抗cd37抗體的製作方法

2023-10-07 11:28:09

專利名稱：：抗cd37抗體的製作方法抗CD37抗體介紹本發明涉及基於B細胞去除(Bcelldepletion)的免疫療法。尤其，本發明涉及用於所述療法，例如，用於治療B細胞惡性腫瘤及自身免疫病的抗CD37抗體分子。使用單克隆抗體(mAb)的免疫療法已呈現為一種用於治療癌症及其它疾病之安全及選擇性方法。詳言之，自引入利妥昔單抗(rituximab)(Rituxan)(針對B細胞表面上之CD20抗原的抗體)以來，單克隆抗體在基於B細胞去除之療法(例如，B細胞惡性腫瘤之治療)中的作用已得到擴展。大量研究已證實呈單一藥劑及組合療法形式之利妥昔單抗在輕度NHL(Hiddemann等人，2005a；Hiddemann等人，2005b；Hainsworth2004；McLaughlin等人，1998)、套細胞淋巴瘤(Forstpointner等人，2004；Kahl等人，2006；Foran等人，2000；Howard等人，2002；Romaguera等人，2005)、瀰漫性大細胞淋巴瘤(DLCL)(Coiffier等人，1998；Feugier等人，2005)及伯基特(Burkitt)白血病/淋巴瘤(Thomas等人，2006)中的功效。然而，僅一部分患者對療法起反應且其中大多數患者在利妥昔單抗治療後最終復發。因此，已尋求對B細胞惡性腫瘤療法而言比CD20潛在有效之新的B細胞治療標靶(Zhao等人，2007)。⑶37抗原為迄今為止尚未以與B細胞抗原⑶20相同之程度被視為B細胞惡性腫瘤之標靶的細胞表面抗原。⑶37是四跨膜蛋白(tetraspanin)超家族之成員，是具有四個跨膜域及兩個細胞外環之高度糖基化細胞表面分子。CD37幾乎僅在成熟B細胞上表達，其中在外周血B細胞上表達程度最高，在漿細胞上表達程度降低，且在骨髓中之CDlO+前驅B細胞上表達程度不可檢測。亦已報導⑶37在靜止性及活化T細胞、粒細胞及單核細胞上的表達程度低。在B細胞的瘤形成中，主要在侵襲性非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin'slymphoma，NHL)及慢性淋巴白血病(CLL)中觀測到⑶37表達。亦在套細胞淋巴瘤(MCL)上發現高程度⑶37表達。此表達模式使CD37成為抗體介導之癌症療法的吸引人之標靶。⑶37在1986年被首次描述且其特徵為鼠單克隆抗體MB_1(Link等人，1986)。⑶37之生理學作用尚未知曉。雖然缺乏⑶37之小鼠未展示淋巴器官之發育及細胞組成的變化，但其具有降低之IgGl含量及衰減的T細胞介導之免疫反應(Knobeloch等人，2000)。對CD37+T細胞之研究表明CD37在T細胞增殖中之作用(vanSpriel等人，2004)。已報導⑶37在各種疾病之惡性B細胞上表達。⑶37在大多數成熟B細胞惡性腫瘤(例如，伯基特淋巴瘤(Burkitt’slymphoma)、濾泡性淋巴瘤及淋巴細胞性淋巴瘤)中表達(Link等人，1986)。已在毛細胞白血病及患有慢性淋巴細胞白血病(CLL)及不同亞型非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)(包括套細胞淋巴瘤(MCL))之患者樣品中觀測到高程度⑶37表達(Schwartz-Albiez等人，1988；Barrena等人，2005)。一個利用抗體微數組進行免疫表型分類之報導聲稱⑶37為惡性CLL細胞(高⑶37表達)與正常外周血(PB)淋巴細胞(低⑶37表達)之間的良好鑑別者(Belov等人，2001)。CD37特異性mAb與癌細胞之結合可引發各種作用機制首先，在抗體與CD37抗原之胞外域結合之後，其可活化補體級聯且裂解標靶細胞。其次，抗CD37抗體可介導抗體依賴性細胞介導之細胞毒活性(ADCC)至標靶細胞，此發生在所結合抗體之Fc部分通過免疫系統之細胞毒活性細胞上的合適受體識別之後。第三，該抗體可改變B細胞對抗原或其它刺激起反應的能力。最終，抗CD37抗體可引發程序性細胞死亡(細胞凋亡)。抗⑶37mAbMB-I用兩個放射免疫療法試驗在B-NHL(B細胞非霍奇金氏淋巴瘤(B-cellnon-Hodgkin'slymphoma);Press等人，1989;Kaminski等人，1992)患者中評估。在一試驗中，向6名復發NHL之患者投與治療劑量之131I-MB-I,且所有6名患者均實現臨床完全緩解(CR)，其中中位持續時間為7個月。值得注意地，6名患者中之2名在僅投與示蹤劑量之MB-I以後顯示臨床消退，此表明抗體自身具有直接抗腫瘤作用。在第二試驗中，應用放射性標記之MB-I以治療難治NHL患者且引起9名可評估患者中之3名具有有限持續時間之目標反應(Kaminski等人，1992)。在兩個試驗中，均報導在注射示蹤標記之MB-I抗體劑量後外周B細胞快速且瞬間去除。此等觀測支持MB-I獨立發揮細胞毒活性之結論。概言之，此等臨床試驗強調對於B細胞惡性腫瘤而言靶向CD37之可行性且表明抗CD37療法之潛在臨床相關性。關於CD37特異性抗體樣單鏈分子(「小模塊免疫藥物「(SmallModularlmmunoPharmaceutical),SMIP)之實驗證據表明，用該分子治療誘發活體外細胞凋亡且延遲活體內異種移植模型中之伯基特淋巴瘤生長。近來，描述來自Trubion之重組抗CD37SMIPTrul6.4之抗細胞凋亡活性(Zhao等人，2004)。Tru16.4在來自腫瘤患者之初級CLL細胞上誘發卡斯蛋白酶(caspase)非依賴性細胞凋亡。對此等細胞之細胞凋亡的誘發大於利妥昔單抗對此等細胞之細胞凋亡的誘發且可與阿來組單抗(Alemtuzumab)(CD52拮抗劑)對此等細胞之細胞凋亡的誘發相當。細胞凋亡誘發程度與⑶37細胞表面表達成正比且可通過與抗人類IgG抗體交聯而進一步得到增強。關於活體外細胞系，證明⑶37表達與ADCC之相關性。在伯基特淋巴瘤小鼠模型(Raji)中，用抗⑶37scFv治療展示治療功效(Zhao等人，2007)。此等數據首次證明靶向⑶37為通過誘發細胞凋亡及ADCC進行之靶向抗腫瘤療法的期望方法。總之，已顯示⑶37抗原通常在若干人類B細胞惡性腫瘤中之腫瘤細胞及成熟的正常B淋巴細胞上表達且基於抗⑶37之療法可為用於治療B細胞惡性腫瘤之期望方法。不認為對CD37呈陽性之正常B細胞的去除為關鍵性的，此系因為來自大量患者之臨床數據顯示甚至用抗CD20mAb長期去除B細胞達6個月亦不會顯著降低IgG血清含量或增加感染危險(VanderKolk等人，2002)。雖然上述抗⑶37抗體或抗體樣分子(MB-1及SMIPTrul6.4)已顯示在B細胞惡性腫瘤中之抗腫瘤功效及靶向CD37之潛能，但仍對改良基於B細胞去除之療法的替代性抗CD37抑制劑存在需要。發明概述本發明之一目標系提供用於治療B細胞惡性腫瘤及對⑶37陽性B細胞之去除起反應的其它病症之新穎CD37拮抗劑。此外，本發明之一目標系提供具有改良效應功能之抗CD37抗體。詳言之，本發明者試圖提供具有抗體依賴性細胞介導之細胞毒活性(ADCC)之抗CD37mAB。為解決本發明潛在之問題，使用鼠單克隆抗CD37抗體作為用於產生可用於人類療法中之嵌合及人源化抗CD37抗體的起始抗體。第一方面，本發明提供與人⑶37結合且衍生自以下抗體的抗體分子a)鼠單克隆抗體，其由以下結構定義i)包含SEQIDNO2所示胺基酸序列的可變重鏈；及ii)包含SEQIDNO4所示胺基酸序列的可變輕鏈，或b)非人類抗體，其與a)中所定義的抗體識別相同的人CD37表位，或識別與該表位相近(close)或重疊(overlap)的表位；其中該抗體分子為嵌合或人源化抗體。正如從下文所述可以理解到的，「衍生自」另一抗體(即起始抗體)的抗體是指，對起始抗體如下述進行修飾而製得的抗體。在一優選實施例中，所述抗體分子是從a)所述起始抗體衍生得到的嵌合或人源化抗體分子。具有相關序列的抗體稱為G28.1且描述於W02005/017148中。b)類起始抗體可以選自，例如，象G28.1一樣，在ThirdHLDAWorkshop中表徵為CD37抗原的CD37特異性抗體；此等抗體稱為HD28、HH1、BI14、F97_3G6(Ling及MacLennan，1987)。其它已描述之0)37特異性抗體包括1^8-7、￥29/55、]\^-1、]\^371、]\^372及10-24。根據Moldenhauer，2000及Schwartz-Albiez等人，1988，所有此等抗體(包括G28.1)識別相同或部分一致或相近之CD37表位。Schwartz-Albiez等人，1988指示該表位位於CD37之碳水化合物部分中。大量以上抗體可購得，例如HHl(SantaCruz)、RFB-7(Biodesign)、Y29/55(Biogenesis)、M-B371(BDBiosciences)、M-B372(SantaCruz)及IP0-24(AbCam)。其它CD37特異性抗體有S-B3(Biosys)、NMN46(Chemicon)及IC0-66(Bioprobe)。可通過競爭性結合試驗或通過如Moldenhauer等人，1987及Moldenhauer，2000所述之交叉抑制放射免疫試驗來確定抗體是否識別與G28.1相同的表位。舉例來說，可在ELISA中，使用塗有⑶37蛋白或⑶37肽或⑶37陽性細胞之板(細胞ELISA)且測量在競爭候選抗體存在下生物素標記抗體之結合來測定競爭性結合。在競爭抗體或抗體衍生片段存在下，在抗體識別共同表位之狀況下，經生物素標記之G28.1(或已知識別相同表位之另一抗體)之結合減少。為鑑別G28.1表位肽，可合成或產生衍生自CD37序列之片段或短的多肽或重組蛋白且在ELISA試驗中測量G28.1與所述肽/多肽之結合。如實施例中所述，亦可經FACS分析來測定競爭性結合。b)中所定義的抗體可以以與G28.1類似之方式用作起始抗體，以產生嵌合或人源化抗體分子。b)類起始抗體亦可從頭(denovo)生成，是分別用含相關表位之肽或蛋白片段、或編碼所述肽/片段的DNA分子進行免疫，以獲得對G28.1的表位具反應性的抗體。起始抗體b)亦可通過用載運相關表位的全細胞進行免疫；再篩檢由此獲得的雜交瘤細胞對分泌抗體的競爭性結合而獲得。術語「抗⑶37抗體分子」包含抗⑶37抗體、抗⑶37抗體片段、以及與所述抗體分子之偶聯物。在本發明之含義中，抗體包括嵌合單克隆抗體及人源化單克隆抗體。術語「抗體」與「抗體分子」可互換使用，應包含完整免疫球蛋白(其由淋巴細胞產生、且例如存在於血清中)、由雜交瘤細胞系分泌之單克隆抗體、宿主細胞重組表達之多肽(其具有免疫球蛋白或單克隆抗體之結合特異性)、及對所述抗體進行修飾或進一步加工但保留其結合特異性而衍生得到的分子。在本發明之一實施例中，抗⑶37抗體分子為由以下定義之嵌合抗體i)包含SEQIDNO2所示胺基酸序列的可變重鏈；ii)包含SEQIDNO4所示胺基酸序列的可變輕鏈；iii)具有人類起源之恆定重鏈及輕鏈。嵌合小鼠/人類抗體之構建及產生為本領域已知(Bouliarme等人，1984)。非人類抗體的可變區通常與人類免疫球蛋白之免疫球蛋白恆定區的至少一部分(Fe)連接。可根據熟知之方法自多種人類細胞、優選自永生化B細胞分離人類恆定區DNA序列(參見Kabat等人，1991；及WO87/02671)。所述抗體分子可含有所有或僅一部分恆定區，只要其展示與CD37抗原及Fc受體之特異性結合即可。恆定區之類型及長度的選擇視是否需要效應功能(如補體結合或抗體依賴性細胞介導之毒性)及抗體分子之所欲藥理學性質而定。在某些實施例中，本發明的抗體分子為嵌合CD37特異性抗體，其具有與人類重鏈恆定區IgGl融合之a)或b)中所定義的非人類抗體的重鏈可變區及與人類輕鏈恆定區κ融合之a)或b)中所定義的非人類抗體的輕鏈可變區。在另一實施例中，抗體分子為嵌合CD37特異性抗體，其具有與人類重鏈恆定區IgGl(其為具有SEQIDNO24所示序列(DNA編碼序列SEQIDNO23)之IgGl分子或自其衍生的突變IgGl分子)融合的SEQIDNO:2所示重鏈可變區且其具有與SEQIDNO26所示人類輕鏈恆定區κ(DNA編碼序列SEQIDNO25)融合的SEQIDNO:4所示輕鏈可變區。用於嵌合a)或b)所定義之非人類起始抗體之其它人類恆定區是本領域技術人員可獲得的，例如IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE或IgM(替代IgGl)或λ(替代κ)。恆定區亦可為嵌合的，例如重鏈IgGl/IgG2或IgGl/IgG3嵌合體。本發明某些實施例中，抗CD37抗體分子為由以下定義的人源化抗體i.SEQIDNO2所示可變重鏈內之CDR，及ii.SEQIDNO4所示可變輕鏈內之CDR，iii.支撐所述⑶R之衍生自人類抗體之框架，iv.來自人類抗體之恆定重鏈及輕鏈。人源化形式之非人類抗體(例如，鼠、大鼠或兔抗體)為含有衍生自非人類免疫球蛋白之最小序列的免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段(諸如，Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或具有抗體子序列之其它抗原結合分子)。人源化抗體包括其中來自受體抗體之互補決定區(OTR)的殘基經來自非人類物種(供體抗體)(諸如，小鼠、大鼠或兔)之⑶R之具有所欲特異性、親和力及能力的殘基置換之人類免疫球蛋白(來自受體抗體)。在一些情況下，人類免疫球蛋白之Fv框架殘基經相應非人類殘基置換。在本發明的人源化抗體中，已將編碼a)或b)中所定義之非人類起始抗體之⑶R的序列移植至人類免疫球蛋白重鏈及輕鏈之各個基因中。單克隆抗體之「互補決定區」(⑶R)應理解為，按照Kabat等人，1991以及Chothia及Lesk(1987)所述，參與特異性抗原結合的那些胺基酸序列。在SEQIDNO:2及SEQIDNO4所示可變區序列中，CDR序列常規上可通過在Kabat序列資料庫中搜索序列特徵來確定。獲得人源化抗體的技術通常是本領域技術人員可得知的，見例如US5，225，539、US6，548，640及US6，982，321。