一種MCF‑7乳腺癌細胞擴大培養的方法與流程
2023-10-11 02:32:39 2
本發明屬於生物技術應用領域，具體地，涉及一種mcf-7乳腺癌細胞擴大培養的方法。
背景技術：
乳腺癌是女性最常見的癌症，主要包括導管癌和小葉癌。2016年美國ca（acancerjournalforclinicians）公布的最新統計數據顯示，美國2016年預計將有420840例女性患乳腺癌，佔女性新發惡性腫瘤的38%，居女性惡性腫瘤發病率第一位，並且死亡人數將達52930例。更為嚴重的是全球的乳腺癌發病率正在逐年增長。
細胞培養基是生物與健康相關研究領域的一項重要技術。隨著生命科學的迅速發展，目前細胞培養已成為細胞生物學、分子生物學、遺傳學和免疫學等學科研究的重要基礎。為了深入探討細胞的生長活動規律、有關疾病的病理和藥物的藥理（毒理）機制，開發具有不同針對性的細胞培養方法具有重要意義。
其中，mcf-7乳腺癌細胞作為人源性低轉移乳腺癌細胞，常用於乳腺癌原位生長、血管生成等乳腺癌的體內外研究。此外，mcf-7乳腺癌細胞還會同其他乳腺癌高轉移性細胞進行對比研究。
技術實現要素：
發明目的：本發明提供了一種mcf-7乳腺癌細胞擴大培養的方法，用於多種人源以及非人源細胞的培養。
技術方案：本發明提供了一種mcf-7乳腺癌細胞擴大培養的方法，包括以下步驟：用移液槍將mcf-7乳腺癌細胞專用培養基吸盡，加入3-5mlpbs洗滌細胞2-3次，向細胞培養皿中加入1-2ml0.38%的胰蛋白酶，於37℃條件下消化3-5min，加入2-3ml的新鮮的mcf-7乳腺癌細胞專用培養基，使用移液槍吹打細胞培養皿底40-50次；將液體移至細胞離心管中，在1000-1200g/min條件下離心3-5min，用移液槍去除上清液，加入2-3ml新鮮的mcf-7乳腺癌細胞專用培養基，使用移液槍上下吹打細胞40-50次；平均加入到3-8個細胞培養皿中，進行擴大培養。本發明所述的mcf-7乳腺癌細胞擴大培養的方法，方法合理，應用方便，mcf-7細胞生長速度快，細胞狀態好，邊界清晰，鏡下觀察透亮、分裂相更多、形態及分散度佳，可以有利於乳腺癌的原位生長、血管生成以及與其他乳腺癌高轉移性細胞進行對比研究等的相關研究。
進一步的，上述的mcf-7乳腺癌細胞擴大培養的方法，所述胰蛋白酶中還包含0.05%的edta。可以與胰蛋白酶相配合，迅速使貼壁細胞脫離培養皿，減少胰蛋白酶對細胞的損傷。
進一步的，上述的mcf-7乳腺癌細胞擴大培養的方法，所述mcf-7乳腺癌細胞專用包括70-90%的基礎培養基以及10-30%的胎牛血清。mcf-7乳腺癌細胞專用培養基營養豐富，提供mcf-7乳腺癌細胞生長的營養物質。其中，胎牛血清可以進一步為培養的細胞提供營養物質，同時還能終止胰蛋白酶的消化作用。
進一步的，上述的mcf-7乳腺癌細胞擴大培養的方法，所述基礎培養基以重量組分計，包括以下組分：葡萄糖80-90份、碳酸氫鈉10-20份、丙酮酸鈉8-18份、轉鐵蛋白2-10份、氯化鉀30-50份、無水硫酸鎂5-12份、氯化鈉60-80份、氯化鋰3-10份、無水磷酸二氫鈉8-16份、葉酸0.2-0.6份、肌醇0.5-1.5份、煙醯胺0.2-0.8份、無水氯化鈣20-40份、硝酸鐵0.1-0.5份、丁二酸5-10份、丁二酸鈉9-18份、d-泛酸鈣0.2-0.8份、酒石酸膽鹼0.5-1份、核黃素0.1-0.3份、鹽酸硫胺0.1-0.5份、鹽酸吡哆辛0.1-0.6份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.2-0.8份、亞麻油0.5-2份、聚脂肪酸酯0.5-1.8份、酚紅鈉0.8-1.5份和去離子水100份。
