丁香酚、蛇床子素復配生物殺菌劑的製作方法

2024-01-25 00:47:15 1

專利名稱：丁香酚、蛇床子素復配生物殺菌劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種防治植物病害的殺菌劑，屬於植物保護領域，具體是關於植物來源的天然化合物丁香酚、蛇床子素復配而成的生物殺菌劑。
背景技術：
約有80％的植物病害中是由真菌引起的。植物真菌病害不僅降低作物的產量和品質，而且在農產品貯藏、加工、運輸過程中進一步發展造成更大危害和損失，有些還能產生真菌毒素汙染。許多植物病害如白粉病、灰黴病、疫病、霜黴病、紋枯病、葉斑病等已成為影響農業生產的主要病害。目前對植物真菌病害的藥劑防治主要採用化學殺菌劑防治。隨著化學農藥使用頻率和使用量增加，其潛在的弊端也逐漸暴露出來(1)毒性較高；(2)農藥殘留超標；(3)病菌對藥劑產生嚴重的抗藥性。如有報導卵菌對苯基醯胺類(甲霜靈)及乙磷鋁兩類藥劑抗性問題已有很多報導；鐮刀菌、菌核菌、葉斑病菌等多種病原真菌對多菌靈和甲基託布津早已產生抗性；灰黴病菌對二甲醯亞胺類(速克靈)、苯胺基嘧啶類、咪唑類菌劑等已產生多重抗性；白粉病菌對三唑酮已產生了抗性。
隨著人們對植物病害生物防治的重視，生物農藥在植物病害防治工作中的作用越來越重要。生物農藥具有毒性低、環境兼容性好，不同作用機制的生物農藥也將對現有生產上已經產生抗藥性的農藥品種起到一種緩解抗性風險的作用。
丁香酚(eugenol)，又稱丁子香酚，化學名稱為2-甲氧基-4-烯丙基苯酚，分子式為C10H12O2。無色至淡黃色液體，在空氣中變棕色，存在於丁香油、內桂葉油、內桂皮油、樟腦油、肉豆蔻油等中。丁香酚在醫藥上的藥理活性主要表現為抑菌、麻醉、解熱、抗氧化、抗腫瘤、促進透皮吸收、祛蚊等。丁香酚具有辛香科的強烈香氣，生活中常用作牙膏香料、抗氧化劑和防腐劑等。丁香酚在農業上的應用，李鵬霞2006年報導該化合物在室內對蘋果貯藏期病害致病真菌如蘋果青黴、蘋果灰黴、蘋果炭疽等有抑制作用。
香豆素類化合物蛇床子素(Osthol)，化學名稱為8-(3-甲基-2-丁烯基)甲醚繖形酮，是傘形花科植物蛇床子中主要成分，也是歐前胡、圓當歸、毛當歸、栓翅芹的根和根莖，芸香科植物八角、黃皮的根皮，單葉芸香等的地上部分的活性成分。蛇床子素在農業上的應用，2004年江蘇省農業科學院申請了「蛇床子素及其復配組合物防治作物白粉病」及「蛇床子素復配組合物」。該化合物對作物白粉病有良好的防治效果，且毒性低，不汙染環境。但該化合物不能進行人工合成，成本相對較高。
關於丁香酚和蛇床子素這兩種化合物的復配殺菌劑至今未見有相關報導和應用。

