癌症的檢測和治療的製作方法

2023-12-02 11:20:31 2

專利名稱：癌症的檢測和治療的製作方法
技術領域：
本發明涉及癌症的檢測和/或治療。更詳細地說，本發明利用存在的AFP受體為基礎，測定病人的癌症或者包含或消除癌症。
背景技術：
二十年以前，Abelev et al.報導了存在第一個癌胚抗原，α-胎蛋白(AFP)的存在[Abelev，G.I.，Perova，S.D.，Khramkova，N.I.，Postnikova，Z.A.和Irlin，I.S，.《移植》1，174(1963)]，雖然其是胎兒期的主要循環蛋白，但它在出生後差不多消失了，它的正常成人血清濃度低於50ng/ml[Ruoslahti，E.和Seppals.M.，《國際癌症雜誌》8，374(1971)]。然而，在某些惡性疾病如肝癌或畸胎瘤中，其血漿水平可以高達一千倍以上[Kuoslahti，E.和Seppals，M.《高級癌症研究》29，275(1979)]。這一發現不僅引起了臨床醫師的注意，他們設想了一個檢測惡性腫瘤和監測癌症病人的新方法，而且引起了研究者研究這個蛋白在胎兒生長過程中的生理作用的興趣。
首先要研究的參數之一是胎兒中AFP的分布。利用免疫過氧化物酶方法，Benno和Williams描述了在發育的大鼠腦中AFP的分布[Benno.R.H.和Williams，T.H.，《腦研究》142，1982(1978)]。不久，一系列論文報告了在幾個種類包括鳥和人的發育的神經細胞中血漿蛋白的分布[Trojan，J.和Uriel.J.，《癌發育生物醫學研究雜誌》1，107(1980)；Uriel.J.，Trojan，J.，Dubouch，P和Pieiro，A.，《病理生物學》30，79(1982)；Moro，R和Uriel，J.，《癌發育生物醫學研究雜誌》2，391(1981)；Dzigielewska，K.M.，Evans.C.A.N.，Lorscheides E.L.，Malinowska，D.H.，Mollgard，K.，Reynolds，M.L.，和Saunders，N.R.，《生理學雜誌》318，239(1981)；Mollgard，K.，Jacobsen，M.，Krag-Jacobsen，G.，Praetorius-Claussen，P.和Saunders，N.R.，《神經科學通信》14，85(1979)]。對於一個給定的組織或器官，不同的種類間AFP和SA染色的動力學是一個相當穩定的圖案[Uriel.J.，Trojan，J.，Moro.R.和Pieiro，A.，《紐約科學學術年鑑》417，321(1983)]。當一個神經結構發育非常不成熟時，檢測不到細胞內的AFP或SA。然後，突然，並在不同種類的生長時間上的某一時期，同時觀察到這兩種蛋白質，甚至於它們在同一細胞中[Torand-Allerand，C.D.，《自然》286，733(1980)]。隨後，首先是AFP後來是SA，染色強度減退，陽性細胞變少，在成熟結構中兩種蛋白是陰性的，其它血清成份，如IgG，或雞胚中的卵清蛋白，儘管存在於腦脊液中，但在胎兒期從沒在神經細胞中發現，[Fielitz，W.，Esteves，A.和Moro.R.，《發育腦研究》13.111(1984)]。
通過胚胎細胞摻入AFP從最初的觀察中提出的一個問題是AFP和SA是從胞外源摻入還是原位合成。由於仍不清楚是否神經細胞能夠合成血漿蛋白，[Ali，M.，Raul，H.和Sahib，M.，《發育腦研究》1，618(1981)；Ali，M.，Mujoo，K.和Sahib，M.，《發育腦研究》6，47(1983)；Schachter，B.S.和Toran-Allerand，C.D.，《發育腦研究》5，95(1982)；Pieiro，A.，Calvo，M.，Iguaz，F.，Lampreave，F和Neval，J..《國際生化雜誌》14，817(1982)]，在體外[Uriel，J.，Faivre-Bauman，A.，Trojan，J.和Foiret，D.《神經科學通信》27，171(1981)；Hajeri-Germond，M.，Trajan，Uriel，J.和Hauw，J.《發育神經科學雜誌》6，111(1984)]和在體內[Villacampa，M.J.，Lampreave，F.，Calvo，M.，Pieiro，A和Uriel，J.《發育腦研究》12，77(1984)，Moro，R.，Fielitz，W.，Grunberg，J.和Uriel，J.，《國際發育神經科學雜誌》2，143(1984)]已經證明，成神經細胞能容易地從胞外源摻入AFP和血清清蛋白。利用同源和異源的蛋白進行了體內實驗，在第一種情況中[Villacampa，M.J.，Lampreave，F.，Calvo，M.，Pieiro，A.和Uriel，J.《發育腦研究》12，77(1984)]，顯示出在對懷孕的大鼠注射後，125I-AFP定位於胎腦，同時也在其它胎兒器官如腸，皮膚，和舌，以前已報導在這些器官中有天然細胞內AFP[Trojan，J.和Uriel，J.，《癌發育生物醫學》3，13(1982)]。第二套實驗[Moro，R.，Fielitz，W.，Grunberg，J.和Uriel，J.，《國際發育神經科學雜誌》2，143(1984)]顯示，當在雞胚的中腦腔注射新生大鼠血清時，在它們的天生等同物的同一位置檢測到大鼠AFP和大鼠SA。這也表明來自於一個種類的AFP和SA被另一種類的細胞吸收，從而指出了進化過程中保守的結構和機制。這又提示其中涉及一個基本生物學原理。
儘管注射了高濃度的大鼠IgG，但這個蛋白質的染色是陰性的，由於也檢測不到卵清蛋白(MW＝43,000)，甚至於當注射兩倍於胚胎的腦脊液中AFP的正常分子濃度時也檢測不到，因此這不是它的能妨礙被動擴散的高分子量(150,000)的結果，[Fielitz，，W.，Esteves，A.和Moro，R.，《發育腦研究》13，111(1984)]。這一選擇性支持了內吞作用的特異受體傳遞機制的假說[Moro，R.和Uriel，J.，《癌發育生物醫學雜誌》2，391(1981)；Moro，R.，Fielitz，W.，Grunberg，J.和Uriel，J.，《國際發育神經科學雜誌》2，143(1984)]。
