用於破壞與泛素化相關的酶的相互作用的抑制劑和其應用的製作方法

2024-04-03 04:48:05 1

專利名稱：：用於破壞與泛素化相關的酶的相互作用的抑制劑和其應用的製作方法
技術領域：
：本發明涉及針對泛素化途徑的基於結構的藥物設計，以及使用這些化合物用於癌症治療。特別地，本發明涉及一類E2-E3抑制劑的鑑定，精確調控蛋白-蛋白表面相互作用。本發明描述的這類化合物及其類似物受到專利保護。本專利可應用於哺乳動物中的癌症和其它疾病的治療。文中所引用的人類的生化指標只是為了便於理解，並不僅限於此。文中引用的術語"病人、人體或人類"也均是為了便於描述，實際上包括所有的哺乳動物病體或身體。
背景技術：
：泛素介導的降解，是一種在翻譯後水平上控制蛋白質豐度的蛋白質調控機制。它是一種與磷酸化作用相當的調控機制。此途徑在DNA損傷修復、細胞周期控制、I類抗原加工、染色體組成、信號轉導、受體介導的內吞作用及細胞凋亡過程中發揮重要作用(Hochstrasser，M,1996)。如果以上過程的調控出現問題就會導致細胞生長失控或者癌症，包括結腸癌、乳腺癌、肺癌、白血球過多症、淋巴瘤和骨髓瘤(KonstantinopoulosPA.等；2006staritaLM等;MontagutC.等.；Pulczynski,S;Keating,MJ.;Hall,EJ.;Magrath,L;Voutsadakis,I.A.)。泛素的級聯j文大過程涉及El酶、E2酶和E3酶活性依次發揮作用(Scheffner，M.等，1998)。El酶(泛素激活酶)，在存在ATP的反應中，其活性位點的胱氨酸與泛素的C末端形成硫酯鍵，從而激活泛素。被激活的泛素接著被轉移到E2酶(泛素結合酶)的胱氨酸活性位點，同樣形成硫酯鍵。E3酶是泛素-蛋白連接酶，至少定義為額外的蛋白質或蛋白質複合物，其對特異性底物的識別和泛素化是必要的。E3酶首先介導泛素從E2酶轉移到底物的賴氨酸側鏈上，然後在泛素的賴氨酸側鏈上繼續轉移泛素，最終形成的多聚泛素底物被蛋白酶體識別後降解。E3酶可分為兩類一類是不表現出與泛素形成硫酯鍵的RING指E3酶家族(Scheffner,M.等)；另一類是Hect結構域E3連接酶家族(Schwarz，S.E.等)。Hect結構域是指與E6結合蛋白[E6AP]的C末端結構域相似(homologoustog6-associatedprotein[E6AP]earboxyl-Jerminaldomain)。E3蛋白的Hect類可形成泛素的石克酯鍵中間體，並促進底物的多聚泛素化。所有E2酶有相同的結構，RING指E3酶與HectE3酶具有相似的與E2酶發生相互作用的結構方式(Huang，L等，Zheng，N.等.)。它們結合袋的細微差別見圖1。因而，此表面的抑制劑可選擇性地影響兩類E3結合酶對底物的泛素化作用。這類抑制劑可以應用於多種疾病的治療。蛋白質與蛋白質之間的相互作用通常很難被破壞，然而E2-E3的相互作用是很獨特的。發明人的生化研究發現，E2酶(UbcH7)和E3酶(E6AP，Hect結構域)的結合作用相當微弱，其相互作用力無法抵抗凝膠過濾，這種結合只能用非變性膠電泳或共結晶法檢測。發明人還詳細分析了E2-E3複合物的相互作用界面，發現了界限清晰的、對E2-E3相互作用起重要作用的疏水袋。根據疏水袋的大小、形狀及其它性質，此袋最適合與小分子靶標結合。因而，E2酶與E3酶的相互作用位點可以輕易被小分子物質瓦解，這也正本發明的理論基礎。泛素化途徑的一個著名的底物，是被稱為"基因組守護者(genomeguardian)"的腫瘤抑制因子p53。腫瘤抑制因子p53的失活在癌症細胞中發生的機率最高。用基因毒劑處理後，激活的轉錄因子p53使細胞周期停留在Gl/S檢查點或目標使受損細胞凋亡，從而阻止受損DNA的複製(Oren,M.)