用於胃癌檢測的標記物的製作方法
2023-12-09 04:27:51 2
專利名稱:用於胃癌檢測的標記物的製作方法
技術領域:
本發明涉及癌症的檢測。具體而言,本發明涉及用於癌症檢測的遺傳標記物和/或蛋白質標記物的用途,並且更加具體而言涉及到遺傳標記物和/或蛋白質標記物用於胃癌檢測的用途。
背景技術:
癌症的早期檢測和治療能顯著提高癌症患者的存活。以胃癌為例,診斷為疾病早期的患者5年存活率為90%,而診斷為疾病晚期的患者5年存活率約為10%。然而,絕大多數胃癌患者通常處於疾病晚期。因此,開發胃癌早期診斷方法能夠改善患者的預後。
在包括體液如血液、尿液、腹膜灌洗液和糞便提取物在內的生物標本中的特異性癌症相關標記物的鑑定能提供有價值的癌症早期診斷方法,以便早期治療並改善預後。特異性癌症標記物還能提供用於監測疾病進展的方法,從而能跟蹤外科手術、放射治療和化學治療的功效。然而,對於許多主要癌症,可利用的標記物缺乏足夠的敏感性和特異性。例如,用於胃癌的最常用標記物ca19-9、ca72-4和癌胚抗原(CEA)僅檢測到大約15-50%的任何階段的胃腫瘤,對於疾病早期的檢測則降至大約2-11%。因此,出現假陰性檢測的頻率非常高,這導致患者和健康護理工作者認為不存在疾病,而事實上,患者可能患有嚴重的需要立即注意的癌症。而且,使用這些標記物可能對高達1/3的患有良性胃疾病個體給出假陽性信號。
發明簡述因此,迫切需要更好的檢測癌症存在的方法。本發明方面提供了能夠檢測早期癌症和降低假陽性和假陰性測試結果頻率的方法、成分和裝置。
在某些實施方案中,可以使用分子分析來鑑定與非惡性胃組織相比在胃腫瘤組織中過表達的基因。此分析包括微陣列和定量聚合酶鏈反應(qPCR)方法。癌基因和由那些基因編碼的蛋白質在本文中稱作胃腫瘤標記物(GTM)。需要理解的是術語GTM並不要求標記物僅僅對於胃腫瘤是特異的。而是應當解釋為GTM可以在包括惡性或非惡性腫瘤在內的其他類型腫瘤中表達增加,其中所述腫瘤除此之外包括胃癌、膀胱癌、結腸直腸癌、胰腺癌、卵巢癌、皮膚癌(例如黑素瘤)、肝癌、食道癌、子宮內膜癌和腦癌。無論如何應當這樣理解,即術語GTM不包括在先技術標記物ca19-9、ca72-4和CEA。一些GTM的過表達足以高度可靠地診斷胃癌,而且在其它情況下,兩種或多種GTM的過表達能提供胃癌的可靠診斷。
在某些實施方案中,可以用微陣列方法來檢測一種或多種癌相關基因的過表達模式。
在其它實施方案中,可以用定量聚合酶鏈反應(qPCR)來鑑定腫瘤或其它生物樣品中過表達標記物的存在。
在本文公開的一些GTM檢測的實施方案中,GTM在腫瘤細胞內以高度選擇方式過表達而在非腫瘤細胞即使表達也是很少,從而能夠只檢測一種過表達的GTM來對癌症進行敏感和精確檢測。在其它實施方案中,可以在樣品中檢測兩種、三種或更多GTM的過表達並從而能提供更大的診斷確定性。
所選擇基因編碼的蛋白質能夠被細胞分泌出來或從細胞中穿透出來。這些蛋白質可以單獨或彼此聯合用作診斷胃癌的血清或體液標記物或者作為監測所確定疾病進展的標記物。可以使用本領域已知的方法開展蛋白質標記物的檢測,並且所述方法包括單克隆抗體、多克隆抗血清等的使用。
附圖簡述關於其特定實施方案和圖在本發明中進行了描述,其中
圖1描述了本發明的胃癌標記物及其寡核苷酸序列列表。
圖2描述了用微陣列方法進行研究獲得的結果列表。
圖3描述了用定量PCR進行研究獲得的結果列表。
圖4a-4d描述了用微陣列方法和qPCR方法獲得的倍數的log2數值結果之間的關係,其中對於四種胃癌標記物數據集中於中間的正常值。灰色方塊對應非惡性腫瘤(「正常」)樣品,而黑色三角對應腫瘤樣品。圖4aASPN。圖4bSPP1。圖4cSPARC。圖4dMMP12。
圖5a-5w描述了顯示從定量PCR研究獲得的多種腫瘤標誌物的相對頻率對變化倍數的log2數值的柱狀圖。圖5aASPN;圖5bCST1、2和4;圖5cCSPG2;圖5dIGFBP7;圖5eINHBA;圖5fLOXL2;圖5gLUM;圖5hSFRP4;圖5iSPARC;圖5jSPP1;圖5kTHBS2;圖5lTIMP1;圖5madlican;圖5nPRS11;圖5oASAH1;圖5pSFRP2;圖5qGGH;圖5rMMP12;圖5sKLK10;圖5tLEPRE1;圖5uTG;圖5vEFEMP2和圖5wTGFBI。
圖6是顯示表達高於中間正常表達的第95百分位數的腫瘤標記物數量的柱狀圖。結果以qPCR數據為基礎並分別顯示了每一份腫瘤樣品的結果。
圖7a-7c描述了與腫瘤標記物CEA基因表達相比,在單個腫瘤樣品和非惡性腫瘤樣品中標記物的相對的log2表達圖。CEA是當前最常用的用於監測胃癌進展的血清標記物。
圖8顯示的是圖3的補充列表。圖8總結了用qPCR檢測候選腫瘤標記物的表達水平,但是使用的是配對數據(即腫瘤(「T」)和非惡性腫瘤(「N」)樣品來自同一個體)從而提供T:N比。圖8還包括了圖3中未包括的其它標記物,即MMP2,CGR11,TGFB1,PCSK5,SERPINB5,SERPINH1。為了比較,也顯示了已經建立的血清標記物基因CEACAM5(CEA)的表達水平。在29個標記物中有27個具有高於或等於CEA的T:N差異中值。此外,與CEA相比,全部29個標記物在配對樣品中具有較高的百分比,其中在腫瘤樣品中標記物的表達超過在正常樣品中的表達。CST1,2,44、ASPN和SFRP4三種標記物在配對的腫瘤樣品和正常樣品之間的表達顯示出100%的差異。本文顯示了這三種標記物的基因序列以及用來檢測它們的引物和探針位置。
圖9a-9d描述了29種胃癌標記物在40位患者的配對樣品中的單個的及中值的TN變化倍數數據。