AFP的摻入依賴於細胞分化然而，目前仍未清楚是否AFP和SA的吸收是一個依賴細胞的現象，或者是否由於在胎兒期結束時腦血屏障的關閉或低濃度的循環AFP而導致的胞外蛋白質的可獲得性較低而引起染色消失。首先在雞中[Moro，R.，《神經科學通信》41，253(1983)]，然後在人胎兒中[Jacobsen，M.，Lassen，L.C.和Mollgard，K.，《腫瘤生物學》5，55(1984)]已經證明，在獲得血清中AFP的最高峰之前，脊柱神經節神經細胞完成了完整的陰性-陽性-陰性染色循環。此外，當AFP變得不可測時，SA仍繼續存在一段時間，從而表明這些血清蛋白已經到達神經節成神經細胞。
未成熟細胞內的AFP受體AFP的細胞吸收表明存在一個根據細胞分化程度調節其表達的特異受體[Uriel，J.，Trojan，J.，Moro，R.和Pieiro，A.，《紐約學術科學年鑑》417，321(1983)；Moro，R.，《神經科學通信》41，253(1983)]，先前的報導[Uriel.J.，Bonillon，D.，Russel，C和Dupiers，M.，《美國國家科學進展》73，1452(1976)]表明在未成熟大鼠的子宮細胞溶質中存在兩種含有AFP的超速離心部分；一個完全對應於AFP的4S部分，另一個只能在用0.4MKCL處理後進行AFP的免疫學檢測的8S部分，這一處理把8S部分轉化成4S。即使在AFP受體的概念還沒有產生的時候，8S部分很可能對應於一個在高KCl濃度時解離的受體-AFP複合物。Smalley和Sarcione也觀察到了利用KCl解離AFP-受體複合物[Smalley，J.R.和Sarcione，E.J.《生物化學生物物理研究通訊》94，1429(1980)]，他們也提供了AFP分子能被未成熟的大鼠的子宮細胞合成的證據。
AFP受體在癌細胞中的表達由於癌細胞具有許多與胎兒細胞相同的生化的和抗原特徵[Uriel，J.，《高級癌症研究》29，127(1979)]，來源於在胎兒期摻入AFP的組織的惡性細胞有可能再表達相應的受體從而再吸收AFP。為了支持這一假說，Sarcione等人[Sarcione，E.J.，Zloty，M.，Delluomo，D.S，Mizejewski，G.和Jacobson.H.，《癌症研究》43，3739(1983)]在源於人乳腺癌的8S複合物中發現AFP，該複合物可以用相同於利用未成熟大鼠細胞溶質的實驗的KCl處理方法來解離。最近，這些作者已經證明MCF-7人乳房癌細胞系以複合物形式合成AFP，為了使AFP變成免疫學可測，該複合物需要分解[Sarcione，E.J.和Hart，D.，《國際癌症雜誌》35，315(1985)]。在另一方面，已證明這一細胞系[Uriel，J.，Failly-Crepin，C.，Villacampa，M.J.，Pieiro，A.，和Gueskens，M.，《腫瘤生物學》5，41(1984)]，和一個鎳誘導的大鼠橫紋肌肉瘤[Uriel，J.，Poupon，M.F.和Geuskens，M.，《英國癌症雜誌》48，263(1983)]在體外吸收AFP。作為這些間接結果的一個證據，在MCF-7細胞系檢測到AFP的表面受體[Villacampa，M.J.，Moro，R.，Naval，J.，Failly-Crpin，Ch.，Lampreave，F.和Uriel，J.，《生物化學生物物理研究通訊》122，1322(1984)]。結合參數指出了一個展示陽性協同作用的兩位點受體模型。高親和位點有一個顯示陽性協同作用的1.5×10-9M的Kd。該高親和位點有一個具有n-2000/細胞的1.5×10-9M的Kd。以320,000/細胞存在的低親和位點有一個2.2×10-7M的Kd。後來的研究表明小鼠YACT淋巴瘤細胞的表面存在一個相似的受體體系，該體系在正常成年小鼠T細胞中缺乏[Naval，J.，Villacampa，M.J.，Goguel，A.F.和Uriel，J.《美國國家科學進展》82，3301(1985)]。
平行於體內實驗也做了這些研究，其中用放射性碘標記的AFP注射攜帶自髮乳腺腫瘤的小鼠。放射性的組織分布顯示了腫瘤組織/正常組織(肝)的比例為3.6[Uriel，J.，Villacampa，M.J.，Moro，R.，Naval，J.和Failly-Crpin，CH.C.R.學術科學(巴黎)297，589(1983)；Uriel.J.，Villacampa.M.J.，Moro，R.，Naval，J.和Failly-Crpin，C.，《癌症研究》44，5314(1984)]。來自這些動物的腫瘤切片的放射自顯影顯示了環繞惡性細胞而不是正常細胞的核膜的明顯的銀顆粒的積累[Uriel，J.，Villacampa，M.J.，Moro，R.，Naval，J.和Failly-Crpin，C.，《癌症研究》44，5314(1984)]。
利用131I-AFP的小鼠腫瘤的閃爍照像成象利用131I-AFP，已經獲得小至3-4mm的鼠乳腺腫瘤的陽性閃爍圖像[Uriel，J.，Villacampa，M.J.，Moro，R.，Naval，J.和Fuilly-Crpin，C.《癌症研究》44，5314(1984)；Moro，R，Heuguerot，C.，Vercelli-Retta，J.，Fielitz，W.，Lpez，J.J.和Roca，R.，《核醫學通訊》5，5(1984)]，事實上，利用連接於計算機的標準γ-攝像機，可檢測12個這樣的腫瘤中的11個。用類似的方法，也可以掃描另一種小鼠腫瘤，即成神經細胞瘤[Hajeri-Germond，M.，Naval.J.，Trojan，J.和Uriel，J.，《英國癌症雜誌》51，791(1985)]。