。超過50%以上的人類癌症細胞中發生了p53的失活。例如，在35%的Burkitt淋巴瘤和60%的L3型B細胞急性成淋巴細胞的白血球過多症中發生了p53的錯誤調控(Soussi，T.&Jonveaux,P.)。除了p53突變原因外，泛素介導的p53降解也是一個失活p53的途徑，此途徑常發生於^^巴瘤和白血球過多症中(Masdehors,P.等；Bueso-Ramos，CE.等.；Teoh,G.等.；Pan,Y.&Haines,D.S.;Gustafsson,B.&Stal，O.)。在不同的細胞環境中，兩類E3連接酶均可以介導p53的降解。在正常細胞中，RING指E3連接酶MDM2通過降解p53來調節p53的水平(Fuchs,S.Y.等；Honda,R.)。在人類乳頭瘤病毒(HPV)感染的細胞中，E6AP被病毒蛋白E6劫持，進而泛素化p53。因而，通過阻斷E2-E3的結合來防止腫瘤抑制因子p53的泛素化，有可能會抑制腫瘤的生長。6其它的疾病，如糖尿病和神經退行性疾病，也可能與泛素化途徑出錯有關。在試驗性糖尿病中，胰島素信號分子(如胰島素受體的底物IRS-1和IRS-2)的錯誤降解已得到證實(BalasubramanyamM.等.)。近來的一些報導在鼠實驗中評估了蛋白酶體抑制劑MLN519在治療局部缺血/再灌注腦損傷中的療效(WilliamsAJ,等.)。本發明利用基於結構的藥物設計技術，在E2-E3複合物的晶體結構基礎上，發現了一些新的化合物。E2酶和E3酶是蛋白質降解中重要且必需的兩個酶。蛋白質的錯誤降解會導致很多嚴重的疾病。蛋白質的泛素化與蛋白質的磷酸化同樣重要，因而E2酶和E3酶與激酶一樣重要。激酶的各種抑制劑作為新藥已經上市。我們發現的這些新化合物及其類似物可用於癌症治療，例如乳腺癌、結腸癌、子宮頸癌、肺癌、肝癌和腦瘤。
發明內容本發明的目的之一是定義E2-E3結合界面的特定袋結構，該結構適合與小分子治療劑結合，有效破壞E2-E3複合物的形成，從而通過E2-E3的信號途徑控制達到治療效果(參見圖1和圖2)。本發明的另一目的是提供與E3酶的E2酶結合袋相適應的化合物種類的鑑定方法。本發明的另一目的是提供這些化合物的組合物。本發明的另一目的是證明這些化合物能夠抑制腫瘤細胞的生長，從而單獨用這些化合物或類似物，或將這些化合物同其它化學治療藥物或藥物載體聯合起來使用，來治療對象的腫瘤。因而，第一方面，本發明提供了用於設計E2酶抑制劑的蛋白質結合袋，該結合袋包括基於SEQIDNO.1的Val657、Leu658、Ser661、Leu662、Leu665、Met676、Ile678、Ile682、Ile705、Phe713、Tyr717。第二方面，本發明提供了設計E2酶抑制劑的方法，該方法包含使用上述蛋白質結合袋。第三方面，本發明提供了一種E2酶抑制劑，此抑制劑包括選自以下化合物組中的化合物結構式Iformulaseeoriginaldocumentpage8X產N，C;111=卣素(F，Cl,Br)、曱基、氧曱基、羥基，使用上述官能團的組合在自由價原子上進行單取代或多取代；X屍其中之一或其中多個是C或N;Ring-五元或六元環，並與圖中明確示出的芳香環結合，包括苯、吡啶、嘧啶、吡。秦(pyrizine)、他咯、咪唑、呋喃、噁唑；結構式II.S、Rl二在鄰位、間位或對位取代的卣素(F，Cl，Br)、曱基、氧曱基、羥基，用前述官能團的組合進行單取代或多取代；Ring-五元或六元芳香環，有無取代基均可，包括雜環，例如苯、吡啶、嘧啶、吡。