可將⑶R移植抗體之合適框架殘基回復至鼠殘基以改良結合親和力。如上所述，根據本領域已知方法，專家知道如何自給定之非人類抗體獲得CDR，選擇及獲得適當人類免疫球蛋白基因，將CDR移植至此等基因中，修飾所選框架殘基，在適當宿主細胞(例如，中國倉鼠卵巢(CHO)細胞)中表達⑶R移植抗體，及測試所得重組抗體之結合親和力及特異性。為獲得人源化抗體，將由重鏈CDR及輕鏈CDR形成之抗原結合位點自分泌齧齒動物(鼠)單克隆抗體之細胞的DNA切出，移植至編碼人類抗體框架之DNA中。或者對於⑶R移植而言，如US5，639，641中所述，可通過所謂的「表面重整(resurfacing)」技術來使非人類、尤其鼠抗CD37抗體人源化，藉此除表面暴露之殘基外，齧齒動物框架保留無變化。在另一方面中，本發明涉及含有具有SEQIDNO:6所示序列的可變重鏈及具有選自SEQIDNO:12、SEQIDNO:14、SEQIDNO:16、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20及SEQIDNO22所示序列之序列的可變輕鏈的人源化抗體。在另一方面中，本發明涉及含有具有SEQIDNO:8所示序列的可變重鏈及具有選自SEQIDN0:12、SEQIDNO:14、SEQIDNO:16、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20及SEQIDNO22所示序列之序列的可變輕鏈的人源化抗體。在另一方面中，本發明涉及含有具有SEQIDNO10所示序列的可變重鏈及具有選自SEQIDN0:12、SEQIDNO:14、SEQIDNO:16、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20及SEQIDNO22所示序列之序列的可變輕鏈的人源化抗體。以上所定義的人源化抗體顯示於表1中。在某些實施例中，人源化抗體具有人類重鏈恆定區IgGl及人類輕鏈恆定區κ。如上文關於嵌合抗體所述，恆定區可選自其它種類及亞類。在某些實施例中，在本發明的人源化抗體中，人類恆定重鏈IgGl為具有SEQIDNO:24所示序列之IgGl分子或自其衍生的突變IgGl分子，且人類輕鏈恆定區κ具有SEQIDNO26所示序列。本發明之抗CD37抗體分子亦可為由序列表中所示胺基酸序列定義的抗體的變體。使用通常可用之技術，本領域技術人員將能夠製備、測試及利用以上所定義的抗體的功能變體。實例為CDR及/或框架中至少一個位置改變之變異抗體、在框架區中具有單個胺基酸取代且偏離種系序列之變異抗體、具有保守氨基取代的抗體、由與序列表中編碼抗體可變鏈的DNA分子在嚴格條件下雜交的DNA分子編碼的抗體。在指定各個胺基酸的性質的情況下，可進行合理取代以獲得保守起始抗體的總體分子結構的抗體變體。可(例如)基於各個胺基酸之極性、電荷、溶解度、疏水性、親水性及/或兩性性質之相似性進行胺基酸取代，意即「保守取代」。本領域技術人員熟悉通常實施之胺基酸取代(舉例而言，如W02007/042309中所述)及獲得由此修飾的抗體的方法。在給定遺傳密碼及重組及合成DNA技術之情況下，通常可設計編碼具有一或多個保守胺基酸交換之變異抗體的DNA分子且易於獲得各個抗體。與由序列表中可變鏈所定義的抗體相比，本發明所包含的抗體變體在CDR區中具有至少60%、更優選至少70%或80%、更優選至少90%及最優選至少95%之序列同一性。優選抗體亦在⑶R區中具有至少80%、更優選90%及最優選95%之序列相似性。優選抗體變體在可變區中具有至少60%、更優選至少70%或80%、更優選至少90%及最優選至少95%之序列同一性。優選抗體亦在可變區中具有至少80%、更優選90%及最優選95%之序列相似性。兩個多肽序列之間的「序列同一性」指示這些序列之間相同胺基酸的百分比。「序列相似性」指示相同或代表保守胺基酸取代的胺基酸的百分比。亦可使用具有序列表中指定序列的抗體作為起點，使一或多個胺基酸殘基、優選在一或多個CDR中的胺基酸殘基優化及多樣化，並篩檢所得抗體變體集合中具有改良性質之變體，來獲得變體。已證明可變輕鏈⑶R3、可變重鏈⑶R3、可變輕鏈⑶Rl及/或可變重鏈CDR2中一或多個胺基酸殘基之多樣化是有用的。多樣化可通過本領域已知的方法(例如，WO2007/042309中提及之所謂TRIM技術)進行。在另一實施例中，本發明之抗⑶37抗體分子為「親和力成熟」「抗體。「親和力成熟的」抗⑶37抗體為衍生自具有序列表中序列的抗體的抗⑶37抗體，其在一或多個CDR中具有一或多個改變，所述改變引起與各個原始未成熟抗體相比對抗原親和力之改良。一種用於產生所述抗體突變體之方法包括噬菌體展示(Hawkins等人，1992；及Lowman等人，1991)。簡言之，使若干高變區位點(例如，6_7個位點)突變以在各位點產生所有可能之胺基酸取代。由此產生的抗體突變體自絲狀噬菌體顆粒以單價方式呈現為與封裝於各顆粒中之M13之基因III產物的融合體。接著，篩檢噬菌體展示的突變體的如本文所揭示之生物活性(例如，結合親和力)。親和力成熟抗體亦可通過如以下所述的方法來產生例如，Marks等人，1992(通過可變重鏈(VH)及可變輕鏈(VL)域改組實現親和力成熟)；或Barbas等人，1994;Shier等人，1995；Yelton等人，1995Jackson等人，1995；及Hawkins等人，1992(CDR及/或框架殘基之隨機突變誘發)。優選之親和力成熟抗體將對標靶抗原具有納摩爾或甚至皮摩爾之親和力。在另一實施例中，本發明之抗⑶37抗體分子為「去免疫的(de-immunized)」抗體。「去免疫的」抗CD37抗體為衍生自具有序列表中所示序列之人源化或嵌合抗體的抗體，其在胺基酸序列中具有一或多個改變，所述改變引起與各個原始非去人源化抗體相比抗體的免疫原性減少。一種用於產生所述抗體突變體之方法包括鑑別及移除抗體分子之T-細胞表位(Baker及Jones，2007)。在第一步驟中，可通過如文獻(Jones等人，2004；Jones等人，2005；Reche等人，2004；Hertz等人，2006)中所述之若干方法，例如通過活體外測定T-細胞表位或模擬預測(insilicoprediction)所述表位來測定抗體分子之免疫原性。一旦已鑑別T-細胞表位功能之關鍵殘基，則可進行突變以移除免疫原性且保留抗體活性(Jones等人，2005；Tangri等人，2005)。用於將突變引入蛋白中的方法為本領域已知，例如通過交迭PCR技術。因為抗體的Fc區與多種Fc受體相互作用，引起多種重要的功能能力(稱為「效應功能」)，所以在某些實施例中，所述抗體為全長抗體或含有Fc區的抗體，後者只要展示與抗原的相關部分及與Fc受體均特異性結合即可。恆定區之類型及長度的選擇視效應功能(如補體結合或抗體依賴性細胞介導之細胞毒活性)是否為所欲特徵及抗體蛋白之所欲藥理學性質而定。在本發明之一實施例中，抗CD37抗體為具有Fc區或其相關部分之嵌合或人源化抗體，該Fc區或其相關部分已經工程化以調節效應功能，尤其增強抗體與一或多個Fc受體之結合，藉此增強效應功能ADDC。與未經Fc工程化之親本抗體相比，Fc區之工程化在效應細胞存在下更有效地介導抗體之效應功能。在一實施例中，該抗體變體介導比親本抗體介導的ADCC大的ADCC。(在下文中，若未另外說明，則在抗體分子之情形中或在IgG或Fc區之情形中術語「親本」分別指未經工程化的抗體分子、Fc區或IgG，自其衍生突變(工程化)分子)。多種Fc區之修飾已在本領域(科學文獻及專利文獻)中提出，例如在EP0307434,WO9304173、WO9734631、WO9744362、WO9805787、W09943713、WO9951642、WO9958572、WO02060919,WO03074679,W02004016750,WO2004029207,WO2004063351、WO2004074455、W02004035752、WO2004099249、WO2005077981、WO2005092925、W02006019447、WO2006031994、WO2006047350、WO2006053301、W02006088494及WO2007041635中提出。在優選實施例中，本發明的抗體為在位置332及/或239及/或236具有胺基酸取代之Fc變體。在優選實施例中，本發明的抗體在Fc區中具有選自以下之群的突變i)在位置332的單一取代，優選I332E；ii)在位置239及332的取代組合，優選S239D/I332E；iii)在位置236及332的取代組合，優選G236A/I332E；iv)在位置236、239及332的取代組合，優選G236A/S239D/I332E。以上所定義的取代可參見，例如Lazar等人，2006，WO2004029207及WO2007041635。本發明抗體之Fc變體根據其包含之胺基酸修飾來定義。因此，舉例而言，I332E為相對於親本Fc多肽具有I332E取代之Fc變體。同樣，S239D/I332E定義相對於親本Fc多肽具有取代S239D及I332E之Fc變體，且S239D/I332E/G236A定義相對於親本Fc多肽具有取代S239D、I332E及G236A之Fc變體。編號系根據EU編號方案(Kabat等人，1991)，EU編號方案係指EU抗體之編號(Edelman等人，1969)。本領域技術人員將了解此等慣例由免疫球蛋白序列之特異性區中的非序列編號組成，使得能夠歸一化提及免疫球蛋白家族之保守位置。在以上所定義的抗體中，經取代之位置236、239及332分別對應於SEQIDNO24中描繪的IgGl重鏈之位置119、122及215。(在SEQIDNO:28、32、36及40所示抗體A2、A4、B2及B4的重鏈的全長序列中，經取代之胺基酸在位置235、238及331處)。在某些實施例中，本發明之Fc變體系基於人類IgG序列，且因此將人類IgG序列用作與其它序列相比較之「基礎」序列。對於本發明的抗體而言，工程化Fc區優選為IgG、尤其IgGl，但其亦可為IgG2或來自其它免疫球蛋白種類(諸如，IgA、IgE、IgGD、IgM)或兩種或兩種以上免疫球蛋白種類之嵌合形式(例如，IgG2/IgGl)之變異序列及其類似物。雖然在一個親本IgG之情形中將本發明之Fc變體工程化，但所述變體亦可在另一第二親本IgG情形下經工程化或「轉移」至另一第二親本IgG情形。此系通過通常基於第一IgG序列與第二IgG序列之間的序列或結構同源性確定第一IgG與第二IgG之間的「等效」或「相應」殘基及取代來進行。為確定同源性，將本文所概述之第一IgG之胺基酸序列直接與第二IgG之序列相比。在比對所述序列之後，使用本領域已知的一或多個同源性比對程序，允許必需之插入及缺失以維持比對(亦即，避免經由任意缺失及插入而消除保守殘基)，從而確定與第一Fc變體之初始序列中之特定胺基酸等效的殘基。無論如何確定等效或相應殘基，且無論製造IgG之親本IgG的一致性如何，均意欲說明本發明中所用之Fc變體可工程化為與Fc變體具有顯著序列或結構同源性之任何第二親本IgG。因此，舉例而言，若通過使用上述方法或用於確定等效殘基之其它方法來產生親本抗體為人類IgGl之變異抗體，則可在(例如)人類lgG2親本抗體、人類IgA親本抗體中將變異抗體工程化(參見WO2007041635)。本發明的抗體靶向抗原⑶37，在⑶37表達程度高於⑶20表達程度之疾病中靶向抗原⑶37可比靶向⑶20有利，舉例而言，如在慢性淋巴細胞白血病(其中樣品已顯示與CD20mRNA之低程度表達相比，CD37mRNA表達程度高)中。已顯示在拉莫斯(Ramos)細胞上的ADCC活性、全血中之正常B細胞去除及拉莫斯伯基特淋巴瘤細胞去除方面，本發明抗體優於利妥昔單抗(登記之抗CD20抗體)。如可在本發明之實驗所示，本發明的抗體(未經Fc工程化及經Fc工程化抗體)具有優於利妥昔單抗的B細胞去除活性的B細胞去除活性。具有突變Fc區的抗體顯示如與利妥昔單抗相比增加約10倍的B細胞去除活性(圖11B)。本發明之⑶37抗體之代表在未交聯之情況下顯示有效的促細胞凋亡活性；在此方面，具有此性質的抗體優於在未交聯情況下不顯示細胞凋亡之抗CD37SMIPTrul6.4(Zhao等人，2007)。在未交聯情況下誘發細胞凋亡(其可由經Fc工程化或未經Fc工程化之本發明抗體顯示)在活體內缺乏交聯劑(例如，具有Fcγ受體之效應細胞)之情況下或在低密度標靶抗原CD37(例如，具有CD37低表達程度之腫瘤細胞)下為有利的。在未交聯情況下誘發細胞凋亡的抗體可能仍引起細胞死亡，而依賴於交聯的抗體不會引起細胞死亡。在另一方面中，本發明之抗CD37抗體分子為衍生自根據本發明之人源化或嵌合CD37特異性抗體的抗體片段。為獲得抗體片段，例如Fab片段，可藉助於常規技術(例如，使用木瓜蛋白酶)來實現消化。木瓜蛋白酶消化之實例描述於WO94/29348及US4，342，566中。抗體之木瓜蛋白酶消化通常產生兩個一致之抗原結合片段(所謂的Fab片段)，各片段具有單一抗原結合位點及殘餘Fc片段。胃蛋白酶處理產生具有兩個抗原結合位點且仍能夠與抗原交聯之F(ab')2片段。通過抗體消化獲得之Fab片段亦含有輕鏈恆定域及重鏈之第一恆定域(CH1)。Fab'片段與Fab片段不同，其不同之處在於其在重鏈CH1域之羧基末端含有其它殘基，包括一或多個來自抗體鉸鏈區的半胱氨酸。Fab'-SH在本文中表示恆定域之半胱氨酸殘基帶有游離硫醇基之Fab'。F(ab')2抗體片段最初以其間具有鉸鏈半胱氨酸之Fab'片段對的形式產生。抗體片段亦可通過產生各個編碼性DNA片段之分子生物學方法而產生。抗體分子通常為由兩個輕鏈/重鏈對組成之四聚體，但亦可為二聚體，亦即，由輕鏈/重鏈對組成(例如，Fab或Fv片段)，或其可為單體單鏈抗體(scFvJohnson及Bird，1991)、微型抗體或雙功能抗體。抗CD37抗體分子亦可呈偶聯物形式，亦即，與細胞毒活性劑、尤其誘發腫瘤細胞之細胞毒活性(例如，細胞凋亡或有絲分裂停滯)之細胞毒活性劑化學偶合的抗體分子。由於正常藥理學清除機制，藥物偶聯物(「免疫偶聯物")中所用的抗體僅以有限量與標靶細胞接觸且結合。因此，偶聯物中所用之細胞毒活性劑必須具有高度細胞毒活性，使得出現足夠細胞殺死以引起治療效應。