一種同時檢測水產品中硝基呋喃類原藥殘留的方法

2023-12-12 00:17:42

專利名稱：一種同時檢測水產品中硝基呋喃類原藥殘留的方法
技術領域：
本發明屬於水產品質量安全檢測領域，特別涉及一種同時檢測水產品中硝基呋喃類原藥殘留的方法。
背景技術：
硝基呋喃類藥物是具有5 —硝基呋喃結構的人工合成抗生素，主要包括呋喃它酮(Furaltadone, FTD)、呋喃西林(Nitrofurazone, NFZ)、呋喃妥因(Nitrofurantoin, NFT)和呋喃唑酮(Furazolidone，FZD)這四種藥物。由於這類抗生素具有良好的抑菌和殺菌效果，曾被廣泛用於水產動物疾病的預防與治療中。相關研究已經證明硝基呋喃類藥物具有致畸、致癌和致突變的毒副作用。目前，歐盟、美國、中國和日本等國家已經禁止硝基呋喃類藥物在動物養殖過程中使用，然而由於其治療效果顯著，且尚無相關替代藥物，許多養殖戶仍在使用硝基呋喃類藥物。因此，建立測定硝基呋喃類藥物的檢測方法具有十分重要的意義。 目前檢測硝基呋喃類藥物殘留主要採用高效液相色譜法、高效液相色譜串聯質譜法和酶聯免疫法進行測定，而檢測對象主要集中在飼料和養殖用水，檢測指標主要為硝基呋喃代謝物。由於水產品種類繁多，基質複雜，導致檢測水產品中硝基呋喃原藥殘留檢測的方法研究還比較匱乏，現有的液相色譜檢測水產品中硝基呋喃原藥殘留的方法，其需要採用固相萃取進行淨化，在實際操作中，增加了前處理所需要的時間和費用，同時該方法的定 量限較高，呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因、呋喃唑酮的定量限分別為25、10、15、10^/1^，無法滿足日益嚴苛的檢測要求。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種同時檢測水產品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，該方法具有靈敏度高、操作簡便、檢測成本低廉、準確可靠的特點；定量限均為5 μ g/kg,回收率大於70%，適合用於水產品進出口快速檢測。本發明的一種同時檢測水產品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，包括(I)取呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃唑酮溶於甲醇，配製成100μ g/mL的原藥混合標準儲備液，-IO0C --20°C下保存；將混合標準儲備液用甲醇稀釋，配製成I μ g/mL的混合標準中間液，再將混合標準中間液用流動相配製成標準工作溶液；(2)將魚類樣品去鱗、去皮沿背脊取肌肉，粉碎，-IO0C -20°C下貯存，測定前室溫解凍；取樣品加入乙酸乙酯，經渦旋混合、超聲、再次渦旋混合後離心，取上層溶液再加入乙酸乙酯重複提取一次，合併提取液；(3)將上述提取液減壓濃縮至幹，加入正己烷，渦旋後加入流動相，渦旋混合、離心，取下層溶液過水相膜後，上機色譜分析，即得硝基呋喃類原藥的濃度。所述步驟(I)中的標準工作溶液的濃度分別為0. 010,0. 015,0. 020,0. 025,0. 05、
0.I 和 0. 25 μ g/mL。所述步驟(2)中的魚類樣品為草魚或大黃魚。
所述步驟(I)和(3)中的流動相為體積比25:75的乙腈和NaH2PO4水溶液；其中，NaH2PO4 水溶液的濃度為 O. 05mol/L, pH=3. O。所述步驟(2)和(3)中的離心的速度為4000r/min,離心的時間為5min。所述步驟(3)中的減壓濃縮在30°C下進行。所述步驟(3)中的水相膜的厚度為O. 45 μ m。所述步驟(3)中的色譜分析條件為色譜柱Z0RBAX SB-C18柱，規格為250mm*4. 6mm，粒徑為5 μ m ;柱溫25°C ;檢測波長365nm ;流動相體積比25:75的乙腈和NaH2PO4水溶液；其中，NaH2PO4水溶液的濃度為O. 05mol/L, pH=3. O ;流速1. OmL/min ;進樣量50 μ L ;運行時間18. Omin ;採用梯度洗脫。有益.效果 (I)本發明具有靈敏度高、操作簡便、檢測成本低廉、準確可靠的特點；(2)本發明簡化了樣品的前處理步驟，減少了前處理費用，特別是將樣品的前處理時間縮短了一倍以上，方法的定量限也大幅度提高；(3)本發明檢測四種硝基呋喃原藥殘留的定量限均為5 μ g/kg，回收率大於70%，適合用於水產品進出口快速檢測。