發明內容
發明目的本發明目的是針對以上兩種化合物的特徵，提供一種高效、低毒的植物來源的天然化合物復配組合物，其主要成分為丁香酚和蛇床子素，可用於防治瓜果、蔬菜、水稻、小麥、果樹等植物上的真菌性病害。
技術方案一種丁香酚、蛇床子素復配殺菌劑，由丁香酚和蛇床子素組成，丁香酚和蛇床子素的重量比例為1∶1～8∶1之間。將蛇床子素、丁香酚按比例混勻即可。
所述復配殺菌劑可以製成由丁香酚、蛇床子素、溶劑、助劑和水組成的微乳劑。其製法是首先將蛇床子素、丁香酚按比例混勻，再依次加入不同比例的溶劑、助劑和水，按常規方法配製。
本發明所述的復配殺菌劑具有以下優點1、增效性，室內復配配方篩選結果表明，丁香酚和蛇床子素按不同比例復配對不同的植物病原真菌均具有明顯的增效作用。
2、降低成本，由於蛇床子素不能人工合成，其來源依賴於植物材料，成本相對較高，而丁香酚雖然也是來源植物的一種化合物，但是其已經可以進行人工合成。因此兩者復配不但能降低使用成本，更能降低對植物資源的依賴。
3、擴大抑菌譜，丁香酚和蛇床子素兩者作用機制不同，不容易產生交互抗性。丁香酚是破壞真菌菌絲體細胞膜、影響膜的滲透性，從而導致菌體死亡。蛇床子素對病原真菌的作用機理是抑制葡萄糖的吸收而導致糖飢餓，糖飢餓引起幾丁質水解酶活性升高，影響到細胞壁的形成，另一方面抑制鈣的吸收，影響到細胞壁前體物質的運輸、沉積，最終影響到菌絲頂端生長。兩者復配可以克服化學藥劑容易產生抗性的缺點，擴大藥劑使用範圍，延長持效期，提高藥效。
4、毒性低，丁香酚和蛇床子素均屬於植物來源的化合物，其毒性低，對人和環境安全。丁香酚對大鼠急性經口毒性LD50＞3000mg/Kg；蛇床子素對大鼠急性經口、經皮毒性 ♀＞5000mg/Kg。`按照急性口服毒性分級標準兩者分別屬於微毒和低毒類。
具體實施例方式
實施例1丁香酚與蛇床子素復配室內配方篩選1、供試藥劑A.99.0％丁香酚，購於南京豐澤土畜產品有限責任公司，溶解於70％乙醇，配製成10000μg/ml母液備用。
B.94.7％蛇床子素，購於四川成都龍泉高科生物製品公司，溶解於70％乙醇，配製成10000μg/ml母液備用。
2、供試菌株水稻紋枯病菌(Rhizoctonia solani)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、番茄灰黴病菌(Botrytis cinerea)(均由江蘇省農業科學院食品質量安全與檢測研究所提供)。
3、試驗方法採用菌絲生長速率測定法試驗設9個處理，即丁香酚、蛇床子素、5個丁香酚和蛇床子素的不同配比、溶劑對照和空白對照，將兩種藥劑的母液按不同比例加入到定量的融化的PDA培養基中，使兩個單劑和復配劑的最終濃度分別為100、50、25、12.5、6.25μg/ml，充分搖勻，倒入已滅菌的培養皿(直徑9cm)中，待培養基凝固後，用直徑0.5cm打孔器製取菌碟，用接種針將菌碟接種到培養基中央，菌絲面朝下，每皿一塊，每處理重複4次，置於26℃培養箱中培養，培養5(天)後用十字交叉法測量菌落直徑。以4次重複的平均值計算抑制率。計算公式為 根據公式計算抑制率，利用百分比與機率值對照表將抑制率轉換成機率值，同時將劑量濃度換算成對數值，以劑量對數值(x)和機率值(y)得到毒力公式Y＝a+bx，計算出相關係數r及抑制中濃度EC50。
根據Wadley的方法計算混配劑的相互作用，以增效係數SR值分析混配的效果EC50(理論值)＝(c+d)/[c/EC50(C)+d/EC50(D)]；SR＝EC50(理論值)/EC50(實際值)；C、D分別代表混劑中的兩種組分；c、d分別代表兩種單劑在混劑中的比例；EC50(實際值)為特定混劑的實際測定值；SR≥1.5表示兩種單劑混配後具有增效作用；SR≤0.5表示兩種單劑混配後具有拮抗作用；0.5≤SR≤1.5表示兩種單劑混配後具有相加作用。
4、試驗結果丁香酚、蛇床子素兩種單劑及不同復配組合物對供試植物病原真菌的抑制率、毒力回歸方程、相關係數r、有效抑制中濃度EC50和混劑的增效係數SR見表1。
表1丁香酚、蛇床子素復配配方的篩選結果

