一種茶葉提取物磷脂複合物及其製備方法

2024-02-05 04:44:15

專利名稱：：一種茶葉提取物磷脂複合物及其製備方法
技術領域：
：本發明涉及一種茶葉提取物(TE)——磷脂(phytosomes，ph)的複合物(TE-ph)及其製備方法。
背景技術：
：茶葉提取物主要含有活性成分茶多酚，具有獨特的抗氧化和抗脂質過氧化性能，但由於茶多酚具多酚羥基，是極性較大的物質，易溶於水,難溶於油中，而限制了其在油脂類產品中的應用和發揮更好的人體生理活性作用。另外，由於茶多酚有很強的苦澀味，而且在使用過程中穩定性較差，特別是在鹼性環境中，極易被氧化，而失去其特有的抗氧化作用，更限制了其在食品中的廣泛使用。再者，由於茶多酚類分子因其水溶性較強，在生物體內難以吸收利用，而大大降低了其特有生物活性的生物利用度。.磷脂是一種含磷的類脂物質，主要有磷脂醯膽鹼(PC)、磷脂醯乙醇胺(PE)、磷脂醯肌醇(PI)、絲氨酸磷脂(PS)和磷脂酸(PA)等。磷脂是動植物細胞中細胞膜、核膜和類脂膜的基本成份，也是神經細胞的組成成份之一，有保護、營養神經細胞，加快其興奮傳遞作用，並可修復受損腦細胞與神經鞘細胞。將天然活性成份與磷脂在一定條件下進行複合，得到天然活性成份磷脂複合物，可有效地提高天然活性成份的體內吸收，顯著地改善其生物利用度。
發明內容本發明的目的在於提供一種茶葉提取物磷脂複合物及其製備方法，通過茶葉提取物的磷脂包埋，以改變茶葉提取物的理化性質並保持或增強其在不同環境中抗氧化性能，以擴大茶葉提取物的應用途徑，增強在某些環境中的作用。本發明的技術方案是一種茶葉提取物磷脂複合物，其特徵在於它以茶葉提取物和磷脂為原料，通過茶葉提取物的磷脂包埋，以改變茶葉提取物的理化性質並保持或增強其在不同環4境中抗氧化性能。所述的茶葉提取物磷脂複合物，其特徵在於所述茶葉提取物中總兒茶素含量可40%95%。所述的茶葉提取物磷脂複合物，其特徵在於所述磷脂是主要成分為磷脂醯膽鹼的蛋黃磷脂和大豆磷脂，或是主要成分為磷脂醯乙醇胺的腦磷脂，或是主要成分磷脂醯肌醇的肌醇磷脂，或是主要成分磷脂醯絲胺酸的絲氨酸磷脂，或是主要成分溶血磷脂醯膽鹼的溶血磷脂，或是包括上述各種磷脂在內的混合體。一種如權利要求上所述的茶葉提取物磷脂複合物的製備方法，其特徵在於它包括如下歩驟歩驟A:將原料磷脂按比例加入非質子性反應溶劑中，並室溫攪拌、溶解；歩驟B:按茶葉提取物磷脂=1:0.110的mo1比例逐漸加茶葉提取物至磷脂溶液中，逐漸升溫，並攪拌複合液至複合液完全澄清；歩驟C:停止攪拌，待冷至室溫，過濾，濾液濃縮至一定量，回收溶劑，再置真空乾燥箱真空乾燥，得茶葉提取物磷脂複合物產品；上述歩驟中溶劑與磷脂比例為5200:1(V/W)。所述的茶葉提取物磷脂複合物的製備方法，其特徵在於所述的非質子性反應溶劑是石油醚、正己垸、環己烷、氯仿、二氯乙烷、四氫呋喃、乙酸乙酯、乙醇、苯中的一種，或兩種以上混合溶劑。所述的茶葉提取物磷脂複合物的製備方法，其特徵在於所述的非質子性反應溶劑中在步驟A中加入一部分，在步驟B中攪拌期間邊攪拌邊加入另一部分溶劑。分歩加入的好處是視茶葉提取物原料的脂溶性及其與磷脂的比例而定，另一種溶劑的種類和加入量，如果單一溶劑能製成澄清溶液則無需加另一種溶劑。