對除草劑具有增強的耐受性的植物的製作方法
2024-03-01 03:07:15 1
對除草劑具有增強的耐受性的植物的製作方法
【專利摘要】本發明涉及控制植物栽培場所不需要的植被的方法，所述方法包括以下步驟：在該場所提供植物，所述植物至少包含：編碼對香豆酮衍生物除草劑具有抗性或耐受性的野生型羥苯基丙酮酸雙加氧酶或突變的羥苯基丙酮酸雙加氧酶(mut-HPPD)的核苷酸序列，和/或編碼對香豆酮衍生物除草劑具有抗性或耐受性的野生型尿黑酸茄尼基轉移酶或突變的尿黑酸茄尼基轉移酶(mut-HST)的核苷酸序列；向該場所施用有效量的所述除草劑。本發明還提供包含mut-HPPD的植物和獲得這樣的植物的方法。
【專利說明】對除草劑具有增強的耐受性的植物
發明領域
[0001]本發明一般涉及賦予植物對除草劑具有農業水平耐受性的方法。特別地，本發明涉及對「香豆酮(coumarone)衍生物」除草劑具有增加的耐受性的植物。更具體地，本發明涉及由誘變及雜交育種及轉化獲得的對「香豆酮衍生物」除草劑具有增加的耐受性的植物和方法。
【背景技術】
[0002]自20世紀90年代早期以來，抑制異戍二烯基醌(prenylquinones)、質體醌(plastoquinone)和生育酹(tocopherols)的生物合成中的關鍵酶4_輕苯基丙酮酸雙加氧酶(4-HPro;ECl.13.11.27)的除草劑已用於進行選擇性雜草控制。其阻斷生物合成路徑中4_輕苯基丙酮酸轉化成尿黑酸(homogentisate) (Matringe等人,2005，Pest ManagSc1.,第 61 卷:269-276 ;Mitchell 等人，2001，Pest Manag Sc1.第 57 卷:120-128)。認為質體醌是類胡蘿蔔素生物合成中八氫蕃茄紅素去飽和酶(phytoene desaturase)的必需輔因子(Boeger 及 Sandmann, 1998, Pestic Outlook,第 9 卷:29-35)。其抑制會使植物質體醌及維生素E庫耗盡，從而導致白化症狀。類胡蘿蔔素的損失，特別是其作為對抗光氧化作用的光系統保護劑功能的損失，會導致生長中的枝條組織中葉綠素及光合膜的氧化降解。結果是，葉綠體的合成和功能被破壞(Boeger和Sandmann, 1998)。尿黑酸爺尼基轉移酶(homogentisate solanesyl transferase, HST)催化質體醌生物合成路徑中HPF1D之後的步驟。HST為異戊二烯基轉移酶，其使尿黑酸脫羧並且將來自茄尼基二磷酸酯的茄尼基轉移至尿黑酸而由此形成2-甲基-6-茄尼基-1，4-苯醌(MSBQ)，一種質體醌生物合成路徑的中間物。HST酶為膜結合酶且編碼其的基因包括質體靶向序列。
[0003]商品化4-HPH)抑制性除草劑的最重要化學類型包括吡唑啉酮類(pyrazolone)、
三酮類(triketone)及異續，唑類(isoxazole)。抑制劑通過形成穩定離子偶極電荷轉移
複合物而模擬底物4-羥苯基丙酮酸與活性位點中的酶結合亞鐵離子的結合。在4-HPH)抑制性除草劑中，三酮磺草酮(triketone sulcotrione)為此組除草劑中首個用於農業中的實例且鑑定了其作用機制(Schulz等人，1993，FEBS Lett.第318卷:162-166)。已報導三酮類是纖精酮(Ieptospermone)的衍生物，纖精酮是來自紅瓶刷(bottlebrush)
植物-紅千層屬物種(Callistemon spp)-的除草劑成分(Lee等.1997，Weed Sc1.Vol45,162-166)。
[0004]因為抑制植物中的反應會導致經處理植物的葉變白並且導致所述植物死亡,這些分子中的一些已用作除草劑(PalIett.K.E.等人1997Pestic.Sc1.5083-84)。本領域中描
述的以HPPD為靶的除草劑特別有:異唑類(EP418175、EP470856、EP487352、EP527036、EP560482、EP682659、美國專利號 5，424，276)，特別是異惡唑草酮(isoxafIutole)，其
