桑葛製劑中總黃酮類和總生物鹼類成分的指紋圖譜構建方法及質量檢測方法

2023-12-01 09:35:16 1

專利名稱：桑葛製劑中總黃酮類和總生物鹼類成分的指紋圖譜構建方法及質量檢測方法
技術領域：
本發明涉及中藥材的質量檢測領域，具體而言，涉及一種對桑葛製劑中總黃酮類成分和總生物鹼類成分的指紋圖譜構建方法及對桑葛製劑的質量檢測方法。
背景技術：
桑白皮為桑科植物桑Morus alba L.的乾燥根皮，性甘、寒，歸肺經，具有瀉肺平喘、利水消腫的功能，主治肺熱喘咳、水腫脹滿尿少、面目肌膚浮腫。葛根為豆科多年生藤本植物野葛Pueraria lobata(ffilld) Ohwi的乾燥根,是中醫臨床常用藥物,具有擴張冠狀動 脈、減慢心率、降低心肌耗氧量、改善心、腦血液循環等作用。在現有技術中，人們將桑白皮和葛根兩味藥材混合製成了桑葛製劑，並將其應用到降脂、腦卒中等中藥組合物的製備中。由於桑葛製劑在中藥組合物中的重要作用，所以其質量檢測也一直受到人們的關注。現有的含量測定方法中僅以測定單一活性成分葛根素和I-脫氧野尻黴素(DNJ)為指標，這一方法雖然能夠快速地檢測出上述兩種主要成分，但由於桑葛製劑中還存在著大量其他有效成分，而使得該藥物在臨床應用中的有效性和安全性無法得到較好的監控。

發明內容
為了解決上述現有桑葛製劑檢測方法不能全面反映總黃酮類和總生物鹼類活性成分的含量，無法控制桑葛製劑質量的問題，本發明提供了一種桑葛製劑總黃酮類和總生物鹼類活性成分的指紋圖譜構建方法。本發明提供的桑葛製劑總黃酮類成分和總生物鹼類活性成分指紋圖譜的構建方法，包括以下步驟a)將桑葛製劑製備成可用於液相色譜分離的桑葛製劑溶液；b)總黃酮類指紋圖譜的構建將桑葛製劑溶液注入液相色譜儀，紫外檢測器的波長為250nm ;柱溫為20-40°C ；以乙腈為流動相A，以O. 3%醋酸為流動相B進行梯度洗脫，得到總黃酮類指紋圖譜；以及c)總生物鹼類成分指紋圖譜的構建稱取預定量的桑葛製劑溶液，分別將硼酸鹽緩衝液和芴甲氧醯氯乙腈溶液加入該桑葛製劑溶液，水浴下進行反應；再依次將甘氨酸溶液、醋酸水溶液加入到上述桑葛製劑溶液，過濾後取續濾液注入高效液相色譜儀，螢光檢測器的激發波長為254nm，發射波長為309nm，柱溫在20_40°C的範圍內；其中，高效液相色譜儀中的色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以乙腈為流動相C，O. I %醋酸為流動相D進行梯度洗脫，，得到總生物鹼類成分指紋圖譜。進一步地，步驟b)的梯度洗脫的程序如下O 20分鐘流動相A體積比保持為10.5%，流動相B體積比保持為89. 5 % ;
20 60分鐘流動相A體積比由10. 5 %線性上升到40 %，流動相B體積比由89. 5%下降到60% ；60 62分鐘流動相A體積比由40 %線性下降到10.5%，流動相B體積比由60 %上升至IJ 89. 5% ；62 70分鐘流動相A體積比保持為10.5%、流動相B體積比保持為89. 5 %，得到總黃酮類成分指紋圖譜；進一步地，步驟c)的梯度洗脫程序如下O 50分鐘，流動相C體積比由30 %上升到35 %，流動相D體積比由70 %下降到65% ；50 60分鐘，流動相C體積比保持為35 %，流動相D體積比保持為65 % ；