圖10a-10ad描述了CEA和本發明中其它GTM表達在腫瘤分期和變化倍數的log2數值間的關係圖。圖10aadlican;圖10bASPN;圖10cCSPG2;圖10dCST1,2,4;圖10eEFEMP2;圖10fGGF;圖10gINHBA;圖10hIGFBP7;圖10iKLK10;圖10jLEPRE1;圖10kLUM;圖10lLOXL2;圖10mMMP12;圖10n;TIMP1;圖10oASAH1;圖10pSPP1;圖10qSFRP2;圖10rSFRP4;圖10sSPARC;圖10tPRSS11;圖10uTHBS2圖10vTG;圖10wTGFBI;圖10xCGR11;圖10ySERPINH1;圖10zMMP2;圖10aaPCSK5;圖10abSERPINB5;圖10acTGFB1和圖10adCEA(CEACAM5)。
圖11a-11ad描述了本發明的29種GTM和CEA表達在腫瘤類型(擴散型(D)和腸型(I))和變化倍數的log2數值間的關係圖。圖11aadlican;圖11bASPN;圖11cCSPG2;圖11dCST1,2,4;圖11eEFEMP2;圖11fGGH;圖11gINHBA;圖11hIGFBP7;圖11iKLK10;圖11jLEPRE1圖11kLUM;圖11lLOXL2;圖11mMMP12;圖11nTIMP1;圖11oASAH1;圖11pSPP1;圖11qSFRP2;圖11rSFRP4圖11s;SPARC;圖11tPRSS11圖11uTHBS2;圖11vTG;圖11wTGFBI;圖11xCGR11;圖11ySERPINH1;圖11zMMP2;圖11aaPCSK5;圖11abSERPINB5;圖11acTGFB1和圖11adCEA(CEACAM5)。
圖12描述了顯示三種標記物SERPINH1、CST1,2,4和INHBA在一系列胃腫瘤樣品和非惡性腫瘤胃樣品中表達的三維圖。
圖13描述了顯示多重標記物對精確區分腫瘤組織和非惡性腫瘤組織能力的影響的表。此表來自qPCR數據的正態分布。
圖14是來源於腫瘤和非腫瘤組織的4種腫瘤標記物的Western印跡。
圖15是胃癌組織和血清中腫瘤標誌物SPARC的Western印跡。
圖16是胃細胞系AGS上清中的半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN的免疫印跡。
發明詳述定義在詳細描述本發明的實施方案之前,提供本文使用的一些術語的定義是有用的。
術語「GTM」或「胃腫瘤標記物」或「GTM家族成員」指與胃癌有關的基因、基因片段、RNA、RNA片段、蛋白質或相關蛋白質片段或者其它鑑別分子,其中不包括在先技術已知的與胃癌相關的分子ca19-9、ca72-4和CEA。下文包括了GTM實例。
述語「標記物」指在數量和質量上與生物現象的存在相關的分子。「標記物」的實例為GTM,然而,「標記物」還包括與不良狀況形成機制直接相關或者間接相關的代謝產物、副產物。
術語「qPCR」指定量聚合酶鏈式反應。
術語「表達」包括mRNA從基因或基因部分的產生,並且包括由RNA或基因或基因部分所編碼的蛋白質的產生,還包括與表達相關的檢測物質的出現。例如,結合配體(如抗體)與基因或其它寡核苷酸、蛋白質或蛋白質片段的結合以及結合配體的顯色都包括在術語「表達」的範圍內。因此,在免疫印跡如Western印跡上斑點密度的增加也處於以生物學分子為基礎的術語「表達」的範圍內。
術語「CPN2」指人羧肽酶N多肽2(83kDa的鏈)和羧肽酶N。
術語「HAPLN4」指人透明質酸糖蛋白連接蛋白4。
術語「MMP12」指人基質金屬蛋白酶12。
術語「INHBA」指人抑制素βA(還包括激活蛋白A、激活蛋白AB或α多肽)。
術語「IGFBP7」指人胰島素樣生長因子7。
術語「GGH」指人γ穀氨醯水解酶(也稱作結合酶、葉醯聚γ穀氨醯水解酶)。
術語「LEPRE1」指人富含亮氨酸脯氨酸的蛋白多糖(也稱作leprecan1)。
術語「CST4」指人半胱氨酸蛋白酶抑制劑S。
術語「SFRP4」指人分泌型frizzled相關蛋白4。
術語「ASPN」指人asporin(也稱作1類LRR)。
術語「CGREF1」或「CGR11」指具有EF手型結構域1的人細胞生長調節因子。
除非另外說明,術語「KLK」指人激肽釋放酶10變體1、或者人激肽釋放酶10變體2、或者兩者。
術語「TIMP1」指人金屬蛋白酶組織抑制劑1(也稱作促紅細胞活性劑(erythroid potentiating activity)或膠原酶抑制劑)。
術語「SPARC」指富含半胱氨酸的人分泌型酸性蛋白質(也稱作骨粘連蛋白)。
術語「TGFBI」指68kDa的人轉化生長因子β誘導蛋白(transforminggrowth factor,beta-induced,68kDa)。
術語「EFEMP2」指包含EGF的纖蛋白樣細胞外基質蛋白質2。
術語「LUM」指人光亮蛋白聚糖。
術語「SNN」指人stannin。
術語「SPP1」指人分泌型磷蛋白1(也稱作骨橋蛋白或骨唾液酸蛋白I或早期T-淋巴細胞活化劑1)。
術語「CSPG2」指人硫酸軟骨素蛋白聚糖2(也稱作多功能蛋白聚糖)。
術語「ASAH1」指人N-醯基鞘氨醇醯胺水解酶變體1,或者N-醯基鞘氨醇醯胺水解酶變體2,或者N-醯基鞘氨醇醯胺水解酶變體1和2(也稱作酸性神經醯胺酶1變體1和2)。
術語「PRSS11」指人絲氨酸蛋白酶11(也稱作IGF結合絲氨酸蛋白酶)。
術語「SFRP2」指人分泌型frizzled相關蛋白2。
術語「PLA2G12B」指人XIIB組磷脂酶A2。
術語「SPON2」指人細胞外基質蛋白質spondin 2。
術語「OLFM1」指人嗅介蛋白1。
術語「TSRC1」指人包含重複的血小板反應蛋白1(thrombospondinrepeat containing 1)。
術語「THBS2」指人血小板反應蛋白2。
術語「adlican」指DKFZp564I1922。
術語「CST2」指人半胱氨酸蛋白酶抑制劑SA。
術語「CST1」指人半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN。
