編碼磷酸烯醇丙酮酸:糖類磷酸轉移酶系統蛋白質的穀氨酸棒桿菌基因的製作方法

2023-10-22 21:23:37

專利名稱：：編碼磷酸烯醇丙酮酸:糖類磷酸轉移酶系統蛋白質的穀氨酸棒桿菌基因的製作方法
技術領域：
：本發明涉及分離的編碼新的穀氨酸棒桿菌PTS蛋白的核酸分子。本發明也涉及反義核酸分子，含有PTS核酸分子的重組表達載體，以及已導入表達載體的宿主細胞。本發明也進一步涉及分離的PTS蛋白，PTS突變蛋白，融合蛋白質，抗原肽，以及基於穀氨酸棒桿菌PTS基因遺傳工程提高由該生物體進行的所需化合物生產的方法。
背景技術：
：細胞中天然存在的代謝過程中的特定產物和副產物，在很多行業中具有用途，包括食品、飼料、化妝品和製藥產業。這些分子總稱為「精細化學物質」，包括有機酸、蛋白源的和非蛋白源的胺基酸、核苷酸和核苷、脂質和脂肪酸、二醇、糖類、芳香族化合物、維生素和輔因子以及酶。可以通過大規模培養產生並分泌大量特定所需分子的細菌，最方便的製備這些產品。用於這一目的的一種特別有用的生物體就是穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)，一種革蘭氏陽性非病原菌。通過菌株篩選，出現了許多產生大批所需化合物的突變株。然而，為改進特殊分子生產而進行的菌株篩選，是一個耗時並且困難的過程。
發明內容本發明提供了新的細菌核酸分子，這些分子具有多種用途。這些用途包括鑑定可以產生精細化學物質的微生物、調節穀氨酸棒桿菌或者親緣細菌中的精細化學物質的產生、穀氨酸棒桿菌或者親緣細菌的分型和鑑定、作為繪製穀氨酸棒桿菌基因組圖譜的參照點。這些新的核酸分子編碼蛋白質，此處稱為磷酸烯醇丙酮酸糖類磷酸轉移酶系統(PTS)蛋白質。穀氨酸棒桿菌是一種革蘭氏陽性需氧細菌，通常在工業中被用於大規模生產各種精細化學物質，也用於降解烴類(例如在石油洩漏中)和氧化萜品醇。因此，本發明的PTS核酸分子，可用來鑑定能用於生產精細化學物質的微生物，例如通過發酵方法。調節本發明PTS核酸分子的表達，或者修飾本發明PTS核酸分子的序列，可以用於調節微生物中一種或者多種精細化學物質的生產(例如，提高棒桿菌或者短桿菌中一種或者多種精細化學物質的產生)。本發明PTS核酸分子可用於鑑定一種微生物是否是穀氨酸棒桿菌或者其親緣菌株，或者鑑定微生物混合群體中穀氨酸棒桿菌或者其親緣菌株的存在。本發明提供了許多穀氨酸棒桿菌基因的核酸序列；在嚴格條件下，用探針探查從單一微生物或者混合微生物群體培養物中提取的基因組DNA，該探針覆蓋了穀氨酸棒桿菌基因特有的一段區域，可以確定是否有該微生物存在。儘管穀氨酸棒桿菌本身是非病原性的，但是它與人體中的病原菌種有關，例如白喉棒狀菌(Corynebacteriumdiphtheriae)(白喉致病原)；探測這種微生物具有重大的臨床實用性。本發明PTS核酸分子也可以用作繪製穀氨酸棒桿菌基因組圖譜的參照點，或者繪製其親緣菌株基因組圖譜的參照點。相似的，這些分子，或者其變體或其部分，可以用作遺傳工程棒桿菌或者短桿菌的遺傳標記。例如，本發明新核酸分子編碼的PTS蛋白，能夠把像是葡萄糖這樣的高能量含碳分子轉運進穀氨酸棒桿菌，或者參與該微生物中的細胞內信號傳導。考慮到可在穀氨酸棒桿菌中使用的克隆載體的實用性，例如在Sinskeyetal.，美國專利編號No.4,649,119中公開的，並且考慮到穀氨酸棒桿菌和親緣短桿菌菌種(例如乳發酵短桿菌)的遺傳操作技術(Yashihamaetal，J.Bacteriol.162591-597(1985)；Katsumataetal.，J.Bacteriol.159306-311(1984)；以及Santamariaetal.，J.Gen.Microbiol.1302237-2246(1984))，本發明的核酸分子可用於該生物體的遺傳工程，使之成為一種或者多種精細化學物質更好的或者更有效的生產者。可以修飾本發明的PTS分子，從而使得一種或者多種精細化學物質的產量、生產和/或生產效率得到提高。例如，通過修飾一種參與葡萄糖攝取的PTS蛋白，可以優化其活性，使得葡萄糖攝取數量或者葡萄糖被轉運進細胞的速率得到提高。細胞內葡萄糖或者其他糖類降解可以提供能量，這些能量可用於推動能量不利的生化反應，例如那些涉及精細化學物質生物合成的反應。降解也提供了某些精細化學物質生物合成所必需的中間體或者前體分子，例如胺基酸、維生素和輔因子。通過修飾本發明PTS分子以增加細胞內高能碳分子的數量，既可以增加完成生產一種或者多種精細化學物質所必需的代謝途徑的能量供給，又可以增加這種生產所需要的細胞內代謝物質庫。另外，本發明PTS分子可以參與一條或者多條細胞內信號傳導途徑，這些信號傳導途徑可以影響穀氨酸棒桿菌中一種或者多種精細化學物質的產量和/或生產速率。例如，一旦細胞內存在足夠數量的糖類，從細胞外介質中輸入一種或者多種糖類所必需的蛋白質(例如，HPr，EnzymeI，或者EnzymeII複合體中的一種成分)經常被翻譯後修飾，從而使它們不能再把糖輸入到細胞內。當轉運系統關閉時糖的數量，對於維持細胞正常功能來說可能是足夠的，這可能限制了所需化學物質的過量生產。因此，修飾本發明PTS蛋白而使其對這種負調節不再有反應是很值得做的，所以，允許細胞內一種或者多種糖達到更高的濃度，並且通過反應延伸，從含有這種PTS蛋白突變體的生物體中，便可以更加有效的生產或者更大產量的獲得一種或者多種精細化學物質。本發明提供了新的編碼蛋白質的核酸分子，這種蛋白質在此處稱作磷酸烯醇丙酮酸糖類磷酸轉移酶系統(PTS)蛋白質，它們參與把高能碳分子(例如，葡萄糖、果糖、蔗糖)輸入穀氨酸棒桿菌，和/或參與一條或者多條穀氨酸棒桿菌細胞內信號傳導途徑。這些蛋白質的實例，包括那些在表1中列出的基因所編碼的蛋白質。因此，本發明的一個方面涉及，分離含有一段編碼一種PTS蛋白或者其生物活性部分的核酸序列的核酸分子(例如，cDNA，DNA，或者RNA)，以及分離適合作為探測或擴增PTS編碼核酸(例如DNA或者RNA)的引物或者雜交探針的核酸片段。在特別優選的實施方案中，分離的核酸分子包含一段列在序列表中的序列號為奇數的核酸序列(例如，SEQIDNO1，SEQIDNO3，SEQIDNO5，SEQIDNO7)或者一條這種核苷酸序列的編碼區域或者其互補序列。在其他特別優選的實施方案中，分離的本發明核酸分子包含與序列表中的序列號為奇數的核苷酸序列(例如，SEQIDNO1，SEQIDNO3，SEQIDNO5，SEQIDNO7)或者其部分有至少大約50％同源性，優選的有至少大約60％的同源性，更優選的有至少大約70％，80％，或90％的同源性，甚至更優選的有至少大約95％，96％，97％，98％，99％或者更高的同源性。在其他優選的實施方案中，已分離的核酸分子編碼列在序列表中的偶數序列號胺基酸序列(例如，SEQIDNO2，SEQIDNO4，SEQIDNO6，SEQIDNO8)。本發明優選的PTS蛋白也優選具有至少一種此處描述的PTS活性。在另一個實施方案中，已分離的核酸分子編碼一種蛋白質或者其部分，其中的蛋白質或者其部分包含一段胺基酸序列，該序列與本發明的胺基酸序列(例如，在序列表中偶數序列號的序列)有充分的同源性，例如，與本發明的胺基酸序列有充分的同源性而使得該蛋白質或者其部分具有PTS活性。優選，核酸分子編碼的蛋白質或者其部分，具有參與把高能碳分子(例如，葡萄糖、果糖、蔗糖)輸入穀氨酸棒桿菌的能力，和/或參與一條或者多條穀氨酸棒桿菌細胞內信號傳導途徑的能力。在一個實施方案中，核酸分子編碼一種蛋白質與本發明的胺基酸序列(例如，從序列表中的偶數序列號序列中選出的完整胺基酸序列)有至少大約50％同源性，優選的有至少大約60％的同源性，更優選的有至少大約70％，80％，90％的同源性，最優選的有至少大約95％，96％，97％，98％，99％或者更高的同源性。在另一個優選的實施方案中，蛋白質是全長的穀氨酸棒桿菌蛋白質，該蛋白質與本發明的全長胺基酸序列(由顯示在相應序列表中的奇數序列號核酸序列(例如，SEQIDNO1，SEQIDNO3，SEQIDNO5，SEQIDNO7)開放閱讀框架編碼的)充分同源。在另一個優選的實施方案中，分離的核酸分子來自穀氨酸棒桿菌，並編碼一種蛋白質(例如一種PTS融合蛋白)，該蛋白質包含一段生物活性區域，該區域與本發明的一種胺基酸序列(例如，序列表偶數序列號序列中的一個序列)有至少大約50％或者更高的同源性，並且該蛋白質能夠參與把高能碳分子(例如，葡萄糖、果糖、蔗糖)輸入穀氨酸棒桿菌，和/或參與一條或者多條穀氨酸棒桿菌細胞內信號傳導途徑，或者擁有一種或者多種列在表1中的活性，並且該蛋白質還包含有一段編碼異源多肽或者調節區域的異源核酸序列。在另一個實施方案中，分離的核酸分子至少有15個核苷酸的長度，並且在嚴格條件下與含有本發明核苷酸序列(例如，在序列表中奇數序列號序列)的核酸分子雜交。優選，分離的核酸分子與天然存在的核酸分子一致。更加優選，分離的核酸分子編碼天然存在的穀氨酸棒桿菌PTS蛋白，或者其生物活性部分。本發明的另一個方面涉及載體的，例如含有本發明核酸分子的重組表達載體，和被引入這種載體的宿主細胞的。在一個實施方案中，通過在合適的培養基中進行培養，這種宿主細胞被用於生產PTS蛋白。然後可以從培養基或者宿主細胞中分離該PTS蛋白。另外，本發明的另一個方面涉及一種經過遺傳改變的微生物，PTS基因已經被引入其中或者已經被改變。在一個實施方案中，通過引入作為轉基因的編碼野生型或者突變型PTS序列的本發明核酸分子，改變了該微生物的基因組。在另一個實施方案中，改變了該微生物基因組中的內源PTS基因，例如，通過使用已改變的PTS基因進行同源重組而進行功能性破壞。在另一個實施方案中，該微生物中內源的或者引入的PTS基因通過一個或者多個點突變、缺失或者倒位而被改變，但是仍然能編碼功能PTS蛋白。在另一個實施方案中，改變微生物PTS基因的一個或者多個調節區域(例如，啟動子、阻抑物或者誘導物)，從而調節PTS基因的表達。在優選的實施方案中，微生物屬於棒桿菌種或者短桿菌種，特別優選是穀氨酸棒桿菌。在優選的實施方案中，也使用微生物生產所需的化合物，例如胺基酸，特別優選是賴氨酸。另一方面，本發明提供了一種鑑定受試者中白喉棒桿菌存在或者活性的方法。該方法包括對受試者中本發明的一種或者多種核酸或者胺基酸序列(例如，列在序列表中SEQIDNO1至34的序列)的檢測，從而可以檢測受試者中穀氨酸棒桿菌的存在或者活性。另外，本發明的另一個方面涉及已分離出PTS蛋白或者其部分，例如其生物活性部分。在一個優選的實施方案中，分離的PTS蛋白或者其部分可以參與把高能碳分子(例如，葡萄糖、果糖、蔗糖)輸入穀氨酸棒桿菌，並且也可以參與一條或者多條穀氨酸棒桿菌細胞內信號傳導途徑。在另一個優選的實施方案中，已分離的PTS蛋白或者其部分與本發明的一種胺基酸序列(例如，序列表偶數序列號序列中的一個序列)有足夠高的同源性，使得該蛋白質或者其部分可參與把高能碳分子(例如，葡萄糖、果糖、蔗糖)輸入穀氨酸棒桿菌的能力，和/或也參與一條或者多條穀氨酸棒桿菌細胞內信號傳導途徑的能力。本發明也提供了PTS蛋白的分離製品。在優選的實施方案中，PTS蛋白包含本發明的胺基酸序列(例如，序列表偶數序列號序列中的一個序列)。在另一個優選的實施方案中，本發明與分離的全長蛋白質有關，該蛋白質與本發明的完全胺基酸序列(序列表偶數序列號序列中的一個序列)(由顯示在相應序列表中的序列號為奇數的開放閱讀框架編碼)有相當高的同源性。此外，在另一個實施方案中，蛋白質與本發明的完全胺基酸序列(例如，序列表中偶數序列號序列)有至少大約50％同源性，優選的有至少大約60％的同源性，更優選的有至少大約70％，80％，或90％的同源性，最優選的有至少大約95％，96％，97％，98％，或99％或者更高的同源性。在另一個實施方案中，分離的PTS蛋白包含的胺基酸序列與本發明的一條胺基酸序列(例如，序列表中的一條偶數序列號序列)有至少大約50％或者更高的同源性，並且能夠參與把高能碳分子(例如，葡萄糖、果糖、蔗糖)輸入穀氨酸棒桿菌，和/和參與一條或者多條穀氨酸棒桿菌細胞內信號傳導途徑，或者具有表1中列出的一種或者多種活性。另外，分離的PTS蛋白可以含有由核酸序列編碼的胺基酸序列，該核酸序列與列在序列表中的偶數序列號的一個核酸序列雜交，例如在嚴格條件下雜交，或者與該核酸序列有至少大約50％的同源性，優選的有至少大約60％的同源性，更優選的有至少大約70％，80％，或90％的同源性，甚至更優選的有至少大約95％，96％，97％，98％，或99％或者更高的同源性。PTS蛋白的優選形式同樣具有一種或者多種此處描述的生物活性，也是優選的。PTS多肽或者其生物活性部分，可以有效的連接到非PTS多肽上而形成融合蛋白質。在優選的實施方案中，該融合蛋白質具有不同於單獨PTS蛋白本身的活性。在另外優選的實施方案中，該融合蛋白質引起所需穀氨酸棒桿菌精細化學物質產量、生產和/或生產效率的增加。在特別優選的實施方案中，把該融合蛋白整合進宿主細胞，可以調節細胞中所需化合物的生產。另一方面，本發明提供了篩選可調節PTS蛋白活性的分子的方法。該分子通過與蛋白質分子本身或者底物相互作用，或者與PTS蛋白的配偶體結合，或者通過調節本發明PTS核酸分子的轉錄或者翻譯來調節PTS蛋白活性。本發明的另一個方面涉及生產精細化學物質的方法。該方法涉及培養含有一種載體的細胞，該載體指導本發明PTS核酸分子的表達，從而產生精細化學物質。在一個優選的實施方案中，該方法還包含獲得含有該載體細胞的步驟，在該步驟中，使用可以指導PTS核酸分子表達的載體轉染細胞。在另一個優選的實施方案中，該方法還包含從培養基中回收精細化學物質的步驟。在一個特別優選的實施方案中，細胞是棒桿菌種或者短桿菌種，或者選自列在表3中的那些菌株。本發明的另一方面涉及調節微生物中分子產生的方法。這種方法包括使用調節PTS蛋白活性或者PTS核酸表達的藥劑接觸細胞，使得細胞的相關活性相對於缺少這種藥劑時的活性發生了改變。在一個優選的實施方案中，為了攝取一種或者多種糖類，調節細胞，使得這種微生物所需精細化學物質的產量或者產生效率得到提高。調節PTS蛋白活性的藥劑，可以是刺激PTS蛋白活性或者PTS核酸表達的藥劑。刺激PTS蛋白活性或者PTS核酸表達的藥劑的實例，包括小分子、活性PTS蛋白、以及編碼已導入細胞的PTS蛋白的核酸。抑制PTS蛋白活性或者表達的藥劑的實例包括小分子和反義PTS核酸分子。本發明的另一個方面，涉及調節細胞中所需化合物產量的方法，包括把野生型或者突變型PTS基因導入細胞，該基因或者保留在單獨的質粒上，或者整合到宿主細胞基因組中。如果整合到宿主細胞基因組中，這種整合可以是任意的，或者是通過同源重組發生的，從而使得引入的拷貝取代天然基因，導致細胞中所需化合物的產生得到調節。在一個優選的實施方案中，該產量得到增加。在另一個優選的實施方案中，所說的精細化學物質是胺基酸。在一個特別優選的實施方案中，所說的胺基酸是L-賴氨酸。具體實施例方式本發明提供了PTS核酸和蛋白質分子，它們參與穀氨酸棒桿菌攝取高能碳分子(例如，葡萄糖、果糖、蔗糖)，並且也可以參與該微生物中一條或者多條細胞內信號傳導途徑。本發明的分子可用於調節微生物中精細化學物質的生產。這種調節，可能是由於細胞內所需產生的高能分子水平的增加，例如，ATP，GTP和其他用於推動像是精細化學物質生物合成這樣的能量不利生化反應的分子。精細化學物質生產的調節也可能是由於這種事實，即很多糖類的降解產物被用作其他生物合成途徑的中間體或者前體，包括某些精細化學物質的生物合成途徑。另外，已知PTS蛋白參與某些細胞內信號傳導途徑，它們可能對一條或者多條精細化學物質的代謝途徑具有調節活性；通過利用這些PTS蛋白，可以激活精細化學物質的生物合成途徑或者抑制其化學降解途徑。本發明的各個方面進一步詳細說明如下。I.精細化學物質「精細化學物質」這個詞是本領域熟知的，包括生物體產生的在各種產業中使用的分子，例如但不僅僅局限於，製藥、農業和化妝品產業。這種化合物包括有機酸，例如酒石酸、衣康酸和二氨基庚二酸，蛋白質源和非蛋白質源胺基酸，嘌呤鹼基和嘧啶鹼基，核苷，以及核苷酸(例如像是描述在Kuninaka，A.(1996)Nucleotidesandrelatedcompounds，p.561-612，inBiotechnologyvol.6，Rehmetal.，eds.VCHWeinheim及其所含參考文獻中的)，脂質，飽和和不飽和脂肪酸(例如花生四烯酸)，二醇(例如，丙烷二醇和丁烷二醇)，芳香族化合物(例如，芳香胺、香草醛和靛)，維生素和輔因子(參見Ullmann’sEncyclopediaofIndustrialChemistry，vol.A27，「Vitamins」，p.443-613(1996)VCHWeinheimandreferencestherein；andOng，A.S.，Niki，E.Packer，L.(1995)「Nutrition，Lipids，Health，andDisease」ProceedingsoftheUNESCO/ConfederationofScientificandTechnologicalAssociationsinMalaysia，andtheSocietyforFreeRadicalResearch-Asia，heldSept.1-3，1994atPenang，Malaysia，AOCSPress，(1995))，酶，聚酮化合物(ployketides)(Caneetal.，(1998)Science28263-68)，以及所有在Gutcho(1983)ChemicalsbyFermentation，NoyesDataCorporation，ISBN0818805086及其參考文獻中描述的化學物質。某些這些精細化學物質的代謝和用途進一步詳細說明如下。A.胺基酸的代謝和用途胺基酸包括所有蛋白質的基本結構單元，同樣也是所有生物體正常細胞生物功能所必需的。「胺基酸」這個詞是本領域熟知的。蛋白質源的胺基酸有20種，是蛋白質的結構單元，相互之間由肽鍵相連接，而非蛋白質源胺基酸(已知的有幾百種)通常情況下不會出現在蛋白質中(參見Ulmann’sEncyclopediaofIndustrialChemistry，vol.A2，p.57-97VCHWeinheim(1985))。雖然L-胺基酸通常是天然存在蛋白質中的唯一類型，但是胺基酸可以是D-或者L-光學構型。20種蛋白質源胺基酸中每一種的生物合成或者降解途徑，都在原核細胞或者真核細胞中有各自的特點(例如參見Stryer，L.Biochemistry，3rdedition，pages578-590(1988))。「必需」胺基酸(組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸和纈氨酸)之所以這樣命名，是因為這些胺基酸生物合成複雜通常是必需的營養條件，它們可以通過簡單的生物合成途徑轉化為其餘的11種「非必需」胺基酸(丙氨酸、精氨酸、天冬醯胺、天冬氨酸、半胱氨酸、穀氨酸、穀氨醯胺、甘氨酸、脯氨酸、絲氨酸、酪氨酸)。雖然高等生物確實具有合成一些這種胺基酸的能力，但是為了正常的蛋白質合成必須從飲食中補充必需胺基酸。它們除了在蛋白質合成中的功能，這些胺基酸就其自身來說是有趣的化學物質，並且它們中的很多在食品、飼料、化學、化妝品、農業和製藥產業中具有各種應用。賴氨酸在營養方面不僅對於人類是一種重要的胺基酸，而且對於像是家禽和豬這樣單胃動物也是重要的。穀氨酸是最常用的風味添加劑(穀氨酸單鈉，MSG)，並且廣泛應用於整個食品產業，如同天冬氨酸、甘氨酸、半胱氨酸一樣。甘氨酸、L-甲硫氨酸和色氨酸全部用於製藥產業。穀氨醯胺、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、組氨酸、精氨酸、脯氨酸、絲氨酸和丙氨酸都應用在製藥產業和化妝品產業中。蘇氨酸、色氨酸和D/L-甲硫氨酸是常用的飼料添加劑(Leuchtenberger，W.(1996)Aminoaids-technicalproductionanduse，p.466-502inRehmetal.(eds.)Biocemistryvol.6，chapter14a，VCHWeinheim)。另外，這些胺基酸作為合成胺基酸和蛋白質合成的前體也是很有用的，例如N-乙醯半胱氨酸，S-羧甲基-L-半胱氨酸，(S)-5-羥色氨酸，以及其他在Ulmann’sEncyclopediaofIndustrialChemistry，vol.A2，p.57-97VCHWeinheim，1985中描述的分子。在能夠產生天然胺基酸的生物體中，例如細菌，這些天然胺基酸的生物合成已經了解得很充分(細菌胺基酸的生物合成及其調節，參見Umbarger，H.E.(1978)Ann.Rev.Biochem.47533-606)。天冬氨酸由α-酮戊二酸還原型氨化合成，後者是檸檬酸循環的中間體。穀氨醯胺、脯氨酸和精氨酸都是由穀氨酸依次產生的。絲氨酸的生物合成是一個三步的過程，開始於3-磷酸甘油酸(糖酵解的中間體)，經過氧化作用、轉氨作用、水解作用各步驟之後，終止於該胺基酸。半胱氨酸和甘氨酸都由絲氨酸產生；前者由高半胱氨酸與絲氨酸縮合而成，後者是把側鏈β-碳原子轉移到四氫葉酸得到的，該反應是由絲氨酸羥甲基轉移酶催化的。苯丙氨酸和酪氨酸，由4-磷酸赤蘚糖和磷酸烯醇丙酮酸在一條9步的生物合成途徑中合成，它們是糖酵解途徑和戊糖磷酸途徑的前體，這兩條途徑只是在合成預苯酸之後不同。色氨酸也可以由這兩種初始分子產生，但是其合成是一個11步的途徑。酪氨酸也可以由苯丙氨酸合成，其反應是由苯丙氨酸羥化酶催化的。丙氨酸、纈氨酸和亮氨酸都是糖酵解終產物丙酮酸的生物合成產物。天冬氨酸由草醯乙酸合成，後者是檸檬酸循環的中間體。天冬醯胺、甲硫氨酸、蘇氨酸和賴氨酸都由天冬氨酸轉化而成。異亮氨酸由蘇氨酸形成。通過一條複雜的9步的途徑，可以從一種活性糖，5-磷酸核糖-1-焦磷酸，產生組氨酸。超出細胞蛋白質合成所需的胺基酸是不能儲存的，而是被降解後為細胞主要代謝途徑提供中間體(評論參見Stryer，L.Biochemistry3rded.Ch.21「AminoAcidDegradationandtheUreaCycle」p.495-516(1988))。儘管細胞能轉化多餘的胺基酸為有用的代謝中間體，但是產生胺基酸要消耗很多的能量、前體分子和合成所需的酶。因此用反饋抑制來調節胺基酸的生物合成是不令人吃驚的，特殊胺基酸的存在可以減慢或者完全停止其自身的產生(對於胺基酸生物合成途徑反饋機制的評論，參見Stryer，L.Biochemistry3rded.Ch.24「BiosynthesisofAminoAcidandHeme」p.575-600(1988))。因此，任何特定胺基酸的產量都被細胞內存在的胺基酸數量所限制。B.維生素、輔因子和營養製品的代謝和用途維生素、輔因子和營養製品包括另一組分子，雖然其他生物，例如細菌，可以合成這些分子，但是高等動物失去了合成它們的能力而只能攝取。這些分子或者其本身是生物活性物質，或者是生物活性物質的前體，該生物活性物質可以是電子載體或者各種代謝途徑的中間體。除了其營養價值，這些化合物作為色素、抗氧化劑和催化劑或者其他加工助劑也有重大的工業價值。(對於這些化合物結構、活性和工業應用的評述，參見例如，Ullmann’sEncyclopediaofIndustrialChemistry，「Vitamins」vol.A27，p.443-613VCHWeinheim1996.)「維生素」這個詞是本領域熟知的，包含了生物體正常功能所需但是又不能自身合成的營養素。維生素可以包括輔因子和營養製品化合物。術語「輔因子」包含了進行正常酶活性所需的非蛋白質化合物。這些化合物可以是無機的或者有機的；本發明的輔因子分子優選是有機的。「營養製品」這個詞包含了對植物和動物，特別是人體有益的飲食增補劑。這些分子的實例是維生素、抗氧化劑和某些脂質(例如多飽和脂肪酸)。在能夠產生這些分子的生物體，例如細菌中這些分子的生物合成，大部分已經被鑑定(Ullman’sEncyclopediaofIndustrialChemistry，「Vitamins」vol.A27，p.443-613，VCHWeinheim，1996；Michal，G.(1999)BiochemicalPathwaysAnAtlasofBiochemistryandMolecularBiology，JohnWileySons；Ong，A.S.，Niki，E.Packer，L.(1995)「Nutrition，Lipids，Health，andDisease」ProceedingsoftheUNESCO/ConfederationofScientificandTechnologicalAssociationsinMalaysia，andtheSocietyforFreeRadicalResearch-Asia，heldSept.1-3，1994atPenang，Malaysia，AOCSPressChampaign，ILX，374S)硫胺素(維生素B1)是由嘧啶和噻唑經化學連接產生的。核黃素(維生素B2)由5』-三磷酸鳥嘌呤核苷和5』-磷酸核糖合成。核黃素依次用於合成黃素單核苷酸(FMN)和黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)。合稱為「維生素B6」的一組化合物(例如，吡哆醇、吡哆胺，5』-磷酸吡哆醛，以及商品化的鹽酸吡哆醛)都是共同結構單元5-羥基-6-甲基吡啶的衍生物。泛酸鹽(泛酸，(R)-(+)-N-(2，4-二羥基-3，3-二甲基-1-氧代丁基)-β-丙氨酸)可由化學合成或者發酵得到。泛酸鹽生物合成的最後一步包括ATP驅動的β-丙氨酸和泛解酸的縮合。負責轉化成泛解酸和β-丙氨酸酶，以及縮合成泛酸鹽的酶都是已知的。泛酸鹽的代謝活性形式是輔酶A，其生物合成過程是5個酶促步驟。泛酸鹽、5』-磷酸吡哆醛、半胱氨酸和ATP是輔酶A的前體。這些酶不僅催化泛酸鹽的形成，也催化(R)-泛解酸、(R)-pantolacton，(R)-泛醇(維生素原B5)泛醯巰基乙胺(及其衍生物)的產生。在微生物中由前體分子庚二醯輔酶A到生物素的生物合成研究得很詳細，並且所涉及的幾個基因已被鑑定。很多相應的蛋白質也被發現參與了鐵簇(Fe-cluster)的合成，並且是nifS家族蛋白質成員。硫辛酸來自辛酸，在能量代謝中用作輔酶，可以成為丙酮酸脫氫酶複合物和α-酮戊二酸脫氫酶複合物的一部分。葉酸鹽是一組葉酸的衍生物，依次來自L-穀氨酸、對氨基苯甲酸和6-甲基蝶呤。起始於代謝中間體5』-三磷酸鳥嘌呤(GTP)、L-穀氨酸和對氨基苯甲酸的葉酸及其衍生物的生物合成，在某些微生物中有詳細的研究。類咕啉(例如鈷胺素，以及特別是維生素B12)和卟啉都屬於以四吡咯環體系為特徵的化學物質。維生素B12的生物合成是這樣的複雜，以至於還沒有徹底了解其特徵，但是許多涉及的酶和底物現在已知。煙酸(煙酸鹽)和菸鹼是吡啶底衍生物，也被稱作「尼亞新」。尼亞新是重要輔酶NAD(煙醯胺腺嘌呤二核苷酸)和NADP(煙醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)及其還原形式的前體。儘管有些這樣的化合物也可以用大規模微生物培養生產，例如核黃素、維生素B6、泛酸和生物素，但是大規模生產這些化合物很大程度還依賴於非細胞化學體系。只有維生素B12，由於其合成的複雜性，只能用發酵生產。體外方法需要相當多的物質和時間投入，經常花費很大。C.嘌呤、嘧啶、核苷和核苷酸的代謝和用途嘌呤和嘧啶代謝基因及其相應的蛋白質，是腫瘤疾病治療和病毒感染治療重要的目標物。術語「嘌呤」和「嘧啶」，包含了作為核酸、輔酶和核苷酸組成的含氮鹼基。術語「核苷酸」包含核酸分子基本結構單元，核酸分子由含氮鹼基、戊糖(對於RNA，該戊糖是核糖；對於DNA，該戊糖是脫氧核糖)和磷酸組成。術語「核苷」包含了作為核苷酸前體的分子，但是缺少核苷酸所具有的磷酸部分。通過抑制這些分子的生物合成，或者抑制為合成核酸分子而進行的移動，可能會抑制RNA和DNA的合成；通過定向腫瘤細胞的方式來抑制該活性，腫瘤細胞分裂和複製的能量可能會得到抑制。另外，有的核苷酸不用於形成核酸，而是用作能量儲存(例如AMP)或者輔酶(例如FAD和NAD)。有些出版物描述了通過影響嘌呤和/或嘧啶的代謝，這些化學物質作為這些醫學指徵的使用(例如，Christopherson，R.I.andLyons，S.D.(1990)「Potentinhibitorsofdenovopyrimidineandpurinebiosynthesisaschemotherapeuticagents.」Med.Res.Reviews10505-548)。涉及嘌呤和嘧啶代謝酶類的研究，集中在可以使用的新藥開發上面，例如，作為免疫抑制劑或者抗增生劑(Smith，J.L.，(1995)「Enzymeinnucleotidesynthesis.」Curr.Opin.Struct.Biol.5752-757；(1995)BiochemSoc.Transact.23877-902)。然而，嘌呤和嘧啶鹼基，核苷和核苷酸還具有另外的作用作為許多精細化學物質生物合成的中間體(例如，硫胺素、S-腺苷甲硫氨酸、葉酸、或者核黃素)，作為細胞能量載體(例如ATP或者GTP)，而作為化學物質本身，通常用作風味增強劑(例如IMP或者GMP)或者幾種醫學應用(參見，例如，Kuninaka，A.(1996)NucleotidesandRelatedCompoundsinBiotechnologyvol.6，Rehmetal.，eds.VCHWeinheim，，p.561-612)。同樣，涉及嘌呤、嘧啶、核苷或者核苷酸代謝的酶，日漸成為開發出的用作保護農作物的化學物質的作用目標，這些化學物質包括殺真菌劑、除草劑和殺蟲劑。細菌中這些化合物的代謝具有特徵(評論參見，例如Zalkin，H.andDixon，J.E.(1992)「denovopurinenucleotidebiosynthesis」，inProgressinNucleicAcidResearchandMolecularBiology，vol.42，AcademicPress，p.259-287；andMichal，G.(1999)「NucleotidesandNucleosides」，Chapter8inBiochemicalPathwaysAnAtlasofBiochemistryandMolecularBiology，WileyNewYork)。嘌呤代謝一直是重點研究課題，而且它是細胞正常功能所必需的。高等動物中受損的嘌呤代謝能夠造成嚴重的疾病，例如痛風。嘌呤核苷酸由5』-磷酸核糖合成，通過一系列步驟，經過中間體5』-磷酸次黃嘌呤核苷(IMP)，最終產生5』-單磷酸鳥嘌呤(GMP)和5』-單磷酸腺嘌呤(AMP)，並由它們形成用作核苷酸的三磷酸形式。這些化合物也用作能量儲存，其降解為細胞中各種不同的生化過程提供能量。嘧啶的生物合成，是通過由5』-磷酸核糖形成5』-磷酸尿嘧啶核苷(UMP)。UMP接下來轉變成5』-三磷酸胞嘧啶(CTP)。所有這些核苷酸的脫氧形式都是經過一步還原反應產生的，由核苷酸的二磷酸核糖形式到核苷酸的二磷酸脫氧核糖形式。一經磷酸化，這些分子就可以參與DNA的合成了。D.海藻糖的代謝和用途海藻糖包括兩個葡萄糖分子，通過α，α-1，1連接。通常在食品產業中用作增甜劑、乾燥食品或者冷凍食品添加劑，以及飲料當中。而且，它也應用在製藥、化妝品和生物技術產業(參見，例如Nishimotoetal.，(1998)U.S.PatentNo.5,759,610；Singer，M.A.andLindquist，S.(1998)TrendsBiotech.16460-467；Paiva，C.L.A.andPanek，A.D.(1996)Biotech.Ann.Rev.2293-314；andShiosaka，M.(1997)J.Japan17297-102)。很多微生物中的酶可以產生海藻糖，並將其天然釋放到周圍培養基中，可以使用技術上熟知的方法從中進行收集。II.磷酸烯醇丙酮酸糖類磷酸轉移酶系統細胞在培養基中的快速生長和分裂，在很大程度上依賴於細胞攝取和利用高能分子的程度，例如葡萄糖或者其他糖類。存在有不同的運輸蛋白，它們把不同的糖類運輸到細胞中。存在有糖類轉運蛋白質，例如轉運葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、核糖、山梨糖、核酮糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖，或者棉子糖，也有澱粉和纖維素降解產物的轉運蛋白質。其他轉運系統負責輸入酒精(例如甲醇或者乙醇)、烷烴、脂肪酸，以及像乙酸或乳酸這樣的有機酸。在細菌中，通過各種機制，糖類可以經過細胞膜被轉運進細胞。除了和質子的共轉運以外，最常使用的糖類攝取過程之一是磷酸烯醇丙酮酸糖類磷酸轉移酶系統(PTS)。該系統不僅催化糖類和己糖醇的轉運(伴隨磷酸化)，而且還調節適應於糖類有效性的細胞代謝。該PTS系統只存在於細菌中，而不出現在古細菌和真核細胞中。功能方面，PTS系統包含兩種細胞質蛋白，酶I和HPr，以及不定數目的糖類特異的整合和外周膜蛋白轉運複合體(每種都被稱為帶有糖類特異下標的「酶II」，例如「酶IIGlu」表示結合葡萄糖的酶II複合體)。已知對單糖、二糖或三糖特異的酶II，像是對葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、核糖、山梨糖、核酮糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖或者棉子糖。酶I把磷酸基團從磷酸烯醇丙酮酸(PEP)轉移至磷酸載體蛋白HPr。然後HPr再把磷酸基團轉移至不同的酶II轉運複合體。雖然酶I和HPr的胺基酸序列在所有的細菌中是非常相似的，PTS轉移體還是可以分為結構不相關的幾個家族。另外，這些基因的數目和同源性在不同的細菌中也各不相同。大腸桿菌基因組編碼38個不同的PTS蛋白，其中33個是分屬於22個不同轉移體的亞基。生殖器支原體(M.genitalium)基因組含有酶I和HPr基因各一個，而只有兩個PTS轉移體基因。T.palladium和沙眼衣原體(C.trachomatis)含有酶I和HPr相似蛋白基因，但是沒有PTS轉移體基因。所有PTS轉移體包含3個功能單元，IIA，IIB和IIC，它們或者是複合體中的蛋白質亞基(例如，IIAGlcIICBGlc)或者是單多肽鏈的結構區域(例如，IICBAGlcNAc)。IIA和IIB依次把磷酸基團從HPr傳遞到被轉運的糖類。IIC含有糖類結合位點，並且跨越內膜6或8次。糖類轉移與IIB區域的瞬時磷酸化是偶合的。酶I，HPr和IIA在其組氨酸殘基發生磷酸化，而IIB亞基是在組氨酸殘基或半胱氨酸殘基發生磷酸化，這依賴於所涉及的特定轉運體。輸入後糖類的磷酸化，有這樣的優點，即可以阻止糖類擴散過細胞膜而回到培養基中，因為帶電荷的磷酸基團不能穿過細胞膜的疏水核心。有些PTS蛋白除了活躍的糖類轉運功能之外，還在細胞內信號傳導中發揮重要作用。這些亞基通過變構或者磷酸化來調節它們的目的物。它們的調節活性隨著磷酸化程度(例如，非磷酸化形式與磷酸化形式的比率)而變化，而後者又隨著糖依賴去磷酸化和磷酸烯醇丙酮酸依賴再磷酸化的比率而變化。大腸桿菌中這種PTS蛋白的細胞內調節的實例包括，通過IIAGlc去磷酸化抑制甘油激酶，而通過其磷酸化形式激活腺苷酸環化酶。而且，這些微生物中有些轉運體的HPr和IIB區域，通過轉錄抗終止子的可逆磷酸化調節基因表達。在革蘭氏陽性細菌中，HPr的活性受HPr特異的絲氨酸激酶和磷酸酶調節。例如，絲氨酸-46磷酸化的HPr，其功能是作為轉錄抑制子CcpA的輔抑制子。