進一步的，上述的mcf-7乳腺癌細胞擴大培養的方法，所述基礎培養基還包括3-8份胺基酸，所述胺基酸以重量組分計，由以下組分組成：l-鹽酸精氨酸5-10份、l-鹽酸胱氨酸3-8份、l-絲氨酸3-6份、甘氨酸1-5份、l-鹽酸組氨酸4-6份、l-異亮氨酸8-20份、l-亮氨酸7-18份、l-鹽酸賴氨酸10-20份、l-甲硫氨酸1-6份、l-苯丙氨酸2-8份、l-蘇氨酸5-15份、l-色氨酸1-3份、l-酪氨酸5-9份和l-纈氨酸8-12份。
進一步的，上述的mcf-7乳腺癌細胞擴大培養的方法，所述基礎培養基還包括2-5份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計，由以下組分組成：胰島素生長因子3-8份、白介素62-5份、白介素101-4份、白介素123-6份、tnf-β2-10份、gm-csf1-5份。基礎培養基組分合理，營養豐富，可以為細胞培養提供更多的營養物。
進一步的，上述的mcf-7乳腺癌細胞擴大培養的方法，所述基礎培養基以重量組分計，還包括0.006份青黴素和0.01份的鏈黴素。可以有效防止培養細胞被汙染。
進一步的，上述的mcf-7乳腺癌細胞擴大培養的方法，所述青黴素選自10000u/ml，所述鏈黴素選自10000μg/ml。青黴素和鏈黴素活性好，效果佳。
進一步的，上述的mcf-7乳腺癌細胞擴大培養的方法，所述細胞培養皿為10cm細胞培養皿。
有益效果：本發明所述的mcf-7乳腺癌細胞擴大培養的方法，方法合理，應用方便，mcf-7細胞生長速度快，細胞狀態好，邊界清晰，鏡下觀察透亮、分裂相更多、形態及分散度佳，可以有利於乳腺癌的原位生長、血管生成以及與其他乳腺癌高轉移性細胞進行對比研究等的相關研究。
具體實施方式
下面將通過幾個具體實施例，進一步闡明本發明，這些實施例只是為了說明問題，並不是一種限制。
實施例1
一種mcf-7乳腺癌細胞擴大培養的方法，包括以下步驟：用移液槍將mcf-7乳腺癌細胞專用培養基吸盡，加入3mlpbs洗滌細胞2次，向10cm細胞培養皿中加入1ml0.38%的胰蛋白酶，於37℃條件下消化5min，加入2ml的新鮮的mcf-7乳腺癌細胞專用培養基，使用移液槍吹打細胞培養皿底40次；將液體移至細胞離心管中，在1000g/min條件下離心5min，用移液槍去除上清液，加入2ml新鮮的mcf-7乳腺癌細胞專用培養基，使用移液槍上下吹打細胞40次；平均加入到3個細胞培養皿中，進行擴大培養。
其中，所述mcf-7乳腺癌細胞專用包括70%的基礎培養基以及30%的胎牛血清。所述基礎培養基以重量組分計，包括以下組分：葡萄糖80份、碳酸氫鈉10份、丙酮酸鈉8份、轉鐵蛋白2份、氯化鉀30份、無水硫酸鎂5份、氯化鈉60份、氯化鋰3份、無水磷酸二氫鈉8份、葉酸0.2份、肌醇0.5份、煙醯胺0.2份、無水氯化鈣20份、硝酸鐵0.1份、丁二酸5份、丁二酸鈉9份、d-泛酸鈣0.2份、酒石酸膽鹼0.5份、核黃素0.1份、鹽酸硫胺0.1份、鹽酸吡哆辛0.1份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.2份、亞麻油0.5份、聚脂肪酸酯0.5份、酚紅鈉0.8份和去離子水100份。
另，所述基礎培養基還包括3份胺基酸，所述胺基酸以重量組分計，由以下組分組成：l-鹽酸精氨酸5份、l-鹽酸胱氨酸3份、l-絲氨酸3份、甘氨酸1份、l-鹽酸組氨酸4份、l-異亮氨酸8份、l-亮氨酸7份、l-鹽酸賴氨酸10份、l-甲硫氨酸1份、l-苯丙氨酸2份、l-蘇氨酸5份、l-色氨酸1份、l-酪氨酸5份和l-纈氨酸8份。
再，所述基礎培養基還包括2份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計，由以下組分組成：胰島素生長因子3份、白介素62份、白介素101份、白介素123份、tnf-β2份、gm-csf1份。