術語「LOXL2」指人賴氨醯氧化酶樣酶2。
術語「TG」指人甲狀腺球蛋白。
術語「TGFB1」指人轉化生長因子,β1。
術語「SERPINH1」指人絲氨酸或半胱氨酸蛋白酶抑制劑進化枝H(也稱作熱休克蛋白47成員1或膠原結合蛋白1)。
術語「SERPINB5」指人絲氨酸或半胱氨酸蛋白酶抑制劑進化枝B(也稱作卵清蛋白成員5)。
術語「CEACAMS」或「CEA」指人癌胚抗原相關細胞黏附分子5。
術語「MMP2」指人基質金屬蛋白酶2(也稱作明膠酶A或72kDa明膠酶或72kDa IV型膠原酶)。
術語「PCSK5」指人前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin類型5(proprotein convertase subtilisin/kexin type 5)。
應當理解,上述術語可以指蛋白質、DNA序列和/或RNA序列。還應當理解,上述術語還可以指具有與本文所述相同序列的非人類蛋白質、DNA和/或RNA。
本發明實施方案詳述本發明提供了在檢測胃癌方面比在先技術的標記物可靠性更高的用於檢測和評價腫瘤(包括胃癌)的標記物。術語「可靠性」包括不存在假陽性和/或假陰性。因此,標記物的可靠性越高,與使用此標記物所作出的診斷相關的假陽性和/或假陰性就越少。所以,在某些實施方案中,提供了允許胃癌檢測可靠性比為50%左右的先技術標記物可靠性更高的標記物。在其它實施方案中,提供了可靠性大於70%左右的標記物;在其它實施方案中,提供了可靠性大於73%左右的標記物;還是在其它實施方案中,提供了可靠性大於80%左右的標記物;在更進一步的實施方案中,提供了可靠性大於90%左右的標記物;還是在其它實施方案中,提供了可靠性大於95%左右的標記物;在更進一步的實施方案中,提供了可靠性大於98%左右的標記物並且在某些實施方案中,提供了可靠性為大約100%的標記物。
因此,我們已經意外發現了許多其存在與胃腫瘤相關的基因和蛋白質。因此,對基因產物(例如寡核苷酸諸如mRNA)以及從該寡核苷酸翻譯而來的蛋白質和肽的檢測能用來診斷腫瘤,如胃腫瘤。對來自胃腫瘤患者的腫瘤組織和同一受試者非惡性腫瘤組織的樣品進行陣列分析,意外地發現在很多胃腫瘤中某些基因過表達的特定模式與疾病相關。
還可以使用抗癌標記物的抗體檢測癌標記物。
通過分析多個癌標記物的存在和表達量從而能提高診斷敏感性同時降低假陽性和/或假陰性結果的頻率。
癌症檢測的一般方法以下方法是使用GTM家族成員檢測包括胃癌在內的癌症的非限定性方法。
·使用對GTM基因產物具有選擇性的寡核苷酸探針的微陣列方法。
·使用標記物特異性引物和探針對腫瘤樣品和正常樣品進行實時定量PCR(qPCR)。
·酶聯免疫吸附測定法(ELISA)。
·使用抗標記物的抗體對胃腫瘤和淋巴結轉移進行免疫組織化學分析。
·使用抗標記物的抗體對其它腫瘤進行免疫組織化學分析,其中所述的其它腫瘤包括但不限於結腸直腸癌、胰腺癌、卵巢癌、黑素瘤、肝癌、食道癌、膀胱癌、子宮內膜癌和腦癌。
·對胃癌患者手術切除腫瘤之前和之後留取血清中的標記物家族成員進行免疫檢測。
·對健康個體和患有非惡性腫瘤疾病(例如胃炎、潰瘍、胃上皮化生和發育異常)個體血清中的標記物家族成員進行免疫檢測。
·對其它癌症患者中的標記物家族成員進行免疫檢測,其中所述的其它癌症包括但不限於結腸直腸癌、胰腺癌、卵巢癌、黑素瘤、肝癌、食道癌、膀胱癌、子宮內膜癌和腦癌。
·對體液中的標記物進行檢測,其中所述的體液包括血清、淋巴液、腹膜液、腦脊液、滑液等。
·對胃癌患者胃液、腹膜灌洗液、尿液和糞便中的標記物家族成員進行免疫檢測。使用陣列方法和/或qPCR。
·使用計算機對陣列數據或qPCR數據進行分析。收集原始數據並通過比較胃腫瘤基因表達水平和同一基因在非腫瘤組織中的表達水平進行變化倍數分析。提供用於斷定表達增加的閾值(例如,1.5倍增加、2倍增加,並且在備選的實施方案中為3倍增加、4倍增加或5倍增加)。應該意識到,用於斷定已發生表達增加的其它閾值可以在不脫離本發明的範圍內選擇。對腫瘤基因表達的進一步分析包括將呈現出表達增加的那些基因與已知胃腫瘤表達譜相匹配以便診斷腫瘤。
在某些方面,本發明提供了檢測癌症的方法,其包括(a)準備生物學樣品;和
(b)檢測GTM家族成員在所述樣品中的過表達。
在其它方面,本發明包括檢測GTM mRNA過表達的步驟。
在其他方面,本發明包括檢測GTM蛋白質過表達的步驟。
在更進一步的方面,本發明包括檢測GTM肽過表達的步驟。
在仍然進一步的方面,本發明包括檢測GTM的裝置,其包括其上具有GTM捕獲試劑的基質;和與所述基質關聯的檢測器,所述檢測器能夠檢測與所述捕獲試劑相關的GTM,其中捕獲試劑包括寡核苷酸或抗體。
另外的方面包括用於檢測癌症的試劑盒,其包含基質;GTM捕獲試劑,其包含一種或更多GTM特異性寡核苷酸和GTM特異性抗體;和使用說明書。
本發明更進一步的方面包括使用qPCR檢測GTM的方法,其包括對所述GTM特異的正向引物;對所述GTM特異的反向引物;PCR試劑;反應小管;和使用說明書。
本發明的另外方面包括檢測GTM蛋白質或肽存在的試劑盒,其包含具有針對所述GTM蛋白質或肽的捕獲試劑的基質;對所述GTM蛋白質或肽特異的抗體;能夠對針對所述GTM蛋白質或肽的結合抗體進行標記的試劑;和使用說明書。
本發明的另外方面包括生產單克隆抗體的方法,其包括步驟在更進一步的方面,本發明包括檢測胃癌的方法,其包括步驟從懷疑患有胃癌的患者準備樣品;
用ELISA方法測定GTM蛋白質的存在。
如本文所描述,腫瘤檢測可以通過測定一種或更多腫瘤特異性標記物的表達來完成。我們已經意外發現GTM的增強表達與所診斷胃癌存在之間的相關性非常高。檢測到的最小顯著相關性的p值約1.6×10-6。許多相關性在p值小於10-20時具有意義。由於具有如此高的顯著性,就不必檢測一種以上GTM的增強表達。然而,本發明過多的GTM能夠提高胃癌檢測的可靠性。
