一種脂質體疫苗製劑及其用途和生產IgG抗體的方法與流程

2023-09-12 20:57:40 2

本發明涉及脂質體疫苗領域，具體地，涉及一種脂質體疫苗製劑及其用途，以及一種生產IgG抗體的方法。
背景技術：
：相比較於傳統疫苗，合成疫苗安全、無毒、穩定，可以直接刺激機體產生特異性免疫反應。因此，合成疫苗更符合未來疫苗的發展方向。另外，近年來迅速發展起來的免疫分析方法具有特異性強，靈敏度高，分析容量大，方便快捷，成本低廉，適於現場批量檢測等優點，被廣泛應用於醫學，農學等各個領域。免疫分析是基於抗原、抗體的特異性識別反應的一種分析方法，核心是高質量的特異性抗體。建立免疫分析方法，製備出針對半抗原特異性強，親和力高的抗體是關鍵。所以，產生高特異性，高滴度，高親和力的IgG抗體是疫苗研究和免疫分析方法的核心。合成疫苗包括兩種類型：半合成疫苗和全合成疫苗。半抗原-蛋白複合物(hapten-protein)的半合成疫苗是目前產生IgG抗體最常見的方法。將半抗原與含有T細胞表位的蛋白共價連接，可以使半抗原被免疫系統識別，從而產生高親和力的IgG抗體。其中，蛋白載體包括匙孔血藍蛋白(KLH)，牛血清白蛋白(BSA)，雞卵白蛋白(OVA)，白喉CRM197蛋白等。半合成疫苗存在著一些缺點，比如偶聯位點不確定、偶聯率不穩定以及蛋白本身也會引起一定的免疫反應等。另外，半抗原-蛋白複合物的熱穩定性差，帶來保存和運輸的額外負擔。全合成的疫苗分子的研究近年來受到廣泛關注。經典的全合成疫苗分子由半抗原，輔助T細胞表位(Thepitope)肽和Toll樣受體(Tolllikereceptor,TLR)激動劑等三組分共價偶聯組成。TLR激動劑有激活抗原呈遞細胞和脂質體載體的作用。輔助T細胞表位用來獲得CD4T細胞的幫助，實現抗體類型從IgM到高親和力IgG的轉換。如果沒有輔助T細胞表位，疫苗分子只能引起一個短暫的、低親和力的、無免疫記憶的IgM抗體應答。據報導，將幾種不同Th表位構建在同一疫苗分子中，可以提高疫苗分子的免疫性能。另外，主要組織相容性複合體(majorhistocompatibilitycomplex，MHC)具有多形性，不同的個體需要不同的Th表位肽和MHC結合，所以普適的疫苗分子需要引入多個Th表位肽。細胞毒性T細胞表位(Tc)的共價引入也可以提高疫苗分子的免疫性能。但是，隨著組分的增加，有機合成的難度也增加，對於工業化生產造成巨大挑戰。近年來，α-半乳糖神經醯胺(α-galactosylceramide，簡稱αGalCer或者KRN7000)作為疫苗佐劑的研究逐漸受到關注。αGalCer是自然殺傷T細胞(NatureKillerTcell，NKTcell)激動劑。通常認為，構成機體免疫系統的淋巴細胞由三種細胞系組成，一是由胸腺產生的T細胞，二是由骨髓分化而來的產生抗體的B細胞，三是自然殺傷細胞(NK細胞)。NKT細胞是一類新型免疫T細胞，可以溝通先天性免疫和獲得性免疫，起到橋梁作用，在功能上既具有T細胞免疫調節功能，同時又兼具自然殺傷細胞(Naturekillercell，NKcell)的自然殺傷作用。T細胞識別的抗原是蛋白質，而NKT細胞識別的抗原是αGalCer等糖脂質。這是該免疫系統與通常的免疫系統重要的不同點。技術實現要素：現有技術中針對NKT細胞的脂質體疫苗是將半抗原與T細胞表位的蛋白或肽共價連接，T細胞表位不可或缺，但是上述連接方式偶聯位點不確定、效率低、存在一定毒性，為了克服上述缺陷，本發明提供了一種脂質體疫苗製劑，本發明的脂質體疫苗製劑能夠簡化疫苗分子結構同時保證產生高滴度、高親和力的IgG抗體，同時該疫苗製劑熱穩定好。具體地，本發明提供了一種脂質體疫苗製劑，所述製劑包括：(a)腫瘤相關的糖抗原或糖肽抗原；(b)連接單元；(c)式(1)-(3)所示的佐劑，其中，組分(a)腫瘤相關的糖抗原或糖肽抗原與組分(c)式(1)-(3)所示的佐劑在脂質體疫苗製劑中的共存關係有兩種：第一種為組分(a)與組分(c)通過組分(b)連接單元共價連接形成組分a-b-c，第二種為組分(a)與組分(b)共價連接，組分(a)與組分(b)共價連接形成的分子組分a-b與組分(c)通過混合自組裝為脂質體；在第一種以共價連接形成組分a-b-c的方式中，所述X為-O-、-NH-、-CH2-或-S-；在第二種混合自組裝的方式中，所述X為-OR1、-NHR2或-[-OCH2CH2O-]n1-OCH3，R1為-H、-(CH2)n2CH3、取代或未取代的苯環、取代或未取代的萘環，R2為R1、-COR1或-CONHR1，n1為0-20的整數，n2為0-10的整數；R*和R#各自獨立地為含有1-30個碳原子的碳基團和0-5個選自N、O、F、Br和Cl中至少一種的雜原子的結構，上述結構可以為直鏈狀的、支鏈狀的、環狀的、取代或未取代的、飽和或不飽和的結構；X』、W、Y和Z各自獨立地選自-CH2-、-NH-、-O-或-S-。本發明還提供了上述脂質體疫苗製劑在製備腫瘤相關藥物中的用途。本發明還提供了一種生產IgG抗體的方法，該方法包括使用上述脂質體疫苗製劑進行免疫反應。本發明具有以下優點：1)在簡化疫苗分子結構的同時保證產生高滴度，高親和力的IgG抗體。(2)該疫苗分子熱穩定性好，更易保存和運輸。本發明具有上述優點的原因可能是NKT細胞激動劑起到了以下三個作用：(1)脂質體載體；(2)激活抗原呈遞細胞(APCs)；(3)通過激活NKT細胞，提供B細胞幫助，產生與Th表位的相似的功能。和經典三組分全合成疫苗分子相比，NKT細胞激動劑可以起到Th表位和TLR激動劑的雙重功能；(4)本發明的疫苗設計方法對腫瘤相關糖抗原是有效的。值得指出的是，非人源糖類(比如：細菌多糖)用作疫苗抗原時，免疫系統能輕易的識別，隨後引發強烈的免疫反應。所以，非人源糖類的疫苗的研製難度比較容易。但是，人源糖類(比如：腫瘤相關糖)通常會產生免疫耐受，難以被免疫系統識別，無法刺激免疫系統產生相應的抗體。而本發明中的抗原端為腫瘤相關糖，它是腫瘤細胞表面異常表達的糖，與正常細胞表面的糖相比，僅存在鏈長變短，過度唾液酸化等區別，不易被免疫系統識別，不易引發免疫反應。本發明的脂質體疫苗製劑克服了上述免疫耐受的缺陷，能夠刺激免疫系統，實現IgM到IgG的抗體類型轉換，迅速產生高滴度的IgG抗體。本發明的其它特徵和優點將在隨後的具體實施方式部分予以詳細說明。附圖說明附圖是用來提供對本發明的進一步理解，並且構成說明書的一部分，與下面的具體實施方式一起用於解釋本發明，但並不構成對本發明的限制。在附圖中：圖1-圖3為實施例4中通過共價連接方式製備的脂質體疫苗的測試結果圖；圖4-圖5為實施例7中通過混合自組裝方式製備的脂質體疫苗的測試結果圖。具體實施方式以下對本發明的具體實施方式進行詳細說明。應當理解的是，此處所描述的具體實施方式僅用於說明和解釋本發明，並不用於限制本發明。在本文中所披露的範圍的端點和任何值都不限於該精確的範圍或值，這些範圍或值應當理解為包含接近這些範圍或值的值。對於數值範圍來說，各個範圍的端點值之間、各個範圍的端點值和單獨的點值之間，以及單獨的點值之間可以彼此組合而得到一個或多個新的數值範圍，這些數值範圍應被視為在本文中具體公開。本發明提供了一種脂質體疫苗製劑，所述製劑包括：(a)腫瘤相關的糖抗原或糖肽抗原；(b)連接單元；(c)式(1)-(3)所示的佐劑，其中，組分(a)腫瘤相關的糖抗原或糖肽抗原與組分(c)式(1)-(3)所示的佐劑在脂質體疫苗製劑中的共存關係有兩種：第一種為組分(a)與組分(c)通過組分(b)連接單元共價連接形成組分a-b-c，第二種為組分(a)與組分(b)共價連接，組分(a)與組分(b)共價連接形成的分子組分a-b與組分(c)通過混合自組裝為脂質體；在第一種以共價連接形成組分a-b-c的方式中，所述X為-O-、-NH-、-CH2-或-S-；在第二種混合自組裝的方式中，所述X為-OR1、-NHR2或-[-OCH2CH2O-]n1-OCH3，R1為-H、-(CH2)n2CH3、取代或未取代的苯環、取代或未取代的萘環，R2為R1、-COR1或-CONHR1，n1為0-20的整數，n2為0-10的整數。其中，在X基團中，所述取代的苯環和取代的萘環上的取代基的種類可以為C1-C5的烷基，苯環上取代基的個數可以為1個、2個、3個、4個或5個，萘環上的取代基的個數可以為1個、2個、3個、4個、5個、6個或7個。X』、W、Y和Z各自獨立地選自-CH2-、-NH-、-O-或-S-；需要說明的是，本發明中，基團一端或兩端的「-」表示化學鍵，可以與其它結構相連接。