所述的茶葉提取物磷脂複合物的製備方法，其特徵在於步驟B中所述的升溫溫度為10°C100°C。所述的茶葉提取物磷脂複合物的製備方法，其特徵在於步驟B中所述的升溫溫度為25'C6(TC。反應溫度高於60'C原料不穩定，有效成分含量下降，抗氧化能力下降，因此溫度越低，原料越穩定，但低於25'C反應溶劑溶解度大大下降，反應時間大大延長。所述的茶葉提取物磷脂複合物的製備方法，其特徵在於步驟A中將原料磷脂置帶攪拌、溫度計、回流冷凝管的三頸燒瓶中，按比例加入非質子性反應溶劑中，並5室溫攪拌、溶解。本發明以不同總多酚含量的茶葉提取物(TE)作為活性物質，用天然磷脂製備相應磷脂複合物，在製備活性成分磷脂複合物的現有技術中，其活性成分都為單一化學藥物成分，本發明製備的茶葉提取物磷脂複合物(TE-ph)，含有茶葉提取物中多種活性成分，且其主要成分兒茶素，可以是不同含量的混合物。製備的茶葉提取物磷脂複合物(TE-ph)與其原活性成分兒茶素比較，主要增加或加強了以下三個方面的性能1.增加了原活性成分的脂溶性，從而擴增了其使用途徑。由於被複合的活性成分是一類含多酚羥基的黃酮類化合物，其水溶性較強而脂溶性較差，在大多數有機溶劑中幾乎不溶，製備成磷脂複合物後，由於磷脂是一種兩性化合物，分子具有一個親水性的頭部和兩條疏水長鏈，其中親水部分與活性成分相互作用而結合，而磷脂的兩個長脂肪酸鏈不參與複合反應,可自由移動,包裹了磷脂的極性部分形成一個親脂性的表面,使複合物表現出較強的脂溶性。2.增加了原活性成分在使用環境中的穩定性。磷脂複合物比其他兩性分子對兒茶素類分子的穩定性保護作用更強。其保護作用可能有兩個方面，其一由於磷脂複合物與活性成分有相對穩定的結合且使其脂溶性增加。使活性成分不易直接受環境影響而氧化，其二由於磷脂為含氮化合物，一般含氮化合物能再生為具有清除自由基作用的抗氧化劑。3.增加活性成分在生物體內的作用。磷脂本身是細胞膜的組分之一，其化學組分和人體的細胞膜接近，對人體皮膚和人體內細胞膜的滲透性較強，因此與細胞膜表面有較強的親和性，可促使茶葉提取物與細胞結合表現出促進吸收，因此可改善茶葉提取物經腸胃道或透皮吸收，可獲得較高的生物利用度，且活性成分在體內消除變慢，故可提高茶葉提取物的生物利用度和增強其生物活性作用。磷脂也是神經組織的主要組成成分，隨著生物膜和營養學研究的不斷深入，磷脂作為在促進生長發育及免疫，降脂，抗衰老等方面的保健作用約來越受到普遍關注。圖1是T80磷脂複合物(T80-ph)紫外掃描鑑定圖譜；圖2是T90磷脂複合物(T90-ph)紫外掃描鑑定圖譜；圖3是幾種脂溶性抗氧化劑POV隨時間變化情況。6本發明以茶葉提取物(TE)和磷脂(ph)為原料。所述TE中總兒茶素含量可40%95%;所述磷脂可以是主要成分為磷脂醯膽鹼(Pc)的蛋黃磷脂和大豆磷脂，也可以是主要成分為磷脂醯乙醇胺(PE)的腦磷脂、主要成分磷脂醯肌醇(PI)的肌醇磷脂、主要成分磷脂醯絲胺酸(Ps)的絲氨酸磷脂和主要成分溶血磷脂醯膽鹼(LPC)的溶血磷脂等，也可以是包括上述各種磷脂在內的混合體。混合體中的主要成分磷脂醯膽鹼和磷脂醯醇胺的含量，視被複合活性成分的不同而定。