啤酒花有效部位用於製備預防和改善抑鬱症及其臨床症狀藥物的應用的製作方法

2024-04-07 03:27:05

專利名稱：啤酒花有效部位用於製備預防和改善抑鬱症及其臨床症狀藥物的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及天然植物提取及應用，具體是涉及啤酒花(Humunus LupuIus L)有效部位用於製備抗抑鬱症及其臨床症狀的藥物的應用。
背景技術：
抑鬱症是一種常見的精神疾病，主要表現為情緒低落，興趣減低，悲觀，思維遲緩，缺乏主動性，自責自罪，飲食、睡眠差等，嚴重者可出現自殺念頭和行為。抑鬱症發病率非常高，幾乎每7個成年人中就有I個抑鬱症患者。抑鬱症目前已成為給人類造成嚴重負擔的第二位重要疾病。在我國，抑鬱症發病率約為3% 5%，生活在大城市的白領們在高壓力高競爭的環境下已成為此病的高發人群。因此，從身體健康及生活習慣角度出發，一種可以長期服用而且安全性高的用於預防及改善抑鬱症的藥物的研製為人們所期待。
啤酒花(hops)，別名忽布、蛇麻花、香蛇麻花、酒花、野酒花，為桑科(Moraceae)潷草屬植物啤酒花(Humulus lupulus L.)的雌花序,原產歐洲,我國新疆有野生,東北、華北、山東等地有栽培。人類利用啤酒花的歷史已有2000多年，最初是作為助消化的藥品、香料和觀賞植物。公元8世紀初，德國開始將啤酒花用於啤酒生產，能賦予啤酒特有的香味、爽快的苦味，並能增加啤酒的防腐能力和非生物穩定性。清代末年，啤酒花被引入我國，開始種植栽培。
啤酒花亦是一種傳統藥用植物，性苦、平，具有健胃消食、抗菌消炎、安神利尿、抗結核等藥用功效，用於治療消化不良、浮腫、小便淋痛、失眠、痢疾、結核、麻風等。《中國藥典》1977年版上記載酒花的乙醇浸膏用於治療肺結核病和麻風病等症。啤酒花的化學成分主要有樹脂、揮髮油、黃酮及鞣質等。
近年來，對啤酒花提取物或其中含有的化合物藥理作用研究的報導多集中在抗菌、抗腫瘤、抗氧化、鎮靜和雌激素樣作用等方面，臨床應用主要在結核病、麻風病和內分泌紊亂方面，但以α酸、β酸和黃酮為活性成分的啤酒花有效部位對預防和改善抑鬱症及其臨床症狀的作用尚未報導。發明內容
本發明的一方面提供了一種從啤酒花中提取製備啤酒花有效部位的方法和以啤酒花有效部位為原料的藥物在預防、改善抑鬱症及其臨床症狀方面的新用途。
本發明的另一方面涉及包含啤酒花有效部位的藥物製劑。
本發明的又一個方面涉及包含啤酒花有效部位的藥物製劑的製備方法。
為解決本發明的技術問題，本發明採用如下技術方案:
一種從啤酒花中提取啤酒花有效部位的方法，其特徵在於包括以下步驟:
(I)將乾燥啤酒花粉碎，加入提取溶劑進行回流提取，合併提取液，過濾，減壓濃縮至無有機溶劑味後，再加入乙醇， 靜置過夜，取上清液，濃縮，得無有機溶劑味的濃縮液；
(2)將上述濃縮液，經大孔樹脂色譜柱吸附，用溶劑進行梯度洗脫，收集合併含有啤酒花有效部位的洗脫液，減壓濃縮，乾燥，即得啤酒花有效部位。
在一個優選的實施方式中，步驟(I)中使用的提取溶劑選自水、乙醇、甲醇、丙酮或它們的混合物；優選為水、乙醇、甲醇或它們的混合物，提取溶劑的濃度為優選50%至100% ;提取溶劑的用量為啤酒花重量的6至12倍；提取溫度為60°C至提取溶劑的沸點溫度；提取次數為2至4次；每次的提取時間為I至4小時；加入乙醇，使得乙醇濃度優選40%至 80%。
