一種分離羊肚菌菌種的方法

2023-12-05 20:01:21 2

專利名稱：一種分離羊肚菌菌種的方法
技術領域：
本發明涉及ー種利用菌柄內側環割法分離羊肚菌菌種的方法，屬於生物技術領域。
背景技術：
羊肚菌隸屬真菌界(Kingdom Fungi)子囊菌門(Ascomycota)盤菌綱(Discomycetes)盤菌目(Peziales)羊肚菌科(Morchellaceae)羊肚菌屬(Morchella),—種珍貴的野生食藥兼用大型真菌，營養豐富，風味奇鮮，是食用菌中的佳品，被認為是僅次於塊菌的美味食用菌，深受人們的喜愛。
羊肚菌最早記載於《本草綱目》，中醫認為「性平、味甘，具有益腸胃、消化助食、化痰理氣、補腎、壯陽、補腦、提神之功能，對脾胃虛弱、消化不良、痰多氣短、頭暈失眠有良好的治療作用。羊肚菌有機鍺含量較高，具有強健身體、預防感冒、增強人體免疫力的功效。羊肚菌含有大量人體必需的礦質元素，每百克幹樣鉀、磷含量是冬蟲夏草的7倍和4倍，鋅的含量是香菇的4. 3倍、猴頭的4倍；鐵的含量是香菇的31倍、猴頭的12倍等」。除富含蛋白質、多糖、核酸、各種微量元素和維生素等活性物質外，還含有豐富的脂肪酸，故其在食品、保健品、醫藥、化妝品、化工、紡織等領域有廣闊的應用前景。現代醫學研究又表明，羊肚菌能增強人體免疫力、抗輻射、抗腫瘤、抗疲勞，並且能夠減輕癌症患者放療、化療引起的毒副作用。由於羊肚菌藥食同源，需求量大，價位高，對其進行研究很有必要。野生羊肚菌資源分布較廣，我國陝西、甘肅、青海、四川、雲南、河北、內蒙、吉林、黑龍江等20多個省份均有分布，但近年來羊肚菌自然採收量越來越少。十多年前，羊肚菌國外有栽培成功報導，已申請技術專利，國內也有栽培成功的報導，但基本處於試驗性階段。羊肚菌目前報導的分離菌種的方法主要有以下幾種黃保敬對採用羊肚菌茵柄基部土壌分離羊肚菌菌種的方法進行了初探，對土壤中菌絲量大，溼度保持較好的成功率較大。董雪採用單孢分離得到了 60株黑脈羊肚菌菌株，趙丹丹等在尖頂羊肚菌孢子懸液分離到了菌種。還有ー種為陳吉嶽等將子實體掰開，用刀尖輕輕挑取內表面約大小的菌塊接入平板培養基，經過多次純化獲得分離菌株。王仲勇用無菌刀片把子實體切成緑豆大小的組織塊在O. 1%的升汞溶液消毒後分離到了菌種。任桂梅等則用陝北野生羊肚菌子實體進行了的組織和孢子母種分離研究，證明組織分離成功率高於孢子分離。而他採用的組織分離方法則是用無菌眼科剪分別剪取菌盂和菌柄內帶無菌組織(如緑豆)，但這樣的前提是柄基部沒有孔口和裂縫。孢子分離法由於變異因素的影響，單核菌絲即使雙核化，仍然對後續栽培結實不可預測。大多數科技工作者仍然以組織分離的方法獲得菌種。但是，羊肚菌與其他大型真菌的子實體在結構上有ー些特殊地方，子實體中空，菌肉比較薄，分離時汙染率較高。另外，羊肚菌對消毒液具有較強的吸附作用，一旦吸附了消毒剤，萌發就會困難，甚至對羊肚菌的菌絲有致死作用。

發明內容
本發明的目的在於提供ー種不用消毒剤，既容易萌發，同時也能降低汙染，並能較順利的分離到羊肚菌菌種的分離羊肚菌菌種方法。為了實現上述目的，本發明的技術方案採用了 ー種分離羊肚菌菌種的方法，包括以下步驟將膠帶封閉的羊肚菌用75%消毒酒精均勻擦拭後，用燒灼的刀具從菌柄頂端在火焰上方切割掉子實體頭部，露出的新鮮菌柄橫切面，在火焰上輕快過2-4下，用刀具在新鮮菌柄內側環割菌柄新鮮菌肉組織並送入抗生素平板培養基上，於20-30°C的溫度下培養，待萌發出菌絲後，及時轉接。所述的刀具為手術刀片。羊肚菌子實體在切割前要基部菌柄完整，用透明膠把羊肚菌整個纏繞密封，中間不留空隙。 所述的抗生素平板培養基為馬鈴薯400g，草炭100g，葡萄糖20g，磷酸ニ氫鉀lg，硫酸鎂O. 5g，酵母膏50g，瓊脂20g、水IOOOmL,鏈黴素30U/mL，青黴素30U/mL，pH6. 5。所述抗生素平板培養基的製作方法為土豆削皮切薄皮加3000mL水煮30min,過濾取2000mL，加入草炭，小火浸煮20min，過濾取濾液IOOOmL,在此濾液中加入葡萄糖、酵母膏、瓊脂、磷酸ニ氫鉀、硫酸鎂，小火煮至瓊脂溶解，定容至IOOOmL,分裝於三角瓶，在高溫121°C _126°C、高壓0. 1-0. 14MPa滅菌30min。待冷卻至50°C左右加入青黴素鈉、硫酸鏈黴素複合抗生素母液，使抗生素終濃度在30U/mL左右，將配好的培養基倒入培養皿中或直接冷卻成固體培養基。本發明的分離方法，先是對羊肚菌進行封閉式消毒，防止消毒酒精浸入菌組織，有利分離成功。另外，割掉子實體頭部後，露出的菌柄內側為無菌組織，環割取內側菌肉組織防雜效果較好。採用抗生素培養基也有利於防止雜菌汙染，培養基的組分營養非常全面，特別是加入草炭和酵母膏，為羊肚菌菌絲生長提供了保證。本發明的整個操作過程不用消毒液，全用火焰消毒，萌發率較高，既保證了容易萌發，同時也能降低汙染，井能較順利的分離到羊肚菌菌種。