最後，發現未磷酸化的酶I抑制細菌趨化器中的傳感蛋白激酶CheA，該激酶在細菌糖類結合轉運系統和控制細菌運動的系統之間提供了直接聯繫(Sonenshein，A.L.，etal.，eds.Bacillussubtilisandothergram-positivebacteria.ASMWashington，D.C.；Neidhardt，F.C.，etal.，eds.(1996)EscherichiacoliandSalmonella.ASMPressWashington，D.C.；Lengeleretal.，(1999).BiologyofProkaryotes.SectionII，pp.68-87，ThiemeVerlagStuttgart)III.本發明的元件和方法本發明至少部分是建立在發現新分子的基礎上的，此處將其稱作PTS核酸和蛋白質分子，它們參與穀氨酸棒桿菌對高能碳分子(例如，葡萄糖、果糖、蔗糖)的攝取，並且也可以參與這些微生物中一條或者多條細胞內信號傳導途徑。在一個實施方案中，PTS分子行使把高能碳分子轉入細胞的功能，在細胞中這些分子降解所提供的能量可以為能量不利的生化反應供能，而且，它們的降解產物可以用作很多其他代謝途徑的中間體或者前體。在另一個實施方案中，PTS分子可以參與一條或者多條細胞內信號傳導途徑，其中PTS分子修飾形式(例如，磷酸化PTS分子)的存在，可以參與信號傳導級聯反應，該級聯反應調節一條或多條細胞過程。在一個優選的實施方案中，本發明PTS分子的活性，對於用該微生物生產所需精細化學物質有影響。在一個特別優選的實施方案中，本發明PTS分子的活性被調節，使得穀氨酸棒桿菌中一種或者多種精細化學物質的產量、生產和生產效率也得到了調節。術語「PTS蛋白」或者「PTS多肽」包含了那些參與從細胞外培養基中向細胞內部攝取一種或者多種高能化合物(例如，單糖、二糖或者寡糖，像是果糖、甘露糖、蔗糖、葡萄糖、棉子糖、半乳糖、核糖、乳糖、麥芽糖和山梨糖)的蛋白質。這些PTS蛋白也可以參與一條或者多條細胞內信號傳導途徑，例如但是不僅僅局限於，那些控制不同糖類攝取進細胞的途徑。PTS蛋白的實例包括那些由列在序列表中序列號為奇數的PTS基因編碼的蛋白質。關於PTS系統的綜合參考文獻，參見Stryer，L.(1998)Biochemistry，Chapter37「MembraneTransport」，W.H.FreemanNewYork，p.959-961；Darnell，J.etal.(1990)MolecularCellBiologyScientificAmericanBooksNewYork，p.552-553，andMichal，G.，ed.(1999)BiochemicalPathwayAnAtlasofBiochemistryandMolecularBiology，Chapter15「SpecialBacterialMetabolism」。術語「PTS基因」或者「PTS核酸序列」包含了編碼PTS蛋白的核酸序列，後者包含編碼區域以及相應的非翻譯的5』和3』序列區域。PTS基因的實例包括那些列在表1中的基因。術語「生產」或者「生產力」是本領域熟知的，包含了在給定時間和給定發酵體積內，發酵產物(例如，所需精細化學物質)的濃度(例如，每小時每升千克產物)。術語「生產效率」包含了，要達到特定的生產水平所需的時間(例如，需要多長時間才能使細胞達到特定的精細化學物質)。術語「收益」「產物/碳收益」是本領域熟知的，包含了把碳源轉化成產物(例如精細化學物質)的效率。例如，經常寫作千克產物每千克碳源。通過提高化合物的收益或者生產，可增加回收分子的數量，或者增加在給定時間內給定數量的培養物中該化合物有用回收分子的數量。術語「生物合成」或者「生物合成途徑」是本領域熟知的，包含了在細胞中，從中間化合物經過可能是多步並且是高度調控的過程，合成化合物，特別是有機化合物。術語「降解」或者一條「降解途徑」是本領域熟知的，包含了在細胞中，經過可能是多步並且是高度調控的過程，把化合物，優選是有機化合物，分解為降解產物(一般而言，是更小或者複雜性更小的分子)。術語「代謝」是本領域熟知的，包含了生物體中所發生的生化反應的全部。因而，特殊化合物的代謝(例如，像是甘氨酸這樣的胺基酸代謝)包括細胞中與該化合物相關的全部生物合成、修飾和降解途徑。術語「轉運」和「輸入」是本領域熟知的，包含了一種或者多種化合物穿過細胞膜的易化移動，而這些化合物通過別的方式不能穿過細胞膜。在另一個實施方案中，本發明的PTS分子能夠調節微生物中，例如穀氨酸棒桿菌中，所需化合物例如精細化學物質的產生。使用重組遺傳技術可以操作本發明的一種或者多種PTS分子，從而調節其活性。例如，參與PTS介導的葡萄糖輸入的一種蛋白質可以被調節，而使其活性優化，並使得葡萄糖輸入的PTS系統，可以轉運更多數量的葡萄糖到細胞中。因為葡萄糖分子不僅可以用作能量以推動能量不利生化反應，例如精細化學物質生物合成，而且可以作為許多生物精細化學物質生物合成途徑(例如，從3-磷酸甘油酸合成絲氨酸)的前體和中間體。在每一個實例中，或者通過增加生產發生所需的能量提供，或者通過增加生產發生所需的化合物供給，可以增加這些所需精細化學物質的總產量或者生產效率。另外，很多已知PTS蛋白在細胞內信號傳導途徑中起關鍵作用，這些途徑調節維持碳源供給的細胞代謝和糖類攝取。例如，已知細胞內1，6-二磷酸果糖(糖酵解中產生的化合物)水平的增加，可以導致HPr絲氨酸殘基的磷酸化，從而阻止該蛋白質在任何PTS糖類轉運過程中作為磷酸基團供體。通過誘變HPr使得其絲氨酸殘基不能被磷酸化，可以組成性的激活HPr，從而增加轉運到細胞中的糖類，然後可以確保細胞內用於一種或者多種所需精細化學物質生物合成所需的更多的能量儲存和中間體/前體分子。分離的本發明核酸序列，包含在穀氨酸棒桿菌菌株的基因組中，該菌株可由美國典型培養物保藏中心獲得，保藏號ATCC13032。分離的穀氨酸棒桿菌PTSDNA核酸序列，以及預測的穀氨酸棒桿菌PTS蛋白胺基酸序列，在序列表中分別以奇數序列號和偶數序列號列出。進行了計算機分析，並將這些核酸序列分類和/或鑑定為編碼代謝途徑蛋白質的序列。本發明也與這樣的蛋白質有關，該蛋白質的胺基酸序列與本發明的胺基酸序列有充分的同源性(例如，序列表中偶數序列號的序列)。如此處所用的那樣，具有與挑選出的胺基酸序列有充分同源性的胺基酸序列的蛋白質，與挑選出的胺基酸序列，例如挑選出的胺基酸全序列，有至少大約50％同源性。具有與挑選出的胺基酸序列有很大同源性的胺基酸序列的蛋白質，也可以與挑選出的胺基酸序列有至少大約50-60％，優選的有至少大約60％的同源性，更優選的有至少大約70％，80％，90％的同源性，最優選的有至少大約95％，96％，97％，98％，99％或者更高的同源性。本發明的PTS蛋白或者其生物活性部分或其片段，能夠參與轉運像是葡萄糖這樣的高能含碳分子進入穀氨酸棒桿菌，或者參與該微生物中的細胞內信號傳導，或者具有表1中列出的一種或者多種活性。以下各部分更加詳細地描述了本發明的各個方面A.分離的核酸分子本發明的一個方面涉及分離的編碼PTS多肽或者其生物活性部分的核酸分子，以及足夠用作雜交探針或者引物的核酸分子片段，這些片段用於鑑定或者擴增編碼PTS的核酸(例如PTSDNA)。如此處所用的那樣，術語「核酸分子」的意思是包含DNA分子(例如，cDNA或者基因組DNA)和RNA分子(例如mRNA)，以及由核苷酸類似物產生的DNA或者RNA類似物。該術語也包括位於基因編碼區域3』和5』末端的非翻譯序列編碼區域5』末端上遊序列的至少100個核苷酸，和基因編碼區域3』末端下遊序列的至少20個核苷酸。核酸分子可以是單鏈的或者雙鏈的，但是優選是雙鏈DNA。「分離的」核酸分子，是指那些與存在於核酸天然來源中的其他核酸分子相互分離的核酸分子。優選，「分離的」核酸不含有天然位於生物體基因組DNA中核酸兩側的序列(例如，位於核酸5』和3』末端的序列)，核酸就是從該生物體中獲得的。例如，在各種實施方案中，分離的PTS核酸分子可以含有少於大約5kb，4kb，3kb，2kb，1kb，0.5kb或者0.1kb的核苷酸序列，該序列天然位於細胞基因組DNA核酸分子的兩側，核酸就是從這些細胞(例如，穀氨酸棒桿菌細胞)中獲得的。另外，「分離的」核酸分子，例如DNA分子，當用重組技術生產時可以基本上不含有其他細胞物質或者培養基，當化學合成時可以不含化學前體或者其他化學物質。本發明核酸分子，例如序列表中奇數序列號的核苷酸序列，或者其部分，可以通過標準分子生物學技術和此處提供的序列信息分離得到。例如，穀氨酸棒桿菌PTSDNA可以從穀氨酸棒桿菌文庫中，使用序列表中奇數序列號序列中一個序列的全部或者其部分作為雜交探針，以及標準雜交技術(例如，像是描述在Sambrook，J.，Fritsh，E.F.，andManiatis，T.MolecularCloningALaboratoryManual.2nd，ed.ColdSpringHarborLaboratory，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY，1989中的)分離得到。另外，包含一條本發明核酸序列(例如，序列表中奇數序列號的核苷酸序列)全部或者一部分的核酸分子，可以通過聚合酶鏈式反應，使用基於該序列設計的寡聚核苷酸引物，分離得到(例如，包含一條本發明核酸序列(例如，序列表中奇數序列號的核苷酸序列)全部或者一部分的核酸分子，可以通過聚合酶鏈式反應，使用基於該相同序列設計的寡聚核苷酸引物，分離得到)。例如，mRNA可以從正常內皮細胞分離得到(例如，使用Chirgwinetal.(1979)Biochemistry185294-5299中的硫氰酸胍提取方法)，DNA可以通過逆轉錄酶(例如，Gibco/BRL，Bethesda，MD提供的MoloneyMLV逆轉錄酶；或者SeikagakuAmerica，Inc.，St.Peterburg，FL提供的AMV逆轉錄酶)製備。為聚合酶鏈式反應合成的寡聚核苷酸引物，可以基於序列表中列出的一條核苷酸序列設計。本發明的核酸，可以使用cDNA或者作為另一種選擇的基因組DNA作模板，合適的寡聚核苷酸引物，根據標準PCR擴增技術來擴增。這樣擴增出的核酸，可以克隆到合適的載體中，並用DNA序列分析辨別其特徵。另外，與PTS核苷酸序列相對應的寡聚核苷酸，可以用標準合成技術準備，例如使用自動DNA合成儀。在一個優選的實施方案中，分離的本發明核酸分子包含序列表中列出的一條核苷酸序列。本發明的核酸序列，正如在序列表中列出的那些，與本發明的穀氨酸棒桿菌PTSDNA是一致的。這些DNA包含編碼PTS蛋白的序列(即「編碼區域」，顯示在每條序列表中奇數序列號序列中)，以及5』非編碼序列和3』非編碼序列，也顯示在每條序列表中奇數序列號序列中。作為另一種選擇，核酸分子可以只包含序列表中核酸序列的編碼區域。為了該申請的目的，可以理解序列表中列出的每條核酸和胺基酸序列，都有一個用於識別的RXA，RXN，RXS或者RXC編碼，標明「RXA」，「RXN」，「RXS」，或者「RXC」後面有5個數字(即，RXA01503，RXN01299，RXS00315，或者RXC00953)。每條核酸序列最多包含三部分5』上遊區域，編碼區域，下遊區域。三個區域的每個部分，都用相同的RXA，RXN，RXS，或者RXC編號確定以消除混淆。於是敘述「序列表中的一條奇數編碼的序列」，是指序列表中的任何核酸序列，這些序列也可以用它們不同的RXA，RXN，RXS，或者RXC編號相互區分。每條這種序列的編碼區域都被翻譯成相應的胺基酸序列，這些序列也列在序列表中，為緊隨相應核酸序列之後偶數序列號。例如，RXA02229的編碼區域列在SEQIDNO1，而它編碼的胺基酸序列列在SEQIDNO2。本發明的核酸分子序列，與其編碼的胺基酸分子，用相同的RXA，RXN，RXS，或者RXC編號表示，使得它們容易相互聯繫。例如，指定為RXA01503，RXN01299，RXS00315和RXC00953的胺基酸序列，分別是RXA01503，RXN01299，RXS00315和RXC00953核酸分子核苷酸序列編碼區域的翻譯。本發明RXA，RXN，RXS和RXC核苷酸和胺基酸序列之間的對應，以及它們被指定的序列號列在表1中。例如，像是列在表1中的核苷酸序列RXN01299是SEQIDNO7，相應的胺基酸序列是SEQIDNO8。本發明的幾個基因是「F-標明的基因」。F-標明的基因包括那些列在表1中並在RXA，RXN，RXS，或者RXC標明前有「F」的基因。例如，SEQIDNO3，像在表1中表示的那樣，被指定為「FRXA00315」，就是一個F-標明的基因，同樣的還有SEQIDNO9，11和13(表1中分別標明為「FRXA01229」、FRXA01883」和「FRXA01889」)。在一個實施方案中，本發明的核酸分子不包含彙編在表2中的那些穀氨酸棒桿菌分子。對於dapD基因，該基因的序列發表在Wehrmann，A.，etal.(1998)J.Bacteriol.180(12)3159-3165。然而，本申請發明者所得到的比發表的版本長很多。據說，發表的版本使用了錯誤的其實密碼子，並因此只表現了真實編碼區域的一部分。在另一個優選的實施方案中，分離的本發明的核酸分子，包含那些是本發明核苷酸序列(例如，序列表中奇數序列號序列)或者其部分的互補分子的核酸分子。與本發明一條核苷酸序列互補的核酸分子，是指該分子與序列表中列出的一條核苷酸序列(例如，奇數序列號序列)充分互補，因此它可以與本發明的一條核苷酸序列雜交，從而形成穩定的雙螺旋。同樣在另一個優選的實施方案中，分離的本發明的核酸分子，包含這樣的核苷酸序列，該序列與本發明的核苷酸序列(例如，序列表中奇數序列號序列)或者其部分，有至少大約50％，51％，52％，53％，54％，55％，56％，57％，58％，59％或者60％的同源性，優選的有至少大約61％，62％，63％，64％，65％，66％，67％，68％，69％或者70％的同源性，更優選的有至少大約71％，72％，73％，74％，75％，76％，77％，78％，79％或者80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，88％，89％或者90％，或者91％，92％，93％，94％，以及甚至更優選的有至少大約95％，96％，97％，98％，99％或者更高的同源性。以上引用範圍(例如，70-90％一致性或者80-95％一致性)中間的範圍和一致性值，也包含在本發明中。例如，包含了這樣的一致性值範圍，這些範圍是上面引用的上限和/或下限值的組合。在另一種優選的實施方案中，本發明分離的核酸分子包括這樣的核苷酸序列，該序列可以與本發明的一條核苷酸序列(例如，序列表中奇數序列號序列)或者其部分進行雜交，例如，在嚴格條件下雜交。另外，本發明核酸分子可能只包含序列表中奇數序列號序列編碼區域的一部分，例如，可以用作探針或者引物的片段，或者編碼PTS蛋白生物活性部分的片段。由穀氨酸棒桿菌PTS基因克隆出的核苷酸序列，容許產生探針和引物，這些探針和引物的設計是用於鑑定和/或克隆其他細胞類型或者其他生物體中的PTS同系物，以及其他棒桿菌或者親緣物種中的PTS同系物。探針/引物典型的包括相當純化的寡聚核苷酸。寡聚核苷酸典型的包括這樣一段核苷酸序列的區域，該區域在嚴格雜交條件下，與本發明核苷酸序列(例如，序列表中奇數序列號序列)的有義鏈，這些序列的反義序列，或者其天然存在的突變體的至少大約12個，優選的大約25個，更優選的大約40，50，或者75個連續核苷酸雜交。基於本發明核苷酸序列的引物，可以用於克隆PTS同系物的PCR反應。基於PTS核苷酸序列的探針，可以用於探測相同的或者同源蛋白的轉錄或者基因組序列。在一個優選的實施方案中，探針更是包括另外的附著標記基團，例如標記基團可以是放射性同位素、螢光化合物、酶或者酶的輔因子。這種探針可以用作診斷檢測試劑盒的一部分，該試劑盒用於鑑定錯誤表達PTS蛋白的細胞，像是通過測定樣本細胞中PTS編碼核酸的水平，例如，檢測PTSmRNA的水平，或者測定基因組PTS基因是否發生了突變或者缺失。在一個實施方案中，本發明核酸分子編碼一種蛋白質或者其部分，該蛋白質或者其部分的胺基酸序列與本發明的胺基酸序列(例如，序列表中偶數序列號序列)有充分的同源性，從而使得該蛋白質或者其部分有能力把高能碳分子(例如葡萄糖)輸入穀氨酸棒桿菌，也可以參與一條或者多條細胞內信號傳導途徑。如此處所用的那樣，術語「充分的同源性」是指蛋白質或者其部分的胺基酸序列，含有最小數目的與本發明胺基酸序列一致的或者等價的(例如，具有與序列表偶數序列號序列中的胺基酸殘基相似側鏈的胺基酸殘基)胺基酸殘基，從而使得該蛋白質或者其部分，能夠把像是葡萄糖這樣的高能碳分子輸入穀氨酸棒桿菌，也可以參與該微生物中的一條或者多條細胞內信號傳導途徑。這種代謝途徑的蛋白質成員，像這裡描述的那樣，其功能是把像是葡萄糖這樣的高能碳分子輸入穀氨酸棒桿菌，也可以參與該微生物中的一條或者多條細胞內信號傳導途徑。這裡也描述了這種活性的實例。因而，「PTS蛋白的功能」對於一條或者多條基於磷酸烯醇丙酮酸的糖類轉運途徑的全部功能和/或調節有貢獻，和/或直接或者間接的對一種或者多種精細化學物質的產量、生產和/或生產效率有貢獻。PTS蛋白活性的實例在表1中列出。在另一個實施方案中，蛋白質與本發明的全部胺基酸序列有至少大約50-60％的同源性，優選的有至少大約60-70％的同源性，更優選的有至少大約70-80％，80-90％，90-95％的同源性，最優選的有至少大約96％，97％，98％，99％或者更高的同源性(例如，序列表中偶數序列號序列)。本發明PTS核酸分子編碼蛋白質的部分，優選是PTS蛋白的生物活性部分。如此處所用的那樣，術語「PTS蛋白的生物活性部分」的意思是包含PTS蛋白這樣的部分，例如結構域/基元，該部分能夠把像是葡萄糖這樣的高能碳分子輸入穀氨酸棒桿菌，或者參與該微生物中的一條或者多條細胞內信號傳導途徑。可以進行一種酶活性分析，以確定PTS蛋白或者其生物活性部分是否參與了把像是葡萄糖這樣的高能碳分子輸入穀氨酸棒桿菌，或者參與了該微生物中的一條或者多條細胞內信號傳導途徑。這種分析方法對於熟悉常規技術者來說是熟知的，在範例的實例8中有詳細的描述。編碼PTS蛋白生物活性部分的額外的核酸片段，可以通過以下方法製備，分離本發明胺基酸序列(例如，序列表中偶數序列號序列)的一部分，表達PTS蛋白或者多肽的編碼部分(例如，通過體外重組表達)，並且估算PTS蛋白或者多肽編碼部分的活性。因為遺傳密碼子的簡併性，以及由此可以編碼得到和本發明核苷酸序列編碼蛋白質相同的PTS蛋白，所以本發明進一步包含不同於本發明核苷酸序列(例如，序列表中奇數序列號序列)(和其部分)的核酸分子。在另一個實施方案中，分離的本發明的核酸分子具有這樣的核苷酸序列，該序列編碼具有序列表中列出的胺基酸序列(例如，偶數序列號)的蛋白質。同樣在另一個實施方案中，本發明核酸分子編碼全長的穀氨酸棒桿菌蛋白質，該蛋白質與本發明的胺基酸序列(由序列表中奇數序列號開放閱讀框架編碼)有充分的同源性。在一個實施方案中，本發明的序列並不意味著包括以前技術上已知的序列，例如那些列在表2或者表4中的在本發明以前就有效的Genbank序列，這對於熟悉常規技術者來說是可以理解的。在一個實施方案中，本發明包含這樣的核苷酸序列和胺基酸序列，該序列與本發明的核苷酸序列和胺基酸序列有一定百分比的一致性，該百分比大於技術上已知的序列(例如，表2或者表4中列出的Genbank序列(或者該序列編碼的蛋白質))與本發明的核苷酸序列和胺基酸序列一致性的百分比。例如，本發明包含與標明為RXA01503(SEQIDNO5)的核苷酸序列有大於和/或至少44％一致性的核苷酸序列，與標明為RXA00951(SEQIDNO15)的核苷酸序列有大於和/或至少41％一致性的核苷酸序列，以及與標明為RXA01300(SEQIDNO21)的核苷酸序列有大於和/或至少38％一致性的核苷酸序列。熟悉常規技術者，通過檢查表4中列出的對於每個特定序列給出的3個最高符合的GPA-計算百分比一致性，以及經過從百分之一百中減去最高的GPA-計算百分比一致性，可以計算任何本發明特定序列百分比一致性的低端域值。熟悉常規技術者也可以意識到，其百分比一致性大於如此計算出的低端域值(例如，至少50％，51％，52％，53％，54％，55％，56％，57％，58％，59％或者60％，優選的至少大約61％，62％，63％，64％，65％，66％，67％，68％，69％或者70％，更優選的至少大約71％，72％，73％，74％，75％，76％，77％，78％，79％或者80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，88％，89％或者90％，或者91％，92％，93％，94％，以及甚至更優選的至少大約95％，96％，97％，98％，99％或者更高的一致性)的核酸和胺基酸序列，也是包含在本發明中的。熟悉常規技術者可以意識到，除了在序列表中以奇數序列號列出的穀氨酸棒桿菌PTS核苷酸序列之外，導致PTS蛋白胺基酸序列改變的DNA多態性可以在一定群體(例如穀氨酸棒桿菌群體)中存在。這種PTS基因的遺傳多態性，可以由於自然條件的變異而在一個群體的不同個體中存在。如此處所用的那樣，術語「基因」和「重組基因」是指含有編碼PTS蛋白的開放閱讀框架的核酸分子，優選的PTS蛋白是穀氨酸棒桿菌PTS蛋白。這種自然條件的變異典型的可以造成PTS基因核苷酸序列1-5％的變化。任何以及全部由於自然條件的變異造成的，並且不改變PTS蛋白功能活性的，這種核苷酸的變化，以及引起的PTS胺基酸的多態性，都屬於本發明範圍之內。相應天然變體的核酸分子，和本發明穀氨酸棒桿菌PTSDNA的非穀氨酸棒桿菌同源物，可以基於此處公開的它們與穀氨酸棒桿菌PTS核酸分子的同源性，使用穀氨酸棒桿菌DNA或者其部分作為雜交探針，在嚴格雜交條件下根據標準雜交技術分離得到。因此，在另一個實施方案中，分離的本發明核酸分子的長度至少有15個核苷酸，在嚴格條件下與含有序列表奇數序列號核苷酸序列的核酸分子雜交。在其他實施方案中，核酸分子的長度至少有30，50，100，250或者更多個核苷酸。如此處所用的那樣，術語「在嚴格條件下雜交」的意思是描述這樣的雜交和清洗的條件，在該條件下彼此之間有至少60％同源性的核苷酸序列相互之間保持典型的雜交。優選，這種條件是序列之間有至少大約65％，更優選的有至少大約70％，以及甚至更優選的有至少大約75或者更高的同源性，相互之間保持典型的雜交。這種嚴格條件對於熟悉常規技術者是已知的，可以在Ausubeletal.，CurrentProtocolsinMolecularBiology，JohnWileySons，N.Y.(1989)，6.3.1-6.3.6中找到。一種優選的但不是限制的嚴格雜交條件是，在6X氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)中大約45℃進行雜交，然後用0.2XSSC，0.1％SDS在50-65℃清洗一次或者多次。優選，分離的本發明的核酸分子，在嚴格雜交條件下與本發明的核苷酸序列雜交，相當於得到天然存在的核酸分子。如此處所用的那樣，「天然存在的」核酸分子是指具有自然中存在的核苷酸序列(例如，編碼天然蛋白質)的RNA或者DNA分子。在一個實施方案中，核酸編碼天然穀氨酸棒桿菌PTS蛋白。熟悉常規技術者可以進一步意識到，除了群體中存在的天然存在的PTS序列變體以外，可以通過突變把改變引入本發明核苷酸序列中，從而導致被編碼PTS蛋白的胺基酸序列的改變，而不改變PTS蛋白的功能。例如，可以在本發明核苷酸序列中，進行可以導致「非必需」胺基酸殘基的胺基酸取代的核苷酸取代。「非必需」胺基酸殘基是指這樣的殘基，該殘基可以在PTS蛋白的野生型序列(例如，序列表中偶數序列號序列)中發生改變，而不改變PTS蛋白的活性，而「必需」胺基酸殘基是PTS蛋白活性所必需的。然而，其他胺基酸殘基(例如，那些在PTS活性結構域中非保守的或者只是半保守的胺基酸殘基)可能對於活性不是必需的，因此也可以在不改變PTS活性的情況下被改變。因此，本發明的另一個方面涉及編碼這樣的PTS蛋白的核酸分子的，該PTS蛋白含有對PTS活性非必需的胺基酸殘基的變化。這些蛋白質的胺基酸序列不同於序列表中偶數序列號序列，但仍然保持至少一種此處描述的PTS活性。在一個實施方案中，分離的核酸分子包含一段編碼蛋白質的核苷酸序列，其中該蛋白質的胺基酸序列與本發明的胺基酸序列有至少大約50％的同源性，並且能夠把像是葡萄糖這樣的高能量含碳分子轉運進穀氨酸棒桿菌，或者參與該微生物中的細胞內信號傳導，或者具有表1中列出的一種或者多種活性。優選，核酸分子編碼的蛋白質與序列表中奇數序列號胺基酸序列，有至少大約50-60％的同源性，更優選的與這種序列有至少大約60-70％的同源性，甚至更優選的與這種序列有至少大約70-80％，80-90％，90-95％的同源性，最優選的與本發明的胺基酸序列有至少大約96％，97％，98％，或者99％的同源性。為了確定兩種胺基酸序列(例如，本發明的一種胺基酸序列與其突變體形式)或者兩種核酸序列的同源性百分比，出於最適宜比較的目的，對序列進行序列對比(例如，為了與其他蛋白質或者核酸進行最適宜的序列對比，可以在一種蛋白質或者核酸的序列中引入間隙)。然後比較相應胺基酸位置的胺基酸殘基或者核酸位置的核苷酸。當一條序列(例如，本發明的一條胺基酸序列)中的一個位置被與其他序列(例如，胺基酸序列的突變體形式)相應位置相同的胺基酸殘基或者核苷酸佔據時，該分子在這個位置是同源的(即，如此處所用的胺基酸或者核酸「同源性」與胺基酸或者核酸的「一致性」是相同的)。兩條序列之間的百分比同源性，是一個相同位置數目被序列均分的函數(即，％一致性＝相同位置的#/全部位置的#×100)。分離的與本發明蛋白質序列(例如，序列表中偶數序列號序列)同源的編碼PTS蛋白質的核酸分子，可以通過向本發明核苷酸序列中引入一個或者多個核苷酸取代、插入、缺失而產生，從而在編碼蛋白質中引入一個或者多個胺基酸取代、插入、缺失。可以使用標準技術，例如定點誘變和PCR介導的誘變，在本發明核苷酸序列中引入突變。優選，保守的胺基酸取代是在一個或者多個預期的非必需胺基酸殘基進行的。「保守的胺基酸取代」是指胺基酸殘基被具有相似側鏈的胺基酸殘基所取代。具有相似側鏈的胺基酸殘基家族，在技術上有規定。這些家族包括，具有鹼性側鏈的胺基酸(例如，賴氨酸、精氨酸、組氨酸)，具有酸性側鏈的胺基酸(例如，天冬氨酸、穀氨酸)，具有無電荷極性側鏈的胺基酸(例如，甘氨酸、天冬氨酸、穀氨醯胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)，具有非極性側鏈的胺基酸(例如，丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)，具有β-支鏈側鏈的胺基酸(例如，蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)，以及具有芳香組側鏈的胺基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)。因此，預期的PTS蛋白中的非必需胺基酸殘基，優選的被同一側鏈家族中的其他胺基酸取代。另外，在另一個實施方案中，可以在PTS編碼序列全長或者部分，隨機的引入突變，例如通過飽和誘變，根據此處描述的鑑定具有PTS活性突變體的PTS活性，篩選出得到的突變體。在一條序列表中奇數序列號核苷酸序列誘變之後，被編碼蛋白質可以重組表達，蛋白質活性也可以，例如使用此處描述的分析(參見範例的實例8)，得到確定。除了以上描述的編碼PTS蛋白質的核酸分子以外，本發明的另一方面還與分離的反義核酸分子有關。「反義」核酸包括與編碼蛋白質的「有義」核酸互補的核苷酸序列，例如與雙鏈DNA分子編碼鏈互補，或者與mRNA序列互補。因此，反義核酸可以通過氫鍵與有義核酸連接。反義核酸可以與全部PTS編碼鏈互補，也可以僅與其部分互補。在一個實施方案中，反義核酸分子，與編碼PTS蛋白的核苷酸序列編碼鏈的「編碼區域」反義。術語「編碼區域」是指包含翻譯成胺基酸殘基的密碼子的核苷酸序列區域(例如，SEQIDNO.5(RAX01503)的全部編碼區域包括1至249核苷酸)。在另一個實施方案中，反義核酸分子，與編碼PTS的核苷酸序列編碼鏈的反義。術語「非編碼區域」是指編碼區域兩側不翻譯成胺基酸的5』和3』序列(即5』和3』非翻譯區域)。考慮到此處公布的編碼PTS的編碼鏈序列(例如，序列表中列出的奇數序列號序列)，本發明反義核酸可以根據Watson和Crick的鹼基配對規則進行設計。反義核酸分子可以與PTSmRNA的全部編碼區域互補，但是更優選是這樣的寡聚核苷酸，該寡聚核苷酸僅與PTSmRNA的編碼區域或者非編碼區域的部分是反義的。例如，反義寡聚核苷酸可以與PTSmRNA翻譯起始位置附近的區域互補。例如，反義寡聚核苷酸的長度可以是5，10，15，20，25，30，35，40，45或者50個核苷酸。本發明的反義核酸分子，可以使用技術上已知的程序，通過化學合成或者酶促連接反應構建。可以使用天然存在的核苷酸或者各種經過修飾的核苷酸，化學合成反義核酸(例如反義寡聚核苷酸)，那些經過修飾的核苷酸，是為了增加分子的生物穩定性，或者為了增加反義核酸與有義核酸之間形成雙螺旋的物理穩定性而設計的，例如可以使用硫代磷酸衍生物和吖啶取代的核苷酸。可用於產生反義核酸的經修飾的核苷酸的實例包括，5-氟尿嘧啶，5-溴尿嘧啶，5-氯尿嘧啶，5-碘尿嘧啶，次黃嘌呤，黃嘌呤，4-乙醯胞嘧啶，5-(羧基羥基甲基)尿嘧啶，5-羧甲基氨基甲基-2-硫尿嘧啶，5-羧甲基氨基甲基尿嘧啶，二氫尿嘧啶，beta-D-半乳糖基肌苷，N6-異戊基腺嘌呤，1-甲基鳥嘌呤，1-甲基肌苷，2，2-二甲基鳥嘌呤，2-甲基腺嘌呤，2-甲基鳥嘌呤，3-甲基胞嘧啶，5-甲基胞嘧啶，N6-腺嘌呤，7-甲基鳥嘌呤，5-甲基氨基甲基尿嘧啶，5-甲氧基氨基甲基尿嘧啶-2-硫代尿嘧啶，beta-D-甘露糖基queosine，5』-甲氧基羧基甲基尿嘧啶，5-甲氧基尿嘧啶，2-甲基硫代-N6-異戊基腺嘌呤，尿嘧啶-5-含氧乙酸(v)，wybutoxosine，假尿嘧啶，queosine，2-硫代胞嘧啶，5-甲基-2-硫代尿嘧啶，2-硫代尿嘧啶，4-硫代尿嘧啶，5-甲基尿嘧啶，尿嘧啶-5-含氧乙酸甲酯，尿嘧啶-5-含氧乙酸(v)，5-甲基-2-硫代尿嘧啶，3-(3-氨基-3-N-2-羧基丙基)尿嘧啶，(acp3)w，以及2，6-二氨基嘌呤。另外，反義核酸可以使用表達載體生物合成，其中核酸被反義方向亞克隆到表達載體中(即，由插入核酸轉錄的RNA，相對於插入的目的核酸是反義方向的，以下部分有進一步敘述)。本發明的反義核酸分子，被典型的施用於細胞或者在原位產生，從而它們可以與編碼PTS蛋白的細胞mRNA和/或基因組DNA雜交或者結合，進而抑制蛋白質的表達，例如，抑制轉錄和/或翻譯。雜交可以通過常規核苷酸互補性而形成穩定的雙螺旋，或者，例如，當反義核酸分子結合DNA雙螺旋時，它與雙螺旋的大溝發生特殊相互作用。反義分子可以被修飾，從而使得該分子可以與受體或者與特定細胞表面表達的抗原特異性結合，例如，反義核酸分子與多肽或者抗體的結合，該抗體與細胞表面受體或者抗原結合。反義核酸分子也可以使用此處描述的載體遞送至細胞。為了得到細胞內足夠濃度的反義分子，這樣的載體是優選，即在該載體中，反義核酸分子被置於原核、病毒或者真核啟動子的控制之下。而在另一個實施方案中，本發明的反義核酸分子是一種α-異頭物核酸分子。α-異頭物核酸分子與互補的RNA形成特異的雙鏈雜交體，雜交體中兩股鏈走向彼此平行，這與通常的β-單元相反(Gaultieretal.(1987)NucleicAcids.Res.156625-6641)。反義核酸分子也可以包含2』-o-甲基核糖核苷酸(Inoueetal.(1987)NucleicAcids.Res.156131-3148)或者化學RNA-DNA類似物(Inoueetal.(1987)FEBSLett.215327-330)。而在另一個實施方案中，本發明的反義核酸分子是核酶。核酶是催化型RNA分子，具有核糖核酸酶活性，能夠切割單鏈核酸，例如mRNA，它具有與單鏈核酸互補的區域。因此，核酶(例如，錘頭核酶(描述於HaselhoffandGerlach(1988)Nature334585-591))可以用於催化切割PTSmRNA轉錄物，從而抑制PTSmRNA的翻譯。對於PTS編碼核酸分子有特異性的核酶，可以基於此處公布的PTSDNA核苷酸序列(即SEQIDNO5(RAX01503))來設計。例如，可以構建四膜蟲屬L-19IVSRNA的衍生物，其活性位點的核苷酸序列與被切割的PTS-編碼mRNA的核苷酸序列是互補的。參見，例如，Cechetal.U.S.PatentNo.4,987,071和Cechetal.U.S.PatentNo.5,116,742。另外，PTSmRNA可以用於RNA分子庫中篩選具有特異核酶活性的催化型RNA。參見，例如，Bartel，D.andSzostak，J.W.(1993)Science2611411-1418。另外，通過把與PTS核苷酸序列調節區域(例如，PTS啟動子和/或增強子)互補的核苷酸序列作為目標，形成三螺旋結構，可以抑制PTS基因的表達，該三螺旋結構可以阻止PTS基因在目的細胞中的轉錄。一般參見，Helene，C.(1991)AnticancerDrugDes.6(6)569-84；Helene，C.etal.(1992)Ann.N.Y.Acad.Sci.66027-36；andMaher，L.J.(1992)Bioassays14(12)807-15。B.重組表達載體和宿主細胞本發明的另一方面涉及載體的，優選是含有編碼PTS蛋白(或者其部分)核酸的表達載體。如此處所用的那樣，術語「載體」是指能夠連接其他核酸，並對其進行運輸的核酸分子。一種類型的載體是「質粒」，質粒是指環形雙鏈DNA環，其中連接有額外的DNA片段。另一種類型的載體是病毒載體，其中額外的DNA片段可以連接到病毒基因組中。某些載體可以在它們被引入的宿主細胞中進行自主複製(例如，具有細菌複製起點的細菌載體，以及附加型哺乳動物載體)。其他的載體(例如，非附加型哺乳動物載體)一經引入宿主細胞就會整合到宿主細胞的基因組中，從而與宿主基因組一同複製。另外，某些載體能夠指導與之相連接的基因的表達。這些載體此處稱作「表達載體」。總之，重組DNA技術使用的表達載體經常是質粒形式。在本說明中，「質粒」和「載體」可以交換使用，因為質粒是最常使用的載體形式。然而，本發明有意包括這些表達載體的其他形式，例如病毒載體(例如，複製缺陷型逆轉錄病毒，腺病毒和腺伴隨病毒)，它們具有相同的功能。本發明重組表達載體包括本發明的核酸，該核酸在宿主細胞中以適合核酸表達的形式存在，這就意味著重組表達載體含有一條或者多條調節序列，這些序列是基於用作表達的宿主細胞選出的，它們被可行的連接到要表達的核酸序列上。在重組表達載體中，「可行的連接」的意思是指，感興趣核苷酸序列與調節序列以允許核苷酸序列表達的方式進行連接(例如，在體外轉錄/翻譯系統中，或者在載體被引入的宿主細胞中)。術語「調節序列」的意思是包括啟動子、增強子和其他表達控制元素(例如，聚腺苷酸化信號)。這種調節序列在，例如，Goeddel；GeneExpressionTechnologyMethodsinEnzymology185，AcademicPress，SanDiego，CA(1990)中有描述。調節序列包括，那些在很多類型宿主細胞中，指導核苷酸序列組成型表達的序列，以及那些在某些宿主細胞中，指導核苷酸序列表達的序列。