B型肝炎治療性疫苗及其製備方法

2023-08-01 12:39:46

專利名稱：B型肝炎治療性疫苗及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種新型B型肝炎治療性疫苗及其製備方法，確切地是涉及一種以質粒脫氧核糖核酸(DNA)為基礎的B型肝炎治療性疫苗及其製備方法。
B型肝炎病毒(簡稱B肝病毒)感染是傳播最為廣泛的一種人類病毒感染。全世界約有三億慢性感染病人，並且據估計每年還有約兩千萬新病例(Davis,H.L,Michel,M-LWhalen,R.G.1993,Hum、Mol.Genet.2:1847-1851)。絕大多數B肝病毒感染發生在亞洲和非洲國家。在東南亞某些地區，B肝病毒攜帶者高達總人口百分之十到二十(Gust,I.D.1982,in Viral Hepatitis,eds.Szmuness,W.,Alter,H.J.andMaynard,J.E.(Franklin Institute Press,Philadelphia),P 129；Davis,1993)。
B肝病毒感染是急性肝炎發病主要病原之一。B型肝炎的特徵是肝細胞損傷及炎症反應(Redecker,A.G.1975,Am.J.Med.Sci.270:9-16)。原發性B肝病毒感染通常是自限性的，病毒抗原隨之清除，大約有百分之十的病人產生持續性感染(Ganem,D.1982,Rev.Infect.Dis.4:1026-47)。持續性即慢性B肝病毒感染可導致肝硬化，終至肝功能衰竭及其他嚴重後果。流行病學調查顯示，慢性B肝病毒感染與原發性肝細胞肝癌有緊密的相關性(Blumberg,B.S.et.al.,1971,in Australian AntigenandHepatitis(CRC,Cleveland,OH)；Beasley,R.P.et、al.,1981,Lancet 2:1129-1133)。慢性B肝病毒攜帶者的原發性肝細胞肝癌發病率是非攜帶者的一百多倍(Beasley,1981)。在東南亞及非洲的一些B肝高發地區，原發性肝細胞肝癌是首位致死病因。例如，原發性肝細胞肝癌致死率是臺灣地區全部癌症致死率的百分之二十(Chen,D-S,1987,inOkada,K.Ishak,K.eds.Neoplasms of Liver,(Springer Verlag,Berlin))。B肝病毒感染的主要後果中，肝硬化及原發性肝細胞肝癌危害最大。
儘管世界各國為尋求有效的預防和治療B型肝炎病毒感染已經投入了巨大的人力和物力，但迄今仍沒有一項理想的治療方案可以治癒B肝病毒感染的病人。因此，為使人們免除感染B肝病毒的痛苦，開發經濟而有效的B肝治療性疫苗，是一項世界性的重大而迫切的任務，這一任務對於亞非發展中國家顯得更為重要。
目前，在美國已知有兩類B肝疫苗已進入臨床應用，這兩種疫苗均含有B肝表面抗原(不含B肝的其他抗原或核心抗原)。其中之一是由慢性B肝病毒攜帶者的血漿中提取的，經福馬林滅活的HBsAg(Maupas,P.,Goudeau,A.,Coursaget,P.Drucker.J.1976,Lancet 1:1367-1370)。這種疫苗經使用，證明基本上是安全有效的。另一種是從酵母菌中表達提純的重組B肝表面抗原(Valenzuela,P.et.al.,1982,Nature(London)298:347-82)，與前一種有相似的安全有效性。這兩種疫苗在健康人群中的保護率可達百分之九十，但在免疫抑制病人(如腎透析、器官移植病人等)中只達到約百分之五十的保護率(Pead,P.J、et.al.,1985,Lancet1:1152；Wiederman,G.et.al.,1987,Vaccine 5:179-84)。更為重要的是上述這兩種疫苗均為蛋白質，需從血漿或重組酵母菌中純化。由於純化蛋白質的過程複雜，而且原料有限，生產成本過於昂貴，加上蛋白質生物製品需冷凍保存，生物活性限期較短，這樣就大大限制了這些B肝疫苗在發展中國家的廣泛使用。