如US2004/0241174中所述，所述細胞毒活性劑之實例包括紫杉烷(taxane)(參見例如WO01/38318及WO03/097625)、DNA烷基化劑(例如，CC-1065類似物)、蒽環黴素(anthracycline)、土布力辛(tubulysin)類似物、多卡米辛(duocarmycin)類似物、羥道諾紅黴素(doxorubicin)、阿瑞他汀E(auristatinE)、篦麻毒素A毒素及包含反應性聚乙二醇部分之細胞毒活性劑(參見例如Sasse等人，2000；Suzawa等人，2000；Ichimura等人，1991；Francisco等人，2003；US5，475，092、US6，340，701、US6，372，738及US6,436,93UUS2001/0036923、US2004/0001838、US2003/0199519及WO01/49698)。在一優選實施例中，細胞毒活性劑為美登素類化合物(maytansinoid)(亦即，美登素(maytansine)之衍生物(CAS35846538))，美登素類化合物為本領域已知，包括美登素、美登醇(maytansinol)、美登醇之C-3酯及其它美登醇類似物及衍生物(參見例如US5，208，020及US6，441，163)。可如WO2007077173中關於抗FAP免疫偶聯物所述來設計及合成抗⑶37抗體免疫偶聯物。在另一實施例中，本發明之抗⑶37分子可經放射性標記以形成放射免疫偶聯物，此為一種關於抗⑶37抗體MB-I所提出的方法(Buchsbaum等人，1992，參見上文)。具有有利放射性質之放射性核素為本領域已知，實例為磷-32、鍶-89、釔-90、碘-131、釤-153、鉺-169、鐿-175、錸-188，其已成功且穩定地與MAb偶合。可使用如US6，241，961中所述之本領域已知之直接標記或間接標記方法，以各种放射性核素標記本發明之抗CD37抗體分子。關於用於產生及應用適用於本發明之新穎放射性標記的抗體偶聯物之技術的評論由Goldenberg及Sharkey，2007給出。本發明的抗體分子(無論Fc經工程化或未經工程化)亦可具有雙特異性，亦即，抗體分子與兩個不同標靶結合，標靶之一為CD37，另一者選自(例如)T細胞表達之表面抗原，例如CD3、CD16及CD56。本發明亦涉及編碼本發明之嵌合或人源化抗CD37抗體分子的DNA分子。編碼本發明的抗體分子的可變重鏈的序列顯示於SEQIDNO=USEQIDN0:5、SEQIDNO:7及SEQIDNO:9中。編碼本發明的抗體分子的可變輕鏈的序列顯示於SEQIDNO:3、SEQIDNO11、SEQIDN0:13、SEQIDNO:15、SEQIDNO:17、SEQIDNO:19、SEQIDN0:21中。可通過標準方法以化學方式及酶方式(PCR擴增)合成編碼輕鏈及重鏈之核酸分子。首先，可通過本領域已知的方法(例如Gait，1984)合成合適之寡核苷酸，所述寡核苷酸可用於產生合成基因。自寡核苷酸產生合成基因的方法為本領域已知(例如，Stemmer等人，1995；Ye等人，1992；HaydenetMandecki,1988；Frank等人，1987)。本發明的DNA分子包括(但不限於)序列表所示DNA分子。因此，本發明亦涉及如TO2007/042309中所定義在高嚴格結合及洗滌條件下與序列表中所述的DNA分子雜交的核酸分子，其中所述核酸分子編碼具有等效於或優於序列表所示序列所編碼的抗體之性質的抗體或其功能片段。優選分子(自mRNA角度)為與本文所述之一種DNA分子具有至少75%或80%(優選至少85%，更優選至少90%且最優選至少95%)同源性或序列同一性的彼等分子。在本發明之範疇內的另一類DNA變體可根據其編碼之多肽來定義。此等DNA分子的序列偏離序列表中所述DNA分子，但由於遺傳密碼簡併性而編碼具有一致胺基酸序列的抗體。舉例來說，鑑於在真核細胞中表達抗體，序列表所示DNA序列經過設計能符合真核細胞中的密碼子使用習慣。若希望在大腸桿菌(E.coli)中表達抗體，則可使此等序列變化以匹配大腸桿菌密碼子使用。舉例而言，如WO2007/042309中所述，可以若干不同方式構建本發明的DNA分子之變體。為產生本發明之重組抗⑶37抗體分子，將編碼全長輕鏈及重鏈或其片段的DNA分子插入表達載體中，使得所述序列可操作地連接於轉錄及翻譯控制序列。為製造本發明的抗體，本領域技術人員可自本領域熟知之多種表達系統進行選擇，例如Kipriyanow及LeGall,2004評述的那些表達系統。表達載體包括質粒、反轉錄病毒、粘粒、EBV衍生之游離體及其類似物。表達載體及表達控制序列系經選擇以與宿主細胞兼容。抗體輕鏈基因及抗體重鏈基因可插入單獨載體中。在某些實施例中，將兩個DNA序列插入同一表達載體中。適宜的載體為編碼功能完整之人類CH或CL免疫球蛋白序列者，其具有經工程化之適當限制位點以使任何VH或VL序列可易於如上所述般插入及表達。對於抗體輕鏈而言，恆定鏈通常為κ或λ，對於抗體重鏈而言，恆定鏈可為(不限於)任何IgG同型(IgGl、IgG2、IgG3、IgG4)或其它免疫球蛋白，包括對偶基因變體。重組表達載體亦可編碼促進自宿主細胞分泌抗體鏈之信號肽。可將編碼抗體鏈之DNA克隆至載體中，使得信號肽同框連接於成熟抗體鏈DNA之氨基末端。信號肽可為免疫球蛋白信號肽或來自非免疫球蛋白之異源肽。或者，編碼抗體鏈之DNA序列可已含有信號肽序列。除編碼抗體鏈之DNA序列以外，重組表達載體亦攜帶調節序列，包括啟動子、強化子、終止及聚腺苷酸化及控制抗體鏈在宿主細胞中的表達之其它表達控制組件。啟動子序列之實例(關於哺乳動物細胞中的表達所例示)為衍生自(CMV)(諸如，CMV猴病毒40(SV40)(諸如，SV40啟動子/強化子))、腺病毒(例如，腺病毒主要晚期啟動子(AdMLP))、多形瘤之啟動子及/或強化子及強哺乳動物啟動子，諸如天然免疫球蛋白及肌動蛋白啟動子。聚腺苷酸化之實例為BGHpolyA、SV40晚期或早期polyA；或者，可使用免疫球蛋白基因之3'UTR等。重組表達載體亦可攜帶調節宿主細胞中的載體複製之序列(例如，複製起點)及可選標記基因。可根據本領域熟知之轉染方法，包括脂質體介導之轉染、聚陽離子介導之轉染、原生質體融合、顯微注射、磷酸鈣沉澱、電穿孔或通過病毒載體轉移，將編碼抗CD37抗體的重鏈或其抗原結合部分及/或輕鏈或其抗原結合部分之核酸分子及包含此等DNA分子的載體引入宿主細胞(例如細菌細胞或高級真核細胞，例如哺乳動物細胞)中。編碼重鏈及輕鏈的DNA分子優選存在於共轉染至宿主細胞、優選哺乳動物細胞中之兩個載體上。可用作用於表達之宿主的哺乳動物細胞係為本領域已知且包括中國倉鼠卵巢(CH0，CH0-DG44)細胞、NS0、SP2/0細胞、海拉細胞(HeLacell)、幼倉鼠腎(BHK)細胞、猴腎細胞(COS)、人類癌細胞(例如，!fepG2)、A549細胞、3T3細胞或任何該細胞系之衍生物/子代。可使用其它哺乳動物細胞，包括(但不限於)人類、小鼠、大鼠、猴及齧齒動物細胞系；或其它真核細胞，包括(但不限於)酵母、昆蟲及植物細胞；或原核細胞，諸如細菌。通過培養宿主細胞歷時足以允許抗體分子在宿主細胞中表達之一段時間來產生本發明之抗⑶37抗體分子。抗體分子優選以分泌多肽形式自培養基回收，或若(例如)在無分泌信號之情況下表達，則其可自宿主細胞裂解產物回收。有必要使用用於重組蛋白及宿主細胞蛋白之標準蛋白純化方法，以獲得大體上同源抗體製劑之方式來純化抗體分子。舉例來說，適用於獲得本發明之抗CD37抗體分子的目前技術水平之純化方法包括自培養基或裂解產物移除細胞及/或微粒細胞碎片作為第一步驟。接著，(例如)通過在免疫親和或離子交換管柱上進行分級分離、乙醇沉澱、反相HPLC、S印hadex層析、二氧化矽或陽離子交換樹脂上之層析而自汙染之可溶性蛋白、多肽及核酸純化抗體。作為獲得抗CD37抗體分子製劑之過程中的最後步驟，可如下文關於治療應用所述來乾燥經純化的抗體分子，例如冷凍乾燥。在另一方面中，本發明涉及藥用組合物，含有本發明之抗CD37抗體分子作為活性成份。為用於療法中，將抗⑶37抗體包括在適於促進向動物或人類投與的藥用組合物中。可通過將抗CD37抗體分子與生理學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑混合而以冷凍乾燥或以其它方式乾燥之配製物或水溶液或水性或非水性懸浮液形式製備抗CD37抗體分子之典型配製物。載劑、賦形劑、改質劑或穩定劑在所用劑量及濃度下為無毒的。其包括緩衝系統，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽及其它無機酸或有機酸及其鹽；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫氨酸；防腐劑(諸如，氯化十八烷基二甲基苄基銨；氯化六羥季銨(hexamethoniumchloride)；氯苄烷銨(benzalkoniumchloride)；苯酚；丁醇或苄醇；對羥基苯甲酸烷基酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；蛋白，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮或聚乙二醇(PEG)；胺基酸，諸如甘氨酸、穀氨醯胺、天冬醯胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、雙糖、寡糖或多糖及其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖、蔗糖、海藻糖、糊精或葡聚糖(dextran)；螯合劑，諸如EDTA；糖醇，諸如甘露糖醇或山梨糖醇；成鹽平衡離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如，Zn-蛋白錯合物)；及/或離子型或非離子型界面活性劑，諸如TWEEN(聚山梨醇酯)、PLUR0NICS或脂肪酸酯、脂肪酸醚或糖酯。抗體配製物中亦可含有有機溶劑，諸如乙醇或異丙醇。賦形劑亦可具有釋放改良或吸收改良功能。抗⑶37抗體分子亦可經乾燥(冷凍乾燥、噴霧乾燥、噴霧冷凍乾燥、通過近或超臨界氣體乾燥、真空乾燥、空氣乾燥)，沉澱或結晶或包埋於(例如)通過凝聚技術或通過界面聚合(例如)分別使用羥甲基纖維素或明膠及聚(甲基丙烯酸甲酯)而製備之微膠囊中，包埋於膠狀藥物傳遞系統(例如，脂質體、白蛋白微球體、微乳液、納米顆粒及納米膠囊)中，包埋於大乳液中，或(例如)通過pcmc技術(蛋白塗覆微晶)而沉澱或固定於載劑或表面上。所述技術揭不於Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,第21版，HendricksonR.編中。自然地，待用於活體內投與之配製物必須無菌；可通過習知技術(例如，通過經由無菌過濾膜過濾)來實現殺菌。可適用的是增加抗⑶37抗體濃度以達到所謂的高濃度液體配製物(HCLF)；已描述產生所述HCLF之各種方式。抗CD37抗體分子亦可含於持續釋放製劑中。所述製劑包括疏水性或親水性聚合物之固體、半固體或液體基質，且可呈成形物品形式，例如薄膜、條狀物或微膠囊，且可經由應用裝置來應用。持續釋放基質之實例包括聚酯、水凝膠(例如，聚(2-羥基乙基-甲基丙烯酸酯)或蔗糖乙酸丁酸酯或聚(乙烯醇))、聚交酯(US3，773，919)、L_穀氨酸與、-L-穀氨酸乙酯之共聚物、不可降解之乙烯_乙酸乙烯酯、可降解之乳酸_乙醇酸共聚物(諸如，LUPR0NDEP0T(由乳酸-乙醇酸共聚物及乙酸亮丙瑞林(leuprolideacetate)組成之可注射微球體))及聚-D-(_)-3-羥基丁酸。雖然諸如乙烯-乙酸乙烯酯及乳酸-乙醇酸之聚合物使分子能夠釋放超過100天，但某些水凝膠釋放蛋白歷時較短時段。當經囊封的抗體長時間保留於體內時，其因暴露於37°C下之水分而可能變性或聚集，從而導致生物活性損失且使免疫原性可能變化。視所涉及之機制而定，可設計合理策略以達成穩定。舉例而言，若發現凝集機制系經由硫基_二硫化物互換而形成分子間S-S鍵，則可通過使巰基殘基改質、自酸性溶液凍幹(例如，如WO89/011297中所述)、控制水分含量、使用適當添加劑及形成特定聚合物基質組合物來達成穩定。亦可用於本發明之抗⑶37抗體分子之配製物描述於US7，060，268及US6,991，790中。CD37抗體分子亦可併入其它應用形式中，諸如併入分散液、懸浮液或脂質體、片齊U、膠囊、粉劑、噴霧劑、具有或不具有滲透增強裝置之經皮或皮內貼片或乳膏、糯米紙囊劑(wafer)、經鼻、經頰或經肺配製物中，或可通過植入之細胞或在基因療法後通過個體的自身細胞來產生。抗CD37抗體分子亦可由化學基團(諸如，聚乙二醇(PEG)、甲基或乙基或碳水化合物基團)衍生。此等基團可用於改良抗體之生物學特徵，例如增加血清半衰期或增加組織糹口口。優選應用模式為通過輸注或注射(靜脈內、肌肉內、皮下、腹膜內、皮內)進行非經腸應用，但諸如通過吸入、經皮、鼻內、經頰、經口之其它應用模式亦可為適用的。為預防或治療疾病，抗體之適當劑量將視待治療之疾病類型、疾病之嚴重程度及過程、投與抗體為達成預防或治療目的、先前療法、患者病史及對抗體之反應以及主治醫師之判斷而定。合適地，一次性或經一系列治療向患者投與抗體。視疾病之類型及嚴重程度而定，無論(例如)通過一或多次分開投與或通過連續輸注，約0.01μg/kg至40mg/kg(例如，0.lmg/kg-20mg/kg)的抗體為向患者投與之最初候選劑量。對於經數天或更長時間之重複投藥而言，視病狀而定，持續治療直至出現疾病症狀之所需抑制作用。然而，其它給藥方案亦可為有用的。此療法之進程易於通過習知技術及試驗來監測，例如通過測定B細胞去除之程度(例如，使用流式細胞儀)來監測。待投與的抗體之「治療有效量」為預防、改善或治療疾病或病症所需之最低量。本發明之抗⑶37抗體分子及含其的藥用組合物可用於去除在表面上表達⑶37且引起癌症或自身免疫/炎性疾病的B細胞。在第一方面中，本發明的藥用組合物可用於治療癌症，尤其任何⑶37陽性惡性腫瘤。