磷脂化合物製備必須在非質子傳遞體系中進行，這是因為磷脂與藥物結合的鍵為分子間作用力，在能電離的溶劑中，這種作用力很容易被打破。天然活性成分一般不會溶於非質子性反應溶劑，但生成的磷脂複合物可溶於該體系中。磷脂複合物的形成與溶劑極性及其用量、原料配比、溫度、時間、加料速度等密切相關。本發明就上述因素進行篩選，並以紫外吸收的差值"」A"、表觀油水分配係數"K"值以及抗脂質過氧化等指標值作為篩選指標，完成了可工業化實施的茶葉提取物——磷脂複合物(TE—ph)製備工藝。本發明產品的具體製備工藝介紹如下原料比例TE:磷脂=1:0.110(mol)溶劑體系所用溶劑體系的介電常數<25，常用溶劑有石油醚、正己烷、環己烷、氯仿、二氯乙垸、四氫呋喃、乙酸乙酯、乙醇、苯等，溶劑體系可是單一溶劑也可是兩種以上混合溶劑，混合溶劑之間的比例按被複合物的活性成分的性質而定。溶劑與磷脂比例一般視原料在製備溶劑體系中的溶解度、分散度而定，可為5200:1(V/W)溫度視活性成分的熱穩定性及複合率綜合考慮，可為1(TC10(TC。一般為25。C60。C。製備時間一般由原料在製備溶劑體系中的溶解度、分散度、攪拌速度、活性成分與磷脂的結合速率及磷脂複合物在體系中的溶解度等因素所確定。可為30分鐘50小時。一般為2小時12小時。磷脂複合物製備步驟如下1.將原料磷脂置帶攪拌、溫度計、回流冷凝管的三頸燒瓶中，按比例加入體系溶劑A室溫攪拌溶解。2.按比例(1:0.110)逐漸加TE至磷脂溶液中，可粉體加入，也可用適量7溶劑溶解後加入，逐漸升溫至要求溫度，按要求攪拌複合液至一定時間。3.攪拌期間邊，攪拌邊按要求比例逐漸分次加入溶劑B，繼續攪拌至複合液完全澄清。4.停止攪拌，待冷至室溫，過濾，濾液濃縮至一定量，回收溶劑，再置真空乾燥箱真空乾燥，得茶葉提取物磷脂複合物(TE-ph)產品。注溶劑體系A和溶劑B,可同時加入，也可如上步驟加入，視複合反應情況而定。茶葉提取物碟脂複合物的結構、脂溶性能和抗氧化性能1.茶葉提取物磷脂複合物和茶葉提取物紫外吸收差值比較磷脂複合物是磷脂的極性基團部分與活性成分發生了較強的相互作用而形成的，因此有紫外吸收的活性成分的光譜特徵會有所改變，原成分的吸收值會降低，以原活性成分與活性成分磷脂複合物在紫外吸收峰的吸收值之差來評價磷脂複合活性成分的完整性，也是磷脂複合物的評價標準之一。參見廉潔，王伯初《生物技術通訊》.Vol:17No:830833試驗樣品①製備TE-ph的原料茶葉提取物T90和T80(總兒茶素含量分別為90%和80%):②以上述原料製備的TE大豆磷脂複合物T80-ph和T90-ph。所製備的樣品其原料T90和T80與磷脂的比例都為原料TE:磷脂=1:1(mol比)。將各樣品分別溶於乙酸乙酯中，都分別配製成以TE濃度為基準的0.lmgTE/ml乙酸乙酯溶液，即T90和T90-ph中的T90濃度及T80和T80-ph中的T80都為0.lmg/ral，按TE原料和磷脂的比例，則T90-ph和T80-ph在溶液中的濃度都為0.26mg/ml。其中磷脂濃度0.16mg/ml。