在另一個優選的實施方式中，步驟(2)中所述大孔吸附樹脂類型選自D101、AB-8、HP-20、HPD-100、X_5、DA-201、DM-301 或 NKA-8 等；優選 DlOl、AB-8 或 HP-20 大孔吸附樹脂；洗脫液選自不同濃度的醇與水的混合溶液或酮與水的混合溶液；優選為不同濃度的乙醇-水或甲醇-水溶液；大孔樹脂色譜柱採用梯度洗脫，先用10 30%乙醇-水或10 30%甲醇-水洗脫除去雜質後，再用95%乙醇-水或95%甲醇-水洗脫，即得啤酒花有效部位；得到啤酒花有效部位的乾燥方式選自減壓真空乾燥、冷凍乾燥、噴霧乾燥。
本發明所述的啤酒花有效部位包括α酸、β酸和黃酮，其中α酸主要由化合物_草酮(humulone)、類_草酮(cohumulone)、聚_草酮(adhumulone)組成，β酸主要由化合物蛇麻酮(Iupulone)、類蛇麻酮(colupulone)、聚蛇麻酮(adlupulone)組成,黃酮主要由化合物黃腐酌.(xanthohumol)和脫甲基黃腐酌.(desmethyIxanthohumol)組成。
本發明還涉及以啤酒花有效部位為原料藥製備的藥物製劑，所述製劑包括啤酒花有效部位以及藥學上可接受的載體和/或輔料，所述製劑可以為片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液、滴丸、微丸、注射劑等藥學上可以接受的藥物製劑形式。
所述包含啤酒花有效部位的藥物製劑可以利用本領域公知的方法製備得到。
本發明還以小鼠自主活動實驗，強迫遊泳實驗，懸尾實驗以及利血平誘導實驗，評價啤酒花有效部位對大鼠抑鬱模型行為學的影響。結果顯示，啤酒花有效部位具有較明顯的鎮靜作用，且對各種抑鬱行為表現出統計學上有意義的改善效果，並能夠拮抗利血平引起的體溫降低。基於上述結果，確認本發明所述的以α酸、β酸和黃酮為有效成分的啤酒花有效部位的新用途的成立。
根據上述實驗可以證明本發明提供啤酒花有效部位是一種安全性高，源於天然，具有預防和改善抑鬱症及其臨床症狀效果的植物提取物，可以用於製備可以長期服用、安全無毒副作用的藥物。


圖1為啤酒花有效部位的HPLC圖，其中測定方法為:檢測系統:Aglientl260 ;色譜柱:Phenomenex Luna C18 (4.6X250mm, 5 μ m);流動相:0.1% 甲酸水(A)-甲醇(B),洗脫條件為 0-3min(A: B = 55: 45) ;3_32min(A: B = 55: 45 — A: B = 5: 95);32-37min(A: B = 5: 95) ;37_45min(A: B = 5: 95— A: B = 55: 45) ;45_47min(A: B=55: 45);進樣量:1(^1^流速:1.0111171^11;檢測波長:37011111;柱溫:251:。
圖2是啤酒花有效部位對正常小鼠自主活動的影響結果圖。
具體實施方式
下面的實施例用於進一步說明本發明，但這並不意味著對本發明的保護範圍的任何限制。
實施例1啤酒花有效部位的製備
將乾燥啤酒花粉碎，加入6倍的50%乙醇回流提取4次，每次提取的時間依次為4，3，2，I小時，合併提取液，過濾，減壓濃縮至無醇味，加95 %乙醇，邊加邊攪拌，至乙醇濃度為50%，靜置過夜，取上清液，減壓濃縮至無乙醇味，上DlOl型大孔樹脂色譜柱吸附，分別用20%、95%乙醇洗脫，收集95%乙醇洗脫液，減壓回收有機溶劑，減壓乾燥，即得啤酒花有效部位。