為用於玉米的選擇性除草劑；二酮腈類(EP496630、EP496631)，特別地2-氰基-3-環丙基 _1_ (2_S02CH3_4_CF3 苯基)丙烷 _1，3_ 二麗及 2_ 氛基 _3_ 環丙基-1- (2_S02CH3_4_2, 3C12苯基)丙烷-1，3- 二酮；諸如描述於EP625505、EP625508、美國專利號5，506, 195中的三酮類，特別地磺草酮；*pyrazolinates。此外,眾所周知的除草劑苯批唑草酮(topramezone)也在易感植物物種中引發與上文描述的4-HPH)抑制性漂白除草劑同樣類型的植物毒性症狀，包括生長中的枝條組織中葉綠素喪失和壞死。苯吡唑草酮屬於化學種類吡唑啉酮類或苯甲醯基吡唑類且於2006年商業引進。當在萌芽後施用時，該化合物選擇性控制玉米中廣譜的一年生窄葉雜草和寬葉雜草。
[0005]植物對「香豆酮衍生物除草劑」的耐受性也已在許多專利中加以報導。國際申請號TO2010/029311 —般地描述HPTO核酸及/或HST核酸在植物中引發除草劑耐受性的用途。W02009/090401、W02009/090402、W02008/071918、W02008/009908 具體公開了某些「香豆酮衍生物除草劑」及「香豆酮衍生物除草劑」耐受性的植物株系。
[0006]3種主要策略可用於使植物耐受除草劑，亦即(I)用將除草劑或其活性代謝物轉化成無毒產物的酶去除除草劑毒性，諸如用於溴苯腈(bromoxynil)耐受性或草銨膦(basta)耐受性的酶(EP242236、EP337899) ； (2)將靶酶突變成對除草劑或其活性代謝物敏感性較小的功能性酶，諸如用於草甘膦(glyphosate)耐受性的酶(EP293356、Padgette
S.R.等人，J.Biol.Chem., 266, 33, 1991);或(3)過表達敏感性酶，使得鑑於此酶的動力學常數，在植物中生產相對於除草劑足夠的靶酶量，以致儘管存在其抑制劑，仍有足夠的功能性酶可用。已經描述了第三種策略用於成功獲得對HPH)抑制劑具有耐受性的植物(W096/38567)。US2009/0172831公開了編碼具有酶促活性的胺基酸序列的核苷酸序列，使得該胺基酸序列對HPH)抑制劑除草劑化學品具有抗性，特別是三酮抑制劑特異的HPH)突變體。
[0007]迄今為止，現有技術尚未描述含有至少一個突變的HPro核酸的香豆酮衍生物除草劑耐受性植物。現有技術亦尚未描述在除從中獲得HPro基因的基因組以外的基因組中含有突變的香豆酮衍生物除草劑耐受性作物。因此，本領域需要自其它基因組及物種鑑定香豆酮衍生物除草劑耐受基因。本領域亦需要對除草劑例如香豆酮衍生物除草劑具有增強的耐受性且含有至少一個突變的HPro核酸的作物。亦需要控制此類作物或其附近雜草生長的方法。當向包含作物的區域施用除草劑時，這些組合物及方法允許使用噴藥技術。
[0008]發明概述
[0009]本發明解決了該技術問題，本發明涉及控制植物栽培場所不需要的植被的方法，所述方法包括以下步驟:
[0010]a)在該場所提供包含至少一個如下核酸的植物，所述核酸包含:
[0011](i)編碼對香豆酮衍生物除草劑具有抗性或耐受性的野生型羥苯基丙酮酸雙加氧酶或突變的羥苯基丙酮酸雙加氧酶(mut-HPH))的核苷酸序列，和/或
[0012](ii)編碼對香豆酮衍生物除草劑具有抗性或耐受性的野生型尿黑酸茄尼基轉移酶或突變的尿黑酸茄尼基轉移酶(mut-HST)的核苷酸序列，
[0013]b)向該場所施用有效量的所述除草劑。
[0014]此外，本發明涉及:通過使用包含核苷酸序列SEQ ID NO: 1，51，3，4，6，7，9，10，12，13，15，16，18，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41，43，45，52，54，56 或其變體的核酸編碼的mut-HPPD，和/或通過使用包含核苷酸序列SEQ ID NO:47或49或其變體的核酸編碼的mut-HST，鑑定香豆酮衍生物除草劑的方法。[0015]所述方法包括以下步驟:
[0016]a)產生包含編碼野生型或mut-HPH)的核酸的轉基因細胞或植物，其中表達野生型或 mut-HPPD ；
[0017]b)向a)的轉基因細胞或植物及相同品種的對照細胞或植物施用香豆酮衍生物除草劑；
[0018]c)在施用所述測試化合物之後，測定轉基因細胞或植物及對照細胞或植物的生長或生存力，以及
[0019]d)選擇使對照細胞或植物的生長較之轉基因細胞或植物的生長降低的測試化合物。
[0020]另一目的涉及鑑定編碼對香豆酮衍生物除草劑具有抗性或耐受性的mut-HPH)的核苷酸序列的方法，該方法包括:
[0021]a)生成mut-HPro編碼核酸的文庫，
[0022]b)通過在細胞或植物中表達每種所述核酸和用香豆酮衍生物除草劑處理所述細胞或植物，篩選所得mut-HPH)編碼核酸的群體，