本文提供的方法還包括高敏感性的測定法。qPCR非常靈敏從而能用來檢測樣品中拷貝數非常低(例如,1-100)的基因產物。這樣的敏感性使得對胃癌相關事件的極早檢測成為可能。
方法下面的普通方法用來評價用於胃癌相關標記物分子鑑定的多種方法的適宜性。
腫瘤收集從韓國的首爾大學醫院和紐西蘭的Dunedin醫院手術切除樣品中收集胃腫瘤樣品和非惡性胃組織。胃癌診斷是基於症狀、體檢發現和對組織的組織學檢查做出的。
RNA提取在一些實施方案中,通過測定腫瘤樣品中RNA的變化分析胃癌相關基因的表達。將冰凍的手術樣品包埋入OCT介質中。使用切片機從組織塊中切出60μM厚的切片,放入TriReagent∶水(3∶1)混合物中勻漿,再用氯仿抽提。然後用RneasyTM方法(Qiagen)從水相中純化總RNA。同樣也從16種癌細胞系中提取RNA並且合併後作為參考RNA。
微陣列玻片製備環氧樹脂包被的玻片從MWG Biotech AG(Ebersberg,德國)獲得,並且使用Gene Machines微陣列機器人並根據廠商提供的方法在上面印上~30,000條50mer寡核苷酸。圖2顯示了相關寡核苷酸的參考號(MWGoligo#)以及NCBI mRNA和蛋白質參考序列。下文還顯示了本發明GTM的全部DNA序列。
RNA標記和雜交用Superscript II逆轉錄酶(Invitrogen)在包含5-(3-氨烷基)-2』-脫氧尿苷-5』-三磷酸的反應中將10μg總RNA轉錄為cDNA。反應產物經Microcon柱去離子之後,與Cy3或Cy5在碳酸氫緩衝液中室溫孵育1小時。經Qiaquick柱(Qiagen)去除未結合的染料,並在SpeedVac中濃縮樣品至15μL。然後,Cy3和Cy5標記的cDNA與Ambion ULTRAhyb緩衝液混合,100℃變性2分鐘,在雜交盒中與微陣列玻片於42℃雜交16小時。然後洗滌玻片並用Axon 4000A掃描儀在兩種功率設置下進行兩次掃描產生基因表達的初步螢光數據。
歸一化方法為比較腫瘤組織和非癌組織中癌基因的表達,應用Genepix軟體檢測的平均螢光強度通過減去局部背景螢光強度得以校正。背景校正強度少於零的點被排除。為了易於歸一化,將強度比和總體點強度進行對數(log)轉換。對數轉換後的強度比通過用LOCFITTM軟體包進行局部回歸來校正著色誤差(dye bias)和空間誤差(spatial bias)。對數轉換的強度比同時對總體點強度和位置回歸。局部回歸殘差提供了經校正的變化倍數對數值。對於質量控制,每個歸一化微陣列的比率對於點強度和位置進行了繪圖。隨後肉眼檢測圖中可能的殘餘假象。另外,應用方差分析(ANOVA)模型來檢測針尖誤差(pin-tip bias)。將所有歸一化結果和參數插入Postgres資料庫進行統計學分析。
統計學分析在腫瘤樣品對正常組織中基因表達中的統計學意義變化可通過測定陣列之間的變化倍數進行鑑定。為實現此鑑定,將log2(比率)按比例調整至每個陣列具有相同的總體標準差。此標準化步驟減少了平均的組織種類內變異性。對於每一個寡核苷酸,將log2(比率)進一步轉換至中位數值為零的結果從而易於肉眼檢察。然後應用以變化倍數為基礎的秩檢驗改善噪音魯棒性。此檢驗由兩個步驟組成(i)計算陣列內變化倍數的等級(rankof fold change)(Rfc),和(ii)將腫瘤組織的中值(Rfc)減去正常組織的中值(Rfc)。兩個中值等級的差異限定了圖2中給出的變化倍數等級的範圍。另外兩個統計學檢驗也根據此標準化數據進行1)進行和不進行Bonferroni調整的兩組樣品student′s t-檢驗;和2)Wilcoxon檢驗。
標記物組合的統計學分析為了確定使用兩種或三種標記物組合區分腫瘤和非惡性腫瘤樣品的數值,對來自40份配對樣品(來自同一患者的腫瘤樣品和非惡性腫瘤樣品)的qPCR數據進行下面的分析。使用樣品平均值和標準差得到非惡性腫瘤樣品和腫瘤樣品的正態分布。然後確定來自腫瘤表達數據的值可能超過非惡性腫瘤分布中所規定閾值(例如,大於50%、70%、73%、80%、90%、95%、98%、99%或100%)的可能性(即敏感性)。對於標記物組合,確定了至少一種標記物表達超過閾值的可能性。
表1
定量實時PCR在其它實施方案中,實時PCR或者定量PCR(qPCR)能用來對PCR模板拷貝數進行絕對或相對定量。使用Primer Express V2.0TM(AppliedBiosystems)設計TaqmanTM探針和引物。如果可能,在所得的擴增子中儘可能包括所有潛在的剪接變體,其中擴增子優選為MWG-Biotech來源微陣列寡核苷酸所涵蓋的區域。備選地,如果靶基因是由涵蓋目的擴增子的Assay-on-Demand表達分析(Applied Biosystems)所給出的,則可使用這些基因。表1和圖1顯示了基因名稱、符號、Applied Biosystems「assayon demand」號、用於qPCR的正向引物、反向引物以及探針序列。在內部設計分析中,使用SYBR綠色標記方法和由參考RNA得到的cDNA滴定引物濃度。在ABI PrismTM7000序列檢測系統中於標準循環條件下進行擴增。當從解離曲線中觀察到單一擴增產物時,使用最佳引物濃度和終濃度為250nM 5』FAM-3』TAMRA磷酸TaqmanTM探針(Proligo)可得到超過625倍濃度範圍的標準曲線。在後續分析中使用了能夠給出回歸係數大於0.98的標準曲線的分析法。應該意識到,在其它實施方案中,回歸係數不需要如此高。而是可以使用任何標準曲線,只要回歸係數高到足以允許測定表達差異的統計學意義即可。在備選的實施方案中,此回歸係數可以大於大約0.7、大於大約0.8、大於大約0.9或者大於大約0.95。