優選的調節序列是，例如，像是cos-，tac-，trp-，tet-，trp-tet-，lpp-，lac-，lpp-lac-，lacIq-，T7-，T5-，T3-，gal-，trc-，ara-，SP6-，arny-，SPO2-，λ-PR-或者λPL這樣的啟動子，這些啟動子優選的使用在細菌中。另外的調節序列是，例如，酵母和真菌的啟動子，例如ADC1，MFα，AC，P-60，CYC1，GAPDH，TEF，rp28，ADH，植物的啟動子，例如，CaMV/35S，SSU，OCS，lib4，usp，STLS1，B33，nos或者ubiquitin-或phaseolin-啟動子。也可以使用人造啟動子。這些對於熟悉常規技術者是可以意識到的，即表達載體的設計依賴於這些因素用於轉化的宿主細胞的選擇，所需蛋白質的表達水平等。本發明的表達載體可以引入宿主細胞，從而產生此處描述的核酸所編碼的蛋白質或者多肽，包括融合蛋白質或者多肽(例如，PTS蛋白、PTS蛋白的突變形式、融合蛋白質等)。可以設計本發明的重組表達載體，用於在原核或者真核細胞中表達PTS蛋白。例如，PTS基因可以在以下細胞中表達，像是穀氨酸棒桿菌這樣的細菌細胞，昆蟲細胞(使用杆狀病毒表達載體)，酵母和其他真菌細胞(參見Romanos，M.A.etal.(1992)「Foreigngeneexpressioninyeastareview」，Yeast8423-488；vandenHondel，C.A.M.J.J.etal.(1991)「Heterologousgeneexpressioninfilamentousfungi」inMoreGeneManipulationsinFungi，J.W.BennetL.L.Lasure，eds.，p.396-428AcademicPressSanDiego；andvandenHondel，C.A.M.J.J.Punt，P.J.(1991)「Genetransfersystemsandvectordevelopmentforfilamentousfungi，inAppliedMolecularGeneticsofFungi，Peberdy，J.F.etal.，eds.，p.1-28，CambridgeUniversityPressCambridge)藻類或者多細胞植物細胞(參見Schmidt，R.andWillmitzer，L.(1998)HighefficiencyAgrobacteriumtumefaciens-mediatedtransformationofArabidopsisthalianaleafandcotyledonexplants」PlantCellRep.583-586)，或者哺乳動物細胞。適當的宿主細胞在Goeddel，GeneExpressionTechnologyMethodsinEnzymology185，AcademicPress，SanDiego，CA(1990)中有進一步論述。另外，重組表達載體可以在體外轉錄和翻譯，例如使用T7啟動子調節序列和T7聚合酶。原核細胞中的蛋白質表達，經常是由含有組成型或者誘導型啟動子的載體進行的，這些啟動子指導融合蛋白質或者非融合蛋白質的表達。融合載體在編碼蛋白質上添加一定數目的胺基酸，通常是在重組蛋白質的氨基末端。這種融合載體具有3個典型用途1)增加重組蛋白質的表達；2)增加重組蛋白質的溶解性；和3)用作親和純化的配基，幫助融合蛋白純化。在融合表達載體中，蛋白質切割位點經常是被引入到融合部分與重組蛋白質的結合處，使得在純化出融合蛋白質之後，能夠把重組蛋白質與融合部分分離開。這種酶，以及它們的同源識別序列，包括Xa因子、凝血酶和腸激酶。典型的融合表達載體包括pGEX(PharmaciaBiotechInc；Smith，D.B.andJohnson，K.S.(1988)Gene6731-40)，pMAL(NewEnglandBiolabs，Beverly，MA)和pRIT5(Pharmacia，Piscataway，NJ)，它們分別與目標重組蛋白融合了谷光甘肽S-轉移酶(GST)，麥芽糖E結合蛋白，或者蛋白質A。在一個實施方案中，PTS蛋白編碼序列被克隆到pGEX表達載體中，產生一個編碼融合蛋白的載體，該載體從N-末端到C-末端包括，GST-凝血酶切割位點-X蛋白質。融合蛋白可以使用谷光甘肽-瓊脂糖樹脂，通過親和層析純化。與GST分離開的重組PTS蛋白，可以通過用凝血酶切割融合蛋白質得到。合適的大腸桿菌誘導型非融合表達載體的實例包括，pTrc(Amannetal.，(1988)Gene69301-315)，pLG338，pACYC184，pBR322，pUC18，pUC19，pKC30，pRep4，pSH1，pSH2，pPLc236，pMBL24，pLG200，pUR290，pIN-III113-B1，λgt11，pBdC1，和pET11d(Studieretal.，GeneExpressionTechnologyMethodsinEnzymology185，AcademicPress，SanDiego，California(1990)60-89；andPouwelsetal.，eds.(1985)CloningVectors.ElsevierNewYorkIBSN0444904018)。pTrc載體的目標基因表達，依賴於雜交trp-lac融合啟動子的宿主RNA聚合酶的轉錄。pET11d載體的目標基因表達，依賴於共表達的病毒RNA聚合酶(T7gn1)介導的T7gn10-lac融合啟動子的轉錄。該病毒聚合酶由宿主菌株BL21(DE3)或者HMS174(DE3)中駐留的λ噬菌體提供，該噬菌體含有在lacUV5啟動子轉錄控制下的T7gn1基因。對於其他種類細菌的轉化，可以選擇合適的載體。例如，已知質粒pIJ101，pIJ364，pIJ702和pIJ361轉化鏈黴菌是有效的，而質粒pUB110，pC194，或者pBD214適合轉化杆狀菌種。有助於把遺傳信息轉入棒狀桿菌的幾種質粒包括pHM1519，pBL1，pSA77或者pAJ667(Pouwelsetal.，eds.(1985)CloningVectors，ElsevierNewYorkIBSN0444904018)。一種最大限度增大重組蛋白表達的方案是，在宿主細胞中表達這樣的蛋白質，該蛋白質具有不會減弱的蛋白酶剪切重組蛋白質的能力(Gottesman，S.，GeneExpressionTechnologyMethodsinEnzymology185，AcademicPress，SanDiego，California(1990)119-128)。另一種方案是改變插入表達載體中核酸的核酸序列，使得每個胺基酸的密碼子都是所選用於表達的細菌優先使用的，例如穀氨酸棒桿菌(Wadaetal.(1992)NucleicAcidsRes.202111-2118)。本發明核酸序列的這種改變，是可以通過標準DNA合成技術進行的。在另一個實施方案中，PTS蛋白表達載體是酵母表達載體。酵母S.cerivisae用於表達的載體的實例包括，pYepSec1(Baldari，etal.，(1987)EmboJ.6229-234)，2μ，pAG-1，Yep6，Yep13，pEMBKYe23，pMFa(KurjanandHerskowitz，(1982)Cell30933-943)，pJRY88(Schultzetal.，(1987)Gene54113-123)，和pYES2(InvitrogenCorporation，SanDiego，CA)。用於構建適合在其他真菌中，例如絲狀真菌中，使用的載體的載體和方法，包括那些詳述於下列文獻中的vandenHondel，C.A.M.J.J.Punt，P.J.(1991)「Genetransfersystemsandvectordevelopmentforfilamentousfungi，inAppliedMolecularGeneticsofFungi，J.F.Peberdy，etal.，eds.，p.1-28，CambridgeUniversityPressCambridge，andPouwelsetal.，eds.(1985)CloningVectors，ElsevierNewYorkIBSN0444904018)。另外，本發明PTS蛋白可以使用杆狀病毒表達載體在昆蟲細胞中表達。在培養的昆蟲細胞(例如Sf9細胞)中，用於表達蛋白質的杆狀病毒載體包括，pAC系列(Smithetal.(1983)Mol.CellBiol.32156-2165)和pVL系列(LucklowandSummer(1989)Virology17031-39)。在另一個實施方案中，本發明PTS蛋白可以在單細胞植物細胞(例如藻類)中表達，或者在高等植物(例如種子植物，像是作物植物)的植物細胞中表達。植物表達載體的實例包括那些詳述於下列文獻中的Becker，D.，Kemper，E.，Schell，J.andMasterson，R.(1992)″Newplantbinaryvectorswithselectablemarkerslocatedproximaltotheleftborder″，PlantMol.Biol.201195-1197；和Bevan，M.W.(1984)″BinaryAgrobacteriumvectorsforplanttransformation」，Nucl.Acid.Res.128711-8721，包括pLGV23，pGHlac+，pBIN19，pAK2004和pDH51(Pouwelsetal.，eds.(1985)CloningVectors.ElsevierNewYorkIBSN0444904018)。也是在另一個實施方案中，本發明核酸使用哺乳動物表達載體在哺乳動物細胞中表達。哺乳動物表達載體的實例包括pCDM8(Seed，B.(1987)Nature329840)和pMT2PC(Kaufmanetal.(1987)EMBOJ.6187-195)。表達載體的控制功能，當時用在哺乳動物中時，經常是由病毒調節元素提供的。例如，通常使用的啟動子來自多形瘤、腺病毒2、巨細胞病毒和猿猴病毒40。其他對於原核細胞和真核細胞都合適的表達體系，參見Sambrook，J.，Fritsh，E.F.，andManiatis，T.MolecularCloningALaboratoryManual.2nd，ed.ColdSpringHarborLaboratory，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY，1989的16章和17章。在另一個實施方案中，重組的哺乳動物表達載體，能夠指導特定細胞類型中優選核酸的表達(例如，組織特異性調節元素被用於表達核酸)。組織特異性調節元素在技術上是已知的。合適的組織特異性啟動子的實例包括但不局限於，白蛋白啟動子(肝臟特異；Pinkertetal.(1987)GeneDev.1268-277)，淋巴特異啟動子(CalameandEaton(1988)Adv.Immunol.43235-275)，T-細胞受體的特殊啟動子(WinotoandBaltimore(1989)EMBOJ.8729-933)和免疫球蛋白的特殊啟動子(Banerjietal.(1983)Cell33729-740；QueenandBaltimore(1983)Cell33741-748)，神經元特異的啟動子(例如神經絲啟動子；ByrneandRuddle(1989)PANS865473-5477)，胰腺特異的啟動子(Edlundetal.(1985)Science230912-916)，以及乳腺特異的啟動子(例如乳汁乳清啟動子；U.S.PatentNo.4,873,316和EuropeanApplicationPublicationNo.264,166)。也包括發育調節的啟動子，例如鼠類hox啟動子(KesselandGruss(1990)Science249374-379)和α-胎蛋白啟動子(CampesandTilghman(1989)GenesDev.3537-546)。本發明此外還提供了含有本發明DNA分子的重組表達載體，該DNA分子以反義方向克隆在表達載體中。也就是說，DNA分子可以可操作性的按以下方式連接到調節序列上，即允許與PTSmRNA反義的RNA分子表達(通過DNA分子的轉錄)的方式。可以選擇那些在各種細胞類型中指導反義RNA分子連續表達的調節序列，，例如病毒啟動子和/或增強子，或者可以選擇指導連續的、組織特異的或者細胞類型特異的反義RNA表達的調節序列，作為調節序列。反義表達載體可以以重組質粒、噬菌粒或者減毒病毒的形式存在，在其中反義核酸在高效調節區域的控制下產生，其活性可以通過引入載體的細胞類型來確定。關於使用反義基因調節基因表達，可以參見Weintraub，H.etal.，AntisenseRNAasamoleculartoolforgeneticsanalysis，Review-TrendsinGenetics，Vol.1(1)1986。本發明的另一方面，涉及被引入本發明重組表達載體的宿主細胞的。術語「宿主細胞」和「重組宿主細胞」在此處可以交替使用。該術語應該理解為，不僅指被挑選的特定細胞，而且也指這些細胞的後代或者可能的後代。因為突變或者環境影響會使得某些修飾發生在成功的傳代中，這些後代細胞實際上不可能與母細胞完全相同，但是也包含在此處使用的術語範圍之內。宿主細胞可以是任何原核或者真核細胞。例如，PTS蛋白可以在像是穀氨酸棒桿菌這樣的細菌細胞中、昆蟲細胞中、酵母細胞中或者哺乳動物細胞(例如中國大鼠卵巢細胞(CHO)或者COS細胞)中表達。其他合適的宿主細胞，對於熟悉常規技術者來說是熟知的。可以用作本發明核酸和蛋白質分子宿主細胞的穀氨酸棒桿菌親緣微生物，在表3中列出。載體DNA可以通過常規轉化或者轉染技術，引入原核或者真核細胞。如此處所用的那樣，術語「轉化」和「轉染」的意思是指各種本領域熟知的，把外源核酸(例如，線性DNA或者RNA(例如，線性載體或者沒有載體的單獨基因結構))或者以載體形式存在的核酸(例如，質粒、噬菌體、噬菌粒、噬菌粒、轉座子或者其他DNA)轉入宿主細胞的技術，包括磷酸鈣或者氯化鈣共沉澱，DEAE-右旋糖苷介導的轉染，脂質轉染，或者電傳孔。轉化或者轉染宿主細胞的合適方法，可以在Sambrook，etal.(MolecularCloningALaboratoryManual.2nd，ed..，ColdSpringHarborLaboratory，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY，1989)，以及其他實驗室手冊上找到。已知，為了穩定的轉染哺乳動物細胞，依靠使用的表達載體和轉染技術，只有一小部分可以把外源DNA整合到其自身基因組中。為了鑑定和篩選這些整合體，編碼篩選標記(例如，對抗生素的抗性)的基因通常與感興趣的基因被一同引入宿主細胞。優選的篩選標記包括那些能賦予藥物抗性的標記，例如G418、潮黴素和氨甲蝶呤。編碼篩選標記的核酸，可以與PTS蛋白在同一個載體上被引入宿主細胞，或者在單獨的載體上引入宿主細胞。經被引入核酸穩定轉染的細胞，可以使用藥物篩選鑑定(例如，與篩選標記基因合併的細胞可以存活，而其他細胞則死掉)。為了創造同源重組微生物，製備含有至少部分PTS基因的載體，該基因具有缺失、添加或者取代，從而改變，例如功能性破壞，PTS基因。優選的該是穀氨酸棒桿菌PTS基因，但是它也可以是來自親緣細菌的同源物，甚至是來自哺乳動物、酵母或者昆蟲。在一個優選的實施方案中，設計載體，使得根據同源重組，內源PTS基因被功能性破壞(即，不在編碼功能蛋白質；也稱作「敲除」載體)。另外，可以設計載體，使得根據同源重組，內源PTS基因被發生突變或者改變，但是仍編碼功能蛋白質(例如，改變上遊調節區域，從而改變內源PTS基因的表達)。在同源重組載體中，被改變的PTS基因部分，在其5』和3』末端側面連接有多餘的PTS核酸，使得同源重組可以發生在載體攜帶的外源PTS基因和微生物的內源PTS基因之間。多餘的側面連接的PTS核酸具有足夠的長度，可以與內源基因成功的發生同源重組。典型的，載體中含有幾千個鹼基的側鏈DNA(5』和3』末端)(參見，例如，Thomas，K.R.，andCapecchi，M.R.(1987)Cell51503foradescriptionofhomologousrecombinationvectors)。引入微生物(例如電傳孔)和細胞的載體，選擇那些其中引入的PTS基因與內源PTS基因，使用技術上已知的技術可以同源重組的。在另一個實施方案中，可以產生含有所選擇系統的重組微生物，該系統允許調節引入基因的表達。例如，包含的PTS基因在載體中處於lac操縱子的控制之下，使得PTS基因只能在IPTG存在時表達。這種調節系統在技術上是熟知的。在另一個實施方案中，宿主細胞中的內源PTS基因被破壞(例如，通過同源重組或者其他技術上已知的遺傳方法)，使得其蛋白質產物的表達不能發生。在另一個實施方案中，宿主細胞中的內源的或者引入的PTS基因，經一個或者多個點突變、缺失或者倒置而改變，但是仍舊編碼功能PTS蛋白。而在另一個實施方案中，微生物PTS基因的一個或者多個調節區域(例如，啟動子、阻抑物或者誘導子)被改變(例如，通過缺失、剪切、倒置或者點突變)，使得PTS基因的表達得到調節。熟悉常規技術者可以意識到，含有不止一個所述PTS基因和蛋白質修飾的宿主細胞，使用本發明的方法可以很容易的產生，這些細胞也包含在本發明中。本發明宿主細胞，例如培養的原核或者真核宿主細胞，可以用於產生(例如表達)PTS蛋白。因此，本發明進一步提供了，使用本發明宿主細胞產生PTS蛋白的方法。在一個實施方案中，該方法包括在合適的培養基中培養本發明的宿主細胞(其中引入了編碼PTS蛋白的重組表達載體，或者其基因組中引入了編碼野生型或者改變的PTS蛋白的基因)，直到產生PTS蛋白。在另一個實施方案中，該方法進一步包括從培養基或者宿主細胞中分離PTS蛋白。C.分離的PTS蛋白本發明的另一方面涉及分離的PTS蛋白及其生物活性部分的。「分離的」或者「純化的」蛋白，或者其生物活性部分，當使用重組DNA技術生產時基本上沒有細胞物質，當化學合成時基本上沒有化學前體或者其他化學物質。術語「基本上不含細胞物質」包括這樣的PTS蛋白製備，其中蛋白質被從天然或者重組產生該蛋白質的細胞的細胞組分中分離出。在一個實施方案中，術語「基本上不含細胞物質」包括製備含有至少大約30％(乾重)非PTS蛋白(此處也稱作「汙染蛋白質」)的PTS蛋白，更優選的含有少於大約20％的非PTS蛋白，甚至更優選的含有少於大約10％的非PTS蛋白，最優選的含有少於大約5％的非PTS蛋白。當PTS蛋白或者其生物活性部分經重組產生時，優選是基本上不含培養基，即培養基少於製備蛋白質體積的大約20％，優選的少於10％，最優選的少於大約5％。術語「基本上不含化學前體或者其他化學物質」包括這樣的PTS蛋白製備，其中蛋白質被從參與蛋白質合成的化學前體或者其他化學物質中分離出。在一個實施方案中，術語「基本上不含化學前體或者其他化學物質」包括製備含有至少大約30％(乾重)化學前體或者非PTS化學物質的PTS蛋白，更優選的含有少於大約20％的化學前體或者非PTS化學物質，甚至更優選的含有少於大約10％的化學前體或者非PTS化學物質，最優選的含有少於大約5％的化學前體或者非PTS化學物質。在一個優選的實施方案中，分離的蛋白質或者其生物活性部分，不含有來自獲得PTS蛋白的同一生物體的汙染蛋白質。這種蛋白質典型的是由重組表達產生，例如像穀氨酸棒桿菌這樣微生物中的穀氨酸棒桿菌PTS蛋白的重組表達。分離的本發明的PTS蛋白或者其生物活性部分，能夠參與把像是葡萄糖這樣的高能量含碳分子轉運進穀氨酸棒桿菌，或者參與該微生物中的細胞內信號傳導，或者具有一種或者多種列在表1中的活性。在一個優選的實施方案中，蛋白質或者其部分含有這樣的胺基酸序列，該序列與本發明的胺基酸序列(例如，序列表偶數序列號序列中的一個序列)有充分的同源性，使得該蛋白質或者其生物活性部分，有能力參與把像是葡萄糖這樣的高能量含碳分子轉運進穀氨酸棒桿菌，或者參與該微生物中的細胞內信號傳導。蛋白質的部分，優選是指此處描述的生物活性部分。在另一個優選的實施方案中，本發明的PTS蛋白具有在序列表中以偶數序列號列出的胺基酸序列。在另一個優選的實施方案中，PTS蛋白具有由核苷酸序列編碼的胺基酸序列，該核苷酸序列與本發明的核苷酸序列(例如，序列表奇數序列號序列中的一個序列)雜交，例如在嚴格條件下雜交。在另一個優選的實施方案中，PTS蛋白具有由這樣的核苷酸序列編碼的胺基酸序列，該核苷酸序列與本發明的一條核酸序列或者其部分，有至少大約50％，51％，52％，53％，54％，55％，56％，57％，58％，59％或者60％的同源性，優選的有至少大約61％，62％，63％，64％，65％，66％，67％，68％，69％或者70％的同源性，更優選的有至少大約71％，72％，73％，74％，75％，76％，77％，78％，79％或者80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，88％，89％或者90％，或者91％，92％，93％，94％，以及甚至更優選的有至少大約95％，96％，97％，98％，99％或者更高的同源性。介於上面引述的值之間的範圍或者一致性值(例如，70-90％的一致性或者80-95％的一致性)，也有意的包含在本發明中。例如，有意的包含了這樣的一致性值範圍，這些範圍是上面引用的上限和/或下限值的組合。本發明優選的PTS蛋白也優選的具有至少一種此處描述的PTS活性。例如，一種本發明優選的PTS蛋白包含這樣的核苷酸序列編碼的胺基酸序列，該核苷酸序列與本發明的核苷酸序列雜交，例如在嚴格條件下雜交，並且該序列能夠參與把像是葡萄糖這樣的高能量含碳分子轉運進穀氨酸棒桿菌，或者參與該微生物中的細胞內信號傳導，或者具有一種或者多種列在表1中的活性。在其他實施方案中，PTS蛋白與本發明的胺基酸序列(例如，序列表偶數序列號序列中的一個序列)有充分的同源性，並且具有本發明胺基酸序列蛋白質的功能活性，正如以上I部分詳細描述的那樣，其胺基酸序列由於天然改變或者突變而有所不同。因此，在另一個實施方案中，PTS蛋白是這樣的蛋白質，它具有的胺基酸序列與本發明的完全胺基酸序列，有至少大約50％，51％，52％，53％，54％，55％，56％，57％，58％，59％或者60％的同源性，優選的有至少大約61％，62％，63％，64％，65％，66％，67％，68％，69％或者70％的同源性，更優選的有至少大約71％，72％，73％，74％，75％，76％，77％，78％，79％或者80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，88％，89％或者90％，或者91％，92％，93％，94％，以及甚至更優選的有至少大約95％，96％，97％，98％，99％或者更高的同源性，並且具有至少一種此處描述的PTS活性。介於上面引述的值之間的範圍或者一致性值(例如，70-90％的一致性或者80-95％的一致性)，也有意的包含在本發明中。例如，有意的包含了這樣的一致性值範圍，這些範圍是上面引用的上限和/或下限值的組合。在另一個實施方案中，本發明與這樣的全長穀氨酸棒桿菌蛋白質有關，該蛋白質與本發明的胺基酸序列有充分的同源性。PTS蛋白的生物活性部分包含這樣的多肽，該多肽含有來自PTS蛋白胺基酸序列的胺基酸序列，例如，序列表偶數序列號的胺基酸序列或者與PTS蛋白同源蛋白質的胺基酸序列，該部分含有比全長PTS蛋白或者全長PTS蛋白同源蛋白質更少的胺基酸，並且表現出至少一種PTS蛋白活性。典型的生物活性部分(肽，例如，胺基酸長度為像是5，10，15，20，30，35，36，37，38，39，40，50，100或者更多的肽)包括一個具有至少一種PTS蛋白活性的結構域或者基元。另外，其他生物活性部分，其中蛋白質的其他部分已被刪除，可以通過重組技術製備，並鑑定其此處描述的一種或者多種活性。優選的PTS蛋白的生物活性部分，含有一個或者多個挑選的具有生物活性的結構域/基元或者其部分。PTS蛋白優選的通過重組DNA技術生產。例如，把編碼蛋白質的核酸分子克隆到表達載體中(如上所述)，將表達載體引入宿主細胞(如上所述)並在宿主細胞中表達PTS蛋白。然後按照合適的純化方案，使用標準蛋白質純化技術，從細胞中分離PTS蛋白。除了重組表達，可以使用標準肽合成技術化學合成PTS蛋白、多肽或者肽。另外，天然PTS蛋白可以從細胞(例如內皮細胞)中分離，例如使用抗-PTS抗體，該抗體可以使用本發明的PTS蛋白或者其部分通過標準技術產生。本發明也提供了PTS嵌合蛋白或者融合蛋白。如此處所用的，PTS「嵌合蛋白」或者「融合蛋白」含有可操作性連接到非PTS多肽上的PTS多肽。「PTS多肽」是指含有PTS相關胺基酸序列的多肽，而「非PTS蛋白」是指含有這樣的蛋白質相關胺基酸序列的多肽，該蛋白質與PTS蛋白沒有基本的同源性，例如，來自相同或者不同生物體的與PTS蛋白不同的蛋白質。在融合蛋白質中，術語「可操作性連接」的意思是指，PTS蛋白與非PTS蛋白相互之間是符合讀框的融合。非PTS多肽可以融合到PTS多肽的N-末端或者C-末端。例如，在一個實施方案中，融合蛋白質是DST-PTS融合蛋白，其中PTS序列融合到GST序列的C-末端。該融合蛋白質有助於重組PTS蛋白的純化。在另一個實施方案中，融合蛋白質是在其N-末端有異源信號序列的PTS蛋白。在某些宿主細胞(例如哺乳動物宿主細胞)中，通過使用異源信號序列可以增加PTS蛋白的表達和/或分泌。優選，本發明的嵌合蛋白或者融合蛋白通過標準重組DNA技術產生。例如，依照常規技術編碼不同多肽序列的DNA片段被符合讀框的連接在一起，例如，使用平頭末端或者交錯末端的末端連接，使用限制性酶進行消化以提供合適的末端，使用粘性末端補平作為合適的末端，使用鹼性磷酸酶處理以避免不合需要的連接，以及使用酶促連接。在另一個實施方案中，可以使用常規技術包括自動DNA合成儀合成融合基因。另外，可以使用錨引物進行基因片段的PCR擴增，錨引物可以增加兩條連續基因片段之間的互補的突出端，連續基因可以隨後進行退火和再擴增而產生嵌合基因序列(參見，例如，CurrentProtocolsinMolecularBiology，eds.Ausubeletal.JohnWileySons1992)。另外，很多已經編碼融合部分(例如GST多肽)的表達載體是商業提供的。PTS-編碼核酸可以被克隆到這種表達載體中，使得融合部分符合讀框的連接到PTS蛋白上。PTS蛋白的同源物可以通過突變產生，例如PTS蛋白的不連續點突變或者剪切。如此處所用的，術語「同源物」是指PTS蛋白的變體形式，它們可以用作PTS蛋白活性的激動劑或者拮抗物。PTS蛋白的激動劑可以基本上具有PTS蛋白相同的或者部分的生物活性。PTS蛋白的拮抗物可以抑制PTS蛋白天然存在形式的一種或者多種活性，例如，通過與包含PTS蛋白的PTS系統的下遊或者上遊成員競爭性結合。因此，本發明的穀氨酸棒桿菌PTS蛋白及其同源物，可以調節一條或者多條糖類轉運途徑的活性，或者調節PTS蛋白在該微生物中發揮作用的細胞內信號傳導途徑的活性。在另外的實施方案中，PTS蛋白的同源物可以通過篩選PTS蛋白突變體的組合文庫，例如剪切突變體，來鑑定PTS蛋白激動劑或者拮抗劑活性。在一個實施方案中，PTS變體的多樣性文庫通過在核酸水平上組合性突變而產生，並由多樣性基因文庫編碼。PTS變體的多樣性文庫可以通過，例如，把合成的寡聚核苷酸混合物酶促連接到基因序列中，使得潛在PTS序列的簡併集合作為單個多肽，或者其中含有PTS序列集合的更大的融合蛋白質(例如為了噬菌體展示)的集合，是可以表達的。有各種方法可以用於從簡併寡聚核苷酸序列，產生潛在PTS同源物文庫。可以用自動DNA合成儀進行簡併基因序列的化學合成，然後合成基因被連接到合適的表達載體中。基因簡併集合的使用，允許混合的提供編碼所需潛在PTS序列集合的全部序列。合成簡併寡聚核苷酸的方法在技術上是已知的(參見，例如，Narang，S.A.(1983)Tetrahedron393；Itakuraetal.(1984)Annu.Rev.Biochem.53323；Itakuraetal.(1984)Science1981056；Ikeetal.(1983)NucleicAcidRes.11477)。另外，編碼PTS蛋白片段的文庫，可用於產生PTS片段的多樣性群體，該群體用於篩選並挑選PTS蛋白的同源物。在一個實施方案中，編碼序列片段的文庫可以這樣產生，即在大約每分子只產生一個切口的條件下，用核酸酶處理PTS編碼序列的雙鏈PCR片段，變性雙鏈DNA，復性DNA以形成雙鏈DNA，該雙鏈DNA可以包含從不同有切口的產物形成的有義/反義對，在重新形成的雙螺旋中通過S1核酸酶處理除去單鏈部分，以及把最後得到的片段文庫連接到表達載體中。通過該方法，可以得到編碼N-末端、C-末端和不同大小PTS蛋白中間片段的表達文庫。篩選由點突變或者剪切得到的組合文庫中的基因產物的許多技術，以及篩選cDNA文庫中具有所挑選特性基因產物的技術，在技術上都是已知的。這些技術都適用於由PTS同源物組合突變得到的基因文庫的快速篩選。篩選大型基因庫的應用最廣泛的技術，能夠用於高產量分析，包括把基因組文庫克隆到可複製表達載體中，用得到的載體文庫轉化載體文庫，以及在一定條件下表達組合基因，在該條件下所需活性的檢測有助於編碼被檢測產物基因的載體的分離。回歸系綜突變(REM)，一種增加文庫中功能突變體頻率的新技術，可以與篩選分析一起用於鑑定PTS同源物(ArkinandYourvan(1992)PANS897811-7815；Delgraveetal.(1993)ProteinEngineering6(3)327-331)。在另一個實施方案中，使用技術上已知的方法，基於細胞的分析可以用於分析多樣性PTS文庫。D.本發明的應用和方法此處描述的核酸分子、蛋白質、蛋白質同源物、融合蛋白質、引物、載體和宿主細胞，可以應用於下述一種或者多種方法中鑑定穀氨酸棒桿菌和親緣微生物；繪製穀氨酸棒桿菌親緣生物體的基因組圖譜；鑑定和定位穀氨酸棒桿菌的感興趣序列；進化研究；確定PTS蛋白的功能必需區域；PTS蛋白活性調節；PTS途徑活性調節；所需化合物，例如精細化學物質的細胞生產的調節。本發明PTS核酸分子具有各種用途。首先，它們可以用於鑑定一種生物體是否是穀氨酸棒桿菌或者其近親生物體。它們也可以用於鑑定混合微生物群體中穀氨酸棒桿菌或者其親緣生物體的存在。本發明提供了許多穀氨酸棒桿菌基因的核酸序列；在嚴格條件下，使用跨越對穀氨酸棒桿菌特異基因的探針，探測從單一或者混合微生物培養物中提取的基因組DNA，可以確定該生物體是否存在。儘管穀氨酸棒桿菌本身是非致病性的，但是它與致病種類相關，例如白喉棒桿菌。白喉棒桿菌是白喉的致病源，白喉是一種發展迅速、急性、發燒的感染，它涉及局部病狀和系統病狀。得這種疾病時，上呼吸道發生局部病變，並且包括上皮細胞壞死性損傷；細菌分泌毒素，毒素從病變處散布到身體易受感染的末梢組織。這些組織包括心臟、肌肉、外周神經、腎上腺、腎臟、肝臟和脾臟，在其中由於蛋白質合成被抑制而造成的變質性改變，會導致該疾病的系統病狀。白喉在世界許多地區保持高發病率，這些地區包括非洲、亞洲、東歐和前蘇聯的獨立國家。從1990年起，在後兩個地區白喉的持續流行，導致了至少5,000人死亡。在一個實施方案中，本發明與鑑定受試者中白喉棒桿菌存在或者活性的方法有關。該方法包括鑑定受試者中本發明的一條或者多條核酸或者胺基酸序列(例如，分別列在序列表中的奇數或者偶數序列號序列)，從而檢測受試者中白喉棒桿菌的存在或者活性。穀氨酸棒桿菌和白喉棒桿菌是有親緣關係的細菌，穀氨酸棒桿菌中的許多核酸和蛋白質分子是白喉棒桿菌中核酸和蛋白質分子的同源物，因此也可以用於檢測受試者中的白喉棒桿菌。本發明的核酸和蛋白質分子也可以用作基因組特定區域的標記。這不僅在繪製基因組圖譜時有用，而且可以用於穀氨酸棒桿菌蛋白質功能研究。例如，為了鑑定特定穀氨酸棒桿菌DNA結合蛋白與之結合的基因組區域，可以消化穀氨酸棒桿菌基因組，將片段與DNA結合蛋白孵育。與蛋白質結合的片段可以進一步用本發明的核酸分子探測，優選使用易檢測標記；這些核酸分子與基因組片段的結合，可以定位片段在穀氨酸棒桿菌基因組圖譜上的位置，而且，當使用不同的酶進行多次操作時，有助於快速確定蛋白質與之結合的核酸序列。另外，本發明核酸分子可以與親緣種類有充分的同源性，使得這些核酸分子可以作為構建親緣細菌基因組圖譜的標記，例如乳發酵短桿菌。本發明的PTS核酸分子又可以用於進化和蛋白質結構研究。本發明分子參與的糖類攝取系統，被各種各樣的細菌所使用；通過比較本發明核酸分子序列和那些在其他生物體中編碼相似酶的核酸分子序列，可以估算生物體的進化相關性。類似的，這種比較允許估算保守序列區域和非保守序列區域，這可以有助於確定蛋白質中對於酶功能必需的區域。這種類型的確定對於蛋白質工程研究是有價值的，並且可以指示那些蛋白質可以忍受突變而不失去功能。本發明PTS核酸分子的操作可以導致具有與野生型PTS蛋白不同功能的PTS蛋白的產生。可以提高這些蛋白質的效率或者活性，可以使之以比通常更多的數目出現在細胞中，或者降低其效率或者活性。本發明提供了篩選可調節PTS蛋白活性的分子的方法，這些分子或者通過與蛋白質本身或者底物相互作用，或者與PTS蛋白的配偶體結合，或者通過調節本發明PTS核酸分子的轉錄或者翻譯來調節PTS蛋白活性。在該方法中，表達一種或者多種PTS蛋白的微生物，與一種或者多種試驗化合物接觸，並且評估每種測試化合物對於PTS蛋白活性或者表達水平的作用。本發明PTS分子可以被修飾，使得一種或者多種化學物質的產量、生產和/或生產效率得到提高。例如，通過修飾參與葡萄糖攝取的PTS蛋白使其活性得到優化，可以增加葡萄糖攝取量或者葡萄糖被轉運進細胞的速率。細胞內葡萄糖和其他糖類的降解，提供能量推動能量不利的生化反應，例如那些涉及精細化學物質生物合成的反應。降解也提供了生物合成某些精細化學物質所必需的中間體或者前體分子，例如胺基酸、維生素和輔因子。通過修飾本發明PTS分子以增加細胞內高能碳分子的數量，從而可以既增加生產一種或者多種精細化學物質所必需的執行代謝途徑的能量，又可以增加這種生產所需要的細胞內代謝物庫。相反的，有些糖類的降解產物含有一種化合物，該化合物只用於這樣的代謝途徑，該途徑因為酶、輔因子或者中間體而與用作產生所需精細化學物質的途徑相互競爭，通過減少這些糖類的輸入，可以負調節該途徑。另外，本發明的PTS分子可以參與一種或者多種細胞內信號傳導途徑，這些途徑可以影響穀氨酸棒桿菌中一種或者多種精細化學物質的產量和/或生產效率。例如，一旦細胞內存在足夠數量的糖類，從細胞外介質中輸入一種或者多種糖類所必需的蛋白質(例如，HPr，EnzymeI，或者EnzymeII複合體中的一種成分)經常被翻譯後修飾，從而使它們不能再把糖輸入到細胞內。這樣的一個實例出現在大腸桿菌中，細胞內1，6-二磷酸果糖的高水平，導致HPr絲氨酸-46的磷酸化，使該分子不能再參與任何糖類的轉運。然而，在轉運系統關閉的這一細胞內糖類水平，對於維持細胞的正常功能是足夠的，這可能限制所需精細化學物質的過量生產。因此，這樣修飾本發明的PTS蛋白是合乎需要的，即使得它們不再對這種負調節有效，從而允許可以達到一種或者多種糖類更高的細胞內濃度，並且，擴展一下，允許從含有這種突變PTS蛋白的生物體中得到一種或者多種精細化學物質更有效的生產或者更高的產量。前面提到的導致所需化合物產量增加的PTS突變方案的列表，並不意味著僅局限於此；這些突變方案的變化對於熟悉技術的人來說是很明白的。經過這些機制，本發明的核酸和蛋白質分子可以用於產生表達突變PTS核酸和蛋白質分子的穀氨酸棒桿菌或者其親緣菌株，從而增加所需化合物的產量、生產和/或生產效率。