作為HIV抑制劑的1-[2′,3′-二脫氧-3′C-(羥甲基)-β-D-赤型環戊二烯並呋喃糖基]胞...的製作方法

2023-10-19 15:31:27 1

專利名稱：：作為HIV抑制劑的1-[2′,3′-二脫氧-3′C-(羥甲基)-β-D-赤型環戊二烯並呋喃糖基]胞...的製作方法
技術領域：
：本發明涉及新的雙環四氫呋喃衍生物及其在治療逆轉錄病毒例如HIV，尤其是藥物逃避突變中的用途。
背景技術：
：不像其它fflV抗病毒藥，例如，在它們的給藥形式中的蛋白酶抑制劑或非核苷逆轉錄酶抑制劑、核苷逆轉錄酶抑制劑(NRTI)在藥理學上是無活性的，且需要經宿主細胞激酶的磷酸化作用產生活性三磷酸代謝物。該三磷酸形式類似天然存在的病毒逆轉錄酶的三磷酸脫氧核苷酸底物並為HIV-1RT結合和合併成病毒DNA而竟爭。批准用來治療HIV的所有NRTI和在專利或學術文獻中提出的其它所有NRTI中的大部分都在核苷的核糖部分上缺乏3'-羥基官能團。實例包括齊多夫定(AZT)、司他夫定(d4T)、拉米夫定(3TC)、扎西他濱(ddC)、阿巴卡韋(ABC)、去羥肌苷(ddl)和替諾福韋(TNF)(後者典型地作為disoproxil富馬酸鹽前藥給藥)。一經磷酸化作用，這類核普或核苷酸類似物經逆轉錄酶共價連結到新生DNA鏈中，但核苷或核苷酸中3'-羥基官能團的缺乏阻止其它核苷酸的進一步連接。因此，這些NRTI末端病毒DNA鏈延長，從而導致對HIV複製的抑制(Mitsuya等1990，JacobMolina等1993,Reardon1993)。當前所有抗逆轉錄病毒治療(ART)的基礎都採用NRTI。然而NRTI只能延緩fflV在血液中的繁殖，目前已經不能根治患者的HIV。HIV通過將其DNA插入涉及人免疫學記憶的潛伏的宿主細胞起作用。這種感染方式暗示，患者^L迫終生接受HIV抗病毒藥，以防止然而，因為RT前-和後-移位中間體是瞬時和短暫的，並不易於經實驗獲取，在2002年底前，這難以被理解。對RT移位理論的最新理解指出，RT催化的DNA聚合以圖3中所示的詳細的級聯方式發生，這採用自Sarafianos等(2003)。這些步驟是1)通過游離酶E定位3'-引物端的P位(引物位)與DNA底物結合。2)接近N位(dNTP位)的dNTP結合形成"開放的"三元複合物。3)經酶構象變化形成"封閉的"三元複合物。4)dNTP的3'-OH引物末端和ot磷酸間的磷酸二酯鍵形成伴隨著焦磷酸(PPi)的釋放，在N位形成前移位的RT複合物。5)通過形成後移位的複合物，引物末端從N位移位到P位，該複合物是下一個dNTP結合和繼續DNA合成的先決條件。如果DNA鏈終止劑核普(NRTI)三磷酸(典型地，在脫氧核糖部分上缺乏3'-羥基官能團的核苷類似物)被採用，它模擬其天然dNTP配對物並結合到RT。在類似的化學過程後，結合的NRTI在聚合的N位形成前移位複合物。由於在NRTI's脫氧核糖部分上缺乏3'-羥基引物，這終止了更多的DNA合成。相反，與TAM相關的RT突變採用與野生型RT不同的核苷酸結合機理。具體地，新機理導致釋放(切除)結合於引物末端的NRTI,取消NRTI的鏈終止活性。該新機理取決於前移位狀態(在N位)下的複合物的積聚和ATP或焦磷酸供體的有效性間的相互作用，這在感染部位，即正常淋巴細胞中通常是豐富的。ATP或焦磷酸通常不參與病毒DNA-聚合反應，表達涉及TAM前_和後_移位動力學類型間的平衡所產生的機理確保從引物末端到N位的自由通道，且還在結合NRTI鏈終止劑和釋放焦磷酸後同時在P位結合焦磷酸供體ATP。當此發生時，ATP(或焦磷酸)進攻連接結合結束治療後的HIV效價反彈。然而，事實上，對給定患者的特定HIV藥物的有效給藥期受到出現的"逃避突變體"出現的顯著限制。逃避突變體是包含不連續的突變簇的病毒，它產生耐藥性並使其在藥物的存在下增殖。由於患者攝入的特定抗病毒藥的選擇性壓力，逃避突變體出現在患者中。因而，藥物的有效給藥期取決於逃避突變體的出現和增殖有多快。在一貫開出HIV抗病毒藥處方的國家中，HIV新病例的原發感染往往不帶有野生型mv,而帶有已經部分或以多種方式抵抗目前的抗病毒藥的mv毒林，這正變得越來越明顯。換句話說，在受感染患者中原位產生的逃避突變體也可通過橫向或垂直傳播被傳播給初次感染的患者。這依次表明，即使以其它方式被分類為初次治療的某些患者，也已經感染對常規一線治療抵抗的病毒。多種因素歸因於藥物逃避突變體的選擇，包括總HIV池大小、RT加工能力和病毒基因複製的失真、病毒適應性和靶細胞的多種有效性。到二十世紀九十年代後期，來自基於齊多夫定(AZT)或司他夫定(d4T)的長期聯合使用的證據表明，RT中的特定突變簇始終在產生。這些突變簇是目前稱為胸苷類似物突變(TAMs)的原型。TAMs的存在增加進一步選擇突變的可能性，並導致不明顯屬於胸苷類似物家族的更高級的NRTI抗性表型的發展。這類表型目前被稱為核苷類似物突變(NAM)和多重耐藥性(MDR)HIV。AZT是一皮廣泛採用的第一種抗逆轉錄病毒藥，並不令人驚訝地首先產生逃避突變體(Larder等，1989)。然而，由於遍及典型患者分離林的HIV基因組的大量突變，採用帶有特定TAM的重組RT酶不可能在體外產生耐藥性表型。因而，並未明確闡明TAM賦予耐藥性的機理。焦磷酸供體已經使對TAM耐藥性背後的機理的各種假想模型和理論預言基於對親核進攻的參與(Boyer等，2002和Meyer等，2002)。RT移位理論大概是理解涉及TAM的耐藥性機理的關鍵步驟。在DNA末端的NRTI的磷酸二酯鍵，導致經焦磷酸解(pyrophosphorolysis)除去NRTI。當焦磷酸供體是ATP時，NRTI作為二核苷四磷酸產物被釋放。圖4圖示在AZT-終止的DNA中的這種"引物拯救"(採自ClinicCareOptionsTM)。目前認為，兩種不同的^U裡涉及到NRTI的表型耐藥性(Sluis-Cremer等，2000)。第一種，稱為"引物拯救"活性，以上剛剛被描述。這裡，鏈末端核苷酸經ATP依賴的或焦磷酸依賴的焦磷酸解作用從引物末端的3'端除去。然而，存在稱為"有區別的突變體"的另一簇耐藥性表型。這些突變體具有伴隨增強的區別NRTI和天然dNTP的能力的RT。這種情況下，該機理產生能優先選擇正確底物(即天然dNTP)的RT，從而避免經NRTI的鏈終止並確保病毒基因組的繁殖。逆轉錄病毒，例如HIV，具有快速的遺傳差異性能力。這是一個有力的無效過程，但它給與有機體明確的適應優勢。當有機體處於選擇壓力下，HIV所採用的複製機制特別易出錯誤，產生大量突變並有可能導致突變積聚。一般說來，病毒複製所產生的大量突變生成更少活力的酶。這裡，第二種且尤其是第三種突變的積聚的可能性更小，因為第二個突變必須積聚於其中的更少活力的突變體的群體池會被更快繁殖的野生型有機體稀釋。通過兩種可能的途徑可產生和發展更加有活力的病毒突變體。第一種途徑出現在快速產生高度耐藥性變異的時候，該變異已經存在於整個病毒群體中。最頻繁地，這是給予對選擇性壓力的表型耐藥性的單點突變。在藥物逃避突變的上下文中，實例包括被非核普逆轉錄酶抑制劑奈韋拉平快速介導的K103。第二種途徑出現於在選擇性壓力存在下出現連續的病毒複製的時候。這產生隨後可發展的累積的突變積聚。在這種情況下，突變積聚的可能性涉及正在出現的病毒複製量。即，會出現更高的病毒負荷(例如，〉200,000個拷貝/ml)、雙重突變的積聚。然而，三重突變的積聚是很少的，只可能因為典型地涉及幾種不同的藥物的複合治療方案而出現，這對患者的堅持是個挑戰。因此，即使是勤勉的患者要確保所有活性成分在每天"24小時低谷(trough)水平"的全部24小時期間以超過必需抑制濃度的水平存在於血液中也是極為困難的。這裡，由於一種或多種藥物的給藥/24小時低谷水平的疏忽，臨時除去藥物治療的任一種選擇性壓力會產生無法控制的病毒複製，從而產生和確立許多新的突變體。當一旦再次施加選擇性壓力(即恢復複合藥物治療)時，已經積聚了產生更好耐藥性的另一個點突變的幾個突變體可以類似於第一種途徑(參見上文)中所見到的方式發展。以上討論集中於與例如，缺失或添加突變相對的點突變的積聚。然而，這裡可適用類似於對三重突變所描述的^t式。即，大部分缺失/添加突變最初涉及單一核苷酸。這具有完全改變編碼蛋白的下遊胺基酸序列的作用，如果該變化發生在編碼區域內並產生被截短的和/或失活的蛋白。為通過缺失或添加一種單一胺基酸保持閱讀框並改變最終蛋白，必須缺失/添加三種核苷酸。既然失活的酶降低HIV有機體活力，尤其是，如果受影響的酶是RT,缺失/添加本身不會積聚，但必須同時出現。換句話說，三重突變的等同物必須出現在單一事件中，這是極為罕見的(參見Boyer等(2004)JVirol78(18):9987-9997,其通過全文引用結合到本文中)。作為三重突變體積聚/引入的過程的結果，並非直到較近期才確定，HIV病毒在RT中表現出的三種突變，其特別地對多種藥物產生有效的耐藥性。例如，在美國，正是在1992年FDA批准了使用聯合藥物治療(ddC和AZT)。同樣直到1995年9月，臨床試驗才表明，AZT與ddC或ddl的聯合治療比單獨的AZT更加有效。採用多種藥物只是釆用聯合治療的結果，但在劑量方案方面，實際上不能保證各種藥物的充分的24小時低谷水平，該結果已經產生目前西方世界已知的特別有問題的多重耐藥性HIV病毒林。最初描述的TAM引物拯救突變體包括在RT的胺基酸位M41L、D67N、K70R、L210W、T215Y/F和K219Q/E的一組六種藥物耐藥表型中的各種排列(Larder和Kemp,1989,Schinazi等，2000)。早期資料指出發展多種TAM引物拯救突變體的兩種特殊的突變途徑，二者通過未知因素出現。第一種途徑導致在密碼子210(210W)的胺基酸取代並優先與在密碼子41(41L;大於98%)和215(215Y;大於94%)的突變及在密碼子67(67N)的取代相關。第二種途徑在密碼子219(219K/E)產生突變，這優先與在密碼子67(67N)和70(70R)的突變相關(Yahi等，1999)。因此，有兩種表型模式(1)L21OW,M41L,T215Y/F,士D67N，其給予對AZT和d4T的高水平的病毒耐藥性和(2)K219K/E,D67N,K70R，其給予對AZT和d4T的中等水平的病毒耐藥性。Marcelin等(2004)總結病毒學失敗患者的涉及TAM引物拯救的突變的普遍性。這裡，研究1098RT序列，得到如圖1和圖2中所示的兩種基因模式。雖然在治療前可能已經表現出不同的遺傳背景，但與個體的藥理學差異相結合時，所採取的抗逆轉錄病毒治療的順序和組合物不僅對AZT和d4T也對其它NRTI產生病毒耐藥性。取決於所出現的突變方式，耐藥性包括阿巴卡韋(ABC)、去羥肌苷(ddl)、替諾福韋(TNF)、拉米夫定PTC)、恩曲他濱(FTC)和扎西他濱(ddC)。因此，引物拯救相關TAM的出現往往在進一步發展更顯著的耐藥HIV基因型模式方面起重要作用。從而，預防多種核苷抗性的一個步驟是開發帶有避免引物拯救相關TAM積聚的目的的新NRTI。引物拯救相關TAM突變可伴隨著典型地出現於抗逆轉錄病毒聯合治療(另稱為合劑(cocktai)治療)的其它家族的逃避突變體的發展。如今，合劑"可比韋(combivir)"(AZT+3TC)一皮最頻繁地使用，並被推薦為治療未接受過治療的HIV患者的第一線的治療方案。然而，它產生對這兩種藥物抵抗的逃避突變體。例如，Miller等(1998)報導，具有M184V突變的耐3TC的病毒僅在AZT+3TC聯合治療開始的4-12周被選擇。額外的與AZT相關的突變及時地逐漸出現，產生特有的M184V、M41L、D67N、K70R、L210W、T215Y/F和K219Q/E的基因型模式，其目前通常發現於經過治療的患者中。所報導的在RT的H208、R211和L214位(Sturmer等，2003)和在G333位(Kemp等，1998)的其它突變涉及AZT-3TC雙重耐藥性，尤其是，使抗AZT的能力增加。因此，引物拯救相關TAM的前後基因型已經被擴展到包括在M184V,M41L,D67N,K70R，H208Y,L210W,R211K,L214F,T215Y/F,K219Q/E和G333E內的排列。在接受過治療的患者中通常見到的其它類型的突變是V1181和E44D/A。這些突變與先前暴露於ddl和d4T極為相關。此外，它們往往與包括M41L加T215Y/F或D67N加L210W的特定TAM簇的出現相關。