秦(pyrizine)、吡咯、他峻、咪唑、呋喃、噁唑、噁二唑；結構式IIIformulaseeoriginaldocumentpage8Rb在鄰位、間位或對位取代的卣素(F，Cl,Br)、曱基、氧曱基、羥基，用前述官能團的組合進行單取代或多取代；R2-在鄰位、間位或對位取代的卣素(F,Cl，Br)、曱基、氧曱基、羥基、苯基，小芳香雜環包括吡咯、吡唑、咪唑、呋喃、噁唑、噁二唑；和/或結構式IVimageseeoriginaldocumentpage9111=在鄰位、間位或對位取代的面素(F，Cl，Br)、曱基、氧甲基、羥基，用前述官能團的組合進行單取代或多取代；X二C或N的可能組合；Ring:非取代的和取代的五元或六元環，包括苯、吡啶、嘧啶、吡。秦(pyrizine)、p比"各、p比"坐、口米口坐、p夫"南、口惡"坐、U惡二p坐。第四方面，本發明提供了一種藥物組合物，該藥物組合物中含有至少一種上述化合物和藥物載體。第五方面，本發明提供上述抑制劑在癌症治療中的應用。優選地，該癌症是腦瘤、肺癌、卵巢癌、膀胱癌、宮頸癌、結腸癌、乳腺癌和前列腺癌。第六方面，本發明提供了一種治療患者癌症的方法，該方法包括對需要的患者給藥治療有效量的至少一種所述化合物。第七方面，本發明提供了一種應用上述任一化合物作為顯像劑用於腫瘤診斷的方法。圖1示出RING指E3酶和HectE3酶的E2結合區結構的比庫交，包括相似點和差異。圖2示出放大後的E2酶(與E3酶接觸的特異性殘基)，及E3酶的E2酶結合袋。圖3示出合成的化合物Mol11的氬核磁共振(1HNMR)數據。圖4示出合成的化合物Mol21的氫核磁共振(1HNMR)數據。圖5示出合成的化合物Mol44的氫核》茲共振(1HNMR)數據。圖6示出合成的化合物Mol640的氫核磁共振(1HNMR)數據。圖7說明可能的Molll衍生物。圖8說明可能的Mol21衍生物。圖9說明可能的Mol44衍生物。圖10說明可能的Mol640衍生物。圖11說明來自NCBI資料庫的E6AP全長序列，下劃線標註的是E2-E3的結合袋區。具體實施例方式定義文中的"E2酶抑制劑"指的是破壞E2酶與E3酶相互作用的抑制劑。1)關鍵的小分子抑制劑結合位點的鑑定。蛋白質與蛋白質之間的相互作用很難被小分子物質破壞，這已是公認的常識。然而，通過E2-E3相互作用的定位分析和對E2-E3界面進行分子表面分析，我們在E3酶上鑑定到一個結合位點對E2-E3複合物形成很關鍵，該結合位點適合與小分子相互作用。E3酶上的這個結合袋被E2酶的Phe63佔據。E3酶上組成該結合位點上的胺基酸是Val657、Leu658、Ser661、Leu662、Leu665、Met676、Ile678、Ile682、Ile705、Phe713和Tyr717。親脂性分析表明E3酶的結合袋高度疏水，主要是因為E3酶疏水側鏈Leu658、Leu662、Leu665、Met676、Ile678、Ile682、Ile705、Phe713和Tyr717。針對這個小的疏水結合袋，我們證明了一類小分子有足夠的能力破壞E2-E3信號級聯反應，繼而破壞泛素化途徑。此類小分子的分子量約為500道爾頓，擁有作為藥物的良好特點，包括藥效、穩定性(體內和體外)、有效性和安全性。雖然只要能結合該小疏水袋就會有一定的藥效，但我們還發現將E2-E3界面處的相互作用擴展至如圖6所述的第二個結合袋後，就可以選擇性地抑制不希望的耙向。第二個結合袋位置上靠近第一個疏水區，但前者的疏水性相對較弱，最適合與極性化學部分和/或雜環組分相結合。與第二個袋的特異性殘10基氬鍵作用會進一步增強藥效和選擇性。現已證實，通過在兩個結合袋間設計合適的接頭，單個化學個體就可以同時互補結合兩個結合袋。經過對E2-E3界面進行廣泛的優化，設計的化學個體(化合物)有望高選擇性抑制在作用起效期間可能暴露的其他生物學靶向，因而減少了潛在的副作用。