該所需化合物可以是穀氨酸棒桿菌的任何天然產物，這包括生物合成途徑的最終產物和天然存在代謝途徑的中間體，以及不是在穀氨酸棒桿菌代謝中天然存在但是由本發明穀氨酸棒桿菌菌株產生的分子。本發明進一步由以下實例闡明，這些實例不應該被解釋為僅局限於此。本申請中所引用的所有參考文獻、專利申請、專利、發表的專利申請、表和序列列表中的內容，特此全部合併入參考文獻。表1本發明包括的基因磷酸烯醇丙酮酸糖類磷酸轉移酶系統表2GENBANK鑑定的基因1該基因序列在所列參考文獻中已經公開。但是，本發明獲得的序列明顯較公開序列長。推測公開的序列起始密碼子錯誤，因此僅為實際編碼區的一個片段。表3可用於實施本發明的棒桿菌和短桿菌菌株ATCC美國典型培養物保藏中心，Rockville，MD，USAFERM發酵研究所，Chiba，日本NRRL農業研究機構保藏中心，北方區域研究實驗室，Peoria，IL，USACECT西班牙典型培養物保藏中心，Valencia，西班牙NCIMB國立工業和海洋微生物保藏中心.，Aberdeen，UKCBS真菌菌種保藏中心，Baarn，NLNCTC國立典型培養物保藏中心，London，UKDSMZ德意志微生物保藏中心，Braunschweig，德國可參見Sugawara，H.etal.(1993)WorlddirectoryofcollectionsofculturesofmicroorganismsBacteria，fungiandyeasts(4thedn)，Worldfederationforculturecollectionsworlddatacenteronmicroorganisms，Saimata，Japen.表4序列比較結果表4(續)實施例實施例1穀氨酸棒桿菌ATCC13032全部基因組DNA的製備穀氨酸棒桿菌(ATCC13032)培養物在BHI培養基(Difco)中，30℃劇烈振蕩培養過夜。離心收集細胞，棄上清，細胞重新懸浮在5ml緩衝液I(培養物原體積的5％-所有指出的體積都是對於100ml培養物體積計算的)中。緩衝液I的組成140.34g/l蔗糖，2.46g/lMgSO4×7H2O，10ml/lKH2PO4溶液(100g/l，KOH調節至PH6.7)，50g/lM12濃縮物(10g/l(NH4)2SO4，1g/lNaCl，2g/lMgSO4×7H2O，0.2g/lCaCl2，0.5g/l酵母提取物(Difco))，10ml/l微量元素混合物(200mg/lFeSO4×H2O，10mg/lZnSO4×7H2O，3mg/lMnCl2×4H2O，30mg/lH3BO3，20mg/lCoCl2×6H2O，1mg/lNiCl2×6H2O，3mg/lNa2MoO4×2H2O)，500mg/l絡合劑(EDTA或者檸檬酸)，100ml/l維生素混合物(0.2mg/l生物素，0.2mg/l葉酸，20mg/lp-氨基安息香酸，20mg/l核黃素，40mg/lpanthothenate，140mg/l煙酸，40mg/l鹽酸吡多醛，200mg/l肌醇)。懸浮液中加入溶菌酶至終濃度2.5mg/ml。37℃孵育大約4小時之後，細胞壁被降解，得到的原生質體用離心收集。沉澱用5ml緩衝液I洗一次，用5mlTE緩衝液(10mMTris-HCl，1mlEDTA，pH8)洗一次。沉澱用4mlTE緩衝液重懸，並加入0.5mlSDS溶液(10％)和0.5mlNaCl溶液(5M)。加入蛋白酶K至終濃度200μg/ml，懸浮液在37℃孵育約18小時。DNA用苯酚、苯酚-氯仿-異戊醇、氯仿-異戊醇按照標準程序提取純化。然後，加入1/50體積的3M乙酸鈉和2倍體積的乙醇，在-20℃孵育30分鐘，用使用SS34轉頭(Sorvall)的高速離心機12,000rpm離心30分鐘，沉澱DNA。把DNA溶解在含有20μg/mlRNaseA的1mlTE緩衝液中，在1000mlTE緩衝液中4℃透析至少3小時。這段時間中，更換緩衝液3次。每0.4ml透析的DNA溶液中，加入0.4ml2MLiCl和0.8ml乙醇。在-20℃孵育30分鐘後，離心(13,000rpm，BiofugeFresco，Heraeus，Hanau，Germany)收集DNA。DNA沉澱融解在TE緩衝液中。按該程序製備的DNA可以用於所有目的，包括southern雜交和基因組文庫的構建。實施例2在大腸桿菌中穀氨酸棒桿菌ATCC13032的基因組文庫的構建使用如在實施例1中所描述製備的DNA，按照已知的和充分建立的方法(參見，例如Sambrook，J.etal.(1989)「MolecularCloningALaboratoryManual」ColdSpringHarborLaboratory，ColdSpringHarborLaboratoryPress，或者Ausubel，F.M.etal.(1994)「CurrentProtocolsinMolecularBilogy」，JohnWileySons.)，可以構建粘粒文庫和質粒文庫。可以使用任何質粒和粘粒。質粒pBR322(Sutcliffe，J.G.(1979)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，753737-3741)；pACY177(ChangeCohen(1978)J.Bacteriol1341141-1156)，pBS系列質粒(pBSSK+，pBSSK-和其他質粒；Stratagene，LaJolla，USA)，粘粒SuperCos1(Stratagene，LaJolla，USA)或者Lorist6(Gibson，T.J.，RosenthalA.andWaterson，R.H.(1987)Gene53283-286)可以用於特殊用途。專門在穀氨酸棒桿菌中使用的基因文庫可以用質粒pSL109(Lee，H.-S.andA.J.Sinskey(1994)J.Microbiol.Biotechnol.4256-263)構建。實施例3DNA測序和計算機功能分析按照標準方法，使用如在實施例2中所描述基因組文庫，可以進行DNA測序，特別是用使用ABI377測序儀的鏈終止方法(參見，例如Fleischman，R.D.etal.(1995)「Whole-genomeRandomSequencingandAssemblyofHaemophilusInfluenzaeRd.，Science，269496-512)。使用具有以下核苷酸序列的測序引物5』-GGAAACAGTATGACCATG-3』或者5』-GTAAAACGACGGCCAGT-3』。實施例4體內突變可以通過大腸桿菌或者其他微生物(例如，芽孢桿菌某些菌或者像是釀酒酵母的酵母)的質粒(或者其他載體)DNA的傳代，進行穀氨酸棒桿菌的體內突變，其中這些微生物保持其遺傳信息整體性的能力已被損傷。典型的突變株，在DNA修復系統的基因中有突變(例如，mutHLS，mutD，mutT等；參考文獻參見Rupp，W.D.(1996)DNArepairmechanisms，inEscherichiacoliandSalmonella，p.2277-2294，ASMWashington.)。這些菌株對於技術熟練的人來說是熟知的。這些菌株的使用闡述在，例如Greener，A.andCallahan，M.(1994)Strategies732-34中。實施例5在大腸桿菌和穀氨酸棒桿菌之間傳遞的DNA棒桿菌和短桿菌菌種含有能自發複製的內源質粒(像是例如，pHM1519或者pBL1)(評論參見，例如，Martin，J.F.etal.(1987)Biotechnology，5137-146)。大腸桿菌和穀氨酸棒桿菌的穿梭載體，可以使用大腸桿菌的標準載體容易的構建(Sambrook，J.etal.(1989)「MolecularCloningALaboratoryManual」ColdSpringHarborLaboratory，ColdSpringHarborLaboratoryPress或者Ausubel，F.M.etal.(1994)「CurrentProtocolsinMolecularBilogy」，JohnWileySons.)，即在其中加入穀氨酸棒桿菌的複製叉起始點和合適的標記。這種複製起始點，優選是從棒桿菌和短桿菌菌種中分離的內源質粒獲得的。用作這些菌種轉化標記這一特殊用途的是卡那黴素抗性基因(例如來自Tn5或者Tn903轉座子的那些卡那黴素抗性基因)或者氯黴素抗性基因(Winnacker，E.L.(1987)「FromGenestoClones-IntroductiontoGeneTechnology，VCH，Weinheim)。在構建各種野生型穿梭載體的文獻中有許多實例，這些穿梭載體可以在大腸桿菌和穀氨酸棒桿菌中複製，並且可以用於各種目的，其中包括基因過量表達(參考文獻參見，例如，Yoshihama，M.etal.(1985)J.Bacteriol.162591-597，MartinJ.F.etal.(1987)Biotechnology，5137-146和Eikmanns，B.J.eta；(1991)Gene，10293-98)。使用標準方法可以把感興趣的基因克隆到上述穿梭載體中，並且可以把該雜交載引入穀氨酸棒桿菌菌株中。穀氨酸棒桿菌的轉化可以通過原生質體轉化(Kastsumata，R.etal.(1984)J.Bacteriol.159306-311)，電傳孔(Liebl，E.etal.(1989)FEMSMicrobiol.Letters，53399-303)實現，當使用特殊的載體時，也可以通過結合作用(例如在Schfer，Aetal.(1990)J.Bacteriol.1721663-1666)實現。也可以通過從穀氨酸棒桿菌製備質粒DNA(使用技術上已知的標準方法)並將其轉化到大腸桿菌中，而把穿梭載體從穀氨酸棒桿菌轉移到大腸桿菌。這一轉化步驟可以使用標準方法進行，但是使用Mcr缺陷型大腸桿菌菌株，例如NM522(GoughMurray(1983)J.Mol.Biol.1661-19)是有利的。使用含有pCG1(U.S.PatentNo.4,617,267)或者其片段的質粒，並且可以選擇來自TN903的卡那黴素抗性基因(Grindley，N.D.andJoyce，C.M.(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA77(12)7176-7180)，就可以在穀氨酸棒桿菌中過量表達基因。另外，使用質粒pSL109(Lee，H.-S.andA.J.Sinskey(1994)J.Microbiol.Biotechnol.4256-263)也可以在穀氨酸棒桿菌中過量表達基因。除了使用可複製質粒以外，也可以通過基因組整合而實現基因的過量表達。穀氨酸棒桿菌或者其他棒桿菌或者短桿菌菌種的基因組整合，可以通過熟知的方法實現，例如基因組區域的同源重組，限制性核酸內切酶介導的整合(REMI)(參見例如，DEPatent19823834)，或者通過使用轉座子。也可以通過修飾調節區域(例如，啟動子、阻抑物和/或增強子)，通過使用定向位點方法(例如同源重組)或者基於隨機事件方法(例如轉座子突變或者REMI)的序列修飾、插入或者缺失，來調節感興趣基因的活性。用作轉錄終止子的核酸序列，也可以被插入到本發明一個或者多個基因編碼區域的3』；這樣的終止子在技術上是熟知的，並且描述在例如Winnacker，E.L.(1987)FromGenestoClones-IntroductiontoGeneTechnology.VCHWeinheim中。實施例6突變蛋白質表達的估算被轉化宿主細胞中突變蛋白質活性的觀測，依賴於這一事實，即突變蛋白質以與野生型蛋白質相似的方式和相似的數量表達。確定突變基因轉錄水平(用於基因產物翻譯的mRNA的數量指標)的一種有用的方法是進行Northern雜交(參考文獻參見，例如，Ausubeletal.(1988)CurrentProtocolsinMolecularBiology，WileyNewYork)，其中設計的用於結合感興趣基因的引物標記有可探測的標記(通常是放射性的或者化學發光的)，從而，當生物體培養物的全部RNA被提取出，跑凝膠電泳，轉移到穩定介質上並與該探針孵育，結合探針的結合和數量便指示了該基因mRNA的存在和數量。該信息是突變基因轉錄程度的證據。可以使用幾種方法從穀氨酸棒桿菌中製備全部細胞RNA，這在技術上是熟知的，例如描述在Bormann，E.R.etal.(1992)Mol.Microbiol.6317-326中的。為了估算由該mRNA翻譯的蛋白質的存在和相對數量，可以使用標準技術，例如Wesstern雜交(參見，例如，Ausubeletal.(1988)CurrentProtocolsinMolecularBiology，WileyNewYork)。在該方法中，提取全部細胞蛋白質，通過凝膠電泳分離，轉移到像是硝酸纖維素這樣的介質上，和與所需蛋白質特異結合的探針共孵育，例如抗體。該探針通常標記有易於檢測的化學發光的或者比色的標記。觀測到的標記的存在和數量，指示了出現在細胞中的所需突變蛋白質的存在和數量。實施例7遺傳修飾的穀氨酸棒桿菌的生長-介質和培養條件遺傳修飾的穀氨酸棒桿菌可以培養在合成或者天然生長培養基中。用於穀氨酸棒桿菌的各種不同的生長培養基是已知的並且是易於得到的(Lieb，etal.(1989)Appl.Microbiol.Biotechno.，32205-210；vonderOstenetal.(1998)BiotechnologyLetters，1111-16；PatentDE4,120,867；Liebl(1992)「TheGenusCorynebacterium，inProcaryotes，VolumeII，Balows，A.etal.，eds.Springer-Verlag)。這些培養基含有一種或者多種碳源、氮源、無機鹽、維生素和微量元素。優選的碳源是糖類，例如單糖、二糖或者多糖。例如，葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、核糖、山梨糖、核酮糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖，棉子糖，澱粉或者纖維素，都可用作很好的碳源。也可以通過複雜化合物向培養基提供糖類，例如糖蜜或者其他糖類精煉的副產物。提高不同碳源的混合物也是有利的。其他可用的碳源有酒精和有機酸，例如甲醇、乙醇、乙酸或者乳酸。氮源通常是有機或者無機的氮化合物，或者含有這些化合物的物質。代表性的氮源包括氨氣或者銨鹽，例如NH4Cl或者(NH4)2SO4、NH4OH、硝酸鹽、尿素、胺基酸或者複雜的氮源，例如玉米浸泡液、大豆粉、大豆蛋白、酵母提取物、肉類提取物或者其他。可以包含在培養基中的無機鹽化合物，包括鹽酸鹽、磷酸鹽或者硫酸鹽的鈣、鎂、鈉、鈷、鉬、鉀、錳、鋅、銅或者鐵。螯合劑可以加到培養基中，以維持溶液中的金屬離子。特別有用的螯合劑包括二羥基苯酚，像是兒茶酚和原兒茶酸，或者有機酸，像是檸檬酸。培養基典型的也含有生長因子，例如維生素和生長促進劑，它們的實例包括生物素、核黃素、硫胺、葉酸、煙酸、泛酸鹽和吡多醇。生長因子和鹽經常來自複雜的培養基成分，例如酵母提取物、糖蜜、玉米浸泡液和其他成分。培養基化合物的確切組成強烈的依賴於直接實驗，而且對於每一個具體情況具體決定。關於培養基最優化的信息通過在教科書「AppliedMicrobiol.Physiology，APracticalApproach」(eds.P.M.Rhodes，P.F.Stanbury，IRLPress(1997)pp.53-73，ISBN0199635773)」中。也可以從商業供應商那裡選擇生長培養基，像是standard1(Merck)或者BHI(grainheartinfusion，DIFCO)或者其他的。所有培養基組分都要通過加熱(1.5bar，120℃，20分鐘)或者無菌過濾滅菌。組分可以一起滅菌，或者如果必要的話分開單獨滅菌。所有的培養基組分可以在生長的開始就加入，或者可以選擇連續性或者分批加入。培養條件對每個實驗分別確定。溫度應該在15℃到45℃範圍內。溫度可以保持恆定，或者在實驗中改變。培養基的pH在5到8.5範圍內，優選的在大約7.0，並且可以通過培養基中緩衝液的添加來維持。針對這一目的有代表性的緩衝液是磷酸鉀緩衝液。合成緩衝液，例如MOPS、HEPES、ACES以及其他的，也可以代替使用或者同時使用。也可以在生長過程中通過添加NaOH或者NH4OH，以維持穩定的培養pH。如果使用像是酵母提取物這樣的複雜培養基組分，可以減少添加緩衝液的必要性，這是因為許多複雜化合物具有很強的緩衝能力這一事實。如果使用發酵罐培養微生物，也可以使用氨氣控制pH。孵育時間通常在幾小時到幾天範圍內。這一時間的選取是為了允許在液體培養基中積累最大量的產物。公布的生長實驗可是在各種容器中進行，例如微量滴定板、玻璃試管、玻璃搖瓶或者不同大小的玻璃或者金屬的發酵罐。為了篩選大量的克隆，微生物應該培養在有擋板或者沒有擋板的微量滴定板、玻璃試管或者搖瓶中。優選的使用100ml搖瓶，加入10％(體積)的所需培養基。搖瓶應該放在搖床上搖動(振幅25毫米)，速度範圍100-300rpm。可以通過保持溼潤的空氣減少蒸發損失；或者，對蒸發損失進行數學修正。如果要檢測遺傳修飾的克隆，那麼也應該檢測未經修飾的對照克隆或者含有基本質粒但沒有任何插入的對照克隆。使用生長在瓊脂板上30℃孵育的細胞，例如CM平板(10g/l葡萄糖，2.5g/lNaCl，2g/l尿素，10g/l多腖，5g/l酵母提取物，5g/l肉汁提取物，22g/l瓊脂，2MNaOH調至pH6.8)，接種培養基至OD600值為0.5-1.5。培養基的接種可以通過引入來自CM平板的穀氨酸棒桿菌細胞的鹽懸浮液，或者通過加入該細菌的液體預培養物實現。實施例8突變蛋白質功能的體外分析酶的活性和動力學參數的測定在技術上是已經很好建立了的。任何對給定的經過改變的酶的活性測定實驗，必須適合野生型酶的特殊活性，這完全在技術熟練者的能力之內。關於酶的概括評論，以及關於結構、動力學、原理、方法、應用和確定許多酶活性實例的明確細節，可以在例如以下參考文獻中找到Dixon，M.，andWebb，E.C.，(1979)Enzymes.LongmansLondon；Fersht，(1985)EnzymeStructureandMechanism.FreemanNewYork；Walsh，(1979)EnzymaticReactionMechanisms.FreemanSanFrancisco；Price，N.C.，Stevens，L.(1982)FundamentalsofEnzymology.OxfordUniv.PressOxford；Boyer，P.D.，ed.(1983)TheEnzymes，3rded.AcademicPressNewYork；Bisswanger，H.，(1994)Enzymkinetik，2nded.VCHWeinheim(ISBN3527300325)；Bergmeyer，H.U.，Bergmeyer，J.，Graβl，M.，eds.(1983-1986)MethodsofEnzymaticAnalysis，3rded.，vol.I-XII，VerlagChemieWeinheim；andUllmann’sEncyclopediaofIndustrialChemistry(1987)vol.A9，「Enzymes」.VCHWeinheim，p.352-363。結合DNA的蛋白質的活性可以通過幾種技術上已知的方法測定，例如DNA條帶移位分析(也稱作凝膠阻滯分析)。這些蛋白質對其他分子表達的作用，可以用報告基因分析測定(例如描述在Kolmar，H.etal.(1995)EMBOJ.143895-3904中的，及其引用的參考文獻)。報告基因測試系統是已知的，並且在原核和真核細胞中的應用都已建立，使用像是beta-半乳糖苷酶、綠色螢光蛋白和幾種其他蛋白質這樣的酶。膜轉運蛋白質活性的測定可以根據例如描述在Gennis，R.B.(1989)「Pores，ChannelsandTransporters」，inBiomembrane，MolecularStructureandFunction，SpringerHeidelberg，p.85-137；199-234；and270-322中的那些技術進行。實施例9突變蛋白質對於所需產物生產的效果的分析穀氨酸棒桿菌遺傳修飾對於所需化合物(例如胺基酸)生產的作用，可以這樣估計，即通過合適條件下(例如以上描述的那些)生長已修飾的微生物，並且分析增加所需產物(例如，胺基酸)生產的培養基和/或細胞組分。這些分析技術對於熟練常規技術者來說是熟知的，包括光譜分析、薄層層析、各種染色方法、酶促方法和微生物方法，以及像是高效液相色譜(Ullman，EncyclopediaofIndustrialChemistry，vol.A2，p.89-90andp.443-613，VCHWeinheim(1985)；Fallon，A.etal.，(1987)「ApplicationsofHPLCinBiochemistry」inLaboratoryTechniquesinBiochemistryandMolecularBiology，vol.17；Rehmetal.(1993)Biotechnology，vol.3，ChapterIII「Productrecoveryandpurification」，page469-714，VCHWeinheim；Belter，P.A.etal.(1988)Bioseparationsdownstreamprocessingforbiotechnology，JohnWileyandSons；Kennedy，J.F.andCabral，J.M.S.(1992)Recoveryprocessesforbiologicalmaterials，JohnWileyandSons；Shaeiwitz，J.A.andHenry，J.D.(1988)Biochemicalseparations，inUlmann’sEncyclopediaofIndustrialChemistry，vol.B3，Chapter11，page1-27，VCHWeinheim；andDechow，F.J.(1989)Separationandpurificationtechniquesinbiotechnology，NoyesPublications)這樣的分析層析。除了對最終發酵產物的測定，也可以對用於所需化合物生產的代謝途徑的其他組分進行分析，例如中間體和副產物，以確定生物體的生產能力、產量、和/或化合物的生產效率。分析方法包括培養基中營養物水平(例如，糖類、烴、氮源、磷酸以及其他離子)的測定，生物量組成和生長的測定，生物合成途徑常見代謝產物的生產的分析，以及對發酵中產生氣體的測定。這些測定的標準方法略述在AppliedMicrobialPhysiology，APracticalApproach，P.M.RhodesandP.F.Stanbury，eds.，IRLPress，p.103-163；and165-192(ISBN0199635773)及其引用的參考文獻中。實施例10穀氨酸棒桿菌培養物中所需產物的純化從穀氨酸棒桿菌細胞中或者上述培養基的上清中回收所需產物，可以通過技術上已知的各種方法進行。如果所需產物不是細胞分泌的，那麼可以通過低速離心從培養基中收集細胞，用標準技術裂解細胞，例如機械力或者超聲波。離心除去細胞碎片，保留含有可溶蛋白的上清部分用於進一步純化所需化合物。如果產物是從穀氨酸棒桿菌細胞分泌的，那麼用低速離心從培養基中除去細胞，保留上清部分用於進一步純化。任何一種純化方法得到的上清部分，用合適的樹脂進行層析，所需分子被層析樹脂保留，而樣品中的很多雜質不被保留，或者雜質被樹脂保留，而樣品不被保留。使用相同或者不同的層析樹脂，可以根據需要重複這一層析步驟。熟悉常規技術者可以非常熟練的選擇合適的層析樹脂，並且熟知這些樹脂對於待純化特定分子最有效的應用。純化的產物可以用過濾或者超濾濃縮，並且貯存在產物穩定性最大的溫度下。技術上已知的純化方法非常多，前述的純化方法並不意味著僅僅局限於此。這些純化方法描述在，例如Bailey，J.E.Ollis，D.F.BiochmicalEngineeringFundamentals，McGraw-HillNewYork(1986)中。分離化合物的特性和純度，可以技術上的標準技術估計。這包括高效液相色譜(HPLC)、分光方法、染色方法、薄層層析、NIRS、酶促方法或者微生物方法。這些分析方法在以下文獻中有評論Pateketal.(1994)Appl.Environ.Microbiol.60133-140；Malakhovaetal.(1996)Biotekhnologiya1127-32；andSchmidtetal.(1998)BioprocessEngineer.1967-70.Ulmann’sEncyclopediaofIndustrialChemistry，(1996)vol.A27，VCHWeinheim，p.89-90，p.521-540，p.540-547，p.559-566，575-581andp.581-587；Michal，G.(1999)BiochemicalPathwaysAnAtlasofBiochemistryandMolecularBiology，JohnWileyandSons；Fallon，A.etal.(1987)ApplicationsofHPLCinBiochemistryinLaboratoryTechniquesinBiochemistryandMolecularBiology，vol.17。實施例11本發明基因序列的分析序列比較和兩條序列之間同源性百分比的測定，是技術上已知的技術，可以使用數學運算法則完成，例如KarlinandAltschul(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA872264-68中的運算法則，該運算法則在KarlinandAltschul(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA905873-77中有修改。該運算法則被整合在Altschul，etal.(1990)J.Mol.Biol.215403-10中的NBLAST和XBLAST程序(2.0版)中。BLAST核苷酸搜尋可以用NBLAST程序進行，score＝100，wordlength＝12，可以得到與本發明PTS核酸分子同源的核苷酸序列。BLAST蛋白質搜尋可以用XBLAST程序進行，score＝50，wordlength＝3，可以得到與本發明PTS蛋白質分子同源的胺基酸序列。出於比較的目的，為了獲得有間隙的序列對比，可以使用描述在Altschuletal.，(1997)NucleicAcidsRes.25(17)3389-3402中的GappedBLAST。當使用BLAST和GappedBLAST程序時，熟悉常規技術者知道對於特定的待分析序列如何優化程序(例如，XBLAST和NBLAST)的參數。用於序列比較的另一個數學運算法則實例是，Meyers和Miller運算法則((1998)Comput.Appl.Biosci.411-17)。該運算法則被整合在ALIGN程序(2.0版)中，該程序是GCG序列序列對比軟體包的一部分。當使用ALIGN程序比較胺基酸序列時，可以使用PAM120重量殘基表、間隙長度處罰12、間隙處罰4。其他的序列分析運算法則在技術上也是已知的，包括ADVANCE和ADAM，敘述在TorelliandRobotti(1994)Comput.Appl.Biosci.103-5中；和FASTA，敘述在PearsonandLipman(1998)P.N.A.S.852444-8中。兩條胺基酸序列之間的百分比同源性也可以使用GCG軟體包(http://www.gcg.com有提供)中的GAP程序實現，使用Blosum62矩陣或者PAM250矩陣，間隙分量12、10、8、6或者4，長度分量2、3或者4。兩條核酸序列之間的百分比同源性可以使用GCG軟體包中的GAP程序實現，使用標準參數，例如間隙分量50和長度分量3。本發明基因序列與Genbank中序列之間的比較分析，可以使用技術上已知的技術進行(參見，例如，BexevanisandOuellette，eds.(1998)BioinformaticsAPracticalGuidetotheAnalysisofGenesandProteins.JohnWileyandSonsNewYork)。本發明基因序列，通過三個步驟的方法與Genbank中的序列進行比較。在第一步中，對本發明的每一條序列相對Genbank中的核苷酸序列進行BLASTN分析(例如，本地序列對比分析)，保留最高的500個匹配作進一步分析。然後對這500個匹配作FASTA搜尋(例如，本地與全世界的組合序列對比分析，在其中對限定的序列區域進行序列對比)。接下來，對本發明的每條基因序列與FASTA的三個最高匹配，使用GCG軟體包中的GAP程序(使用標準參數)進行全世界序列對比。為了得到正確結果，從Genbank選出的序列長度，使用技術上熟知的方法調節為查詢序列的長度。該分析的結果列在表4中。雖然這樣得到的結果，與對本發明每條基因相對於Genbank每條對照所進行的單獨GAP(全世界)分析得到的結果，是一致的，但是相對於大資料庫的GAP(全世界)分析來說，所需的計算時間大大減少。沒有得到截止值以上序列對比的本發明序列，在表4中表明，缺少序列對比信息。熟悉常規技術者能夠深一層的理解，在表4中列出的標題「％homology(GPA)」下的GAP序列對比同源性百分比，是以歐洲數字格式列出的，其中『,』代表十進位點。例如，該列中的值「40,345」代表「40.345％」。實施例12DNA微陣列的構建和操作本發明的序列還可以用於DNA微陣列(DNA陣列的設計、方法和應用技術上是熟知的，描述在，例如，Schena，M.teal.(1995)Science270467-470；Wodicka，L.etal.(1997)NatureBiotechnology151359-1367；DeSaizieu，A.etal.(1998)NatureBiotechnology1645-48；andDeRisi，J.L.etal.(1997)Science278680-686)的構建和應用。DNA微陣列使用固體或者可彎曲的支持物，包括硝酸纖維素、尼龍、玻璃、矽或者其他材料。核酸分子可以以有序的方式連接在表面。合適標記之後，其他核酸或者核酸混合物可以與固定的核酸分子雜交，標記可以用於監控和測量確定區域雜交分子的單獨的信號強度。本方法允許同時定量適用的核酸樣品或者混合物中的全部或者所選擇核酸的相對或者絕對數量。因此，DNA微陣列允許多種(多至6800或者更多)類似核酸表達的分析(參見例如，Schena，M.(1996)BioEssays18(5)427-431)。本發明序列可以用於設計寡聚核苷酸引物，這些引物可以通過像聚合酶鏈式反應這樣的核酸擴增反應擴增一條或者多條穀氨酸棒桿菌基因的確定區域。5』或者3』寡聚核苷酸引物或者合適連接體的選擇和設計，允許得到的PCR產物共價連接到上述支持介質的表面(也描述在，例如，Schena，M.etal.(1995)Science270467-470)。核酸微陣列也可以通過如在Wodicka，L.etal.(1997)NatureBiotechnology151359-1367中描述的原位寡聚核苷酸合成構建。通過照相平板方法，可將矩陣中精確確定的區域暴露在光線中。保護基團是光不穩定的，從而被激活並經受核苷酸添加，但是被掩飾而見不到光的區域不進行任何修飾。接下來的保護和光激活循環，允許在確定位置不同寡聚核苷酸的合成。本發明確定的小區域可以在微陣列上通過固相寡聚核苷酸合成而合成。出現在樣品或者核苷酸混合物中的本發明核酸分子，可以與微陣列雜交。可以根據標準方法標記這些核酸分子。簡單的說，核酸分子(例如，mRNA分子或者DNA分子)可以通過與同位素或者螢光標記的核苷酸結合而被標記，例如，在逆轉錄或者DNA合成中。標記核酸與微陣列的雜交有描述(例如在Schena，M.etal.(1995)supra；Wodicka，L.etal.(1997)，supra；andDeSaizieuA.etal.(1998)，supra中)。雜交分子的檢測和定量要適合特定的結合標記。放射性標記可被探測，例如，在Schena，M.etal.(1995)supra中描述的，螢光標記也可以探測，例如使用Shalonetal.(1996)GemoneResearch6639-645的方法。如上所述，本發明序列在DNA微陣列中的應用，允許不同的穀氨酸棒桿菌菌株或者其他棒桿菌的比較分析。例如，通過核酸陣列方法，可以促進基於個別轉錄分部圖的菌株內改變的研究，以及促進對特定和/或所需的像是致病性、生產能力和壓力承受能力這樣的菌株性質重要的基因的鑑定。同樣，使用核酸陣列技術，也可以比較發酵反應過程中本發明基因表達的分部圖。實施例13細胞蛋白質群體動力學的分析(蛋白質組學)本發明的基因、組成和方法，可以用於研究蛋白質群體的相互作用和動力學，稱作「蛋白質組學」。感興趣的蛋白質群體包括，但是不局限於，穀氨酸棒桿菌的全部蛋白質群體(例如，和其他生物體的蛋白質群體比較起來)，在特殊環境或者代謝條件下(例如，發酵中、高溫或者低溫、或者高pH或低pH)有活性的那些蛋白質，或者在特定生長或者發育階段有活性的那些蛋白質。可以用各種熟知的技術分析蛋白質群體，例如凝膠電泳。細胞蛋白質可以通過例如裂解或者提取獲得，也可以使用各種電泳技術彼此分離。十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離蛋白質，很大程度上基於它們的分子重量。等電聚焦聚丙烯醯胺凝膠電泳(IEF-PAGE)通過等點點(這不僅反映了胺基酸序列，而且放映了蛋白質的翻譯後修飾)分離蛋白質。另一種更加優選的蛋白質分析方法是，IEF-PAGE和SDS-PAGE的連續結合，稱為2-D-凝膠電泳(在例如Hermannetal.(1998)Electrophoresis193217-3221；Fountoulakisetal.(1998)Electrophoresis191193-1202；Langenetal.(1997)Electrophoresis181184-1192；Antelmannetal.(1997)Electrophoresis181451-1463中有描述)。用這些方法分離的蛋白質可以通過標準技術顯現，例如通過染色或者標記。合適的染色在技術上是已知的，包括考馬斯亮藍、銀染或者螢光染料，例如SyproRuby(MolecularProbes)。穀氨酸棒桿菌培養基中包含有放射性標記的胺基酸或者其他蛋白質前體(例如，35S-甲硫氨酸，35S-半胱氨酸，14C-標記胺基酸，15N-胺基酸，15NO3或者15NH4+或者13C-標記胺基酸)，可以使得這些細胞在其蛋白質分離之前就標記蛋白質。類似的，也可以使用螢光標記。根據前述技術可以提取、隔離和分離這些標記蛋白質。用這些技術顯現的蛋白質，可以通過測量所用的染料或者標記作進一步分析。特定蛋白質的數量可以使用例如光學方法，進行定量確定，並且可以與在同一塊凝膠上或者其他凝膠上的其他蛋白質的數量進行比較。可以通過例如光學比較、分光分析、凝膠圖象分析和掃描，或者通過使用照相膠片或者顯示器，對凝膠上的蛋白質進行比較。