60 61分鐘，流動相C體積比由35 %上升到100 %，流動相D體積比由65 %下降到0% ；61 70分鐘，流動相C體積比保持為100 %，流動相D體積比保持為O % ； 70 71分鐘，流動相C體積比由100 %下降到30 %，流動相D體積比由O %上升到 70% ；進一步地，步驟b)包括通過將葛根素加入水中製備葛根素參照物溶液的步驟，上述葛根素參照物溶液與桑葛製劑溶液同時注入液相色譜儀。進一步地，步驟c)包括將I-脫氧野尻黴素鹽酸加入水中製得I-脫氧野尻黴素鹽酸參照物溶液的步驟；製得的I-脫氧野尻黴素鹽酸鹽參照物溶液與桑葛製劑溶液同時注入高效液相色譜儀。進一步地，總黃酮類成分的對照指紋圖譜中具有17個共有指紋峰，相對保留時間分別為I 號峰為 O. 487±0. 009，2 號峰為 O. 536±0. 004，3 號峰即 S 峰為 I. 000±0· 000，4 號峰為 I. 099±0. 030,5 號峰為 I. 217±0. 002,6 號峰為 I. 308±0. 001,7 號峰為I. 890±0. 002,8 號峰為 2. 268±0. 008,9 號峰為 2. 314±0· 006，10 號峰為 2. 445±0. 010，
11號峰為 2. 507±0. 028，12 號峰為 2. 549±0. 010，13 號峰為 2. 722±0. 012，14 號峰為 2. 771±0. 012，15 號峰為 2. 930±0. 007，16 號峰為 3. 423±0. 019，17 號峰為
3.529±0. 017。進一步地，當桑葛製劑中桑白皮與葛根的質量比為2 I時，總生物鹼類活性成分的對照指紋圖譜中具有13個共有指紋峰，相對保留時間分別為I 號峰為 O. 514±0· 03,2 號峰即 S 峰為 I. 000±0· 000,3 號峰為 I. 401±0. 001，4 號峰為 I. 427±0. 003，5 號峰為 I. 478±0. 009，6 號峰為 I. 522±0. 008，7 號峰為
1.917±0· 012,8 號峰為 2. 030±0. 007,9 號峰為 2. 212±0· 022，10 號峰為 2. 530±0. 044，
11號峰為 2. 617±0· 008，12 號峰為 3. 630±0. 017，13 號峰為 3. 740±0. 018。進一步地，當桑葛製劑中桑白皮與葛根的質量比為4 1、1 : 2和I : 4時，總生物鹼類活性成分的對照指紋圖譜中具有9個共有指紋峰，相對保留時間分別為I 號峰為 O. 512±0· 018，2 號峰即 S 峰為 I. 000±0· 000，3 號峰為 I. 450±0. 003，4 號峰為 I. 880±0. 002,5 號峰為 2. 154±0. 005,6 號峰為 2. 288±0. 006,7 號峰為
2.469±0. 006，8 號峰為 2. 559±0. 013,9 號峰為 2. 621±0· 010。
本發明的另一目的在於提供一種桑葛製劑的質量檢測方法，包括以下步驟將待測桑葛製劑製成液相色譜用溶液；按照上述構建方法中的步驟b)和c)所描述的方法獲得待測桑葛製劑的總黃酮類成分和總生物鹼類成分的指紋圖譜；以及將待測桑葛製劑的總黃酮類成分指紋圖譜與上述總黃酮類成分的對照指紋圖譜進行比較，以及將待測桑葛製劑的總生物鹼類成分指紋圖譜與上述總生物鹼類成分的對照指紋圖譜進行比較。採用本發明提供的指紋圖譜構建方法，可以有效、準確地構建出桑葛製劑的總黃酮類成分指紋圖譜和總生物鹼類成分指紋圖譜。該指紋圖譜構建方法具有穩定性好、重現性好的優點。另外，通過構建得到的指紋圖譜及對照指紋圖譜對現有桑葛製劑進行質量控
制，有利於對市場現有桑葛製劑的監控，提高了藥品安全度，維護了廣大消費者的權益。