[0023]c)比較由所述mut-HPH)編碼核酸群體提供的香豆酮衍生物除草劑耐受性水平與由對照HPro編碼核酸提 供的香豆酮衍生物除草劑耐受性水平，
[0024]d)選擇至少一種mut-HPH)編碼核酸，所述核酸較之對照HPTO編碼核酸提供顯著增加的香豆酮衍生物除草劑耐受性水平。
[0025]在一個優選的實施方案中，較之由對照HPro編碼核酸提供的香豆酮衍生物除草劑耐受性，步驟d)中選出的mut-HPro編碼核酸提供至少2倍的香豆酮衍生物除草劑耐受性。
[0026]抗性或耐受性可通過生成包含步驟a)的文庫的核酸序列的轉基因植物和比較所述轉基因植物與對照植物來確定。
[0027]另一目的涉及鑑定含有編碼對香豆酮衍生物除草劑具有抗性或耐受性的mut-HPPD或mut-HST的核酸的植物或藻類之方法，該方法包括:
[0028]a)在植物細胞或綠藻的培養物中鑑定香豆酮衍生物除草劑的有效量，
[0029]b)用誘變劑處理所述植物細胞或綠藻，
[0030]c)使所述經誘變處理的細胞群體與a)中鑑定出的香豆酮衍生物除草劑有效量接觸，
[0031]d)選擇在這些測試條件下存活的至少一個細胞，
[0032]e)對來自d)中所選細胞的HPH)和/或HST基因進行PCR擴增及測序，和將此序列與野生型HPro或HST基因序列進行比較。
[0033]在一個優選的實施方案中，誘變劑為甲烷磺酸乙酯。
[0034]另一目的涉及編碼mut-HPH)的分離的核酸，該核酸可通過如上定義的方法鑑定。
[0035]在另一實施方案中，本發明涉及由野生型或mut-HPH)核酸轉化的植物細胞或已經被突變的植物，以獲得表達，優選過表達野生型或mut-HPH)核酸的植物，其中所述核酸在植物細胞中的表達導致較之野生型品種的植物細胞對香豆酮衍生物除草劑增強的抗性或耐受性。
[0036]在一個優選實施方案中，本發明的植物細胞轉化了野生型或mut-HPH)核酸，所述核酸包含 SEQ ID NO:1, 51，3，4，6，7，9，10，12，13，15，16，18，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41，43，45，52，54，56或其變體或衍生物的序列。
[0037]在另一實施方案中，本發明涉及包含本發明的植物細胞的轉基因植物，其中所述核酸在植物中的表達導致，較之野生型品種的植物，該植物對香豆酮衍生物除草劑的增強的抗性。
[0038]本發明的植物可為轉基因或非轉基因植物。
[0039]優選地，核酸在植物中的表達導致較之野生型品種的植物，本發明植物對香豆酮衍生物除草劑的增強的抗性。
[0040]在另一實施方案中，本發明涉及由包含本發明的植物細胞的轉基因植物生產的種子，其中就相對於野生型品種的種子增強的香豆酮衍生物除草劑抗性而言，該種子是純種(true breeding)的。
[0041]在另一實施方案中，本發明涉及生產較之野生型品種的植物細胞具有香豆酮衍生物除草劑增強抗性的轉基因植物細胞的方法，所述方法包括用包含野生型或mut-HPH)核酸的表達盒轉化植物細胞。
[0042]在另一實施方案中，本發明涉及生產轉基因植物的方法，其包括:(a)用包含野生型或mut-HPH)核酸的表達盒轉化植物細胞，以及(b)從植物細胞產生具有對香豆酮衍生物除草劑的增強的抗性的植物。
[0043]優選地，表達盒還包含在植物中具有功能的轉錄起始調控區及翻譯起始調控區。
[0044]在另一實施方案中，本發明涉及使用本發明的mut-HPH)作為選擇標誌物。本發明提供鑑定或選擇經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分的方法，所述方法包括:a)提供經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分，其中該經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分包含編碼如下文所述的本發明mut-HPH)多肽的分離的核酸，其中該多肽用作選擇標誌物，且其中該經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分可任選地包含其它分離的目的核酸山)使經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分與至少一種香豆酮衍生物抑制性化合物接觸；c)確定植物細胞、植物組織、植物或其部分是否受抑制劑或抑制性化合物影響；以及d)鑑定或選擇經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分。