實施例2啤酒花有效部位的製備
將乾燥啤酒花粉碎，加入10倍的80%乙醇回流提取3次，每次提取的時間依次為4，3，2小時，合併提取液，過濾，減壓濃縮至無醇味，加95 %乙醇，邊加邊攪拌，至乙醇濃度為70 %，靜置過夜，取上清液，減壓濃縮至無乙醇味，上AB-8型大孔樹脂色譜柱吸附，分別用10%、95%乙醇洗脫，收集95%乙醇洗脫液，減壓回收有機溶劑，噴霧乾燥，即得啤酒花有效部位。
實施例3啤酒花有效部位的製備
將乾燥啤酒花粉碎，加入12倍的95%甲醇回流提取3次，每次提取的時間依次為4，3，2小時，合併提取液，過濾，減壓濃縮至無醇味，加95 %乙醇，邊加邊攪拌，至乙醇濃度為80%，靜置過夜，取上清液，減壓濃縮至無乙醇味，上HP-20型大孔樹脂色譜柱吸附，分別用30%、95%甲醇洗脫，收集95%甲醇洗脫液，減壓濃縮回收有機溶劑，冷凍乾燥，即得啤酒花有效部位。
實施例1至3所得的啤酒花有效部位用於下列實驗，驗證其作用。
實施例4啤酒花有效部位對正常小鼠自主活動的影響
本實驗採用7周齡雄性昆明種小白鼠，由北京維通利華實驗動物技術有限公司購入。飼養溫度23±2°C，照明時間12小時/日(7:00 19:00開燈)。經飼養一周後進行實驗。將小鼠按體重隨機分為4組，每組10隻，分別為空白對照組(蒸餾水)、啤酒花低劑量組(50mg/kg)、啤酒花中劑量組(100mg/kg)和啤酒花高劑量組(200mg/kg)。受試藥物均於實驗前按10ml /kg體重溶解於蒸餾水中，灌胃給藥。小鼠給藥後立即放入小鼠自主活動記錄儀中，每間隔20min記錄IOmin小鼠自主水平活動次數(Locomotor counts)。共記錄5次即持續時間2h。實驗在安靜，室溫25°C房間內，於9:00至17:00之間進行。實驗結果如附圖2所示。
實驗結果顯示，啤酒花各劑量組具有降低小鼠自發運動強度的作用，特別是高劑量組對小鼠自主運動強度的降低作用具有統計學意義。說明啤酒花有效部位具有較明顯的鎮靜安神作用。
實施例5啤酒花有效部位對小鼠強迫遊泳實驗行為學的影響
應激負荷實驗使用動物為約為22g雄性昆明種小鼠，由北京維通利華實驗動物技術有限公司購入。飼養溫度23±2°C，照明時間12小時/日(7:00 19:00開燈)。經飼養一周後進行實驗。本實驗分三天進行，第一、二天為訓練日。即將遊泳箱中水加至滑輪中央，約18cm高度處，此水位能保證小鼠遊泳時不會藉助滑輪爬出箱外，也不會因夠不到滑輪而過分疲勞。水溫保持在22 23°C。訓練時將小鼠面向滑輪輕輕放入水中，使其遊泳lOmin，取出擦乾放回飼養籠中，連續訓練兩天。訓練過程中剔除掉過度興奮或抑制的小鼠。實驗日將小鼠按體重隨機分為4組，分別為正常組、啤酒花低劑量組(50mg/kg)、啤酒花中劑量組(100mg/kg)、啤酒花高劑量組(200mg/kg)，每組12隻小鼠。受試藥物均於實驗前按10ml/kg溶解於蒸餾水中，灌胃給藥。小鼠給藥20min後面向滑輪輕輕放入遊泳箱中，使其遊泳6min，採用計算機記錄後5min小鼠用前肢撥動滑輪的圈數。實驗在安靜，室溫25°C房間內，於9:00至17:00之間進行。
實驗結果顯示，在強迫遊泳引起小鼠絕望行為實驗中(表I)，灌胃給與100mg/kg和200mg/kg啤酒花有效部位均能夠顯著增加小鼠前肢撥動轉輪旋轉的圈數，且兩個劑量下對旋轉圈數的增加作用與空白對照組均具有顯著的統計學差異(P < 0.05)。