構成本申請的一部分的附圖用來提供對本發明的進一步理解，本發明的示意性實施例及其說明用於解釋本發明，並不構成對本發明的不當限定。在附圖中圖I當桑葛製劑中桑白皮和葛根的質量比為2 I時，總黃酮類成分的對照指紋圖譜；圖2當桑葛製劑中桑白皮和葛根的質量比為2 : I時，總生物鹼類成分的對照指紋圖譜；圖3當桑葛製劑中桑白皮和葛根的質量比為4 : I時，總黃酮類成分的對照指紋圖譜；圖4當桑葛製劑中桑白皮和葛根的質量比為4 : I時，總生物鹼類成分的對照指紋圖譜；圖5當桑葛製劑中桑白皮和葛根的質量比為I : 2時，總黃酮類成分的對照指紋圖譜；圖6當桑葛製劑中桑白皮和葛根的質量比為I : 2時，總生物鹼類成分的對照指紋圖譜；圖7當桑葛製劑中桑白皮和葛根的質量比為I : 4時，總黃酮類成分的對照指紋圖譜；圖8當桑葛製劑中桑白皮和葛根的質量比為I : 4時，總生物鹼類成分的對照指紋圖譜；圖9桑葛製劑中總黃酮類成分空白指紋圖譜，即不加入任何桑葛製劑或參照物，只加入各種試劑而得到的高效液相色譜；以及圖10總生物鹼類活性成分空白指紋圖譜，即不加入任何桑葛製劑或參照物，只加入各種試劑而得到的高效液相色譜。圖11待測桑葛製劑(桑白皮提取物S20100721和葛根提取物G20100813)按照質量比2I混合的總黃酮類成分指紋圖譜；圖12待測桑葛製劑(桑白皮提取物S20100721和葛根提取物G20100813)按照質量比4 : I混合的總黃酮類成分指紋圖譜；
圖13待測桑葛製劑(桑白皮提取物S20100721和葛根提取物G20100813)按照質量比I:2混合後的總黃酮類成分指紋圖譜；圖14待測桑葛製劑(桑白皮提取物S20100721和葛根提取物G20100813)按照質量比I:4混合後的總黃酮類成分對照指紋圖譜；圖15待測桑葛製劑(桑白皮提取物S20100721和葛根提取物G20100813)按照質量比2I混合的總生物鹼類成分指紋圖譜；圖16待測桑葛製劑(桑白皮提取物S20100721和葛根提取物G20100813)按照質量比4: I混合後的總生物鹼類成分指紋圖譜；圖17待測桑葛製劑(桑白皮提取物S20100721和葛根提取物G20100813)按照質量比I:2混合後的總生物鹼類成分指紋圖譜；圖18待測桑葛製劑(桑白皮提取物S20100721和葛根提取物G20100813)按照質 量比I:4混合後的總生物鹼類成分指紋圖譜。
具體實施例方式需要說明的是，在不衝突的情況下，本申請中的實施例及實施例中的特徵可以相互組合。下面將參考附圖並結合實施例來詳細說明本發明。本發明所涉及的桑葛製劑可以通過如下方法製備(I)桑白皮藥材經過切制或粉碎，用水提取，獲得桑白皮藥材水提取液，提取液濃縮後離心，上清液過強酸型陽離子交換樹脂，收集O. I IN的氨水洗脫液，洗脫液濃縮後得到桑白皮提取物，或經過噴霧乾燥、減壓或常壓乾燥得桑白皮提取物；(2)葛根藥材經過切制或粉碎，用水提取，獲得葛根藥材的水提取液，提取液濃縮後離心，上清液繼續濃縮成稠膏得到葛根提取物，或經過噴霧乾燥、減壓或常壓乾燥得葛根提取物；(3)將桑白皮提取物和葛根提取物混合均勻，得桑葛提取物；將桑葛提取物加入常規賦形劑，按照常規工藝，製成臨床可接受的劑型，包括但不限於濃縮丸劑、膠囊劑、滴丸劑、顆粒劑、片劑、軟膠囊劑、緩釋劑、口服液體製劑或凍乾粉針劑，製得桑葛製劑。當然，上述製備方法並不是唯一製備桑葛製劑的方法。本領域技術人員完全可以根據實踐操作，採用其他桑葛製劑的製備方法。本發明的一個目的在於提供一種桑葛製劑總黃酮類成分和總生物鹼類活性成分指紋圖譜的構建方法，包括以下步驟a)將桑葛製劑製備成可用於液相色譜分離的桑葛製劑溶液；可將桑葛製劑溶於水中形成液相色譜分離桑葛製劑溶液。桑葛製劑在水中具有一定的溶解度，可通過超聲振蕩的方法加快桑葛製劑在水中的溶解。在本發明的一個具體實施例中，發明人採用了功率250W，頻率33KHZ進行超聲輔助處理，提高了桑葛製劑的溶解度。也可採用其他溶劑來溶解桑葛製劑，以使得桑葛製劑可用於液相分離，本領域技術人員可根據具體情況而採用不同的溶劑，在這裡就不再贅述。b)總黃酮類指紋圖譜的構建桑葛製劑中含有多種黃酮各類活性成分，現有技術中僅以單一葛根素作為檢測指標，而本發明採用液相檢測方法，利用梯度洗脫工藝將桑葛製劑中總黃酮類成分完全分離出來，全面地考察桑葛製劑中總黃酮的成分及含量組成。