結果是，引物拯救相關TAM對胸苷類似物家族的耐藥性增加以及在對AZT+3TC的雙重耐藥性方面的特殊作用(Montes等，2002,Girouard等，2003)。作為治療過程中所採用的一些NRTI的功能，藥物逃避突變體的流行增加，並形成包含在M41L、E44D/A、D67N、K70R、V118I、M184V、H208Y、L210W、R211K、L214F、T215Y/F、K219Q/E和G333E內的各種排列的擴展的TAM或NAM譜。該簇對含有AZT和d4T的聯合治療也往往是難醫治的，並對整個NRTI類交叉耐藥。在往往與伴隨TAM的T69G的胺基酸取代相關的RT指狀區中，在位置67(a67)具有胺基酸缺失的逃避突變體中也發現對抗胸苷類似物，特別是AZT、d4T和TNF的顯著抗性(參見Imamichi等2000和2001)。議與特定基因型相關的增強的RT聚合活性糹皮認為導致更加有效的焦磷酸解作用依賴的引物切除(上文已敘述)，引起增加的耐藥性。Boyer等，(2004)也已經注意到伴隨著TAM的a67產生增加的能力，與單獨TAM相比，促進引物拯救(切除)病毒對AZT和TNF的耐藥性。HIV正隨抗逆轉錄病毒治療發展而共同進化。當雙重和三重核苷類似物合劑被用於HIV的臨床治療，尤其是在治療初次接受治療的患者時，新的突變表型出現。需要在一天內攝取多種藥物，有些與食物一起，有些不與食物一起的複合治療方案對患者是個挑戰。主要由於獲得NAM或MDR的病毒，不能嚴格遵守這些劑量方案導致24小時低谷的失敗已經促使多種耐NRTI的HIV病毒的出現。例如，多個團體(例如，Mas等，2000)已經注意到與AZT使用有關的突變體T69S-XX病毒的出現。這種突變體在核酸給定的胺基酸69和70之間的其RT的編碼區域中具有6-bp插入。所生成的雙胺基酸插入複合物(典型地SS、SG或AG插入)不僅導致病毒對AZT的耐藥性，而且還對包括d4T,3TC,ddl，ddC和ABC的NRTI,以及TNF的幾乎全部集合的耐藥性。伴隨T69S+雙胺基酸插入物，尤其是在TAM的存在下，可見到增強的焦磷酸解作用依賴的引物拯救。這種現象典型地與"M41L/T215Y"或"M41L/L210W/R211K/L214F/T215Y"耐藥表型相關，且在多種核普抗性方面起到重要的表型作用(Meyer等，2003)。另一類MDR具有在密碼子Q151M處的胺基酸取代。以相對低的頻率在臨床上觀察到這種突變，且它往往與A62V、V"I、F"L和F116Y的繼發突變一起出現。然而，它對幾乎整個類型的NRTI產生顯著抗性。此外，已經觀察到與TAM,典型地"M41L、L210W和T215Y/F"或"D67N、K70R和K219K/E"基因型相關。它出現於經歷過用AZT/ddl和AZT/ddC聯合方案的過度治療的患者。L74V最常為ddl單一治療所選擇(Martin等，1993)並表現出對ABC和3TC的交叉耐藥性。它對產生病毒逃避的作用取決於其它突變的出現。耐藥性研究表明，L74V的頻繁性顯著與典型地在M41L、U10W和T215Y/F背景中的TAM相關(Marcelin等，2004),即使L74V突變被認為對病毒複製產生減少作用並使含有大量TAM的耐AZT病毒敏感(St.Clair等，1991)。HIV-1RT中的L74V和M184V突變組合是與對ABC和ddl的抵抗有關的最頻繁方式(Harrigan等，2000和Miller等，2000)。儘管高水平的對ABC的抗性典型地需要包含K65R、L74V、Y115F和M184V的多種突變，但單一的突變，M184V常常首先出現。這種突變，目前公認為藥物逃避耐藥性判別機理中的關鍵突變，使對ABC的敏感性適當減少(Tisdale等，1997)。全部562位患者隨機接受帶有ABC或ddl的AZT和3TC的CNA3005研究表明，攜帶AZT和3TC加ABC分支(arm)中的TAM的患者比例緩慢卻穩定增加。48周後，至多56%的患者具有超過和超出快速介導的M184V突變(Melby等，2001)的至少一種引物拯救相關TAM(1xTAM)，說明預防引物拯救相關耐藥性出現的重要性。同樣地，在3TC選擇性壓力下，攜帶基因型模式67、70、215和219的抗AZT病毒的體外通道導致M184V突變的選擇和賦予對ABC的交叉耐藥性(Tisdale等，1997》這再次強調這個概念處理預先存在的引物拯救相關TAM和預防引物拯救相關突變體的積聚是避免多種核苷耐藥性發展的關鍵步驟。已經更加清楚，K65R以極高的的比例快速出現於正接受TNF或ABC治療的患者中。Valer等(2004)報導，在他們馬德裡醫院中，K65R普遍從1997-2000年間的<1%增加到2003年的7%和2004年前4個月的12%。在與對ABC、3TC、ddl和ddC的減少的敏感性相關的其它突變存在下，K65R突變體的作用被加強(Parikh等，2003)。目前同時出現的引物拯救相關TAM基因型的K65R,雖然很少出現,但其對TNF的引物拯救(切除)的影響比對AZT的更加深遠(Naeger等，2001)。據報導，TNF是抗攜帶至多3xTAM的HIV-l活性的，除非TAM簇包括M41L或L210W突變。目前，仍不清楚TAM能夠逆轉K65R的部分影響的原因，這另外被認為阻止了涉及對TNF和ABC的敏感性的引物切除突變體。最終，T69D突變最初因其引起ddC耐藥性而被鑑別。已經報導，當它出現在與T215Y突變和引物拯救相關TAM基因型的其它突變組合中時，與對ddl的減少的響應相關。多年來，WHO和DHHS(美國健康和人類健康服務部)已經為治療從未接受過治療的患者推薦一線抗逆轉錄病毒療法，包括與3TC加奈韋拉平或依法韋侖一起以d4T或AZT給藥(GuidelinesfortheUseofAntiviralRetroviralAgentsinHIV-1-InfectedAdultsandAdolescents,2003年7月14日和2004年3月23日)。然而，大部分HIV感染的患者在他們的初次高活性抗逆轉錄病毒治療(HAART)方案中經歷過治療失敗，表明這些患者已經感染藥物逃避病毒。引物拯救相關TAM耐藥性突變體繼續在耐藥性的發展方面起關鍵作用。因此，抵制引物拯救相關TAM耐藥性突變體作用的藥物或治療方法的開發能加強或延長治療從未接受過治療的患者的現有NRTI的使用，並還能用來治療搶救治療中攜帶引物拯救相關耐藥性突變體的HIV感染的人群。資嚴*^7#參炎^丈謬的秀參才,主要因為目前的治療方案，引物拯救和有區別的突變往往同時出現在相同突變體基因型中。M184V突變是不同的突變體家族的代表。然而，如果它與引物拯救相關突變體，例如，M41L、D67N、K70R、L210W、T215Y/F和K219Q/E—起出現，它起到對AZT和3TC的雙重耐藥性作用(Miller等，1998)。這些引物拯救和不同的耐藥性表型似乎與RT中不同簇的突變相關。例如，涉及AZT的突變包括在M41L、E44D/A、D67N、K70R、VI181、M184V、H208Y、L210W、R211K、L214F、T215Y/F、K219Q/E和G333E之內的各種排列，帶6-bp插入物和A67的MDRT69S突變典型地表現出引物拯救突變體活性。另一方面，在65、74、89、151和184位的突變產生區別NRTI和各dNTP配對物的能力，或者它們可涉及《1物4莫板複合物的復位(repositioning)。在最近的文章"Designinganti-AIDSdrugstargetingthemajormechanismofHIV-1RTresistancetonucleosideanalogdrugs"(IJBCB36(2004)1706-1715，其通過全文引用結合到本文中)中，Sarafianos等推斷，引物拯救(切除)機理只能出現在N位的RT移位之前，並進一步推斷，它已成為NRTI耐藥性性的主要機理。在標題為"StrategiesforInhibitionoftheExcisionReaction"(參見1711頁)的章節中，他們提出戰勝這種耐藥性機理的三種途徑1.採用大概通過在或接近ATP-結合位點的結合，幹擾ATP的生產的結合(在P位)的新的抗病毒藥，從而阻斷切除反應，而不影響DNA合成的向前反應。2.採用能阻斷DNA合成但以某種方式抵抗切除的化合物，例如，現有NRTI的硼代(borano)或硫代取代的a磷酸變體。同樣地，可按非切除方式設計現有NRTI的變體以復位延長的/終止的才莫板/引物，3TC介導的M184I/V突變體的差的切除能力暗示這一點。3.採用基於二核苷酸四磷酸的抑制劑，提供在N和P位的雙配位基的結合。針對NRTI耐藥性的預防引物拯救機理所提出的三種途徑的每一種都因各種理論缺陷公開受到批評。例如，在第一種途徑中，對正常的RT功能，ATP結合併非必需的。因此，基於通過竟爭或阻止抑制ATP或焦磷酸結合的對策不會預防耐藥性發展，因為潛在的病毒的適應性將不會受這類藥物的損害。換句話說，耐藥性突變完全不以進化代價出現。出現在正常淋巴細胞中的大量ATP也挑戰該途徑背後的基本原理。在提出的第二個途徑中，硼代或^^代取代的a磷酸類似物似乎可能會選擇已經發現帶有3TC和FTC的區別的耐藥突變體，和產生HIV耐藥性突變體。所提出第三個途徑受到進入大和高注入的四磷酸二核苷酸類的靶細胞的藥動學攝取的需要的限制。這對製藥和藥物傳遞是個嚴重的挑戰。值得關注的是，Serafaniano的各個途徑(包括本身不抗病毒，但卻預示常規NRTI的共同給藥的途徑l)是以目前產生的NRTI的變體為基礎的。即是說，該化合物缺乏3-羥基官能團並因而起到專性鏈終止劑作用。作為與上文討論的"標準"NRTI(即缺乏3'-羥基官能團的那些)的對照，Ohrm等(JMedChem(2000)43,4516-4525,其通過全文引用結合到本文中)描述了4'-C-乙炔基HIV抑制劑這些化合物保留3'-羥基官能團，卻仍表現出抗HIV-1活性，包括抗攜帶A62V、V75L、F77L、Fl16Y和Q151M突變的典型的不同的MDR株的活性。假定作用機理經過對核苷磷酸化激酶的親合。然而，還觀察到，由於這些化合物的新戊基醇特性和鄰近順4'取代基的嚴重位阻，它們可起到DNA鏈終止劑的作用，這導致3'-羥基的反應性急劇下降。Kodama等(AntimicrobAgentsChemother(2001)1539-1546，其通過全文引用結合到本文中)描述攜帶接近所保留的3'-羥基官能團的4'-C-乙炔基的極為類似的一批化合物，它們在細胞培養基中用另外的HIV耐藥抹試驗。由於Kodama等沒有製備他們的化合物的三磷鹽，他們不能說明作用機理，但從各種依照情況的觀察，推斷這些化合物實際上起到NRTI的作用。Kodama等稍後報導(摘要388-T,20039thConferenceonRetrovirusesandOpportunisticInfections,其通過全文引用結合到本文中)，在它們的體外4-C-乙炔基核苷的選擇性壓力下，發現突破攜帶定位於RT催化位的T165I和M184V突變的耐藥嚴重的交叉耐藥性。因而暗示空間衝突阻斷4-C-乙炔基核香結合。這已被3TC抑制機理所確定並因而幾乎必然地表現不同的耐藥機理。因此，在確定突變體促進引物拯救(ATP或焦磷酸介導的切除)方面，Kodama的化合物似乎不可能提供指導。Chen等(Biochemistry(1993)32:6000-6002,其通過全文引用結合到本文中)對在4'攜帶疊氮基的結構上相關的系列化合物進行廣泛的機械論研究formulaseeoriginaldocumentpage17Chen論證RT有效地結合兩個連續的4'-疊氮基胸苷一磷酸核苷酸，其末端鏈延長。此外，RT也能結合第一個4'-疊氮基胸苷一磷酸，隨後是天然dNTP，然後是第二個4'-疊氮基胸普核普酸，這也導致鏈終止。注意到，這兩種都導致4'-疊氮基胸苷一磷酸存在於終止的DNA引物末端，這使人容易想到目前的NRTI的抑制機理。細胞的(即，非病毒)聚合酶a和|3各能結合單一4'-疊氮基核苷酸也是顯然的。但不是第二個進入宿主DNA的初生鏈。然後這些細胞聚合酶用其它天然dNTP使宿主DNA鏈延長，並這樣永久地使NRTI核苷酸結合進宿主DNA基因中。因為非天然核苷酸與細胞酶的錯參已經清楚暗示致癌作用，所以沒有追蹤人的這些化合物。同樣地，Kodama相應的4'-C-乙炔基化合物的製藥開發被終止，照其說法是由於對高級有機體的嚴重毒性。EP341911描述具有下式的3'-C-羥甲基核苷的大家族，式III並提出它們的不僅主要抗皰滲病毒，例如CMV,還抗逆轉錄病毒的用途。