注表中丁香酚和蛇床子素的各個比例均為有效成分之比。
實施例2丁香酚與蛇床子素復配殺菌劑田間藥效試驗丁香酚與蛇床子素復配殺菌劑防治草莓白粉病田間試驗(試驗方案按照《農藥田間藥效試驗準則(二)》設計)一、試驗設計和安排1、供試作物和防治對象。
供試作物草莓，品種為豐香。
防治對象草莓白粉病，病原菌為Sphaerotheca pannosa。
2、供試藥劑試驗藥劑20％丁香酚微乳劑，江蘇省農業科學院，有效濃度為300μg/ml。
1％蛇床子素水乳劑，江蘇省農業科學院，有效濃度為40μg/ml。
22.5％丁香酚·蛇床子素微乳劑(有效成分20％丁香酚+2.5％蛇床子素)，江蘇省農業科學院，有效濃度為200μg/ml丁香酚+25μg/ml蛇床子素。
22.5％丁香酚·蛇床子素微乳劑(有效成分20％丁香酚+2.5％蛇床子素)，江蘇省農業科學院，有效濃度為150μg/ml丁香酚+18.75μg/ml蛇床子素。
22.5％丁香酚·蛇床子素微乳劑(有效成分20％丁香酚+2.5％蛇床子素)，江蘇省農業科學院，有效濃度為100μg/ml丁香酚+12.5μg/ml蛇床子素。
對照藥劑70％代森錳鋅可溼性粉劑900倍，市售，上海華泰農藥有限公司生產。
3、小區設計試驗地塊的選擇此試驗設在江蘇省農業科學院園藝研究所試驗大棚基地。
試驗設7個藥劑處理，22.5％丁香酚·蛇床子素微乳劑225μg/mL、22.5％丁香酚·蛇床子素微乳劑168.75μg/mL、22.5％丁香酚·蛇床子素微乳劑112.5μg/mL，20％丁香酚微乳劑300μg/mL，1％蛇床子素水乳劑40μg/mL，70％代森錳鋅可溼性粉劑900倍，空白對照。小區面積15m2，4次重複，小區間採用完全隨機區組排列，分別於2007年2月28日、3月6日施二次藥，施藥用工農-16型人工背負式噴霧器，每667m2藥液量為60kg。
4、調查方法每小區對角線五點取樣，每點五株。每株各取3張有代表性的複葉，以複葉上每張葉片病斑面積佔整個小葉片面積百分率分級。
分級標準為0級無病斑；1級病斑面積佔整個葉面積5％以下；3級病斑面積佔整個葉面積6％～15％；5級病斑面積佔整個葉面積16％～25％；7級病斑面積佔整個葉面積26％～50％；9級病斑面積佔整個葉面積50％以上。
5、調查時間和次數本試驗共調查2次，於2月28日第1次施藥前調查病情基數，第2次調查在3月12日最後一次藥後6d進行。


CK0噴藥前不施藥對照區的病指。CK1噴藥後不施藥對照區的病指。
pt0噴藥前處理區的病指。Pt1噴藥後處理區的病指。
二、試驗結果表2 22.5％蛇床子素·丁香酚微乳劑防治草莓白粉病田間藥效試驗結果 江蘇南京