圖I為O. 025 μ g/mL混合標準溶液色譜圖；圖2為5. O μ g/kg草魚樣品加標色譜圖；圖3為草魚空白樣本色譜圖。
具體實施例方式下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之後，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落於本申請所附權利要求書所限定的範圍。實施例II. O. 05mol/L NaH2PO4 (pH = 3. O)溶液配置方法稱 7. 8g NaH2PO4 · 2H20 加入IOOOmL超純水，用磷酸調節pH至3. O，定容至1L。2.四種混合標準溶液配製準確稱取呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因、呋喃唑酮各IOmg,用甲醇定容至IOOmL,配製成ΙΟΟμ g/mL的四種原藥混合標準儲備液,_20°C保存。取ImL混合標準儲備液，用甲醇定容至IOOmL,配製成I μ g/mL的混合標準中間液。移取混合標準中間液，用流動相(體積比乙腈:0· 05M NaH2PO4 = 25:75，ρΗ3· 0)配製成濃度為O. 010、
0.015,0. 020,0. 025,0. 05,0. 1,0. 25 μ g/mL 標準工作溶液。實施例2樣品製備草魚和大黃魚去鱗、去皮沿背脊取肌肉，經組織粉碎機粉碎，-20°C貯存，測定前室溫解凍。樣品前處理I提取準確稱取樣品(5. 00±0. 05)g於50mL離心管中，加入8mL乙酸乙酯，渦旋混合lmin,超聲5min,再次潤旋混合lmin, 4000r/min離心5min,將上層轉移至棕色雞心瓶中，再加入8mL乙酸乙酯重複提取，合併提取液。2.濃縮將提取液在旋轉蒸發儀上於30°C減壓濃縮至幹。3.淨化加入2mL正己燒，渦旋30s後加入ImL流動相(體積比乙臆:O. 05MNaH2P04 = 25:75, ρΗ3· O), 混合 lmin,轉入 IOmL 離心管中，4000r/min 離心 5min,取下層過O. 45 μ m水相膜後,上機分析,結果見圖2和圖3。4.色譜條件儀器色譜為Agilent 1200，色譜柱為ZORBAX SB-C18柱(250mm*4. 6mm, 5 μ m),柱溫:25 V，檢測波長365nm,流動相為體積比乙腈:0. 05MNaH2PO4 = 25:75,pH3. 0，流速:1. OmL/min ;進樣量50μ L ;運行時間為 18. Omin0 梯度洗脫程序見表I。表I流動相及梯度洗脫程序
權利要求
1.一種同時檢測水產品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，包括 (O取呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃唑酮溶於甲醇，配製成ΙΟΟμ g/mL的原藥混合標準儲備液，-IO0C -20°C下保存；將混合標準儲備液用甲醇稀釋，配製成I μ g/mL的混合標準中間液，再將混合標準中間液用流動相配製成標準工作溶液； (2)將魚類樣品去鱗、去皮沿背脊取肌肉，粉碎，-10°C-20°C下貯存，測定前室溫解凍；取樣品加入乙酸乙酯，經渦旋混合、超聲、再次渦旋混合後離心，取上層溶液再加入乙酸乙酯重複提取一次，合併提取液； (3)將上述提取液減壓濃縮至幹，加入正己烷，渦旋後加入流動相，渦旋混合、離心，取下層溶液過水相膜後，上機色譜分析，即得硝基呋喃類原藥的濃度。
2.根據權利要求I所述的一種同時檢測水產品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，其特徵在於:所述步驟(I)中的標準工作溶液的濃度分別為O. 010,0. 015,0. 020,0. 025,0. 05,0. I和 O.25 μ g/mL。
3.根據權利要求I所述的一種同時檢測水產品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，其特徵在於 所述步驟(2)中的魚類樣品為草魚或大黃魚。
4.根據權利要求I所述的一種同時檢測水產品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，其特徵在於 所述步驟(I)和(3 )中的流動相為體積比25:75的乙腈和NaH2PO4水溶液；其中，NaH2PO4水溶液的濃度為O. 05mol/L, pH=3. O。
5.根據權利要求I所述的一種同時檢測水產品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，其特徵在於 所述步驟(2)和(3)中的離心的速度為4000r/min,離心的時間為5min。
6.根據權利要求I所述的一種同時檢測水產品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，其特徵在於 所述步驟(3)中的減壓濃縮在30°C下進行。
7.根據權利要求I所述的一種同時檢測水產品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，其特徵在於 所述步驟(3)中的水相膜的厚度為O. 45 μ m。
8.根據權利要求I所述的一種同時檢測水產品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，其特徵在於 所述步驟(3)中的色譜分析條件為色譜柱Z0RBAX SB-C18柱，規格為250mm*4. 6mm,粒徑為5 μ m ;柱溫25°C ;檢測波長365nm ;流動相體積比25:75的乙腈和NaH2PO4水溶液；其中，NaH2POyjC溶液的濃度為O. 05mol/L，pH=3. O ;流速1. OmL/min ;進樣量:50μ L ;運行時間18. Omin ;採用梯度洗脫。
全文摘要
本發明涉及一種同時檢測水產品中硝基呋喃類原藥殘留的方法，包括(1)四種混合標準溶液配製；(2)樣品製備；(3)提取；(4)濃縮；(5)淨化；(6)測定。本發明具有靈敏度高、操作簡便、檢測成本低廉、準確可靠的特點；定量限均為5μg/kg，回收率大於70%，適合用於水產品進出口快速檢測。
文檔編號G01N30/06GK102830192SQ201210277638
公開日2012年12月19日 申請日期2012年8月6日 優先權日2012年8月6日
發明者黃宣運, 于慧娟, 蔡友瓊, 李冰, 黃冬梅, 史永富, 沈曉盛 申請人:中國水產科學研究院東海水產研究所