WO92/06201也公開類似的一組化合物和適應症。US5,612,319(其通過全文引用結合到本文中)公開抗野生型HIV-l鵬和HIV感染的急性稱猴^t型中的猿猴同等物SIV-1的2'-3'二脫氧-3'-C-羥甲基胞嘧啶的逆轉錄病毒活性。該出版物建議用該化合物作用暴露後的預防藥物，尤其是防針刺損傷。暴露後預防意味著立即以活性成分向人們，例如，已經用fflV潛在感染的注射器無意刺到他們自己的醫療人員給藥。為了確保快速治療受可理解驚擾的健康護理專業人員，優選的給藥途徑是，例如，用作化學和生物戰的抗菌藥的自我給藥的裝有彈簧的注射器。暴露後預防的意圖是預防感染以保護自身安全，而不是治療正在進行的感染。因此，打算用極高劑量的化合物進行短期，例如，24-48小時的治療。該出版物指出，由於給藥的不連續時間期間，瞬時毒性是可以接受的，因為人們正試圖預防不能治癒的疾病。描述於US5，612,319的暴露後預防方法從未有人試驗過-事實上據我們所知，2'-3'二脫氧-3'-C-羥甲基胞嘧啶還完全沒對人給藥。在1994年，當提交被授權的US5,612,319的申請時，如今已知的多重耐藥性HIV還沒有以任何令人信服的方式出現。今天的多重耐藥性HIV具有經多年NRTI治療的選擇性壓力所介導的和積聚自這種壓力的引物拯救突變。換句話說，存在於這些專利被授權期間的HIV和尤其是RT在結構和機械學上與現今的病毒極為不同。在本申請的優先權日未出版的國際專利申請PCT/EP2005/057196,公開2',3'-二脫氧-3'-羥甲基胞嘧啶及其前藥在治療HIV逃避突變體方面的用途。據認為，2',3'-二脫氧-3'-C-羥甲基胞嘧啶被細胞酶磷酸化為相應的5'-三磷酸。多重耐藥性HIV的嚴重突變的RT，尤其是引物拯救相關突變體RT，將該三磷酸作為5'-(2',3'-二脫氧-3'-C-羥甲基胞嘧啶)鏈中。常規NRTI起到專性鏈終止劑的作用，終止N位的DNA合成，並因而對只有多重耐藥性HIV才有的上迷ATP-或焦磷酸介導的引物拯救(切除)機理敏感。相反，5'-(2'-3'-二脫氧-3'-C-鞋甲基胞嗜咬)一磷酸不起專性鏈終止劑作用，而是使另外的殘基共價連接到5'-(2',3'-二脫氧-3'-C-羥甲基胞嘧啶)一磷酸的3'羥甲基官能團上。於是這促進RT經歷必需的轉變，將自身移位入下一輪聚合的P位。初步的證據表明，所連的這種末端殘基是天然核苷酸而不是另外的5'-(2',3'-二脫氧-3'-C-羥甲基胞嘧啶)一磷酸。重要地，資料表明，最後結合的非2'3'-二脫氧-3'-C-羥曱基胞嘧啶核苷酸不適於通過突變的逆轉錄酶進一步加入核苷酸中。即，鏈終止似乎產生本發明的NRTI之外而不是在NRTI上的一種4C此外，根據2'，3'-二脫氧-3'-輕甲基胞嘧啶的結合，RT表現出成功地移位到P位，以接受下一個引入的核苷酸。該證據表明，與引物拯救相關突變的RT結合的2',3'-二脫氧-3'-羥甲基胞嘧啶，實現不適於ATP-或焦磷酸介導的切除的鏈終止形式。因而，2',3'-二脫氧-3'-羥甲基胞嘧啶帶來對當前藥物方案不響應的HIV感染的有效治療。因此，以上剛剛討論的抑制機理從根本上不同於Chen等(見上)的4'-取代核苷的鏈終止機理，鏈終止機理允許依照結合的4-取代的化合物結合幾種核苷酸。首先，Chen機理大大增加了"通讀"風險。即，DNA聚合酶繼續遵循編碼鏈和繼續將編碼殘基加到正常終止密碼子中，從而在DNA鏈中錯誤摻入不正常核苷。然而，既然通讀構成物可能仍然是可行的，而不管錯參的4'-取代核苷，當病毒DNA鏈通過病毒聚合酶(即RT)構成時，可能失去抗病毒功效。更重要地，如果4'-取代核苷^L細胞(即宿主)聚合酶通讀，如Chen描述的那樣，其後所生成的構成物代表致畸物(teratogen)並大大增加細胞損傷和癌症的風險。Chen的化合物又需要加入第二個4'-取代核苷酸，或者直接鄰近於第一個錯參的4'-取代核苷酸(即，X-X)或被一種天然核普酸插入(interspersed)(即，X-N-X)。實際上，這意味著，在引物末端的最後位置的核苷酸是非天然的(即，藥物)核苷酸。這種情況類似於典型的NRTI(即，缺乏3-羥基的那些)鏈終止的情況。這裡，如上所述的那樣，NRTI核苷酸也存在於引物末端的最後位置，其中它對ATP或焦磷酸介導的切除敏感。為了起到有效RT抑制劑的作用，需要多個單元的Chen的4'-取代核苷酸。因而，該藥物的效果取決於閱讀鏈的序列。例如，如果Chen的化合物是胸苦類似物，如果閱讀鏈具有AA或A-N-A序列，那麼它會具有最好的親合性。這裡，該藥物會有效和收效地終止DNA合成。但如果閱讀鏈的序列不含有AA或A-N-A序列的大量表達(recitals)，則Chen的藥物更少可能以給定的濃度終止DNA合成。既然在基因組中，AA雙重或A-N-A三重遠較單重A罕見，Chen的藥物就會遠比不具有多個單元需求的其它NRTI更無效。Mauldin等J5Zoorga剛'cawc/AfWc/wa/C77e/m'欲y19986:577-585公開許多2',3'-二脫氧-3'-羥甲基胞嘧啶前藥。特別關注的是事實:作者發現，在他們的幾乎全部實驗中，涉及在醇位的取代基的前藥導致抗病毒活性的下降。本發明的目標是，提供用於治療HIV，尤其是治療HIV逃避突變體的2',3'-二脫氧-3'-輕曱基胞嘧啶的新的前藥。發明簡述根據本發明的第一方面，提供具有式I的新的化合物及其藥學上可接受的鹽其中R獨立為H、-OR3、-NHR4;C廣C4烷基；或者，當n是2時，相鄰的R'—起限定烯鍵；R2是H;或當偕位R1是C廣Q烷基時，R2也可為d-C4烷基；或當偕位R1是-OR3時，RZ也可為-C(-0)OH或其藥學上可接受的酯；R"蟲立為H，或其藥學上可接受的酯；R"獨立為H，或其藥學上可接受的酖胺；RS是H、-C(=0)R7，或醯胺-鍵接的L-胺基酸殘基；R6是H;或R5和R6—起限定亞胺=018118';R7是C廣Q烷基、QrC3烷基環基；R8和R8'獨立為H、CVQ烷基、C。-C3烷基環基；或R8是H和R8'是-NR9R9';R9和R9'獨立為H、C廣C6烷基、C。-C3烷基環基；或119和119與它們所連的N原子一起限定飽和5或6元環；n是l,2或3。根據本發明的一個實施方案，n是l和該化合物具有通式本實施方案中W:R2的優選變量包括H:H、H:OH或其藥學上可4矣受的酯和Me:Me。該實施方案的特別優選的變量的115和116為H。本發明的一個供選擇的實施方案的n=2，從而產生下列通式的化合物:在該實施方案中，R'a:R'b:R^:R、的優選的變量包括H:H:H:HH:H.H:OH或其藥學上可接受的酯H:H:H:NH2，或其藥學上可接受的醯胺H:OH或其藥學上可接受的酯H:HH:NH2，或其藥學上可接受的醯胺H:HMe:Me:H:HH:H:Me:MeH:OH:H:OHH:C=C:H該實施方案特別優選的115和116變量為H。具有下列通式的本發明的又一個實施方案的n等於3:formulaseeoriginaldocumentpage22R!a:R2a:R2a:R2b:R^c:R2c的優選變量包括H:H:H:H:H:HH:H:Me:Me:H:HH:H:OH:H:H:HH:H:OH:COOH:H:HH:H:H:H:H:NH2或其藥學上可接受的酯或醯胺。該實施方案特別優選的R5和RS變量為H。本發明的某些實施方案具有修飾的鹼，即115和/或W不是氪。一個這樣的實施方案是亞胺，其中RS和I^一起定義為亞胺二CR8118。R8和RS'典型地各自為相同的烷基，但不對稱的RVRS'變量也在本發明的範圍內。該實施方案中的代表性亞胺包括=CHN(CH3)2=CHN(,pr)2=CHN(pr)2作為選擇，RS和RS'可一起限定環狀基團，例如，吡咯烷、哌啶、哌。秦、N-甲基哌。秦或嗎啉，因而典型的亞胺包括=CHN(CH2)4=CHN(CH2)5=CHN(CH2)6=CHN(CH2CH2)20普遍優選，RS和I^是H。其中RS和RS不是H的本發明其它實施方案包括醯胺，例如，L-胺基酸醯胺，例如，lle、Val、Leu或Phe醯胺。作為選擇的醯胺包括烷基醯胺例如，CVQ烷基醯胺，例如，其中RS是C(-0)CHrC^O)CH2CH3或C(0)C(CH3)3的那些醯胺。其它醯胺包括C(=0)Qr。3烷基芳基醯胺，例如，C(=0)Ph或C(=0)Bz。通常優選的實施方案包括式I化合物，所述化合物指2-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-l-基)-八氫-l,5,10-三氧雜環戊二烯並-環癸烯-6,9-二酮；或2-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-l-基)-八氫-l,5,ll-三氧雜-環戊二烯並環十一碳烯-6,10-二酮；或其藥學上可接受的鹽。一經體內水解，這些化合物釋^:無毒副產物，例如，琥珀酸或戊二酸。儘管不希望囿於理論，但仍認為本發明的化合物或其活性代謝物具有抑制逆轉錄病毒，例如，HIV-1、HIV-2、HTLV和SIV的逆轉錄酶的活性。因此，本發明另一方面提供人或動物的逆轉錄病毒感染的預防或治療方法，包括給予式I化合物或其藥學上可接受的鹽。典型的給藥是口服。本發明的又一方面提供式I化合物或其藥學上可接受的鹽在治療或預防人或動物的逆轉錄病毒感染的藥物的製備方面的用途。該藥物一般呈適於口服的形式。本發明的另一實施方案提供抑制HIV引物拯救突變體出現或傳播的方法，該突變體能夠除去結合到HIV引物/4莫板複合物的鏈終止NRTI核苦酸，其中的除去受到ATP依賴的或焦磷酸依賴的切除機理的影響。該方法包括同時或相繼給予感染HIV的個體有效量的本發明化合物和至少一種誘發引物拯救突變體的鏈終止劑NRTI。常規的NRTI起到專性的鏈終止劑的作用，終止N位的DNA合成，並因而對只有多重耐藥性HIV才有的上述ATP-或焦磷酸介導的引物拯救(切除)機理敏感。相反，初步證據表明，本發明化合物未起到專性鏈終止劑的作用，而是使另外的殘基共價連至5'-(2',3'-二脫氧-3'-C-羥甲基胞嘧啶)一磷酸的3'羥甲基官能團上。這因而促進RT經過必需的轉變，為下一輪聚合而自身移位進入P位。基於下述模板的序列的初步證據表明，該所附末端殘基是天然核苷酸。通常能被治療或預防的根據本發明的多重耐藥性HIV典型地具有攜帶包含下列之一的基因模式的RT(a)M41,±D67,L210和T215;(b)D67,K70和K219;(c)T69S-XX或(d)A67其中XX表示加到RT序列中的任何兩個天然胺基酸和A67表示在密碼子67的胺基酸缺失。儘管以上4個基因模式被認為表示切除藥物逃避表型的必要基和其它地方的額外的突變，在RT基因中往往有至少三種突變。一般，但不排他地，簇M41、±D67、L210和T215往往會包含M41L、士D67N、L210W和T215Y或T215F。任選地，上述各簇可進一步包括在位置E44、K70、V118、H208、R211K、L214、K219或G333的至少一處的額外突變。上述各簇可進一步包含在位置A67、T69、E203、L210、D218、H221、D223或L228的至少一處的額外突變。一般，但不排他地，簇D67、K70和K219包含D67N、K70R和K219Q或K219E。任選地，簇D67、K70和K219可進一步包括在位置M41、E44、V118、H208、L210、R211K、L214、T215或G333的至少一處的額外突變。此外，蔟D67、K70和K219任選進一步包括在位置A67、T69、E203、L210、D218、H221、D223或L228的至少一處的額外突變。一般，但不排他地，簇T69S-XX可進一步包括在位置M41、E44、D67、K70、V118、H208、L210、R211K、L214、T215、K219或G333的至少一處的額外突變。任選地，簇T69S-XX可進一步包括在位置、T69、E203、L210、D218、H221、D223或L228的至少一處的額外突變。一般，但不排他地，簇A67可進一步包括在位置M41、E44、D67、K70、V118、H208、L210、R211K、L214、T215、K219或G333的至少一處的額外突變。任選地，簇A67可進一步包括在位置T69、T69S+XX、E203、L210、D218、H221、D223或L228的至少一處的額外突變。任選地，逆轉錄酶可進一步攜帶在位置K65、L74、M184或Q151,尤其是K65R、L74V或M184V或Q151M的至少一處的有區別的突變。