近年來，由於血漿製品不僅來源有限，而且此疫苗有帶感染性病毒顆粒汙染的可能性，約萬分之一的受接種人因此受害，從而得到B肝病毒感染並成為新的感染源。同時人們對其他可能的病原體汙染(如愛滋病毒或其他尚未明確的新病原體)的關注也日益增加，因此，人們已在探索生產B肝疫苗的其他途徑。大腸桿菌、酵母菌、哺乳類細胞均已被試用來表達B肝病毒抗原，以期生產無感染性的新的亞單位疫苗。但是迄今為止，B肝病毒表面抗原無法在大腸桿菌而只能在真核細胞中有效地表達(Dubois,M.F.et,al,1980,Proc,natl.AcadSci.USA 77:209-217；Moriarty,A.M.et.al.,1981,Proc,natl.Acad.Sci.USA78:2606-71；Wang,Y.et.al.,1982,The EMBO Journal 1:1213；Gough,N.Murray,K.1983,J、Mol.Biol.162:43-48)。哺乳動物細胞也可以用來表達B肝表面抗原，但有可能帶有病毒、活化的癌基因及其他活化因子或人類尚未認識到的病原體。而酵母菌表達的B肝表面抗原的純化過程需要裂解細胞，因而，這種疫苗生產的成本較高。疫苗生產成本高及貯藏不方便是現有B肝疫苗無法在發病率較高的發展中國家得到廣泛應用的主要原因。
此外，上述兩種現有的B肝疫苗均需多次注射才能達到免疫效果，同時這兩種疫苗對慢性病毒攜帶者沒有治療效果。
從而，本發明的目的是為了克服上述現有疫苗所存在的缺點，提供一種安全可靠、性能穩定、製備簡便、易於貯存和便於應用的新型B肝治療性疫苗。
此外，本發明的另一目的是為了製備上述新型治療性疫苗而提供一種製備該疫苗的方法，該方法生產成本低、工藝簡單、生產出的疫苗質量高。
本申請的發明人根據過去十五年左右分子生物學的發展，對哺乳動物細胞基因表達調控的認識以及對B型肝炎病毒的分子結構和免疫反應的了解，經過長期試驗研究，終於達到了上述目的。
本發明提供了一種新型的B型肝炎治療性疫苗，該疫苗以質粒脫氧核糖核酸(DNA)為基礎，用含有B型肝炎病毒表面抗原多肽(pre S多肽及完整的HBSAg)基因的轉錄及蛋白合成的DNA連接入質粒載體。所述的質粒載體含有來自人類巨細胞病毒(Maniatis,T、et.al.,1982,Molecular Cloning,A Laboratory Manual(Cold Spring HarborLaboratory))的高效哺乳動物細胞轉錄啟動子及增強子，並帶有核糖核酸穩定序列、哺乳動物細胞DNA複製起動順序及帶有能增強免疫效果的抗生素選擇基因(如抗氨苄青黴素基因)。其中轉錄啟動子及增強子順序使得B肝表面抗原基因得以高效轉錄，核糖核酸穩定序列使轉錄的B肝表面抗原信使核糖核酸不致裂解。哺乳動物DNA複製起動順序使得質粒能在動物細胞內複製，因而達到更高表達效果。大腸桿菌DNA複製起動順序及抗生素選擇基因(如抗氨苄青黴素基因)則使質粒得以在大腸桿菌內複製擴增而使得大量提純DNA成為可能。同時此抗氨苄青黴素基因也帶有能增強免疫效果的序列，因而在動物及人體注射後能產生有保護作用的免疫反應。
上述疫苗質粒中包括有[pre S1+pre S2+HBSAg]、[pre S2+HBSAg]以及[HBSAg]三種不同組分，其中所用的B型肝炎表面抗原多肽基因的序列如下1．肽序列MGGWSSKPRKGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWDFNPVKDDWPAANQVGVGAFGPRLTPPHGGILGWSPQAQGILTTVSTIPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQWNSTAFHQTLQDPRVRGLYLPAGGSSSGTVNPAPNIASHISSISARTGDPVTNMENITSGFLGPLLVLQAGFFLLTRILTIPQSLDSWWTSLNFLGGSPVClGQNSQSPTSNHSFTSCPPICPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLIPGSTTTSTGPCKTCTTPAQGNSMFPSCCCTKPTDGNCTCIPIPSSWAFAKYLWEWASVRFSWLSLLVPFVQWFVGLSPTVWLSAIWMMWYWGPSLYSIVSPFIPLLPIFFCLWVYI2．