注不同小寫字母表示差異達0.05顯著水平。
*為4次重複的平均值。
丁香酚與蛇床子素復配殺菌劑防治油菜菌核病田間試驗(試驗方案按照《農藥田間藥效試驗準則(一)》設計)一、試驗設計和安排1、供試作物和防治對象。
供試作物油菜，品種為油研8號。
防治對象油菜菌核病，病原菌為Sclerotinia sclerotiorum。
2、供試藥劑試驗藥劑20％丁香酚微乳劑，江蘇省農業科學院，有效濃度為300μg/ml。
1％蛇床子素水乳劑，江蘇省農業科學院，有效濃度為80μg/ml。
10％丁香酚·蛇床子素微乳劑(有效成分5％丁香酚+5％蛇床子素)，江蘇省農業科學院，有效濃度為60μg/ml丁香酚+60μg/ml蛇床子素。
10％丁香酚·蛇床子素微乳劑(有效成分5％丁香酚+5％蛇床子素)，江蘇省農業科學院，有效濃度為50μg/ml丁香酚+50μg/ml蛇床子素。
10％丁香酚·蛇床子素微乳劑(有效成分5％丁香酚+5％蛇床子素)，江蘇省農業科學院，有效濃度為40μg/ml丁香酚+40μg/ml蛇床子素。
對照藥劑40％菌核淨可溼性粉劑75g/667m2，市售，揚州市蘇靈農藥化工有限公司生產。
3、小區設計試驗地塊的選擇此試驗設在江蘇省建湖縣蘆溝鎮蘆東村一油菜種植地。
試驗設7個藥劑處理10％丁香酚·蛇床子素微乳劑120μg/mL、10％丁香酚·蛇床子素微乳劑100μg/mL、10％丁香酚·蛇床子素微乳劑80μg/mL，20％丁香酚微乳劑300μg/mL，1％蛇床子素水乳劑80μg/mL，40％菌核淨可溼性粉劑75g/667m2，空白對照。小區面積20m2，4次重複，小區間採用完全隨機區組排列，分別於2006年4月6日、4月13日施二次藥，施藥用工農-16型人工背負式噴霧器，每667m2藥液量為60kg。
4、調查方法每小區棋盤式10點取樣，每點5株。並根據以下分級標準記錄發病情況；分級標準為0級無病斑；
1級輕微發病，發病面積佔整個植株面積的5％以下；3級輕微發病，發病面積佔整個植株面積的6％～15％；5級中等發病，發病面積佔整個植株面積的16％～30％；7級高度發病，發病面積佔整個植株面積的31～50％以下；9級嚴重發病，發病面積佔整個植株面積的50％以上。
5、調查時間和次數本試驗共調查1次，於在油菜菌核病發病基本定局即2006年5月21日調查各小區發病情況。


CK1噴藥後不施藥對照區的病指。Pt1噴藥後處理區的病指。
二、試驗結果表3 10％蛇床子素·丁香酚微乳劑防治油菜菌核病田間藥效試驗結果 江蘇建湖

注不同小寫字母表示差異達0.05顯著水平。
*為4次重複的平均值。
權利要求
1.一種丁香酚、蛇床子素復配殺菌劑，其特徵是該復配殺菌劑由丁香酚和蛇床子素組成，丁香酚和蛇床子素的重量比例為1∶1～8∶1之間。
2.根據權利要求1所述的丁香酚、蛇床子素復配殺菌劑，其特徵是丁香酚和蛇床子素的重量比例為1∶1～6∶1之間。
3.根據權利要求1所述的丁香酚、蛇床子素復配殺菌劑，其特徵是丁香酚和蛇床子素的重量比例為1∶1～4∶1之間。
4.根據權利要求1所述的丁香酚、蛇床子素復配殺菌劑，其特徵是丁香酚和蛇床子素的重量比例為1∶1～2∶1之間。
5.根據權利要求1、2、3或4所述的丁香酚、蛇床子素復配殺菌劑，其特徵是所述復配殺菌劑由蛇床子素、丁香酚、溶劑、助劑和水組成的微乳劑。
全文摘要
本發明提供了一種丁香酚、蛇床子素復配生物殺菌劑，該復配殺菌劑由蛇床子素和丁香酚組成，丁香酚和蛇床子素的重量比例為1∶1～8∶1之間。本發明中的兩種化合物均來源於植物，復配物對人和環境安全。對植物病原菌的作用機理不同，使用後病原菌不易對其產生抗藥性。
文檔編號A01N31/08GK101036461SQ20071002172
公開日2007年9月19日 申請日期2007年4月26日 優先權日2007年4月26日
發明者王春梅, 石志琦, 陳浩, 範永堅 申請人:江蘇省農業科學院