圖1和圖2分別為T90-ph和T80-ph紫外掃描圖譜，掃描圖表明，兩樣品在270nm處都有最強吸收峰，而相應濃度的大豆磷脂溶液在270nm無吸收峰(注測定TE和TE-ph時分別以乙酸乙酯和相應濃度的大豆磷脂乙酸乙酯溶液為空白對照)。由於磷脂的屏蔽作用，TE-ph的兒茶素吸收值降低.T80和T80-ph在270nm處吸收值差為ZA-3.18—2.02=1.16;T90和T90-ph在270nm處吸收值差為ZA=3.40—2.53=0.87。2.脂溶性能——表觀油水分配係數K值活性成分經磷脂複合後，通常脂溶性會增強，表觀油水分配係數將這種脂溶性8增強性質數據化。試驗樣品為T90、T90-ph。分別稱取T90和T90-ph0.Olg並分別溶於一定量蒸餾水和脂性有機溶劑中，再分別在T90水溶液和T90-ph脂性有機溶劑溶液中加入等量脂性有機溶劑和蒸餾水，振搖後靜置，樣品中兒茶素成分在乙酸乙酯和水相中自動分配，分離兩相溶液，分別以相應溶劑定容。進行高壓液相(HPLC)色譜分析檢測其中兒茶素含量，以脂相中兒茶素含量除以水相中兒茶素含量，得到的數值即為K值(KtMi/水tti)，K值越大表明脂溶性越強(即水溶性越差)。試驗中所用脂性有機溶劑分別為乙酸乙酯和三氯甲烷表1表觀油水分配係數樣品兩相溶劑EGCG含量mg/mlK值乙酸乙酯相水相Ke化yIAcetate,whlc「T90乙酸乙酯—水137.434.34.0T90-ph54.82.027.4氯仿相水相Kciia.:i'膨iT90氯仿-水0,24650.20.00037T90-ph154.21.33115.9表1數據表明T90—ph的KethylAcetate/粉Ler禾口Kou值遠大於T90的KEthylAcetate^和Kd。f。Wr值，表明經磷脂複合後的茶葉提取物(TE)其脂溶性大大增加。且脂性溶劑極性越小，T90和T90-ph的K值相差越大。也表明T90-ph在脂性溶劑中有很廣的可溶解範圍。3.對二苯代苦味肼自由塞(DPPH)的抑制率自由基是指具有未配對價電子的原子、原子團或分子。大多數自由基化學性質極為活潑，壽命極短。而二苯代苦味肼基自由基(DPPH)由於有三個苯環的空間障礙,而使夾在其中間氮原子上的不成對電子不能發揮其應有的電子成對作用，故能提供一個穩定的自由基。且DPPH'在517nm處有一強吸收,其乙醇溶液呈深紫色。當有自由基清除劑存在時，由於與其單電子配對而使其吸收逐漸消失，其褪色程度與其接受的電子數量成定量關係。因而可用分光法進行定量分析。試驗樣品T80、T80-ph、迷迭香提取物，樣品規格見表2。9測定條件所有樣品等質量溶於乙醇中，濃度25ppm(0.025mg/ml);DPPH濃度30O請ol/L;測定波長517nm。測定時以未加樣品溶液的乙醇作樣品空白對照。測定方法參見下述兩篇文獻(1)陳季武，胡斌，趙實等，發光學報，第26巻第5期，2005年10月664—668;(2)李紅，張元湖，應用DPPH法測定蘋果提取物的抗氧化能力，山東農業大學學報(自然科學版)，第36巻第1期3538。表tableseeoriginaldocumentpage10從表2結果可知，樣品對dpph抑制率基本與總兒茶素含量相關。