核苷酸序列ATGGGAGGTTGGTCATCCAAACCTCGCAAAGGCATGGGGACGAACCTTTCTGTTCCCAACCCTCTGGGATTCTTTCCCGATCATCAGTTGGACCCTGCATTCGGAGCCAACTCAAACAATCCAGATTGGGACTTCAACCCCATCAAGAACCACTGGCCAGCAGCCAACCAGGTAGGAGTGGGAGCATTCGGGCCAAGGCTCACCCCTCCACACGGCGGTATTTTGGGGTGGAGCCCTCAGGCTCAGGGCATATTGACCACAGTGTCAACAATTCCTCCTCCTGCCTCCACCAATCGGCAGTCAGGAAGGCAGCCTACTCCCATCTCTCCACCTCTAAGAGACAGTCATCCTCAGGCCATGCAGTGGAATTCCACTGCCTTCCACCAAGCTCTGCAGGATCCCAGAGTCAGGGGTCTGTATCTTCCTGCTGGTGGCTCCAGTTCAGGAACAGTAAACCCTGCTCCGAATATTGCCTCTCACATCTCGTCAATCTCCGCGAGGACTGGGGACCCTGTGGCGAACATGGAGAACATCACATCAGGATTCCTAGGACCCCTGCTCGTGTTACAGGCGGGGTTTTTCTTGTTGACAAGAATCCTCACAATACCGCAGAGTCTAGACTCGTGGTGGACTTCTCTCAATTTTCTAGGGGGATCACCCGTGTGTCTTGGCCAAAATTCGCAGTCCCCAACCTCCAATCACTCACCAACCTCCTGTCCTCCAATTTGTCCTGGTTATCGTTGGATGTGTCTGCGGCGTTTTATCATATTCCTCTTCATCCTGCTGCTATGCCTCATCTTCTTATTGGTTCTTCTGGATTATCAAGGTATGTTGCCCGTTTGTCCTCTAATTCCAGGATCAACAACAACCAGTACGGGACCATGCAAAACCTGCACGACTCCTGCTCAAGGCAACTCTATGTTTCCCTCATGTTGCTGTACAAAACCTACGGATGGAAATTGCACCTGTATTCCCATCCCATCGTCCTGGGCTTTCGCAAAATACCTATGGGAGTGGGCCTCAGTCCGTTTCTCTTGGCTCAGTTTACTAGTGCCATTTGTTCAGTGGTTCGTAGGGCTTTCCCCCACTGTTTGGCTTTCAGCAATATGGATGATGTGGTATTGGGGGCCAAGTCTGTACAGCATCGTGAGTCCCTTTATACCGCTGTTACCAATTTTCTTATGTCTCTGGGTATACATTTAA上述疫苗質粒的特徵為全長六千六百鹼基對的環形質粒，經BamHⅠ限制性內切酶酶切後產生分別為六千二百和四百鹼基對的兩個片段。
上述疫苗為白色粉末，溶於生理鹽水後為無色透明液體，用於皮內或肌肉注射。此疫苗性狀穩定，可在室溫保存至少三年。
與現有B肝疫苗相比，本發明的新型疫苗不僅可用於預防B肝病毒感染，而且可用於治療慢性病毒攜帶者，因此能達到更高的保護率；生產這種新型疫苗工藝比較簡單而生產成本較低；貯藏簡便(不需低溫保存)。
本發明的疫苗在人體中應用將會十分安全，其理由如下1、所用的構建疫苗的載體各部分，已經在歐美各國的基因治療的臨床試驗中安全地應用於病人(Conty,RM；LoBugliO,AFCuriel,DT.1996,Seminars in oncology 23:135-147)。