R*和R#各自獨立地為含有1-30個碳原子的碳基團和0-5個選自N、O、F、Br和Cl中至少一種的雜原子的結構，上述結構可以為直鏈狀的、支鏈狀的、環狀的、取代或未取代的、飽和或不飽和的結構。R*和R#各自獨立地表示含有1-30個碳原子的碳殘基，碳殘基可以為線性的碳鏈或帶支鏈的碳鏈，碳殘基中也可以含有碳環結構或雜環結構。碳殘基中也可以進一步含有雜原子例如N、O、S和/或功能性基團像滷素F、Cl、Br或包含有雜原子N、O和/或S的功能性基團或功能性基團例如雙鍵和三鍵。所述碳殘基或碳鏈中可以含有一個或多個碳碳雙鍵和/或一個或多個碳碳三鍵。碳環結構可以出現在碳殘基或碳鏈中。雜環結構可以出現在碳殘基或碳鏈中。所述「1-30個碳原子的碳殘基」指的是一個碳原子或2-30個碳原子的鏈，上述碳原子可以為鏈狀，也可以成環狀，也可以含有碳碳雙鍵或碳碳三鍵。進一步地，所述「1-30個碳原子的碳殘基」可以進一步被1-5個取代基Z1、Z2、Z3、Z4、Z5取代。如果所述1-30個碳原子的碳殘基不含有其它額外的取代基Z1、Z2、Z3、Z4、Z5，則認為是未取代。優選地，R*和R#各自獨立地為線性或支鏈狀的C1-C30的烷基殘基、線性或支鏈狀的C2-C30的烯基殘基、線性或支鏈狀的C2-C30的炔基殘基、C3-C30的碳環烷基殘基、C4-C30的環烷基殘基、C2-C30的雜環烷基殘基、或者是取代的含有1-5個取代基Z1、Z2、Z3、Z4、Z5的C1-C30的碳殘基。其中，Z1、Z2、Z3、Z4和Z5各自獨立地表示為：-OH、-OCH3、-OC2H5、-OC3H7、-O-cyclo-C3H5、-OCH(CH3)2、-OC(CH3)3、-OC4H9、-OPh、-OC2Ph、-OCPh3、-CH2-OCH3、-C2H4-OCH3、-C3H6-OCH3、-CH2-OC2H5、-C2H4-OC2H5、-C3H6-OC2H5、-CH2-OC3H7、-C2H4-OC3H7、-C3H6-OC3H7、-CH2-O-cyclo-C3H5、-C2H4-O-cyclo-C3H5、-C3H6-O-cyclo-C3H5、-CH2-OCH(CH3)2、-C2H4-OCH(CH3)2、-C3H6-OCH(CH3)2、-CH2-OC(CH3)3、-C2H4-OC(CH3)3、-C3H6-OC(CH3)3、-CH2-OC4H9、-C2H4-OC4H9、-C3H6-OC4H9、-CH2-OPh、-C2H4-OPh、-C3H6-OPh、-CH2-OC2Ph、-C2H4-OC2Ph、-C3H6-OC2Ph、-NO2、-F、-Cl、-Br、-COCH3、-COC2H5、-COC3H7、-CO-cyclo-C3H5、-COCH(CH3)2、-COC(CH3)3、-COOH、-COOCH3、-COOC2H5、-COOC3H7、-COO-cyclo-C3H5、-COOCH(CH3)2、-COOC(CH3)3、-OOC-CH3、-OOC-C2H5、-OOC-C3H7、-OOC-cyclo-C3H5、-OOC-CH(CH3)2、-OOC-C(CH3)3、-CONH2、-CONHCH3、-CONHC2H5、-CONHC3H7、-CONH-cyclo-C3H5、-CONH[CH(CH3)2]、-CONH[C(CH3)3]、-CON(CH3)2、-CON(C2H5)2、-CON(C3H7)2、-CON(cyclo-C3H5)2、-CON[CH(CH3)2]2、-CON[C(CH3)3]2、-NHCOCH3、-NHCOC2H5、-NHCOC3H7、-NHCO-cyclo-C3H5、-NHCOCH(CH3)2、-NHCOC(CH3)3、-NH2、-NHCH3、-NHC2H5、-NHC3H7、-NH-cyclo-C3H5、-NHCH(CH3)2、-NHC(CH3)3、-N(CH3)2、-N(C2H5)2、-N(C3H7)2、-N(cyclo-C3H5)2、-N[CH(CH3)2]2、-N[C(CH3)3]2、-N(CH3)2、-OCF3、-CH2-OCF3、-C2H4-OCF3、-C3H6-OCF3、-OC2F5、-CH2-OC2F5、-C2H4-OC2F5、-C3H6-OC2F5、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CH2Cl、-CH2Br、-CH2-CH2F、-CH2-CHF2、-CH2-CF3、-CH2-CH2Cl、-CH2-CH2Br。根據一種優選的實施方式，R*和R#各自獨立地為：乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基，癸基，十二烷基，十四烷基，順-9-十六碳烯基，順-9-十六碳烯基，順-6-十八烯基，順-9-十八烯基，順-11-十八烯，順-9-二十碳烯，順-11-二十碳烯，順-13-二十二烯基，順-15-二十四烯基，反-9-十八烯基，反-11-十八烯基，反-3-十九碳烯-1,9,12-十八碳二烯基，6,9,12-十八碳三烯基，8,11,14-二十碳三烯基，5,8,11,14-二十碳四烯基，7,10,13,16-二十二碳四烯基，4,7,10,13,16-二十二碳五烯基，9,12,15-十八碳三烯基，6,9,12,15-十八碳四烯基，8,11,14,17-二十碳四烯基，5,8,11,14,17-二十碳五烯基，7,10,13,16,19-二十二碳五烯基，4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯基，順-9-十六碳烯基，順-9-十八碳烯基，順-9-十八碳烯基，順-11-十八碳烯基，順-9-十八碳烯基，順-9-十八碳烯基，順-9-十八碳烯基，順-9-十八碳烯基，順-9-二十碳烯基，順-11-二十碳烯基，順-13-二十二碳烯基，順-15-二十四碳烯基，9,12-十八碳二烯基，6,9,12-十八碳三烯基，8,11,14-二十碳三烯基，5,8,11,14-二十碳四烯基，7,10,13,16-二十二碳四烯基，4,7,10,13,16-二十二碳五烯基，9,12,15-十八碳三烯基，6,9,12,15-十八碳四烯基，8,11,14,17-二十碳四烯基，5,8,11,14,17-二十碳五烯基，7,10,13,16,19-二十二碳五烯醯基，4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯基，1,2-二硫戊環-3-戊烷基，6,8-二噻烷辛烷基，二十二烷十七烷基，桐醇基，梓醇基，紫杉醇基，蒎烯基，視黃基，14-甲基十五烷基，9,10-環氧硬脂基，9,10-環氧十八烷-12-烯基，6-十八炔基，9-十八炔基，6-十八烯t10-十七碳烯-8-炔基，9-十八碳烯-12-炔基，t7,t11-十八碳二烯-9-炔基，t8,t10-十八碳二烯-12-炔基，二十碳四烯基，2-羥基二十四烷基，2-羥基-15-二十四烯基，12-羥基-9-十八烯基或14-羥基_二十碳烯基，6-十八炔基，t11-八-10-亞甲基十六烷基，冠醚芳基，CRS)磷酸酯6,8-雙(甲基硫烷基)-辛基，4,6-雙(甲基硫烷基)-烷基，2,4-雙(甲基硫烷基)-丁基，羥基乙烯基，蓖麻酸基，月桂基，桐油基，十一烷基，十二烷基，十六烷基，十八烷基，二十烷基，二十二烷基，二十四烷基，順-9-十四烯基，順9-十六烯基，順-6-十八烯基，順-9-十八烯基，順-9-二十碳烯基，順-11-二十碳烯基，順-13-二十二碳烯基，順-15-二十四碳烯基，9,12-十八碳二烯基，6,9,12-十八碳三烯基，8,11,14-二十碳三烯基，5,8,11,14-二十碳四烯基，7,10,13,16-二十二碳四烯基，4,7,10,13,16-二十二碳五烯基，9,12,15-十八碳三烯基，6,9,12,15-十八碳四烯酸，8,11,14,17-二十碳四烯酸，5,8，11,11,14-二十碳五烯酸，7,10,13,16,19-二十二碳五烯基，5,8,11-二十碳三烯基，1,2-二硫戊環-3-戊基，6,8-二噻烷辛基，桐油基，十四烷基，十四烷基，十四烷基，十一烷基，十一烷基，十一烷基，十一烷基，十一烷基，十一烷基，十一烷基，十二烷基，t11-十八烯-9-炔基，9-十八炔基，6-十八烯-9-炔基，t10-十七烯-8-炔基，9-十八烯-12-炔基，t7,t11-辛二烯-9-炔基，t8,t10-十八碳二烯-12-炔基，5,8,11,14-二十碳四烯基，2-羥基二十四烷基，2-1-羥基-15-四-亞烯基，12-羥基-9-十八碳烯基和14-羥基-11-二十碳烯基。