具體的構建方法為將桑葛製劑溶液注入液相色譜儀，紫外檢測器的波長為250nm;柱溫為20-400C ;以乙腈為流動相A，以O. 3%醋酸為流動相B進行梯度洗脫，即可得到總黃酮類指紋圖譜；c)總生物鹼類成分指紋圖譜的構建桑葛製劑中含有多種總生物鹼類活性成分，現有技術中僅以DNJ作為檢測指標，而本發明在螢光檢測法的基礎上，利用梯度洗脫工藝將桑葛製劑中總生物鹼類成分完全分離出來，全面考察桑葛製劑總的生物鹼類活性成分及含量組成。該指紋圖譜的構建方法包括稱取預定量的桑葛製劑溶液，分別將硼酸鹽緩衝液和芴甲氧醯氯乙腈溶液加入該桑葛製劑溶液，水浴下反應；再依次將甘氨酸溶液、醋酸水溶液加入到上述桑葛製劑溶液，過濾後取續濾液注入高效液相色譜儀，螢光檢測器的激發波長為254nm，發射波長為309nm，柱溫在20_40°C的範圍內；其中，高效液相色譜儀中的色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以乙腈為流動相C，O. I %醋酸為流動相D進行梯度洗脫，得到總生物鹼類成分指紋圖譜。這裡所稱「預定量」，是指按照液相色譜的性能以及實際需求設定注射到液相色譜柱中的樣品的濃度，而計算取出的桑葛製劑溶液的體積。 本發明所採用的柱溫、檢測器的波長均為常規實驗參數，本領域技術人員可根據具體操作在此範圍內選擇合適的參數。通過以上步驟，可測得桑葛製劑中總黃酮及總生物鹼類活性成分的指紋圖譜，不僅僅單一地以一種有效成分作為測試目標，而是全面地反映了製劑中總黃酮及總生物鹼活性成分的含量，有利於控制桑葛製劑的質量。在本發明提供的一個具體實施方式
中，步驟b)總黃酮類指紋圖譜的構建方法具體包括將桑葛製劑溶液注入液相色譜儀(十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑)，紫外檢測器的波長為250nm ;柱溫為20_40°C;流速為O. 8-1. Oml/min ;以乙腈為流動相A，以O. 3%醋酸為流動相B進行梯度洗脫；梯度洗脫的程序如下O 20分鐘流動相A體積比保持為10.5%，流動相B體積比保持為89. 5 % ;20 60分鐘流動相A體積比由10. 5 %線性上升到40 %，流動相B體積比由89. 5%下降到60% ； 60 62分鐘流動相A體積比由40 %線性下降到10.5%，流動相B體積比由60 %上升至IJ 89. 5% ；62 70分鐘流動相A體積比保持為10. 5 %、流動相B體積比保持為89. 5 %，得到總黃酮類成分指紋圖譜；經過上述梯度洗脫方法，可以有效地將桑葛製劑中的總黃酮類成分梯度洗脫出來，所得圖譜的分離度較高。優選地，在上述步驟中還可包括將葛根素加入水中製得葛根素參照物溶液的步驟；將葛根素參照物溶液與桑葛製劑溶液同時注入液相色譜儀。參照物的加入可用於考察指紋圖譜的穩定程度和重現性，有助於色譜的辨認；在本發明提供的一個具體實施方式
中，步驟c)總生物鹼類成分指紋圖譜的構建方法中的梯度洗脫程序如下O 50分鐘，流動相C體積比由30 %上升到35 %，流動相D體積比由70 %下降到65% ；
50 60分鐘，流動相C體積比保持為35 %，流動相D體積比保持為65 % ；60 61分鐘，流動相C體積比由35 %上升到100 %，流動相D體積比由65 %下降到0% ；61 70分鐘，流動相C體積比保持為100 %，流動相D體積比保持為O % ；70 71分鐘，流動相C體積比由100 %下降到30 %，流動相D體積比由O %上升到70% ;得到總生物鹼類成分指紋圖譜。優選地，步驟c)中還包括將I-脫氧野尻黴素鹽酸加入水中製得I-脫氧野尻黴素鹽酸鹽參照物溶液的步驟，I-脫氧野尻黴素鹽酸鹽參照物溶液與桑葛製劑溶液可同時注入高效液相色譜儀。