典型地，不同的突變體的簇可在位置A62、V75、F77、Y115或F116與至少一個額外的突變相連。能被本發明處理的HIV林是多重耐藥性HIV林，它們的RT具有促進鏈終止NRTI核苷酸的ATP-或焦磷酸-介導的引物拯救(切除)的突變，這種突變出現在以前曾用選自以下的至少一種抗病毒藥治療HIV的患者中齊多夫定(AZT、ZDV)、司他夫定(d4T)、扎西他濱(ddC)、去羥肌苷(ddl)、阿巴卡韋、(ABC)、拉米夫定(3TC)、恩曲他濱(FTC)、阿德福韋(ADV)、恩替卡韋(BMS200475)、阿洛夫定(FLT)、替諾福韋disoproxil富馬酸鹽(TNF)、amdoxavir(DAPD)、D-d4FC(DPC-817)、-dOTC(SPD754)、SPD隱756、racivir、D-FDOC或GS7340。作為選擇，HIV林是在已經接受這樣的耐藥或多重耐藥性HIV林的患者中發現的那些林，它們直接或間接地來自經選自上述NRTI抗病毒藥的至少一種抗病毒藥持續治療使自身介導出耐藥或多重耐藥性HIV抹的另一個體。與野生型相比，在病毒RT中，多重耐藥性HIV林往往含有至少三種突變。因此，顯然，本發明的方法和組合物可用作目前的抗逆轉錄病毒治療，例如，HAART的一種補充，或者在某些情況下，作用拯救或搶救治療。這是一種典型的情況，其中多重耐藥性HIV已經被患者的早期抗逆轉錄病毒藥物治療史引入現有患者中。作為選擇，本發明的方法和組合物將典型地在已經出現突變的多重耐藥性;f木的原發HIV感染的那些患者中組成一線治療。下列抗病毒藥往往誘導具有RT引物拯救突變的這類多重耐藥性HIV抹，其促進鏈終止NRTI核普酸的ATP-或焦磷酸-介導的切除齊多夫定、拉米夫定或組合劑型可比韋或Tiizivir;拉米夫定、阿巴卡韋或組合劑型Epzicom;替諾福韋、恩曲他濱或組合劑型Tmvada。儘管這些藥物常常誘導這類多重耐藥性HIV抹，但該藥品名單不是唯一的。因此，為預防具有RT引物拯救突變的一種或多種多重耐藥性HIV抹的出現，而這種突變促進鏈終止NRTI核香酸的ATP-或焦磷酸-介導的切除，顯然應給予本發明化合物。甚至與誘導這類突變的NTRI藥物同時給藥的時候，也會產生預防作用。本發明的第三方面提供包含式I化合物和至少一種鏈終止劑NRTI的呈單位劑型的藥用組合物，其中持續給予NRTI誘導HIVRT《1物拯救突變並恢復DNA合成，這種突變促進從？1物/才莫板複合物的3'-末端結合的NRTI—磷酸的ATP依賴或焦磷酸依賴性切除。本發明的藥用組合物和本發明的方法的優選實施方案包括其中的NRTI選自齊多夫定(AZT、ZDV)、司他夫定(d4T)、扎西他濱(ddC)、去羥肌苷(ddl)、阿巴卡韋、(ABC)、拉米夫定(:3TC)、恩曲他濱(FTC)、阿德福韋(ADV)、恩替卡韋(BMS200475)、阿洛夫定(FLT)、替諾福韋disoproxil富馬酸鹽(TNF)、amdoxavir(DAPD)、D-d4FC(DPC-817)、-dOTC(SPD754)、SPD-756、mcivir、D-FDOC或GS7340及其組合的那些組合物和方法。特別優選的實施方案包括其中的NRTI選自齊多夫定、司他夫定、去羥肌苷、拉米夫定、阿巴卡韋、替諾福韋、恩曲他濱或其組合的那些實施方案。使用HIV藥物，尤其是HIV逆轉錄酶抑制劑的經驗進一步強調，非最佳的藥動學和複方劑量方案很快導致不經意的依從性失敗。這依次意味著，在一日的大部分時間內，HIV方案中的各種藥物的24小時低谷濃度(最小血漿濃度)往往下降至低於ICw或ED,認為，至少ICs。和更實際地，1(:9或ED9Q的24小時低谷水平對減緩藥物逃避突變體的發展是重要的。典型地以與所期望的持續和延長的抗逆轉錄病毒治療相當的劑量，給予患者本發明化合物。因而，該治療方案旨在確保限定的藥物水平，還要避免毒性，儘管暴露後預防治療需要耐受一些短暫的毒性，但以高劑量快速使用式I化合物是可以接受的。式I化合物的典型給藥量介於1-25mg/kg/日，優選少於10mg/kg/日，優選介於0.05-0.5mg/kg/日。適當劑量將取決於適應症和患者，並易於通過常規的動物藥物代謝和藥動學(DMPK)或臨床試驗和z力w7Zco預測軟體確定。本發明的單位劑量藥用組合物具有相應量的式I化合物，典型地針對60kg或75kg成人劃分，並對QD、BID或TID劑量方案任選分成一次、兩次或三次。如果治療劑量介於0.05-0.5mg/kg/日，那麼臨床QD劑量/人/日對60kg成人為3mg-30mg或對75kg成人為3.75-37.5mg。在本發明的聯合劑量單位藥用組合物方面，額外的常規NRTI劑量和方案限制可以以QD、BID或TID給藥為條件。本發明包括藥學上可接受的鹽，例如，有機酸尤其是羧酸的鹽，包括但不限於乙酸鹽、三氟乙酸鹽、乳酸鹽、葡糖酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、泛酸鹽、羥乙磺酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、丁酸鹽、二葡糖酸鹽、環戊酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸、草酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、富馬酸鹽、煙酸鹽、椋櫚酸鹽、果膠酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽(proprionate)、酒石酸鹽、乳糖酸鹽、新戊酸鹽(pivolate)、樟腦酸鹽、十一酸鹽和琥珀酸鹽。還包括的鹽為有枳^黃酸例如，甲石黃酸鹽、乙磺酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽、樟腦磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、苯磺酸鹽、對-氯代苯磺酸鹽和對曱苯磺酸鹽。可接受的鹽還包括來自無機酸的那些，例如，氫氯酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、半硫酸鹽、硫氰酸鹽、過硫酸鹽、磷酸和磺酸。本發明延伸到為式I化合物的水合物、溶劑合物、複合物和其它物理形式的活性劑。儘管所述活性劑可能單獨給藥，但優選它作為藥物製劑的一部分存在。這類製劑將包含與一種或多種可接受的載體/賦形劑和任選的其它治療成分在一起的式I化合物活性劑。在與製劑的其它成分相容的意義上，載體必須是可接受的，且對接受者無害。製劑包括適於直腸、鼻、局部(包括口腔和舌下)、陰道或胃腸外(包括皮下、肌內、靜脈內和皮內)給藥的那些。製劑優選口服製劑。製劑可方便地以單位劑型，例如片劑和持續釋放膠嚢存在，並可通過製藥領域熟知的任何方法製備。這類熟知的方法包括使式I化合物活性劑與載體混合的步驟。一般說來，通過使活性劑均勻緊密地與液體載體或細分散的固體載體或二者混合，如需要再使產品成形，製備製劑。本發明延伸到藥用組合物的製備方法，它包括使式I化合物或其藥學上可接受的鹽與藥學上可接受的載體或溶i某結合或混合。如果該藥物製劑的製備涉及多種藥物賦形劑的緊密混合且活性成分呈鹽的形式，那麼往往優選採用非鹼性，即，酸性或中性的賦形劑。本發明的口服製劑可為各含有預定量的活性劑的不連續單元，例如，膠嚢、扁嚢劑或片劑。作為選擇，它們可為散劑或顆粒劑；為含呈含水液體或非含水液體形式的活性劑的溶液劑或混懸劑，或為水包油液體乳劑或油包水液體乳劑，為大丸劑等。針對口服組合物(例如，片劑和膠嚢)，術語"適當的載體"包括媒介物例如，常用賦形劑，例如，粘合劑例如，糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、黃蓍膠、聚乙烯吡咯烷酮(聚維酮)、甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、鞋丙基甲基纖維素、蔗糖和澱粉；填料和載體，例如，玉米澱粉、明膠、乳糖、蔗糖、微晶纖維素、白陶土、甘露醇、磷酸氫鈣、氯化鈉和海藻酸；和潤滑劑，例如，硬脂酸鎂、硬脂酸鈉和其它硬脂酸金屬、甘油硬脂酸酯硬脂酸、矽酮流體、滑石粉臘、油和膠態二氧化矽。也可採用矯味劑，例如，薄荷油、冬青油、櫻桃調味劑等。希望加入著色劑使劑型易於鑑別。也可用本領域熟知的方法對片劑包衣。可通過任選與一種或多種輔劑一起擠壓或衝莫壓製備片劑。可通過在合適的機器中擠壓任選與粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑混合的呈自由流動形式的活性劑，例如，粉末或顆粒，製備壓製片劑。可通過在合適機器中模壓用惰性液體稀釋劑溼潤的粉末狀化合物的混合物，製備模壓片劑。可任選對片劑包衣或刻痕和配製，以使活性劑緩釋或控釋。適於口服的其它製劑包括包含於矯味基質，通常是蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠中的活性劑的錠劑；包含於惰性基質例如，明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠中的活性劑的錠劑；和包含於適用液體載體中的活性劑的漱口液。用於本文的'C廣C6烷基'(也簡稱為C廣Qalk，或用於化合物表達式例如，C廣Q烷氧基等)意指包括直鏈和支鏈脂族碳鏈，例如，曱基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、異戊基、己基、庚基和它們的任何簡單異構體。烷基可具有不飽和鍵。此外，CVCe烷基中的任何C原子可任選被一個、兩個或如果價允許，三個滷素取代，和/或被雜原子S、O、NH取代或亞烷基鏈被雜原子S、O、NH間斷。如果雜原子定位於鏈末端，那麼，它適宜被一個或兩個氫原子取代。C,-Cn烷基與調整為需要的碳原子數的C廣C6烷基的意義相對應。用於本文的'C。-C3烷基芳基'指包括稠合到CVC7環烷基的芳基部分，例如，苯基、萘基或苯基，例如，茚滿基，其中的芳基直接連接(即，c。)或經上面如對cvc3亞烷基定義的中間物曱基、乙基、丙基或異丙基連接。除非另有說明，芳基和/或它所稠合的環烷基部分任選被選自卣代基、羥基、硝基、氰基、羧基、C,-Q烷基、c,-c6烷氧基、CVQ烷氧基CVC6烷基、CVQ5烷醯基、氨基、疊氮基、氧代、巰基、硝基C。-q烷基碳環基、C。-(^烷基雜環基的l-3個取代基取代。"芳基"具有相應的意義，即其中的C。-C3烷基鍵不存在。用於本文的'c。-c3烷基c3-c7環烷基'指包括c3-c7環烷基，例如，環丙基、環丁基、環戊基、環己基或環庚基，其中的環烷基直接連接(即C。烷基)或經上面如對C廣C3亞烷基定義的中間物曱基、乙基或丙基連接。環烷基可含有不飽和鍵。除非另有說明，環烷基部分任選被選自囟代基、羥基、硝基、氰基、羧基、C,-Q烷基、C廣Q烷氧基、CVQ烷氧基C廣Q烷基、C廣C6烷醯基、氨基、疊氮基、氧代、巰基、硝基、C。-C3烷基碳環基、C。-C3烷基雜環基的1-3個取代基取代。用於本文的'c。-c,烷基碳環基'指包括c。-c3烷基芳基和c。-c3烷基cvc7環烷基。除非另有說明，芳基或環烷基任選被選自卣代基、羥基、硝基、氰基、羧基、C,-Q烷基、CVQ烷氧基，CVC6烷氧基cvc6烷基、C,-Q烷醯基、氨基、疊氮基、氧代、巰基、硝基、C。-C3烷基碳環基和/或C。-q烷基雜環基的l-3個取代基取代。"碳環基"具有相應的意義，即其中的c。-c3烷基鍵不存在。用於本文的'c。-q烷基雜環基'指包括含有單環、飽和或不飽和、雜原子的環，例如，哌咬基、嗎啉基、哌嗪基、吡唑基、咪唑基、嗯唑基、異嗨唑基、蓬n秦基(thiazinolyl)、異噻。秦基(isothiazinolyl)、噻唑基、嗨二唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三哇基、四唑基、呋喃基、噻吩基、吡咬基、嘧咬基、噠。秦基、吡唑基，或稠合到苯環的任何這類基團，例如，喹啉基、苯並咪唑基、苯並嗯唑基、苯並異嗨唑基、苯並噻嗪基、苯並異噻嗪基、苯並噻唑基、苯並噁二唑基、苯並-1,2,3-三唑基、苯並-l,2,4-三唑基、苯並四唑基、苯並呋喃基、苯並噻吩基、苯並吡啶基、苯並嘧啶基、苯並噠嗪基、苯並p比唑基等，其中的環直接連接，即(C。)或經上面如對C,-C3亞烷基定義的中間物曱基、乙基、丙基或異丙基連接。具有芳族特性的任何這類非飽和環本文在中可稱為雜芳基。