據此，按T80和T80-ph的總兒茶素含量比例比較，磷脂複合物不但沒有掩蔽兒茶素自身的自由基抑制作用，而'且加強了該作用。4.抗油脂脂質過氧化性能(油脂脂質過氧化值POV測定)油脂氧化過程中生成過氧化物，過氧化物與碘化鉀作用，生成游離碘，以硫代硫酸鈉溶液滴定，以滴定的體積計算生成過氧化物的含量。當油中含有抗氧化劑時，其生成的過氧化物的量就減少，即pov值就降低，以pov值高低判定抗氧化劑的性能優劣。測定方法參照gb5009.37-1996進行測定。測定樣品及規格見表3測定條件將表3樣品分別等質量溶於無tbhq的大豆油中，置98'c條件下保溫加速氧化，在不同時間段(小時)0、4、8、12、16、22、28、32、52、70、78，測定每個樣品的油脂質過氧化值(POV，單位meq/kg)。樣品濃度lOOppm(O.lmg樣品/ml大豆油)。表3:試驗樣品規格tableseeoriginaldocumentpage10T80-ph(EGCG/總多酚)23.19/30.23醚迭香提取物(鼠尾草酸含量)》60Ve(總生育酚含量)》90圖3結果表明，等質量樣品抗油脂過氧化的穩定性由高至低依次為T80-ph〉醚迭香提取物〉T80^Ve。在98'C，78小時末，T80-ph的POV值顯著低於其他三種脂溶性抗氧化劑。見附圖3。另外，就T80-ph和T80抗脂質過氧化性能來看，在油脂中抗氧化性能不完全與總兒茶素相關，T80-PH顯示了磷脂在植物油抗氧化中的的穩定和修復作用。實施例實施例一取大豆磷脂15克置三頸燒瓶中，加氯仿200ml室溫攪拌溶解後，邊攪拌邊逐漸加入TE(總兒茶素含量80X)10克，逐漸升溫至4(TC，攪拌2小時後，邊攪拌邊逐漸加入無水乙醇20ml，繼續攪拌2小時後溶液澄清。過濾回收溶劑，真空乾燥，得茶葉提取物磷脂複合物(TE-ph)產品。實施例二取卵磷脂16克置三頸燒瓶中，加石油醚350ml室溫攪拌溶解。另取TE10克(總兒茶素含量80%)，逐漸加入石油醚磷脂溶液中，逐漸升溫至40。C，攪拌2小時後，邊攪拌邊逐漸加入無水乙醇20ml，繼續攪拌l小時後溶液澄清。過濾回收溶劑，真空乾燥，得TE-ph產品。實施例三取大豆磷脂45克置三頸燒瓶中，加氯仿900ml室溫攪拌溶解。另取TE27克(總兒茶素含量50%)，邊攪拌邊逐漸加入氯仿磷脂溶液中，逐漸升溫至6(TC，攪拌2小時後，邊攪拌邊逐漸加入無水乙醇50ml，4(TC下繼續攪拌2小時後溶液澄清。過濾回收溶劑，真空乾燥，得TE-ph產品。實施例四取卵磷脂20克置三頸燒瓶中，加石油醚400ml室溫攪拌溶解。另取TE10克(總兒茶素含量50%)，逐漸加入石油醚磷脂溶液中，逐漸升溫至6(TC，攪拌2小時後，邊攪拌邊逐漸加入無水乙醇25ml，繼續攪拌1小時後溶液澄清。過濾回收溶劑，真11空乾燥，得TE-ph產品。實施例五取卵磷脂40克置三頸燒瓶中，加氯仿3800ml室溫攪拌溶解。另取TE20克(總兒茶素含量90%)，用600ml乙酸乙酯溶解後，逐漸加入氯仿磷脂溶液中，逐漸升溫至35°C，攪拌5小時後，邊攪拌邊逐漸加入無水乙醇15ml，35'C繼續攪拌1小時，溶液澄清。過濾回收溶劑，真空乾燥，得TE-ph產品。實施例六取卵磷脂32克置三頸燒瓶中，加石油醚3000ml室溫攪拌溶解。