2)以結構為基礎的藥物設計一些計算機技術可以用來判斷E2和E3的相互作用，包括蛋白表面的產生和比較，氫鍵分析，圖像性質，包括疏水性分析、靜電勢分析及雙複合物界面的總形狀互補性分析。本研究在E2-E3界面發現了一個明確的小疏水袋，該區域對E2-E3複合物的相互作用4艮重要。因而針對這個疏水袋有望破壞E2-E3複合物的形成，進而幹涉泛素化途徑，達到前面提到的療效。設計合適的能與疏水袋結合的抑制劑需要進行文庫設計、相似性檢索、虛擬篩選和重新設計。使用商品化試劑，在可靠的合成方案基礎上，設計了幾個虛擬的化合物文庫。這些虛擬的化合物與已有的商品購買的數據集一起組成了一個更大的化合物資料庫。根據一些藥物的特點對這些化合物進行篩選，通過篩選步驟的化合物即為候選藥物，進而分析候選藥物與E3酶疏水袋的結合力。在自由能截止值(cutoff)為-20kJ/mo1時，篩選到數十個有希望的結合分子，並在蛋白質環境下視覺檢查了這些分子與蛋白質結合時的構象以保證二者的正確結合。利用一套突變操作技術對結合位點內的這些化合物進行優化，同時結合能量估算法進一步優化它們與E3酶的相互作用，並將新結構引入模板。3)抗腫瘤應用的權利要求。本發明提供了一種對癌症患者的癌症治療方法，該方法包括對患者給藥治療有效量的本發明公開的此類化合物或類似物，任選地，結合使用藥物載體。該方法可適用於實體瘤或白血球過多症。特別地，該方法可應用於治療如下癌症腦瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌或結腸直腸癌。本發明也提供了一種用於治療癌症的藥物組合物，該組合物包括活性成分的物質，任選地但通常與合適的藥物載體組合使用。本藥物組合物也可以加入其它的活性組合物，如已有的化療藥物，用於聯合治療。本發明化合物的治療劑量根據患者的特點和病情嚴重程度、化合物種類和給藥途徑的變化而變化。對本文公開有效劑量的藥物來說，任何合適的給藥途徑均可以使用，用於給藥給哺乳動物，特別是人。例如可以使用的給藥途徑有口服給藥、直腸給藥、局部給藥、腸胃外給藥、眼部給藥、肺部給藥、鼻部給藥等。劑型包括片劑、含片、散劑、懸浮劑、溶液、膠嚢、乳膏、軟膏、氣霧劑等。本發明的組合物適用於各種給藥途徑，包括口服、直腸給藥或局部給藥(包括經皮膚、氣溶膠、乳液、軟膏，洗液和樸4分)，腸胃外給藥(包括皮下、肌肉內、動脈內和靜脈內)，眼部給藥(經目艮)，肺部給藥(鼻部或口腔吸入)或鼻部給藥。雖然在任何情況下最恰合的給藥途徑很大程度上與要治療的疾病貪蟹、病悄的嚴重程度、藥物活性成分相關,^T^便於^f吏用，可以將藥物組合物設計成單位劑量的形式，並採用藥學領域中各種常用方法進行製備。在製備口服藥物時，一些非藥物的介質可能會用到，例如水、乙二醇、油、酒精、調味劑、保護劑、著色劑以及在口服液體(例如懸浮液、酏劑和溶液)製備中可能會用到的材料；或載體例如澱粉、糖、維晶纖維素、稀釋劑、制粒劑、潤滑劑、粘合劑、分解劑等。口服的固體製劑優於口服液體製劑，例如粉末、膠嚢和片劑。如果需要，膠嚢可以用標準的含水或不含水的方法來包衣。除了上述的給藥形式，本發明的化合物還可以根據本領域的常識通過受控制釋放手段或策略進行給藥。適合口服給藥的本發明的藥物組合物，可以做成散劑例如膠嚢、扁膠嚢或片劑(每一粒都是有固定量活性成分的粉末或顆粒形式)，也可以做成溶液或懸浮液(在含水的、不含水的液體中的或者在水包油或油包水乳液中)。以上組合物可以用藥學領域中已知的任何一種方法來製備。通常組合物可以通過以下方式製備將活性成分和液體載體進行均一、充分混合，或者與細分的固體載體混合，或者二者均有。如有需要，可把藥做成需要的形狀。例如，可以通過壓縮或造型製造片劑。任選地加入一種或多種輔助成分。