已經在幾種不同類型的腫瘤中證明AFP吸收的表達或AFP受體的直接證據，這些腫瘤中的一些是大鼠橫紋肌肉瘤[Uriel，J.，Poupon，M.F.和Geuskens，M.，《英國癌症雜誌》48，263(1983)]，小鼠成神經細胞瘤[Hajeri-Germond，M.Naval，J.，Trojan，J.和Uriel，J.，《英國癌症雜誌》51，791(1985)]，小鼠和人乳腺癌[Villacampa，M.J.，Moro，R.，Naval.J.，Failly-Crpin，Ch，Lampreave，F和Uriel，J.，《生物化學生物物理研究通訊》122，1322(1984)；Naval，J.，Villacampa，M.J.，Goguel，A.F.和Uriel，J.《美國國家科學進展》82，3301(1985)；Uriel，J.，Villacampa，M.J.，Moro，R.，Naval，J.和Failly-Crpin，CH.C.R.學術科學(巴黎)297，589(1983)；Uriel，J.，Villacampa，M.J.，Moro，R.，Naval，J.和Failly-Crpin，C.，《癌症研究》44，5314(1984)；Moro，R.，Heuguerot，C.，Vercelli-Retta，J.，Fielitz，W.，Lpez，J.J.和Roca，R，《核醫學通訊》5，5(1984)；Biddle，W.和Sarcione.E.J.，Breast《癌症研究》Treat.10.281(1987)]，小鼠T淋巴瘤[Naval，J，Villacampa，M.J.，Goguel，A.F.和Uriel，J.《美國國家科學進展》82，3301(1985)].人T和B細胞淋巴瘤[Laborda，J.，Naval，J.，Allouche，M.，Calvo，M.，Georgoulias，V.，Mishal，Z.和Uriel，J.《國際癌症雜誌》40，314(1987)；Calvo，M.，Laborda，J.，Naval，J.，Georgoulias，V.和Uriel，J.發表在ISOBM的XIII次會議(巴黎1985)；Torres，J.M.，Anel，A.，和Uriel，J.，《細胞生理學雜誌》150，458(1992)；Torres，J.M.，Gueskens，M.和Uriel，J，《國際癌症雜誌》47，112(1991)]，以及phitto血凝素激活的人T淋巴細胞[Torres，J.M.，Laborda，J.，Naval，J.，Darracq，N.，Calvo，M.，Mishal，Z.和Uriel.J.《分子免疫學》26，851(1989)]，人惡性單核細胞系U937[Suzuki，Y.，Zeng，C.Q.，Alpert.E.《臨床研究雜誌》90，1530(1992)]和HT29人結腸癌細胞系[Esteban，C.，Gueskens.M.和Uriel.J.，《國家癌症雜誌》49，425(1991)]。
這些發現把AFP受體看作是相關於惡性狀態而不是腫瘤類型的廣泛的癌胚抗原。
針對AFP受體的單克隆抗體可能是由於固定過程中受體結合位點的部分變性和標記AFP對它的受體顯示出的較低的親和力，標記的AFP(FITC，放射性跟蹤物)不結合到在石蠟組織切片中的腫瘤細胞上，所以，利用一組人乳房癌作為免疫原產生了針對AFP受體的單克隆抗體(Mabs)[Moro，R.，Tamaoki，T.，Wegmann.T.G.，Longenecker，B.M.，和Laderoute，M.P.《腫瘤生物學》14，116(1993)，該文引入作為參考文獻]。
兩個IgM產生的Mabs識別非還原條件下的PAGE凝膠上的一條67KD的雙譜帶。該67KD譜帶也能與125I-AFP反應。這些Mabs與AFP受體的結合位點反應，因為它們抑制AFP與腫瘤細胞的結合，並相反在過量AFP存在下他們與細胞的結合受到抑制，Mabs不與AFP反應。他們識別在組織切片中的胎兒細胞和乳房癌，但不識別乳腺腺瘤或者大多數其他正常成人組織。
在過去幾十年中，科學家們已經試圖鑑定與惡性相關的抗原。應被認為是一個癌胚抗原的AFP受體，可以滿足臨床有用的腫瘤標記的許多要求。利用這一廣泛的與癌相關的抗原的單克隆抗體的進一步工作將使人們能夠確定他們的臨床用途，同時也能研究AFP受體的生理作用。

發明內容
本發明涉及一種檢測病人癌症的方法，該方法包括將標記抗體或標記AFP導入到一個病人的生物學樣品，以使標記抗體或標記AFP與生物學樣品中的AFP受體結合位點反應的步驟，接著的步驟是鑑定生物學材料中與標記抗體或標記AFP反應的AFP受體結合位點，以確定癌的存在。優選地，在導入步驟之前，有一個從病人身體中獲得生物學樣品的步驟。
本發明涉及一種治療病人癌細胞的方法，該方法包括給病人的癌細胞導入AFP受體抗體的步驟，接著的步驟是使AFP受體抗體與癌細胞的AFP受體反應來抑制癌細胞的生長或殺死癌細胞。
本發明涉及一種監測病人的方法，該方法包括治療病人的癌症的步驟，接著的步驟是在治療之後在預定的時間間隔檢測病人的AFP受體位點水平。
本發明涉及一種治療病人的方法，該方法包括檢測病人的AFP受體的步驟，接著的步驟是如果測試顯示病人存在AFP受體則將AFP受體抗體或AFP導入病人以便與病人的癌細胞反應的步驟。
本發明涉及一種治療病人的癌細胞的方法，該方法包括給病人的癌細胞導入經修飾的AFP的步驟，接著的步驟是將修飾的AFP與癌細胞的AFP受體反應來抑制癌細胞的生長或殺死癌細胞。
本發明的目的是通過檢測體液和組織中的α-胎蛋白受體(AFP受體)來診斷和跟蹤癌症疾病和懷孕。儘管檢測溶液中(體液)或附著於固體基質(組織切片)上的AFP受體的原理和方法是相似的，為了清楚起見將分別論述他們。


在附圖中，本發明的優選實施方案和實施本發明的優選方法說明如下圖1是一個癌性的和非惡性疾病的圖。
