一種順丙烯磷酸中順反異構體及其相關雜質的檢測方法

2023-05-28 08:15:21 4

專利名稱：一種順丙烯磷酸中順反異構體及其相關雜質的檢測方法
技術領域：
本發明屬於藥物分析領域，具體涉及一種順丙烯磷酸中順反異構體及其相關雜質的檢測方法。
背景技術：
目前，磷黴素1、2_環氧丙基磷酸二鈉鹽，是一種游離酸，最初從Mi^ptomyces fradicle中分離，對革蘭氏陽性和陰性菌有效，其作用機理是抑制細菌細胞壁的合成導致細菌死亡。磷黴素能與一種細菌細胞壁合成酶相結合，阻礙細菌利用有關物質合成細胞壁的第一步反應，從而起殺菌作用，磷黴素抗菌譜較廣，主要用於金萄菌、大腸埃希菌、肺炎雷伯菌、產氣桿菌、沙雷菌屬、志賀菌屬、銅綠假單孢菌等敏感菌引起的呼吸道、泌尿道、腸道和皮膚軟組織感染，以及敗血症、腹膜炎、腦膜炎等。綜上所述其療效僅次於青黴素類，發生過敏性休克的機會甚少。所以受到廣大的醫務人員及患者的歡迎，使用磷黴素的診所和個人隨處可見。順丙烯磷酸是製備磷黴素的中間體，丙二稀磷酸為順丙烯磷酸的前體，在磷黴素的製備過程中，順丙烯磷酸中的反異構體及丙二稀磷酸的含量直接影響到磷黴素系列產品的收率及質量。為保證藥品的質量及其安全性，需建立檢測方法對磷黴素中順丙烯磷酸、順丙烯磷酸中的反異構體及丙二稀磷酸的含量進行控制。目前，順丙烯磷酸中順反異構體及其相關雜質的檢測方法，未見相關報導。因此，研製開發一種順丙烯磷酸中順反異構體及其相關雜質的檢測方法一直是亟待解決的新課題。