壓縮片劑可以用自由流動形式的活性成分(如粉末或顆粒)在適當的機器中通過壓縮而製得的，任選地，該活性成分可以與粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑或表面活性或分散劑相混合。模塑片劑可以使惰性稀釋劑潤溼的粉末化合物的混合物在適當的機器通過模塑而製得通過下面具體的實驗細節可以更好地理解本發明。然而，本領域技術人員應該了解下面的例子只是為了更好地說明問題,本專利的保護範圍不只限於這些例子。實施例實施例1通過前面描迷的方法得到的新化合物(NCE)Molu。其化學結構如下Molll合成的途徑如下所示。質譜測得分子量為294。氫核磁共振的結果見圖13買施例2通過前面描述的方法得到新化合物(NCE)Mo121。其化學結構如下:Mol21合成的途徑如下所示。質譜測得分子量為403。氫核磁共振的結果見圖4。formulaseeoriginaldocumentpage15實施例3通過前面描述的方法得到新化合物(NCE)Mo144。其化學結構如下:formulaseeoriginaldocumentpage15合成的途徑如下所示。質譜測得分子量為402。氫核磁共振的結果見圖formulaseeoriginaldocumentpage16實施例4通過前面描述的方法得到新化合物(NCE)Mo1640其化學結構如下:00q々HOMol640合成的途徑如下所示。質譜測得分子量為448。氫核磁共振的結果見圖6。16線O買施例5以上鑑定的化合物的抗腫瘤活性效果在人癌細胞中用MTT生存實驗進行了分析。MTT實驗是一種常用的評估細胞存活的方法，其原理是有活力的細胞可以將MTT(MTT,S，CatNo.044K5307)即可溶性四唑鐵鹽溴化-3-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基四唑鐺轉化為不可溶的曱賠沉澱，該沉澱物用二曱基亞碸(DMSO)溶解後可以用分光光度法定量分析。簡要概括就是，在96孔組織培養板中，不同的腫瘤細胞用陰性對照、不同濃度的各種測試項和陽性對照(DDP)進行處理，每個測試項在不同的濃度均重複3次。不同腫瘤細胞用10%FBS和RMPI640或MEM培養基稀釋至3-5x104個細胞/ml懸浮液。在96孔組織培養板中，每孔加入100微升細胞懸液，在37。C培養第一天。第二天，棄培養上清液，每孔加入100微升含不同濃度測試M、H.《02、S—《項的培養基，同時設立3個陰性對照孔和3個陽性對照孔(DDP),在37°C繼續孵育68小時。68小時後棄培養上清液，每孔加入100微升用PBS稀釋的lmg/mlMTT。在37。C孵育4小時後棄培養上清液。每孔加入150微升DMSO，混勻後放置10min，用Bio-Rad公司的Model550讀板機(Microplate)測定波長570nm時的吸光光度值。細胞生長抑制率IR%=(陰性對照OD570-測試項OD570)/陰性對照OD570。用Bliss方法計算細胞50%抑制濃度(IC50)的95%置信水平。宮頸癌細胞林(Hela細胞)的IC50結果tableseeoriginaldocumentpage18乳腺癌細胞抹(MCF-7)IC50結果IC50檢測項濃度ug/mlOD(A570nm)IR(%)(95%置信水平)陰性對照00鄰3逸083000.478±0.07947.0500,490*0,的345.7w,〃250.705±0.07621.994.2312.50,752*0.1641"66鄰-154.166.250.7U士0.0"21.2_3.1250.