[0045]本發明還涉及含有本文所述的突變的經純化的mut-HPro蛋白質，所述蛋白質可用於分子建模研究中以設計對除草劑耐受性的進一步改良。蛋白質純化方法為熟知的，且可容易地使用市售產品或採用例如於Protein Biotechnology, Walsh和Headon(Wiley, 1994)中所述的特別設計的方法來達成。
[0046]附圖簡述
[0047]圖1:來自萊茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii) (Cr_HPPDla, Cr_HPPDlb)、小立碗蘚(Physcomitrella patens) (Pp_HPPDl)、稻(Oryzasativa) (Osj_HPPDl)、小麥(Triticum aestivum) (Ta_HPPDl)、玉蜀黍(Zeamays) (Zm_HPPDl)、擬南芥(Arabidopsisthaliana) (AtJIPF1D)、大豆(Glycine max) (Gm_HPPD)和葡萄(Vitis vinifera) (Vv_HPPD)的HPro酶的胺基酸序列比對和保守區域。
[0048]*來自基因組測序計劃的序列。基因座位ID(Locus ID):GRMZM2G088396
[0049]**基於NCBI GenPept登錄號CAG25475的胺基酸序列。
[0050]圖2顯示用於HPHVHST序列的大豆轉化的植物轉化載體的載體圖。[0051]圖3顯示表達大麥屬(Hordeum)野生型HPI3D (HvHPH)，Seq ID: 1/2)的轉基因擬南芥幼苗的萌發試驗。植物在(A) 7-(2，6-二氯-3-吡啶)-5，5-二甲基-6，6-二氧代-硫代吡喃並[4，3-b]吡啶-8-醇和(B) 7-[2，4- 二氯-3-(3-甲基-4，5- 二氫異3惡唑_5_基)苯基]-5，5-二甲基-6，6-二氧代-硫代吡喃並[4，3-b]吡唳-8-醇上萌發。
[0052]圖4顯示表達擬南芥野生型HPH)或其所示突變體的轉基因分離的Tl大豆植物處理後5天的除草劑噴霧試驗。顯示了來自單獨事件的植物。未轉化的對照植物標記為野生型。所使用的香豆酮衍生物除草劑為7-(2，6- 二氯-3-吡啶)_5，5- 二甲基-6，6- 二氧代-硫代吡喃並[4, 3-b]吡唳-8-醇。
[0053]圖5顯示表達擬南芥野生型HPH)或其所示突變體的轉基因分離的Tl玉米植物處理後4天的除草劑噴霧試驗。顯示了來自單獨事件的植物。未轉化的對照植物標記為野生型。所使用的香豆酮衍生物除草劑為7-(2，6- 二氯-3-吡啶)_5，5- 二甲基-6，6- 二氧代-硫代吡喃並[4, 3-b]吡唳-8-醇。
[0054]序列表
[0055]表1
[0056]
【權利要求】
1.控制植物栽培場所不需要的植被的方法，所述方法包括以下步驟: a)在該場所提供包含至少一個核酸的植物，其中所述核酸包含: (i)編碼對香豆酮衍生物除草劑具有抗性或耐受性的野生型羥苯基丙酮酸雙加氧酶或突變的羥苯基丙酮酸雙加氧酶(mut-HPro)的核苷酸序列，和/或 (?)編碼對香豆酮衍生物除草劑具有抗性或耐受性的野生型尿黑酸茄尼基轉移酶或突變的尿黑酸茄尼基轉移酶(mut-HST)的核苷酸序列， b)向該場所施用有效量的所述除草劑， 其中所述香豆酮衍生物除草劑包含具有選自表2式1、2、3和4的通式的化合物。
2.根據權利要求1的方法，其中⑴的核苷酸序列包含SEQID NO: 1，51，3，4，6，7，9，10，12，13，15，16，18，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41，43，45，52，54，56 的序列、或其變體或衍生物。
3.根據權利要求1的方法，其中(ii)的核苷酸序列包含SEQID NO:47或49的序列、或其變體或衍生物。
4.根據權利要求1至3之任一的方法，其中植物包含至少一個另外的異源核酸，所述核酸包含(iii)編碼除草劑耐受酶的核苷酸序列。
5.根據權利要求1至4之任一的方法，其中香豆酮衍生物除草劑組合一種或多種其它HPPD和/或HST靶向除草劑一起施用。