B細胞惡性腫瘤包括(但不限於)B細胞淋巴瘤(例如，各種形式之霍奇金氏病(Hodgkin'sdisease)、B細胞非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)及相關淋巴瘤(例如，瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症(WaldenstrGm'smacroglobulinaemia)(亦稱為淋巴漿細胞淋巴瘤或免疫細胞瘤))或中樞神經系統淋巴瘤)、白血病(例如，急性淋巴母細胞白血病(ALL)、慢性淋巴細胞白血病(CLL；亦稱為B細胞慢性淋巴細胞白血病BCLL)、毛細胞白血病及慢性肌胚細胞白血病)及骨髓瘤(例如，多發性骨髓瘤)。其它B細胞惡性腫瘤包括小淋巴細胞淋巴瘤、B細胞前淋巴細胞性白血病、淋巴漿細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤、漿細胞骨髓瘤、骨孤立性漿細胞瘤、骨外漿細胞瘤、黏膜相關(MALT)淋巴組織之結外邊緣區B細胞淋巴瘤、結邊緣區B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、縱隔(胸腺)大B細胞淋巴瘤、血管內大B細胞淋巴瘤、原發性滲出性淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤/白血病、灰區淋巴瘤、未定惡性腫瘤潛能的B細胞增殖、淋巴瘤樣肉芽腫病及移植後淋巴組織增生病症。在另一方面中，含有抗⑶37抗體的藥用組合物可用於治療那些在病理學方面涉及B細胞的自身免疫病及炎性疾病。所述疾病包括(但不限於)關節炎、類風溼性關節炎、幼年型類風溼性關節炎、骨關節炎、多軟骨炎、牛皮癬性關節炎、牛皮癬、皮炎、多發性肌炎/皮肌炎、包涵體肌炎、發炎性肌炎、中毒性表皮壞死松解症、全身性硬皮病及硬化症、CREST徵候群、與發炎性腸病相關之反應、克羅恩氏病(Crohn'sdisease)、潰瘍性結腸炎、呼吸窘迫症候群、成人呼吸窘迫症候群(ARDS)、腦膜炎、腦炎、葡萄膜炎、結腸炎、絲球體腎炎、過敏病狀、溼疹、哮喘、包含T細胞浸潤及慢性發炎反應之病狀、動脈粥樣硬化、自身免疫心肌炎、白血球黏著缺乏、全身性紅斑狼瘡(SLE)、亞急性皮膚性紅斑狼瘡、盤狀狼瘡(discoidlupus)、狼瘡性脊髓炎、狼瘡性大腦炎、幼年發作型糖尿病、多發性硬化症、過敏性腦脊髓炎、視神經脊髓炎、風溼熱、西登哈姆氏舞蹈病(Sydenham'schorea)、與通過細胞因子及T-淋巴細胞介導之急性及延遲性過敏相關的免疫反應、結核病、肉狀瘤病、肉牙腫病(包括韋格納氏肉牙月中病(Wegener'sgranulomatosis)及丘一施二氏疾病(Churg-Straussdisease))、顆粒性球缺乏症、血管炎(包括過敏性血管炎(vasculitis/angiitis)、ANCA及類風溼性血管炎)、再生障礙性貧血、戴-布二氏貧血(DiamondBlackfananemia)、免疫性溶血性貧血(包括自身免疫性溶血性貧血(AIHA))、惡性貧血、純紅血球發育不全(PRCA)、因子VIII缺乏、A型血友病、自身免疫嗜中性球減少症、全部血球減少症、白血球減少症、涉及白血球滲出之疾病、中樞神經系統(CNS)發炎病症、多發性器官損傷徵候群、重症肌無力、抗原抗體複合物介導之疾病、抗腎小球基底膜疾病、抗磷脂抗體徵候群、過敏性神經炎、貝切特氏病(Behcetdisease)、卡斯特爾曼氏徵候群(Castleman『ssyndrome)、古德帕斯徹氏徵候群(Goodpasture『ssyndrome)、蘭姆博特-伊頓二氏重症肌無力症候群(Lambert-EatonMyasthenicSyndrome)、雷諾氏徵候群(Reynaud'ssyndrome)、休格連氏徵候群(Sjorgen'ssyndrome)、史蒂芬-瓊森症候群(Stevens-Johnsonsyndrome)>實體器官移植排斥反應、移植物抗宿主疾病(GVHD)、大皰性類天皰瘡、天皰瘡、自身免疫多內分泌病變、血清陰性脊椎關節病、萊特爾氏病(Reiter'sdisease)、全身肌強直徵候群、巨細胞性動脈炎、免疫複合物腎炎、IgA腎病、IgM多發性神經病或IgM介導之神經病、特發性血小板減少性紫癜(ITP)、血栓性血小板減少性紫癜(TTP)、亨-舍二氏紫癜(Henoch-Schonleinpurpura)、自身免疫血小板減少症、睪丸及卵巢之自身免疫疾病(包括自身免疫睪丸炎及卵巢炎)、原發性甲狀腺功能低下、自身免疫內分泌疾病(包括自身免疫甲狀腺炎)、慢性甲狀腺炎(橋本甲狀腺炎(Hashimoto'sThyroiditis))、亞急性甲狀腺炎、特發性甲狀腺功能低下、阿狄森氏病(Addison'sdisease)、格雷氏病(Grave'sdisease)、自身免疫多腺體徵候群(或多腺體內分泌病徵候群)、I型糖尿病(亦稱為胰島素依賴性糖尿病(IDDM))及席漢氏症候群(Sheehan'ssyndrome)、自身免疫肝炎、淋巴組織間質性肺炎(HIV)、閉塞性細支氣管炎(非移植)對NSIP、格-巴二氏徵候群(Guillain-Barre'Syndrome)、大血管血管炎(包括風溼性多肌痛及巨細胞(高安氏(Takayasu's))動脈炎)、中血管血管炎(包括川崎氏病(Kawasaki『sdisease)及結節性多動脈炎)、結節性多動脈炎(PAN)、強直性脊椎炎、伯傑氏病(Berger'sdisease)(IgA腎病)、快速進行性絲球體腎炎、原發性膽汁性肝硬化、口炎性腹瀉(麩質腸病)、冷凝球蛋白血症、與肝炎相關之冷凝球蛋白血症、肌萎縮性側索硬化(ALS)、冠狀動脈疾病、家族性地中海熱(famiIialMediterraneanfever)、顯微性多血管炎、耳蝸前庭症候群(Cogan'ssyndrome)、維-奧二氏症候群(Whiskott-Aldrichsyndrome)及閉塞性血栓血管炎(參見W02007014278)。視待治療之病症而定，本發明之抗CD37抗體分子可單獨使用或與一或多種其它治療劑組合使用，該或所述其它治療劑尤其選自DNA破壞或微管蛋白結合劑或抑制癌細胞中的血管生成、信號轉導路徑或有絲分裂檢查點之治療活性化合物。其它治療劑可視情況作為同一醫藥製劑之組份與抗CD37抗體分子同時投與，或在抗CD37抗體分子投與之前或之後投與。在某些實施例中，其它治療劑可為(但不限於)一或多種選自以下之群之抑制劑EGFR家族、VEGFR家族、IGF-1R、胰島素受體、AuroraA,AuroraB,PLK及PI3激酶、FGFR、PDGFR、Raf、KSP或PDKl之抑制劑。其它治療劑之其它實例為CDK、Akt、Src、Bcr-Abl,cKit、cMet/HGF、c_Myc、Flt3、HSP90之抑制劑、hedgehog拮抗劑、JAK/STAT、Mek、mTor、NFκB、蛋白酶體、Rho之抑制劑、Wnt信號轉導或Notch信號轉導之抑制劑或泛素化路徑抑制劑。Aurora抑制劑之實例為(但不限於)PHA-739358、AZD-1152、AT-9283、CYC-116,R-763、VX-667、MLN-8045、PF-3814735、SNS-314、VX-689、GSK-1070916、TTP-607、PHA-680626.MLN-8237及ENMD-2076。PLK抑制劑之實例為GSK-461364。raf抑制劑之實例為BAY-73-4506(亦為VEGFR抑制劑)、PLX-4032、RAF-265(亦為VEGFR抑制劑)、索拉非尼(sorafenib)(亦為VEGFR抑制劑)、XL_281及Nevavar(亦為VEGFR之抑制劑)。KSP抑制劑之實例為伊平絲博(ispinesib)、ARRY-520、AZD-4877、CK-1122697、GSK-246053A、GSK-923295、MK-0731、SB-743921、LY-2523355及EMD-534085。src及/或bcr-abl抑制劑之實例為達沙替尼(dasatinib)、AZD-0530、伯舒替尼(bosutinib)、XL-228(亦為IGF-IR抑制劑)、尼羅替尼(nilotinib)(亦為PDGFR及cKit抑制劑)、伊馬替尼(亦為cKit抑制劑)、NS-187、KX2-391、AP_24534(亦為EGFR、FGFR、Tie2、Flt3之抑制劑)、KM-80及LS-104(亦為Flt3、Jak2之抑制劑)。PDKl抑制劑之一實例為AR-12。Rho抑制劑之一實例為BA-210。PI3激酶抑制劑之實例為PX-866、PX-867、BEZ-235(亦為mTor抑制劑)、XL-147及XL-765(亦為mTor抑制劑)、BGT-226、CDC-0941。cMet或HGF抑制劑之實例為XL-184(亦為VEGFR、cKit、Flt3之抑制劑)、PF-2341066、MK-2461、XL-880(亦為VEGFR之抑制劑)、MGCD-265(亦為VEGFR、Ron、Tie2之抑制劑)、SU-11274、PHA-665752、AMG-102、AV-299、ARQ-197、MetMAb,CGEN-241、BMS-777607、JNJ-38877605、PF-4217903、SGX-126,CEP-17940、AMG-458、INCB-028060及E-7050。c-Myc抑制劑之一實例為CX-3543。Flt3抑制劑之實例為AC-220(亦為cKit及PDGFR之抑制劑)、KW-2449、LS_104(亦為bcr-abl及Jak2之抑制劑)、MC_2002、SB_1317、來妥替尼(Iestaurtinib)(亦為VEGFR、PDGFR、PKC之抑制劑)、TG-101348(亦為JAK2之抑制劑)、XL_999(亦為cKit、FGFR、PDGFR及VEGFR之抑制劑)、舒尼替尼(sunitinib)(亦為PDGFR、VEGFR及cKit之抑制劑)及坦度替尼(tandutinib)(亦為PDGFR及cKit之抑制劑)。HSP90抑制劑之實例為坦螺旋黴素(tanespimycin)、阿螺旋黴素(alvespimycin)、IPI-504、STA-9090、MEDI-561、AUY-922、CNF-2024及SNX-5422。JAK/STAT抑制劑之實例為CYT-997(亦與微管蛋白相互作用)、TG-101348(亦為Flt3抑制劑)及XL-019。Mek抑制劑之實例為ARRY-142886、AS-703026、PD-325901、AZD-8330、ARRY-704、RDEA-I19及XL-518。mTor抑制劑之實例為泰西羅莫司(temsirolimus)、德福羅莫司(deforolimus)(其亦用作VEGF抑制劑)、依維莫司(everolimus)(此外，VEGF抑制劑)、XL_765(亦為PI3激酶抑制劑)及BEZ-235(亦為PI3激酶抑制劑)。Akt抑制劑之實例為哌立福新(perifosine)、GSK-690693、RX-0201及曲西立濱(triciribine)。cKit抑制劑之實例為馬賽替尼(masitinib)、0SI_930(亦用作VEGFR抑制劑)、AC-220(亦為Flt3及PDGFR之抑制劑)、坦度替尼(亦為Flt3及PDGFR之抑制劑)、阿西替尼(axitinib)(亦為VEGFR及PDGFR之抑制劑)、舒尼替尼(亦為Flt3、PDGFR、VEGFR之抑制劑)及XL-820(亦用作VEGFR及PDGFR之抑制劑)、伊馬替尼(imatinib)(亦為bcr-abl抑制劑)、尼羅替尼(亦為bcr-abl及PDGFR之抑制劑)。hedgehog拮抗劑之實例為IPI-609、CUR-61414、GDC-0449、IPI-926及XL-139。CDK抑制劑之實例為塞力絲伯(seliciclib)、AT-7519、P-276、ZK_CDK(亦抑制VEGFR2及PDGFR)、PD-332991、R-547、SNS-032、PHA-690509、PHA-848125及SCH-727965。蛋白酶體抑制劑之實例為硼替佐米(bortezomib)、卡菲佐米(carfilzomib)及NPI-0052(亦為NFκB之抑制劑)。蛋白酶體抑制劑/NFKB路徑抑制劑之實例為硼替佐米、卡菲佐米、NPI-0052、CEP-18770、MLN-2238、PR-047、PR-957、AVE-8680及SPC-839。泛素化路徑抑制劑之實例為HBX-41108。抗血管生成劑之實例為FGFR、PDGFR及VEGF(R)之抑制劑及沙力度胺(thalidomide)，所述藥劑選自(但不限於)貝伐單抗(bevacizumab)、莫替尼伯(motesanib)、CDP-791、SU-14813、替拉替尼(telatinib)、KRN-951、ZK-CDK(亦為CDK抑制劑)、ABT-869、BMS-690514、RAF-265、IMC-KDR、IMC-18F1、IMiD、沙力度胺、CC-4047、來那度胺(Ienalidomide)、ENMD-0995、IMC-DlUKi-23057、布瑞伐尼(brivanib)、西地尼布(cediranib)UB3,CP-868596,IMC-3G3,R-1530(亦為Flt3抑制劑)、舒尼替尼(亦為cKit及Flt3之抑制劑)、阿西替尼(axitinib)(亦為cKit抑制劑)、來妥替尼(Iestaurtinib)(亦為Flt3及PKC之抑制劑)、凡塔藍尼(vatalanib)、坦度替尼(亦為Flt3及cKit之抑制劑)、帕佐尼布(pazopanib)、PF_337210、阿柏西普(afliberc印t)、E_7080、CHIR-258、索拉非尼甲苯磺酸鹽(亦為Raf之抑制劑)、範得他尼(vandetanib)、CP-547632、0SI-930、AEE-788(亦為EGFR及Her2之抑制劑)、BAY_57_9352(亦為Raf抑制劑)、BAY_73_4506(亦為Raf抑制劑)、XL-880(亦為cMet抑制劑)、XL-647(亦為EGFR及EphB4之抑制劑)、XL-820(亦為cKit之抑制劑)、尼羅替尼(亦為cKit及brc-abl之抑制劑)、CYT-116、PTC-299、BMS-584622、CEP-11981、多福替尼(dovitinib)、CY-2401401及ENMD-2976。