這些技術在技術上是熟知的。為了確定特定蛋白質的特性，可以使用直接序列測定或者其他標準技術。例如，可以使用N-和/或C-末端胺基酸測序(例如Edman降解)，以及質譜分析(特別是MALDI或者ESI技術(參見例如，Langenetal.(1997)Electrophoresis181184-1192))。此處提供的蛋白質序列，可以用作通過這些技術進行的穀氨酸棒桿菌蛋白質鑑定。通過這些技術得到的信息，可以用於比較蛋白質存在、活性、不同生物條件下(例如，在其他條件中的不同生物體、發酵時間點、培養基條件、或者生物環境)不同樣品間修飾的各種模式。這些試驗得到的數據，可以單獨的，或者與其他技術相結合的用於各種應用，例如比較特定情況下(例如代謝情況)各種生物體的行為，增加生產精細化學物質的菌株的生產能力，或者增加精細化學物質生產的效率。等同聲明熟悉常規技術者可以認識到，或者能夠確定僅僅使用常規實驗，此處描述的本發明的特定實施方案有很多等價物。下面的權利要求意圖包含這些等價物。序列表110BASF公司(BASFAktiengesellschaft)120編碼磷酸烯醇丙酮酸糖類磷酸轉移酶系統蛋白的穀氨酸棒桿菌基因130BGI-122CPPC140PCT/IB00/009731412000-06-27150US60/142,6911511999-07-01150US60/150,3101511999-08-23150DE19942095.51511999-09-03150DE19942097.11511999-09-031603621012111527212DNA213穀氨酸棒桿菌(corynebacteriumglutamicum)220221CDS222(101)..(1504)223RXS003154001ctcatggcatctgcgccgttcgcgttcttgccagtgttggttggtttcaccgcaaccaag60cgtttcggcggcaatgagttcctgggcgccgcgtattggtatggcgatggtgttc115MetAlaMetValPhe15ccgagcttggtgaacggctacgacgtggccgccaccatggctgcgggc163ProSerLeuValAsnGlyTyrAspValAlaAlaThrMetAlaAlaGly101520gaaatgccaatgtggtccctgtttggtttagatgttgcccaagccggt211GluMetProMetTrpSerLeuPheGlyLeuAspValAlaGlnAlaGly253035taccagggcaccgtgcttcctgtgctggtggtttcttggattctggca259TyrGlnGlyThrValLeuProValLeuValValSerTrpIleLeuAla404550acgatcgagaagttcctgcacaagcgactcaagggcactgcagacttc307ThrIleGluLysPheLeuHisLysArgLeuLysGlyThrAlaAspPhe556065ctgatcactccagtgctgacgttgctgctcaccggattccttacattc355LeuIleThrProValLeuThrLeuLeuLeuThrGlyPheLeuThrPhe70758085atcgccattggcccagcaatgcgctgggtgggcgatgtgctggcacac403IleAlaIleGlyProAlaMetArgTrpValGlyAspValLeuAlaHis9095100ggtctacagggactttatgatttcggtggtccagtcggcggtctgctc451GlyLeuGlnGlyLeuTyrAspPheGlyGlyProValGlyGlyLeuLeu105110115ttcggtctggtctactcaccaatcgtcatcactggtctgcaccagtcc499PheGlyLeuValTyrSerProIleValIleThrGlyLeuHisGlnSer120125130ttcccgccaattgagctggagctgtttaaccagggtggatccttcatc547PheProProIleGluLeuGluLeuPheAsnGlnGlyGlySerPheIle135140145ttcgcaacggcatctatggctaatatcgcccagggtgcggcatgtttg595PheAlaThrAlaSerMetAlaAsnIleAlaGlnGlyAlaAlaCysLeu150155160165gcagtgttcttcctggcgaagagtgaaaagctcaagggccttgcaggt643AlaValPhePheLeuAlaLysSerGluLysLeuLysGlyLeuAlaGly170175180gcttcaggtgtctccgctgttcttggtattacggagcctgcgatcttc691AlaSerGlyValSerAlaValLeuGlyIleThrGluProAlaIlePhe185190195ggtgtgaaccttcgcctgcgctggccgttcttcatcggtatcggtacc739GlyValAsnLeuArgLeuArgTrpProPhePheIleGlyIleGlyThr200205210gcagctatcggtggcgctttgattgcactctttaatatcaaggcagtt787AlaAlaIleGlyGlyAlaLeuIleAlaLeuPheAsnIleLysAlaVal215220225gcgttgggcgctgcaggtttcttgggtgttgtttctattgatgctcca835AlaLeuGlyAlaAlaGlyPheLeuGlyValValSerIleAspAlaPro230235240245gatatggtcatgttcttggtgtgtgcagttgttaccttcttcatcgca883AspMetValMetPheLeuValCysAlaValValThrPhePheIleAla250255260ttcggcgcagcgattgcttatggcctttacttggttcgccgcaacggc931PheGlyAlaAlaIleAlaTyrGlyLeuTyrLeuValArgArgAsnGly265270275agcattgatccagatgcaaccgctgctccagtgcctgcaggaacgacc979SerIleAspProAspAlaThrAlaAlaProValProAlaGlyThrThr280285290aaagccgaagcagaagcacccgcagaattttcaaacgattccaccatc1027LysAlaGluAlaGluAlaProAlaGluPheSerAsnAspSerThrIle295300305atccaggcacctttgaccggtgaagctattgcactgagcagcgtcagc1075IleGlnAlaProLeuThrGlyGluAlaIleAlaLeuSerSerValSer310315320325gatgccatgtttgccagcggaaagcttggctcgggcgttgccatcgtc1123AspAlaMetPheAlaSerGlyLysLeuGlySerGlyValAlaIleVal330335340ccaaccaaggggcagttagtttctccggtgagtggaaagattgtggtg1171ProThrLysGlyGlnLeuValSerProValSerGlyLysIleValVal345350355gcattcccatctggccatgctttcgcagttcgcaccaaggctgaggat1219AlaPheProSerGlyHisAlaPheAlaValArgThrLysAlaGluAsp360365370ggttccaatgtggatatcttgatgcacattggtttcgacacagtaaac1267GlySerAsnValAspIleLeuMetHisIleGlyPheAspThrValAsn375380385ctcaacggcacgcactttaacccgctgaagaagcagggcgatgaagtc1315LeuAsnGlyThrHisPheAsnProLeuLysLysGlnGlyAspGluVal390395400405aaagcaggggagctgctgtgtgaattcgatattgatgccattaaggct1363LysAlaGlyGluLeuLeuCysGluPheAspIleAspAlaIleLysAla410415420gcaggttatgaggtaaccacgccgattgttgtttcgaattacaagaaa1411AlaGlyTyrGluValThrThrProIleValValSerAsnTyrLysLys425430435accggacctgtaaacacttacggtttgggcgaaattgaagcgggagcc1459ThrGlyProValAsnThrTyrGlyLeuGlyGluIleGluAlaGlyAla440445450aacctgctcaacgtcgcaaagaaagaagcggtgccagcaacacca1504AsnLeuLeuAsnValAlaLysLysGluAlaValProAlaThrPro455460465taagttgaaaccttgagtgttcg15272102211468212PRT213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)4002MetAlaMetValPheProSerLeuValAsnGlyTyrAspValAlaAla151015ThrMetAlaAlaGlyGluMetProMetTrpSerLeuPheGlyLeuAsp202530ValAlaGlnAlaGlyTyrGlnGlyThrValLeuProValLeuValVal354045SerTrpIleLeuAlaThrIleGluLysPheLeuHisLysArgLeuLys505560GlyThrAlaAspPheLeuIleThrProValLeuThrLeuLeuLeuThr65707580GlyPheLeuThrPheIleAlaIleGlyProAlaMetArgTrpValGly859095AspValLeuAlaHisGlyLeuGlnGlyLeuTyrAspPheGlyGlyPro100105110ValGlyGlyLeuLeuPheGlyLeuValTyrSerProIleValIleThr115120125GlyLeuHisGlnSerPheProProIleGluLeuGluLeuPheAsnGln130135140GlyGlySerPheIlePheAlaThrAlaSerMetAlaAsnIleAlaGln145150155160GlyAlaAlaCysLeuAlaValPhePheLeuAlaLysSerGluLysLeu165170175LysGlyLeuAlaGlyAlaSerGlyValSerAlaValLeuGlyIleThr180185190GluProAlaIlePheGlyValAsnLeuArgLeuArgTrpProPhePhe195200205IleGlyIleGlyThrAlaAlaIleGlyGlyAlaLeuIleAlaLeuPhe210215220AsnIleLysAlaValAlaLeuGlyAlaAlaGlyPheLeuGlyValVal225230235240SerIleAspAlaProAspMetValMetPheLeuValCysAlaValVal245250255ThrPhePheIleAlaPheGlyAlaAlaIleAlaTyrGlyLeuTyrLeu260265270ValArgArgAsnGlySerIleAspProAspAlaThrAlaAlaProVal275280285ProAlaGlyThrThrLysAlaGluAlaGluAlaProAlaGluPheSer290295300AsnAspSerThrIleIleGlnAlaProLeuThrGlyGluAlaIleAla305310315320LeuSerSerValSerAspAlaMetPheAlaSerGlyLysLeuGlySer325330335GlyValAlaIleValProThrLysGlyGlnLeuValSerProValSer340345350GlyLysIleValValAlaPheProSerGlyHisAlaPheAlaValArg355360365ThrLysAlaGluAspGlySerAsnValAspIleLeuMetHisIleGly370375380PheAspThrValAsnLeuAsnGlyThrHisPheAsnProLeuLysLys385390395400GlnGlyAspGluValLysAlaGlyGluLeuLeuCysGluPheAspIle405410415AspAlaIleLysAlaAlaGlyTyrGluValThrThrProIleValVal420425430SerAsnTyrLysLysThrGlyProValAsnThrTyrGlyLeuGlyGlu435440445IleGluAlaGlyAlaAsnLeuLeuAsnValAlaLysLysGluAlaVal450455460ProAlaThrPro46521032111109212DNA213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)220221CDS222(1)..(1086)223FRXA003154003tatgatttcggcggtccagtcggcggtctgctcttcggtctggtctac48TyrAspPheGlyGlyProValGlyGlyLeuLeuPheGlyLeuValTyr151015tcaccaatcgtcatcactggtctgcaccagtccttcccgccaattgag96SerProIleValIleThrGlyLeuHisGlnSerPheProProIleGlu202530ctggagctgtttaaccagggtggatccttcatcttcgcaacggcatct144LeuGluLeuPheAsnGlnGlyGlySerPheIlePheAlaThrAlaSer354045atggctaatatcgcccagggtgcggcatgtttggcagtgttcttcctg192MetAlaAsnIleAlaGlnGlyAlaAlaCysLeuAlaValPhePheLeu505560gcgaagagtgaaaagctcaagggccttgcaggtgcttcaggtgtctcc240AlaLysSerGluLysLeuLysGlyLeuAlaGlyAlaSerGlyValSer65707580gctgttcttggtattacggagcctgcgatcttcggtgtgaaccttcgc288AlaValLeuGlyIleThrGluProAlaIlePheGlyValAsnLeuArg859095ctgcgctggccgttcttcatcggtatcggtaccgcagctatcggtggc336LeuArgTrpProPhePheIleGlyIleGlyThrAlaAlaIleGlyGly100105110gctttgattgcactctttaatatcaaggcagttgcgttgggcgctgca384AlaLeuIleAlaLeuPheAsnIleLysAlaValAlaLeuGlyAlaAla115120125ggtttcttgggtgttgtttctattgatgctccagatatggtcatgttc432GlyPheLeuGlyValValSerIleAspAlaProAspMetValMetPhe130135140ttggtgtgtgcagttgttaccttcttcatcgcattcggcgcagcgatt480LeuValCysAlaValValThrPhePheIleAlaPheGlyAlaAlaIle145150155160gcttatggcctttacttggttcgccgcaacggcagcattgatccagat528AlaTyrGlyLeuTyrLeuValArgArgAsnGlySerIleAspProAsp165170175gcaaccgctgctccagtgcctgcaggaacgaccaaagccgaagcagaa576AlaThrAlaAlaProValProAlaGlyThrThrLysAlaGluAlaGlu180185190gcacccgcagaattttcaaacgattccaccatcatccaggcacctttg624AlaProAlaGluPheSerAsnAspSerThrIleIleGlnAlaProLeu195200205accggtgaagctattgcactgagcagcgtcagcgatgccatgtttgcc672ThrGlyGluAlaIleAlaLeuSerSerValSerAspAlaMetPheAla210215220agcggaaagcttggctcgggcgttgccatcgtcccaaccaaggggcag720SerGlyLysLeuGlySerGlyValAlaIleValProThrLysGlyGln225230235240ttagtttctccggtgagtggaaagattgtggtggcattcccatctggc768LeuValSerProValSerGlyLysIleValValAlaPheProSerGly245250255catgctttcgcagttcgcaccaaggctgaggatggttccaatgtggat816HisAlaPheAlaValArgThrLysAlaGluAspGlySerAsnValAsp260265270atcttgatgcacattggtttcgacacagtaaacctcaacggcacgcac864IleLeuMetHisIleGlyPheAspThrValAsnLeuAsnGlyThrHis275280285tttaacccgctgaagaagcagggcgatgaagtcaaagcaggggagctg912PheAsnProLeuLysLysGlnGlyAspGluValLysAlaGlyGluLeu290295300ctgtgtgaattcgatattgatgccattaaggctgcaggttatgaggta960LeuCysGluPheAspIleAspAlaIleLysAlaAlaGlyTyrGluVal305310315320accacgccgattgttgtttcgaattacaagaaaaccggacctgtaaac1008ThrThrProIleValValSerAsnTyrLysLysThrGlyProValAsn325330335acttacggtttgggcgaaattgaagcgggagccaacctgctcaacgtc1056ThrTyrGlyLeuGlyGluIleGluAlaGlyAlaAsnLeuLeuAsnVal340345350gcaaagaaagaagcggtgccagcaacaccataagttgaaaccttgagtgt1106AlaLysLysGluAlaValProAlaThrPro355360tcg11092104211362212PRT213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)4004TyrAspPheGlyGlyProValGlyGlyLeuLeuPheGlyLeuValTyr151015SerProIleValIleThrGlyLeuHisGlnSerPheProProIleGlu202530LeuGluLeuPheAsnGlnGlyGlySerPheIlePheAlaThrAlaSer354045MetAlaAsnIleAlaGlnGlyAlaAlaCysLeuAlaValPhePheLeu505560AlaLysSerGluLysLeuLysGlyLeuAlaGlyAlaSerGlyValSer65707580AlaValLeuGlyIleThrGluProAlaIlePheGlyValAsnLeuArg859095LeuArgTrpProPhePheIleGlyIleGlyThrAlaAlaIleGlyGly100105110AlaLeuIleAlaLeuPheAsnIleLysAlaValAlaLeuGlyAlaAla115120125GlyPheLeuGlyValValSerIleAspAlaProAspMetValMetPhe130135140LeuValCysAlaValValThrPhePheIleAlaPheGlyAlaAlaIle145150155160AlaTyrGlyLeuTyrLeuValArgArgAsnGlySerIleAspProAsp165170175AlaThrAlaAlaProValProAlaGlyThrThrLysAlaGluAlaGlu180185190AlaProAlaGluPheSerAsnAspSerThrIleIleGlnAlaProLeu195200205ThrGlyGluAlaIleAlaLeuSerSerValSerAspAlaMetPheAla210215220SerGlyLysLeuGlySerGlyValAlaIleValProThrLysGlyGln225230235240LeuValSerProValSerGlyLysIleValValAlaPheProSerGly245250255HisAlaPheAlaValArgThrLysAlaGluAspGlySerAsnValAsp260265270IleLeuMetHisIleGlyPheAspThrValAsnLeuAsnGlyThrHis275280285PheAsnProLeuLysLysGlnGlyAspGluValLysAlaGlyGluLeu290295300LeuCysGluPheAspIleAspAlaIleLysAlaAlaGlyTyrGluVal305310315320ThrThrProIleValValSerAsnTyrLysLysThrGlyProValAsn325330335ThrTyrGlyLeuGlyGluIleGluAlaGlyAlaAsnLeuLeuAsnVal340345350AlaLysLysGluAlaValProAlaThrPro3553602105211372212DNA213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)220221CDS222(101)..(349)223RXA015034005gtatcctcaaaggccttctagctgttgcagctgcagcgcactcggtggatacgacatcca60cgacctatcaaattctttatgctgcaggcgatgccttttcatgttcttggcagtc115MetPheLeuAlaVal15attttggcgattactgcggctcgtaaattcggtgccaatgtctttaca163IleLeuAlaIleThrAlaAlaArgLysPheGlyAlaAsnValPheThr101520tcagtcgcactcgctggtgcattgctgcacacacagcttcaggcagta211SerValAlaLeuAlaGlyAlaLeuLeuHisThrGlnLeuGlnAlaVal253035accgtgttggttgacggtgaactccagtcgatgactctggtggctttc259ThrValLeuValAspGlyGluLeuGlnSerMetThrLeuValAlaPhe404550caaaaggctggtaatgacgtcaccttcctgggcattccagtggtgctg307GlnLysAlaGlyAsnAspValThrPheLeuGlyIleProValValLeu556065cagttggcgttgcatgtagcgagtttgatgaagttgtcgcga349GlnLeuAlaLeuHisValAlaSerLeuMetLysLeuSerArg707580taagaggaggggcgtgtcggtct372210621183212PRT213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)4006MetPheLeuAlaValIleLeuAlaIleThrAlaAlaArgLysPheGly151015AlaAsnValPheThrSerValAlaLeuAlaGlyAlaLeuLeuHisThr202530GlnLeuGlnAlaValThrValLeuValAspGlyGluLeuGlnSerMet354045ThrLeuValAlaPheGlnLysAlaGlyAsnAspValThrPheLeuGly505560IleProValValLeuGlnLeuAlaLeuHisValAlaSerLeuMetLys65707580LeuSerArg21072112187212DNA213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)220221CD8222(101)..(2164)223RXN012994007cgactgcggcgtctcttcctggcactaccattcctcgtcctgaccaactcgccacagctg60gtgcaacggtcacccaagtcaaaggattgaaagaatcagcatgaatagcgtaaat115MetAsnSerValAsn15aattcctcgcttgtccggctggatgtcgatttcggcgactccaccacg163AsnSerSerLeuValArgLeuAspValAspPheGlyAspSerThrThr101520gatgtcatcaacaaccttgccactgttattttcgacgctggccgagct211AspValIleAsnAsnLeuAlaThrValIlePheAspAlaGlyArgAla253035tcctccgccgacgcccttgccaaagacgcgctggatcgtgaagcaaag259SerSerAlaAspAlaLeuAlaLysAspAlaLeuAspArgGluAlaLys404550tccggcaccggcgttcctggtcaagttgctatcccccactgccgttcc307SerGlyThrGlyValProGlyGlnValAlaIleProHisCysArgSer556065gaagccgtatctgtccctaccttgggctttgctcgcctgagcaagggt355GluAlaValSerValProThrLeuGlyPheAlaArgLeuSerLysGly70758085gtggacttcagcggacctgatggcgatgccaacttggtgttcctcatt403ValAspPheSerGlyProAspGlyAspAlaAsnLeuValPheLeuIle9095100gcagcacctgctggcggcggcaaagagcacctgaagatcctgtccaag451AlaAlaProAlaGlyGlyGlyLysGluHisLeuLysIleLeuSerLys105110115cttgctcgctccttggtgaagaaggatttcatcaaggctctgcaggaa499LeuAlaArgSerLeuValLysLysAspPheIleLysAlaLeuGlnGlu120125130gccaccaccgagcaggaaatcgtcgacgttgtcgatgccgtgctcaac547AlaThrThrGluGlnGluIleValAspValValAspAlaValLeuAsn135140145ccagcaccaaaaaccaccgagccagctgcagctccggctgcggcggcg595ProAlaProLysThrThrGluProAlaAlaAlaProAlaAlaAlaAla150155160165gttgctgagagtggggcggcgtcgacaagcgttactcgtatcgtggca643ValAlaGluSerGlyAlaAlaSerThrSerValThrArgIleValAla170175180atcaccgcatgcccaaccggtatcgcacacacctacatggctgcggat691IleThrAlaCysProThrGlyIleAlaHisThrTyrMetAlaAlaAsp185190195tccctgacgcaaaacgcggaaggccgcgatgatgtggaactcgttgtg739SerLeuThrGlnAsnAlaGluGlyArgAspAspValGluLeuValVal200205210gagactcagggctcttccgctgtcaccccagtcgatccgaagatcatc787GluThrGlnGlySerSerAlaValThrProValAspProLysIleIle215220225gaagctgccgacgccgtcatcttcgccaccgacgtgggagttaaagac835GluAlaAlaAspAlaValIlePheAlaThrAspValGlyValLysAsp230235240245cgcgagcgtttcgctggcaagccagtcattgaatccggcgtcaagcgc883ArgGluArgPheAlaGlyLysProValIleGluSerGlyValLysArg250255260gcgatcaatgagccagccaagatgatcgacgaggccatcgcagcctcc931AlaIleAsnGluProAlaLysMetIleAspGluAlaIleAlaAlaSer265270275aagaacccaaacgcccgcaaggtttccggttccggtgtcgcggcatct979LysAsnProAsnAlaArgLysValSerGlySerGlyValAlaAlaSer280285290gctgaaaccaccggcgagaagctcggctggggcaagcgcatccagcag1027AlaGluThrThrGlyGluLysLeuGlyTrpGlyLysArgIleGlnGln295300305gcagtcatgaccggcgtgtcctacatggttccattcgtagctgccggc1075AlaValMetThrGlyValSerTyrMetValProPheValAlaAlaGly310315320325ggcctcctgttggctctcggcttcgcattcggtggatacgacatggcg1123GlyLeuLeuLeuAlaLeuGlyPheAlaPheGlyGlyTyrAspMetAla330335340aacggctggcaagcaatcgccacccagttctctctgaccaacctgcca1171AsnGlyTrpGlnAlaIleAlaThrGlnPheSerLeuThrAsnLeuPro345350355ggcaacaccgtcgatgttgacggcgtggccatgaccttcgagcgttca1219GlyAsnThrValAspValAspGlyValAlaMetThrPheGluArgSer360365370ggcttcctgttgtacttcggcgcagtcctgttcgccaccggccaagca1267GlyPheLeuLeuTyrPheGlyAlaValLeuPheAlaThrGlyGlnAla375380385gccatgggcttcatcgtggcagccctgtctggctacaccgcatacgca1315AlaMetGlyPheIleValAlaAlaLeuSerGlyTyrThrAlaTyrAla390395400405cttgctggacgcccaggcatcgcgccgggcttcgtcggtggcgccatc1363LeuAlaGlyArgProGlyIleAlaProGlyPheValGlyGlyAlaIle410415420tccgtcaccatcggcgctggcttcattggtggtctggttaccggtatc1411SerValThrIleGlyAlaGlyPheIleGlyGlyLeuValThrGlyIle425430435ttggctggtctcattgccctgtggattggctcctggaaggtgccacgc1459LeuAlaGlyLeuIleAlaLeuTrpIleGlySerTrpLysValProArg440445450gtggtgcagtcactgatgcctgtggtcatcatcccgctacttacctca1507ValValGlnSerLeuMetProValValIleIleProLeuLeuThrSer455460465gtggttgttggtctcgtcatgtacctcctgctgggtcgcccactcgca1555ValValValGlyLeuValMetTyrLeuLeuLeuGlyArgProLeuAla470475480485tccatcatgactggtttgcaggactggctatcgtcaatgtccggaagc1603SerIleMetThrGlyLeuGlnAspTrpLeuSerSerMetSerGlySer490495500tccgccatcttgctgggtatcatcttgggcctcatgatgtgtttcgac1651SerAlaIleLeuLeuGlyIleIleLeuGlyLeuMetMetCysPheAsp505510515ctcggcggaccagtaaacaaggcagcctacctctttggtaccgcaggc1699LeuGlyGlyProValAsnLysAlaAlaTyrLeuPheGlyThrAlaGly520525530ctgtctaccggcgaccaagcttccatggaaatcatggccgcgatcatg1747LeuSerThrGlyAspGlnAlaSerMetGluIleMetAlaAlaIleMet535540545gcagctggcatggtcccaccaatcgcgttgtccattgctaccctgctg1795AlaAlaGlyMetValProProIleAlaLeuSerIleAlaThrLeuLeu550555560565cgcaagaagctgttcaccccagcagagcaagaaaacggcaagtcttcc1843ArgLysLysLeuPheThrProAlaGluGlnGluAsnGlyLysSerSer570575580tggctgcttggcctggcattcgtctccgaaggtgccatcccattcgcc1891TrpLeuLeuGlyLeuAlaPheValSerGluGlyAlaIleProPheAla585590595gcagctgacccattccgtgtgatcccagcaatgatggctggcggtgca1939AlaAlaAspProPheArgValIleProAlaMetMetAlaGlyGlyAla600605610accactggtgcaatctccatggcactgggcgtcggctctcgggctcca1987ThrThrGlyAlaIleSerMetAlaLeuGlyValGlySerArgAlaPro615620625cacggcggtatcttcgtggtctgggcaatcgaaccatggtggggctgg2035HisGlyGlyIlePheValValTrpAlaIleGluProTrpTrpGlyTrp630635640645ctcatcgcacttgcagcaggcaccatcgtgtccaccatcgttgtcatc2083LeuIleAlaLeuAlaAlaGlyThrIleValSerThrIleValValIle650655660gcactgaagcagttctggccaaacaaggccgtcgctgcagaagtcgcg2131AlaLeuLysGlnPheTrpProAsnLysAlaValAlaAlaGluValAla665670675aagcaagaagcacaacaagcagctgtaaacgcataatcggaccttgacccgat2184LysGlnGluAlaGlnGlnAlaAlaValAsnAla680685gtc21872108211688212PRT213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)4008MetAsnSerValAsnAsnSerSerLeuValArgLeuAspValAspPhe151015GlyAspSerThrThrAspValIleAsnAsnLeuAlaThrValIlePhe202530AspAlaGlyArgAlaSerSerAlaAspAlaLeuAlaLysAspAlaLeu354045AspArgGluAlaLysSerGlyThrGlyValProGlyGlnValAlaIle505560ProHisCysArgSerGluAlaValSerValProThrLeuGlyPheAla65707580ArgLeuSerLysGlyValAspPheSerGlyProAspGlyAspAlaAsn859095LeuValPheLeuIleAlaAlaProAlaGlyGlyGlyLysGluHisLeu100105110LysIleLeuSerLysLeuAlaArgSerLeuValLysLysAspPheIle115120125LysAlaLeuGlnGluAlaThrThrGluGlnGluIleValAspValVal130135140AspAlaValLeuAsnProAlaProLysThrThrGluProAlaAlaAla145150155160ProAlaAlaAlaAlaValAlaGluSerGlyAlaAlaSerThrSerVal165170175ThrArgIleValAlaIleThrAlaCysProThrGlyIleAlaHisThr180185190TyrMetAlaAlaAspSerLeuThrGlnAsnAlaGluGlyArgAspAsp195200205ValGluLeuValValGluThrGlnGlySerSerAlaValThrProVal210215220AspProLysIleIleGluAlaAlaAspAlaValIlePheAlaThrAsp225230235240ValGlyValLysAspArgGluArgPheAlaGlyLysProValIleGlu245250255SerGlyValLysArgAlaIleAsnGluProAlaLysMetIleAspGlu260265270AlaIleAlaAlaSerLysAsnProAsnAlaArgLysValSerGlySer275280285GlyValAlaAlaSerAlaGluThrThrGlyGluLysLeuGlyTrpGly290295300LysArgIleGlnGlnAlaValMetThrGlyValSerTyrMetValPro305310315320PheValAlaAlaGlyGlyLeuLeuLeuAlaLeuGlyPheAlaPheGly325330335GlyTyrAspMetAlaAsnGlyTrpGlnAlaIleAlaThrGlnPheSer340345350LeuThrAsnLeuProGlyAsnThrValAspValAspGlyValAlaMet355360365ThrPheGluArgSerGlyPheLeuLeuTyrPheGlyAlaValLeuPhe370375380AlaThrGlyGlnAlaAlaMetGlyPheIleValAlaAlaLeuSerGly385390395400TyrThrAlaTyrAlaLeuAlaGlyArgProGlyIleAlaProGlyPhe405410415ValGlyGlyAlaIleSerValThrIleGlyAlaGlyPheIleGlyGly420425430LeuValThrGlyIleLeuAlaGlyLeuIleAlaLeuTrpIleGlySer435440445TrpLysValProArgValValGlnSerLeuMetProValValIleIle450455460ProLeuLeuThrSerValValValGlyLeuValMetTyrLeuLeuLeu465470475480GlyArgProLeuAlaSerIleMetThrGlyLeuGlnAspTrpLeuSer485490495SerMetSerGlySerSerAlaIleLeuLeuGlyIleIleLeuGlyLeu500505510MetMetCysPheAspLeuGlyGlyProValAsnLysAlaAlaTyrLeu515520525PheGlyThrAlaGlyLeuSerThrGlyAspGlnAlaSerMetGluIle530535540MetAlaAlaIleMetAlaAlaGlyMetValProProIleAlaLeuSer545550555560IleAlaThrLeuLeuArgLysLysLeuPheThrProAlaGluGlnGlu565570575AsnGlyLysSerSerTrpLeuLeuGlyLeuAlaPheValSerGluGly580585590AlaIleProPheAlaAlaAlaAspProPheArgValIleProAlaMet595600605MetAlaGlyGlyAlaThrThrGlyAlaIleSerMetAlaLeuGlyVal610615620GlySerArgAlaProHisGlyGlyIlePheValValTrpAlaIleGlu625630635640ProTrpTrpGlyTrpLeuIleAlaLeuAlaAlaGlyThrIleValSer645650655ThrIleValValIleAlaLeuLysGlnPheTrpProAsnLysAlaVal660665670AlaAlaGluValAlaLysGlnGluAlaGlnGlnAlaAlaValAsnAla6756806852109211464212DNA213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)220221CDS222(1)..(441)223FRXA012994009atggaaatcatggccgcgatcatggcagctggcatggtcccaccaatc48MetGluIleMetAlaAlaIleMetAlaAlaGlyMetValProProIle151015gcgttgtccattgctaccctgctgcgcaagaagctgttcaccccagca96AlaLeuSerIleAlaThrLeuLeuArgLysLysLeuPheThrProAla202530gagcaagaaaacggcaagtcttcctggctgcttggcctggcattcgtc144GluGlnGluAsnGlyLysSerSerTrpLeuLeuGlyLeuAlaPheVal354045tccgaaggtgccatcccattcgccgcagctgacccattccgtgtgatc192SerGluGlyAlaIleProPheAlaAlaAlaAspProPheArgValIle505560ccagcaatgatggctggcggtgcaaccactggtgcaatctccatggca240ProAlaMetMetAlaGlyGlyAlaThrThrGlyAlaIleSerMetAla65707580ctgggcgtcggctctcgggctccacacggcggtatcttcgtggtctgg288LeuGlyValGlySerArgAlaProHisGlyGlyIlePheValValTrp859095gcaatcgaaccatggtggggctggctcatcgcacttgcagcaggcacc336AlaIleGluProTrpTrpGlyTrpLeuIleAlaLeuAlaAlaGlyThr100105110atcgtgtccaccatcgttgtcatcgcactgaagcagttctggccaaac384IleValSerThrIleValValIleAlaLeuLysGlnPheTrpProAsn115120125aaggccgtcgctgcagaagtcgcgaagcaagaagcacaacaagcagct432LysAlaValAlaAlaGluValAlaLysGlnGluAlaGlnGlnAlaAla130135140gtaaacgcataatcggaccttgacccgatgtc464ValAsnAla14521010211147212PRT213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)40010MetGluIleMetAlaAlaIleMetAlaAlaGlyMetValProProIle151015AlaLeuSerIleAlaThrLeuLeuArgLysLysLeuPheThrProAla202530GluGlnGluAsnGlyLysSerSerTrpLeuLeuGlyLeuAlaPheVal354045SerGluGlyAlaIleProPheAlaAlaAlaAspProPheArgValIle505560ProAlaMetMetAlaGlyGlyAlaThrThrGlyAlaIleSerMetAla65707580LeuGlyValGlySerArgAlaProHisGlyGlyIlePheValValTrp859095AlaIleGluProTrpTrpGlyTrpLeuIleAlaLeuAlaAlaGlyThr100105110IleValSerThrIleValValIleAlaLeuLysGlnPheTrpProAsn115120125LysAlaValAlaAlaGluValAlaLysGlnGluAlaGlnGlnAlaAla130135140ValAsnAla14521011211580212DNA213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)220221CDS222(101)..(580)223FRXA0188340011cgactgcggcgtctcttcctggcactaccattcctcgtcctgaccaactcgccacagctg60gtgcaacggtcacccaagtcaaaggattgaaagaatcagcatgaatagcgtaaat115MetAsnSerValAsn15aattcctcgcttgtccggctggatgtcgatttcggcgactccaccacg163AsnSerSerLeuValArgLeuAspValAspPheGlyAspSerThrThr101520gatgtcatcaacaaccttgccactgttattttcgacgctggccgagct211AspValIleAsnAsnLeuAlaThrValIlePheAspAlaGlyArgAla253035tcctccgccgacgcccttgccaaagacgcgctggatcgtgaagcaaag259SerSerAlaAspAlaLeuAlaLysAspAlaLeuAspArgGluAlaLys404550tccggcaccggcgttcctggtcaagttgctatcccccactgccgttcc307SerGlyThrGlyValProGlyGlnValAlaIleProHisCysArgSer556065gaagccgtatctgtccctaccttgggctttgctcgcctgagcaagggt355GluAlaValSerValProThrLeuGlyPheAlaArgLeuSerLysGly70758085gtggacttcagcggacctgatggcgatgccaacttggtgttcctcatt403ValAspPheSerGlyProAspGlyAspAlaAsnLeuValPheLeuIle9095100gcagcacctgctggcggcggcaaagagcacctgaagatcctgtccaag451AlaAlaProAlaGlyGlyGlyLysGluHisLeuLysIleLeuSerLys105110115cttgctcgctccttggtgaagaaggatttcatcaaggctctgcaggaa499LeuAlaArgSerLeuValLysLysAspPheIleLysAlaLeuGlnGlu120125130gccaccaccgagcaggaaatcgtcgacgttgtcgatgccgtgctcaac547AlaThrThrGluGlnGluIleValAspValValAspAlaValLeuAsn135140145ccagcaccaaaaaaccaccgagccagctgcagc580ProAlaProLysAsnHisArgAlaSerCysSer15015516021012211160212PRT213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)40012MetAsnSerValAsnAsnSerSerLeuValArgLeuAspValAspPhe151015GlyAspSerThrThrAspValIleAsnAsnLeuAlaThrValIlePhe202530AspAlaGlyArgAlaSerSerAlaAspAlaLeuAlaLysAspAlaLeu354045AspArgGluAlaLysSerGlyThrGlyValProGlyGlnValAlaIle505560ProHisCysArgSerGluAlaValSerValProThrLeuGlyPheAla65707580ArgLeuSerLysGlyValAspPheSerGlyProAspGlyAspAlaAsn859095LeuValPheLeuIleAlaAlaProAlaGlyGlyGlyLysGluHisLeu100105110LysIleLeuSerLysLeuAlaArgSerLeuValLysLysAspPheIle115120125LysAlaLeuGlnGluAlaThrThrGluGlnGluIleValAspValVal130135140AspAlaValLeuAsnProAlaProLysAsnHisArgAlaSerCysSer14515015516021013211631212DNA213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)220221CDS222(77)..(631)223FRXA0188940013accgagccagctgcagctccggctgcggcggccggttgttaagagtggggcggcgtcgac60aagcgttactcgtatcgtggcaatcaccgcatgcccaaccggtatcgcacac112ValAlaIleThrAlaCysProThrGlyIleAlaHis1510acctacatggctgcggattccctgacgcaaaacgcggaaggccgcgat160ThrTyrMetAlaAlaAspSerLeuThrGlnAsnAlaGluGlyArgAsp152025gatgtggaactcgttgtggagactcagggctcttccgctgtcacccca208AspValGluLeuValValGluThrGlnGlySerSerAlaValThrPro303540gtcgatccgaagatcatcgaagctgccgacgccgtcatcttcgccacc256ValAspProLysIleIleGluAlaAlaAspAlaValIlePheAlaThr45505560gacgtgggagttaaagaccgcgagcgtttcgctggcaagccagtcatt304AspValGlyValLysAspArgGluArgPheAlaGlyLysProValIle657075gaatccggcgtcaagcgcgcgatcaatgagccagccaagatgatcgac352GluSerGlyValLysArgAlaIleAsnGluProAlaLysMetIleAsp808590gaggccatcgcagcctccaagaacccaaacgcccgcaaggtttccggt400GluAlaIleAlaAlaSerLysAsnProAsnAlaArgLysValSerGly95100105tccggtgtcgcggcatctgctgaaaccaccggcgagaagctcggctgg448SerGlyValAlaAlaSerAlaGluThrThrGlyGluLysLeuGlyTrp110115120ggcaagcgcatccagcaggcagtcatgaccggcgtgtcctacatggtt496GlyLysArgIleGlnGlnAlaValMetThrGlyValSerTyrMetVal125130135140ccattcgtagctgccggcggcctcctgttggctctcggcttcgcattc544ProPheValAlaAlaGlyGlyLeuLeuLeuAlaLeuGlyPheAlaPhe145150155ggtggatacgacatggcgaacggctggcaagcaatcgccacccagttc592GlyGlyTyrAspMetAlaAsnGlyTrpGlnAlaIleAlaThrGlnPhe160165170tctctgaccaacctgccaggcaacaccgtcgatgttgac631SerLeuThrAsnLeuProGlyAsnThrValAspValAsp17518018521014211185212PRT213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)40014ValAlaIleThrAlaCysProThrGlyIleAlaHisThrTyrMetAla151015AlaAspSerLeuThrGlnAsnAlaGluGlyArgAspAspValGluLeu202530ValValGluThrGlnGlySerSerAlaValThrProValAspProLys354045IleIleGluAlaAlaAspAlaValIlePheAlaThrAspValGlyVal505560LysAspArgGluArgPheAlaGlyLysProValIleGluSerGlyVal65707580LysArgAlaIleAsnGluProAlaLysMetIleAspGluAlaIleAla859095AlaSerLysAsnProAsnAlaArgLysValSerGlySerGlyValAla100105110AlaSerAlaGluThrThrGlyGluLysLeuGlyTrpGlyLysArgIle115120125GlnGlnAlaValMetThrGlyValSerTyrMetValProPheValAla130135140AlaGlyGlyLeuLeuLeuAlaLeuGlyPheAlaPheGlyGlyTyrAsp145150155160MetAlaAsnGlyTrpGlnAlaIleAlaThrGlnPheSerLeuThrAsn165170175LeuProGlyAsnThrValAspValAsp18018521015211416212DNA213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)220221CDS222(1)..(393)223RXA0095140015atccaagcaatcttagagaaggcagcagcgccggcgaagcagaaggct48IleGlnAlaIleLeuGluLysAlaAlaAlaProAlaLysGlnLysAla151015cctgctgtggctcctgctgtaacacccactgacgctcctgcagcctca96ProAlaValAlaProAlaValThrProThrAspAlaProAlaAlaSer202530gtccaatccaaaacccacgacaagatcctcaccgtctgtggcaacggc144ValGlnSerLysThrHisAspLysIleLeuThrValCysGlyAsnGly354045ttgggtacctccctcttcctcaaaaacacccttgagcaagttttcgac192LeuGlyThrSerLeuPheLeuLysAsnThrLeuGluGlnValPheAsp505560acctggggttggggtccatacatgacggtggaggcaaccgacactatc240ThrTrpGlyTrpGlyProTyrMetThrValGluAlaThrAspThrIle65707580tccgccaagggcaaagccaaggaagctgatctcatcatgacctctggt288SerAlaLysGlyLysAlaLysGluAlaAspLeuIleMetThrSerGly859095gaaatcgcccgcacgttgggtgatgttggaatcccggttcacgtgatc336GluIleAlaArgThrLeuGlyAspValGlyIleProValHisValIle100105110aatgacttcacgagcaccgatgaaatcgatgctgcgcttcgtgaacgc384AsnAspPheThrSerThrAspGluIleAspAlaAlaLeuArgGluArg115120125tacgacatctaactactttaaaaggacgaaaa416TyrAspIle13021016211131212PRT213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)40016IleGlnAlaIleLeuGluLysAlaAlaAlaProAlaLysGlnLysAla151015ProAlaValAlaProAlaValThrProThrAspAlaProAlaAlaSer202530ValGlnSerLysThrHisAspLysIleLeuThrValCysGlyAsnGly354045LeuGlyThrSerLeuPheLeuLysAsnThrLeuGluGlnValPheAsp505560ThrTrpGlyTrpGlyProTyrMetThrValGluAlaThrAspThrIle65707580SerAlaLysGlyLysAlaLysGluAlaAspLeuIleMetThrSerGly859095GluIleAlaArgThrLeuGlyAspValGlyIleProValHisValIle100105110AsnAspPheThrSerThrAspGluIleAspAlaAlaLeuArgGluArg115120125TyrAspIle130210172111827212DNA213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)220221CDS222(101)..(1804)223RXN0124440017gatatgtgtttgtttgtcaatatccaaatgtttgaatagttgcacaactgttggttttgt60ggtgatcttgaggaaattaactcaatgattgtgaggatgggtggctactgtggct115ValAlaThrValAla15gatgtgaatcaagacactgtactgaagggcaccggcgttgtcggtgga163AspValAsnGlnAspThrValLeuLysGlyThrGlyValValGlyGly101520gtccgttatgcaagcgcggtgtggattaccccacgccccgaactaccc211ValArgTyrAlaSerAlaValTrpIleThrProArgProGluLeuPro253035caagcaggcgaagtcgtcgccgaagaaaaccgtgaagcagagcaggag259GlnAlaGlyGluValValAlaGluGluAsnArgGluAlaGluGlnGlu404550cgtttcgacgccgctgcagccacagtctcttctcgtttgcttgagcgc307ArgPheAspAlaAlaAlaAlaThrValSerSerArgLeuLeuGluArg556065tccgaagctgctgaaggaccagcagctgaggtgcttaaagctactgct355SerGluAlaAlaGluGlyProAlaAlaGluValLeuLysAlaThrAla70758085ggcatggtcaatgaccgtggctggcgtaaggctgtcatcaagggtgtc403GlyMetValAsnAspArgGlyTrpArgLysAlaValIleLysGlyVal9095100aagggtggtcaccctgcggaatacgccgtggttgcagcaacaaccaag451LysGlyGlyHisProAlaGluTyrAlaValValAlaAlaThrThrLys105110115ttcatctccatgttcgaagccgcaggcggcctgatcgcggagcgcacc499PheIleSerMetPheGluAlaAlaGlyGlyLeuIleAlaGluArgThr120125130acagacttgcgcgacatccgcgaccgcgtcatcgcagaacttcgtggc547ThrAspLeuArgAspIleArgAspArgValIleAlaGluLeuArgGly135140145gatgaagagccaggtctgccagctgtttccggacaggtcattctcttt595AspGluGluProGlyLeuProAlaValSerGlyGlnValIleLeuPhe150155160165gcagatgacctctccccagcagacaccgcggcactagacacagatctc643AlaAspAspLeuSerProAlaAspThrAlaAlaLeuAspThrAspLeu170175180tttgtgggacttgtcactgagctgggtggcccaacgagccacaccgcg691PheValGlyLeuValThrGluLeuGlyGlyProThrSerHisThrAla185190195atcatcgcacgccagctcaacgtgccttgcatcgtcgcatccggcgcc739IleIleAlaArgGlnLeuAsnValProCysIleValAlaSerGlyAla200205210ggcatcaaggacatcaagtccggcgaaaaggtgcttatcgacggcagc787GlyIleLysAspIleLysSerGlyGluLysValLeuIleAspGlySer215220225ctcggcaccattgaccgcaacgcggacgaagctgaagcaaccaagctc835LeuGlyThrIleAspArgAsnAlaAspGluAlaGluAlaThrLysLeu230235240245gtctccgagtccctcgagcgcgctgctcgcatcgccgagtggaagggt883ValSerGluSerLeuGluArgAlaAlaArgIleAlaGluTrpLysGly250255260cctgcacaaaccaaggacggctaccgcgttcagctgttggccaacgtc931ProAlaGlnThrLysAspGlyTyrArgValGlnLeuLeuAlaAsnVal265270275caagacggcaactctgcacagcaggctgcacagaccgaagcagaaggc979GlnAspGlyAsnSerAlaGlnGlnAlaAlaGlnThrGluAlaGluGly280285290atcggcctgttccgcaccgaactgtgcttcctttccgccaccgaagag1027IleGlyLeuPheArgThrGluLeuCysPheLeuSerAlaThrGluGlu295300305ccaagcgttgatgagcaggctgcggtctactcaaaggtgcttgaagca1075ProSerValAspGluGlnAlaAlaValTyrSerLysValLeuGluAla310315320325ttcccagagtccaaggtcgttgtccgctccctcgacgcaggttctgac1123PheProGluSerLysValValValArgSerLeuAspAlaGlySerAsp330335340aagccagttccattcgcatcgatggctgatgagatgaacccagcactg1171LysProValProPheAlaSerMetAlaAspGluMetAsnProAlaLeu345350355ggtgttcgtggcctgcgtatcgcacgtggacaggttgatctgctgact1219GlyValArgGlyLeuArgIleAlaArgGlyGlnValAspLeuLeuThr360365370cgccagctcgacgcaattgcgaaggccagcgaagaactcggccgtggc1267ArgGlnLeuAspAlaIleAlaLysAlaSerGluGluLeuGlyArgGly375380385gacgacgccccaacctgggttatggctccaatggtggctaccgcttat1315AspAspAlaProThrTrpValMetAlaProMetValAlaThrAlaTyr390395400405gaagcaaagtggtttgctgacatgtgccgtgagcgtggcctaatcgcc1363GluAlaLysTrpPheAlaAspMetCysArgGluArgGlyLeuIleAla410415420ggcgccatgatcgaagttccagcagcatccctgatggcagacaagatc1411GlyAlaMetIleGluValProAlaAlaSerLeuMetAlaAspLysIle425430435atgcctcacctggactttgtttccatcggtaccaacgacctgacccag1459MetProHisLeuAspPheValSerIleGlyThrAsnAspLeuThrGln440445450tacaccatggcagcggaccgcatgtctcctgagcttgcctacctgacc1507TyrThrMetAlaAlaAspArgMetSerProGluLeuAlaTyrLeuThr455460465gatccttggcagccagcagtcctgcgcctgatcaagcacacctgtgac1555AspProTrpGlnProAlaValLeuArgLeuIleLysHisThrCysAsp470475480485gaaggtgctcgctttaacaccccggtcggtgtttgtggtgaagcagca1603GluGlyAlaArgPheAsnThrProValGlyValCysGlyGluAlaAla490495500gcagacccactgttggcaactgtcctcaccggtcttggcgtgaactcc1651AlaAspProLeuLeuAlaThrValLeuThrGlyLeuGlyValAsnSer505510515ctgtccgcagcatccactgctctcgcagcagtcggtgcaaagctgtca1699LeuSerAlaAlaSerThrAlaLeuAlaAlaValGlyAlaLysLeuSer520525530gaggtcaccctggaaacctgtaagaaggcagcagaagcagcacttgac1747GluValThrLeuGluThrCysLysLysAlaAlaGluAlaAlaLeuAsp535540545gctgaaggtgcaactgaagcacgcgatgctgtacgcgcagtgatcgac1795AlaGluGlyAlaThrGluAlaArgAspAlaValArgAlaValIleAsp550555560565gcagcagtctaaaccactgttgagctaaaaag1827AlaAlaVal21018211568212PRT213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)40018ValAlaThrValAlaAspValAsnGlnAspThrValLeuLysGlyThr151015GlyValValGlyGlyValArgTyrAlaSerAlaValTrpIleThrPro202530ArgProGluLeuProGlnAlaGlyGluValValAlaGluGluAsnArg354045GluAlaGluGlnGluArgPheAspAlaAlaAlaAlaThrValSerSer505560ArgLeuLeuGluArgSerGluAlaAlaGluGlyProAlaAlaGluVal65707580LeuLysAlaThrAlaGlyMetValAsnAspArgGlyTrpArgLysAla859095ValIleLysGlyValLysGlyGlyHisProAlaGluTyrAlaValVal100105110AlaAlaThrThrLysPheIleSerMetPheGluAlaAlaGlyGlyLeu115120125IleAlaGluArgThrThrAspLeuArgAspIleArgAspArgValIle130135140AlaGluLeuArgGlyAspGluGluProGlyLeuProAlaValSerGly145150155160GlnValIleLeuPheAlaAspAspLeuSerProAlaAspThrAlaAla165170175LeuAspThrAspLeuPheValGlyLeuValThrGluLeuGlyGlyPro180185190ThrSerHisThrAlaIleIleAlaArgGlnLeuAsnValProCysIle195200205ValAlaSerGlyAlaGlyIleLysAspIleLysSerGlyGluLysVal210215220LeuIleAspGlySerLeuGlyThrIleAspArgAsnAlaAspGluAla225230235240GluAlaThrLysLeuValSerGluSerLeuGluArgAlaAlaArgIle245250255AlaGluTrpLysGlyProAlaGlnThrLysAspGlyTyrArgValGln260265270LeuLeuAlaAsnValGlnAspGlyAsnSerAlaGlnGlnAlaAlaGln275280285ThrGluAlaGluGlyIleGlyLeuPheArgThrGluLeuCysPheLeu290295300SerAlaThrGluGluProSerValAspGluGlnAlaAlaValTyrSer305310315320LysValLeuGluAlaPheProGluSerLysValValValArgSerLeu325330335AspAlaGlySerAspLysProValProPheAlaSerMetAlaAspGlu340345350MetAsnProAlaLeuGlyValArgGlyLeuArgIleAlaArgGlyGln355360365ValAspLeuLeuThrArgGlnLeuAspAlaIleAlaLysAlaSerGlu370375380GluLeuGlyArgGlyAspAspAlaProThrTrpValMetAlaProMet385390395400ValAlaThrAlaTyrGluAlaLysTrpPheAlaAspMetCysArgGlu405410415ArgGlyLeuIleAlaGlyAlaMetIleGluValProAlaAlaSerLeu420425430MetAlaAspLysIleMetProHisLeuAspPheValSerIleGlyThr435440445AsnAspLeuThrGlnTyrThrMetAlaAlaAspArgMetSerProGlu450455460LeuAlaTyrLeuThrAspProTrpGlnProAlaValLeuArgLeuIle465470475480LysHisThrCysAspGluGlyAlaArgPheAsnThrProValGlyVal485490495CysGlyGluAlaAlaAlaAspProLeuLeuAlaThrValLeuThrGly500505510LeuGlyValAsnSerLeuSerAlaAlaSerThrAlaLeuAlaAlaVal515520525GlyAlaLysLeuSerGluValThrLeuGluThrCysLysLysAlaAla530535540GluAlaAlaLeuAspAlaGluGlyAlaThrGluAlaArgAspAlaVal545550555560ArgAlaValIleAspAlaAlaVal565210192111629212DNA213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)220221CDS222(98)..