在兩塊96孔板上對代表每一個RNA樣品的單一cDNA進行分析。每一塊板包括兩份的參考cDNA標準曲線,其濃度範圍超過625倍。分析包括ΔCT(靶基因CT-平均參考cDNA CT)的計算。ΔCT與變化倍數的log2值的負值成比例。再計算相對於非惡性腫瘤變化倍數log2值中值的變化倍數log2值(倍數變化的log2值-正常的變化倍數log2值的中值)。然後將這些變化倍數以頻率分類並作圖。
癌症標記物基因的微陣列分析用Cy5標記來自58份胃腫瘤組織樣品和58份非惡性腫瘤(「正常」)胃組織樣品的RNA,並與Cy3標記的參考RNA一式兩份或一式三份進行雜交。在歸一化之後,在29,718個基因中每一個基因的表達變化通過三種測定進行估計(i)變化倍數基因在腫瘤樣品中的表達中值(非標準化)除以在非惡性腫瘤樣品中的水平中值的比值,(ii)變化倍數的等級,以及(iii)所觀察的倍數變化具有顯著性的統計學概率。
用於胃惡性腫瘤的血清標記物的選擇在某些實施方案中,可以在包括血清在內的生物體液中發現癌症標記物。血清標記物選自陣列數據,其基於(i)以分泌蛋白質或膜外裂解為特徵的信號序列的存在,(ii)與非惡性腫瘤對照樣品相比,標記物在腫瘤樣品中過表達(變化倍數)的水平中值,(iii)標記物在腫瘤樣品和非惡性腫瘤對照樣品之間表達等級的中值變化,以及(iv)在腫瘤樣品和非惡性腫瘤對照樣品中表達範圍之間的重疊程度。
已知全部29種GTM在其編碼序列的5』末端具有信號肽序列。信號序列引導GTM蛋白質通過質膜轉運至細胞外區室(Gunner von Heijne,Journal of Molecular Biology 173243-251(1984))。此外,沒有一個GTM具有可導致全長蛋白質滯留在質膜內的跨膜序列基序。因此,本發明的所有GTM標記物很可能分泌至細胞外區室,並因此與脈管系統接觸(通過毛細管吸收,或者先轉運至淋巴系統然後再轉運至脈管系統)。結果,這些腫瘤來源的每一個標記物會出現在血液中。
再者,如果>50%的腫瘤樣品顯示基因表達水平位於非惡性腫瘤樣品範圍的第95百分位數之內,則基因被排除。腫瘤樣品中過表達程度的變化不僅反映了腫瘤異質性,而且反映了腫瘤樣品被「正常」組織(包括肌肉、基質細胞和非惡性上皮腺)汙染程度的變化。「正常」汙染範圍為5-70%,其中值大約為25%。其它基因由於在造血細胞中相對高表達或在化生胃組織中表達增加而被排除。應該意識到,取決於正常細胞或正常表達標記物的細胞的汙染程度,可以選擇能夠使癌症源和正常源充分分離的不同閾值範圍。
我們發現有有用GTM包括下面標記物的基因(DNA)、互補DNA(cDNA)、RNA、蛋白質和蛋白質片段,其中所述標記物有羧肽酶N多肽2,83kDa的鏈(也稱作羧肽酶N(CPN2))、基質金屬蛋白酶12(MMP12)、抑制素(「TNHBA」)、胰島素樣生長因子7(「IGFBP7」)、γ穀氨醯水解酶(「GGH」)、富含亮氨酸脯氨酸的蛋白多糖(「LEPRE1」)、半胱氨酸蛋白酶抑制劑S(「CST4」)、分泌型frizzled相關蛋白4(「SFRP4」)、asporin(「ASPN」)、具有EF手型結構域1的細胞生長調節因子(「CGREF1」)、激肽釋放酶(「KLK10」)、金屬蛋白酶組織抑制劑1(「TIMP1」)、富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白質(「SPARC」)、轉化生長因子β誘導蛋白(「TGFBI」)、包含EGF的纖蛋白樣細胞外基質蛋白質2(「EFEMP2」)、光亮蛋白聚糖(「LUM」)、stannin(「SNN」)、分泌型磷蛋白1(「SPP1」)、硫酸軟骨素蛋白聚糖2(「CSPG2」)、N-醯基鞘氨醇醯胺水解酶(「ASAH1」)、絲氨酸蛋白酶11(「PRSS11」)、分泌型frizzled相關蛋白2(「SFRP2」)、XIIB組磷脂酶A2(「PLA2G12B」)、細胞外基質蛋白質spondin 2(「SPON2」)、嗅介蛋白1(「OLFM1」)、包含重複的血小板反應蛋白1(「TSRC1」)、血小板反應蛋白2(「THBS2」)、adlican、半胱氨酸蛋白酶抑制劑SA(「CST2」)、半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN(「CST1」)、賴氨醯氧化酶樣酶2(「LOXL2」)、甲狀腺球蛋白(「TG」)、轉化生長因子β1(「TGFB1」)、絲氨酸或半胱氨酸蛋白酶抑制劑進化枝H(「SERPINH1」)、絲氨酸或半胱氨酸蛋白酶抑制劑進化枝B(「SERPINB5」)、基質金屬蛋白酶2(「MMP2」)、前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin類型5(「PCSK5」)以及透明質酸糖蛋白連接蛋白4(「HAPLN4」)。
本發明GTM的DNA序列以及鑑定信息一起示於下面。
基質金屬蛋白酶12>gi|4505206|ref|NM_002426.1|人類基質金屬蛋白酶12(巨噬細胞彈性蛋白酶)(MMP12),mRNA|qPCR正向引物匹配[758..780]|qPCR反向引物匹配[888..864]|qPCR探針匹配[786..815]