圖2是一個乳房癌的照片，其中明亮的細胞是癌性的。
圖3是一個乳房癌的照片，其中暗棕色細胞是癌性的。
圖4是良性乳腺瘤。
圖5是肺癌的照片，其中棕色細胞是癌細胞。
圖6是胃癌的照片，其中暗棕色的是癌細胞。
圖7是腸癌的照片。
圖8是顯示AFPr-1對P-388生長的抑制的照片。
圖9是注射五天後，上邊三個對照動物和四個治療動物的照片。
圖10是另一個實驗的動物照片，其中三個治療動物解除了疾病，兩個仍攜帶大的腫瘤。
具體實施例方式
本發明涉及一種檢測病人的癌症的方法，該方法包括將標記的抗體或標記的AFP導入到病人的一個生物學樣品中以使標記的抗體或標記的AFP與生物學樣品中的AFP受體結合位點反應的步驟。生物學樣品可以是血液、唾液、組織、血清、粘液、痰、尿或眼淚或含有癌細胞的材料。生物學樣品可以是組織切片。組織切片可以是固定的組織，新鮮的組織或冷凍的組織。抗體可以是單克隆抗體，抗體可以是多克隆抗體。接著的步驟是在生物學材料中鑑定與標記抗體或標記AFP反應的AFP受體結合位點，以確定癌症的存在。優選地，在導入步驟之前，有一個從病人身體中獲得生物學樣品的步驟。
導入步驟包括將放射性同位素標記的抗體或放射性同位素標記的AFP導入到病人的生物學樣品中以使標記抗體或標記AFP與生物學樣品中的AFP受體反應的步驟，然後的鑑定步驟包括鑑定生物學樣品中存在的放射性。更具體地說，鑑定步驟可以包括測量生物學樣品的放射性計數的步驟，或者鑑定步驟包括用照像乳膠包被生物學樣品，顯影照像乳膠，觀察包被的生物學樣品的步驟。或者，生物學樣品是病人，導入步驟包括用放射性同位素標記的抗體或放射性同位素標記的AFP注射病人的步驟。
在另一個實施方案中，導入步驟包括導入用酶標記的抗體或用酶標記的AFP到病人的生物學樣品中以使標記抗體或標記AFP與生物學樣品中的AFP受體結合位點反應的步驟，酶標記的抗體或酶標記的AFP改變了生物學樣品的顏色，鑑定步驟可以包括把生物學樣品的顏色與一個已知顏色相比較來確定癌症存在的步驟。酶可以是過氧化物酶，導入步驟包括導入過氧化物酶標記的抗體到病人的組織中的步驟。或者，導入步驟可以包括放一滴生物學樣品到硝酸纖維素或尼龍的一個位置上，然後加過氧化物酶標記的抗體到這個位置的步驟。然後鑑定步驟包括確定是否在硝酸纖維素或尼龍上的這一位置改變了顏色的步驟。
在另一個實施方案中，酶標記的抗體或酶標記的AFP釋放離子改變了處理樣品的溶液的電導。因而鑑定步驟包括測定溶液的電導來確定生物學樣品中癌的存在的步驟。
在另一個實施方案中，導入步驟可以包括導入螢光色素標記的抗體或螢光色素標記的AFP到生物學樣品中以使標記抗體或標記AFP與生物學樣品中的AFP受體反應的步驟，然後鑑定步驟包括用紫外光照射生物學樣品，測量來自被照射的生物學樣品的光輻射的步驟。作為另一個例子，生物學樣品可以是在玻片上的含有癌細胞的生物學材料的塗片，鑑定步驟包括用顯微鏡或通過螢光細胞測定法檢查塗片的步驟。
本發明涉及一種治療病人癌細胞的方法，該方法包含導入AFP受體抗體到病人的癌細胞中的步驟。抗體可以是單克隆抗體，多克隆抗體，來自於不同於病人的種類的抗體，或來自於相同於病人的種類的淋巴細胞體外產生的抗體。然後還有一個步驟是使AFP受體抗體與癌細胞的AFP受體反應來抑制癌細胞的生長或殺死癌細胞。
導入步驟包括給病人注射AFP受體抗體的步驟，注射步驟可以包括通過靜脈注射AFP抗體受體進入病人的血流的步驟，或者，注射步驟可以包括注射AFP受體抗體進入病人的一個鄰近癌細胞的位置。
或者，導入步驟可以包括針對癌細胞免疫接種病人的步驟，免疫接種步驟可以包括注射一個不同於病人的種類的AFP受體進入病人來引起病人產生針對注射的AFP受體的AFP受體抗體的步驟。病人產生的AFP受體抗體與病人的AFP受體或癌細胞交叉反應。
反應步驟可以包括將AFP受體抗體與病人癌細胞的AFP受體反應以使癌細胞的AFP受體被封閉或功能受損的步驟。或者，AFP受體抗體是固定補體的AFP受體抗體。那麼反應步驟即是使固定補體的AFP受體抗體與癌細胞反應以使當產生補體鏈反應時，在癌細胞的膜上穿孔殺死癌細胞。
或者，AFP受體抗體與藥物或毒素偶聯，然後，反應步驟包括使偶聯藥物或毒素的AFP受體抗體與癌細胞反應以使癌細胞吞沒進入癌細胞的藥物或毒素，在癌細胞中，癌細胞的酶把藥物或毒素從抗體上切割下來引起細胞不可逆地損害或死亡。
在另一個實施方案中，AFP受體抗體是放射性標記的，接著的反應步驟是包括使放射性標記的AFP受體抗體與病人的癌細胞反應，以使放射性標記的AFP受體抗體從短距離對癌細胞DNA輻射，以損壞DNA從而誘導癌細胞的死亡。
本發明涉及一種監測病人的方法，該方法包括治療病人的癌症的步驟，然後是在治療之後在預定間隔測試病人的AFP受體位點水平。
本發明涉及一種治療病人的方法，該方法包括測試病人的AFP受體的步驟，接著如果測試表明病人具有AFP受體則將AFP受體抗體或AFP導入病人以與病人的癌細胞反應。
本發明涉及一種治療病人的癌細胞的方法，該方法包括導入修飾的AFP到病人的癌細胞中的步驟，修飾的AFP可以是合成地產生或者是AFP的一部分。接著的步驟是使修飾的AFP與癌細胞的AFP受體反應來抑制癌細胞或殺死癌細胞。
導入步驟可以包括給病人注射修飾的AFP的步驟，注射步驟包括通過靜脈注射修飾的AFP進入病人的血流的步驟，或者，注射步驟包括注射修飾的AFP進入病人的一個鄰近癌細胞的位置的步驟。
反應步驟可以包括使病人的癌細胞的AFP受體與修飾的AFP反應以使癌細胞的AFP受體位點被封閉或功能受損的步驟。
一般來說，除了運用或利用與AFP受體反應的AFP，修飾的AFP或抗體，本領域熟練技術人員一般是公知上述的技術。