除非另有說明，雜環和/或其所稠合的苯基部分任選被選自卣代基、羥基、硝基、氰基、羧基、C,-C6烷基、C,-Q烷氧基、C廣C6烷氧基C廣Q烷基、C,畫C6烷醯基、氨基、疊氮基、氧基、巰基、硝基、C。-C^烷基碳環基、C。-C3烷基雜環基的l-3個取代基取代。"雜環基"和"雜芳基"具有相應的意義，即其中的C。-C3烷基鍵不存在。因此，典型地，上面定義範圍內的雜環基和碳環基部分是有5個或尤其是6個環原子的單環，或包含稠合到4、5或6元環的6元環的雙環結構。典型的這類基團包括CVC8環烷基、苯基、千基、四氫萘基、茚基、茚滿基、雜環基，例如選自氮雜環庚烷基(azepanyl)、氮雜環辛烷基(azocanyl)、吡咯烷基、哌啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、哌。秦基、二氫吲哚基、吡喃基、四氫吡喃基、四氯噻喃基、噻喃基、呋喃基、四氫呔喃基、噻吩基、吡咯基、嗯唑基、異嗯唑基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、嘧咬基、吡溱基、噠喚基、四唑基、吡唑基、巧l咮基、苯並呋喃基、苯並噻喻基、苯並咪唑基、苯並噻唑基、苯並嗯唑基、苯並異嗯唑基、喹啉基、四氫喹啉基、異喹啉基、四氫異喹啉基、嗇哇啉基、四氬查唑啉基和壹喔啉基，它們中的任一個可任選如本文所述的那樣被取代。從而，飽和的雜環部分包括基團，例如，吡咯啉基、吡咯烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、哌咬基、嗎啉基、硫代嗎啉基、吡喃基、噻喃基、哌嗪基、二氫吲哚基、氮雜環丁烷基、四氫吡喃基、四氫噻喃基、四氫呋喃基、六氫嘧啶基、六氫噠嗪基、1,4,5，6-四氫嘧啶胺、二氫-嗯唑基、1,2-p塞。秦烷基(thiazinanyl)-l,l-二氧化物、1,2,6-噻二嗪烷基(thiadiazinanyl)-l,l-二氧化物、異噻唑烷基-l,l-二氧化物和咪唑烷基-2,4-二酮，而不飽和的雜環包括帶芳族性質的基團，例如，呋喃基、p塞p分基、吡咯基、瞎唑基、"塞唑基、咪唑基、吡唑基、異聰唑基、異噻唑基、嗯二唑基、三唑基、四唑基、噻二唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧咬基、吡嗪基、中氮茚基、吲哚基、異吲哚基。在各種情況下，雜環可與苯環稠合形成雙環系統。式I化合物包括某些藥學上可接受的酯或醯胺。從而，代表性的酯包括羧酸酯，其中，酯基的羧酸部分的非羰基部分選自直鏈或支鏈烷基(例如，甲基、正丙基、叔丁基或正丁基)、環烷基、烷氧基烷基(例如，甲氧基甲基)、芳烷基(例如，千基)、芳氧基烷基(例如，苯氧基甲基)、芳基(例如，任選被例如，卣素、Cw烷基或CM烷氧基或氨基取代的苯基)；磺酸酯，例如，烷基-或芳烷基磺醯基(例如，甲磺醯基)；胺基酸酯(例如，L-異戊氨醯或L-異亮氨醯)；和單、雙或三-磷酸酯。在這類酯中，除非另有說明，存在的任何烷基部分有利地含有l-i8個碳原子，特別是i-6個碳原子，更特別是1"4個碳原子。存在於這類酯中的任何環烷基部分有利地含有3-6個碳原子。存在於這類酯中的任何芳基部分有利地包含任選如上述碳環基的定義所示被取代的苯基。藥學上可接受的酯因而包括C廣C^脂肪酸酯，例如，乙醯基、叔丁基或長鏈直鏈或支鏈的不飽和或to-6單不飽和脂肪酸，例如，棕櫚醯、硬脂醯等。作為選擇的芳基或雜芳基酯包括苯甲醯、吡啶甲醯等，它們的任一個可如上述碳環基中的定義那樣被取代。優選的藥學上可接受的酯包括脂族L-胺基酸酯，例如，亮氨醯、異亮氨醯和特別是異戊氨醯。優選的其它胺基酸酯包括描述於W09909031的2-0-AA-C3-C2:脂肪酸酯，其中AA是脂族胺基酸酯，特別是衍生自L-乳酸和L-異戊氨醯的那些。藥學上可接受的醯胺包括衍生自任選包含1-3個不飽和現象和/或任選被在上面碳環基中所定義的取代基取代的cvc22支鏈或直鏈氨基烷基或苯胺或千基胺的那些醯胺。優選的醯胺包括由胺與cvc4直鏈或支鏈鏈烷酸反應而形成的那些。具有胺官能團的藥學上可接受的其它醯胺對應於上述酯所優選的羧酸的醯胺。合成本發明化合物典型地由類似於SvanssonL.等mlOrg.Chem(1991)Vol56:2993-2997製備的區別保護的二-4,5-羥甲基四氫呋喃衍生物合成，如流程1中概述formulaseeoriginaldocumentpage34在流程1中,採用JOrgChem1987,52,2596中所示的Sharpless氧化容易地製備手性環氧醇1。Rs是常規的羥基保護基，例如，下面所討論的那些，例如，對溴代千基。例如，-50°CT,在二曱醚中，環氧醇1被烯丙基溴化鎂在C-3位區域選擇地烷基化。例如，任選在非所要的區域異構體的鄰近羥基用氧化劑例如高碘酸鈉裂解的鑑別步驟後，用矽膠層析法分離所希望的異構體2。用其它羥基保護基保護2中的伯羥基，例如，。C下，用在嘧啶中的苯甲醯氯苯甲醯化，產生區別保護的3。如描述於Tet.Lett1976171973中的那樣，採用催化量的四氧化鋨和N-曱基嗎啉N-氧化物作為再氧化劑，使烯鍵順-羥基化(Cis-hydroxylation),生成相應的二醇，它依次被氧化劑，例如，在有機溶劑例如含水四氫呋喃中的高碘酸鈉裂解。用醇/酸例如0.5%w/w甲醇的鹽酸溶液解封(deblocked)這樣製得的不穩定呋喃糖，得到區別保護的二-4,5-羥甲基四氫呋喃中間體4。希望處理保護基Rs和Rsl(即去保護，再用其它羥基保護基再保護)，從而在稍後步驟中，最容易地選擇性去除所選4^的一個保護基而不是其它的保護基。因此，如以下的流程2和3中所示，選擇4中的特別保護基，以便能選擇性地去除一個這樣的保護基並使因此暴露的羥基官能團醯基化。已知許多這類成對的可特別選擇的羥基保護基，例如，公開於Greene,"ProtectiveGroupsInOrganicSynthesis,"(JohnWiley&Sons，NewYork(1981))中的O-保護基。因此，羥基-保護基包括醚，例如，曱醚或取代的甲醚，例如，甲氧基曱基(MOM)、苄氧基甲基、叔丁氧基甲基、2-曱氧基乙氧基甲基(MEM)、2,2,2-三氯代乙氧基曱基、二(2-氯代乙氧基)曱基、2-(三甲基曱矽烷基)乙氧基曱基、四氫吡喃基(THP)、3-溴代四氫吡喃基、四氫噻喃基、4-曱氧基四氫-吡喃基、4-甲氧基四氫p塞喃基S,S二氧化物(dixido)、四氫呋喃基和四氫瘞喻基。乙基醚包括1-乙氧基乙基、1-甲基-l-甲氧基乙基、l-(異丙氧基)乙基、2,2,2-三氯代乙基和2-(苯基氫硒基)乙基。其它醚包括叔丁基、烯丙基、肉桂基，對氯代苯基和千基醚，例如，未取代爺基、對甲氧基節基、鄰硝基節基、對硝基千基、對滷代苄基和對氰基苄基。其它醚包括3-甲基-2-吡啶甲基(picolyl)N-氧化物(oxido)、二苯基曱基、5-二苯並環庚基、三苯基甲基、a萘基二苯基甲基、對甲氧基苯基二苯基甲基、對(對'-溴代苯甲醯甲基氧基)苯基二苯基甲基、9-蒽基、9-(9-苯基)站噸基、9-(9-苯基-10-氧代)蒽基(三苯甲酮(tritylone))和苯並異噻唑基S,S二氧化物(dioxodo)。甲矽烷基醚包括三甲基甲矽烷基(TMS)、三乙基曱矽烷基、異丙基二曱基曱矽烷基、叔丁基二甲基甲矽烷基(TBDMS)、(三苯基甲基)二曱基曱矽烷基、叔丁基二苯基甲矽烷基、甲基二異丙基甲矽烷基、曱基二叔丁基甲矽烷基、三苄基曱矽烷基、三-對-二甲苯基甲矽烷基、三異丙基甲矽烷基和三戊基曱矽烷基(tripenylsilyl)。備選的幾基保護基包括酯，例如，甲酸酯、苯甲醯甲酸酯、乙酸酯、氯代乙酸酯、二氯代乙酸酯、三氯代乙酸酯、三氟乙酸酯、曱氧基乙酸酯、三苯基曱氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、對氯代苯氧基乙酸酯、2,6-二氯-4-曱基苯氧基乙酸酯、2,6-二氯-4-(1,1,3,3-四甲基丁基)苯氧基乙酸酯、2,4-二(1,1-二甲基丙基)苯氧基乙酸酯、氯代二苯基乙酸酯、對-(P)-苯基乙酸酯、丙酸3-苯基酯、3-苯甲醯丙酸酯、異丁酸酯、單琥珀酸酯、4-氧代戊酸酯(levinulate)、新戊酸酯、金剛烷二曱酸酯(adamantoate)、巴豆酸酯、4-曱氧基巴豆酸酯、(E)-2-甲基-2-丁烯酸酯(惕各酸酯)和苯曱酸酯，例如，未取代或鄰-(二溴代甲基)-、鄰-(甲氧基羰基)-、對苯基-、2,4,6-三甲基-(5-甲基鄰苯二甲酸酯)或對-(P)-苯曱酸酯，或ot-萘甲酸酯。碳酸酯羥基保護基包括甲基、乙基、2,2,2-三氯代乙基、異丁基、乙烯基、烯丙基、肉桂基、對硝基苯基、千基，例如，未取代的對曱氧基-、3,4-二甲氧基-、鄰硝基-或對硝基千基或S-千基硫代碳酸酯。各種羥基保護基包括N-苯基氨基甲酸酯，N-咪唑基氨基甲酸酯、硼酸酯、硝酸酯、N,N，N,N-四甲基二氨基磷酸酯(phosphorodiamidate)和2,4-二硝基苯基次磺酸酯。Greene提供大量反應性圖，以幫助選擇補充的各對不同的保護基。典型的羥基保護基包括實施例中的那些和醚，例如，叔丁基和其它低級烷基醚，例如，異丙基、乙基和特別是甲基、節基和三苯基曱基；四氫吡喃基醚；取代的乙基醚，例如，2,2,2-三氯代乙基；甲矽烷基醚，例如，三甲基甲矽烷基、叔丁基二曱基曱矽烷基和叔丁基二苯基甲矽烷基；和使羥基與羧酸反應製備的酯，例如，乙酸酯、丙酸酯、苯甲酸酯等。然後，使區別保護的二-4,5羥基甲基四氫呋喃4如流程2中所示的那樣再與甲矽烷基化的、任選N-保護的4-氨基-嘧啶酮縮合，接著醯基化和環化。作為選擇，如流程3中所示，首先使4雙環化，然後縮合。流程2表示用甲矽烷基化的4-氨基-嘧啶-2-酮特別保護中間體4的Vorbri)ggen縮合(ChemBer.1981,114,1234)，其中的4-氨基官能團如Greene,"ProtectiveGroupsInOrganicSynthesis,"(JohnWiley&Sons，NewYork(1981》中所示的那樣，任選用常規氨基保護基保護。這類基團的實例包括l)醯基，例如，甲醯基、三氟乙醯基、鄰苯二醯基和對甲苯磺醯基；2)芳族氨基甲酸酯基，例如，節氧基羰基(Cbz或Z)和取代的千氧基羰基，和9-芴基曱氧基羰基(Fmoc);3)脂族氨基甲酸酯基，例如，叔丁氧基羰基(Boc)、乙氧基羰基、二異丙基甲氧基羰基和烯丙氧基羰基；4)環烷基氨基曱酸酯基，例如，環戊氧基羰基和金剛烷氧基羰基；5)烷基，例如，三苯基甲基和千基；6)三烷基甲矽烷基例如，三曱基甲矽烷基；和7)含硫代的基團，例如，苯基硫代羰基和二硫琥珀醯基。當然，要選擇氨基保護基，以使去保護條件與不同的羥基保護基的去除順序一致。作為選擇，1^2是用於RS和RS所定義的醯胺和亞胺的合成子。在許多情況下，4-氨基官能團完全無需保護基，並因此RsS是H。反應混合物含有TBDMSOTf和0^2(312和所需要的異構體5經層析法，例如，HPLC分離，這在Vorbrt)ggen縮合反應中是常規的。5中的羥基保護基之一再被選擇性地除去，以顯現羥基官能團。在流程2的化合物6中，首先除去Rs,從而鞋基保護基的區別對可以為，例如，對於Rs,用四氫呋喃中的TBAF選擇性地除去的TBDP(叔丁基-矽烷基)，和對於Rs'，用乙酸隨後除去的MMTR(4-甲氧基-苯基-二苯基曱基)。然而，很顯然，保護基的其它排列會實現相同目標。Greene提供關於不同的保護基的大量反應圖，以幫助這類選擇。此外，經4的適當處理的Rs和Rs'位的交換會生成中間體，其中的4-羥甲基官能團未被掩蔽，因而首先被醯基化。用活化的、O)O)-二羧酸HOOC-A-COOH醯化6中的未掩蔽羥基官能團，其中的A對應於如上定義的-(CR1112)^生成7。結果，R1或112含有潛在的反應性基團，例如，OH、NH2或COOH，這些如同上文在Greene中所述的那樣;故常規性地保護。用於醯化的活化的酸可包括，例如，醯基滷、酸酐、活化酸酯或在偶合劑存在下的酸，例如，二環己基碳二亞胺。代表性的活化酸衍生物包括醯基氯、衍生自烷氧基羰基卣化物例如異丁氧基碳醯氯等的酐、N-羥基琥珀醯胺衍生的酯、N-羥基苯鄰二甲醯亞胺衍生的酯、N-羥基-5-降冰片烯-2,3-二曱醯胺衍生的酯、2,4,5-三氯酚衍生的酯等。其它的活化酸包括具有式HCOOHACOOX的那些，例如，其中X是COCH3、COCH2CH3或COCF3或苯並三唑。然後除去化合物7的保護基Rs1,釋放8的4個羥甲基，為雙環四氫呋喃環系統的第二個環的環化作準備。