發明內容
本發明的目的在於提供一種順丙烯磷酸中順反異構體及其相關雜質的檢測方法， 本方法採用高效液相色譜法監控順丙烯磷酸中順反異構體及其前體丙二稀磷酸的含量，以確保能夠持續穩定地生產出質量均一的合格產品。本發明的目的是這樣實現的一種順丙烯磷酸中順反異構體及其相關雜質的檢測方法，所述方法包括如下步驟(1)色譜條件色譜柱C-18柱，4. 6mmX250mmX5. Oym ；流速1. Oml/min ；紫外檢測器，檢測波長 225nm，進樣量 10 μ 1 ；流動相50mmol/L的磷酸氫二鉀水溶液-甲醇；(2)供試液製備取供試品0. 1 μ 1，用流動相溶解並稀釋到25ml，過濾；(3)取供試液，進樣10微升，記錄圖譜，順丙烯磷酸保留時間為12. 3min，其順反異構體相對保留值為1. 15，丙二稀磷酸相對保留值為0. 38，採用面積歸一化法計算各雜質含量；所述流動相中50mmol/L的磷酸氫二鉀水溶液中含2%的四丁基氫氧化銨水溶液； 所述四丁基氫氧化銨水溶液的濃度為；所述流動相磷酸氫二鉀水溶液的PH需用磷酸調到7.0;所述流動相磷酸氫二鉀水溶液與甲醇體積比為90 1;所述檢測方法根據保留時間及相對保留值對順丙烯磷酸及其順反異構體、丙二稀磷酸進行識別。本發明的要點在於它的檢測方法。該檢測方法的基本原理是，順丙烯磷酸、丙二稀磷酸、順丙烯磷酸反式異構體在流動相中的保留時間不同，利用HPLC檢測方法分別計算其含量。一種順丙烯磷酸中順反異構體及其相關雜質的檢測方法與現有技術相比，具有通過該方法檢測順丙烯磷酸中順反異構體及其相關雜質，重現性、靈敏度、準確度均能符合要求等優點，將廣泛的應用於藥物分析領域中。
具體實施例方式以下實例將有助於對本發明的了解，但這些實例僅為了對本發明加以說明，本發明並不限於這些內容。一種順丙烯磷酸中順反異構體及其相關雜質的檢測方法，所述方法包括如下步驟(1)色譜條件色譜柱C-18柱，4. 6_Χ250_Χ5. Ομπι ；流速1. Oml/min ；紫外檢測器，檢測波長 225nm，進樣量 10 μ 1 ；流動相50mmol/L的磷酸氫二鉀水溶液-甲醇；(2)供試液製備取供試品0. 1 μ 1，用流動相溶解並稀釋到25ml，過濾；(3)取供試液，進樣10微升，記錄圖譜，順丙烯磷酸保留時間為12. 3min，其順反異構體相對保留值為1. 15，丙二稀磷酸相對保留值為0. 38，採用面積歸一化法計算各雜質含量；所述流動相中50mmol/L的磷酸氫二鉀水溶液中含2%的四丁基氫氧化銨水溶液； 所述四丁基氫氧化銨水溶液的濃度為；所述流動相磷酸氫二鉀水溶液的PH需用磷酸調到7.0;所述流動相磷酸氫二鉀水溶液與甲醇體積比為90 1;所述檢測方法根據保留時間及相對保留值對順丙烯磷酸及其順反異構體、丙二稀磷酸進行識別。下面結合實施例對本發明作進一步具體描述1.相關溶液及流動相的配製1. 1流動相的製備取磷酸二氫鉀6. 8g，加水適量溶解，加入20. Oml質量百分比濃度為55%的四丁基氫氧化銨水溶液，用水稀釋到1000ml，用磷酸調節pH到7. O。量取該液 900ml，與IOOml甲醇混合，過濾，脫氣。1.2供試品溶液製備1. 2. 1取供試品(批號:1)0. 1ml，用流動相溶解並稀釋到25ml，過濾。1. 2. 2取供試品(批號2)0. 1ml，用流動相溶解並稀釋到25ml，過濾。1. 2. 3取供試品(批號3)0. 1ml，用流動相溶解並稀釋到25ml，過濾。2.測定方法將3批供試品溶液各10 μ 1分別注入液相色譜儀，記錄圖譜。順丙烯磷酸保留時間為12. 3min，其順反異構體相對保留值為1. 15，丙二稀磷酸相對保留值為0. 38。採用面積歸一化法計算各雜質含量。
3.檢測結果供試品1丙二稀磷酸的峰面積為811140，順丙烯磷酸的峰面積為3436614，順丙烯磷酸反式異構體的峰面積為1409M8丙二稀磷酸含量=811140+(811140+3436614+1409248)X 100%= 14. 34%順丙烯磷酸含量=3436614+(811140+3436614+1409248) X 100%= 60. 75%順丙烯磷酸反式異構體含量=1409248+(811140+3436614+1409248)X 100% =
24.91%供試品2丙二稀磷酸的峰面積為831520，順丙烯磷酸的峰面積為3386510，順丙烯磷酸反式異構體的峰面積為1438236丙二稀磷酸含量=831520+(831520+3386510+1438236)X 100%= 14. 70%順丙烯磷酸含量=3386510+(831520+3386510+1438236) X 100%= 59. 87%順丙烯磷酸反式異構體含量=1438236+(831520+3386510+1438236) X 100% =
25.43%供試品3丙二稀磷酸的峰面積為820377，順丙烯磷酸的峰面積為3356745，順丙烯磷酸反式異構體的峰面積為1436502丙二稀磷酸含量1 = 820377^- (820377+3356745+1436502) X 100%= 14. 61%順丙烯磷酸含量1 = 3356745 + (820377+3356745+1436502) X 100%= 59. 80%順丙烯磷酸反式異構體含量=1436502+(820377+3356745+1436502) X 100% = 25. 59%。
權利要求
1.一種順丙烯磷酸中順反異構體及其相關雜質的檢測方法，其特徵在於所述方法包括如下步驟(1)色譜條件色譜柱c-18柱，4. 6πιπιΧ250πιπιΧ5.0μπι;流速1. Oml/min ；紫外檢測器，檢測波長 225nm，進樣量 10 μ 1 ；流動相50mmol/L的磷酸氫二鉀水溶液-甲醇；(2)供試液製備取供試品0.1 μ 1，用流動相溶解並稀釋到25ml，過濾；(3)取供試液，進樣10微升，記錄圖譜，順丙烯磷酸保留時間為12.3min，其順反異構體相對保留值為1. 15，丙二稀磷酸相對保留值為0. 38，採用面積歸一化法計算各雜質含量。
2.根據權利要求1所述一種順丙烯磷酸中順反異構體及其相關雜質的檢測方法，其特徵在於所述流動相中50mmol/L的磷酸氫二鉀水溶液中含2%的四丁基氫氧化銨水溶液。
3.根據權利要求2所述一種順丙烯磷酸中順反異構體及其相關雜質的檢測方法，其特徵在於所述四丁基氫氧化銨水溶液的濃度為55%。
4.根據權利要求1所述一種順丙烯磷酸中順反異構體及其相關雜質的檢測方法，其特徵在於所述流動相磷酸氫二鉀水溶液的PH需用磷酸調到7. O。
5.根據權利要求1所述一種順丙烯磷酸中順反異構體及其相關雜質的檢測方法，其特徵在於所述流動相磷酸氫二鉀水溶液與甲醇體積比為90 1。
6.根據權利要求1所述一種順丙烯磷酸中順反異構體及其相關雜質的檢測方法，其特徵在於所述檢測方法根據保留時間及相對保留值對順丙烯磷酸及其順反異構體、丙二稀磷酸進行識別。
全文摘要
一種應用於藥物分析領域中的順丙烯磷酸中順反異構體及其相關雜質的檢測方法，所述方法包括如下步驟色譜條件色譜柱C-18柱，4.6mm×250mm×5.0μm；流速1.0ml/min；紫外檢測器，檢測波長225nm，進樣量10μl；流動相50mmol/L的磷酸氫二鉀水溶液-甲醇；供試液製備取供試品0.1μl，用流動相溶解並稀釋到25ml，過濾；取供試液，進樣10微升，記錄圖譜，順丙烯磷酸保留時間為12.3min，其順反異構體相對保留值為1.15，丙二稀磷酸相對保留值為0.38，採用面積歸一化法計算各雜質含量；所述流動相中50mmol/L的磷酸氫二鉀水溶液中含2％的四丁基氫氧化銨水溶液；所述四丁基氫氧化銨水溶液的濃度為55％。該發明通過該方法檢測順丙烯磷酸中順反異構體及其相關雜質，重現性、靈敏度、準確度均能符合要求。
文檔編號G01N30/02GK102507758SQ20111031035
公開日2012年6月20日 申請日期2011年10月13日 優先權日2011年10月13日
發明者馮文宇, 周秀峰, 唐奎山, 婁玉濤, 孟濤, 尤楠, 蘇貴弟, 鄧暤, 金玉坤 申請人:東北製藥集團股份有限公司