在本發明提供的具體實施例中，通過對10批桑葛製劑的指紋圖譜測試和比較分析，得到的總黃酮類成分對照指紋圖譜(對照指紋圖譜)中具有17個共有指紋峰的，相對保留時間分別為I 號峰為 O. 487±0. 009，2 號峰為 O. 536±0. 004，3 號峰即 S 峰為 I. 000±0· 000，4 號峰為 I. 099±0. 030,5 號峰為 I. 217±0. 002,6 號峰為 I. 308±0. 001,7 號峰為I. 890±0. 002,8 號峰為 2. 268±0. 008,9 號峰為 2. 314±0· 006，10 號峰為 2. 445±0. 010，
11號峰為 2. 507±0. 028，12 號峰為 2. 549±0. 010，13 號峰為 2. 722±0. 012，14 號峰為 2. 771±0. 012，15 號峰為 2. 930±0. 007，16 號峰為 3. 423±0. 019，17 號峰為
3.529±0. 017。這些共有峰構成了桑葛製劑中總黃酮活性成分的指紋特徵，可作為桑葛製劑總黃酮類活性成分的對照指紋圖譜。在本發明提供的另一具體實施例中，當桑葛製劑中桑白皮與葛根的質量比為
2 I時，通過對10批桑葛製劑的指紋圖譜測試和比較分析，總生物鹼類活性成分共有模式指紋圖譜(對照指紋圖譜)中具有13個共有指紋峰，相對保留時間分別為I 號峰為 O. 514±0· 03,2 號峰即 S 峰為 I. 000±0· 000,3 號峰為 I. 401±0. 001，·4 號峰為 I. 427±0. 003，5 號峰為 I. 478±0. 009，6 號峰為 I. 522±0. 008，7 號峰為
1.917±0· 012,8 號峰為 2. 030±0. 007,9 號峰為 2. 212±0· 022，10 號峰為 2. 530±0. 044，11號峰為2. 617±0· 008，12號峰為3. 630±0. 017，13號峰為3. 740±0. 018。這些共有峰構成了桑葛製劑中總生物鹼活性成分的指紋特徵，可作為桑葛製劑總生物鹼類活性成分的對照指紋圖譜。在本發明提供的又一具體實施例中，當桑葛製劑中桑白皮與葛根的質量比為4 : 1、1 : 2和I : 4時，通過對10批桑葛製劑的指紋圖譜測試和比較分析，得到的總生物鹼類對照指紋圖譜(對照圖譜)中具有9個共有指紋峰，相對保留時間分別為I 號峰為 O. 512±0· 018，2 號峰即 S 峰為 I. 000±0· 000，3 號峰為 I. 450±0. 003，4 號峰為 I. 880±0. 002,5 號峰為 2. 154±0. 005,6 號峰為 2. 288±0. 006,7 號峰為
2.469±0. 006,8號峰為2. 559±0. 013,9號峰為2. 621±0. 010。這些共有峰構成了桑葛製劑中總生物鹼活性成分的指紋特徵，可作為桑葛製劑總生物鹼類活性成分的對照指紋圖
-i'TfeP曰。在得到上述對照指紋圖譜的基礎上，本發明提供了一種桑葛製劑的質量檢測方法，包括以下步驟將待測桑葛製劑製成可用於液相色譜分離的溶液；按照上述構建方法所記載的步驟b)和c)獲得待測桑葛製劑中總黃酮類成分和總生物鹼類成分的指紋圖譜；將待測桑葛製劑總黃酮類成分的指紋圖譜與總黃酮類成分對照指紋圖譜進行比較，以及將待測桑葛製劑總生物鹼類成分指紋圖譜與總生物鹼類成分對照指紋圖譜進行比較。以《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統A版》計算待測桑葛製劑的指紋圖譜與對照指紋圖譜的相似性。相似度高，則表明待測桑葛製劑的質量較好；如果相似度低，則表明待測桑葛製劑的質量較差，總黃酮和總生物鹼成分含量不達標。實施例I桑葛製劑總黃酮類對照指紋圖譜的構建實施例I所採用的10批桑白皮藥材和葛根的產地主要為河南、河北、安徽、廣西、湖南，上述品種經過鑑別，符合藥典標準，無明顯生物差異性，具體情況請見表I:表I