其它治療劑亦可選自EGFR抑制劑，所述EGFR抑制劑可為小分子EGFR抑制劑或抗EGFR抗體。抗EGFR抗體之實例為(但不限於)西妥昔單抗(cetuximab)、盤尼圖單抗(panitumumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、札魯目單抗(zalutumumab)；小分子EGFR抑制劑之實例為吉非替尼(gefitinib)、埃羅替尼(erlotinib)及範得他尼(亦為VEGFR抑制劑)。EGFR調節劑之另一實例為EGF融合毒素。可用於與本發明之抗⑶37抗體分子組合的其它EGFR及/或Her2抑制劑為拉帕替尼(Iapatinib)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、XL_647、奈拉替尼(neratinib)、BMS-599626、ARRY-334543、AV-412、mAB-806、BMS-690514,JNJ-26483327、AEE-788(亦為VEGFR抑制劑)、AZD-8931、ARRY-380ARRY-333786、IMC-11F8、Zemab,TAK-285、AZD-4769。其它藥物亦可選自靶向IGF-IR及胰島素受體路徑的藥劑。所述藥劑包括與IGF-IR結合的抗體(例如，CP-751871、AMG-479、IMC-Al2,MK-0646、AVE-1642、R-1507、BIIB-022、SCH-717454、rhuMabIGFR)及靶向IGFl-R之激酶域的新穎化學實體(例如，0SI-906或BMS-554417、XL-228、BMS-754807)。可在療法中與本發明之抗CD37抗體分子有利組合的其它藥劑為靶向CD20之分子，包括⑶20特異性抗體(例如利妥昔單抗、LY-2469298、歐克利單抗(ocrelizumab)、MEDI-552、IMMU-106,GA-IOl(=R7159)、XmAb-0367、歐伐吐單抗(ofatumumab))、放射性標記之⑶20抗體(例如託絲吐單抗(tositumumab)及替坦異貝莫單抗(ibritumomabtiuxetan))或其它針對CD20之蛋白，例如SMIPTru015、PR0-131921、FBT_A05、伐吐珠單抗(veltuzumab)、R-7159。CD37抗體可與白血球上表達之其它表面抗原之抑制劑、尤其抗體或抗體樣分子組合，例如抗CD2(希普利珠單抗(sip1izumab))、抗CD4(扎木單抗(zano1imumab))、抗CD19(MT-103、MDX-1342,SAR-3419、XmAb-5574)、抗CD22(依帕珠單抗(epratuzumab))、抗CD23(魯昔單抗(Iumiliximab))、抗CD30(伊莫單抗(iratumumab))、抗CD32B(MGA-321)、抗CD38(HuMax-⑶38)、抗CD40(SGN40)、抗CD52(阿來組單抗)、抗CD80(加利昔單抗(galiximab))。本發明的抗體亦可與另一⑶37拮抗劑(例如，TRU-016)組合。待與⑶37抗體組合之其它藥劑為免疫毒素(例如BL-22(抗⑶22免疫毒素))、伊妥珠單抗奧唑米星(inotuzumabozogamicin)(抗CD23抗體-刺孢黴素(calicheamicin)偶聯物)、RFT5.dgA(抗⑶25篦麻毒素A鏈)、SGN_35(抗⑶30阿瑞他汀E偶聯物)及吉妥珠單抗奧唑米星(gemtuzumabozogamicin)(抗CD33刺孢黴素偶聯物)、MDX_1411(抗CD70偶聯物)或放射性標記的抗體(例如90Y-依帕珠單抗(抗CD22放射免疫偶聯物))。此外，抗CD37抗體亦可與免疫調節劑組合，所述免疫調節劑例如誘發細胞凋亡或修飾信號傳遞路徑的抗體，例如TRAIL受體調節劑馬帕妥單抗(mapatumumab)(TRAIL-1受體促效劑)、來沙木單抗(Iexatumumab)(TRAIL-2受體促效劑)、替加妥珠單抗(tigatuzumab)、阿泊單抗(Apomab)、AMG_951及AMG-655；抗HLA-DR抗體(例如1D09C3)、抗CD74、破骨細胞分化因子配位體抑制劑(例如狄諾塞單抗(denosumab))、BAFF拮抗劑(例如AMG-623a)或Toll樣受體促效劑(例如，TLR-4或TLR-9)。可與本發明之抗⑶37抗體分子組合使用的其它藥物選自(但不限於)激素、激素類似物及抗激素(例如，他莫昔芬(tamoxifen)、託瑞米芬(toremifene)、雷諾昔酚(raloxifene)、氟維司群(fulvestrant)、乙酸甲地孕酮(megestrolacetate)、氟他胺(flutamide)、尼魯胺(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、乙酸環丙孕酮(cyproteroneacetate)、非那雄安(finasteride)>乙酸布舍瑞林(buserelinacetate)、氟氧可的松(fludrocortinsone)、氟甲睪酮(fluoxymesterone)、甲輕孕If(medroxyprogesterone)、己酸pi孕Slf(hydroxyprogesteronecaproate)、己Al(diethylstilbestrol)>M^(testosteronepropionate)>M￥^Sll(fluoxymesterone)/等效物、奧曲肽(octreotide)、阿佐普芬(arzoxifene)、帕瑞肽(pasireotide)、伐普肽(vapreotide)、腎上腺類固酉享(adrenocorticosteroid)/拮抗齊[J、撥尼松(prednisone)、地塞米松(dexamethasone)、胺魯米特(ainoglutethimide))；芳香酶抑制劑(例如，安美達錠(anastrozole)、來曲唑(Ietrozole)、利阿唑(Iiarozole)、依西美坦(exemestane)、阿他美坦(atamestane)、福美司坦(formestane))；LHRH促效劑及拮抗劑(例如，乙酸戈舍瑞林(goserelinacetate)、亮丙立德(Ieuprolide),阿巴瑞克(abarelix)、西曲瑞克(cetrorelix)、地洛瑞林(deslorelin)、組胺瑞林(histrelin)、曲普瑞林(triptorelin))；抗代謝物(例如，抗葉酸物，例如氨甲蝶呤(methotrexate)、三甲曲沙(trimetrexate)、培美曲唑(pemetrexed)；嘧啶類似物，例如5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、氟脫氧尿苷(fluorodeoxyuridine)、卡西他濱(capecitabine)、地西他濱(decitabine)、奈拉濱(nelarabine)、5_氮胞苷(5-azacytidine)及吉西他濱(gemcitabine)；嘌呤及腺苷類似物(諸如，巰嘌Πφ(mercaptopurine)、ρτ胃BfΠφ(thioguanine)、·R^ρτBfΠφ(azathioprine)、ii屈濱(cladribine)及噴司他丁(pentostatin)、阿糖胞苷(cytarabine)、氟達拉濱(fludarabine)、氯法拉濱(clofarabine))；抗腫瘤抗生素(例如，蒽環黴素，例如羥道諾紅霄素、道i若霄素(daunorubicin)、表柔比星(epirubicin)及伊達比星(idarubicin)>絲裂黴素-C(mitomycin-C)、博萊黴素(bleomycin)、放線菌素D(dactinomycin)、普卡黴素(plicamycin)、絲普卡黴素(splicamycin)、阿替莫黴素D(actimomycinD)、米it惠酉昆(mitoxantrone)、米託惠酉昆伊達比星(mitoxantroneidarubicin)、皮克;i；醌(pixantrone)、鏈脲佐菌素(str印tozocin)、阿非迪黴素(aphidicolin))；鉬衍生物(例如，順鉬(cisplatin)、奧賽力鉬(oxaliplatin)、卡波鉬(carboplatin)、洛鉬(Iobaplatin)、撒塔鉬(satraplatin))；烷基化劑(例如，雌莫司汀(estramustine)、司莫司汀(semustine)、氮芥(mechlorethamine)、美法倉(melphalan)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、馬利蘭(busulphan)、達卡巴嗪(dacarbazine)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、異環磷醯胺(ifosfamide)、羥基脲(hydroxyurea)、替莫唑胺(temozolomide)、亞硝基脲(nitrosourea)(諸如，卡莫司汀(carmustine)及洛莫司汀(Iomustine))、塞替派(thiotepa))；抗有絲分裂劑(例如，長春花鹼(vincaalkaloid),例如長春鹼(vinblastine)、長春花鹼醯胺(vindesine)、長春瑞賓(vinorelbine)、長春氟寧(vinflimine)及長春新鹼(vincristine)；及紫杉烷，例如紫杉醇(paclitaxel)、多烯紫杉醇(docetaxel)及其配製物拉若他西(Iarotaxel)；絲莫他西(simotaxel)及埃坡黴素(印othilone)，例如伊沙匹隆(ixab印ilone)、帕妥匹隆(patupilone)、ZK-EP0)；拓撲異構酶抑制劑(例如，表鬼臼素(印ipodophyllotoxin)，例如依託泊苷(etoposide)及磷酸依託泊昔(etopophos)、替尼泊試(teniposide)、安口丫口定(amsacrine)、拓樸替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)、巴i若惠酉昆(banoxantrone)、喜豐對喊(camptothecin))；及t昆雜化學治療劑，諸如視黃酸衍生物、胺磷汀(amifostine)、阿那格雷(anagrelide)、幹擾素α、幹擾素β、幹擾素Y、介白素-2(interleukin-2)、丙卡巴胼(procarbazine)、N-甲胼(N-methylhydrazine)>^ftfi(mitotane)&口卜口(porfimer)、貝胃Pt丁(bexarotene)>賽利克西(celecoxib)、乙烯亞胺(ethylenemine)/甲基三聚氰胺、三乙烯三聚氰胺(triethyienemelamine)、三乙烯硫代憐酉先胺(triethylenethiophosphoramide)、六甲基三聚氰胺(hexamethylmelamine)及酶L-天冬醯胺酶、L-精氨酸酶及甲硝噠唑(metronidazole)、米索硝唑(misonidazole)、去甲基醚酉享硝唑(desmethylmisonidazole)、哌莫硝唑(pimonidazole)、依他硝唑(etanidazole)、尼莫唑(nimorazole)、RSU1069、E09、RB6145、SR4233、菸鹼醯胺(nicotinamide)、5_溴脫氧尿苷(5_bromodeozyuridine)、5-碘脫氧尿苷(5-iododeoxyuridine)、溴脫氧胞苷(bromodeoxycytidine)、赤式輕基壬基Ρ^Πφ(erythrohydroxynonyl-adenine)>(anthracenedione)>GRN-163L(端粒酶模板拮抗劑)、SDX-101(PPAR促效劑)、他拉伯特(talabostat)(DPP抑制劑)、福羅地辛(forodesine)(PNP抑制劑)、阿他塞泊(atacic印t)(靶向TNF家族成員BLyS及APRIL之可溶性受體)、TNF_a中和劑(恩博(Enbrel)、胡米拉(Humira)、雷米卡德(Remicade))、XL-844(CHK1/2抑制劑)、VNP-40101M(DNA烷基化劑)、SPC-2996(反義bcl2抑制劑)、歐巴妥拉(obatoclax)(bcl2抑制劑)、恩絲他瑞(enzastaurin)(PKCβ調節劑)、沃瑞塞特(vorinistat)(HDAC抑制劑)、羅米地辛(romidepsin)(HDAC抑制劑)、AT-IOl(Bcl-2/Bcl-xL抑制劑)、普利地辛(plitid印sin)(多作用縮肽)、SL_11047(多元胺代謝調節劑)。在某些實施例中，將抗⑶37抗體分子與〃CHOP"(環磷醯胺、羥道諾紅黴素、長春新鹼及潑尼松之組合)一起應用。本發明之抗CD37抗體分子亦可與其它療法組合使用，所述療法包括外科手術、放射療法、內分泌療法、生物反應改質劑、高溫及冷凍療法及減弱任何不利影響的藥劑(例如，止吐藥)、G-CSF、GM-CSF、光敏劑(諸如，血卟啉衍生物、Photofrin、苯並卟啉衍生物、Npe6、錫本卟啉、苯博瑞德a(pheoboride-a)、細菌葉綠素a(bacteriochlorophyll-a)、萘Fft胃(naphthalocyanine)(phthalocyginine)、胃·胃)。單克隆抗體顯示靈敏的抗原特異性且通常僅與人類標靶抗原反應，而不與來自動物物種之同源蛋白反應。為支持治療抗體之研製，可需要用於評估活體內毒性及藥效行為之適當動物模型。活體內模型之一種可能性為內源標靶抗原經人類同源物置換之轉基因小鼠(「基因剔除/基因敲入"小鼠)。詳言之，為研製治療性抗CD37抗體，可由人CD37基因置換鼠CD37基因。此可通過構建含有側接未翻譯序列之人CD37基因之編碼性基因組序列的靶向載體來實現。此靶向載體可用於使用小鼠ES細胞進行同源重組。用於人⑶37表達之純合之轉基因動物可用以(例如)通過監測抗體應用後外周B細胞的數目來評估抗體關於人CD37之藥效作用。或者，彼等小鼠可用於研究在靜脈內(i.v.)