卯3±0,19409.938.53-11.4514.1212.34-16.110.5%0.48風7370.527i錫541.60,587*0.03034.90,7闊.t5112.4145,210.791*0.15110.271.33-551.OS0.8II±0.10912.80,787*0.17613.3編,J1亂挑DDP(順柏)(陽性對照)100502512.56,25—3.125502512.56.25—J3」2S—"50.250.062S0.072*0.0070.069土0.0060.098±0.0060掘±0.0220,624*0.加80遞-0.(M20.09440.0120.!07±0.0070.'151±0,01122-y2l91o9soSC22183T,;2BssT,一1結腸癌細胞抹(HCT116)IC50結果檢測項濃度ug/mlOD(A570nm)IR(%)IC50(95%置信水平)陰性對照00.542i0.0271000.083±0.00184,7500.085:fc0.0M84.3鹿Zf25(U01士0週3廁12.50.150±0.0252.32.992-3.3306-250.300丄0.05E)楊3.1250,237:fe0.09S56,210084.10.083±0.0118"抑.O12,50.26城03550,76.250.394土0.03927.33,12530.40.133:1:0.01675.5A"1ftW7DJDP1o62》0.25(J.266i0.0i65(.0肺癌細胞林(A459)IC50結果濃度ug/mlOD(A570瞧)IR(%)[C50(95%置信水平)陰性對照00.637+0.044500.368:M).03942,3250,504±0,04621.012.58,11srv6.250.680:fcO.0lS-6.8Jw3J2SO掘逸,-23.3U60.634±0,0090.600S3.i500.152±鐘776.1250.230±0.04064.019.4350.438±0,05131.29.，16-19,7596,250.471±0.00126.13.1250.5!H士0.(H5S.6DDP471.0l0.341±細46.4(US0.517±0,0738.80.0625".9tableseeoriginaldocumentpage21肝癌SMMC-7721糹田胞抹實-瞼#2IC50檢測項濃度ug/mlOD(A570nm)IR(%)(95%置信水平)陰性對照00.461±0.271卵巢癌細胞林(SKOV3)IC50結果檢測項陰性對照^/必她〃/IR(%)IC50濃度ug/mlOD(A570nm)(95%置信水平)00.701士0.03.550t).333士0細52/1250.426丄0.卿39,112.50.525±0.035.25.160.006,250.539*0.02323.03.1250.533±0.01723》錯5士0,02927"100亂0500,3幽J4i55.1250.3S5士0.0n45.0——'29.0012,50.671±0.063《16.25ft.砂4站.0430.93,!250.753i0.07f488,2l0.267±0.0'1.162.0O.躬0,250.643±0.1418.30.06250.689±0.0651.6贈？丄艦鵬DDP1W2512.53.1259.51S9.32卜9.7127.681-8.3594.1553.757-4.,0.091i0.0020細*0加20.268±0.0130.27肚0.0D(K215丄0.0080.244±0,55(U4扭0.0450.077-上0.0090.079±0.0050,129*0,006(U46iO.(Ml0.161*0.08510053.125410,2578543-5442522222卵巢癌細胞抹(SKOV3)IC50結果IC50檢測項濃度ug/mlODfA570nm)IR(%)(95%置信水平)陰性對照0.701±0.035100的.l50歸袖切250.429iO.