6.鑑定香豆酮衍生物除草劑的方法，所述方法通過使用由包含核苷酸序列SEQID NO:1, 51，3，4，6，7，9，10，12，13，15，16，18，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41，43，45，52，54，56或其變體或衍生物的核酸編碼的mut-HPPD、和/或使用由包含核苷酸序列SEQ IDNO:47或49或其變體或衍生物的核酸編碼的mut-HST來進行，其中所述香豆酮衍生物除草劑包含具有選自表2式1、2、3和4的通式的化合物。
7.根據權利要求6的方法，其包含以下步驟: a)生成包含編碼mut-HPH)的核酸的轉基因細胞或植物，其中表達mut-HPH)； b)對a)的轉基因細胞或植物和對相同品種的對照細胞或植物施用香豆酮衍生物； c)測定施用所述測試化合物之後轉基因細胞或植物及該對照細胞或植物的生長或生存力，及 d)選擇使對照細胞或植物的生長較之轉基因細胞或植物的生長降低的測試化合物。
8.鑑定編碼對香豆酮衍生物除草劑具有抗性或耐受性的mut-HPH)的核苷酸序列的方法，該方法包括: a)生成mut-HPH)編碼核酸的文庫， b)通過在細胞或植物中表達每種所述核酸且用香豆酮衍生物處理所述細胞或植物，篩選所得mut-HPro編碼核酸的群體， c)比較由所述mut-HPH)編碼核酸群體提供的「香豆酮衍生物」耐受性水平與由對照HPPD編碼核酸提供的「香豆酮衍生物」耐受性水平， d)選擇至少一種mut-HPH)編碼核酸，較之對照HPH)編碼核酸，其提供對「香豆酮衍生物」的顯著增加的耐受性水平， 其中所述香豆酮衍生物除草劑包含具有選自表2式1、2、3和4的通式的化合物。
9.根據權利要求8的方法，其中較之由對照HPH)編碼核酸提供的對香豆酮衍生物除草劑的耐受性，步驟d)中選出的mut-HPH)編碼核酸提供至少2倍的香豆酮衍生物除草劑耐受性。
10.根據權利要求8或9的方法，其中抗性或耐受性通過生成包含步驟a)的文庫的核酸序列的轉基因植物和比較所述轉基因植物與對照植物而測定。
11.編碼mut-HPPD的分離的核酸，所述核酸包含SEQID NO: 2, 5，8，11，14，17，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，53，55，57，58，59，60，61，62，63，64，65，66，48，50、或其變體或衍生物。
12.權利要求11的分離的核酸，其中核酸可以通過權利要求8至10之任一中定義的方法鑑定。
13.轉化了野生型或mut-HPH)核酸的轉基因植物細胞，其中較之野生型品種的植物細胞，所述核酸在植物細胞中的表達導致對香豆酮衍生物除草劑增強的抗性或耐受性，其中所述香豆酮衍生物除草劑包含具有選自表2式1、2、3和4的通式的化合物，其中野生型或mut-HPPD核酸包含選自以下的多核苷酸序列:a)如SEQ ID NO: 1，51，3，4，6，7，9，10，12，13，15，16，18，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41，43，45，52，54，56 中所示的多核苷酸、或其變體或衍生物山)如SEQ ID NO:47或49中所示的多核苷酸、或其變體或衍生物；c)編碼如 SEQ ID NO:2，5，8，11，14，17，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，53，55，57，58，59，60，61，62，63，64，65，66，48，50中所示的多肽或其變體或衍生物的多核苷酸；d)包含a)至c)之任一多核苷酸的至少60個連續核苷酸的多核苷酸 '及e)與a)至d)之任一的多核苷酸互補的多核苷酸。
14.表達誘變的或重組的mut-HPH)的植物，其中所述mut-HPH)包含SEQID NO: 2，其中該胺基酸序列在一個或多個胺基酸位置上不同於相應的野生型植物的HPH)的胺基酸序列，其中位置236的胺基酸不是丙氨酸；位置411的胺基酸不是穀氨酸；位置320的胺基酸不是亮氨酸；位置403的胺基酸不是甘氨酸；位置334的胺基酸不是亮氨酸；位置353的胺基酸不是亮氨酸；位置321的胺基酸不是脯氨酸；位置212的胺基酸不是纈氨酸；和/或位置407的胺基酸不是甘氨酸，其中當在植物中表達時，所述HPH)賦予植物較之相應的野生型植物品種增加的除草劑耐受性，其中所述香豆酮衍生物除草劑包含具有選自表2式1、2、3和4的通式的化合物。