TAGAAGTTTACAATGAAGTTTCTTCTAATACTGCTCCTGCAGGCCACTGCTTCTGGAGCTCTTCCCCTGAACAGCTCTACAAGCCTGGAAAAAAATAATGTGCTATTTGGTGAGAGATACTTAGAAAAATTTTATGGCCTTGAGATAAACAAACTTCCAGTGACAAAAATGAAATATAGTGGAAACTTAATGAAGGAAAAAATCCAAGAAATGCAGCACTTCTTGGGTCTGAAAGTGACCGGGCAACTGGACACATCTACCCTGGAGATGATGCACGCACCTCGATGTGGAGTCCCCGATCTCCATCATTTCAGGGAAATGCCAGGGGGGCCCGTATGGAGGAAACATTATATCACCTACAGAATCAATAATTACACACCTGACATGAACCGTGAGGATGTTGACTACGCAATCCGGAAAGCTTTCCAAGTATGGAGTAATGTTACCCCCTTGAAATTCAGCAAGATTAACACAGGCATGGCTGACATTTTGGTGGTTTTTGCCCGTGGAGCTCATGGAGACTTCCATGCTTTTGATGGCAAAGGTGGAATCCTAGCCCATGCTTTTGGACCTGGATCTGGCATTGGAGGGGATGCACATTTCGATGAGGACGAATTCTGGACTACACATTCAGGAGGCACAAACTTGTTCCTCACTGCTGTTCACGAGATTGGCCATTCCTTAGGTCTTGGCCATTCTAGTGATCCAAAGGCTGTAATGTTCCCCACCTACAAATATGTCGACATCAACACATTTCGCCTCTCTGCTGATGACATACGTGGCATTCAGTCCCTGTATGGAGACCCAAAAGAGAACCAACGCTTGCCAAATCCTGACAATTCAGAACCAGCTCTCTGTGACCCCAATTTGAGTTTTGATGCTGTCACTACCGTGGGAAATAAGATCTTTTTCTTCAAAGACAGGTTCTTCTGGCTGAAGGTTTCTGAGAGACCAAAGACCAGTGTTAATTTAATTTCTTCCTTATGGCCAACCTTGCCATCTGGCATTGAAGCTGCTTATGAAATTGAAGCCAGAAATCAAGTTTTTCTTTTTAAAGATGACAAATACTGGTTAATTAGCAATTTAAGACCAGAGCCAAATTATCCCAAGAGCATACATTCTTTTGGTTTTCCTAACTTTGTGAAAAAAATTGATGCAGCTGTTTTTAACCCACGTTTTTATAGGACCTACTTCTTTGTAGATAACCAGTATTGGAGGTATGATGAAAGGAGACAGATGATGGACCCTGGTTATCCCAAACTGATTACCAAGAACTTCCAAGGAATCGGGCCTAAAATTGATGCAGTCTTCTATTCTAAAAACAAATACTACTATTTCTTCCAAGGATCTAACCAATTTGAATATGACTTCCTACTCCAACGTATCACCAAAACACTGAAAAGCAATAGCTGGTTTGGTTGTTAGAAATGGTGTAATTAATGGTTTTTGTTAGTTCACTTCAGCTTAATAAGTATTTATTGCATATTTGCTATGTCCTCAGTGTACCACTACTTAGAGATATGTATCATAAAAATAAAATCTGTAAACCATAGGTAATGATTATATAAAATACATAATATTTTTCAATTTTGAAAACTCTAATTGTCCATTCTTGCTTGACTCTACTATTAAGTTTGAAAATAGTTACCTTCAAAGCAAGATAATTCTATTTGAAGCATGCTCTGTAAGTTGCTTCCTAACATCCTTGGACTGAGAAATTATACTTACTTCTGGCATAACTAAAATTAAGTATATATATTTTGGCTCAAATAAAATTGSEQ ID NO67抑制素βA>gi|4504698|ref|NM_002192.1|人類抑制素,βA(激活蛋白A、激活蛋白ABα多肽)(INHBA),mRNA|qPCR據assay_on_demand情況匹配[457..481]TCCACACACACAAAAAACCTGCGCGTGAGGGGGGAGGAAAAGCAGGGCCTTTAAAAAGGCAATCACAACAACTTTTGCTGCCAGGATGCCCTTGCTTTGGCTGAGAGGATTTCTGTTGGCAAGTTGCTGGATTATAGTGAGGAGTTCCCCCACCCCAGGATCCGAGGGGCACAGCGCGGCCCCCGACTGTCCGTCCTGTGCGCTGGCCGCCCTCCCAAAGGATGTACCCAACTCTCAGCCAGAGATGGTGGAGGCCGTCAAGAAGCACATTTTAAACATGCTGCACTTGAAGAAGAGACCCGATGTCACCCAGCCGGTACCCAAGGCGGCGCTTCTGAACGCGATCAGAAAGCTTCATGTGGGCAAAGTCGGGGAGAACGGGTATGTGGAGATAGAGGATGACATTGGAAGGAGGGCAGAAATGAATGAACTTATGGAGCAGACCTCGGAGATCATCACGTTTGCCGAGTCAGGAACAGCCAGGAAGACGCTGCACTTCGAGATTTCCAAGGAAGGCAGTGACCTGTCAGTGGTGGAGCGTGCAGAAGTCTGGCTCTTCCTAAAAGTCCCCAAGGCCAACAGGACCAGGACCAAAGTCACCATCCGCCTCTTCCAGCAGCAGAAGCACCCGCAGGGCAGCTTGGACACAGGGGAAGAGGCCGAGGAAGTGGGCTTAAAGGGGGAGAGGAGTGAACTGTTGCTCTCTGAAAAAGTAGTAGACGCTCGGAAGAGCACCTGGCATGTCTTCCCTGTCTCCAGCAGCATCCAGCGGTTGCTGGACCAGGGCAAGAGCTCCCTGGACGTTCGGATTGCCTGTGAGCAGTGCCAGGAGAGTGGCGCCAGCTTGGTTCTCCTGGGCAAGAAGAAGAAGAAAGAAGAGGAGGGGGAAGGGAAAAAGAAGGGCGGAGGTGAAGGTGGGGCAGGAGCAGATGAGGAAAAGGAGCAGTCGCACAGACCTTTCCTCATGCTGCAGGCCCGGCAGTCTGAAGACCACCCTCATCGCCGGCGTCGGCGGGGCTTGGAGTGTGATGGCAAGGTCAACATCTGCTGTAAGAAACAGTTCTTTGTCAGTTTCAAGGACATCGGCTGGAATGACTGGATCATTGCTCCCTCTGGCTATCATGCCAACTACTGCGAGGGTGAGTGCCCGAGCCATATAGCAGGCACGTCCGGGTCCTCACTGTCCTTCCACTCAACAGTCATCAACCACTACCGCATGCGGGGCCATAGCCCCTTTGCCAACCTCAAATCGTGCTGTGTGCCCACCAAGCTGAGACCCATGTCCATGTTGTACTATGATGATGGTCAAAACATCATCAAAAAGGACATTCAGAACATGATCGTGGAGGAGTGTGGGTGCTCATAGAGTTGCCCAGCCCAGGGGGAAAGGGAGCAAGAGTTGTCCAGAGAAGACAGTGGCAAAATGAAGAAATTTTTAAGGTTTCTGAGTTAACCAGAAAAATAGAAATTAAAAACAAAACAAAACAAAAAAAAAAACAAAAAAAAACAAAAGTAAATTAAAAACAAACCTGATGAAACAGATGAAACAGATGAAGGAAGATGTGGAAATCTTAGCCTGCCTTAGCCAGGGCTCAGAGATGAAGCAGTGAAGAGACAGATTGGGAGGGAAAGGGAGAATGGTGTACCCTTTATTTCTTCTGAAATCACACTGATGACATCAGTTGTTTAAACGGGGTATTGTCCTTTCCCCCCTTGAGGTTCCCTTGTGAGCTTGAATCAACCAATCTGATCTGCAGTAGTGTGGACTAGAACAACCCAAATAGCATCTAGAAAGCCATGAGTTTGAAAGGGCCCATCACAGGCACTTTCCTAGCCTAAT SEQ ID NO68胰島素樣生長因子結合蛋白7>gi|4504618|ref|NM_001553.1|人類胰島素樣生長因子結合蛋白7(IGFBP7),mRNA|qPCR正向引物匹配[470..487]|qPCR反向引物匹配[567..546]|qPCR探針匹配[492..517]GCCGCTGCCACCGCACCCCGCCATGGAGCGGCCGTCGCTGCGCGCCCTGCTCCTCGGCGCCGCTGGGCTGCTGCTCCTGCTCCTGCCCCTCTCCTCTTCCTCCTCTTCGGACACCTGCGGCCCCTGCGAGCCGGCCTCCTGCCCGCCCCTGCCCCCGCTGGGCTGCCTGCTGGGCGAGACCCGCGACGCGTGCGGCTGCTGCCCTATGTGCGCCCGCGGCGAGGGCGAGCCGTGCGGGGGTGGCGGCGCCGGCAGGGGGTACTGCGCGCCGGGCATGGAGTGCGTGAAGAGCCGCAAGAGGCGGAAGGGTAAAGCCGGGGCAGCAGCCGGCGGTCCGGGTGTAAGCGGCGTGTGCGTGTGCAAGAGCCGCTACCCGGTGTGCGGCAGCGACGGCACCACCTACCCGAGCGGCTGCCAGCTGCGCGCCGCCAGCCAGAGGGCCGAGAGCCGCGGGGAGAAGGCCATCACCCAGGTCAGCAAGGGCACCTGCGAGCAAGGTCCTTCCATAGTGACGCCCCCCAAGGACATCTGGAATGTCACTGGTGCCCAGGTGTACTTGAGCTGTGAGGTCATCGGAATCCCGACACCTGTCCTCATCTGGAACAAGGTAAAAAGGGGTCACTATGGAGTTCAAAGGACAGAACTCCTGCCTGGTGACCGGGACAACCTGGCCATTCAGACCCGGGGTGGCCCAGAAAAGCATGAAGTAACTGGCTGGGTGCTGGTATCTCCTCTAAGTAAGGAAGATGCTGGAGAATATGAGTGCCATGCATCCAATTCCCAAGGACAGGCTTCAGCATCAGCAAAAATTACAGTGGTTGATGCCTTACATGAAATACCAGTGAAAAAAGGTGAAGGTGCCGAGCTATAAACCTCCAGAATATTATTAGTCTGCATGGTTAAAAGTAGTCATGGATAACTACATTACCTGTTCTTGCCTAATAAGTTTCTTTTAATCCAATCCACTAACACTTTAGTTATATTCACTGGTTTTACACAGAGAAATACAAAATAAAGATCACACATCAAGACTATCTACAAAAATTTATTATATATTTACAGAAGAAAAGCATGCATATCATTAAACAAATAAAATACTTTTTATCACAAAAAAAAAAAAAAAASEQ ID