根據另一個優選的實施方式，R*和R#各自獨立地被苯環取代，優選是被未取代的苯環取代。進一步地，所述苯環在R*或R#的取代位置位於R*或R#與式(1)-(3)所示結構連接位置的對位。根據一種更優選的實施方式，R*和R#相同，優選為線性的烷基殘基，更優選為線性的C10-C30的烷基殘基，最優選為線性的-C14H29殘基。在另一種更優選的實施方式中，R*和R#不相同，並代表不同的線性烷基殘基，優選地R*為線性C20-C30的烷基殘基，R#為線性C10-C19的烷基殘基，更優選地，R*為線性-C25H51殘基，R#為線性-C14H29殘基。在另一種更優選的實施方式中，R*和R#不相同，並代表不同的線性烷基殘基，優選地R*為線性C1-C10的烷基殘基，R#為線性C10-C19的烷基殘基，更優選地，R*為線性-C4H9殘基，R#為線性-C14H29殘基。在另一種更優選的實施方式中，R*為殘基，R#為線性-C14H29殘基；其中左側的波浪線表示式(1)-(3)所示的佐劑結構中除R*外的其他部分，下同。在另一種更優選的實施方式中，R*表示為殘基，R#為線性-C14H29殘基；在另一種更優選的實施方式中，R*表示為-(CH2)9-CH＝CH-CH2-CH＝CH-(CH2)4-CH3殘基，R#為線性-C14H29殘基；在另一種更優選的實施方式中，R*表示為線性-C9H19殘基，R#為線性-C14H29殘基在另一種更優選的實施方式中，R*和R#不相同，並代表不同的線性烷基殘基，R*進一步被苯環取代，優選地，R*表示為一個苯環取代的線性C1-C10的烷基殘基，R#為線性C10-C19的烷基殘基；更優選地，R*表示為線性的-C6H12-Ph殘基，R#為線性-C14H29殘基。在另一種更優選的實施方式中，R*和R#不相同，並代表不同的線性烷基殘基，優選地R*為線性C20-C30的烷基殘基，R#為線性C1-C10的烷基殘基；更優選地，R*為線性-C25H51殘基，R#為線性-C5H11殘基。在本發明中，所述腫瘤相關的糖抗原指的是：腫瘤細胞表面過量表達的一些異常的糖鏈，與正常細胞的正常糖鏈相比，腫瘤細胞表面的異常糖鏈通常以鏈長變短，過度唾液酸化為特徵，稱之為腫瘤相關糖抗原(tumor-associatedcarbohydrateantigens,TACAs)。所述腫瘤相關的糖肽抗原指的是與肽鏈連接的腫瘤相關的糖抗原。其中，常見的腫瘤相關的糖抗原可以包含但不限於以下一種或多種：Tn、TF、STn、GD2、GD3、GM2、GM3、GloboH、Lex、Ley、KH-1。部分腫瘤相關的糖抗原的結構式如下所示：腫瘤相關的糖肽抗原可以為以下種類：AFP，輔肌動蛋白(alpha-actinin-4)，ARTC1，BAGE，BCR-abl,B-RAF,CA15-3，CA19-9，CA-125，CASP-5，CASP-8，β-連環蛋白(beta-catenin)，癌胚抗原(carcinoembryonic)，修飾的癌胚抗原(modifiedcarcinoembryonicantigen)，癌相關突變粘蛋白(carcinoma-associatedmutatedmucins)，CDC27,CDK4，CDKN2A，CEA，嗜鉻粒蛋白A(chromograninA)，COA-1，細胞周期蛋白依賴性激酶-4(cyclindependentkinase-4)，EFTUD，伸長因子2(elongationfactor2)，生長因子受體vI11(growthfactorreceptorEGFRvI11)，EB病毒EBNA基因產物(EpsteinBarrVirusEBNAgeneproduct)，ETA，ETV6-AML1融合蛋白，FLT3-ITD，FN1，GAGE，神經節苷脂(gangliosides)，GPNMB，gp75/TRP-1，gp100，H1FT，HAGE，HERV-K-MEL，HIP-55，HLA-A2，HLA-A11，hsp70-2，KIAAO205，驅動蛋白2(kinesin2)，KK-LC-1，KLK-4，KM-HN-1，KSA，LAGE，LDLR-巖藻糖基轉移酶AS融合蛋白(LDLR-fucosyltransferaseASfusionprotein)，MAGE，乳腺珠蛋白-A(mammaglobin-A)，MART-1/MelanA，MART-2，ME1，肌球蛋白1類(myosincalss1)，MUC1，MUM，MUM-2，MUM-3，NA-88，NCAM-180，neo-PAP，NFYC，NY-BR，NY-ESO-1，OA1，OGT，OS-9，p15，p21-ras，乳頭瘤病毒E7(papillomavirusE7)，乳頭瘤病毒E6(papillomavirusE6)，PRDX5，PTPRK，PSA，PSMA，RAGE，K-ras，N-ras，RAB38，RBAF600，SAGE，SIRT2，SNRPD1，sp17，SYT-SSX1融合蛋白(SYT-SSX1fusionprotein)，SYT-SSX2融合蛋白(SYT-SSX2fusionprotein)，TA90，TAG，TGF-β1抗凋亡因子(TGF-β1anti-apoptoticfactor)，TGF-βRII，甲狀腺球蛋白(thyroglobulin)，TRAG-3，磷酸丙糖異構酶(triosephosphateisomerase)，TRP2，TRP2-INT2，腫瘤蛋白D52(tumorproteinD52)，酪氨酸酶(tyrosinase)，WT1，以及上述抗原的片段，衍生物及其兩個以上抗原的組合。優選地，所述糖肽抗原為MUC-1，其結構如下所示：其中，GTSAPDTRRAP均為胺基酸殘基。在第一種以共價連接(組分a-b-c)的方式中，所述佐劑可以為以下結構：需要說明的是，上述結構式中的虛線表示化學鍵，表示佐劑與連接單元連接的化學鍵。在第二種混合自組裝的方式中，所述佐劑可以為：其中，R1為-H、-(CH2)n2CH3、取代或未取代的苯環、取代或未取代的萘環；n1為0-20的整數，n2為0-10的整數；所述-OH的位置可以根據式(1)-式(3)的佐劑中的-OH的位置進行確認；R*和R#各自獨立地為含有1-30個碳原子的碳基團和0-5個選自N、O、F、Br和Cl中至少一種的雜原子的結構，上述結構可以為直鏈狀的、支鏈狀的、環狀的、取代或未取代的、飽和或不飽和的結構；X』、W、Y和Z各自獨立地選自-CH2-、-NH-、-O-或-S-；優選地，所述佐劑可以為以下結構：R*和R#各自獨立地為含有1-30個碳原子的碳基團和0-5個選自N、O、F、Br和Cl中至少一種的雜原子的結構，上述結構可以為直鏈狀的、支鏈狀的、環狀的、取代或未取代的、飽和或不飽和的結構；X』、W、Y和Z各自獨立地選自-CH2-、-NH-、-O-或-S-。進一步優選地，所述佐劑的具體結構為：在第一種以共價連接的方式中，組分(a)與組分(c)通過組分(b)連接單元共價連接，其中，連接單元(b)用L表示，進一步表示為-L1-L2-，-L2-，-L2-L3-或-L1-L2-L3-。其中，L1可以選自以下結構中的一種：其中，x為1-60的整數；Y*表示一個鍵，-NH-，-O-，-S-，-S-S-；在本發明中，虛線表示化學鍵。L2為-CH2-、-C2H4-、-C3H6-、-C4H8-、-C5H10-、-C6H12-、-C7H14-、-C8H16-、-C9H18-、-C10H20-、-CH(CH3)-、-C[(CH3)2]-、-CH2-CH(CH3)-、-CH(CH3)-CH2-、-CH(CH3)-C2H4-、-CH2-CH(CH3)-CH2-、-C2H4-CH(CH3)-、-CH2-C[(CH3)2]-、-C[(CH3)2]-CH2-、-CH(CH3)-CH(CH3)-、-C[(C2H5)(CH3)]-、-CH(C3H7)-、-(CH2-CH2-O)n-CH2-CH2-、-CO-CH2-、-CO-C2H4-、-CO-C3H6-、-CO-C4H8-、-CO-C5H10-、-CO-C6H12-、-CO-C7H14-、-CO-C8H16-、-CO-C9H18-、-CO-C10H20-、-CO-CH(CH3)-、-CO-C[(CH3)2]-、-CO-CH2-CH(CH3)-、-CO-CH(CH3)-CH2-、-CO-CH(CH3)-C2H4-、-CO-CH2-CH(CH3)-CH2-、-CO-C2H4-CH(CH3)-、-CO-CH2-C[(CH3)2]-、-CO-C[(CH3)2]-CH2-、-CO-CH(CH3)-CH(CH3)-、-CO-C[(C2H5)(CH3)]-、-CO-CH(C3H7)-或-CO-(CH2-CH2-O)n-CH2-CH2-；n為1-60的整數；L3為-CO-、-O-CO-、-NH-CO-、-NH(C＝NH)-、-SO2-、-O-SO2-、-NH-、-NH-CO-CH2-。