它原則上如上所述通過醯化進行。然後處理化合物8的基團RsS製備所需要的式1化合物。例如，可除去作為RsZ的氨基保護基，生成在115&116上的游離胺和/或如下在流程3中，上述區別保護的四氫呋喃4首先被雙環化，再經Vorbriiggen縮合。通過對第一個補充保護基的Rs/Rsi對的去保護進行雙環化。在這種情況下，四氫呋喃的4-羥甲基官能團首先被釋放，以備醯化，但帶有適當選擇的Rs/RsM呆護基的該通用方法也可作為環化的第一步，通過去除和醯化5羥甲基官能團進行。在這些情況下，首先選擇4-或5-去保護是重要的，其中(oco-二羧酸HOOC-A-COOH中的A是不對稱的，即，在式I化合物中，其中m是2或3和其中在亞甲基鏈節中的R'/R2是不相同的。例如，其中A是-CH(OH)CIV(即在式1中，n是2，第一個亞曱基中的R1是OH，而W是H,第二個亞曱基中的R'和RZ都是H)，那麼，通過首先去保護的Rs和採用活化酸PG-OC-CH2-CH(OH)-COOH，可確保鄰近連接四氫呋喃中間體的4羥甲基官能團的酯鍵的R1羥基的定位，其中的PG是常規的羧基保護基，它的選擇當然要使它的去除條件與打算去除RS'的一致。Greene提供大量的反應圖，以幫助這類選擇。在Greene的上述文獻中，評述了大量羧基保護基，並典型地包括酯，例如，曱基或取代的甲基酯，例如，曱氧基甲基、甲硫基甲基、四氫吡喃基、四氫呋喃基、曱氧基乙氧基乙基、苄氧基甲基、苯曱醯曱基包括對溴代、a曱基或對甲氧基苯曱醯甲基、二醯基甲基或N-苯二醯亞氨基甲基。乙基酯包括未取代的乙基和2,2,2-三氯代乙基、2-卣代乙基、co-氯代烷基、2-(三甲基甲矽烷基)乙基、2-甲基三乙基(thiethyl)、2-(對硝基苯基亞磺醯)乙基、2-(對甲苯磺醯)乙基和1-甲基-l-苯乙基。其它酯包括叔丁基、環戊基、環己基、烯丙基、肉桂基和苯基，包括間曱硫基苯基。苄基酯包括未取代的苄基、三苯基甲基、二苯基曱基包括二(鄰竭基苯基)曱基、9-蒽基曱基、2-(9,10-二氧代)蒽基曱基、二苯並環庚基、2,4,6-三甲基苄基、對溴代苄基、鄰硝基千基、對硝基苄基、對甲氧基苄基、胡椒基、4-吡啶甲基和對-(P)-苄基。甲矽烷基酯包括三曱基曱矽烷基、三乙基甲矽烷基、叔丁基二曱基曱矽烷基、異丙基二甲基甲矽烷基和苯基二甲基甲矽烷基。活化的酯包括S-叔丁基、S-苯基、S-2-吡咬基、N-羥基哌咬基、N-羥基琥珀醯亞氨醯基(succinimidoyl)、N-羥基苯二醯亞氨醯基和N-羥基苯並三唑基。各種酯^友基保護基包括O-醯基肟、2,4-二硝基苯基亞磺醯、2-烷基-l,3-嚼唑啉、4-烷基-5-oxox-l,3-嘿唑烷和5-烷基-4-氧代-1,3-二氧戊環。甲錫烷基酯包括二乙基甲錫烷基和三正丁基甲錫烷基。非酯羧基保護基包括醯胺，例如，N-N-二甲基、吡咯烷基、哌啶基、鄰硝基苯基、7-硝基巧|哚基、8-硝基四氫喹啉基和對-(P)苯磺醯胺。非酯羧基保護基還包括醯肼，例如，N-苯基醯肼或N,N'-二異丙基醯肼。針對區別保護的四氫吹喃衍生物的供選擇的流程示於流程4中流程4被廣泛報導於學術文獻中。尿苷類似物前體的製備表示於Sanghvi等Synthesis1994,1163,Sanghvi等TettLett35巻，4697頁(1994)和Haly&SanghviNucleosides&Nucleotides15巻，1383(1996)中。尿香向胞嘧啶類似物的轉化表示於Kozlov,Nucleosides&Nucleotides17巻，2249(簡)中。不需要鹼i的轉化的區別保護的四氫呋喃的備選途徑示於流程5中formulaseeoriginaldocumentpage41a:TrCI,吡咬，b:i)MsCI,Pyrii)INNaOH,THF,c)i)EtAlCN,65C,ii)甲苯/THF,d)i)MsCl,Et3N,ii)EtOAc,f)i)NaBH4ii)EtOH,ot/卩1:3-4,g)i)DIBAL,ii)矽膠EtOAc,差向異構a/p93:7,g)i)NaBH4，ii)EtOH/CH2Cl2。儘管已經用TrO保護基和RSR^^H說明流程5，顯然，胺和輕基保護基的其它變量遵循該途徑。現在參看全部流程，類似於Mauldon等，BioorgMedChem6(1998)577-585中的程序，典型地通過室溫下，典型地在DMF中，使式1化合物，其中RS和RS是或者相應的中間體5(任選去保護)與式(CH30)2CHNRSRS'化合物縮合，製備其中的115和116—起限定=018118'的亞胺。一般在室溫下，由中間體二烷基甲醯胺和硫酸二甲酯製備適當的甲醯胺縮醛(formamideacetals)。中間體鹽與曱醇鈉的反應提供半縮醛，再如上所述將其縮合。典型地在H20/1,4-二氧雜環己烷中，通過用適當的ROOR使式I的N-4未保護的化合物或相應的中間體5進行Akiyama醯化(ChemPharmBull1978,26,981),製備其中115是醯胺的式I化合物。用常規肽偶合條件，使其中Rs是胺基酸殘基的化合物與N-保護的胺基酸殘基偶合。實施方案詳述參照下列實施例和圖，現在將只通過舉例的方式，描述本發明方法和化合物的各種實施方案；其中圖1是大鼠口服本發明化合物後，對體內代謝物隨時間推移的血漿濃度圖；圖2描述相對於常規NRTI的抑制作用，本發明的母體化合物對具有引物拯救表型的典型的TAM抹的抑制作用，如在生物實施例2a中進一步討論的；圖3描述相對於常規NRTI的抑制作用，本發明的母體化合物對具有引物拯救表型的M184V+TAM的抑制作用，如在生物實施例2b中進一步討論的；圖4描述相對於常規NRTI的抑制作用，本發明的母體化合物對T69S+XX+TAM的抑制作用，如在生物實施例2c中進一步討論的；圖5描述相對於齊多夫定和拉米夫定的抑制作用，本發明的母體化合物對TAM抹的抑制作用，如在生物實施例3中進一步討論的。實施例1.2-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-l-基)-八氫-l，5,10-三氧雜環戊二烯並畫環癸烯-6,9-二酮formulaseeoriginaldocumentpage44a)N-(l-(5-(叔丁基-二苯基-矽烷氧基曱基)-4-[(4-甲氧基-苯基)-二苯基-甲氧基甲基]-四氧呋喃-2-基}-2-氧代-1,2-二氫-嘧啶-4-基)-2,2-二甲基-丙醯胺formulaseeoriginaldocumentpage44氮氣下，向以上流程4中製備的0.75g(lmmol)4-氨基-l-(5-(叔丁基-矽烷氧基甲基)-4-[(4-甲氧基苯基)-二苯基-甲氧基甲基]-四氫呋喃-2-基卜lH-嘧啶-2-酮的二氧雜環己烷(25ml)溶液中加入二碳酸二叔丁酯(0.44g,2mmol)的二氧雜環己烷(2ml)溶液。室溫下攪拌反應混合物48小時。在矽膠上蒸發反應混合物和在矽膠柱純化殘餘物，用乙酸乙酯/己烷2:l作為洗脫液，得到0.42g(49。/。)上述產物。質子NMR(CDCI3):8.33(d.1H)，7.64-7.59(m,4H)，7，4&7.18(m,18H),6.91(d,1H),6.79-6.77(m,2H),6.10-6.08(m,1H),4.084.06(m,1H),3.98-3.96(m,1H)'3.77(s,3H),3.59(dd,1H)'3.19-3.16(m,1H)'3.02-2.98(m'1H),2.57-2.53(m,2H),2.72-2.25(m,化)，1.50(s,9H),1,08(s，9H).b)(1-{5-羥曱基-4-[(4-甲氧基苯基-二苯基-曱氧基甲基]-四氫呋喃-2-基}-2-氧代-1,2-二氫-嘧啶-4-基]-氨基甲酸叔丁酯向以上化合物(0.33g,0.4mmol)的四氬呋喃(10ml)溶液中加入TBAF(0.19g,0.6mmol)的四氬呋喃(lml)溶液。室溫下攪拌反應混合物3小時。在矽膠上蒸發反應混合物和用採用乙酸乙酯/己烷2:l作為洗脫液的矽膠柱純化殘餘物。蒸發適當流分，得到0.20g(80%)(l-{5-羥甲基_4_[(4-曱氧基苯基-二苯基-曱氧基曱基]-四氫呋喃-2-基}-2-氧代-1，2-二氫-嘧啶-4-基]-M甲酸叔丁酯。質子NMR(CDCI3):8.22(d,1H),7.40-7.38(m,4H),7.38-7.23(m，10H),0.85-6.82(m,化)，6.03-6.00(m,1H),4.04-3.94(m,2H),3.85-3.81(m,1H),3.80(s,3H),3.29(dd,1H),3.11(dd,1H),2.35-2.22(m,3H)，1.52(S,9H).c)琥珀酸單-{5-(4-叔丁氧基羰基氨基-2-氧代-2H-嘧啶-l-基)-3-[(4-曱氧基-苯基)-二苯基-曱氧基甲基]-四氬-呋喃-2-基-甲基}酯向以上化合物(200mg,0.33mmol)和4-二曱基氨基吡咬(98mg,0.8mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中加入琥珀酸酐(80mg,0.8mmol)。在反應混合物被加到二氯甲烷和飽和氯化銨的混合物中後，室溫下徹夜攪拌反應混合物。用水洗滌有機相併千燥。蒸發溶劑得到222mg(94%)上述化合物。質子NMR(CDC13):8.02(d,1H),7.38-7.36(m,4H),7.30-7.15(m,9H),6.84-6.81(m，2H),5.89-5.87(m,1H),4.58(dd,1H),4.26(dd,1H),4.13-4.08(m,1H)，3.79(s，3H),3.24(dd,1H),3.05(t,1H),2.80-2.60(m,4H).2.31-2.26(m,1H),2.17-2.12(m,2H),1.51(s,9H).d)琥珀酸單-[5-(4-叔丁氧基羰基氨基-2-氧代-2&嘧啶-1-基)-3-羥甲基-四氧呋喃-2-基-甲基酯0室溫下，攪拌以上化合物(222mg,0.31mmol)的乙酸(IOml)和水(5ml)溶液3小時。用442的M+l離子的LC/MS表明原料完全轉化為所需要的去保護的化合物。蒸發反應混合物至幹，經用乙腈/水1丄5作為洗脫液洗脫的C-8反相柱純化殘餘物，得到100mg(73%)所需上述化合物。質子NMR(CDC13):8.18(d,1H),7.23(d,1H),5.93(寬s,1H)，4.66-4.63(m;1H),4.33(d,1H),4.15(寬s,1H),3.66(寬s,2H),2.80-2.59(m,4H),2.37(寬s,2H),2.28-2.44(m,1H),1.51(s,9H).e)[l-(6,9-二氧代-十氫-l,5，10-三氧雜-環戊二烯並環癸烯-2-基)-2-氧代-1,2-二氫-嘧啶-4-基]-氨基甲酸叔丁酯向以上化合物(74mg,0.168mmol)、HOBT(27mg,0.2mmol)和三乙胺(0.14ml,1mmol)的二氧曱烷(65ml)和DMF(2ml)溶液中加入EDAC(39mg,0,2mmol)。在將反應混合物傾入二氯甲烷(IOOml)和含水檸檬酸(100ml)後，室溫下攪拌反應混合物48小時。用碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌有機相。有機相經硫酸鈉乾燥，並蒸發至殘餘物，經採用乙酸乙酯作為洗脫液的矽膠柱純化，得到22mg(31%)以上所示的化合物。質子NMR(CDC13):7.75(d,1H),7.36(寬s,1H),7.25(d,1H),6.02-5.99(m,1H),4.58(dd，1H),4.36-4.28(m,2H)，4.14(t，2H)，2.64(s,4H),2.58-2.55(m,1H),2.29-2.25(m，2H),1.52(s,9H).f)2-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-l-基)-八氫-l,5,10-三氧雜-環戊二烯並環癸烯-6,9-二酮向以上化合物(22mg,0.052mmol)的二氯曱烷(2ml)溶液中加入三氟乙酸(2ml)。室溫下攪拌反應混合物1小時並蒸發至幹。與甲苯共蒸發兩次，小心千燥後，得到12.7mg作為雙-三氟乙酸鹽的標題化合物。LC/MS確認帶324(M+l)和647(2M+1)特徵離子的結構，254nmHPLC純度超過90%。