本發明的操作在體液中在細胞死亡之後，通過分泌或通過被動擴散，來自癌或胎兒/胚胎組織的AFP受體可以被釋放進入血流並從那裡進入許多其他液象尿，眼淚，唾液等，然後在體液(包括血清)中AFP受體的濃度在健康個體和癌症或懷孕病人之間有明顯的不同。這可以用於診斷，同時，AFP受體濃度在這些體液中的進化可以用於跟蹤，例如一病人被診斷有乳腺癌那麼AFP受體的血清濃度是高的。病人被開刀並且腫瘤被移走，隨後血清中AFP受體的測定顯示了外科手術後的即刻的劇烈下降，接著是一個平穩階段。然而六個月後血清中AFP受體的濃度又開始增加，這表示了癌症的再出現或轉移，這可能領先於傳統的臨床或其他診斷方法，被所提出的一個不昂貴的測試所提醒；現在醫師用更精確昂貴並且如果需要用侵害的方法尋找惡性塊。
在組織樣品中AFP受體存在於大多數癌細胞中，所以，可以通過免疫組織學方法或用合適地標記的AFP溫育來檢測AFP受體(儘管後者還沒有成功地用於石蠟切片，它只適用於冰凍切片)。在這個基礎上可進行惡性疾病的診斷，除此之外，用螢光素作標記，在一個組織切片上可以點出很少的陽性細胞，這降低了傳統病理學分析所產生的錯誤的界限，在傳統病理學分析中，在一個正常組織中的少數癌細胞可能看不到。另外，由於AFP受體的表達不是以結構上變化而是以分化和生化變化為條件的，因而很可能看上去正常而事實上處於腫瘤發生早期的細胞在測試AFP受體的檢測中會呈現陽性。
同樣，為了清楚起見，儘管原理上沒有差別並且所用的技術上僅有微小差別，在體液中和組織切片中的AFP受體的檢測將被分別論述體液實施例1在本例中，通過酶免疫測定(EIA)測試了來自非癌病人的22個血清樣品和來自癌症病人的17個樣品的AFP受體濃度，所用的技術如下用在磷酸緩衝鹽水(PBS)(0.05MPO4，0.15MNaCl，pH7.5)中稀釋1/16384的來自上述組中的血清樣品包被EIA96孔板1小時到過夜。以類似的方法以1/256稀釋倍數用來自乳房癌肺轉移的病人的胸膜滲出液包被一些孔。由於可大量獲得，這一材料，稱為P89被用作標準，這使得P89被用作同樣的標準來比較所有實驗中的所有樣品和所有其他樣品。在用PBS洗3次之後，1％在PBS中的卵白蛋白或明膠封閉非特異結合位點1小時。在洗3次之後，在每個孔中溫育3小時100μl用1％在PBS中的卵白蛋白稀釋1/200的鼠產生的抗AFP受體的單克隆抗體(Mab)腹水(如在[Moro，R.，Tamaoki，T.，Wegmann，T.G.，Longenecker.B.M.，和Laderante，M.P.《腫瘤生物學》14，116(1993)]所述的Mab167H.4，引為參考文獻)，然後用PBS洗孔3次並且以廠家(Sigma Chemicals.S.Louis)所推薦的濃度加入商購的過氧化物酶抗小鼠IgM偶聯物，1小時後用PBS洗板3次並且以廠家(Sigma)所推薦的濃度加入過氧化物酶的顯色底物。在室溫下做所有的溫育，30分鐘後，用一個標準的Titertek讀板器在405nm處讀出每個孔中的光密度(O.D.)，結果如表1和圖1所示表1器官 腫瘤類型1卵巢 粘液性腺癌2 淋巴性白血病3肢體 血管肉瘤4子宮 腺癌5軟組織 肉瘤6卵巢 囊性腺癌7直腸 腺癌8骨盆 癌病9 一般傳播腫瘤10腦星形細胞瘤11肺瘤形成12肝初級肝細胞瘤13骨盆 瘤形成14腎瘤形成(轉移)15結腸 瘤形成16骨骨肉瘤該表顯示了研究過程中病人、腫瘤的類型以及樣品與用作標準的P89的比例，結果表明當陽性和陰性的臨界設定在54％的P89時，除一人外所有的癌症病人都是陽性，利用同樣的界限除一人外所有的非癌病人都是陰性。一個單獨的T-測試報告了如下值(利用Excel(TM))中數據分析)
t-測試具有不等方差的兩個樣品變量1 變量2平均 84.7457 133.26582方差 709.91373300.2051觀察資料 16 22Pearson相關 #N/A合併方差 3.5df 24.02215t6.758736P(T＜＝t)單尾2.72E-07t臨界單尾1.710882P(T＜＝t)雙尾5.44E-07t臨界雙尾2.063898一個雙尾分析產生了P＝0.00000054，一個特別顯著的數據，即使是對少量所考慮的樣品也是如此。
在陰性對照組的一個病人(不在表中)是陽性的，被所獲得的數據的高顯著性所提醒，負責這一病人的醫師用CAT掃描她並發現一個正好是惡性腎上腺樣的腫瘤。這一惡性首先通過利用這一測試檢測到，後來被臨床證實。
圖1示出了以圖表表示的相同結果。在該圖中，x軸分成兩部分(惡性的和非惡性的，單位無關)，並且Y軸代表每個病人的P89的百分數。水平線代表54％+/-界限。
實施例2在另一個實施方案中，用AFP受體的單克隆抗體(Mab)以適當的濃度包被一種適當的塑料的或玻璃基底(EIA板或試管)。在洗掉多餘的Mab後，用一種不相關的蛋白質或胺基酸封閉基底以防止非特異結合，並且用所包被的基底溫育病人的體液(血清、唾液、尿等)的合適的樣品稀釋液一段時間，在洗滌除去未結合的樣品材料之後，加入多克隆類型的第二抗體(通過免疫動物產生多克隆抗體並利用它的血清作為反應的抗體源，其與Mab相反，Mab是通過培養無限增殖的脾細胞的個別克隆或移植進入一個合適的寄主而產生)，這個抗體可以與合適的標記或酶偶聯以顯色，或者，通過加入用所說的標記或酶標記的一個抗第二抗體可以進行可測定的反應或者測定。如果反應涉及這第三抗體，那麼第二抗體應該在一個不同於第一抗體的種類中產生並且第一和第三抗體之間應觀察到無交叉反應。然後通過對應於所進行的反應的類型(顏色，傳導性，化學發光等)的一個合適的檢測器來讀這一反應。
實施例3相同於實施例2但是使用了兩個不同的多克隆抗體代替單克隆抗體和抗體以分別作為第一和第二抗體。
實施例4相同於實施例2，其中的基底為硝酸纖維素或尼龍膜，反應不是通過儀器來測定，而是反應在基底上作為顏色點顯示。用裸眼判斷反應為陽性或陰性。
實施例5相同於實施例3，其中的基底為硝酸纖維素或尼龍膜，反應不是通過儀器來測定，而是反應在基底上作為顏色點顯示，通過裸眼看出反應為陽性或陰性。
實施例6在實施例2-5中的抗體中的一個被結合到受體上的同源的或異源的AFP所替代。