在第二種混合自組裝的方式中，所述連接單元(b)可以用L或L-L#表示，其中，如果L中不帶有C10-C100的脂肪鏈，連接單元(b)用L-L#表示，L#表示為帶有C10-C100的脂肪鏈的結構。如果L中帶有C10-C100的脂肪鏈，則連接單元(b)可以表示為L。L可以為上文中描述的各種結構，唯一不同的是，L的一端與組分(a)連接，另一端則用氫原子補齊。例如，另一端可以表示為-YH或-CH3。其中，所述C10-C100的脂肪鏈指的是碳原子個數為10-100個，且不含有除烷基外的取代基和雜原子。而除了C10-C100的脂肪鏈的結構，L#還可以含有或者不含有其它結構，其它的結構沒有特別的限定，可以為各種化學結構。另外，C10-C100的脂肪鏈可以位於組分(b)的側鏈位置上或者碳骨架上，當C10-C100的脂肪鏈位於碳骨架上時，C10-C100的脂肪鏈是碳骨架的端尾。在本發明中，所述L、L1、L2和L3的方向沒有限定，由於L1、L2和L3均有兩個鍵與其它結構相連，所以均可以有兩種連接方式，L也可以有兩種連接方式。舉例來說，L2為-CH2-CH(CH3)-、L3為-NH-CO-，L為-L1-L2-L3，則L可以有以下幾種結構：在第一種共價連接的方式中，L與組分(a)和(c)連接時，左右方向也沒有限制，原則與上文描述相同。虛線表示L與組分(a)和(b)連接的化學鍵。在第二種混合自組裝的方式中，則遵循組分(b)的C10-C100的脂肪鏈端不與組分(a)連接，即C10-C100的脂肪鏈端暴露在外的原則。如果C10-C100的脂肪鏈位於組分(b)的側鏈位置上，則連接方向沒有限制。如果C10-C100的脂肪鏈位於組分(b)的碳骨架位置上，則組分(b)的非脂肪鏈端與組分(a)連接。根據一種具體的實施方式，組分(a)、(b)和(c)以共價連接方式連接時，疫苗分子優選為以下結構：在組分(a)、(b)和(c)以共價連接方式連接時，組分(a)、(b)和(c)的含量的摩爾比為1：1：1。根據另一種具體的實施方式，組分(a)和(b)通過進行共價連接，連接產物(組分a-b)和(c)通過混合自組裝方式，組分a-b和組分(c)的含量的摩爾比為1：0.01-10，優選為1：0.1-10。進行混合的組分a-b和組分(c)的結構分別如下所示：其中，組分(a)為STn，組分(b)的右端為βGalCer，組分(b)為βGalCer和共價連接方式中的連接單元連接的產物，組分(c)選自圖示結構中的至少一種。在本發明中，所述混合自組裝的方式可以為各種常規方式，例如可以包括：攪拌、渦旋、振蕩或反覆顛倒等。在本發明中，除了組分a-b-c的疫苗分子，或者組分a-b和組分(c)混合自組裝形成的混合物外，所述脂質體疫苗製劑中還包括：(d)脂質載體，所述脂質載體可以為本領域的各種疫苗製劑中使用的脂質載體，例如，可以為膽固醇、1,2-二硬脂醯基-Sn-丙三基-3-磷酸膽鹼(DCPC)和1,2-二油醯基卵磷脂(DOPC)中的一種或多種。優選地，所述脂質載體為膽固醇和1,2-二硬脂醯基-Sn-丙三基-3-磷酸膽鹼按照摩爾比0.1-10:1的比例形成的混合物；優選地，所述脂質載體為膽固醇和1,2-二油醯基卵磷脂按照摩爾比0.1-10:1的比例形成的混合物；優選地，所述脂質載體為膽固醇、1,2-二油醯基卵磷脂和1,2-二硬脂醯基-Sn-丙三基-3-磷酸膽鹼按照摩爾比0.1-10:0.1-10:1的比例形成的混合物。在第一種共價連接的方式中，組分a-b-c、膽固醇和1,2-二硬脂醯基-Sn-丙三基-3-磷酸膽鹼的摩爾比可以在較大範圍內變動，例如可以為1：0.1-100：0.1-100，優選為1：1-100：1-100。其中，1,2-二硬脂醯基-Sn-丙三基-3-磷酸膽鹼可以替換為相同摩爾數的1,2-二油醯基卵磷脂或相同摩爾數的1,2-二硬脂醯基-Sn-丙三基-3-磷酸膽鹼與1,2-二油醯基卵磷脂的混合物。在第二種混合自組裝的方式中，組分a-b、組分(c)、膽固醇和1,2-二硬脂醯基-Sn-丙三基-3-磷酸膽鹼的摩爾比可以在較大範圍內變動，例如可以為1：0.01-100：0.1-100：0.1-100，優選為1：0.1-10：1-10：1-10。其中，1,2-二硬脂醯基-Sn-丙三基-3-磷酸膽鹼可以替換為相同摩爾數的1,2-二油醯基卵磷脂或相同摩爾數的1,2-二硬脂醯基-Sn-丙三基-3-磷酸膽鹼與1,2-二油醯基卵磷脂的混合物。在本發明中，所述脂質體疫苗製劑優選經過凍幹製成凍乾粉以及凍乾粉在鹽水中重建的過程。所述凍幹和重建均可以為本領域的常規選擇，可以為各種疫苗凍幹和重建的常規操作。所述鹽水是氯化鈉和4-羥乙基哌嗪乙磺酸的水溶液，氯化鈉的濃度是0.15M，4-羥乙基哌嗪乙磺酸的濃度是0.02M。根據一種具體的實施方式，所述凍幹的過程可以包括：將膽固醇和1,2-二硬脂醯基-Sn-丙三基-3-磷酸膽鹼(DCPC)以及疫苗分子溶解於二氯甲烷：甲醇(v/v,1:1)的混合液中，超聲10min後凍幹。重建的過程可以包括：脂質體疫苗溶解於鹽水中，超聲10min即可注射。本發明還提供了上述脂質體疫苗製劑在製備腫瘤相關藥物中的用途。本發明還提供了一種生產IgG抗體的方法，該方法包括使用上述脂質體疫苗製劑進行免疫反應。以下將通過實施例對本發明進行描述。在實施例中，所使用的原料均可以商購獲得。實施例1本實施例用於說明(a)腫瘤相關的糖抗原STn(化合物S1，保護基保護的STn抗原)、以及上述糖抗原與連接單元(化合物4)共價連接。將化合物3(200mg)溶於二氯甲烷/甲醇(v/v1:1)中，加入鈀碳後，通入氫氣，攪拌1-2h，硅藻土過濾，濾液減壓除去溶劑，得到產物S1。將S1溶於CH3CN，加入己二酸對硝基苯酚酯(化合物4，連接臂)，室溫條件下反應過夜，矽膠柱色譜分離，洗脫劑比例為二氯甲烷/甲醇＝20：1，得到產物5(180mg)無色油狀液體。上述產物5即為腫瘤相關的糖抗原STn與連接臂共價連接的產物。產物5的表徵數據為：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(d,J＝9.2Hz,2H),7.23(d,J＝9.2Hz,2H),5.51(dd,J＝7.6,1.5Hz,1H),5.36(dd,J＝6.9,2.7Hz,1H),4.84(d,J＝3.6Hz,1H),4.53(dd,J＝9.3,1.5Hz,1H),4.30(dd,J＝12.2,2.6Hz,2H),4.27–4.16(m,2H),4.01–3.93(m,2H),3.90(s,1H),3.83(dd,J＝12.8,6.0Hz,2H),3.76(s,3H),3.73–3.65(m,4H),3.58(d,J＝8.3Hz,4H),3.52–3.46(m,2H),3.45–3.38(m,1H),3.37(s,1H),3.30(s,1H),2.80(dd,J＝11.8,3.3Hz,1H),2.59(t,J＝14.5Hz,2H),2.41(s,3H),2.26–2.16(m,2H),2.06(dd,J＝7.6,3.2Hz,6H),1.97(d,J＝5.0Hz,6H),1.77–1.63(m,4H)；13CNMR(100MHz,CDCl3)δ172.77,172.23,171.94,171.00,170.91,170.29,169.88,168.21,155.23,153.44,145.02,125.00,122.35,99.09,97.47,77.32,77.00,76.68,75.60,74.56,71.70,69.85,69.67,69.53,69.05,68.63,68.21,66.53,64.16,62.93,58.66,53.11,50.19,38.98,35.80,35.63,33.72,24.67,24.49,23.97,22.95,20.94,20.70,20.60；MS(MALDI-TOF)calcd.forC43H58N4O24Na+[M+Na]+1037.3339,found1037.3459。