應用後人CD37特異性抗體之潛在毒性作用。在缺乏單克隆抗體之動物交叉反應性之狀況下，另一可能性為產生所謂的替代抗體。替代抗體為與可用於研究藥效及毒性作用之相關動物物種(例如，小鼠或食蟹猴)之同源蛋白反應的抗體。在CD37之狀況下，分別研製對獼猴CD37或小鼠CD37具特異性之單克隆抗體。理想地，此類替代抗體應具有與研製抗體類似之結合及功能性質。此可通過使用試驗系統來研究，所述試驗系統利用獼猴或小鼠的表達CD37之細胞作為標靶細胞，例如對於結合而言，可使用FACSScatchard分析、ADCC及細胞凋亡試驗。最終，可根據活體外獼猴或小鼠血液中的B細胞去除活性來選擇替代抗體。圖1經FACS競爭試驗測定，嵌合抗體AO特異性識別⑶37抗原。圖2經FACS測定的AO的人源化形式對細胞性⑶37抗原的結合。圖3經FACS測定的AO的人源化形式對細胞性⑶37抗原的結合。圖4經FACSscatchard分析測定的AO的人源化形式對細胞性CD37抗原的親和力。圖5=AO的人源化形式對拉莫斯細胞的ADCC活性。圖6=AO的人源化形式對拉莫斯細胞的促細胞凋亡活性。圖7:mAbAO的Fc工程化形式對拉莫斯細胞的ADCC活性。圖8:mAbBO的Fc工程化形式對拉莫斯細胞的ADCC活性。圖9:mAbAO及BO的促細胞凋亡活性。圖10:mAbAO的Fc工程化形式的促細胞凋亡活性。圖IlA:Fc工程化抗體A2及B2對正常人類B細胞的去除，全血試驗，與利妥昔單抗相比。圖1IB與利妥昔單抗相比，抗體經Fc工程化後的B細胞去除活性更好。圖IlC抗體A2和B2在全血試驗中未除去T細胞和單核細胞。圖12與利妥昔單抗相比，Fc工程化後ADCC活性更好。圖13:Fc工程化抗體A2及B2對拉莫斯伯基特淋巴瘤細胞的去除，全血試驗，與利妥昔單抗相比。圖14:Fc工程化抗體A2及B2對裸小鼠中拉莫斯異種移植腫瘤的體內腫瘤生長抑制作用。圖15⑶37在多發性骨髓瘤細胞上的表達。圖16抗體A2及B2在多發性骨髓瘤細胞上的ADCC活性。圖17抗體A2及B2在來自患者的CLL細胞上的促細胞凋亡活性。實施例1製備嵌合及人源化的抗⑶37抗體a)製備嵌合抗體AO基於SEQIDNO2及SEQIDNO4所示可變重鏈及輕鏈胺基酸序列，應用哺乳動物細胞的最佳密碼子使用規律(GeneArt，Regensburg，Germany)合成相應DNA序列，在5'末端添加HindIII克隆位點及在3'末端添加BamHl克隆位點，藉此。合成的DNA分子經HindIII及BamHI消化，且基於分別編碼人類IgGl恆定區及人類κ輕鏈恆定區(SEQIDΝ0:24及SEQIDNO26)的表達載體，將所得DNA片段(SEQIDNO:1及SEQIDNO:3加上限制位點)克隆至pcDNA3.1中。製備EndoFree質粒製劑(Qiagen)，且根據供貨商之方案，將重鏈及輕鏈質粒以各質粒lmg/L之濃度共轉染至HEK293自由式(freestyle)細胞(Invitrogen)中。72小時後，採集上清液且通過ELISA測定IgG濃度。將所得嵌合抗CD37抗體(稱為AO)在改良之蛋白A管柱(GEHealthcare)上純化，洗脫至檸檬酸鹽緩衝液中，接著在PBS中透析。b)製備嵌合抗體AO的人源化形式使用如(例如)US5,225,539,US6,548,640,US6,982,321中所述之CDR移植方法，對a)中所得嵌合mAbAO進行人源化。為建立mAbAOVL域之結構模型，自布魯克哈芬國家實驗室(BrookhavenNationalLaboratory)之蛋白資料庫(PDB)中選擇結構模板。自鼠單克隆抗體路徑〃1KB5"選擇具有88%序列同一性/81%相似性及.2.5A解析度之VL域。對於mAbAOVH域，選擇具有90%序列同一性及91%相似性之同一小鼠單克隆抗體結構"1KB5"作為主要模型化模板。發現人類Vkl(hVKl)及人類VHl(hVHl)類型與人類共有框架達到最優選配合。作為替代性設計，選擇最穩定人類共有域hVK3及hVH3之移植物。為進行移植，將mAbA0_VL及mAbA0_VH模型與人類共有域模型hVKl、hVK3、hVHlA及hVH3組合，且將其組合以產生Fv模型。通過將鼠mAbAO⑶R區包埋至人類抗體框架中來執行環移植，且合成人源化鏈構建體的DNA分子。合成各自的人源化可變區，將其克隆至免疫球蛋白表達載體中，與表1所示的重鏈及輕鏈序列一起，如a)所述在HEK293自由式表達系統(Invitrogen)中瞬間表達，且在蛋白A柱上進行純化。表1實施例中用的嵌合及人源化抗CD37抗體的可變重鏈及輕鏈序列γμrai抗體SEQIDNO:aa/DNASEQIDNO:aa/DNAA(=AO)seq2/1seq4/3tableseeoriginaldocumentpage25c)製備Fc工程化之嵌合及人源化抗⑶37抗體如Lazar等人，2006所述，製備Fc突變體。將所得Fc工程化的重鏈序列引入表達載體pAD-CMVl(EP393438中所述)中且與含有輕鏈編碼序列之質粒一起共轉染至CH0-DG44細胞中。在轉染後5至7天自細胞培養基收集抗體，且經由蛋白A層析進行純化，將其洗脫至檸檬酸鹽緩衝液中，接著在PBS中透析。經由蛋白AHPLC來測定樣品之蛋白含量,經由Kinetic-QCL動力學顯色試驗(KineticChromogenicAssay,Lonza)來測定內毒素含量。通過HP-SEC來測定樣品之單體含量，用於功能測試之所有樣品均顯示單體含量>95%。表2嵌合及人源化抗CD37抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區的序列(第III和第IV欄)以及Fc突變(第II欄)(抗體AO、BO、CO等與表1中的抗體A及B、C等一致)。重鏈和輕鏈的全長序列在第V和VI欄列出。(第V欄中標記了*的序列是指SEQIDNO24和23(野生型序列)的IgGl序列經修飾後具有對應於第II欄的取代的序列，以及編碼性DNA中的相應突變)。tableseeoriginaldocumentpage26tableseeoriginaldocumentpage27實施例2嵌合mAbAO特異性識別⑶37抗原在FACS競爭試驗中，在拉莫斯伯基特淋巴瘤細胞(ATCC#CRL-1596)上測試MAbAO對細胞性⑶37之特異性。使細胞在組織培養瓶(175cm2)中生長，瓶中有RPMI-1640+GlutaMAX作為培養基，並補充有10%熱滅活胎牛血清、12.5mMHEPES、lmM丙酮酸鈉、1%MEM非必需胺基酸。在溼潤氣氛中，細胞以3XIO5個細胞/毫升之初始密度在37°C、5%C02中培養3天。通過每周用新鮮培養基以16之比率轉種2-3次，將培養物維持在3XIO5-L8X106/ml的細胞濃度。用濃度為lwg/ml、由藻紅蛋白(PE)直接標記的CD37特異性mAbHHl(SantaCruz)進行FACS競爭分析。所述抗體與未標記的競爭抗體AO以指定摩爾比在4°C預培育lOmin。此後，將1XIO5個拉莫斯細胞用抗體混合物在冰上培育30min。此後，將細胞在磷酸鹽緩衝液(PBS)中洗滌兩次，再懸浮於FACS緩衝液中且在BDFACSCanto上進行測量。此類試驗結果顯示於圖1中。以20倍摩爾過量添加對照人類IgGl抗體(SigmaIgGlκ)並未顯著降低拉莫斯細胞之平均螢光強度(MFI)。以20倍摩爾過量添加未標記之HHl抗體或AO抗體幾乎完全消除直接標記之HHl抗體的結合。此表明，AO及HHl抗體識別拉莫斯細胞上的相同或相似表位，且競爭與細胞性CD37抗原之結合。實施例3mAbAO的人源化形式與細胞性CD37抗原的結合經FACS分析來測試AO的人源化形式與細胞性⑶37抗原之結合。以所指示之濃度將抗體添加至拉莫斯細胞中且使其在4°C下結合30min。此後，用PE標記之山羊抗人類IgG抗體(Sigma)檢測結合抗體，將細胞用PBS洗滌2次，此後使細胞再懸浮於FACS緩衝液中，在BDFACSCanto上通過FACS進行分析。實例顯示於圖2及3中(分別為抗體A、B、C、D、I或A、H、I、J、K、L及M；參見表1)。數個AO人源化形式顯示與拉莫斯細胞之結合與親本抗體AO相似，表明人源化不會降低與細胞性CD37抗原之結合。實施例4嵌合mAbAO的人源化形式的FACSscatchard分析通過如其它文獻(Brockhoff等人，1994)所述之FACSscatchard分析來測定抗體AO的人源化形式(稱為B、C、D、H、I及K;參見表1)對細胞性⑶37抗原之親和力。簡言之，在96孔板中製備抗體稀釋液，在第一孔中以100-400nM開始(80μ1)，接著11個稀釋步驟(12，40+40μ1)。將50μ1mAb稀釋液添加至FACS管中，將150μ1細胞(0.8XIO6/ml=1.2XIO5個細胞/管)添加至各FACS管中。將細胞輕輕混合且在冰上培育lh。此後，添加50μ1偶聯了FITC的第二抗體(濃度為15μg/ml；小鼠mAb抗huIgG所有亞類，Zymed05-4211)，混合，冰上培育30min。此後添加4ml含有0.02%酸之PBS(ph7.2)，將細胞沉降後，重懸於300μ1PBS(ρΗ7.2)中，用BDFACSCanto進行FACS分析。所有實驗步驟均在溼冰上執行，所有抗體稀釋均在PBS/0.5%BSA+0.02%酸中進行。使用QuantumFITCMESF(Premix)高含量珠粒(BangsLaboratories)來執行FACS校準。所有樣品均使用相同FACS參數來測量。根據不同抗體濃度之MFI值來計算結合IgG對游離IgG之比率，將其展示為scatchard墨點。圖4顯示數個AO人源化變體之MFI/抗體濃度關係。結果顯示，一些人源化形式對拉莫斯細胞之結合與起始抗體相似，其解離常數(Kd)為2.15-4.90納摩爾/升。實施例5嵌合mAbAO的人源化形式的ADCC活性使用拉莫斯細胞作為標靶細胞及使用IL2刺激之人類PBMC作為效應細胞，來評估AO的人源化形式(稱為B、C、D、H、J、K;參見表1)介導抗體依賴性細胞介導之細胞毒活性(ADCC)的能力。拉莫斯細胞(伯基特淋巴瘤；ATCC#CRL-1596)自ATCC購得。使細胞在組織培養瓶(175cm2)中生長，瓶中有RPMI-1640+GlutaMAX作為培養基，並補充有10%熱滅活胎牛血清、12.5mMHEPESUmM丙酮酸鈉、MEM非必需胺基酸。在溼潤氣氛中，細胞以3XIO5個細胞/毫升之初始密度在37°C、5%CO2中培養3天。通過每周用新鮮培養基以16之比率轉種2-3次，將培養物維持在3XIO5-L8X106/ml的細胞濃度。將細胞密度為1.5X106/ml-l.8XlO6Ail的對數生長期細胞培養物的等分試樣離心(200Xg，亦即IOOOrpm)lOmin。將細胞用洗滌培養基(RPMI1640，不含L-穀氨醯胺)洗滌一次，沉降(200Xg，亦即IOOOrpm;IOmin)。使細胞團再懸浮於試驗培養基[RPMI，含1%BSA，不含L-穀氨醯胺]，進行細胞計數。將細胞濃度調整至2X105/ml。自健康供體抽出約50-80ml全血，用於分離PBMC。在50ml管中，將IOml全血用26mlHBSS(Hanks'平衡鹽溶液，不含鈣及鎂)以13.6稀釋。在50ml管中，將18ml經稀釋之全血加在12mlLymphoprep(NycomedPharma)頂部，以370Xg(1400rpm)離心35min。自界面吸出單核細胞，先用HBSS洗滌(750Xg，亦即1900rpm;10min)，接著用HBSS進行第二次洗滌(300Xg,亦即1200rpm；IOmin)，最終用HBSS洗滌(160Xg,亦即900rpm；IOmin)。用移液管使沉降細胞輕輕再懸浮於培養基/試驗培養基(RPMI1640，含10%熱滅活人類AB血清，不含L-穀氨醯胺)中，在細胞計數器中測定細胞數。將PBMC濃度調整至lX107ml。在37°0、0)2恆溫箱中的組織培養燒瓶(75cm2)中，將新鮮分離之PBMC(5X105/ml)在培養基(RPMI1640，含10%人類AB血清，不含L-穀氨醯胺)中維持隔夜。第二天，用終濃度為lU/ml的hIL-2刺激細胞，歷時另外3天。在Lymphopr印梯度上，自細胞碎片分離經IL-2刺激之PBMC。使純化並經IL-2刺激的PBMC以1X107/ml懸浮於培養基/試驗培養基中。效應細胞與標靶細胞在特異性或非特異性抗體存在的條件下的共培養，一式雙份或一式三份地在96孔圓底微量滴定板中進行，每孔的試驗培養基終體積為200μ1，由10%人類AB血清及BSA的RPMnfWl1的比率組成。首先，塗上效應細胞(於每孔100μ1於RPMI中之10%人類AB血清中的剛分離之PBMC細胞)，接著塗上標靶細胞及在50μ1含BSA的RPMI中稀釋的抗體溶液。作為對照，在單獨試驗培養基中培養效應細胞(效應細胞對照)，且在單獨試驗培養基(自發裂解)或在補充有TritonX-100之試驗培養基(最大裂解)中培養標靶細胞。將共培養物在潮溼CO2恆溫箱中於37°C下培育3小時。在培育結束時，在室溫下通過離心(200Xg，亦即IOOOrpm;10min)自培養基移除細胞。將不含細胞之上清液(每孔100μ1)轉移至96孔平底板之相應孔中。為測定此等上清液中之LDH活性，將100μ1反應混合物(將250μ1催化劑與11.25ml染料溶液新鮮混合)添加至各孔中，室溫避光培育30min。接著，如下所述來測量吸光度。用細胞毒活性檢測試劑盒(LDH；Roche)來測量ADCC活性。細胞毒活性的檢測是基於對漿膜受損細胞釋放的LDH酶活性的測量。釋放至培養物上清液中之LDH將來自試劑盒之四唑鹽還原成甲臢(formazan)。相對於參考波長650nm，在ELISA板式讀數器中測量490nm下甲臢染料之吸收最大值。為計算細胞介導之細胞毒活性百分比，在每組實驗中執行五個對照。背景對照I(I)試驗培養基中的LDH活性，將其自值(3)及(5)減去。背景對照II(2)含1%Triton-XlOO的試驗培養基中的LDH活性，將其自最大LDH釋放值⑷減去。自發LDH釋放值(3)僅有標靶細胞時釋放的LDH活性。最大LDH釋放值(4)標靶細胞中最大可釋放的LDH活性。效應細胞對照(5)僅有效應細胞時釋放的LDH活性。