進一步的，所述基礎培養基以重量組分計，還包括0.006份青黴素和0.01份的鏈黴素。並且，所述青黴素選自10000u/ml，所述鏈黴素選自10000μg/ml。此外，所述胰蛋白酶中還包含0.05%的edta。
實施例2
一種mcf-7乳腺癌細胞擴大培養的方法，包括以下步驟：用移液槍將mcf-7乳腺癌細胞專用培養基吸盡，加入5mlpbs洗滌細胞2次，向10cm細胞培養皿中加入2ml0.38%的胰蛋白酶，於37℃條件下消化3min，加入3ml的新鮮的mcf-7乳腺癌細胞專用培養基，使用移液槍吹打細胞培養皿底50次；將液體移至細胞離心管中，在1200g/min條件下離心4min，用移液槍去除上清液，加入3ml新鮮的mcf-7乳腺癌細胞專用培養基，使用移液槍上下吹打細胞50次；平均加入到8個細胞培養皿中，進行擴大培養。
其中，所述mcf-7乳腺癌細胞專用包括90%的基礎培養基以及10%的胎牛血清。所述基礎培養基以重量組分計，包括以下組分：葡萄糖90份、碳酸氫鈉20份、丙酮酸鈉18份、轉鐵蛋白10份、氯化鉀50份、無水硫酸鎂12份、氯化鈉80份、氯化鋰10份、無水磷酸二氫鈉16份、葉酸0.6份、肌醇1.5份、煙醯胺0.8份、無水氯化鈣40份、硝酸鐵0.5份、丁二酸10份、丁二酸鈉18份、d-泛酸鈣0.8份、酒石酸膽鹼1份、核黃素0.3份、鹽酸硫胺0.5份、鹽酸吡哆辛0.6份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.8份、亞麻油2份、聚脂肪酸酯1.8份、酚紅鈉1.5份和去離子水100份。
另，所述基礎培養基還包括8份胺基酸，所述胺基酸以重量組分計，由以下組分組成：l-鹽酸精氨酸10份、l-鹽酸胱氨酸8份、l-絲氨酸6份、甘氨酸5份、l-鹽酸組氨酸6份、l-異亮氨酸20份、l-亮氨酸18份、l-鹽酸賴氨酸20份、l-甲硫氨酸6份、l-苯丙氨酸8份、l-蘇氨酸15份、l-色氨酸3份、l-酪氨酸9份和l-纈氨酸12份。
再，所述基礎培養基還包括5份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計，由以下組分組成：胰島素生長因子8份、白介素65份、白介素104份、白介素126份、tnf-β10份、gm-csf5份。
進一步的，所述基礎培養基以重量組分計，還包括0.006份青黴素和0.01份的鏈黴素。並且，所述青黴素選自10000u/ml，所述鏈黴素選自10000μg/ml。此外，所述胰蛋白酶中還包含0.05%的edta。
實施例3
一種mcf-7乳腺癌細胞擴大培養的方法，包括以下步驟：用移液槍將mcf-7乳腺癌細胞專用培養基吸盡，加入4mlpbs洗滌細胞3次，向10cm細胞培養皿中加入2ml0.38%的胰蛋白酶，於37℃條件下消化4min，加入2-3ml的新鮮的mcf-7乳腺癌細胞專用培養基，使用移液槍吹打細胞培養皿底45次；將液體移至細胞離心管中，在1100g/min條件下離心4min，用移液槍去除上清液，加入3ml新鮮的mcf-7乳腺癌細胞專用培養基，使用移液槍上下吹打細胞45次；平均加入到5個細胞培養皿中，進行擴大培養。
其中，所述mcf-7乳腺癌細胞專用包括80%的基礎培養基以及20%的胎牛血清。所述基礎培養基以重量組分計，包括以下組分：葡萄糖86份、碳酸氫鈉18份、丙酮酸鈉12份、轉鐵蛋白6份、氯化鉀40份、無水硫酸鎂8份、氯化鈉75份、氯化鋰6份、無水磷酸二氫鈉12份、葉酸0.4份、肌醇1份、煙醯胺0.5份、無水氯化鈣30份、硝酸鐵0.3份、丁二酸7份、丁二酸鈉14份、d-泛酸鈣0.5份、酒石酸膽鹼0.7份、核黃素0.2份、鹽酸硫胺0.3份、鹽酸吡哆辛0.4份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.5份、亞麻油1.2份、聚脂肪酸酯1.2份、酚紅鈉1.2份和去離子水100份。