實施例2本實施例用於說明本發明的用於共價連接的佐劑S9α、S10α、S11α、S12α和S13α及其製備方法將化合物S2和S3加入裝有在乾燥分子篩的反應瓶中，加入乾燥的四氫呋喃，攪拌一個小時後冷卻至-20℃，加入BF3·Et2O溶液，並在該溫度條件下保持2h。反應結束後用乙酸乙酯稀釋，用硅藻土過濾。加入飽和碳酸氫鈉溶液除去BF3·Et2O，產物通過矽膠柱分離，洗脫劑比例是石油醚/乙醚4:1，得到產物S4α和S4β。將S4α溶解在體積比為乙酸/水/四氫呋喃(v/v/v8:2:5)的體系中，60℃條件下攪拌3-4h，得到產物S5α，減壓除去溶劑，再加入三甲基磷的四氫呋喃溶液攪拌3-5h，得到產物S6α，再將製備好的C25H51COCl溶解於乾燥的二氯甲烷中加入，在0℃條件下加入三乙胺，半小時後反應結束，減壓除去溶劑，後通過矽膠柱分離得到產物S7α，洗脫劑比例為二氯甲烷/甲醇＝10:1。產物S7α的表徵數據為：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.27(ddt,J＝19.0,11.8,5.6Hz,20H),5.85(d,J＝8.8Hz,1H),4.82(d,J＝3.5Hz,1H),δ4.78–4.63(m,4H),4.62–4.53(m,2H),4.52–4.44(m,2H),4.33(d,J＝7.6Hz,1H),4.00(s,1H),3.82(ddd,J＝23.4,11.8,5.0Hz,5H),3.73–3.62(m,3H),3.56–3.47(m,1H),2.72(s,1H),2.64(s,1H),1.95–1.81(m,2H),1.24(d,J＝6.1Hz,72H),0.88(t,J＝6.6Hz,6H).13CNMR(100MHz,CDCl3)δ173.20,138.48,138.37,138.17,137.91,128.51,128.43,128.41,128.38,127.96,127.94,127.90,127.88,127.85,127.77,127.72,127.65,99.44,80.03,79.23,77.52,75.80,73.49,73.10,72.50,71.76,69.80,69.26,68.39,62.75,50.49,36.78,31.93,30.10,29.78,29.73,29.71,29.68,29.66,29.61,29.45,29.38,29.37,25.76,25.72,22.70,14.14。ESI-MScalcd.forC78H124NO9+[M+H]+1219.02。將得到的S7α(1.27g)溶於乾燥的二氯甲烷中，加入對甲苯磺醯氯和三乙胺，室溫攪拌3h，待原料消失後，加入飽和的氯化銨溶液調節到至中性，用二氯甲烷萃取，用無水硫酸鈉乾燥有機層，減壓除去溶劑矽膠柱分離得到產物白色固體S8(1.31g，92％)，洗脫劑比例為PE/EA＝3:1。產物S8的表徵數據為：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.69(d,J＝8.3Hz,2H),7.41–7.01(m,22H),5.84(d,J＝8.7Hz,1H),4.73(d,J＝3.4Hz,1H),4.72–4.60(m,4H),4.55(d,J＝11.5Hz,2H),4.47(d,J＝11.3Hz,2H),4.21(d,J＝8.4Hz,1H),4.18–4.01(m,2H),3.94(dd,J＝11.7,4.7Hz,2H),3.83–3.62(m,5H),3.60–3.41(m,1H),2.38(s,3H),1.95–1.87(m,2H),1.22(d,J＝6.8Hz,72H),0.85(t,J＝6.7Hz,6H).將得到的S8(15mg)溶於DMF中，加入疊氮鈉，80℃條件下攪拌過夜，冷卻到室溫後，萃取分離，無水硫酸鈉乾燥有機層，減壓除去溶劑，矽膠柱分離得到無色蠟狀物S9α(12mg，90％)，洗脫劑比例PE/EA＝5:1。產物S9α的表徵數據為：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.43–7.14(m,20H),5.90(d,J＝8.7Hz,1H),4.81(d,J＝2.4Hz,1H),4.77–4.72(m,2H),4.71(d,J＝4.8Hz,1H),4.67(d,J＝11.5Hz,1H),4.63–4.54(m,2H),4.49(dd,J＝11.6,6.1Hz,2H),4.28(dd,J＝8.5,5.9Hz,1H),3.90(s,1H),3.83(d,J＝5.3Hz,2H),3.81–3.72(m,4H),3.62–3.47(m,2H),3.29(dd,J＝12.6,4.9Hz,1H),2.47(d,J＝1.5Hz,1H),1.93(q,J＝7.3Hz,2H),1.24(d,J＝6.8Hz,72H),0.88(t,J＝6.7Hz,6H).13CNMR(100MHz,CDCl3)δ172.86,138.58,138.46,138.13,137.80,128.56,128.44,128.38,128.36,128.04,127.98,127.88,127.86,127.79,127.78,127.64,127.59,98.66,79.70,78.97,77.19,75.70,73.39,73.12,72.65,71.76,69.02,68.61,67.73,51.23,50.03,36.75,31.95,29.97,29.84,29.75,29.73,29.70,29.68,29.62,29.57,29.52,29.48,29.40,29.39,25.87,25.75,25.55,22.72,14.16；MS(MALDI-TOF)calcd.forC78H122N4NaO8+[M+Na]+1265.9155,found1265.9707。採用與S9α相同的路線合成佐劑S10α、S11α和S12α。S10α：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.53–7.16(m,20H),5.89(d,J＝8.8Hz,1H),4.84(d,J＝2.2Hz,1H),4.74(dt,J＝20.6,11.4Hz,4H),4.66–4.56(m,2H),4.52(dd,J＝11.6,7.7Hz,2H),4.31(d,J＝4.0Hz,1H),3.97–3.70(m,7H),3.66–3.47(m,2H),3.31(dd,J＝12.6,4.8Hz,1H),2.50(s,1H),1.94(q,J＝7.0Hz,2H),1.80–1.56(m,3H),1.59–1.36(m,4H),1.25(d,J＝6.8Hz,35H),0.88(dt,J＝7.0,3.4Hz,6H)；13CNMR(100MHz,CDCl3)δ172.75,138.55,138.43,138.11,137.76,128.50,128.38,128.32,128.30,127.98,127.90,127.81,127.78,127.72,127.70,127.58,127.52,98.62,79.70,79.07,77.15,75.69,73.31,73.09,72.62,71.75,68.57,67.70,51.18,50.01,36.70,31.88,31.83,29.98,29.78,29.67,29.62,29.48,29.39,29.34,29.32,29.28,25.81,25.67,22.65,22.63,14.08,14.06。MS(MALDI)calculatedforC62H90N4NaO8+(M+Na+)1041.6651,found1041.7104。S11α：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.45–7.20(m,20H),7.12(dd,J＝8.3,5.6Hz,2H),6.96(t,J＝8.7Hz,2H),6.01(d,1H),4.85(s,1H),4.82–4.67(m,4H),4.67–4.58(m,2H),4.54(dd,J＝11.5,8.6Hz,2H),4.33(d,J＝3.6Hz,1H),3.96–3.76(m,7H),3.66–3.53(m,2H),3.31(dd,J＝12.6,2Hz),2.57(t,J＝7.7Hz,2H),2.30(t,J＝7.5Hz,1H),1.97(d,J＝7.3Hz,2H),1.80–1.38(m,8H),1.28(t,J＝7.8Hz,31H),1.39-1.09(m,32H),1.01–0.80(m,3H)。