實施例2.7-氨基-2-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-l-基)-八氫-l,5,10-三氧雜環戊二烯並環癸烯-6.9-二酮a)2-叔丁氧基羰基氨基-琥珀酸4-{5-(4-叔丁氧基羰基氨基-2-氧代-2H-嘧啶-l-基]-3-[(4-甲氧基-苯基)-二苯基-甲氧基曱基]-四氫-呋喃-2-基-曱基}酯向(1-{5-羥甲基-4-[(4-曱氣基苯基-二苯基-甲氧基曱基]-四氫呋喃誦2-基}-2-氧代-1,2-二氫-嘧啶-4-基]-氨基曱酸叔丁酯[98mg,0.4mmol,實施例1中所述的]和4-甲基氨基吡啶(98mg,0.8mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中加入N-BoC-(S)-asp酐[172mg,0.8mmol(如丄Med.Chem.1971,24-30頁中所述製備)]。在反應混合物傾入乙酸乙酯(150ml)和飽和氯化銨(100ml)後，室溫下徹夜攪拌反應混合物。用水洗滌有機相，經硫酸鈉乾燥，蒸發，得到371mg上述粗產物，無需任何純化而用於下一步驟。質子NMR(CDCI3):7.76(d,1H),7.38-7.20(m,12H),7.08(d,1H),6.83(d,2H)'6.13(d,1H),5.80(d,1H),4.83(t,1H),4.614.58(m,1H),4.144.06(m,2H),3,79(s,3H),3.25-3.23(m,1H),3.17-3.12(m,1H)'3.00(t,1H),2.80-2.76(m,1H),2.26-2.15(m,3H),1鄰(s,9H),1,4(s,9H).4b)2-叔丁氧基羰基氨基-琥珀酸4-[5-(4-叔丁氧基羰基氨基-2-氧代-2H-嘧啶-l-基)-3-羥曱基-四氧呋喃-2-基-甲基]酉旨室溫下，徹夜攪拌以上化合物(330mg，0.40mmol)的乙酸(IOml)和水(5ml)溶液。蒸發反應混合物至幹，殘餘物經用乙腈/水1:1.5作為洗脫液洗脫的C-8反相柱純化，得到72mg(32%)所需化合物。LC/MS確認帶557(M+l)的分子離子的正確結構。c)[l-(7-叔丁氧基羰基氨基-6,9-二氧代-十氫-l,5,10-三氧雜-環戊二烯並環癸烯-2-基)-2-氧代-1,2-二氫-嘧啶-4-基}-氨基甲酸叔丁酯向以上化合物(72mg,0.13mmol)、HOBT(20mg,0.16mmol)和三乙胺(0.07ml,0.5mmol)的二氯甲烷(50ml)和DMF(1ml)溶液中加入EDAC(31mg,0.16mmol)。在反應混合物被傾入二氯曱烷(IOOml)後，室溫下攪拌反應混合物24小時，並用檸檬酸溶液、碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌。有機相經硫酸鈉乾燥，並蒸發至殘餘物，經採用乙酸乙酯作為洗脫液的矽膠柱純化，得到26mg(37。/o)以上所示的化合物。LC/MS得到確切的539M+1離子和537M-1離子。質子NMR(CDCI3〉:7,73(d,1H),7.40(寬s,1H),7.24(d,1H),6.02-6.00<m,1H),5.26-5.24(m,1H),4.87-4.85(m,1H),4.644.55(m,2H),4.204.18(m,1H),4.062.恥(m，1H)，2.76-2.66(m,1H),2.57-2.52(m,1H),2.31-2.17(m'2H)，1.52(s,9H),1.45(s,9H).d)7-氨基-2-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-l-基)-八氫-l,5,10-三氧雜環戊二烯並環癸烯-6,9-二酮向以上化合物的(26mg，0.05mmol)二氯曱烷(2ml)溶液中加入三氟乙酸(2ml)。室溫下攪拌反應混合物2小時，並蒸發至幹。與甲苯共蒸發兩次，小心乾燥後，得到24mg作為雙三氟乙酸鹽的標題化合物。LC/MS確認帶有339(M+l)、677(2M+1)和337(M-l)特徵離子的結構。實施例3.2-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-l-基)-八氫-l,5,ll-三氧雜環戊二烯並環十一碳烯-6，10-二酮a)己二酸單45-[4-叔丁氧基羰基氨基-2-氧代-2H-嘧啶-l-基]-3-[(4-甲氧基-苯基)-二苯基-甲氧基曱基]-四氧呋喃-2-基-曱基}酉旨formulaseeoriginaldocumentpage51向(1-{5-羥甲基-4-[(4-甲氧基苯基-二苯基-甲氧基甲基]-四氫呋喃-2-基}-2-氧代-1,2-二氫-嘧啶-4-基]-氨基曱酸叔丁酯[730mg,1.19mmol,實施例1中所述的]和4-甲基氨基吡啶(350mg,2.86mmol)的二氯曱烷(80tnl)溶液中加入戊二酐(327mg,2.86mmol)。在反應混合物傾入二氯甲烷後，室溫下徹夜攪拌反應混合物。用稀氯化銨溶液、稀檸檬酸溶液、水和鹽水洗滌有機相，經硫酸鈉乾燥，蒸發，得到819mg(95%)上述粗產物，其無需任何純化而用於下一步驟。b)己二酸單-[5-[4-叔丁氧基羰基氨基-2-氧代-2H-嘧啶-l-基]-3-羥甲基-四氧呋喃-2-基-甲基]酉旨室溫下，攪拌以上化合物(1.09g,1.5mmol)的乙酸(50ml)和水(25ml)溶液2.5小時。蒸發反應混合物至幹，殘餘物經用EtOAc/MeOH9:l作為洗脫液洗脫的矽膠柱純化，得到435mg(64%)所希望的化合物。c)[l-(6,10-二氧代-十氫-l,5,ll-三氧雜-環戊二烯並環十一碳烯-2-基)-2-氧代-1,2-二氫-嘧啶-4-基}-氨基甲酸叔丁酯向以上化合物(395mg,0.87mmol)、HOBT(235mg,1.74mmol)和DMAP(213mg,1.74mmol)的DMF(120ml)溶液中加入EDAC(334mg，1.74mmol)。在蒸發溶劑後，室溫下攪拌反應混合物48小時。將二氯甲烷加入反應殘餘物，用稀氯化銨溶液、稀檸檬酸溶液、水和鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，蒸發，得到350mg粗產物。LC/MS表示所需產物帶有438(M+1)、496(M+乙酸鹽)、875(2M+1)和436(M-l)的離子。經用乙腈/水1:1和乙腈/水1:1.25洗脫的C-8反相柱的兩次純化，蒸發和凍幹後，得到31mg的標題化合物，經HPLC在220nM確定純度為約50%。d)2-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶小基)-八氫-l,5,ll-三氧雜-環戊二烯並環十一碳烯-6,10-二酮於士0。C下，向以上化合物(31mg)的二氯甲烷(2ml)溶液中加入三氟乙酸(2ml)。於士0。C下，攪拌反應混合物2小時，再於室溫下，攪拌2小時。隨後，蒸發反應混合物至千燥，最後與甲苯共蒸發，得到粗產物，經用乙腈/水1:2洗脫的C-8反相柱純化。加入TFA後，蒸發適當的餾分，得到31mg作為三氟乙酸鹽的標題化合物。LC/MS確認結構帶有338(M+l),3%(M+乙酸鹽)和6"PM+1)的特徵離子，220nM處的純度約為70%。生物學實施例1A:大鼠藥動學使實施例1化合物溶解於MQ級水(3mg/ml),使成雙大鼠口月艮。劑量為15mg/kg,於0、15和30分鐘、1、2、4和6小時時取血樣。用質譜法測量血漿的復原(作為代謝物2',3'-二脫氧-3'-C-羥甲基-P-D-赤型07&ra)環戊二烯並呋喃糖基胞嘧啶)，檢測為鈉加合物m/z264(M+Na)+。如圖1中可見，4uM左右劑量時，本發明化合物提供具有高峰濃度的代謝物2',3'-二脫氧，3'-C-羥甲基-P-D-赤型環戊二烯並(pento)呋喃糖基胞嘧啶的充分血漿濃度。由於大鼠不能被HIV感染，不能直接用該實施例測定這種製劑的抗逆轉錄病毒活性，但引起注意的是，人H9細胞中的代謝物2'，3'-二脫氧，3'-C-羥甲基-p-D-赤型環戊二烯並呋喃糖基胞嘧啶的EDs。典型地約為0.01uM。這依次意味著血漿高峰濃度超過ED5。的幾百倍。與QD或BID給藥的ED5。比較，其它藥學參數如AUC和清除率與達到24小時低谷水平極為相符。生物學實施例1B滲透性該實施例測量抑制劑經人胃腸道細胞的傳輸。試驗採用熟知的具有通道號40-60之間的Caco-2細胞。尖端(Apical)至基底外側的轉運一般說來，在2-4孔中試驗每一種化合物。基底外側和尖端孔會分別容納1.5mL和0.4mL轉運緩沖液(TB)，試驗物質的標準濃度為10pM。而且，所有的試驗溶液和緩沖液會含有1%DMS0。實驗前，用含有10%血清的培養基預先塗布轉運板30分鐘，以避免非特異性結合到塑性材料上。在過濾器栽體上培養21-28日後，將細胞備用於滲透性實驗。l號轉運板包括3排孔，每排4個孔。第l排指定為洗滌，第2排為"30分鐘"和第3排為"60分鐘"。2號轉運板包括3排孔，每排4個孔，第4排指定為"90分鐘"，第5排120分鐘"和餘下的那排未指定。移出尖端孔的培養基，將插入物轉移到無插入物的2個板中的轉運板(l號板)中的洗滌排(l號排)中，已經用1.5mL轉運緩衝液(HBSS,25mMHEPES,pH7.4)在l-5排中製備插入物。在A—B篩選中，基底外側孔中的TB也含有1%牛血清白蛋白。將0.5mL轉運緩沖液(HBSS,25mMMES,pH6.5)加至插入物中，37t下，在多混合震動器中，使各細胞單層在轉運緩沖液系統中平衡30分鐘。在被平衡到緩衝液系統後，用EVOMch叩stick儀器測量各孔中的經上皮的電阻值(TEER)。TEER值通過介於400-1000n每孔(取決於所用的通道數)。從尖端側移去轉運緩沖液(TB,pH6.5)，將插入物轉移到30分鐘排(2號)中並將包含試驗物質的新鮮的425|iLTB(pH6.5)加到尖端(供體)孔。37。C下，在多混合震動器中，用約150-300rpm的低搖晃速度培養各板。在第2排中培養30分鐘後，每30分鐘將插入物移至新的預熱過的基底外側(受體)孔中；第3排(60分鐘)、第4排(90分鐘)和第5排(120分鐘)。約2分鐘後和在實驗結束時，從尖端溶液取出25pL樣品。這些樣品代表從實驗開始至結束的供體樣品。在各預定的時間點從基底外側(受體)孔取出300^L，測量實驗結束時的TEER的端值(postvalue)。對於收集的所有樣品，將乙腈在樣品中的最終濃度加到50%。於-20。C貯存所收集的樣品，直到用HPLC或LC-MS分析。基底外側至尖端的轉運一般說來，在2-4孔中試驗每一種化合物。基底外側和尖端孔會分別容納1.55mL和0.4mLTB，試驗物質的標準濃度為10pM。而且，所有的試驗溶液和緩衝液會含有1%DMS0。實驗前，用含有10%血清的培養基預先塗布轉運板30分鐘，以避免非特異性結合到塑性材料上。在過濾器載體上培養21-28日後，細胞為滲透性實驗而準備。移去來自尖端孔的培養基，將插入物轉移至無插入物的新板(轉運板)的洗滌排(l號)中。轉運板包括3排孔，每排4個孔。第1排指定為"洗滌"和第3排是"實驗排"。先前已經用洗滌的第l排中的1.5mLTB(pH7.4)和在實驗的第3排(供體側)中含有試驗物質的1.55mLTB(pH7.4)製備轉運板。將0.5mL轉運緩沖液(HBSS,25mMMES,pH6.5)加到第1排中的插入物中。37。C下，在多混合震動器中，各細胞單層在轉運緩沖液系統中平衡30分鐘。在被平衡到緩沖液系統後，經EVOMchopstick儀器測量各孔中的TEER值。從尖端側移去轉運緩衝液(TB,pH6.5)，將插入物轉移到第3排，向插入物加入400pL新鮮TB,pH6.5。30分鐘後，從尖端(受體)孔抽取250pL並用新鮮轉運緩衝液置換。其後，每30分鐘抽取250nL樣品並用新鮮轉運緩衝液置換，直到於120分鐘時實驗結束，最後，在實驗結束時，測量TEER的端值。約2分鐘後和在實驗結束時，從基底外側(供體)格取25pL樣品。這些樣品代表實驗開始和結束時的供體樣品。對於收集的所有樣品，將乙腈在樣品中的最終濃度加到50%。於-20。C貯存所收集的樣品，直到用HPLC或LC-MS分析。計算確定所吸收的累積分數，FA。um對時間。由下式計算FA。訓^加其中的CRl是間隔i端的受體濃度，CDi是間隔i開始時的供體濃度。應獲得線性關係。滲透性係數(Pj)p〉cm/s)的確定由下式計算formulaseeoriginaldocumentpage56其中k是定義為斜率的轉運速度(分鐘-1)，通過作為時間(min)函數的吸收的累積分數(FA。