用新型的積極意義在於試劑盒靈敏度高、特異性好、測量範圍寬、操作簡單，利於大規模推廣應用，有廣闊的市場前景。
文檔編號G01N33/577GK202583208SQ20122021968
公開日2012年12月5日 申請日期2012年5月16日 優先權日2012年5月16日
發明者張藝, 黃飈, 張珏, 周彬, 王柯, 朱嵐 申請人:江蘇省原子醫學研究所, 無錫市江原實業技貿總公司