實施例7濃度超過0.4M的KCl解離AFP受體複合物，這可能會釋放一定量的可能檢測不到的AFP受體，因為被前例所述的配體(Mab，多克隆抗體或AFP)中之一識別可能被存在於循環AFP受體複合物中的內源AFP所削弱。結果，可以增加AFP受體的量從而增加測試的靈敏度。在本例中，可以在與分析法的固相溫育過程中或之前用KCL處理樣品。
實施例8所有上述提到的例子中的標記是一個放射活性化合物(用於放射性免疫測定和相關的技術)。
實施例9所有上述實施例中的測定的閱讀通過cheuriluminescence或螢光。
實施例10所有上述閱讀是基於傳導性。
在組織樣品中以下面幾種方式獲得並加工組織樣品獲得(a)來自於外科手術移去的器官(b)來自分泌物或其它體液或通過接觸的塗片(PAP塗片)。
(c)來自針活體解剖在AFP受體染色之前加工組織組織樣品可以被固定和切割，如果需要以如下幾種方式進行(a)冰凍切片在切割之前將組織冰凍成固體，在這些切片上可以使用或不用固定劑。
(b)石蠟切片其中常規地加工組織以在切割之前把樣品包埋在一個石蠟塊中。
(c)丙烯加工和其他加工主要是為了用於電子顯微鏡而加工。
實施例11在這個例子中，利用了來自醫院的病理學部門的常規石蠟切片。組織被切成4-8μm厚的切片，在再水合之後，用1∶2000稀釋的抗AFP受體的單克隆抗體(Mab)腹水溶液溫育切片，45分鐘後，洗玻片並用一種抗小鼠IgG+IgG過氧化物或鹼性蕊香紅標記的偶聯物溫育玻片，45分鐘後，再一次洗玻片，並在合適的光源下用顯微鏡觀察或者用過氧化物底物DAB溫育直到顯色，然後常規固定玻片並在可見光下觀察。圖2-7顯示了乳房癌(圖2-3)，良性乳腺瘤(圖4)，肺癌(圖5)，胃癌(圖6)，和腸癌(圖7)的鹼性蕊香紅染色的AFP受體的照片，這些圖顯示了癌細胞或癌細胞的索或條是陽性染色的，而非惡性的鄰近組織不是陽性，這一點在圖4中是明顯的，該圖顯示一個良性乳腺瘤，其中細胞是陰性的，在腺瘤細胞和周圍正常組織之間沒有染色上的差別。癌症治療在癌細胞表面的癌標記的表達使得有可能利用它們來定位癌細胞以實現治療目的。
有許多方法可通過定位表面抗原促進細胞死亡，例如，可以用固定補體的抗體，當發生補體鏈反應時，在細胞上穿孔導致細胞死亡。另一種可能性是利用抗腫瘤抗原抗體偶聯藥物或毒素，一旦附著於細胞表面，偶聯物被吞入細胞的細胞質，在那裡細胞的酶把藥物或毒素從抗體上切割下來。一旦釋放，藥物或毒素不可逆地損壞細胞誘導細胞死亡。在另一種情況下，可以使用放射性標記抗體，一旦與細胞粘連，其與細胞DNA的短距離的輻射產生對細胞DNA的損傷從而誘導細胞在下一個複製時死亡。
在所有上述過程中的關鍵成份是特異地識別惡性細胞的抗體，如果(AFP受體)被用作癌症標記，那麼不僅僅抗其的抗體了可作為靶分子，而α-胎蛋白(AFP)本身將特異地識別AFP受體，所以也可以用各種溶細胞的試劑標記AFP來誘導細胞死亡。
除了損壞癌細胞，後者還可以被誘導停止增殖，如下例所示。
實施例12用抗AFP受體的一個單克隆抗體的不同稀釋液溫育表達AFP受體的P-388小鼠細胞。先進行了一個補體固定試驗並顯示沒有由於補體固定而導致的細胞破壞。在誘導了2-6小時之後，加3H-胸苷到P-388細胞中，清洗並計數。圖9顯示了用同樣濃度的AFPr-1(一個抗AFP受體單克隆抗體)或正常小鼠血清處理的細胞的放射性胸苷計數，正如所描述的，通過Mab大大地降低了P388的增殖。另人感興趣的是，當用Mab溫育細胞幾個小時後，然後清洗並再培養，它們的複製速率接近於那些用不相干抗體(正常鼠血清)處理的對照細胞的複製速率，從而指出細胞不是被殺死而是被Mab抑制了增殖，在人LoVo消化道癌細胞系中也觀察到體外增殖抑制(結果未顯示)。
細胞增殖被抑制的原因不清楚，一個可能的解釋是在胎兒期中，據信AFP攜帶脂肪酸進入胎兒細胞，這些脂肪酸對細胞合成膜，即器官發生過程中一個非常積極的任務是必需的。由於AFP的細胞外濃度隨著時間以及從一種組織到另一組織而變化著，對細胞來說，當它周圍的AFP的濃度不合適時，進入複製可能是致命的。這一概念支持了AFP受體能作為細胞膜和核之間的信使的論點。在使用P388的實驗中所述的抗AFP受體的抗體可能在某種程度上「幹擾」(jam)信息傳遞到核，從而細胞不能進入分裂期，這很重要因為還有其他方法可以用如下將要討論的Mab以外的物質「幹擾」AFP受體系統。
在這個例子和其他例子中的一個重要的考慮是針對人AFP受體產生的小鼠抗AFP受體單克隆抗體也能識別小鼠癌細胞，當溫育來自一個種類的AFP並結合到來自不同種類的細胞上時，在結合研究中觀察到了類似的種類間的交叉反應，從而提示了不同種類的AFP受體之間的相似性。
實施例13同時用2×106EL-4細胞注射C57黑鼠的腹部並在尾巴靜脈注射100μl抗AFP受體腹水或作為對照的正常鼠血清，由於次要組織不相容性，用300rad照射動物，這幫助EL-4細胞產生腫瘤。動物被觀察了21天；殺死動物並照相。圖10和11顯示了兩個這樣的實驗的結果，圖10描述了上部的3個對照動物(注射了正常鼠血清)和4個治療動物(注射了正常鼠血清)和4個注射5天後的治療動物。對照組中的腫瘤(它們中的一些被一種紅氈所染色而使它們更清楚)的直徑大約是5mm，治療動物沒有疾病(僅在注射位置可以看到一個疤痕)。圖11顯示了來自另一個實驗的幾個動物，其中所有5個治療動物沒有疾病(顯示了其中3個)，2個有大的腫瘤(在注射的15天殺死動物)。
在另一個實驗中，治療動物活了8個月沒有任何疾病的信號或異常狀態。樣品和體液AFP受體存在於細胞膜上也在細胞質中，當然當放射性AFP與癌細胞溫育時，發現大約其2/3在細胞質中，很可能與AFP受體相關，(參考文獻32 Naval，J.，Villacampa，M.J.，Goguel，A.和Uriel，J.，《美國國家科學進展》82，3301(1985)在我送你的總的介紹中)，已開發了一種從人索血清中純化AFP受體的方法[Moro，R.，Tamaoki，T.，Wegmann，T.G.，Longenecker，B.M.，和Laderoute，M.P.《腫瘤生物學》14，116(1993)]，引入作為參考文獻，實行這個方法是因為據信垂死的細胞釋放或主動地分泌循環的AFP受體，事實是正如所希望的，AFP受體是存在於新生兒血液中的一個可溶性蛋白。