為測定細胞介導之細胞毒活性百分比，根據製造商之說明計算一式三份或一式雙份實驗之平均吸光度，且減去背景。在圖5中，顯示使用25IiET比率及拉莫斯標靶細胞的ADCC試驗的結果。添加30ng/ml濃度的抗體。起始mAb及其人源化形式對拉莫斯細胞展示相似的ADCC活性。可見，抗⑶37mAbA之人源化不會顯著改變其誘發ADCC之能力。實施例6嵌合mAbAO的人源化形式的促細胞凋亡活性mAbAO(=A)及其人源化形式(B、C、D及I；參見表1)的促細胞凋亡活性，通過將拉莫斯細胞與mAb—起培育，再測量膜聯蛋白(ArmexirOV/PI陽性細胞來評估。拉莫斯細胞(伯基特淋巴瘤；ATCC#CRL-1596)來源於ATCC。使細胞在組織培養瓶(175cm2)中生長，瓶中有RPMI_1640+GlutaMAX作為培養基，並補充有10%熱滅活胎牛血清、12.5mMHEPES、ImM丙酮酸鈉、1%MEM非必需胺基酸。在溼潤氣氛中，細胞以3XIO5個細胞/毫升之初始密度在37°C、5%CO2中培養3天。通過每周用新鮮培養基以16之比率轉種2-3次，將培養物維持在3X105-1.8X106/ml的細胞濃度。將細胞密度為1.5X106/ml-1.8X106/ml的對數生長期細胞培養物的等分試樣離心(200Xg，亦即IOOOrpm)lOmin。將細胞用洗滌培養基(RPMI1640，不含L-穀氨醯胺)洗滌一次，沉降(200Xg，亦即IOOOrpm;10min)。使細胞團再懸浮於培養基中，進行細胞計數。將細胞濃度調整至IX106/ml。將每孔100μ1細胞懸浮液塗於96孔圓底板中。在含有10%FBS之細胞培養基中稀釋抗體，每孔添加100μ1抗體溶液。細胞在CO2恆溫箱中37°C培育20至24小時，此後以Vybrant凋亡實驗盒#2進行染色。將AlexaFluor488標記之膜聯蛋白V及碘化丙啶溶液添加至細胞中，避光培育15min。此後，使細胞再懸浮於400μ1膜聯蛋白V結合緩衝液中，用BDFACSCanto進行FACS分析。使用FL1/FL2通道，以二維點印跡法測定膜聯蛋白V陽性/PI陰性細胞及膜聯蛋白V/PI陽性細胞的百分比。用同種型相匹配的未結合抗體(Sigma人類IgGl)作陰性對照。圖6顯示mAbA之各種人源化形式對拉莫斯細胞的促細胞凋亡作用。用10μg/ml的抗體將細胞培育24小時，展示膜聯蛋白V陽性細胞(PI陽性及PI陰性)之總百分比。親本mAbA顯示較強促細胞凋亡活性。意外地，人源化形式顯示與親本mAbA相比顯著減少之膜聯蛋白V陽性細胞數目，表明人源化抗體的促細胞凋亡活性改變。可見，在此組實驗中，MAbA的人源化使其促細胞凋亡活性降低。實施例7嵌合mAbAO的Fc工程化形式的ADCC活性使用拉莫斯細胞作為標靶細胞來評估mAbAO的Fc工程化形式(稱為A1、A2、A3、A4，參見表2)的ADCC活性。如上所述來執行ADCC試驗(實施例5)。實驗結果顯示於圖7中。AO的Fc工程化形式與親本mAbAO相比在潛力(potency)及功效(efficacy)方面都明顯進步。一些Fc變體與親本mAb相比，最大裂解增幅多達100%，EC5tl增幅多達10倍。可見，引入特異性Fc突變大大增加嵌合mAbAO的ADCC活性。實施例8mAbBO的Fc工程化形式的ADCC活性使用拉莫斯細胞作為標靶細胞來評估mAbBO的Fc工程化形式(稱為B1、B2、B3、B4；參見表2)的ADCC活性。如上所述來執行ADCC試驗(實施例5)。BO的Fc工程化形式與親本mAbBO相比在潛力及功效方面都明顯進步。一些Fc變體與親本mAb相比，最大裂解增幅多達80%，EC50增幅多達20倍。可見，引入特異性Fc突變大大增加嵌合mAbBO的ADCC活性。實驗結果見圖8。實施例9mAbAO及BO的促細胞凋亡活性圖9中展示mAbAO及BO在與抗IgGmAb交聯之前及之後對拉莫斯細胞的促細胞凋亡活性。如實施例6中所述來執行細胞凋亡試驗，為進行抗體交聯，以11之比率向所述抗體添加抗人類IgG抗體(Y-鏈特異性；Sigma)，37°C培育15min，接著添加標靶細胞。在圖9中，以1μg/ml之濃度添加交聯及未交聯之⑶37特異性mAb。嵌合mAbAO即使未交聯亦為細胞凋亡之強效誘發劑，此作用在mAb交聯之後顯著增強。意外地，未交聯之人源化mAbBO完全缺乏促細胞凋亡活性，然而在與抗IgGAb交聯之後顯示強效促細胞凋亡活性。總之，此實驗顯示，人源化mAbAO的促細胞凋亡活性可在抗體交聯後恢復。實施例10mAbAO的Fc工程化形式的促細胞凋亡活性嵌合mAbAO的Fc工程化形式對拉莫斯細胞的促細胞凋亡活性通過實施例6所述膜聯蛋白V/PI染色來評估。在0.1至10.000ng/ml之濃度範圍內，對親本抗體AO及Fc工程化變體A2及A4進行滴定。如圖10中可見，所有3種抗體均顯示相似的促細胞凋亡活性。總之，此實驗顯示mAbAO之Fc工程化不會改變其促細胞凋亡活性。實施例11a)全血試驗中Fc工程化抗體A2及B2的B細胞去除活性從人類血液去除正常B細胞之潛力及功效用全血試驗來評估。在此試驗形式中，將受試抗體添加至健康人體血樣經EDTA處理的樣品中，37°C培育3至4小時後，通過4色FACS試驗定量測量B細胞數目。通過與緩衝液或IgG對照相比，可計算受試藥劑去除B細胞之程度。由於存在與人體內情況相似的人類IgG含量及效應細胞，所以認為此試驗類型對於預測該受試抗體的體內效應有高度相關性。用定量FACS試驗來測定健康個體血樣中的B細胞數及/或添加的(spiked)拉莫斯細胞的數目。定量分析用含已知數量螢光珠的BDTrucoimt管來進行，所述珠作為對目標細胞群進行定量的內標。用4種不同的⑶標記(⑶3/⑶14/⑶19/⑶45)進行4色分析，並聯合FSC/SSC分析來鑑別B細胞。將每孔270μ1新鮮血液與30μ1抗體稀釋液(在PBS中)或PBS(緩衝液對照)一起在48孔板中一式雙份進行培育。將樣品在37°C培育4h，此後立即將其置於冰上。將33μ1⑶標記主混合物添加至Trucount管中，添加50μ1血液-抗體混合物。使樣品渦旋，室溫培育15分鐘。此後，添加450μ1裂解緩衝液，使其渦旋，室溫再培育15分鐘。將樣品置於冰上，立即用BDFACSCanto流式細胞儀進行FACS分析。用BDFACSDiva軟體(5.0.2版)進行數據評估。Fc工程化的嵌合及人源化mAbA2及B2在正常B細胞的去除能力方面顯示優秀的潛力，其EC5tl值為0.15-0.35nM。正常B細胞的去除水平為57%-65%。利妥昔單抗(獲準治療B-NHL的抗體)在此試驗形式中平行測試，其B細胞去除活性顯著較低(圖11A)。b)Fc工程化使AO及BO的B細胞去除活性比利妥昔單抗更好mAb對健康人體血液中B細胞去除的效應按a)所述來評估。未經Fc工程化之mAbAO及BO顯示B細胞去除活性為13%-26%，與利妥昔單抗類似。Fc工程化使兩種mAb的B細胞去除活性均顯著增加，平均去除百分比為75%。此顯然證明A2及B2與利妥昔單抗相比的優越性(圖11B)。c)抗體A2和B2在全血試驗中不去除T細胞和單核細胞在評估對B淋巴細胞的影響的同時，也評估A2和B2對T淋巴細胞(⑶3+)和單核細胞(CD14+)的影響。未觀察到T細胞數或單核細胞數的顯著變化，但觀察到B細胞數顯著減少(圖11C)。這表明，A2和B2從人血中特異性除去B細胞。實施例12Fc工程化導致比利妥昔單抗更好的ADCC活性mAbAO的Fc工程化形式A2的ADCC活性用拉莫斯細胞作標靶細胞進行評估。如上所述來執行ADCC試驗(實施例5)。未經Fc工程化的抗體AO對拉莫斯標靶細胞的最大裂解次於利妥昔單抗(對⑶20具特異性的抗體，其經批准用於治療罹患B細胞淋巴瘤之患者)。意外發現，AO的Fc工程化使A2在潛力和功效方面比利妥昔單抗明顯進步。此表明，當拉莫斯細胞上⑶20及⑶37的抗原密度相似時，經Fc工程化的抗⑶37mAbA2的ADCC活性比利妥昔單抗明顯更好(圖12)。實施例13全血試驗中Fc工程化抗體A2及B2之淋巴瘤細胞去除活性拉莫斯細胞(來自人類血液的伯基特淋巴瘤細胞系)去除活性之潛力及功效用實施例11所述全血試驗來評估。在該試驗之改良版中，向全血基質中添加(spikein)拉莫斯腫瘤細胞，其與內源性B細胞相比約十倍過量，其去除用FACS分析來監測。Fc工程化之嵌合及人源化mAbA2及B2在拉莫斯細胞去除活性方面顯示良好潛力，其EC5tl值為0.35-0.54nM。拉莫斯細胞去除水平為36%-55%。利妥昔單抗(獲準治療B-NHL的抗體)在此試驗形式中平行測試，其拉莫斯細胞去除活性顯著較低(圖13)。實施例14疾病相關模型中Fc工程化抗體A2及B2之活體內功效mAbA2及B2之活體內抗腫瘤功效用拉莫斯伯基特淋巴瘤裸小鼠模型來評估。將CD37陽性拉莫斯細胞經皮下注射至動物腰窩中，當腫瘤形成時，開始靜脈內治療所述動物。選擇每周兩次之治療方案(q3/4d)，平行測試兩種不同劑量(8mg/kg及25mg/kg)。兩種mAb均顯示顯著抗腫瘤功效，其T/C值為0.2%-26%。未觀測到兩種劑量水平之間及兩種抗體之間的顯著差異。然而，經大劑量A2治療之動物中存在功效更佳之傾向，T/C為0.2%，且5/10的腫瘤完全消退。所有治療均良好耐受，無明顯重量減輕。總之，mAbA2及B2顯示在拉莫斯伯基特淋巴瘤模型中具有顯著抗腫瘤功效，在8mg/kg劑量水平獲得最大活性。該活性可與平行測試之利妥昔單抗之活性相當。必須注意的是，在Fc工程化抗體A2及B2中觀測到之體內活性可能被低估，因為此等mAb針對與人類效應細胞而非鼠效應細胞之相互作用進行了優化。此種經優化的相互作用在使用人類效應細胞時引起體外ADCC活性大大改善(實施例8)，但在所用小鼠模型中並未有所反映。然而，此實驗中獲得之數據(圖14所示)提供活體內證據證明靶向CD37之概念、且因此可用於評估人類之治療劑量。實施例15小鼠中A2及B2的藥物動力學(PK)與藥效作用(PD)的相關性，用以評估對人的治療劑量使用拉莫斯腫瘤異種移植模型，在小鼠中建立A2及B2之血清濃度與其藥效作用之間的相關性。此等研究證明，在小鼠中採用標準的q3或4d抗體給藥方案時，8mg/kgA2及B2的劑量(配製在檸檬酸鹽緩衝液中25mM檸檬酸鈉、115mMNaCl,0.04%Tween80，PH6.0)在此侵襲性皮下(s.c.)腫瘤模型中引起腫瘤生長顯著延緩，從而表明在整個給藥間隔期具有持續之活性。此外，亦確立同一劑量之藥物動力學數據。利用這種小鼠中的PK/PD關聯性，人體的估計用量可以用人體中人源化抗體清除率(CL)的已公開數據(Lobo等人，2004)來計算。A2的完整計算·單一劑量8mg/kg後的平均AUC(0-①)=6099μg·h/mL小鼠中的指定AUC(0_①)=小鼠中AUC(ss，τ)，且AUC(ss，τ)/τ=C(ave,ss)·小鼠中C(ave，ss)(τ=84小時)=73μg/mL，假定其等同於人體中的C(ave，ss)(τ=168h)。因為人體AUC(ss，τ)=D/CL，且利用Lobo等人2004所報導的人體中人源化抗體清除率(CL)範圍CL=7mL/h/70kg至15mL/h/70kg。·對於7mL/h/70kg:168hrX7=1176mLX73yg=86mg。·對於15mL/h/70kg:168hrX15=2520mLX73yg=184mg。因此，對於70kg的人而言，A2的每周估計劑量為86_184mg。使用與上述相同之假定，對於70kg的人而言，經計算，B2的每周估計人用劑量為189至404mg。實施例16抗體A2及B2對多發性骨髓瘤細胞顯示ADCC活性⑶37在一組多發性骨髓瘤細胞系上的表達用⑶37特異性抗體經FACS分析來評估。細胞與直接螢光標記之抗CD37抗體或與未標記之CD37特異性抗體一起保溫，接著與螢光標記的抗第一抗體的第二抗體一起保溫。帶標記的細胞的螢光活性用FACSCanto流式細胞儀(BDBiosciences)測量，螢光強度用FACSDiva軟體記錄為MFI。11例所測試的多發性骨髓瘤中，有6例表明細胞表面表達CD37(圖15)。接著，將細胞系(RPMI8226)用⑶37特異性抗體A2及B2按實施例5所述的ADCC試驗進行測試。兩種抗體均證明在RPMI8226細胞上具有強效ADCC活性，EC50值為25ng/ml，最大細胞裂解為約20%(圖16)。此實施例證明，在使用CD37特異性mAbA2及B2的情況下，CD37陽性多發性骨髓瘤細胞易感於ADCC介導的細胞裂解作用。圖15顯示6例多發性骨髓瘤細胞系的⑶37表達的FACS分析。空心曲線表示與CD37特異性抗體的反應性，實心曲線表示陰性對照抗體。實施例17抗體A2和B2對來自患者的CLL細胞的促細胞凋亡活性A2和B2的促凋亡活性在衍生自患者的慢性淋巴細胞白血病(CLL)細胞上進行評估。從診斷為CLL的患者製得外周血單核細胞(PBMC)，所述患者事先都已按赫爾辛基聲明(thedeclarationofHelsinki)取得知情同意。用Ficoll-Paqueplus方法(StemCellTechnologies,Meylan,France)從新鮮採集的血液純化出原代CLL細胞，在含10%熱滅活人AB血清(Sigma，France)的RPMI1640培養基中4°C儲存備用。原代CLL細胞的培養基是RPMI1640，補加2mML-穀氨醯胺和10%熱滅活的人AB血清。為了進行實驗，原代CLL細胞用血細胞計數儀計數，並用0.25%臺盼藍排除法評估其活力。CLL樣品的活力在90%以上。按實施例6所述，將細胞與30μg/ml抗體在37°C保溫24小時後，測定膜聯蛋白V陽性細胞百分比。如圖17所示，Fc工程化抗體A2和B2對原代CLL細胞顯示強勁的促細胞凋亡活性，其膜聯蛋白V陽性細胞分別為約90%(A2)和40%(B2)。這兩種mAb都明顯優於rituximab，後者是已獲準治療B-NHL的B細胞特異性抗體。MabA2的活性還明顯優於阿來組單抗，後者是獲準治療B-CLL的抗體。實施例18生成轉基因小鼠模型，其中的內源CD37基因被其人類同源物置換。構建靶向載體，其含有人CD37(BAC(細菌人工染色體)ID:RP11-433N13,RP11-50I11)的編碼序列，且該編碼序列側翼是非翻譯序列。