15.表達誘變的或重組mut-HPH)的植物，其中所述mut-HPH)包含SEQID NO:53,其中該胺基酸序列在一個或多個胺基酸位置上不同於相應的野生型植物的HPH)的胺基酸序列，其中位置293的胺基酸不是穀氨醯胺；位置335的胺基酸不是甲硫氨酸；位置336的胺基酸不是脯氨酸；位置337的胺基酸不是絲氨酸；位置363的胺基酸不是穀氨酸；位置368的胺基酸不是亮氨酸；位置422的胺基酸不是甘氨酸；位置385的胺基酸不是亮氨酸；位置393的胺基酸不是異亮氨酸；和/或位置421的胺基酸不是賴氨酸，其中當在植物中表達時，所述HPro賦予植物較之相應的野生型植物品種增加的除草劑耐受性，其中所述香豆酮衍生物除草劑包含具有選自表2式1、2、3和4的通式的化合物。
16.由包含權利要求13中定義的植物細胞的轉基因植物或由權利要求14或15的植物產生的種子，其中就相對於野生型品種的種子增強的香豆酮衍生物除草劑抗性而言，該種子是純種(true breeding)的,其中所述香豆酮衍生物除草劑包含具有選自表2式1、2、3和4的通式的化合物。
17.生產較之野生型品種的植物細胞具有增強的香豆酮衍生物除草劑抗性的轉基因植物細胞的方法，所述方法包括用包含mut-HPH)核酸的表達盒轉化植物細胞，其中所述香豆酮衍生物除草劑包含具有選自表2式1、2、3和4的通式的化合物。
18.生產轉基因植物的方法，其包括:(a)用包含mut-HPH)核酸的表達盒轉化植物細胞，以及(b)從植物細胞產生具有對香豆酮衍生物除草劑的增強的抗性的植物，其中所述香豆酮衍生物除草劑包含具有選自表2式1、2、3和4的通式的化合物。
19.權利要求17或18的方法，其中mut-HPH)核酸包括選自以下的多核苷酸序列:a)如 SEQ ID NO:1, `51，3，4，6，7，9，10，12，13，15，16，18，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，3`9，41，43，45，52，54，56中所示的多核苷酸、或其變體或衍生物；b)如SEQ ID NO:47或49中所示的多核苷酸、或其變體或衍生物；c)編碼如SEQ ID NO: 2, `5，8，11，14，17，20，22，24，26，`28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，53，55，57，58，59，60，61，62，63，64，65，6`6，48，50 中所示的多肽或其變體或衍生物的多核苷酸；d)包含a)至c)之任一多核苷酸的至少60個連續核苷酸的多核苷酸；及 e)與a)至d)之任一的多核苷酸互補的多核苷酸。
20.權利要求17至19之任一的方法，其中表達盒還包含在植物中具有功能的轉錄起始調控區及翻譯起始調控區。
21.鑑定或選擇經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分的方法，所述方法包括:i)提供經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分，其中該經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分包含 SEQ IDNO:1, `51，3，4，6，7，9，10，12，13，15，16，18，19，21，23，25，27，29，`31，33，35，37，39，41，43，45，52，54，56中所示的多核苷酸或其變體或衍生物，其中多核苷酸編碼用作選擇標記的mut-HPH)多肽，其中該經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分可以包含其它分離的多核苷酸；ii)使經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分與至少一種香豆酮衍生物化合物接觸；iii)確定該植物細胞、植物組織、植物或其部分是否受該抑制性化合物影響；以及iv)鑑定或選擇該經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分， 其中所述香豆酮衍生物除草劑包含具有選自表2式1、2、3和4的通式的化合物。
【文檔編號】C12N15/82GK103930548SQ201280053591
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2012年10月30日 優先權日:2011年11月2日
【發明者】J·赫茨勒, S·特雷施, T·米茨納, M·維切爾, J·萊爾希爾, R·阿朋特, L·帕爾拉帕多, J·M·保利克 申請人:巴斯夫歐洲公司