同樣情況發生於一個帶腫瘤的個體中，只是AFP受體的起源是惡性細胞而不是生理表達其的胎兒細胞，所以，在腫瘤胞外液體中存在AFP受體，這是重要的，因為一些體液或分泌物可以直接從胞外液體中獲得，例如，一個腹膜癌病(轉移到腹膜並傳播到整個腹腔的任何起源的癌細胞)正常地產生我們已經測到並富於AFP受體的腹水液體(不要與在鼠中作為單克隆抗體源誘導的腹水混淆，儘管病理生理學機制是相同的，在腹腔中的癌細胞(在這種情況下，產生單克隆抗體的雜交瘤)產生一個炎性反應，其產生腹水，雜交瘤細胞釋放單克隆抗體到腹水中)。
我們曾在酶免疫測定中用作參考標準的P89是一個帶有乳房癌肺轉移的病人的胸膜滲出液，這裡的情況是來自乳房癌的細胞轉移到肺並在胸膜上開始生長，膜包裹著肺。胸膜以同樣於腹膜的方式與癌細胞反應，只是液體稱作胸膜滲出液而不是腹水，在這些情形中(腹水和胸膜滲出液)，與液體直接接觸(或漂浮在其中)的癌細胞直接釋放AFP受體進入液體。
腹水和胸膜滲出液通過用針穿刺來收集。在其他情況下，分泌物可以自發地排到體外，例如，一個膀胱癌可以釋放AFP受體進入隨後能監測的尿中，支氣管癌可以釋放AFP受體到粘液中，其可通過強迫病人咳嗽以痰來收集。
如果惡性細胞與血液有緊密接觸，正如白血病和一些淋巴瘤的情況，則AFP受體的最高濃度是在血清中。
所有上述均是確實的情況，但不是最可能發生的，最普通癌症胃、乳房、子宮、結腸和肺將釋放AFP受體進入血流，這一體液在用於分析的液體中將顯示最高的標記物濃度。然而，由於不同的免疫化學技術的靈敏度的增加，也有可能在其它液體中檢測AFP受體，例如，大部分血清蛋白均有少量存在於唾液中。顯然獲得唾液樣品比血樣更容易，如果AFP受體的量足夠高並且所用的反應的靈敏度也足夠的話，人們可以用唾液而不是血來診斷和跟蹤，對其他體液也同樣。
總之，在某些情況下，用體液如腹水，關節液(例如關節骨癌)，胸膜滲出液、痰、腦脊髓液、尿、糞便等是方便的。在其他情況下，血或血清是最佳選擇，最後，在某些其他情況下，儘管更多的AFP受體可能存在於血清中，但為了實際或法律的原因測試其他體液如唾液或尿可能更方便，可以通過自發分泌或用一根合適的針穿刺來收集體液。
免疫化學方法這些方法可以分成2組一類在試管或平板孔中進行，其中反應所「粘連」的固相是一個人工物，另一類，其中固相是寄主的一個天然部分，例如，組織切片或血細胞塗片。前者通常稱為免疫化學測定，後者稱為免疫組織化學(在組織切片的情況)或免疫細胞化學(當細胞如在塗片上那樣疏鬆時)技術。原理是相同的；最初的材料不同，對免疫化學測定，待測或測量的分子必須在溶液中，而在免疫組織化學或免疫細胞化學測定中，檢查的分子是反應中的細胞的一部分。
這些反應的一般原理是簡單的抗體(單克隆的或來自血清或免疫動物)非常特異地識別他們與之反應的結構。如果用非常純的人清蛋白的一部分免疫一種動物，它的血清將只識別存在於可能含有非常高濃度的上百種其他蛋白的一個樣品中的清蛋白。抗體還具有對產生他們的(稱為抗原)的物質的巨大的親和力，所以，很少量的這些抗原也可以被檢測出來。
實現免疫化學或免疫組織化學(免疫細胞化學反應包括在後者中，因為唯一的差別是在一種情況下，細胞是所切割的放在玻片上的一塊組織的結構的一部分，在另一種情況下，細胞被塗在玻片上)反應的方法是相同的所檢測的物質(抗原，這裡為AFP受體)與一個特異於那個抗原的抗體反應。以某種方式標記(標籤)兩個(抗體或抗原)中的一個。在把兩者一起溫育之後，洗去過量的試劑並且以許多方式使標記物顯示，如果標記是放射性同位素則用一個合適的檢測器測量其放射性計數(通常，在這些技術中用125I並測量γ射線輻射，這些技術被總稱為放射性免疫測定(RIA)。如果在一個組織切片上進行與放射性標記物的溫育，那麼3H是優選的，在用照相乳膠包被它之後，它即暴露於玻片上，在有放射性的地方顯現銀顆粒(黑色)，可以在顯微鏡下觀察這些顆粒。
另一種非常普遍的技術是利用一種酶作為標記。酶是一種催化劑，正因為如此，它可以把一種底物轉化成一種新的產物，這裡感興趣的特徵是一個單一的酶分子(如辣根過氧化物酶或鹼性磷酸酯酶(2個最常用的))可以催化10,000個或者更多的底物分子，所以，由於存在一個10,000倍的放大因子，靈敏度是巨大的，這些反應被稱為酶免疫測定(EIA)或酶聯免疫吸附測定(ELISA)。這些酶通常在底物中產生顏色變化，在可溶性測定(免疫化學反應)中，在試管中或平板孔中的溶液改變顏色，然後測量這個變化就可以定量這一反應(用光比色計或分光光度計)。在其他情況下，酶從非離子溶液釋放離子從而改變了溶液的電導，隨後可以進行電測量。在這些技術的一個變化方案中，標記物是生物素，其隨後被與酶偶聯的抗生素蛋白識別。抗生素蛋白-生物素反應提高了測定的總靈敏度。
最近，介紹了另一類標記，這些標記是螢光色素，他們在被UV光激發在可見光譜發射質子，在暴露於一個高強度的UV刺雷射脈衝之後馬上用光電池測量反應，這些技術被稱為免疫化學發光。
不管標記分子的方式或閱讀反應的方式，反應以下述確定好的順序發生競爭測定在這種情況下，自由抗原(這裡是AFP受體)必須是以相當高的量和非常純的形式獲得，抗體(Ab)附著於固相(試管或塑料平板孔或一個合適的膜，以下更多的是後者)，將含抗原(Ab)的樣品與已知量的純的標記抗原混合，用在固相上的Ab溫育混合物，在原始樣品中的Ag越多，可以附著於固相上的給定量的Ab上的標記Ag越少(Ag與Ab量比較處於飽和狀態)，通過針對含有已知量的非標記Ag的溶液的外推法定量反應。這項技術只適用於可溶性抗原，對組織樣品沒有用途，競爭測定具有的主要優點是它們只需要一個抗體。