Γ1Ε1產地是否有生物差異性~
桑白皮Y070609HN Μ I
桑白皮Y100513HB WitI
桑白皮Y100716HB Mt
桑白皮Y101113HB Mt
桑白皮Y101229HB MI
桑白皮Y110104HN ISI
桑白皮Y101230AH WW
桑白皮Y100826HN M
桑白皮Y101026HB Mt
桑白皮Y101102HN M
葛根G110111HN M ^
葛根G110112HN M ^
葛根G110112AH HI
葛根G110113AH WW
葛根G110114AH HI
葛根G110117HN M ^
葛根G110118HN M ^
權利要求
1.一種桑葛製劑中總黃酮類成分和總生物鹼類成分指紋圖譜的構建方法，其特徵在於，所述方法包括 a)將所述桑葛製劑製備成液相分離用桑葛製劑溶液； b)總黃酮類成分指紋圖譜的構建 將所述桑葛製劑溶液注入以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑的液相色譜儀，紫外檢測器波長為250nm ;柱溫為20_40°C ;以乙腈為流動相A，以O. 3%醋酸為流動相B進行梯度洗脫，得到所述總黃酮類成分指紋圖譜；以及 c)總生物鹼類成分指紋圖譜的構建 將預定量的所述桑葛製劑溶液置於容器中，將硼酸鹽緩衝液和芴甲氧醯氯乙腈溶液加入所述容器中，水浴下反應；再依次將甘氨酸溶液、醋酸水溶液加入到所述桑葛製劑溶液，過濾後取續濾液注入高效液相色譜儀，其中， 所述高效液相色譜儀中的色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，螢光檢測器激發波長為254nm，發射波長為309nm，柱溫為20_40°C，以乙腈為流動相C，O. I %醋酸為流動相D進行梯度洗脫，得到所述總生物鹼類成分指紋圖譜。
2.根據權利要求I所述的構建方法，其特徵在於，所述步驟b)的梯度洗脫程序如下 O 20分鐘流動相A體積比保持為10. 5%，流動相B體積比保持為89. 5% ; 20 60分鐘流動相A體積比由10. 5 %線性上升到40 %，流動相B體積比由89. 5 %下降到60% ； 60 62分鐘流動相A體積比由40 %線性下降到10.5%，流動相B體積比由60 %上升到 89. 5% ； 62 70分鐘流動相A體積比保持為10. 5 %、流動相B體積比保持為89. 5 %，得到所述總黃酮類成分指紋圖譜。
3.根據權利要求I所述的構建方法，其特徵在於，所述步驟c)的梯度洗脫程序如下 O 50分鐘，所述流動相C體積比由30 %上升到35 %，所述流動相D體積比由70 %下降到65% ； 50 60分鐘，所述流動相C體積比保持為35%，所述流動相D體積比保持為65% ； 60 61分鐘，所述流動相C體積比由35 %上升到100 %，所述流動相D體積比由65 %下降到0% ； 61 70分鐘，所述流動相C體積比保持為100%，所述流動相D體積比保持為0% ； 70 71分鐘,所述流動相C體積比由100%下降到30%，所述流動相D體積比由0%上升到70%，得到所述總生物鹼類成分指紋圖譜。
4.根據權利要求I所述的構建方法，其特徵在於，所述步驟b)進一步包括將葛根素加入水中製得葛根素參照物溶液的步驟，所述葛根素參照物溶液與所述桑葛製劑溶液同時注入所述液相色譜儀。
5.根據權利要求I所述的構建方法，其特徵在於，所述步驟c)進一步包括將I-脫氧野尻黴素鹽酸鹽溶入水中製得I-脫氧野尻黴素鹽酸鹽參照物溶液的步驟，所述I-脫氧野尻黴素鹽酸鹽參照物溶液與所述桑葛製劑溶液同時注入所述高效液相色譜儀。