13CNMR(100MHz,CDCl3)δ172.82,160.98(d,J＝242.8Hz),138.48,138.32(d,J＝3.3Hz),138.30,138.00,137.69,129.53(d,J＝7.7Hz),128.46,128.34,128.28,128.27,127.96,127.88,127.78,127.71,127.70,127.55,127.50,114.78(d,J＝21.0Hz),98.54,79.61,78.83,77.09,75.61,73.31,73.03,72.53,71.66,68.95,68.46,67.61,51.13,49.93,36.62,35.02,31.85,31.54,29.86,29.74,29.64,29.59,29.50,29.45,29.40,29.34,29.30,29.28,29.11,25.76,25.63,22.62,14.07。MS(MALDI)calculatedforC69H95FN4NaO8+(M+Na+)1149.7026,found1149.7732.S12α：1HNMR(600MHz,Chloroform-d)δ7.39–7.21(m,20H),7.12(d,J＝8.2Hz,2H),7.00(t,J＝8.6Hz,2H),6.95(dd,J＝9.2,4.4Hz,2H),6.88(d,J＝8.2Hz,2H),5.89(d,J＝8.7Hz,1H),4.83(d,J＝2.5Hz,1H),4.80–4.65(m,4H),4.66–4.55(m,2H),4.51(t,J＝10.9Hz,2H),4.35(t,J＝7.1Hz,1H),3.96–3.72(m,7H),3.62–3.50(m,2H),3.30(dd,J＝12.6,4.8Hz,1H),2.56(t,J＝7.8Hz,2H),2.48(s,1H),1.98–1.85(m,2H),1.74–1.46(m,10H),1.43(s,2H),1.42–1.11(m,29H),0.88(t,J＝7.0Hz,3H)。13CNMR(100MHz,CDCl3)δ172.80,159.76,157.36,155.34,153.36,138.58,138.45,138.11,137.84,137.78,129.54,128.55,128.42,128.36,128.34,128.03,127.93,127.84,127.76,127.75,127.62,127.56,120.07,119.99,118.31,116.24,116.01,98.62,79.75,79.12,77.20,77.17,75.70,73.37,73.12,72.65,71.78,68.97,68.57,67.73,51.20,50.05,36.72,35.18,31.91,31.62,30.02,29.82,29.70,29.66,29.60,29.55,29.51,29.42,29.36,29.29,25.85,25.69,22.68,14.11。MS(MALDI)calculatedforC75H99N4NaO9+(M+Na+)1241.7288,found1241.8127。S13α由於在脫去Bn的過程中雙鍵往往會被破壞，不宜合成S13α結構，應對S5α側鏈的疊氮集團還原成氨基後予以保護。所以合成αGalCer側鏈含不飽和雙鍵或三鍵衍生物及含有此類似結構化合物的應當先脫去Bn再連雙烯的側鏈。其路線修改為：將得到的S6溶於40mL3:1的二氧六環：水中，然後依次加入三乙胺(1.29mL，9.3mol)，Boc2O(1.2g，5.58mmol)，室溫攪拌3h，TLC檢測反應完全。減壓濃縮，以矽膠層析柱分離，石油醚:乙醚＝4:3洗脫，得到化合物S14(1.05g)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.50–7.19(m,20H),4.96(d,J＝9.2Hz,1H),4.89–4.65(m,5H),4.66–4.40(m,4H),4.03(s,1H),3.95(s,1H),3.90–3.44(m,9H),2.63(s,2H),1.72(s,3H),1.40(s,9H),1.24(d,J＝8.0Hz,23H),0.88(t,J＝6.8Hz,3H)。13CNMR(400MHz,CDCl3)δ155.42,138.45,138.39,138.23,137.91,128.44,128.30,128.28,128.26,127.90,127.86,127.73,127.66,127.52,127.49,99.14,79.54,79.37,75.78,73.35,73.28,72.50,71.70,69.56,69.22,68.49,62.70,51.68,31.86,29.65,29.60,29.58,29.31,28.30,25.73,22.63,14.09。MS(MALDI)calculatedforC57H81NNaO10+(M+Na+)962.5753,found962.6218。之後的兩步與上述步驟相同，得到化合物S15。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.44–7.22(m,20H),4.99(d,J＝9.2Hz,1H),δ4.86(d,J＝3.2Hz,1H),4.85–4.70(m,4H),4.68–4.60(m,2H),4.57(d,J＝11.5Hz,1H),4.50(d,J＝11.7Hz,1H),3.94(d,J＝2.8Hz,2H),3.92–3.74(m,5H),3.59(q,J＝7.4Hz,2H),3.32(dd,J＝12.6,5.1Hz,1H),2.63(d,J＝4.9Hz,1H),2.04–1.58(m,3H),1.47(s,9H),1.29(d,J＝6.6Hz,24H),0.92(t,J＝6.8Hz,3H)。13CNMR(100MHz,CDCl3)δ155.26,138.51,138.45,138.16,137.76,128.46,128.30,128.25,128.23,127.94,127.85,127.72,127.65,127.62,127.45,127.44,98.37,79.72,79.20,78.85,77.15,75.60,73.33,73.16,72.61,71.67,68.85,68.59,67.64,51.43,51.04,31.85,29.66,29.64,29.59,29.30,28.30,25.78,22.63,14.08。MS(MALDI)calculatedforC57H80N4NaO9+(M+Na+)987.5818,found987.6314。實施例3本實施例用於說明本發明提供的糖抗原、連接單元和佐劑依次共價連接的方法將S9(40mg)溶於5mL的溼甲醇加入PMe3(40μL)在室溫下攪拌3小時。減壓除去溶劑，並真空抽24h除去殘留物中的三甲基磷氧，得到白色固體(32mg，等量)。產物直接溶於1mL乾燥的CH3CN中，加入實施例1製備的化合物5(47mg)，室溫反應過夜，然後在真空濃縮。通過SephadexLH-20提純，洗脫劑二氯甲烷/甲醇(1:1，v/v)，得到產物7(62mg)，繼續下一步，產物7溶解在10mL的二氯甲烷/甲醇(1:1，v/v),加入Pd(OH)2/C(30mg)，H2氛圍下攪拌3h，硅藻土過濾除去氫氧化鈀碳。減壓除去溶劑後溶於4mL的四氫呋喃和甲醇的溶液中(v/v,1:1)，加入1mL的0.5mmol/L的甲醇鈉溶液在0℃攪拌1h，之後用Amberlite15(H+)樹脂調為中性，過濾後，產物濃縮後後溶解於4mL的四氫呋喃/水溶液中(1:1,v/v)，後加入0.5mLof2.0M的氫氧化鈉水溶液，室溫攪拌過夜用1.0M鹽酸調至中性.減壓除去溶劑，經過SephadexLH-20提純，洗脫劑為二氯甲烷/甲醇CH2Cl2/MeOH(v/v,1:1)得到白色固體產物1(20mg,5步產率51％)，MS(MALDI-TOF)calcd.forC79H146N5Na2O25+[M+2Na-H]+1611.0097，found1611.0509。