另取TE23克(總兒茶素含量90%)，用200ml乙酸乙酯+10無水乙醇溶解後，逐漸加入石油醚磷脂溶液中，逐漸升溫至35'C，攪拌5小時後溶液澄清。過濾回收溶劑，真空乾燥，得TE-ph產品。綜上所述僅為本發明的較佳實施例而已，並非用來限定本發明的實施範圍。即凡依本發明申請專利範圍的內容所作的等效變化與修飾，都應為本發明的技術範疇。1權利要求1、一種茶葉提取物磷脂複合物，其特徵在於它以茶葉提取物和磷脂為原料，通過茶葉提取物的磷脂包埋，以改變茶葉提取物的理化性質並保持或增強其在不同環境中抗氧化性能。2、根據權利要求l所述的茶葉提取物磷脂複合物，其特徵在於所述茶葉提取物中總兒茶素含量可40%95%。3、根據權利要求1所述的茶葉提取物磷脂複合物，其特徵在於所述磷脂是主要成分為磷脂醯膽鹼的蛋黃磷脂和大豆磷脂，或是主要成分為磷脂醯乙醇胺的腦磷脂，或是主要成分磷脂醯肌醇的肌醇磷脂，或是主要成分磷脂醯絲胺酸的絲氨酸磷脂，或是主要成分溶血磷脂醯膽鹼的溶血磷脂，或是包括上述各種磷脂在內的混合體。4、一種如權利要求1或2或3所述的茶葉提取物磷脂複合物的製備方法，其特徵在於它包括如下步驟步驟A:將原料磷脂按比例加入非質子性反應溶劑中，並室溫攪拌、溶解；步驟B:按茶葉提取物磷脂=1:0.110的mol比例逐漸加茶葉提取物至磷脂溶液中，逐漸升溫，並攪拌複合液至複合液完全澄清；步驟C:停止攪拌，待冷至室溫，過濾，濾液濃縮至一定量，回收溶劑，再置真空乾燥箱真空乾燥，得茶葉提取物磷脂複合物產品；上述步驟中溶劑與磷脂比例為5200:1(V/W)。5、根據權利要求4所述的茶葉提取物磷脂複合物的製備方法，其特徵在於所述的非質子性反應溶劑是石油醚、正己垸、環己烷、氯仿、二氯乙烷、四氫呋喃、乙酸乙酯、乙醇、苯中的一種，或兩種以上混合溶劑。6、根據權利要求4所述的茶葉提取物磷脂複合物的製備方法，其特徵在於所述的非質子性反應溶劑中在步驟A中加入一部分，在步驟B中攪拌期間邊攪拌邊加入另一部分溶劑。7、根據權利要求4所述的茶葉提取物磷脂複合物的製備方法，其特徵在於步驟B中所述的升溫溫度為1(TC10(TC。8、根據權利要求7所述的茶葉提取物磷脂複合物的製備方法，其特徵在於歩驟B中所述的升溫溫度為25'C60'C。9、根據權利要求4所述的茶葉提取物磷脂複合物的製備方法，其特徵在於步驟A中將原料磷脂置帶攪拌、溫度計、回流冷凝管的三頸燒瓶中，按比例加入非質子性反應溶劑中，並室溫攪拌、溶解。全文摘要本發明涉及一種茶葉提取物(TE)——磷脂(phytosomes，ph)的複合物(TE-ph)及其製備方法。它以茶葉提取物和磷脂為原料，通過茶葉提取物的磷脂包埋，以改變茶葉提取物的理化性質並保持或增強其在不同環境中抗氧化性能。本發明通過茶葉提取物的磷脂包埋，以改變茶葉提取物的理化性質並保持或增強其在不同環境中抗氧化性能，以擴大茶葉提取物的應用途徑，增強在某些環境中的作用。文檔編號A23F3/00GK101554192SQ20081003975公開日2009年10月14日申請日期2008年6月27日優先權日2008年6月27日發明者蔚張,杭曉敏,邵衛樑申請人:上海交大昂立股份有限公司;上海諾德生物實業有限公司