6.根據權利要求1-5中任一項所述的構建方法,其特徵在於,所述總黃酮類成分的對照指紋圖譜具有17個共有指紋峰，相對保留時間分別為I號峰為 O. 487±0. 009，2 號峰為 O. 536±0. 004，3 號峰為 S峰，為 I. 000±0. 000，4 號峰為 I. 099±0. 030，5 號峰為 I. 217±0· 002，6 號峰為 I. 308±0· 001，7 號峰為 I. 890±0. 002，.8 號峰為 2. 268±0. 008,9 號峰為 2. 314±0. 006，10 號峰為 2. 445±0. 010，11 號峰為.2.507±0. 028，12 號峰為 2. 549±0. 010，13 號峰為 2. 722±0· 012，14號峰為 2. 771±0· 012，.15 號峰為 2. 930±0. 007，16 號峰為 3. 423±0. 019，17 號峰為 3. 529±0. 017。
7.根據權利要求1-5中任一項所述的構建方法，其特徵在於，當所述桑葛製劑中桑白皮與葛根的質量比為2 I時，所述步驟c)得到的總生物鹼類成分的對照指紋圖譜具有13個共有指紋峰，相對保留時間分別為I號峰為 O. 514±0· 03，2 號峰為 S 峰，為 I. 000±0· 000，3 號峰為 I. 401 ±0. 001，4 號峰為 I. 427±0· 003，5 號峰為 I. 478±0. 009，6 號峰為 I. 522±0· 008，7 號峰為 I. 917±0· 012，.8號峰為 2. 030±0. 007,9 號峰為 2. 212±0. 022，10 號峰為 2. 530±0. 044，11 號峰為.2.617±0· 008，12 號峰為 3. 630±0. 017，13 號峰為 3. 740±0. 018。
8.根據權利要求1-5中任一項所述的構建方法，其特徵在於，當所述桑葛製劑中桑白皮與葛根的質量比為4 : 1、1 : 2和I : 4時，所述步驟c)得到的總生物鹼類成分的對照指紋圖譜中具有9個共有指紋峰，相對保留時間分別為I號峰為 O. 512±0. 018，2 號峰為 S 峰，為 I. 000±0. 000，3 號峰為 I. 450±0. 003，4 號峰為 I. 880±0. 002，5 號峰為 2. 154±0. 005，6 號峰為 2. 288±0. 006，7 號峰為 2. 469±0. 006，.8號峰為 2. 559±0. 013，9 號峰為 2. 621±0· 010。
9.一種桑葛製劑的質量檢測方法，其特徵在於，所述質量檢測方法包括 將待測桑葛製劑製備成液相分離用桑葛製劑溶液； 所述待測桑葛製劑總黃酮類成分和總生物鹼類成分指紋圖譜的獲得按照權利要求I所述構建方法中的步驟b)和c)獲得所述待測桑葛製劑的總黃酮類成分和總生物鹼類成分指紋圖譜；以及 將所述待測桑葛製劑的總黃酮類成分指紋圖譜與權利要求6所述構建方法中的總黃酮類成分對照指紋圖譜進行比較，以及將所述待測桑葛製劑的總生物鹼類成分指紋圖譜與權利要求7或8所述構建方法中的總生物鹼類成分對照指紋圖譜進行比較。
全文摘要
本發明提供了一種桑葛製劑中總黃酮類成分和總生物鹼類成分指紋圖譜的構建方法以及桑葛製劑的質量檢測方法。上述指紋圖譜的構建方法包括a)桑葛製劑溶液的製備，b)總黃酮類成分指紋圖譜的構建，以及c)總生物鹼類成分指紋圖譜的構建。通過本發明提供的構建方法，得到了桑葛製劑中總黃酮類成分和總生物鹼類成分的指紋圖譜，該指紋圖譜可用於桑葛製劑的質量控制。該構建方法和檢測方法提高了桑葛製劑的質量控制標準，較為全面地反應了總黃酮類和總生物鹼類活性成分的含量情況，而且具有穩定性好、重現性好的優點。
文檔編號G01N30/02GK102890124SQ20111020412
公開日2013年1月23日 申請日期2011年7月20日 優先權日2011年7月20日
發明者段震文, 郭樹仁, 薛嵐 申請人:北京北大維信生物科技有限公司