另，所述基礎培養基還包括5份胺基酸，所述胺基酸以重量組分計，由以下組分組成：l-鹽酸精氨酸8份、l-鹽酸胱氨酸6份、l-絲氨酸5份、甘氨酸4份、l-鹽酸組氨酸5份、l-異亮氨酸12份、l-亮氨酸10份、l-鹽酸賴氨酸16份、l-甲硫氨酸3份、l-苯丙氨酸6份、l-蘇氨酸9份、l-色氨酸2份、l-酪氨酸6份和l-纈氨酸10份。
再，所述基礎培養基還包括3份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計，由以下組分組成：胰島素生長因子4份、白介素64份、白介素103份、白介素125份、tnf-β8份、gm-csf3份。
進一步的，所述基礎培養基以重量組分計，還包括0.006份青黴素和0.01份的鏈黴素。並且，所述青黴素選自10000u/ml，所述鏈黴素選自10000μg/ml。此外，所述胰蛋白酶中還包含0.05%的edta。
實施例4
一種mcf-7乳腺癌細胞擴大培養的方法，包括以下步驟：用移液槍將mcf-7乳腺癌細胞專用培養基吸盡，加入4mlpbs洗滌細胞3次，向10cm細胞培養皿中加入1ml0.38%的胰蛋白酶，於37℃條件下消化4min，加入2ml的新鮮的mcf-7乳腺癌細胞專用培養基，使用移液槍吹打細胞培養皿底50次；將液體移至細胞離心管中，在1200g/min條件下離心4min，用移液槍去除上清液，加入3ml新鮮的mcf-7乳腺癌細胞專用培養基，使用移液槍上下吹打細胞45次；平均加入到6個細胞培養皿中，進行擴大培養。
其中，所述mcf-7乳腺癌細胞專用包括90%的基礎培養基以及10%的胎牛血清。所述基礎培養基以重量組分計，包括以下組分：葡萄糖82份、碳酸氫鈉25份、丙酮酸鈉16份、轉鐵蛋白5份、氯化鉀40份、無水硫酸鎂6份、氯化鈉78份、氯化鋰6份、無水磷酸二氫鈉12份、葉酸0.4份、肌醇1.2份、煙醯胺0.3份、無水氯化鈣28份、硝酸鐵0.2份、丁二酸8份、丁二酸鈉12份、d-泛酸鈣0.6份、酒石酸膽鹼0.8份、核黃素0.1份、鹽酸硫胺0.4份、鹽酸吡哆辛0.3份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.6份、亞麻油1.2份、聚脂肪酸酯0.8份、酚紅鈉1.3份和去離子水100份。
另，所述基礎培養基還包括5份胺基酸，所述胺基酸以重量組分計，由以下組分組成：l-鹽酸精氨酸5份、l-鹽酸胱氨酸8份、l-絲氨酸3份、甘氨酸4份、l-鹽酸組氨酸5份、l-異亮氨酸12份、l-亮氨酸7份、l-鹽酸賴氨酸10份、l-甲硫氨酸6份、l-苯丙氨酸8份、l-蘇氨酸9份、l-色氨酸2份、l-酪氨酸8份和l-纈氨酸8份。
再，所述基礎培養基還包括2份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計，由以下組分組成：胰島素生長因子3份、白介素65份、白介素103份、白介素125份、tnf-β8份、gm-csf5份。
進一步的，所述基礎培養基以重量組分計，還包括0.006份青黴素和0.01份的鏈黴素。並且，所述青黴素選自10000u/ml，所述鏈黴素選自10000μg/ml。此外，所述胰蛋白酶中還包含0.05%的edta。
以上所述僅是發明的幾個實施方式，應當指出，對於本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離發明原理的前提下，還可以做出若干改進，這些改進也應視為本發明的保護範圍。