三文治技術有許多變化方案傳統的夾心ELISA包括把Ab化學地附著於固相，然後加入含有Ag的待測樣品，稀釋液是使反應在過量的Ab中進行。在溫育幾分鐘到幾小時後，洗去過量的試劑並加入第二抗體，這第二抗體必須識別Ag分子上不同於第一Ab識別的位點的位點，否則，第一Ab將佔據位點而不發生反應(除非Ag具有多於1個第二Ab識別的相同的結合位點，這種情況很少見)。第二抗體也過量存在以識別所有的Ag，這第二Ab是被標記的。在又一次清洗之後讀出反應。夾心技術有一個優點，那就是不需要純Ag，缺點是反應時間較長(至少需要2次溫育)並需要2個不同的抗體。
「一片」夾心被用於本例中並被用於大多數組織中上的免疫組織化學反應中。這裡，Ag被固定在固相上，然後在其上溫育標記的Ab(只有1個Ab)。當用試管作固相時，缺點是Ag附著於試管的方式可能影響反應的強度並且「粘度」可能依賴於樣品中在一個病人的血清與另一個之間變化很大的其他組份(這是因為相對於結合Ag到它的Ab上，將蛋白質結合到試管或平板孔的玻璃或塑料的力是靜電力並很弱)。為了避免這樣是用過量的第一Ab進行上述雙夾心。如果附著於固相的第一抗體或多或少是不相干的，由於與固相的非特異結合總是用相同於測定中的產物(第一Ab製備液)，因而量總是足夠的，從一個樣品到另一個樣品也沒有變化。這裡在癌症和非癌症病人之間的實驗差別是它們不能用所用的塑料板的包被的不同來解釋。
關於固相其可以是在顯微鏡玻片上的組織或一個通常通過靜電力附著分子的合適的表面(製備液通常剛好在試管中溫育幾個小時然後洗滌，蛋白質仍然附著於玻璃或塑料上)。然而在其他一些情況下，固相可以是通常由尼龍或硝酸纖維素做的膜，這些膜是白色的。如果一旦用Ag或Ab包被膜，則實現了一個類似於在顯微鏡組織切片上實現的測定並且利用一種不改變顏色而是產生有顏色的沉澱的底物顯色，接著在此過程結束時，有顏色的點指示反應為陽性或陰性。如果有顏色，則有反應，如果沒有顏色則反應是陰性的，這是前面所提到的「有或沒有」類型的反應的一個例子，其有巨大的優點，它不需要讀數指示儀器；有裸眼就夠了。主要的缺點是不精確。
人體中抗體的導入有幾種方法可以使病人的癌細胞暴露於抗AFP受體抗體一種方法是注射純的鼠單克隆抗體(Mab)給病人。如果惡性細胞是與血液直接接觸(如白血病)則選擇靜脈注射途徑，如果腫瘤只能從血液達到，用同樣的途徑。然而在有些情況下，其它途徑可能更好，如上所述，一些腫瘤生長在限定空間如胸腔或腹腔，在這些情況下，注射抗體直接進入腔內而不是血液可能更好。另一個得到針對AFP受體的抗體的方法是通過在寄主中誘導它們，可以用不同種類的AFP受體免疫癌症病人，在受體的人類和其他種的組成之間的細微差別可能允許在那個病人中產生抗甚至例如鼠或牛AFP受體並與自體人AFP受體交叉反應的抗體，所以，病人得到抗其本身腫瘤的「接種」。值得一提的是抗體不是在癌細胞表面阻塞受體的唯一方法，一個變性的AFP可以達到同樣的目的，甚至於AFP的一個合成片段也可以獲得那樣的結果，所以它可以用於終止腫瘤生長。
有幾種不同的方法可以獲得修飾的AFP，其為天然存在的AFP的一部分或通過分子工程從DNA合成的部分，關鍵是與AFP受體反應的AFP的部分是有活力的，但是AFP剩餘部分是不存在的或被改變或損害到足以不能實現它的功能，所有這些方法本身在現有技術中是已知的，AFP被簡單地用於這些方法中的每一種，他們是，例如用來自例如貝克曼儀器的多肽合成儀來生產與AFP受體反應的AFP的合成部分，對應於與AFP受體反應的AFP的部分的胺基酸順序進入多肽合成儀，激活了合成儀，產生了合成的多肽。或者，利用現有技術中已知的合適的載體將所希望的DNA序列導入寄主系統可以合成AFP部分，寄主系統隨後表達所期望的AFP部分，其可被收集並如果需要加以純化。或者，通常把所希望的DNA序列放入如牛受精卵中可以利用轉基因合成，那麼所期望的AFP部分從出生後動物中獲得，正如本領域所公知的。例如參見Maniatis et al.(1982)。另一種獲得所期望的AFP的方法是通過切割天然存在的AFP，用一個鏈反應劑如花菁苷溴化物切開AFP並隨後純化得到所期望的AFP部分。




雖然在前述的實施方案中已經詳細地描述了本發明，應理解的是這種描述僅是為了舉例說明，在不脫離本發明的精神和範圍內本領域熟練技術人員可以做一些變異。在下面的權利要求中限定了本發明的精神和範圍。
權利要求
1.一種抗體，其與生物學樣品中的AFP受體或AFP受體結合位點反應。
2.一種標記的抗體，其與生物學樣品中的AFP受體或AFP受體結合位點反應。
3.權利要求1或2的抗體，其同時鑑定生物學樣品中癌的存在。
4.標記的AFP，其與生物學樣品中的AFP受體或AFP受體結合位點反應。
全文摘要
一種檢測病人的癌症的方法，該方法包括把標記抗體或標記AFP導入病人的生物學樣品以使標記抗體或標記AFP與AFP受體結合位點在生物學樣品中反應的步驟，然後是在生物學材料中鑑定與標記抗體或標記AFP反應的AFP受體結合位點來確定癌的存在的步驟，優選的是，在導入步驟之前還有一個從病人身體中獲得生物學樣品的步驟。一種用於治療病人癌細胞的方法，該方法包括給病人的癌細胞導入AFP受體抗體的步驟，然後是AFP受體抗體與癌細胞的AFP受體反應來抑制癌細胞的生長或殺死癌細胞的步驟。一種監測病人方法，該方法包括治療病人的癌症的步驟，然後是在治療之後以預定間隔檢測病人的AFP受體位點水平的步驟。一種治療病人的方法，該方法包括測試病人AFP受體的步驟，如果測試表明AFP受體存在於病人中，則然後是給病人導入AFP受體抗體或AFP以便與病人的癌細胞反應的步驟。一種治療病人癌細胞的方法，該方法包括給病人癌細胞導入修飾的AFP的步驟，然後是使修飾的AFP與癌細胞的AFP受體反應來抑制癌細胞的生長或殺死癌細胞的步驟。
文檔編號A61K38/16GK1502994SQ200310104769
公開日2004年6月9日 申請日期1995年9月18日 優先權日1994年9月19日
發明者裡卡爾多·J·莫羅, 裡卡爾多 J 莫羅 申請人:裡卡爾多·J·莫羅, 裡卡爾多 J 莫羅