(1606)223FRXA0124440019agatgtcgatttctcgaggaagaagttaacgccgaagaaaaccgtgaatcagagcaggag60cgcttcgacgccgctgcagccacagtctcttcttcgtttgcttgagcgctccgaa115LeuLeuGluArgSerGlu15gctgctgaaggaccagcagctgaggtgcttaaagctactgctggcatg163AlaAlaGluGlyProAlaAlaGluValLeuLysAlaThrAlaGlyMet101520gtcaatgaccgtggctggcgtaaggctgtcatcaagggtgtcaagggt211ValAsnAspArgGlyTrpArgLysAlaValIleLysGlyValLysGly253035ggtcaccctgcggaatacgccgtggttgcagcaacaaccaagttcatc259GlyHisProAlaGluTyrAlaValValAlaAlaThrThrLysPheIle404550tccatgttcgaagccgcaggcggcctgatcgcggagcgcaccacagac307SerMetPheGluAlaAlaGlyGlyLeuIleAlaGluArgThrThrAsp55606570ttgcgcgacatccgcgaccgcgtcatcgcagaacttcgtggcgatgaa355LeuArgAspIleArgAspArgValIleAlaGluLeuArgGlyAspGlu758085gagccaggtctgccagctgtttccggacaggtcattctctttgcagat403GluProGlyLeuProAlaValSerGlyGlnValIleLeuPheAlaAsp9095100gacctctccccagcagacaccgcggcactagacacagatctctttgtg451AspLeuSerProAlaAspThrAlaAlaLeuAspThrAspLeuPheVal105110115ggacttgtcactgagctgggtggcccaacgagccacaccgcgatcatc499GlyLeuValThrGluLeuGlyGlyProThrSerHisThrAlaIleIle120125130gcacgccagctcaacgtgccttgcatcgtcgcatccggcgccggcatc547AlaArgGlnLeuAsnValProCysIleValAlaSerGlyAlaGlyIle135140145150aaggacatcaagtccggcgaaaaggtgcttatcgacggcagcctcggc595LysAspIleLysSerGlyGluLysValLeuIleAspGlySerLeuGly155160165accattgaccgcaacgcggacgaagctgaagcaaccaagctcgtctcc643ThrIleAspArgAsnAlaAspGluAlaGluAlaThrLysLeuValSer170175180gagtccctcgagcgcgctgctcgcatcgccgagtggaagggtcctgca691GluSerLeuGluArgAlaAlaArgIleAlaGluTrpLysGlyProAla185190195caaaccaaggacggctaccgcgttcagctgttggccaacgtccaagac739GlnThrLysAspGlyTyrArgValGlnLeuLeuAlaAsnValGlnAsp200205210ggcaactctgcacagcaggctgcacagaccgaagcagaaggcatcggc787GlyAsnSerAlaGlnGlnAlaAlaGlnThrGluAlaGluGlyIleGly215220225230ctgttccgcaccgaactgtgcttcctttccgccaccgaagagccaagc835LeuPheArgThrGluLeuCysPheLeuSerAlaThrGluGluProSer235240245gttgatgagcaggctgcggtctactcaaaggtgcttgaagcattccca883ValAspGluGlnAlaAlaValTyrSerLysValLeuGluAlaPhePro250255260gagtccaaggtcgttgtccgctccctcgacgcaggttctgacaagcca931GluSerLysValValValArgSerLeuAspAlaGlySerAspLysPro265270275gttccattcgcatcgatggctgatgagatgaacccagcactgggtgtt979ValProPheAlaSerMetAlaAspGluMetAsnProAlaLeuGlyVal280285290cgtggcctgcgtatcgcacgtggacaggttgatctgctgactcgccag1027ArgGlyLeuArgIleAlaArgGlyGlnValAspLeuLeuThrArgGln295300305310ctcgacgcaattgcgaaggccagcgaagaactcggccgtggcgacgac1075LeuAspAlaIleAlaLysAlaSerGluGluLeuGlyArgGlyAspAsp315320325gccccaacctgggttatggctccaatggtggctaccgcttatgaagca1123AlaProThrTrpValMetAlaProMetValAlaThrAlaTyrGluAla330335340aagtggtttgctgacatgtgccgtgagcgtggcctaatcgccggcgcc1171LysTrpPheAlaAspMetCysArgGluArgGlyLeuIleAlaGlyAla345350355atgatcgaagttccagcagcatccctgatggcagacaagatcatgcct1219MetIleGluValProAlaAlaSerLeuMetAlaAspLysIleMetPro360365370cacctggactttgtttccatcggtaccaacgacctgacccagtacacc1267HisLeuAspPheValSerIleGlyThrAsnAspLeuThrGlnTyrThr375380385390atggcagcggaccgcatgtctcctgagcttgcctacctgaccgatcct1315MetAlaAlaAspArgMetSerProGluLeuAlaTyrLeuThrAspPro395400405tggcagccagcagtcctgcgcctgatcaagcacacctgtgacgaaggt1363TrpGlnProAlaValLeuArgLeuIleLysHisThrCysAspGluGly410415420gctcgctttaacaccccggtcggtgtttgtggtgaagcagcagcagac1411AlaArgPheAsnThrProValGlyValCysGlyGluAlaAlaAlaAsp425430435ccactgttggcaactgtcctcaccggtcttggcgtgaactccctgtcc1459ProLeuLeuAlaThrValLeuThrGlyLeuGlyValAsnSerLeuSer440445450gcagcatccactgctctcgcagcagtcggtgcaaagctgtcagaggtc1507AlaAlaSerThrAlaLeuAlaAlaValGlyAlaLysLeuSerGluVal455460465470accctggaaacctgtaagaaggcagcagaagcagcacttgacgctgaa1555ThrLeuGluThrCysLysLysAlaAlaGluAlaAlaLeuAspAlaGlu475480485ggtgcaactgaagcacgcgatgctgtacgcgcagtgatcgacgcagca1603GlyAlaThrGluAlaArgAspAlaValArgAlaValIleAspAlaAla490495500gtctaaaccactgttgagctaaaaag1629Val21020211503212PRT213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)40020LeuLeuGluArgSerGluAlaAlaGluGlyProAlaAlaGluValLeu151015LysAlaThrAlaGlyMetValAsnAspArgGlyTrpArgLysAlaVal202530IleLysGlyValLysGlyGlyHisProAlaGluTyrAlaValValAla354045AlaThrThrLysPheIleSerMetPheGluAlaAlaGlyGlyLeuIle505560AlaGluArgThrThrAspLeuArgAspIleArgAspArgValIleAla65707580GluLeuArgGlyAspGluGluProGlyLeuProAlaValSerGlyGln859095ValIleLeuPheAlaAspAspLeuSerProAlaAspThrAlaAlaLeu100105110AspThrAspLeuPheValGlyLeuValThrGluLeuGlyGlyProThr115120125SerHisThrAlaIleIleAlaArgGlnLeuAsnValProCysIleVal130135140AlaSerGlyAlaGlyIleLysAspIleLysSerGlyGluLysValLeu145150155160IleAspGlySerLeuGlyThrIleAspArgAsnAlaAspGluAlaGlu165170175AlaThrLysLeuValSerGluSerLeuGluArgAlaAlaArgIleAla180185190GluTrpLysGlyProAlaGlnThrLysAspGlyTyrArgValGlnLeu195200205LeuAlaAsnValGlnAspGlyAsnSerAlaGlnGlnAlaAlaGlnThr210215220GluAlaGluGlyIleGlyLeuPheArgThrGluLeuCysPheLeuSer225230235240AlaThrGluGluProSerValAspGluGlnAlaAlaValTyrSerLys245250255ValLeuGluAlaPheProGluSerLysValValValArgSerLeuAsp260265270AlaGlySerAspLysProValProPheAlaSerMetAlaAspGluMet275280285AsnProAlaLeuGlyValArgGlyLeuArgIleAlaArgGlyGlnVal290295300AspLeuLeuThrArgGlnLeuAspAlaIleAlaLysAlaSerGluGlu305310315320LeuGlyArgGlyAspAspAlaProThrTrpValMetAlaProMetVal325330335AlaThrAlaTyrGluAlaLysTrpPheAlaAspMetCysArgGluArg340345350GlyLeuIleAlaGlyAlaMetIleGluValProAlaAlaSerLeuMet355360365AlaAspLysIleMetProHisLeuAspPheValSerIleGlyThrAsn370375380AspLeuThrGlnTyrThrMetAlaAlaAspArgMetSerProGluLeu385390395400AlaTyrLeuThrAspProTrpGlnProAlaValLeuArgLeuIleLys405410415HisThrCysAspGluGlyAlaArgPheAsnThrProValGlyValCys420425430GlyGluAlaAlaAlaAspProLeuLeuAlaThrValLeuThrGlyLeu435440445GlyValAsnSerLeuSerAlaAlaSerThrAlaLeuAlaAlaValGly450455460AlaLysLeuSerGluValThrLeuGluThrCysLysLysAlaAlaGlu465470475480AlaAlaLeuAspAlaGluGlyAlaThrGluAlaArgAspAlaValArg485490495AlaValIleAspAlaAlaVal50021021211390212DNA213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)220221CDS222(101)..(367)223RXA0130040021gatcgacattaaatcccctcccttggggggtttaactaacaaatcgctgcgccctaatcc60gttcggattaacggcgtagcaacacgaaaggacactttccatggcttccaagact115MetAlaSerLysThr15gtaaccgtcggttcctccgttggcctgcacgcacgtccagcatccatc163ValThrValGlySerSerValGlyLeuHisAlaArgProAlaSerIle101520atcgctgaagcggctgctgagtacgacgacgaaatcttgctgaccctg211IleAlaGluAlaAlaAlaGluTyrAspAspGluIleLeuLeuThrLeu253035gttggctccgatgatgacgaagagaccgacgcgtcctcttccctcatg259ValGlySerAspAspAspGluGluThrAspAlaSerSerSerLeuMet404550atcatggcgctgggcgcagagcacggcaacgaagttaccgtcacctcc307IleMetAlaLeuGlyAlaGluHisGlyAsnGluValThrValThrSer556065gacaacgctgaagctgttgagaagatcgctgcgcttatcgcacaggac355AspAsnAlaGluAlaValGluLysIleAlaAlaLeuIleAlaGlnAsp70758085cttgacgctgagtaaacaacgctctgcttgttaaa390LeuAspAlaGlu2102221189212PRT213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)40022MetAlaSerLysThrValThrValGlySerSerValGlyLeuHisAla151015ArgProAlaSerIleIleAlaGluAlaAlaAlaGluTyrAspAspGlu202530IleLeuLeuThrLeuValGlySerAspAspAspGluGluThrAspAla354045SerSerSerLeuMetIleMetAlaLeuGlyAlaGluHisGlyAsnGlu505560ValThrValThrSerAspAsnAlaGluAlaValGluLysIleAlaAla65707580LeuIleAlaGlnAspLeuAspAlaGlu8521023211508212DNA213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)220221CDS222(101)..(508)223RXN0300240023ggaacttcgaggtgtcttcgtggggcgtacggagatctagcaagtgtggctttatgtttg60accctatccgaatcaacatgcagtgaattaacatctacttatgtttgtactcaaa115MetPheValLeuLys15gatctgctaaaggcagaacgcatagaactcgaccgcacggtcaccgat163AspLeuLeuLysAlaGluArgIleGluLeuAspArgThrValThrAsp101520tggcgtgaaggcatccgcgccgcaggtgtactcctagaaaagacaaac211TrpArgGluGlyIleArgAlaAlaGlyValLeuLeuGluLysThrAsn253035agcattgattccgcctacaccgatgccatgatcgccagcgtggaagaa259SerIleAspSerAlaTyrThrAspAlaMetIleAlaSerValGluGlu404550aaaggcccctacattgtggtcgctccaggtttcgctttcgcgcacgcc307LysGlyProTyrIleValValAlaProGlyPheAlaPheAlaHisAla556065cgccccagcagagcagtccgcgagaccgctatgtcgtgggtgcgcctg355ArgProSerArgAlaValArgGluThrAlaMetSerTrpValArgLeu70758085gcctcccctgtttccttcggtcacagtaagaatgatcccctcaatctc403AlaSerProValSerPheGlyHisSerLysAsnAspProLeuAsnLeu9095100atcgttgctctcgctgccaaagatgccaccgcacatacccaagcgatg451IleValAlaLeuAlaAlaLysAspAlaThrAlaHisThrGlnAlaMet105110115gcggcattggctaaagctttaggaaaataccgaaaggatctcgacgag499AlaAlaLeuAlaLysAlaLeuGlyLysTyrArgLysAspLeuAspGlu120125130gcacaaagt508AlaGlnSer13521024211136212PRT213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)40024MetPheValLeuLysAspLeuLeuLysAlaGluArgIleGluLeuAsp151015ArgThrValThrAspTrpArgGluGlyIleArgAlaAlaGlyValLeu202530LeuGluLysThrAsnSerIleAspSerAlaTyrThrAspAlaMetIle354045AlaSerValGluGluLysGlyProTyrIleValValAlaProGlyPhe505560AlaPheAlaHisAlaArgProSerArgAlaValArgGluThrAlaMet65707580SerTrpValArgLeuAlaSerProValSerPheGlyHisSerLysAsn859095AspProLeuAsnLeuIleValAlaLeuAlaAlaLysAspAlaThrAla100105110HisThrGlnAlaMetAlaAlaLeuAlaLysAlaLeuGlyLysTyrArg115120125LysAspLeuAspGluAlaGlnSer13013521025211789212DNA213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)220221CDS222(14)..(766)223RXC0095340025cttgcattccccaatggcgccaccaacggtaggcaactacatcatgcagtcc52MetAlaProProThrValGlyAsnTyrIleMetGlnSer1510ttcactcaaggtctgcagttcggcgttgcagttgccgtgattctcttt100PheThrGlnGlyLeuGlnPheGlyValAlaValAlaValIleLeuPhe152025ggtgtccgcaccattcttggtgaactggtccccgcattccaaggtatt148GlyValArgThrIleLeuGlyGluLeuValProAlaPheGlnGlyIle30354045gctgcgaaggttgttcccggagctatccccgcattggatgcaccgatc196AlaAlaLysValValProGlyAlaIleProAlaLeuAspAlaProIle505560gtgttcccctacgcgcagaacgccgttctcattggtttcttgtcttcc244ValPheProTyrAlaGlnAsnAlaValLeuIleGlyPheLeuSerSer657075ttcgtcggtggcttggttggcctgactgttcttgcatcgtggctgaac292PheValGlyGlyLeuValGlyLeuThrValLeuAlaSerTrpLeuAsn808590ccagcttttggtgtcgcgttgattctgcctggtttggtcccccacttc340ProAlaPheGlyValAlaLeuIleLeuProGlyLeuValProHisPhe95100105ttcactggtggcgcggcgggcgtttacggtaatgccacgggtggtcgt388PheThrGlyGlyAlaAlaGlyValTyrGlyAsnAlaThrGlyGlyArg110115120125cgaggagcagtatttggcgcctttgccaacggtcttctgattaccttc436ArgGlyAlaValPheGlyAlaPheAlaAsnGlyLeuLeuIleThrPhe130135140ctccctgctttcctgcttggtgtgcttggttccttcgggtcagagaac484LeuProAlaPheLeuLeuGlyValLeuGlySerPheGlySerGluAsn145150155accactttcggtgatgcggactttggttggttcggaatcgttgttggt532ThrThrPheGlyAspAlaAspPheGlyTrpPheGlyIleValValGly160165170tctgcagccaaggtggaaggtgctggcgggctcatcttgttgctcatc580SerAlaAlaLysValGluGlyAlaGlyGlyLeuIleLeuLeuLeuIle175180185atcgcagcggttcttctgggtggcgcgatggtcttccagaagcgcgtc628IleAlaAlaValLeuLeuGlyGlyAlaMetValPheGlnLysArgVal190195200205gtgaatgggcactgggatccagctcccaaccgtgagcgcgtggagaag676ValAsnGlyHisTrpAspProAlaProAsnArgGluArgValGluLys210215220gcggaagctgatgccactccaacggctggggctcggacctaccctaag724AlaGluAlaAspAlaThrProThrAlaGlyAlaArgThrTyrProLys225230235attgctcctccggcgggcgctcctaccccaccggctcgaagc766IleAlaProProAlaGlyAlaProThrProProAlaArgSer240245250taagatctccaaaaccctgagat78921026211251212PRT213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)40026MetAlaProProThrValGlyAsnTyrIleMetGlnSerPheThrGln151015GlyLeuGlnPheGlyValAlaValAlaValIleLeuPheGlyValArg202530ThrIleLeuGlyGluLeuValProAlaPheGlnGlyIleAlaAlaLys354045ValValProGlyAlaIleProAlaLeuAspAlaProIleValPhePro505560TyrAlaGlnAsnAlaValLeuIleGlyPheLeuSerSerPheValGly65707580GlyLeuValGlyLeuThrValLeuAlaSerTrpLeuAsnProAlaPhe859095GlyValAlaLeuIleLeuProGlyLeuValProHisPhePheThrGly100105110GlyAlaAlaGlyValTyrGlyAsnAlaThrGlyGlyArgArgGlyAla115120125ValPheGlyAlaPheAlaAsnGlyLeuLeuIleThrPheLeuProAla130135140PheLeuLeuGlyValLeuGlySerPheGlySerGluAsnThrThrPhe145150155160GlyAspAlaAspPheGlyTrpPheGlyIleValValGlySerAlaAla165170175LysValGluGlyAlaGlyGlyLeuIleLeuLeuLeuIleIleAlaAla180185190ValLeuLeuGlyGlyAlaMetValPheGlnLysArgValValAsnGly195200205HisTrpAspProAlaProAsnArgGluArgValGluLysAlaGluAla210215220AspAlaThrProThrAlaGlyAlaArgThrTyrProLysIleAlaPro225230235240ProAlaGlyAlaProThrProProAlaArgSer24525021027211553212DNA213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)220221CDS222(101)..(553)223RXC0300140027cccggttcacgtgatcaatgacttcacgagcaccgatgaaatcgatgctgcgcttcgtga60acgctacgacatctaactactttaaaaggacgaaaatattatggactggttaacc115MetAspTrpLeuThr15attcctcttttcctcgttaatgaaatccttgcggttccggctttcctc163IleProLeuPheLeuValAsnGluIleLeuAlaValProAlaPheLeu101520atcggtatcatcaccgccgtgggattgggtgccatggggcgttccgtc211IleGlyIleIleThrAlaValGlyLeuGlyAlaMetGlyArgSerVal253035ggtcaggttatcggtggagcaatcaaagcaacgttgggctttttgctc259GlyGlnValIleGlyGlyAlaIleLysAlaThrLeuGlyPheLeuLeu404550attggtgcgggtgccacgttggtcactgcctccctggagccactgggt307IleGlyAlaGlyAlaThrLeuValThrAlaSerLeuGluProLeuGly556065gcgatgatcatgggtgccacaggcatgcgtggtgttgtcccaacgaat355AlaMetIleMetGlyAlaThrGlyMetArgGlyValValProThrAsn70758085gaagccatcgccggaatcgcacaggctgaatacggcgcgcaggtggcg403GluAlaIleAlaGlyIleAlaGlnAlaGluTyrGlyAlaGlnValAla9095100tggctgatgattctgggcttcgccatctctttggtgttggctcgtttc451TrpLeuMetIleLeuGlyPheAlaIleSerLeuValLeuAlaArgPhe105110115accaacctgcgttatgtcttgctcaacggacaccacgtgctgttgatg499ThrAsnLeuArgTyrValLeuLeuAsnGlyHisHisValLeuLeuMet120125130tgcaccatgctcaccatggtcttggccaccggaagagttgatgcgtgg547CysThrMetLeuThrMetValLeuAlaThrGlyArgValAspAlaTrp135140145atcttc553IlePhe15021028211151212PRT213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)40028MetAspTrpLeuThrIleProLeuPheLeuValAsnGluIleLeuAla151015ValProAlaPheLeuIleGlyIleIleThrAlaValGlyLeuGlyAla202530MetGlyArgSerValGlyGlnValIleGlyGlyAlaIleLysAlaThr354045LeuGlyPheLeuLeuIleGlyAlaGlyAlaThrLeuValThrAlaSer505560LeuGluProLeuGlyAlaMetIleMetGlyAlaThrGlyMetArgGly65707580ValValProThrAsnGluAlaIleAlaGlyIleAlaGlnAlaGluTyr859095GlyAlaGlnValAlaTrpLeuMetIleLeuGlyPheAlaIleSerLeu100105110ValLeuAlaArgPheThrAsnLeuArgTyrValLeuLeuAsnGlyHis115120125HisValLeuLeuMetCysThrMetLeuThrMetValLeuAlaThrGly130135140ArgValAspAlaTrpIlePhe145150210292112172212DNA213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)220221CDS222(101)..