該靶向載體還含有側翼於外顯子3-4的IoxP位點、以及被frt位點側接的neo選擇標記。接著，用此靶向載體和小鼠ES細胞按照標準技術進行同源重組，以便將小鼠基因組序列的外顯子1-8替換為相應的人類序列。為此，使C57BL/6NES細胞系在失去有絲分裂活性的餵養層上生長，所述餵養層在補力口20%FBS(PAN)及1200u/mL白血病抑制因子(MilliporeESG1107)的DMEM高葡萄糖培養基中含有小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)。在240V及500F下，將IXIO7個細胞及30g線性化DNA載體電穿孑L(BioradGenePulser)。G418選擇(200g/mL)在第2天開始。用更昔洛韋(Gancyclovir)(2M)進行之反選擇在電穿孔後第5天(d5)開始。在第8天(d8)分離ES克隆，對克隆進行擴增及在液氮中冷凍後，根據標準方法，(例如)通過使用對標靶基因具特異性之放射性標記之DNA探針，通過Southern印跡法進行分析。接著，通過本領域已知之標準方法，例如通過囊胚注射(blastocystinjection)及隨後產生嵌合動物，而產生轉基因動物。分別對嵌合及雜合動物進行常規育種，獲得對人CD37的雜合型及純合型動物。使用標準方法，例如外周血淋巴細胞之FACS分析或組織切片之免疫組織化學分析，在蛋白水平監測鼠⑶37基因之成功基因剔除及人⑶37基因之基因敲入。實施例19帝[J備替代抗體(surrogateantibody)用獼猴(macaque)CD37抗原之完整編碼序列(登錄號ENSMMUT00000020744)對小鼠及兔進行基因免疫，產生獼猴CD37特異性單克隆抗體。特異性抗體用表達獼猴CD37抗原之重組HEK293或CHO細胞來選擇，使用例如標準ELISA或FACS技術。這些抗體的可變重鏈及輕鏈編碼序列通過PCR克隆重新獲得，並用於(按實施例1所述)產生嵌合抗體，使所述嵌合抗體具有來源於鼠或兔起始抗體的VH及VL區、以及與本發明抗體(例如，A2或B2)的Fc部分一致的Fc部分。結合及功能性質可利用試驗來研究，所述試驗例如，利用獼猴⑶37表達細胞作為例如結合作用的標靶細胞的試驗系統、FACS、SCatChard分析、ADCC及細胞凋亡試驗。最後，替代抗體根據食蟹猴(Cynomolgusmonkey)血液的體外B細胞去除活性來選擇。實施例20製備產生所述抗體之克隆為製備用於產生本發明抗體(例如，抗體A2、A4、B2或B4)之克隆，將編碼完整重鏈(例如分別具有SEQIDNO:27、31、35或39所示序列)的DNA分子插入真核表達載體pBI-26中，該載體亦編碼來自倉鼠之二氫葉酸還原酶選擇標記。將編碼SEQIDNO:29、33、37及41分別所示的完整輕鏈的DNA分子插入真核表達載體pBI-49中，該載體亦編碼新黴素磷酸轉移酶選擇標記。對完整重鏈及輕鏈的DNA序列進行充分測序。對於在化學合成培養基(chemicallydefinedmedia)中懸浮生長的倉鼠細胞系CH0-DG44，用上述編碼抗體重鏈及輕鏈的真核表達載體共轉染。被轉染的細胞在不含次黃嘌呤及胸苷、但有G418抗生素的培養基中選擇。接著，將細胞用濃度遞增的氨甲蝶呤(MTX)進行分步選擇及擴增。在SOOnMMTX擴增步驟中，基於旋轉器運行中之生長效能及抗體生成而選出一個細胞系，將其凍存於SafetyCellBank(SCB)中。參考文獻AmericanCancerSociety(CancerFacts&Figures2005)。Baker及Jones,CurrOpinioninDrugDiscovery&Development,10,219-227,2007。Barbas等人，Proc.Nat.Acad.Sci，USA91:3809_3813，1994。Barrena等人，Leukemia19:1376—1383，2005。Belov等人，CancerResearch61:4483-4489,2001。BoulianneG.L.,HozumiN.及ShuIman,Μ.J.,Productionoffunctionalchimericmouse/humanantibody.Nature312:643,1984。BrockhoffG,HofstaedterF,KnuechelR.,Cytometry1994，17(1):75_83。Buchsbaum等人，CancerResearch52:6476—6481,1992。Chothia及Lesk.，J.Mol.Biol.196:901_917，1987。CoiffierB等人』Rituximab(anti_CD20monoclonalantibody)forthetreatmentofpatientswithrelapsingorrefractoryaggressivelymphoma:amulticenterphaseIIstudy.Bloodl998;92:1927-1932。Coiffier,JC0，23，6387-93，2005。Edelman等人，ProcNatlAcadSciUSA63:78-85,1969。FeugierP等人，Long-termresultsoftheR-CHOPstudyinthetreatmentofelderlypatientswithdiffuselargeB—celllymphoma:astudybytheGrouped'EtudedesLymphomesdel'Adulte.JClinOncol2005;23:4117-4126。ForanJM等人，EuropeanphaseIIstudyofrituximab(chimericanti_CD20monoclonalantibody)forpatientswithnewlydiagnosedmantle-celllymphomaandpreviouslytreatedmantle—celllymphoma,immunocytoma，andsmallB—celllymphocyticlymphoma.JClin0ncol2000;18:317_324。ForstpointnerR等人，Theadditionofrituximabtoacombinationoffludarabine，cyclophosphamide,mitoxantrone(FCM)significantlyincreasestheresponserateandprolongssurvivalascomparedwithFCMaloneinpatientswithrelapsedandrefractoryfollicularandmantlecelllymphomas:resultsofaprospectiverandomizedstudyoftheGermanLow-GradeLymphomaStudyGroup.Blood,2004；104:3064-3071oFrancisco等人，Blood，2003年8月15日；102(4):1458_65。Frank等人，MethodsEnzymo1.154:221_249，1987。Gait，Μ.J.，OligonucleotideSynthesis.APracticalApproach.IRLPress，Oxford,UK(1984)。GoldenbergDM及SharkeyRM，Oncogene(2007)26，3734-3744.NovelradioIabeledantibodyconjugates。HainsworthJD.Prolongingremissionwithrituximabmaintenancetherapy.Semin0ncol2004；31:17-21。Hawkins等人，J.Mol.Biol.254:889_896，1992。Hayden及Mandecki·Genesynthesisbyserialcloningofoligonucleotides.DNA7(8):571-7，1988。HertzTiYanoverC:PepDist:Anewframeworkforprotein-peptidebindingpredictionbasedonlearningpeptidedistancefunctions.BMCBioinform(2006)7(il1刊1):S3-S17。HiddemannW等人，Frontlinetherapywithrituximabaddedtothecombinationofcyclophosphamide,doxorubicin,vincristine,andprednisone(CHOP)significantlyimprovestheoutcomeforpatientswithadvanced-stagefollicularlymphomacomparedwiththerapywithCHOPalone；resultsofaprospectiverandomizedstudyoftheGermanLo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示序列的可變輕鏈。12.權利要求1至11中任一項的抗體，其中所述抗體在Fc區有一或多個改變一或多種效應功能的突變。13.權利要求12的抗體，其中所述改變效應功能為增加抗體依賴性細胞介導的細胞毒活性。14.權利要求12或13的抗體，其中所述Fc區的一或多個突變是按KabatEU編號索引編號之位置332的單一取代。15.權利要求12或13的抗體，其中所述Fc區的一或多個突變是按KabatEU編號索引編號之位置239及332的取代的組合。16.權利要求12或13的抗體，其中所述Fc區的一或多個突變是按KabatEU編號索引編號之位置236及332的取代的組合。17.權利要求12或13的抗體，其中所述Fc區的一或多個突變是按KabatEU編號索引編號之位置236、239及332的取代的組合。18.權利要求14-17中任一項的抗體，其中所述取代為I332E、S239D及G236A。19.抗體，其與人⑶37結合且具有含胺基酸序列SEQIDNO:28的重鏈。20.權利要求19的抗體，其具有含胺基酸序列SEQIDNO30的輕鏈。21.抗體，其與人⑶37結合且具有含胺基酸序列SEQIDNO:36的重鏈。22.權利要求21的抗體，其具有含胺基酸序列SEQIDNO38的輕鏈。23.抗體，其與人⑶37結合且具有含胺基酸序列SEQIDNO:32的重鏈。24.權利要求23的抗體，其具有含胺基酸序列SEQIDNO34的輕鏈。25.抗體，其與人⑶37結合且具有含胺基酸序列SEQIDNO:40的重鏈。26.權利要求25的抗體，其具有含胺基酸序列SEQIDNO42的輕鏈。27.DNA分子，其包含編碼權利要求1至26中任一項的抗體的可變重鏈的區。28.權利要求27的DNA分子，其中該可變重鏈編碼區與編碼人類起源的恆定重鏈的區融合。29.權利要求28的DNA分子，其中該人類恆定重鏈為IgGl。30.權利要求29的DNA分子，其中該IgGl由SEQIDNO23所示序列編碼。31.權利要求28至30中任一項的DNA分子，其中該人類恆定重鏈在Fc區中具有一或多個按照權利要求14至18任一項所定義的取代。32.DNA分子，包含編碼權利要求1至26任一項的抗體的可變輕鏈的區。33.權利要求32的DNA分子，其中該可變輕鏈編碼區與編碼人類起源的恆定輕鏈的區融合。34.權利要求33的DNA分子，其中該恆定輕鏈為κ鏈。35.權利要求34的DNA分子，其中該κ輕鏈由SEQIDNO:25所示序列編碼。36.表達載體，其含有權利要求27至31中任一項的DNA分子及/或權利要求32至35中任一項的DNA分子。37.宿主細胞，其載運一或多個權利要求36的載體。38.權利要求37的宿主細胞，其載運含權利要求27至31中任一項的DNA分子的表達載體及含權利要求32至35中任一項的DNA分子的第二表達載體。39.權利要求37的宿主細胞，其為哺乳動物細胞。40.產生權利要求1至26中任一項的抗體的方法，包括以一或多個按權利要求36所述的載體轉染哺乳動物宿主細胞，培養該宿主細胞，及回收且純化抗體分子。41.藥用組合物，其包含一或多種按權利要求1至26中任一項所述的抗⑶37抗體分子作為活性成份，並包含可藥用載劑。42.權利要求41的藥用組合物，其進一步包含一或多種其它治療劑。43.權利要求42的藥用組合物，其中所述一或多種其它治療劑選自靶向除CD37以外的B細胞抗原的藥劑。44.權利要求43的藥用組合物，其中所述B細胞抗原為⑶20。45.權利要求42的藥用組合物，其中所述一或多種其它治療劑選自誘發細胞凋亡的藥劑。46.權利要求45的藥用組合物，其中該藥劑為TRAIL受體的調節劑。47.權利要求41至46中任一項的藥用組合物，其用於除去表面表達⑶37的B細胞。48.權利要求47的藥用組合物，其用於治療B細胞惡性腫瘤。49.權利要求48的藥用組合物，其中該B細胞惡性腫瘤選自B細胞非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkinslymphoma)、B細胞慢性淋巴細胞白血病及多發性骨髓瘤。50.權利要求47的藥用組合物，其用於治療病理學涉及B細胞的自身免疫病或炎性疾病。51.從一群細胞中去除表達CD37的B細胞的方法，其包含向該細胞群體投與權利要求1至26中任一項的抗體分子或含有該抗體分子的藥用組合物。52.權利要求51的方法，其在體外進行。53.治療B細胞惡性腫瘤患者的方法，所述B細胞惡性腫瘤選自B細胞非霍奇金氏淋巴瘤、B細胞慢性淋巴細胞白血病及多發性骨髓瘤，所述方法包括，對該患者施用有效量的按照權利要求41至46中任一項所述的藥用組合物。全文摘要嵌合及人源化抗CD37抗體及含其的藥用組合物可用於治療B細胞惡性腫瘤及病理學涉及B細胞之自身免疫病及炎性疾病。文檔編號A61K39/395GK101815725SQ200880102642公開日2010年8月25日申請日期2008年8月8日優先權日2007年8月9日發明者卡爾-海因茨·海德,埃林伯格·奧斯特曼,埃裡克·博格斯申請人:貝林格爾.英格海姆國際有限公司