(M)238.8，，xo12.534.36.250,532卻,02524,13.1250.503*0.03128.2雨88.7$0脂250.39扭0,03726,8712.50.63城0209.76,250.62SA0.02510.33,1250.7廳細040.083:fc0.002汰2DDJP0.267±0.0"62,00.250.06251.6神經膠質瘤(腦瘤U251)IC50結果檢測項濃度ug/mlOD(A570nm)IR(%)1C50(95%置信水平)陰性對照她圾DDP50256.25IS".56卿5012.56,253.1250.25o.smo.05-'0.659±0.0470.737士0.067.0.811±0.0500.7fl5丄O.0(H0.790*0.0860.650丄0遍0.709.+.0.0540.58士0.0190.174丄0.00DO.365+0.05S0.68^0.0350.72扭0.09024.9—7.51.219.6i5.113,580,258.421.5129.1443401.323神經"交質瘤(腦瘤U251)IC50結果IC50檢測項濃度pg/mlODfA570nm)IR(%)(95%置信水平)陰性對照00.877*0.055100狄2500.，2〗±0.019抓22S0.232*0.03473,516,2412.50.501編5842.86.250.719*0.1!0歸3.1250,840*0.0134,2卿0.090*0.0"狄750卯.l250.訴5±0.012懇U.(S512,50.35樹屈59.66,2520.69.24(U74i0,卿額"DDP10.36S±0.05858,4U30.250.6S則.0352，J0.06250.729±0.090本發明中參考的所有專利、專利申請書和文獻作為參考完整地引入本文。在本發明詳細說明的啟發下，對於本領域技術人員來講，暗示了本發明的許多變化，這種明顯的變化落入後附的權利要求的完整範圍內。。備註圍繞在E3酶結合袋周圍的胺基酸殘基有Val634，Leu635，Ser638,Leu639,Leu642,Met653，Ile655，Ile659，Ile682，Phe690，Tyr694,參考EGAP三維結構(Huang等.)。在全長E6AP(或者UBE3A—人)中，這些胺基酸殘基是Val657,Leu658,Ser661，Leu662，Leu665,Met676,Ile678，Ile682，Ile705,Phe713,Tyr717。24參考文獻Bd，*wnwnyaiaM,樹a}.Mol,CellBkrte微.2S《"2》，U-23HoctamssenM-A鵬nJRvGmwt知，405439(WW),Hnii4欲fR.,T柳aka，H,&Y輔站",H,FEBSL鎖420,25-2《l效》.Kcatiig,M丄ateOmeerto3,2豕《24(1997)、Krast欲wfat^rotosPAet魏l,JB邵ertOplttInvg!>gs15(S*)1067-5(2WM).M，lh，t.C柳ecrRes52,履9"通，(,〗.C,織al,Cl'nTr,s〖Oucd.辨5):313-《2加(5)Ort,M,SniriC如ojrBW5，幼〗-227《1妙4).Pan,Y,&!Iai股s'D,S,Ca加crRes5.9,20"-2M《！9的).Pulez》'n汰i,S,Le.ukLym—ma15,243-2^(，09.1).Sc城'!欲.M.,S!n他，S.&Je咖Ji,i'nUW爭ilinandthel;idogyof,heCcl養，Plcn睡，NYtPete,J.-M,，1〖arris,lR.,amiPiatey,IX,Sehwara,Rosa,J丄.