(2149)223RXN0194340029ccgattctttttcggcccaattcgtaacggcgatcctcttaagtggacaagaaagtctct60tgcccgcgggagacagaccctacgtttagaaaggtttgacatggcgtccaaactg115MetAlaSerLysLeu15acgacgacatcgcaacatattctggaaaaccttggtggaccagacaat163ThrThrThrSerGlnHisIleLeuGluAsnLeuGlyGlyProAspAsn101520attacttcgatgactcactgtgcgactcgccttcgcttccaagtgaag211IleThrSerMetThrHisCysAlaThrArgLeuArgPheGlnValLys253035gatcaatccattgttgatcaacaagaaattgactccgacccatcagtt259AspGlnSerIleValAspGlnGlnGluIleAspSerAspProSerVal404550cttggcgtagtaccccaaggatccaccggtatgcaggtggtgatgggt307LeuGlyValValProGlnGlySerThrGlyMetGlnValValMetGly556065ggatctgttgcaaactattaccaagaaatcctcaaacttgatggaatg355GlySerValAlaAsnTyrTyrGlnGluIleLeuLysLeuAspGlyMet70758085aagcacttcgccgacggtgaagctacagagagttcatccaagaaggaa403LysHisPheAlaAspGlyGluAlaThrGluSerSerSerLysLysGlu9095100tacggcggagtccgtggcaagtactcgtggattgactacgccttcgag451TyrGlyGlyValArgGlyLysTyrSerTrpIleAspTyrAlaPheGlu105110115ttcttgtctgatactttccgaccaatcctgtgggccctgcttggtgcc499PheLeuSerAspThrPheArgProIleLeuTrpAlaLeuLeuGlyAla120125130tcactgattattaccttgttggttcttgcggatactttcggtttgcaa547SerLeuIleIleThrLeuLeuValLeuAlaAspThrPheGlyLeuGln135140145gacttccgcgctccaatggatgagcagcctgatacttatgtattcctg595AspPheArgAlaProMetAspGluGlnProAspThrTyrValPheLeu150155160165cactccatgtggcgctcggtcttctacttcctgccaattatggttggt643HisSerMetTrpArgSerValPheTyrPheLeuProIleMetValGly170175180gccaccgcagctcgaaagctcggcgcaaacgagtggattggtgcagct691AlaThrAlaAlaArgLysLeuGlyAlaAsnGluTrpIleGlyAlaAla185190195attccagccgcacttcttactccagaattcttggcactgggttctgcc739IleProAlaAlaLeuLeuThrProGluPheLeuAlaLeuGlySerAla200205210ggcgataccgtcacagtctttggcctgccaatggttctgaatgactac787GlyAspThrValThrValPheGlyLeuProMetValLeuAsnAspTyr215220225tccggacaggtattcccaccgctgattgcagcaattggtctgtactgg835SerGlyGlnValPheProProLeuIleAlaAlaIleGlyLeuTyrTrp230235240245gtggaaaagggactgaagaagatcatccctgaagcagtccaaatggtg883ValGluLysGlyLeuLysLysIleIleProGluAlaValGlnMetVal250255260ttcgtcccattcttctccctgctgattatgatcccagcgaccgcattc931PheValProPhePheSerLeuLeuIleMetIleProAlaThrAlaPhe265270275ctgcttggacctttcggcatcggtgttggtaacggaatttccaacctg979LeuLeuGlyProPheGlyIleGlyValGlyAsnGlyIleSerAsnLeu280285290cttgaagcgattaacaacttcagcccatttattctttccatcgttatc1027LeuGluAlaIleAsnAsnPheSerProPheIleLeuSerIleValIle295300305ccattgctctacccattcttggttccacttggattgcactggccacta1075ProLeuLeuTyrProPheLeuValProLeuGlyLeuHisTrpProLeu310315320325aacgccatcatgatccagaacatcaacaccctgggttacgacttcatt1123AsnAlaIleMetIleGlnAsnIleAsnThrLeuGlyTyrAspPheIle330335340cagggaccaatgggtgcctggaacttcgcctgcttcggcctggtcacc1171GlnGlyProMetGlyAlaTrpAsnPheAlaCysPheGlyLeuValThr345350355ggcgtgttcttgctctccattaaggaacgaaacaaggccatgcgtcag1219GlyValPheLeuLeuSerIleLysGluArgAsnLysAlaMetArgGln360365370gtttccctgggtggcatgttggctggtttgctcggcggcatttccgag1267ValSerLeuGlyGlyMetLeuAlaGlyLeuLeuGlyGlyIleSerGlu375380385ccttccctctacggtgttctgctccgattcaagaagacctacttccgc1315ProSerLeuTyrGlyValLeuLeuArgPheLysLysThrTyrPheArg390395400405ctcctgccgggttgtttggcaggcggtatcgtgatgggcatcttcgac1363LeuLeuProGlyCysLeuAlaGlyGlyIleValMetGlyIlePheAsp410415420atcaaggcgtacgctttcgtgttcacctccttgcttaccatcccagca1411IleLysAlaTyrAlaPheValPheThrSerLeuLeuThrIleProAla425430435atggacccatggttgggctacaccattggtatcgcagttgcattcttc1459MetAspProTrpLeuGlyTyrThrIleGlyIleAlaValAlaPhePhe440445450gtttccatgttccttgttctcgcactggactaccgttccaacgaagag1507ValSerMetPheLeuValLeuAlaLeuAspTyrArgSerAsnGluGlu455460465cgcgatgaggcacgtgcaaaggttgctgctgacaagcaggcagaagaa1555ArgAspGluAlaArgAlaLysValAlaAlaAspLysGlnAlaGluGlu470475480485gatctgaaggcagaagctaatgcaactcctgcagctccagtagctgct1603AspLeuLysAlaGluAlaAsnAlaThrProAlaAlaProValAlaAla490495500gcaggtgcgggagccggtgcaggtgcaggagccgctgctggcgctgca1651AlaGlyAlaGlyAlaGlyAlaGlyAlaGlyAlaAlaAlaGlyAlaAla505510515accgccgtggcagctaagccgaagctggccgctggggaagtagtggac1699ThrAlaValAlaAlaLysProLysLeuAlaAlaGlyGluValValAsp520525530attgtttccccactcgaaggcaaggcaattccactttctgaagtacct1747IleValSerProLeuGluGlyLysAlaIleProLeuSerGluValPro535540545gacccaatctttgcagcaggcaagcttggaccaggcattgcaatccaa1795AspProIlePheAlaAlaGlyLysLeuGlyProGlyIleAlaIleGln550555560565ccaactggaaacaccgttgttgctccagcagacgctactgtcatcctt1843ProThrGlyAsnThrValValAlaProAlaAspAlaThrValIleLeu570575580gtccagaaatctggacacgcagtggcattgcgcttagatagcggagtt1891ValGlnLysSerGlyHisAlaValAlaLeuArgLeuAspSerGlyVal585590595gaaatccttgtccacgttggattggacaccgtgcaattgggcggcgaa1939GluIleLeuValHisValGlyLeuAspThrValGlnLeuGlyGlyGlu600605610ggcttcaccgttcacgttgagcgcaggcagcaagtcaaggcgggggat1987GlyPheThrValHisValGluArgArgGlnGlnValLysAlaGlyAsp615620625ccactgatcacttttgacgctgacttcattcgatccaaggatctacct2035ProLeuIleThrPheAspAlaAspPheIleArgSerLysAspLeuPro630635640645ttgatcaccccagttgtggtgtctaacgccgcgaaattcggtgaaatt2083LeuIleThrProValValValSerAsnAlaAlaLysPheGlyGluIle650655660gaaggtattcctgcagatcaggcaaattcttccacgactgtgatcaag2131GluGlyIleProAlaAspGlnAlaAsnSerSerThrThrValIleLys665670675gtcaacggcaagaacgagtaacctgggatccatgttgcgca2172ValAsnGlyLysAsnGlu68021030211683212PRT213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)40030MetAlaSerLysLeuThrThrThrSerGlnHisIleLeuGluAsnLeu151015GlyGlyProAspAsnIleThrSerMetThrHisCysAlaThrArgLeu202530ArgPheGlnValLysAspGlnSerIleValAspGlnGlnGluIleAsp354045SerAspProSerValLeuGlyValValProGlnGlySerThrGlyMet505560GlnValValMetGlyGlySerValAlaAsnTyrTyrGlnGluIleLeu65707580LysLeuAspGlyMetLysHisPheAlaAspGlyGluAlaThrGluSer859095SerSerLysLysGluTyrGlyGlyValArgGlyLysTyrSerTrpIle100105110AspTyrAlaPheGluPheLeuSerAspThrPheArgProIleLeuTrp115120125AlaLeuLeuGlyAlaSerLeuIleIleThrLeuLeuValLeuAlaAsp130135140ThrPheGlyLeuGlnAspPheArgAlaProMetAspGluGlnProAsp145150155160ThrTyrValPheLeuHisSerMetTrpArgSerValPheTyrPheLeu165170175ProIleMetValGlyAlaThrAlaAlaArgLysLeuGlyAlaAsnGlu180185190TrpIleGlyAlaAlaIleProAlaAlaLeuLeuThrProGluPheLeu195200205AlaLeuGlySerAlaGlyAspThrValThrValPheGlyLeuProMet210215220ValLeuAsnAspTyrSerGlyGlnValPheProProLeuIleAlaAla225230235240IleGlyLeuTyrTrpValGluLysGlyLeuLysLysIleIleProGlu245250255AlaValGlnMetValPheValProPhePheSerLeuLeuIleMetIle260265270ProAlaThrAlaPheLeuLeuGlyProPheGlyIleGlyValGlyAsn275280285GlyIleSerAsnLeuLeuGluAlaIleAsnAsnPheSerProPheIle290295300LeuSerIleValIleProLeuLeuTyrProPheLeuValProLeuGly305310315320LeuHisTrpProLeuAsnAlaIleMetIleGlnAsnIleAsnThrLeu325330335GlyTyrAspPheIleGlnGlyProMetGlyAlaTrpAsnPheAlaCys340345350PheGlyLeuValThrGlyValPheLeuLeuSerIleLysGluArgAsn355360365LysAlaMetArgGlnValSerLeuGlyGlyMetLeuAlaGlyLeuLeu370375380GlyGlyIleSerGluProSerLeuTyrGlyValLeuLeuArgPheLys385390395400LysThrTyrPheArgLeuLeuProGlyCysLeuAlaGlyGlyIleVal405410415MetGlyIlePheAspIleLysAlaTyrAlaPheValPheThrSerLeu420425430LeuThrIleProAlaMetAspProTrpLeuGlyTyrThrIleGlyIle435440445AlaValAlaPhePheValSerMetPheLeuValLeuAlaLeuAspTyr450455460ArgSerAsnGluGluArgAspGluAlaArgAlaLysValAlaAlaAsp465470475480LysGlnAlaGluGluAspLeuLysAlaGluAlaAsnAlaThrProAla485490495AlaProValAlaAlaAlaGlyAlaGlyAlaGlyAlaGlyAlaGlyAla500505510AlaAlaGlyAlaAlaThrAlaValAlaAlaLysProLysLeuAlaAla515520525GlyGluValValAspIleValSerProLeuGluGlyLysAlaIlePro530535540LeuSerGluValProAspProIlePheAlaAlaGlyLysLeuGlyPro545550555560GlyIleAlaIleGlnProThrGlyAsnThrValValAlaProAlaAsp565570575AlaThrValIleLeuValGlnLysSerGlyHisAlaValAlaLeuArg580585590LeuAspSerGlyValGluIleLeuValHisValGlyLeuAspThrVal595600605GlnLeuGlyGlyGluGlyPheThrValHisValGluArgArgGlnGln610615620ValLysAlaGlyAspProLeuIleThrPheAspAlaAspPheIleArg625630635640SerLysAspLeuProLeuIleThrProValValValSerAsnAlaAla645650655LysPheGlyGluIleGluGlyIleProAlaAspGlnAlaAsnSerSer660665670ThrThrValIleLysValAsnGlyLysAsnGlu675680210312111339212DNA213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)220221CDS222(101)..(1339)223FRXA0219140031ccgattctttttcggcccaattcgtaacggcgatcctcttaagtggacaagaaagtctct60tgcccgcgggagacagaccctacgtttagaaaggtttgacatggcgtccaaactg115MetAlaSerLysLeu15acgacgacatcgcaacatattctggaaaaccttggtggaccagacaat163ThrThrThrSerGlnHisIleLeuGluAsnLeuGlyGlyProAspAsn101520attacttcgatgactcactgtgcgactcgccttcgcttccaagtgaag211IleThrSerMetThrHisCysAlaThrArgLeuArgPheGlnValLys253035gatcaatccattgttgatcaacaagaaattgactccgacccatcagtt259AspGlnSerIleValAspGlnGlnGluIleAspSerAspProSerVal404550cttggcgtagtaccccaaggatccaccggtatgcaggtggtgatgggt307LeuGlyValValProGlnGlySerThrGlyMetGlnValValMetGly556065ggatctgttgcaaactattaccaagaaatcctcaaacttgatggaatg355GlySerValAlaAsnTyrTyrGlnGluIleLeuLysLeuAspGlyMet70758085aagcacttcgccgacggtgaagctacagagagttcatccaagaaggaa403LysHisPheAlaAspGlyGluAlaThrGluSerSerSerLysLysGlu9095100tacggcggagtccgtggcaagtactcgtggattgactacgccttcgag451TyrGlyGlyValArgGlyLysTyrSerTrpIleAspTyrAlaPheGlu105110115ttcttgtctgatactttccgaccaatcctgtgggccctgcttggtgcc499PheLeuSerAspThrPheArgProIleLeuTrpAlaLeuLeuGlyAla120125130tcactgattattaccttgttggttcttgcggatactttcggtttgcaa547SerLeuIleIleThrLeuLeuValLeuAlaAspThrPheGlyLeuGln135140145gacttccgcgctccaatggatgagcagcctgatacttatgtattcctg595AspPheArgAlaProMetAspGluGlnProAspThrTyrValPheLeu150155160165cactccatgtggcgctcggtcttctacttcctgccaattatggttggt643HisSerMetTrpArgSerValPheTyrPheLeuProIleMetValGly170175180gccaccgcagctcgaaagctcggcgcaaacgagtggattggtgcagct691AlaThrAlaAlaArgLysLeuGlyAlaAsnGluTrpIleGlyAlaAla185190195attccagccgcacttcttactccagaattcttggcactgggttctgcc739IleProAlaAlaLeuLeuThrProGluPheLeuAlaLeuGlySerAla200205210ggcgataccgtcacagtctttggcctgccaatggttctgaatgactac787GlyAspThrValThrValPheGlyLeuProMetValLeuAsnAspTyr215220225tccggacaggtattcccaccgctgattgcagcaattggtctgtactgg835SerGlyGlnValPheProProLeuIleAlaAlaIleGlyLeuTyrTrp230235240245gtggaaaagggactgaagaagatcatccctgaagcagtccaaatggtg883ValGluLysGlyLeuLysLysIleIleProGluAlaValGlnMetVal250255260ttcgtcccattcttctccctgctgattatgatcccagcgaccgcattc931PheValProPhePheSerLeuLeuIleMetIleProAlaThrAlaPhe265270275ctgcttggacctttcggcatcggtgttggtaacggaatttccaacctg979LeuLeuGlyProPheGlyIleGlyValGlyAsnGlyIleSerAsnLeu280285290cttgaagcgattaacaacttcagcccatttattctttccatcgttatc1027LeuGluAlaIleAsnAsnPheSerProPheIleLeuSerIleValIle295300305ccattgctctacccattcttggttccacttggattgcactggccacta1075ProLeuLeuTyrProPheLeuValProLeuGlyLeuHisTrpProLeu310315320325aacgccatcatgatccagaacatcaacaccctgggttacgacttcatt1123AsnAlaIleMetIleGlnAsnIleAsnThrLeuGlyTyrAspPheIle330335340cagggaccaatgggtgcctggaacttcgcctgcttcggcctggtcacc1171GlnGlyProMetGlyAlaTrpAsnPheAlaCysPheGlyLeuValThr345350355ggcgtgttcttgctctccattaaggaacgaaacaaggccatgcgtcag1219GlyValPheLeuLeuSerIleLysGluArgAsnLysAlaMetArgGln360365370gtttccctgggtggcatgttggctggtttgctcggcggcatttccgag1267ValSerLeuGlyGlyMetLeuAlaGlyLeuLeuGlyGlyIleSerGlu375380385ccttccctctacggtgttctgctccgattcaagaagacctacttccgc1315ProSerLeuTyrGlyValLeuLeuArgPheLysLysThrTyrPheArg390395400405ctcctgccgggttgtttggcagca1339LeuLeuProGlyCysLeuAlaAla41021032211413212PRT213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)40032MetAlaSerLysLeuThrThrThrSerGlnHisIleLeuGluAsnLeu151015GlyGlyProAspAsnIleThrSerMetThrHisCysAlaThrArgLeu202530ArgPheGlnValLysAspGlnSerIleValAspGlnGlnGluIleAsp354045SerAspProSerValLeuGlyValValProGlnGlySerThrGlyMet505560GlnValValMetGlyGlySerValAlaAsnTyrTyrGlnGluIleLeu65707580LysLeuAspGlyMetLysHisPheAlaAspGlyGluAlaThrGluSer859095SerSerLysLysGluTyrGlyGlyValArgGlyLysTyrSerTrpIle100105110AspTyrAlaPheGluPheLeuSerAspThrPheArgProIleLeuTrp115120125AlaLeuLeuGlyAlaSerLeuIleIleThrLeuLeuValLeuAlaAsp130135140ThrPheGlyLeuGlnAspPheArgAlaProMetAspGluGlnProAsp145150155160ThrTyrValPheLeuHisSerMetTrpArgSerValPheTyrPheLeu165170175ProIleMetValGlyAlaThrAlaAlaArgLysLeuGlyAlaAsnGlu180185190TrpIleGlyAlaAlaIleProAlaAlaLeuLeuThrProGluPheLeu195200205AlaLeuGlySerAlaGlyAspThrValThrValPheGlyLeuProMet210215220ValLeuAsnAspTyrSerGlyGlnValPheProProLeuIleAlaAla225230235240IleGlyLeuTyrTrpValGluLysGlyLeuLysLysIleIleProGlu245250255AlaValGlnMetValPheValProPhePheSerLeuLeuIleMetIle260265270ProAlaThrAlaPheLeuLeuGlyProPheGlyIleGlyValGlyAsn275280285GlyIleSerAsnLeuLeuGluAlaIleAsnAsnPheSerProPheIle290295300LeuSerIleValIleProLeuLeuTyrProPheLeuValProLeuGly305310315320LeuHisTrpProLeuAsnAlaIleMetIleGlnAsnIleAsnThrLeu325330335GlyTyrAspPheIleGlnGlyProMetGlyAlaTrpAsnPheAlaCys340345350PheGlyLeuValThrGlyValPheLeuLeuSerIleLysGluArgAsn355360365LysAlaMetArgGlnValSerLeuGlyGlyMetLeuAlaGlyLeuLeu370375380GlyGlyIleSerGluProSerLeuTyrGlyValLeuLeuArgPheLys385390395400LysThrTyrPheArgLeuLeuProGlyCysLeuAlaAla40541021033211428212DNA213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)220221CDS222(1)..(405)223FRXA0194340033cctgacccaatctttgcagcaggcaagcttggaccaggcattgcaatc48ProAspProIlePheAlaAlaGlyLysLeuGlyProGlyIleAlaIle151015caaccaactggaaacaccgttgttgctccagcagacgctactgtcatc96GlnProThrGlyAsnThrValValAlaProAlaAspAlaThrValIle202530cttgtccagaaatctggacacgcagtggcattgcgcttagatagcgga144LeuValGlnLysSerGlyHisAlaValAlaLeuArgLeuAspSerGly354045gttgaaatccttgtccacgttggattggacaccgtgcaattgggcggc192ValGluIleLeuValHisValGlyLeuAspThrValGlnLeuGlyGly505560gaaggcttcaccgttcacgttgagcgcaggcagcaagtcaaggcgggg240GluGlyPheThrValHisValGluArgArgGlnGlnValLysAlaGly65707580gatccactgatcacttttgacgctgacttcattcgatccaaggatcta288AspProLeuIleThrPheAspAlaAspPheIleArgSerLysAspLeu859095cctttgatcaccccagttgtggtgtctaacgccgcgaaattcggtgaa336ProLeuIleThrProValValValSerAsnAlaAlaLysPheGlyGlu100105110attgaaggtattcctgcagatcaggcaaattcttccacgactgtgatc384IleGluGlyIleProAlaAspGlnAlaAsnSerSerThrThrValIle115120125aaggtcaacggcaagaacgagtaacctgggatccatgttgcgca428LysValAsnGlyLysAsnGlu13013521034211135212PRT213穀氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)40034ProAspProIlePheAlaAlaGlyLysLeuGlyProGlyIleAlaIle151015GlnProThrGlyAsnThrValValAlaProAlaAspAlaThrValIle202530LeuValGlnLysSerGlyHisAlaValAlaLeuArgLeuAspSerGly354045ValGluIleLeuValHisValGlyLeuAspThrValGlnLeuGlyGly505560GluGlyPheThrValHisValGluArgArgGlnGlnValLysAlaGly65707580AspProLeuIleThrPheAspAlaAspPheIleArgSerLysAspLeu859095ProLeuIleThrProValValValSerAsnAlaAlaLysPheGlyGlu100105110IleGluGlyIleProAlaAspGlnAlaAsnSerSerThrThrValIle115120125LysValAsnGlyLysAsnGlu1301352103521118212DNA213人工序列220223人工序列說明引物40035ggaaacagtatgaccatg182103621117212DNA213人工序列220223人工序列說明引物40036gtaaaacgacggccagt1權利要求1.包含SEQIDNO7的核苷酸序列的分離的核酸分子，或其互補序列。2.編碼包含SEQIDNO8的胺基酸序列的多肽的分離的核酸分子，或其互補序列。3.編碼包含SEQIDNO8的胺基酸序列的多肽的天然存在等位基因變體的分離的核酸分子，或其互補序列。4.分離的核酸分子，包含與SEQIDNO7的完整核苷酸序列有至少50％同一性的核苷酸序列，或其互補序列。5.分離的核酸分子，其包含SEQIDNO7的核苷酸序列的至少15個連續核苷酸的片段，或其互補序列。6.分離的核酸分子，其編碼包含與SEQIDNO8的完整胺基酸序列有至少50％同一性的胺基酸序列的多肽，或其互補序列。7.分離的核酸分子，包含權利要求1-6中任一項的核酸分子和編碼異源多肽的核苷酸序列。8.包含權利要求1-7中任一項的核酸分子的載體。9.權利要求8的載體，該載體是表達載體。10.權利要求9的表達載體轉染的宿主細胞。11.權利要求10的宿主細胞，其中該細胞是微生物。12.權利要求11的宿主細胞，其中該細胞屬於棒桿菌屬或者短桿菌屬。13.權利要求10的宿主細胞，其中所說的核酸分子的表達，導致該細胞精細化學物質生產的調節。14.權利要求14的宿主細胞，其中所說的精細化學物質選自下列物質有機酸，蛋白質源胺基酸，非蛋白質源胺基酸，嘌呤鹼基和嘧啶鹼基，核苷，核苷酸，脂質，飽和和不飽和脂肪酸，二醇，糖類，芳香族化合物，維生素，輔因子，聚酮化合物和酶。15.生產多肽的方法，包括在合適的培養基中培養權利要求10的宿主細胞，從而生產多肽。16.分離的多肽，包含SEQIDNO8的胺基酸序列。17.分離的多肽，包含含有SEQIDNO8的胺基酸序列的多肽的天然存在等位基因變體。18.分離的多肽，由一種核酸分子編碼，該核酸分子包含與SEQIDNO7的完整核苷酸序列有至少50％同一性的核苷酸序列。19.分離的多肽，包含與SEQIDNO8的完整胺基酸序列有至少50％同一性的胺基酸序列。20.分離的多肽，包含含有SEQIDNO8的胺基酸序列的多肽的片段，其中所述多肽片段保持含有SEQIDNO8的胺基酸序列的多肽的生物學活性。21.分離的多肽，包含由包含SEQIDNO7的核苷酸序列的核酸分子編碼的胺基酸序列。22.權利要求16-21中任一項的分離的多肽，進一步包含異源胺基酸序列。23.生產精細化學物質的方法，包括培養權利要求10的細胞，從而產生精細化學物質。24.權利要求23的方法，其中所說的方法另外包括從所說的培養物中回收精細化學物質的步驟。25.權利要求23的方法，其中所說的細胞屬於棒桿菌屬或者短桿菌屬。26.權利要求23的方法，其中所說的細胞選自下組穀氨酸棒桿菌、力士棒桿菌、百合花棒桿菌、嗜乙醯乙酸棒桿菌、醋谷棒桿菌、嗜乙醯棒桿菌、產氨棒桿菌、Corynebacteriumfujiokense、Corynebacteriumnitrilophilus、產氨短桿菌、Brevibacteriumbutanicum、分歧短桿菌、黃色短桿菌、希氏短桿菌、酮戊二酸短桿菌、Brevibacteriumketosoreductum、乳發酵短桿菌、擴展短桿菌、解石蠟短桿菌和表3所列菌株。27.權利要求23的方法，其中所說載體的核酸分子的表達，導致該細胞精細化學物質生產的調節。28.權利要求23的方法，其中所說的精細化學物質選自下列物質有機酸，蛋白質源胺基酸，非蛋白質源胺基酸，嘌呤鹼基和嘧啶鹼基，核苷，核苷酸，脂質，飽和和不飽和脂肪酸，二醇，糖類，芳香族化合物，維生素，輔因子，聚酮化合物和酶。29.權利要求23的方法，其中所說的精細化學物質是胺基酸。30.權利要求29的方法，其中所說的胺基酸選自下列胺基酸賴氨酸、穀氨酸、穀氨醯胺、丙氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、精氨酸、脯氨酸、組氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸。31.生產精細化學物質的方法，包括培養這樣的細胞，該細胞的基因組DNA被插入了權利要求1-6中任一項的核酸分子而改變。32.診斷受試者中白喉棒桿菌的存在或者活性的方法，包括檢測受試者中權利要求1-6的至少一種核酸分子或權利要求16-21的多肽分子的存在，從而診斷受試者中白喉棒桿菌的存在或者活性。33.含有SEQIDNO7的核酸分子的宿主細胞，其中所述核酸分子被破壞。34.含有SEQIDNO7的核酸分子的宿主細胞，其中的核酸分子含有一個或者多個對在SEQIDNO7列出序列的核酸修飾。35.含有SEQIDNO7的核酸分子的宿主細胞，其中該核酸分子調節區域相對於該分子野生型調節區域進行了修飾。全文摘要本發明涉及編碼磷酸烯醇丙酮酸:糖類磷酸轉移酶系統蛋白質的穀氨酸棒桿菌基因。本發明描述了分離的編碼新的穀氨酸棒桿菌PTS蛋白的核酸分子，該分子被稱為PTS核酸分子。本發明也提供了反義核酸分子，含有PTS核酸分子的重組表達載體，以及已導入表達載體的宿主細胞。本發明也進一步提供了分離的PTS蛋白，PTS突變蛋白，融合蛋白質，抗原肽，以及基於穀氨酸棒桿菌PTS基因遺傳工程提高由該生物體進行的所需化合物生產的方法。文檔編號C12N9/12GK101054592SQ20071009207公開日2007年10月17日申請日期2000年6月27日優先權日1999年7月1日發明者M·波姆佩朱斯,B·克雷格爾,H·施雷德爾,O·策爾德,G·哈貝豪爾申請人:Basf公司