2、B肝病毒表面抗原基因已用於生產現有的疫苗，而現有的疫苗已在全世界數百萬人中安全地使用。本發明的疫苗只含有B肝病毒基因組中的表面抗原基因，而不含其他B肝病毒基因。相反地，現在中國仍然大規模使用的血清性疫苗含有滅活的病毒顆粒，即含有完整的B肝病毒基因組。因此，從這一點看，本發明的疫苗將不可能產生因為含有少量未被滅活的病毒顆粒引起約萬分之一的被接種者發生B肝病毒感染的危險。
3、本發明的疫苗是以脫氧核糖核酸為基礎的疫苗，僅含有B肝病毒表面抗原基因，而不含完整的B肝病毒基因組，特別是不帶有可能介導整合的基因。並且疫苗的使用途徑為肌肉注射，而正常肌肉細胞不再分裂增生。因此這種疫苗造成因為脫氧核糖酸整合而引起的副作用的可能性極其微小。
4、大量的動物實驗和臨床試驗尚未發現有任何其他原因引起的不良作用。我們的動物實驗證明，肌肉注射後九十天內，疫苗DNA只在肌肉中能被檢測到，而在其他組織中使用非常靈敏的DNA多聚酶鏈反應也檢測不到。一百八十天後疫苗DNA在任何組織中都檢測不到。因此本發明的疫苗既沒有急性或亞急性，也沒有慢性毒性。如上所述，這種疫苗比血源性疫苗所含的病毒基因更少，因而可能的副作用將更小。
本發明的B肝疫苗，不僅能產生表面抗原多肽，而且產生前表面抗原多肽，因此這種B肝疫苗既能誘導產生抗體的免疫反應，又誘導保護性的細胞反應。從而產生更高的保護效率。新疫苗的這一優點也使得這種疫苗能用於慢性持續性和慢性活動性肝炎病人，以幫助從這些病人體內清除病毒。
此外，本發明還提供了一種製備上述B肝疫苗的工藝方法，該方法的具體構建及製備步驟如下1、疫苗構建從B肝病人血清中提取B型肝炎病毒(HBV)DNA，使用DNA多聚酶鏈反應，將完整的前表面抗原(pre S)及表面抗原(HBSAg)基因片段，用Klenow酶反應後，用T4DNA連接酶以平頭連接入質粒載體的Eco RV位點構成疫苗質粒(PWR)DNA，其中，所用的質粒載體所含的各種組分和所用前表面抗原和表面抗原基因序列以及疫苗質粒的特性如上所述，2、疫苗製備用構建成的質粒DNA轉化大腸桿菌細胞，在含有氨苄青黴素(50-300ug/ml)的大腸桿菌培養液中，繁殖含有質粒DNA的大腸桿菌，經30-40℃ 8-24小時培養之後，以離心方法(每分鐘四千轉，4℃,15分鐘)收集大腸桿菌細胞，去除上清液，將大腸桿菌以鹼性裂鮮(1％SPS,0.2MNaOH,15分鐘後)之後，去除細菌DNA及蛋白質，經離子交換，酚抽提以及乙醇沉澱後，得到高純度質粒DNA。
上述製備本發明B型肝炎治療性疫苗的方法工藝簡單，生產成本較低。由於該方法不是傳統的Cscl-溴乙啶方法，因而所提取的質粒DNA不含有任何可能致癌或致突變的化學物質。用這種方法所提取的質粒DNA用於動物或人體注射是安全可靠的。此外，本發明方法所用的疫苗原料不是有帶感染性B肝病毒顆粒的血漿，因而不會傳播而造成危害。所得到的質粒DNA可用BamHⅠ限制性內切酶反應後，以凝膠電泳方法鑑定。用這種方法製備工藝簡單，重複性好。申請人已製備了120批樣品，均獲得良好結果。
以下的實施例將進一步說明本發明的B型肝炎治療性疫苗及製備該疫苗的方法。實施例11000ml培養液在37℃培養14小時後，在Beckman J6離心機上每分鐘4000轉，15分鐘離心後，去除上清液，收集菌體，溶於10mMTns與2mMEDTA溶液後，用1％SDS+0.2MNaOH裂解菌體。用3HKDACpH4.0中和後，通過離子交換柱。用緩衝液洗脫DNA，酚抽提，加NaCl至0.1M，再加二倍體積的乙醇，用Beckman J6離心機，每分鐘4000轉，離心15分鐘後，得到白色沉澱，溶於去離子無菌水中。經分光光度計測定OD260/OD280=1.80共得1200微克的高純度質粒DNA。
實施例21200ml培養液，經36℃培養16小時後，離心及其它製備過程同實施例1。
得到20000微克高純度質粒DNA，分光光度計測定OD260/OD280=1.82。
總結十二次製備實驗結果如下表如下
實施例3疫苗使用及動物實驗將純化的質粒DNA溶於生理鹽水中。選用小白鼠做肌肉注射或尾根部皮肉注射。多次實驗免疫效果穩定而明顯。