疫苗分子2，3，4，5的合成路線如1。疫苗分子2：1HNMR(400MHz,Pyridine-d5)δ9.32(s,1H),8.99(d,J＝26.9Hz,2H),8.70(d,J＝7.9Hz,1H),8.54(d,J＝17.3Hz,1H),4.59(d,J＝11.6Hz,9H),4.50(d,J＝15.6Hz,7H),4.35(dt,J＝17.9,6.8Hz,11H),4.16–4.03(m,2H),3.92(s,4H),3.64(t,J＝20.0Hz,14H),2.70–2.42(m,4H),2.14(d,J＝5.1Hz,2H),2.03(s,2H),1.92(s,4H),1.53–1.01(m,44H),0.87(d,J＝8.1Hz,6H).MS(MALDI)calculatedforC63H114N5Na2O25+(M+2Na-H+)1386.7593,found1386.8218.疫苗分子3：1HNMR(400MHz,Pyridine-d5)δ9.39(s,2H),9.12–8.91(m,2H),8.56(s,2H),7.15(d,J＝8.7Hz,2H),5.31(d,J＝3.3Hz,2H),5.23(d,J＝6.7Hz,2H),5.11(s,2H),4.91(s,2H),4.78–4.54(m,6H),4.55–4.40(m,4H),4.34(d,J＝10.4Hz,7H),4.09(dd,J＝13.6,6.8Hz,2H),3.92(dt,J＝12.0,5.7Hz,4H),3.78–3.45(m,9H),2.61–2.41(m,7H),2.39–2.22(m,3H),2.13(s,3H),2.04(s,2H),1.92(s,8H),1.75–1.48(m,6H),1.23(d,J＝22.7Hz,31H),0.88(t,J＝6.6Hz,3H)。MS(MALDI)calculatedforC70H119FN5Na2O25+(M+2Na-H+)1494.7968,found1494.8469.疫苗分子4：1HNMR(400MHz,Pyridine-d5)δ9.00(s,1H),8.97–8.84(m,1H),8.80(d,J＝8.1Hz,1H),8.63(s,1H),7.33–7.26(m,2H),7.16(d,J＝8.5Hz,2H),7.12–7.05(m,4H),5.57–5.33(m,2H),5.26(t,J＝21.1Hz,2H),5.05(s,2H),4.86–4.17(m,20H),4.16–3.78(m,5H),3.79–3.31(m,9H),2.68–2.40(m,7H),2.21–1.99(m,5H),1.87(d,J＝30.1Hz,8H),1.61(t,J＝7.6Hz,5H),1.49–1.02(m,45H),0.88(t,J＝6.6Hz,3H)。MS(MALDI)calculatedforC76H123FN5Na2O26+(M+2Na-H+)1586.8230,found1586.8019.疫苗分子5：1HNMR(400MHz,Pyridine-d5)δ9.29(s,1H),8.91(s,1H),8.80(d,J＝8.0Hz,1H),8.64–8.47(m,1H),5.22(d,J＝71.4Hz,2H),4.81(d,J＝7.7Hz,1H),4.77–4.51(m,4H),4.51–4.18(m,7H),4.18–3.80(m,4H),3.81–3.44(m,6H),2.47(d,J＝18.5Hz,4H),2.08(d,J＝38.4Hz,4H),1.90(s,5H),1.31(d,J＝24.4Hz,58H),0.89(t,J＝6.6Hz,6H).MS(MALDI)calculatedforC79H146N5Na2O25+(M+2Na-H+)1611.0097,found1611.0119疫苗分子6的合成路線自S15後與以上相似，不同的是在脫Bn之後在TFA條件下脫去Boc，再連上側鏈。疫苗分子6的表徵數據：1HNMR(400MHz,Pyridine-d5)δ9.00–8.85(m,2H),8.69(s,1H),5.62–5.47(m,12H),4.83–4.56(m,7H),4.58–4.17(m,14H),3.96(d,J＝6.9Hz,3H),3.80–3.38(m,6H),3.09–2.87(m,4H),2.73–2.40(m,3H),2.31(s,2H),2.24–2.03(m,4H),2.02–1.60(m,5H),1.53–1.01(m,53H),0.87(t,J＝4.7,2.5Hz,6H)。MS(MALDI)calculatedforC73H130N5Na2O25+(M+2Na-H+)1522.8845,found1522.9110。疫苗分子6的合成方法，其餘的疫苗分子1，2，3，4，5也適用。實施例4本實施例用於說明共價連接方式的脂質體疫苗的製備將1,2-二硬醯基-Sn-丙三基磷酸膽鹼，膽固醇和實施例3製備得到的疫苗分子按照摩爾比5:4:1溶解於二氯甲烷：甲醇(v/v,1:1)中，超聲10分鐘，凍幹。小鼠免疫前，將制好的脂質體溶於含有氯化鈉的4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩衝液中，緩衝液組分濃度分別為0.15M(氯化鈉)和0.02M(4-羥乙基哌嗪乙磺酸)，STn抗原的濃度為10μg/mL，超聲10min後注射。實施例5本實施例用於說明用於混合自組裝方式的佐劑的製備方法下列佐劑的合成方法參照文獻合成：Li,X.；Fujio,M.；Imamura,M.；Wu,D.；Vasan,S.；Wong,C.-H.；Ho,D.D.；Tsuji,M.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.2010,107(29),13010–13015.實施例6本實施例用於說明本發明提供的糖抗原與連接單元共價連接的方法糖抗原與連接單元共價連接合成化合物7：化合物S7β.化合物S7β從化合物S4β(2.43g,2.55mmol)製備得到，合成方法類似於從化合物S4α製備化合物S7α，三步反應後得到化合物S7β為1.35g，三步產率為33.7％。1HNMR(400MHz,CDCl3)1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.58–6.85(m,20H),5.89(d,J＝8.5Hz,1H),4.79(d,J＝11.2Hz,1H),4.75(d,J＝5.1Hz,1H),4.72(d,J＝4.7Hz,1H),4.69(s,2H),4.59(d,J＝4.8Hz,1H),4.56(d,J＝4.7Hz,1H),4.49(d,J＝11.5Hz,1H),4.38(d,J＝8.7Hz,1H),4.33(d,J＝7.7Hz,1H),4.05(dd,J＝10.5,5.2Hz,1H),3.99–3.86(m,2H),3.84–3.70(m,3H),3.66–3.59(m,1H),3.52(d,J＝13.7Hz,1H),3.51–3.45(m,1H),3.43–3.37(m,1H),1.83(q,J＝7.7Hz,2H),1.64(s,4H),1.43(d,J＝6.3Hz,4H),1.24(d,J＝9.3Hz,64H),0.88(t,J＝6.8Hz,6H).13CNMR(100MHz,CDCl3)δ172.92,138.54,138.41,137.63,128.52,128.38,128.37,128.02,127.96,127.85,127.75,127.70,127.64,127.62,104.11,80.63,80.47,78.96,78.84,77.20,75.13,74.43,73.14,72.50,71.99,68.82,67.58,62.70,53.39,50.82,50.18,36.65,31.92,30.25,29.84,29.73,29.71,29.69,29.67,29.65,29.59,29.39,29.36,29.35,29.33,26.00,25.64,22.68,14.10.ESI-MScalcd.forC78H123NNaO9+[M+Na]+1240.91,found1241.07.化合物S9β.