圖I為本發明的羊肚菌菌柄內側環割取組織片示意圖。
具體實施例方式本實施例的分離羊肚菌菌種的方法，包括以下步驟將膠帶封閉的羊肚菌用75%消毒酒精均勻擦拭後，用燒灼的手木刀片從菌柄頂端在火焰上方切割掉子實體頭部，見圖I中2，露出的新鮮菌柄橫切面，在火焰上輕快過兩下。用手木刀在新鮮菌柄內側環割菌柄新鮮菌肉組織送入抗生素平板培養基上，見圖I中I所示，25°C培養，待萌發出菌絲後，及時轉接。抗生素平板培養基為馬鈴薯400g，草炭100g，葡萄糖20g，磷酸ニ氫鉀lg，硫酸鎂0. 5g，酵母膏50g，瓊脂20g、水IOOOmL,鏈黴素30U/mL，青黴素30U/mL，pH6. 5，其製作方法為土豆削皮切薄皮加3000mL水煮30min,過濾取2000mL,加入草炭,小火浸煮20min,過濾取濾液IOOOmL,在此濾液中加入葡萄糖、酵母膏、瓊脂、磷酸ニ氫鉀、硫酸鎂，小火煮至瓊脂溶解，定容至IOOOmL,分裝於三角瓶，在高溫121°C _126°C、高壓0. 1-0. 14MPa滅菌30min。待冷卻至50°C左右加入青黴素鈉、硫酸鏈黴素複合抗生素母液，使抗生素終濃度在30U/mL左右，將配好的培養基倒入培養皿中或直接冷卻成固體培養基。 其中，羊肚菌子實體在切割前要基部菌柄完整，用透明膠把羊肚菌整個纏繞密封，中間不留空隙。
權利要求
1.一種分離羊肚菌菌種的方法，其特徵在於包括以下步驟將膠帶封閉的羊肚菌用75%消毒酒精均勻擦拭後，用燒灼的刀具從菌柄頂端在火焰上方切割掉子實體頭部，露出的新鮮菌柄橫切面，在火焰上輕快過2-4下，用刀具在新鮮菌柄內側環割菌柄新鮮菌肉組織並送入抗生素平板培養基上，於20-30°C的溫度下培養，待萌發出菌絲後，及時轉接。
2.根據權利要求I所述的分離羊肚菌菌種的方法，其特徵在於所述的刀具為手術刀片。
3.根據權利要求I所述的分離羊肚菌菌種的方法，其特徵在於羊肚菌子實體在切割前要基部菌柄完整，用透明膠把羊肚菌整個纏繞密封，中間不留空隙。
4.根據權利要求I所述的分離羊肚菌菌種的方法，其特徵在於所述的抗生素平板培養基為馬鈴薯400g，草炭100g，葡萄糖20g，磷酸ニ氫鉀lg，硫酸鎂O. 5g，酵母膏50g，瓊脂20g、水 IOOOmL,鏈黴素 30U/mL，青黴素 30U/mL，pH 5-7。
5.根據權利要求4所述的分離羊肚菌菌種的方法，其特徵在於所述抗生素平板培養基的製作方法為土豆削皮切薄皮加3000mL水煮30min,過濾取2000mL,加入草炭,小火浸煮20min，過濾取濾液IOOOmL,在此濾液中加入葡萄糖、酵母膏、瓊脂、磷酸ニ氫鉀、硫酸鎂，小火煮至瓊脂溶解，定容至IOOOmL,分裝於三角瓶，在高溫121°C_126°C、高壓O. 1-0. 14MPa滅菌30min。待冷卻至50°C左右加入青黴素鈉、硫酸鏈黴素複合抗生素母液，使抗生素終濃度在30U/mL左右，將配好的培養基倒入培養皿中或直接冷卻成固體培養基。
全文摘要
本發明涉及一種分離羊肚菌菌種的方法，包括以下步驟將膠帶封閉的羊肚菌用75％消毒酒精均勻擦拭後，用燒灼的刀具從菌柄頂端在火焰上方切割掉子實體頭部，露出的新鮮菌柄橫切面，在火焰上輕快過2-4下，用刀具在新鮮菌柄內側環割菌柄新鮮菌肉組織並送入抗生素平板培養基上，於20-30℃的溫度下培養，待萌發出菌絲後及時轉接。本發明的整個操作過程不用消毒液，全用火焰消毒，萌發率較高，既保證了容易萌發，同時也能降低汙染，並能較順利的分離到羊肚菌菌種。
文檔編號A01G1/04GK102687639SQ201110427089
公開日2012年9月26日 申請日期2011年12月19日 優先權日2011年12月19日
發明者侯軍, 劉保國, 吳祖峰, 杜愛玲, 林曉民 申請人:河南科技大學