<&Sdwffnei",M,J!feWClwra23,32M!M2!54(，998),So、"化T,&〗okvwu,x，RMoav.Rt;vPrHcmalul33,4—,!7-賴0("1〉.StatiwI'M,Tw,h,G.a，，SBi(KKl卯，1紹2-!992(J99〉，V加効德s，AaO柳l39,151-156(20,).W出feimsA.f"<，lN機irochetuIW.49(2〉,(06-:2(2鵬)T:iie，，N,etai,Ce〖〗Iff',533'"9權利要求1.一種用於設計E2酶抑制劑的蛋白結合袋，該結合袋包括基於SEQIDNO.1的Val657、Leu658、Ser661、Leu662、Leu665、Met676、Ile678、Ile682、Ile705、Phe713、Tyr717。2.—種設計E2酶抑制劑的方法，該方法包括使用權利要求1所述的蛋白結合袋。3.—種E2酶抑制劑，其中，抑制劑包括選自以下組中的化合物結構式IX1=N,C,Rl二囟素(F、Cl、Br)、曱基、氧曱基、羥基，使用上述官能團的組合在自由價原子上進行單取代或多取代，X2二其中之一或其中多個是C或N,Ring-五元或六元環，並與圖中明確示出的芳香環結合，包括苯、吡啶、嘧咬、吡喚(pyrizine)、？比略、咪哇、咬喃、噁哇；結構式IIRl二在鄰位、間位或對位取代的滷素(F、Cl、Br)、甲基、氧曱基、羥基，用前述官能團的組合進行單取代或多取代，Ring^取代或非取代的五元或六元芳香環，包括雜環，例如是苯、吡啶、嗜咬、吡噪(pyrizine)、吡咯、吡唑、咪唑、呋喃、噁唑、噁二唑；if、結構式inRl-在鄰位、間位或對位取代的卣素(F、Cl、Br)、甲基、氧曱基、羥基，用前述官能團的組合進行單取代或多取代，112=在鄰位、間位或對位取代的卣素(F,Cl，Br)、曱基、氧曱基、羥基、苯基，小芳香雜環包括吡咯、吡唑、咪唑、呋喃、噁唑、噁二唑；和/或結構式IVRl-在鄰位、間位或對位取代的面素(F、Cl、Br)、曱基、氧曱基、羥基，用前述官能團的組合進行單取代或多取代；X^C或N的可能組合；Ring^非取代的和取代的五元或六元環，包括苯、吡啶、嘧啶、吡喚(pyrizine)、p比p各、p比峻、咪唑、吹喃、噁唑、噁二峻。4.一種藥物組合物，包括權利要求3中的至少一種化合物和藥物載體。5.權利要求3的抑制劑在癌症治療中的應用。6.根據權利要求5的方法，其中，癌症是腦瘤、肺癌、卵巢癌、膀胱癌、宮頸癌、結腸癌、乳腺癌和前列腺癌。7.—種治療對象癌症的方法，對需要的對象給藥治療有效量的權利要求1中的化合物中的至少一種。8.根據權利要求7的方法，治療窗期間給藥治療有效量的化療藥物，使得在癌症的進程中該化療藥物對患者達到改善的治療效果，該癌症選自由以下組成的組腦瘤、肺癌、卵巢癌、膀胱癌、宮頸癌、結腸癌、乳腺癌和前列腺癌。9.根據權利要求7的方法，治療窗期間給藥治療劑量的放療藥物，使得在癌症的進程中該放療藥物對患者達到改善的治療效果，該癌症選自由以下組成的組腦瘤、肺癌、卵巢癌、膀胱癌、宮頸癌、結腸癌、乳腺癌和前列腺癌。10.根據權利要求7-9任一項的方法，該方法包括聯合使用權利要求1中的化合物與其它的化療藥物，用於治療癌症。11.一種應用權利要求3中的至少一種化合物作為顯像劑用於腫瘤診斷的方法。全文摘要本發明公開了一種泛素蛋白連接酶E3的疏水結合袋，並使用該結合袋來設計抑制劑從而破壞泛素結合酶E2和E3的相互作用。通過使用該結合袋設計了四種抑制劑，它們可以被用於治療癌症。文檔編號C07D237/26GK101583622SQ200780040934公開日2009年11月18日申請日期2007年11月1日優先權日2006年11月2日發明者興李,嵐黃申請人:黃嵐;李興