(1)注射劑量20-150mg/只(2)注射方法尾根皮肉注射或肌肉內注射；一次注射或多次注射(即每月一次，連續2-4月注射)。
(3)效果觀察；注射前及注射後取血清測定B型肝炎表面抗原(HBsAg)或/及B型肝炎表面抗體(HBs抗體)。
HBsAg用Abott公司的AUSZYME試劑盒，參照試劑盒說明書進行。
HBSAg用Abott公司的AUSAB試劑盒，用抗鼠第二抗體檢測，以標準血清為對照。
現將三次實驗(單次肌肉注射)的結果總結如下
將小鼠分為五組(A=SAg,B=preS1,C=PMS,D=PMsa,E=載體)，每組30隻。經乙醚輕微麻醉後在脛骨前肌肉內注射溶於生理鹽水的相應疫苗質粒DNA，左右兩側各注射50微升(共含100微克DNA)。肌肉注射後兩周、四周、六周、八周、十二周採血，用以上描述的方法測血清HBsAg含量，三次實驗結果表明，肌肉注射蝗兩周，小鼠血清內即可檢測到HBsg含量，三次實驗結果表明，肌肉注射後兩周，小鼠血清內即可檢測到HBsAg高達0.6mg/ml。HBsAg表達可持續至第八周肌肉注射後四周、八周、十二周採血，用上述方法測血清HBs抗體含量，三次實驗結果表明，單次疫苗注射後四周，百分之九十三的小鼠血清內即可檢測到HBs抗體，抗體水平到第八周可達100mlU/mL，而國際公認的保護性抗體水平為10mlU/mL。這些結果說明，此疫苗在小鼠內可產生良好的抗體反應，抗體效價達到保護水平。
權利要求
1.一種乙型肝類治療性疫苗，所述疫苗以質粒脫氧核糖核酸(DNA)為基礎，用含有B型肝炎病毒表面抗原多肽(preS多肽及完整的HBSAg)基因的轉錄及蛋白合成的DNA連接入質粒[PreS2+HBsAg]載體構成，其特徵在於所述質粒疫苗包括有[preS1+preS2+HBSAg]、[preS2+HBSAg]以及[HBSAg]三種不同組分，其中所用的B型肝炎表面抗原多肽基因的序列如下1．肽序列MGGWSSKPRKGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWDFNPVKDDWPAANQVGVGAFGPRLTPPHGGILGWSPQAQGILTTVSTIPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQWNSTAFHQTLQDPRVRGLYLPAGGSSSGTVNPAPNIASHISSISARTGDPVTNMENITSGFLGPLLVLQAGFFLLTRILTIPQSLDSWWTSLNFLGGSPVCIGQNSQSPTSNHSFTSCPPICPGYRWMCLRRFIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLIPGSTTTSTGPCKTCTTPAQGNSMFPSCCCTKPTDGNCTCIPIPSSWAFAKYLWEWASVRFSWLSLLVPFVQWFVGLSPTVWLSAIWMMWYWGPSLYSIVSPFIPLLPIFFCLWVYI2．核苷酸序列ATGGGAGGTTGGTCATCCAAACCTCGCAAAGGCATGGGGACGAACCTTTCTGTTCCCAACCCTCTGGGATTCTTTCCCGATCATCAGTTGGACCCTGCATTCGGAGCCAACTCAAACAATCCAGATTGGGACTTCAACCCCATCAAGAACCACTGGCCAGCAGCCAACCAGGTAGGAGTGGGAGCATTCGGGCCAAGGCTCACCCCTCCACACGGCGGTATTTTGGGGTGGAGCCCTCAGGCTCAGGGCATATTGACCACAGTGTCAACAATTCCTCCTCCTGCCTCCACCAATCGGCAGTCAGGAAGGCAGCCTACTCCCATCTCTCCACCTCTAAGAGACAGTCATCCTCAGGCCATGCAGTGGAATTCCACTGCCTTCCACCAAGCTCTGCAGGATCCCAGAGTCAGGGGTCTGTATCTTCCTGCTGGTGGCTCCAGTTCAGGAACAGTAAACCCTGCTCCGAATATTGCCTCTCACATCTCGTCAATCTCCGCGAGGACTGGGGACCCTGTGGCGAACATGGAGAACATCACATCAGGATTCCTAGGACCCCTGCTCGTGTTACAGGCGGGGTTTTTCTTGTTGACAAGAATCCTCACAATACCGCAGAGTCTAGACTCGTGGTGGACTTCTCTCAATTTTCTAGGGGGATCACCCGTGTGTCTTGGCCAAAATTCGCAGTCCCCAACCTCCAATCACTCACCAACCTCCTGTCCTCCAATTTGTCCTGGTTATCGTTGGATGTGTCTGCGGCGTTTTATCATATTCCTCTTCATCCTGCTGCTATGCCTCATCTTCTTATTGGTTCTTCTGGATTATCAAGGTATGTTGCCCGTTTGTCCTCTAATTCCAGGATCAACAACAACCAGTACGGGACCATGCAAAACCTGCACGACTCCTGCTCAAGGCAACTCTATGTTTCCCTCATGTTGCTGTACAAAACCTACGGATGGAAATTGCACCTGTATTCCCATCCCATCGTCCTGGGCTTTCGCAAAATACCTATGGGAGTGGGCCTCAGTCCGTTTCTCTTGGCTCAGTTTACTAGTGCCATTTGTTCAGTGGTTCGTAGGGCTTTCCCCCACTGTTTGGCTTTCAGCAATATGGATGATGTGGTATTGGGGGCCAAGTCTGTACAGCATCGTGAGTCCCTTTATACCGCTGTTACCAATTTTCTTATGTCTCTGGGTATACATTTAA所述疫苗質粒的特徵為全長六千六百鹼基對的環形質粒，經BamHI限制性內切酶酶切後產生分別為六千二百和四百鹼基對的兩個片段。
2.權利要求1所述的疫苗，其特徵在於所述的質粒載體含有來自人類巨細胞病毒的高效哺乳動物細胞轉錄啟動子及增強子，並帶有核糖核酸穩定序列、哺乳動物細胞DNA複製起動順序、大腸桿菌DNA複製起動順序及抗生素選擇基因。
3.權利要求2所述的疫苗，其特徵在於所述的抗生素選擇基因為抗氨苄青黴素基因。
4.一種製備權利要求1所述的B型肝炎治療性疫苗的方法，其特徵在於所述方法的具體構建及製備步驟如下(1)疫苗構建從B肝病人血清中提取B型肝炎病毒(HBV)DNA，使用DNA多聚酶鏈反應，將完整的前表面抗原(preS)及表面抗原(HBSAg)基因片段，用Klenow酶反應後，用T4DNA連接酶以平頭連接入質粒位點的EcoRV位點構成疫苗質粒(pWR)DNA，(2)疫苗製備用構建成的質粒DNA轉化大腸桿菌細胞，在含有氨苄青黴素(50-300ug/ml)的大腸桿菌培養液中，繁殖含有質粒DNA的大腸桿菌，經30-40℃ 8-24小時培養後，以離心方法收集大腸桿菌細胞，去除上清液，將大腸桿菌以鹼性裂解後，去除細菌DNA及蛋白質，經離子交換、酚抽提以及乙醇沉澱之後，得到高純度質粒DNA。
5.權利要求4所述的方法，其特徵在於所述離心方法的條件是每分鐘四千轉，於4℃，經15分鐘。
6.權利要求4所述的方法，其特徵在於所述鹼性裂解的具體條件是用1％SDS,0.2MNaOH，經15分鐘。
全文摘要
本發明提供了一種新型B型肝炎治療性疫苗以及製備該疫苗的方法。所述疫苗是以質粒脫氧核糖核酸(DNA)為基礎,用含有B型肝炎病毒表面抗原多肽(preS多肽及完整的HBSAg)基因轉錄及蛋白合成的DNA連接入質粒載體構成。該疫苗既能用於B肝預防,又可用於慢性B肝病人的治療。是一種安全、經濟、有效的活療性疫苗。所提供的製備方法工藝簡單,成本較低,生產出的疫苗質量高,適於大量生產。
文檔編號A61K39/29GK1209340SQ9811717
公開日1999年3月3日 申請日期1998年8月14日 優先權日1998年8月14日
發明者饒緯華 申請人:饒緯華