J的線性回歸得到，Vk是受體格中的體積(mL)，和A過濾器的面積(cm2)。參比化合物tableseeoriginaldocumentpage56生物學實施例2PhenoSenseHIV試驗中抑制TAM引物拯救相關耐藥性HIV的活性通過市售的PhenoSenseHIV試驗(描迷於Petropoulos,CJ等，(2000)Antimicrob.AgentsChemother.44:920-928並被ViroLogics，Inc實現)確定本發明化合物的敏感性，即作為對分離自帶典型的TAM引物拯救突變體耐藥基因型的患者血漿樣品中的HIV-1的血漿代謝物2',3'-二脫氧，3'-C-羥甲基-P-D-赤型環戊二歸並呋喃糖基胞嘧啶的測量。通過放大來自患者血漿的fflV/o/基因的蛋白酶(PR)-RT片段和將放大產物插入到經修飾的衍生自NL4-3分子克隆的HIV-1載體，進行該試驗。用重組病毒DNA載體和產生鼠科雙嗜性白血病病毒包膜蛋白的表達載體，通過共轉染293細胞培養物準備病毒儲備液(viralstocks)。假型病毒顆粒得自轉染細胞培養物，並用來傳染新鮮293細胞培養物。重組病毒DNA含有在HIVe"v基因區域內的螢光素酶基因盒，螢光素酶在靶細胞中的產生取決於一輪病毒複製的完成。通過向細胞加入系列濃度的本發明化合物和參比化合物測量藥物敏感性。倘若定量測量藥物敏感性，抑制病毒複製的藥物以劑量依賴的方式減少螢光素酶信號。實施例2a.表1概述用於實驗的引物拯救相關TAM突變體的主要簇，它們是抗HIV的，並帶有AZT相關抗逆轉錄病毒治療期間典型地出現的特有的TAM基因型。表l.在引物拯救相關TAM患者分離物20和21中的特有的基因型tableseeoriginaldocumentpage57結果表示於圖2。野生型mv病毒用作對照。這裡，與對照物的平行進行相比，患者分離物20和21抹的抑制作用表示為對治療藥物的敏感性減少的倍數變化。下列抗病毒藥被試驗AZT、3TC、TNF、ABC、d4T、FTC和本發明化合物，作為血漿代謝物2',3'-二脫氧，3'-C-羥曱基-(3-D-赤藝環戊二烯並呋喃糖基胞嘧啶。很顯然地，本發明化合物保留對抗帶TAM的毒抹的活性。結果表明，對分離物20才朱的敏感性只有l.O倍減少，而對分離物21^^朱的敏感性少於1.0倍減少。這意味著，本發明化合物以類似於其抑制野生型HIVRT的效能的效能水平，保留抑制患者的引物拯救相關突變體HIVRT的活性。相反，其它藥物，與對野生型的相比，特別是AZT(敏感性減少451倍)，還有3TC、TFN、ABC、d4T和FTC失去抑制來自這些患者的病毒的效能。換句話說，來自這些患者的病毒表現出耐藥性，它大大減少圖2中所表示的這些藥物的敏感性。重要的是注意到，患者兩種分離物包含於密碼子215的不同的胺基酸轉換；分離物20中T到F和分離物21中T到Y。這是引物拯救相關TAM耐藥性突變體的典型特點。實施例2b表2概括帶基因背景M184V(不同的突變體)的引物拯救相關突變體HIV，它典型地通過極常採用的抗逆轉錄病毒治療AZT+3TC(可比韋)選擇。表2.TAM-引物拯救相關患者分離物19中的基因型改變tableseeoriginaldocumentpage58如圖3所示，通過血漿代謝物2',3'-二脫氧，3'-C-羥曱基-p-D-赤型環戊二烯並呋喃糖基胞嘧啶測量的本發明化合物再次保留抑制這種耐藥病毒的活性，表明與對野生型HIV的相比，敏感性只有1.78倍的不同。對耐藥性病毒，3TC和AZT都失去活性，並表現出減少的效能(即病毒敏感性顯著減少)(圖3)。實施例2c用抗逆轉錄病毒藥持續挑戰患者導致MDR的出現。在RT指形區的胺基酸68和70之間帶有6-bp插入物的T69S突變常見於與各種形式的TAM結合在一起，並歸因於增強的引物拯救活性。如表3中所述，選擇與TAM結合的MDR(帶不同形式的胺基酸插入物(s))《狄。表3.引物拯救相關患者分離物31、32和35中的基因型改變分離物編號特有的引物拯救相關TAM突變31在TAMsA62V、D67E和R211K的基因背景中的T69S+雙胺基酸插入SG32在TAMsA62V、D67G、V751和T215I的基因背景中的T69S+雙胺基酸插入VG35在TAMsA62V、R211K、T215Y和L228H的基因背景中的T69S+雙胺基酸插入VA如圖4中所示，本發明化合物抑制這些患者的分離物，與目前用於常規抗逆轉錄病毒治療的6種對照抗病毒藥相比，在藥物敏感性方面產生最小的改變。值得注意的是，針對患者分離物32和35,觀察到對AZT的敏感性的顯著的(500-1000倍)減少，儘管本發明化合物各表現出2.79和4.29倍的變化。這與本發明化合物顯示的不同於常規NRTI表現的專性DNA鏈終止劑的抑制機理相一致。實施例2d分離物4表示在R211S和K219E的突變組成的非原發的TAM背景中帶有K65R+M184V基因型的其它有區別的突變體。該分離物引起典型的對阿巴卡韋、3TC和最近批准的核苷FTC的交叉耐藥性，但保留其對胸苷類似物，例如，AZT和d4T的敏感性。該分離物不帶典型的引物拯救突變，但本發明化合物仍抑制該病毒表型，3.88的FC值說明了這一點。該值可比得上胸香類似物、AZT(FC=1.11)和d4T(FC^.71)，但發現3TC(FC〉200)、FTC(FC〉40)和一定程度上的ABC(FO9.0)有顯著的耐藥性。該實驗數據表明，本發明化合物不僅帶有抑制"引物拯救"突變體的獨特的性質，而且還能抑制來自不同家族的HIV突變體。因此，這與3TC和FTC所採用的抑制機理及4'-C-乙炔基化合物的可能的機理(其中在催化區域中的密碼子T165R中，M184V與一個額外的胺基酸一起的改變歸因於對4-C-乙炔基核苷的交叉耐藥性(Kodama2002))形成對照。生物學實施例32',3'-二脫氧-3-C-羥甲基-胞嘧啶抑制PBMC中引物拯救相關耐藥性HIV的活性。在PBMC培養基中，測試本發明化合物抑制其它TAM引物拯救相關耐藥性HIV分離物的病毒耐藥性能。通過用PHA-刺激的供體PBMC共培養被感染患者PBMC，產生HIV-1分離物並發展到高滴定度(VirologyManualforACTGHIVLaboratories)。為藥物敏感性試驗驗，收集無細胞上清液，對其測序並於-70。C分等分試樣貯存。用經修飾的一致同意的ACTG/DOD方法(VirologyManualforACTGHIVlaboratories)進行體外藥物敏感性試驗。於37°C，潮溼的5%(302氛圍下，用病毒儲備液預感染PBMC4小時，隨後培養4小時。用培養基洗滌感染的細胞兩次，並移液到帶8個系列藥物稀釋的微量滴定板中。各孔含有100,000個預感染的PBMC，用細胞培養基稀釋所有藥物。對每種單一藥物，選擇將藥物稀釋到超過50%抑制濃度(ICs。)。在各個板上共培養含有細胞和病毒的對照孔。於37。C下，在5%032降壓氣氛下培養7日後，用對上清液的p24抗原檢驗確定病毒生長(AbbottLaboratories,Chicago,USA)。與不含藥物的對照孔相比，計算病毒生長抑制百分率並表示為與對照孔相比的倍數改變表達(化合物敏感性的減少)。參比化合物AZT的處理與本發明化合物平行進行。選擇一簇有代表性的引物拯救相關突變體病毒，其包含引物拯救相關TAM耐藥RT突變的基本特點。在位置M41L,D67N,K70R:L210W，T215Y/F和K219Q/E(與或不與不同的突變體M184V的各種組合)具有突變的毒林如表4中所示般採用。表4.9位患者分離物中的TAM引物拯救相關基因型tableseeoriginaldocumentpage61這些選擇的引物拯救突變體的大部分產生顯著的對AZT敏感性的抗性，FC值下降數百倍。帶有T215V胺基酸突變的分離物7086(FC=3.0)例外。FC值的完整的報告表示於圖5。這裡，2',3'-二脫氧-3'-C-羥曱基胞嘧啶以只有2.7的最高FC值抑制所有的8種分離物。本申請涉及的所有參考文獻，包括專利和專利申請，儘可能地通過最完整程度的引用而結合到本文中。除非文中另有需要，貫穿本說明和隨後的權利要求書中的詞'包括'和變體例如'包含'和'含有'，應被理解為暗示包含所述的整數、步驟、整數群或步驟組，但不排除其它任何整數、步驟、整數群或步驟組。權利要求1.一種式I化合物及其藥學上可接受的鹽，其中R1獨立為H、-OR3、-NHR4；C1-C4烷基；或者，當n是2時，相鄰的R1一起限定烯鍵；R2是H；或當偕位R1是C1-C4烷基時，R2也可為C1-C4烷基；或當偕位R1是-OR3時，R2也可為-C(＝O)OH或其藥學上可接受的酯；R3獨立為H，或其藥學上可接受的酯；R4獨立為H，或其藥學上可接受的醯胺；R5是H、-C(＝O)R7或醯胺-鍵接的L-胺基酸殘基；R6是H；或R5和R6一起限定亞胺＝CR8R8′；R7是C1-C6烷基，C0-C3烷基環基；R8和R8′獨立為H、C1-C6烷基、C0-C3烷基環基；或R8是H和R8′是-NR9R9′；R9和R9′獨立為H、C1-C6烷基、C0-C3烷基環基；或R9和R9′與它們所連的N原子一起限定飽和5或6元環；n是1、2或3。2.根據權利要求1的化合物，其中RS和I^是H。3.根據權利要求1的化合物，其中n是1。4.根據權利要求3的化合物，其中R'是H、OH或其藥學上可接受的酯。5.根據權利要求1的化合物，其中n是2。6.根據權利要求5的化合物，其中第一個R'是H;而第二個R1是-OH或-NI^，或其藥學上可接受的酯或醯胺。7.根據權利要求6的化合物，所述化合物具有下式formulaseeoriginaldocumentpage3其中RS和R4口權利要求1中所定義和R/為所述的第二個R1。8.根據權利要求5的化合物，所述化合物指2-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-l-基)-八氫-l,5,10-三氧雜環戊二烯並環癸烯-6,9-二酮；或其藥學上可接受的鹽。9.根據權利要求1的化合物，其中n是3。10.根據權利要求9的化合物，所述化合物指2-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-l-基)-八氫-l,5,ll-三氧雜-環戊二烯並環十一碳烯-6,10-二酮或其藥學上可接受的鹽。11.一種藥用製劑，它包含與藥學上可接受的載體或賦形劑在一起的根據權利要求1-10中任一項的化合物。12.根據權利要求1-10中任一項的化合物，它用作藥物。13.根據權利要求12的化合物，它用於治療或預防HIV。14.根據權利要求13的化合物，其中的HIV是多重耐藥性HIV。15.根據權利要求14的化合物，其中多重耐藥性HIV的逆轉錄酶產生至少一次突變，使專性鏈末端核苷-或核苷酸磷酸經ATP-或焦磷酸-介導的切除從新生DNA鏈中被切除。16.根據權利要求15的化合物，其中所述逆轉錄酶帶有至少一種下列的基因模式(a)M41,±D67,L210和T215;(b)D67,K70和K219;(c)T69S-XX;或(d)A67(在67位缺失)。17.根據權利要求16的化合物，其中所述逆轉錄酶產生至少3處突變。18.—種治療或預防HIV感染的方法，該方法包括給予有需要的患者安全和有效量的根據權利要求1-10中任一項的化合物。19.根據權利要求18的方法，其中的HIV是多重耐藥性HIV。20.根據權利要求1-10中任一項的化合物在製備用於治療或預防HIV感染的藥物中的用途。21.根據權利要求20的用途，其中的HIV是多重耐藥性HIV。全文摘要式(I)化合物及其藥學上可接受的鹽，具有在治療或預防HIV，尤其是使專性鏈末端磷酸核苷或磷酸核苷酸被ATP-或焦磷酸-介導的切除從新生DNA鏈切除的逆轉錄酶突變體中的用途，其中R1獨立為H1-OR3、NHR4；C1-C4烷基；或者，當n是2時，相鄰的R1一起構成烯鍵；R2是H；或當偕位R1是C1-C4烷基時，R2也可為C1-C4烷基；或當偕位R1是-OR3時，R2也可為-C(＝O)OH或其藥學上可接受的酯；R3獨立為H，或其藥學上可接受的酯；R4獨立為H，或其藥學上可接受的醯胺；R5和R6是H或胺前藥部分，n是1、2或3。文檔編號C07D493/04GK101213198SQ200680024408公開日2008年7月2日申請日期2006年7月5日優先權日2005年7月7日發明者C·薩爾伯格,周曉雄申請人:美迪維爾公司