表I啤酒花有效部位對小鼠強迫遊泳實驗的影響
權利要求
1.啤酒花有效部位用於製備預防和改善抑鬱症及該疾病引起的各種臨床症狀藥物的用途，所述的啤酒花有效部位的製備方法，其特徵在於包括以下步驟: (1)將乾燥啤酒花粉碎，加入提取溶劑進行回流提取，合併提取液，過濾，減壓濃縮至無有機溶劑味後，再加入乙醇，靜置過夜，取上清液，濃縮，得無有機溶劑味的濃縮液； (2)將上述濃縮液，經大孔樹脂色譜柱吸附，用溶劑進行梯度洗脫，收集合併含有啤酒花有效部位的洗脫液，減壓濃縮，乾燥，即得啤酒花有效部位。
2.根據權利要求1所述的方法，其中步驟⑴中使用的提取溶劑選自水、乙醇、甲醇、丙酮或它們的混合物；提取溶劑的用量為啤酒花重量的6至12倍；提取溫度為60°C至提取溶劑的沸點溫度；提取次數為2至4次；每次的提取時間為I至4小時。
3.根據權利要求1所述的方法，其中步驟(2)中所述大孔吸附樹脂類型為D101、AB-8、HP-20、HPD-1OO, X_5、DA-201、DM-301或NKA-8 ;洗脫液選自醇與水的混合溶液或酮與水的混合溶液；使用的乾燥方式為減壓真空乾燥、噴霧乾燥或冷凍乾燥。
4.根據權利要求1至3任意一項所述的方法，其中得到的啤酒花有效部位，其特徵在於:所述的啤酒花有效部位含有活性成分α酸、β酸和黃酮。
5.根據權利要求1所述的用途，其特徵在於:所述的啤酒花有效部位含有活性成分α酸,主要由化合物_草酮(humulone)、類_草酮(cohumulone)、聚_草酮(adhumulone)組成，每克啤酒花有效部位中該3種成份含量之和不少於100毫克。
6.根據權利要求1所述的用途，其特徵在於:所述的啤酒花有效部位含有活性成分β酸，主要由化合物蛇麻酮(Iupulone)、類蛇麻酮(colupulone)、聚蛇麻酮(adlupulone)組成，每克啤酒花有效部位中該3種成份含量之和不少於100毫克。
7.根據權利要求1所述的用途，其特徵在於:所述的啤酒花有效部位含有活性成分黃酮，主要由化合物黃腐酹(xanthohumol)和脫甲基黃腐酹(desmethyIxanthohumol)組成，每克啤酒花有效部位中該2種成份含量之和不少於200毫克。
8.權利要求1所述的啤酒花有效部位在製備預防及改善抑鬱症及其臨床症狀的藥物中的應用:所述的藥物包括有效治療劑量的啤酒花有效部位，以及藥學上可接受的載體包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服 液、滴丸、微丸、注射劑等。
全文摘要
本發明涉及一種啤酒花(Humunus Lupulus L)有效部位製備方法，特別是涉及了以啤酒花有效部位用於製備預防和改善抑鬱症及該疾病引起的各種臨床症狀的藥物製劑。本發明中啤酒花有效部位的活性成分主要由α酸、β酸和黃酮組成，動物實驗表明啤酒花有效部位能夠降低小鼠自主運動強度，增加小鼠前肢撥動轉輪旋轉的圈數、減少小鼠不動時間和拮抗利血平引起的小鼠體溫下降。說明啤酒花有效部位能用於預防和改善抑鬱症及該疾病引起的各種臨床症狀。
文檔編號A61P25/24GK103156923SQ20131002405
公開日2013年6月19日 申請日期2013年1月23日 優先權日2013年1月23日
發明者續潔琨, 張維庫 申請人:北京中醫藥大學