化合物S9β從化合物S7β(0.774g,0.636mmol)製備得到，合成方法類似於從化合物S7α製備化合物S9α，兩步反應後得到化合物S9β為628mg，兩步產率為72％。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.52–6.73(m,20H),5.64(d,J＝7.9Hz,1H),4.90–4.54(m,5H),4.49(d,J＝12.6Hz,2H),4.38(d,J＝11.4Hz,1H),4.18(dd,J＝29.8,8.4Hz,3H),3.78(s,1H),3.66(s,2H),3.59–3.48(m,2H),3.40(s,3H),3.26–3.09(m,1H),1.77(d,J＝11.2Hz,3H),1.58(s,3H),1.35(d,J＝19.7Hz,4H),1.17(s,64H),0.80(d,J＝6.3Hz,6H)；13CNMR(100MHz,CDCl3)δ172.40,138.38,138.26,138.03,137.21,128.38,128.23,128.13,127.94,127.78,127.69,127.61,127.56,127.36,103.69,80.22,79.88,79.35,78.48,77.32,77.00,76.68,75.11,73.53,73.47,72.63,71.81,68.99,66.91,50.87,49.91,36.72,32.04,29.83,29.83,29.49,26.18,25.77,22.84,14.31.MS(MALDI-TOF)calcd.forC78H122N4NaO8+[M+Na]+1265.91,found1265.12.化合物7.化合物7從化合物S9β製備得到，合成方法類似於從化合物S9α製備化合物1，五步反應後得到化合物7為34mg，五步產率為48％。1HNMR(400MHz,C5H5N)δ9.29(s,1H),9.00–8.78(m,2H),8.67–8.44(m,2H),5.30(s,1H),5.13(s,2H),4.81(d,J＝7.7Hz,1H),4.75–4.65(m,2H),4.56(d,J＝21.8Hz,4H),4.39(qd,J＝19.1,11.0Hz,8H),4.22(t,J＝7.3Hz,1H),4.07(dd,J＝15.7,8.6Hz,3H),3.99–3.85(m,2H),3.75–3.48(m,8H),2.47(d,J＝18.5Hz,6H),2.13(s,4H),2.03(s,2H),1.90(s,6H),1.85–1.74(m,3H),1.73–1.60(m,2H),1.31(d,J＝24.4Hz,67H),0.89(t,J＝6.6Hz,6H).MS(MALDI-TOF)calcd.forC79H146N5Na2O25+[M+2Na-H]+1611.0097,found1610.9741.實施例7本實施例用於說明糖抗原與連接單元共價的連接產物組分(a-b)與佐劑混合自組裝脂質體疫苗製劑的方法將實施例6製備得到的組分a-b(化合物7)與實施例5製備得到的佐劑以及1,2-二硬醯基-Sn-丙三基磷酸膽鹼和膽固醇按照1:1:5:4的摩爾比溶解於二氯甲烷：甲醇(v/v,1:1)中，超聲10分鐘，凍幹。小鼠免疫前，將制好的脂質體溶於含有氯化鈉的4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩衝液中，緩衝液組分濃度分別為0.15M(氯化鈉)和0.02M(4-羥乙基哌嗪乙磺酸)，STn抗原的濃度為10μg/mL，超聲10min後注射。實施例8本實施例用於說明包被抗原的製備將產物3(20.0mg,0.012mmol)溶於4mL四氫呋喃和甲醇的溶液中(v/v,1:1)，加入1mL的0.5mmol/L的甲醇鈉溶液在0℃攪拌1h，之後用Amberlite15(H+)樹脂調為中性，過濾後，產物濃縮後後溶解於4mL的四氫呋喃/水溶液中(1:1,v/v)，後加入0.5mL的2.0M的氫氧化鈉水溶液，室溫攪拌過夜用1.0M鹽酸調至中性.減壓除去溶劑後，用3mL甲醇溶解，加入10mg鈀碳，H2氛圍下攪拌3h，硅藻土過濾後，濃縮後，溶於4mL二氯甲烷/甲醇/乙腈(v/v/v,2:1:1)，加入5倍摩爾量的己二酸二硒酯，加幾滴碳酸氫鈉水溶液，反應2h後用Amberlite15(H+)樹脂調為中性，減壓除去溶劑，用水萃取，濃縮後得到8mg無色透明固體8(產率36％)。取產物81.5mg溶於150μL的DMF，將3.25mg的BSA蛋白溶於1.35mLpH為7.5的PBS緩衝液中，混合後靜置24h後，用乙酸乙酯萃取後，離心後凍幹，放入-20℃冰箱保存。質譜表徵BSA連上11.6個STn抗原。實施例9本實施例用於說明動物免疫過程購買7周大的雌性BALB/c小鼠(購自武漢大學中南醫院動物中心)。免疫時間分別為第1天，第15天和第29天，注射方式為腹腔注射。取血方式為斷尾取血，取血時間為每次免疫注射後的14天。具體列於表1中。血液靜置1h後，離心取血清，存儲在-80℃冰箱。表1第0天第1天第14天第15天第28天第29天第42天取血1初次免疫取血2第二次免疫取血3第三次免疫取血4實施例10本實施例用於說明間接法測定血液中抗體含量的方法(1)包被：包被抗原STn-BSA，用pH＝9.0-9.6碳酸鹽緩衝液稀釋，抗原密度為0.02μg/孔，每孔100μL，置於4℃冰箱過夜。PBST滿孔洗滌三次，扣幹。(2)封閉：每孔加入100μL3％BSA的PBS緩衝液，37℃恆溫箱溫育1h，PBST滿孔洗滌三次，扣幹。(3)抗原抗體特異性結合：用0.1％BSA的PBS緩衝液稀釋血清，測IgG抗體時，稀釋倍數為400，1000，2000，4000，8000，16000，32000，64000；測IgM抗體時,稀釋倍數為100，200，400，800，1600，3200，6400，12800。每孔加入100μL稀釋液，設置空白和陰性對照。37℃恆溫箱溫育1h。PBST滿孔洗滌三次，扣幹。(4)加二抗：將羊抗鼠IgG-HRP溶於PBS緩衝液中，用0.1％BSA的PBS緩衝液稀釋至4000倍，混勻，每孔加入100μL稀釋液，37℃恆溫箱溫育1h。加IgM-HRP二抗操作與此相同。PBST滿孔洗滌三次，扣幹。(5)顯色：每孔加入50μL顯色液(OPD濃度1mg/mL，H2O2濃度為1.5μL/mL)，震蕩混勻，室溫下避光保存15min。(6)終止：每孔加入50μL終止液(2M的硫酸)，放入酶標儀中混勻後讀數，在490nm波長處測定各孔的吸光度值。圖1-圖3為實施例4中通過共價連接方式製備的脂質體疫苗的測試結果圖。圖4-圖5為實施例7中通過混合自組裝方式製備的脂質體疫苗的測試結果圖。在圖1中，橫坐標為各類型抗體的種類，縱坐標為各類型抗體的滴度，誤差線表示平均數標準誤差。其中，PBS為空白對照，STn-βGalCer(化合物7)為陰性對照，STn-αGalCer(化合物1)為實驗組。從圖1中可以看出，共價連接策略的疫苗分子STn-αGalCer可以有效的引發免疫系統實現IgM到IgG的抗體類型轉換，產生高滴度的IgG抗體。在圖2中，橫坐標為各類型抗體的種類，縱坐標為各類型抗體的滴度，誤差線表示平均數標準誤差。其中，PBS為空白對照，STn-βGalCer(化合物7)為陰性對照，STn-αGalCer(化合物1)為實驗組。從圖2中可以看出，STn-αGalCer引發產生的IgG抗體亞型主要為IgG1和IgG3。在圖3中，橫坐標為時間，縱坐標為各類型抗體的滴度，誤差線表示平均數標準誤差。其中，PBS為空白對照，STn-βGalCer(化合物7)為陰性對照，STn-αGalCer(化合物1)為實驗組。從圖3中可以看出，STn-αGalCer可以迅速的引發免疫系統實現IgM到IgG的抗體轉換。在圖4中，橫坐標是添加的不同佐劑，縱坐標是抗體滴度，誤差線表示平均數標準誤差。其中，PBS為空白對照。從圖4可以看出，混合自組裝方式製備的脂質體疫苗製劑也可以有效的激發免疫系統實現IgM到IgG的抗體類型轉換，產生高滴度的IgG抗體。在所用的佐劑中，αGalCer最佳。在圖5中，橫坐標是添加的不同佐劑，縱坐標是抗體滴度，誤差線表示平均數標準誤差。在圖5中，橫坐標是添加的不同佐劑，縱坐標是抗體滴度，誤差線表示平均數標準誤差。其中，PBS為空白對照。從圖5可以看出，IgG的亞型主要是IgG1和IgG3。當前第1頁1&nbsp2&nbsp3&nbsp