NO69γ穀氨醯水解酶>gi|4503986|ref|NM_003878.1|人類γ穀氨醯水解酶(結合酶、葉醯聚γ穀氨醯水解酶)(GGH),mRNA|qPCR正向引物匹配[531..547]|qPCR反向引物匹配[611..587]|qPCR探針匹配[549..577]TGCCGCAGCCCCCGCCCGCCCGCAGAGCTTTTGAAAGGCGGCGGGAGGCGGCGAGCGCCATGGCCAGTCCGGGCTGCCTGCTGTGCGTGCTGGGCCTGCTACTCTGCGGGGCGGCGAGCCTCGAGCTGTCTAGACCCCACGGCGACACCGCCAAGAAGCCCATCATCGGAATATTAATGCAAAAATGCCGTAATAAAGTCATGAAAAACTATGGAAGATACTATATTGCTGCGTCCTATGTAAAGTACTTGGAGTCTGCAGGTGCGAGAGTTGTACCAGTAAGGCTGGATCTTACAGAGAAAGACTATGAAATACTTTTCAAATCTATTAATGGAATCCTTTTCCCTGGAGGAAGTGTTGACCTCAGACGCTCAGATTATGCTAAAGTGGCCAAAATATTTTATAACTTGTCCATACAGAGTTTTGATGATGGAGACTATTTTCCTGTGTGGGGCACATGCCTTGGATTTGAAGAGCTTTCACTGCTGATTAGTGGAGAGTGCTTATTAACTGCCACAGATACTGTTGACGTGGCAATGCCGCTGAACTTCACTGGAGGTCAATTGCACAGCAGAATGTTCCAGAATTTTCCTACTGAGTTGTTGCTGTCATTAGCAGTAGAACCTCTGACTGCCAATTTCCATAAGTGGAGCCTCTCCGTGAAGAATTTTACAATGAATGAAAAGTTAAAGAAGTTTTTCAATGTCTTAACTACAAATACAGATGGCAAGATTGAGTTTATTTCAACAATGGAAGGATATAAGTATCCAGTATATGGTGTCCAGTGGCATCCAGAGAAAGCACCTTATGAGTGGAAGAATTTGGATGGCATTTCCCATGCACCTAATGCTGTGAAAACCGCATTTTATTTAGCAGAGTTTTTTGTTAATGAAGCTCGGAAAAACAACCATCATTTTAAATCTGAATCTGAAGAGGAGAAAGCATTGATTTATCAGTTCAGTCCAATTTATACTGGAAATATTTCTTCATTTCAGCAATGTTACATATTTGATTGAAAGTCTTCAATTTGTTAACAGAGCAAATTTGAATAATTCCATGATTAAACTGTTAGAATAACTTGCTACTCATGGCAAGATTAGGAAGTCACAGATTCTTTTCTATAATGTGCCTGGCTCTGATTCTTCATTATGTATGTGACTATTTATATAACATTAGATAATTAAATAGTGAGACATAAATAGAGTGCTTTTTCATGGAAAAGCCTTCTTATATCTGAAGATTGAAAAATAAATTTACTGAAATACAAAAAAAAAAAAAAASEQ ID NO70富含亮氨酸脯氨酸的蛋白多糖1>gi|21361917|ref|NM_022356.2|人類富含亮氨酸脯氨酸的蛋白多糖(leprecan)1(LEPRE1),mRNA|qPCR正向引物匹配[813..836]|qPCR反向引物匹配[894..872]|qPCR探針匹配[841..870]GGTGGCGGGTGGCTGGCGGTTCCGTTAGGTCTGAGGGAGCGATGGCGGTACGCGCGTTGAAGCTGCTGACCACACTGCTGGCTGTCGTGGCCGCTGCCTCCCAAGCCGAGGTCGAGTCCGAGGCAGGATGGGGCATGGTGACGCCTGATCTGCTCTTCGCCGAGGGGACCGCAGCCTACGCGCGCGGGGACTGGCCCGGGGTGGTCCTGAGCATGGAACGGGCGCTGCGCTCCCGGGCAGCCCTCCGCGCCCTTCGCCTGCGCTGCCGCACCCAGTGTGCCGCCGACTTCCCGTGGGAGCTGGACCCCGACTGGTCCCCCAGCCCGGCCCAGGCCTCGGGCGCCGCCGCCCTGCGCGACCTGAGCTTCTTCGGGGGCCTTCTGCGTCGCGCTGCCTGCCTGCGCCGCTGCCTCGGGCCGCCGGCCGCCCACTCGCTCAGCGAAGAGATGGAGCTGGAGTTCCGCAAGCGGAGCCCCTACAACTACCTGCAGGTCGCCTACTTCAAGATCAACAAGTTGGAGAAAGCTGTTGCTGCAGCACACACCTTCTTCGTGGGCAATCCTGAGCACATGGAAATGCAGCAGAACCTAGACTATTACCAAACCATGTCTGGAGTGAAGGAGGCCGACTTCAAGGATCTTGAGACTCAACCCCATATGCAAGAATTTCGACTGGGAGTGCGACTCTACTCAGAGGAACAGCCACAGGAAGCTGTGCCCCACCTAGAGGCGGCGCTGCAAGAATACTTTGTGGCCTATGAGGAGTGCCGTGCCCTCTGCGAAGGGCCCTATGACTACGATGGCTACAACTACCTTGAGTACAACGCTGACCTCTTCCAGGCCATCACAGATCATTACATCCAGGTCCTCAACTGTAAGCAGAACTGTGTCACGGAGCTTGCTTCCCACCCAAGTCGAGAGAAGCCCTTTGAAGACTTCCTCCCATCGCATTATAATTATCTGCAGTTTGCCTACTATAACATTGGGAATTATACACAGGCTGTTGAATGTGCCAAGACCTATCTTCTCTTCTTCCCCAATGACGAGGTGATGAACCAAAATTTGGCCTATTATGCAGCTATGCTTGGAGAAGAACACACCAGATCCATCGGCCCCCGTGAGAGTGCCAAGGAGTACCGACAGCGAAGCCTACTGGAAAAAGAACTGCTTTTCTTCGCTTATGATGTTTTTGGAATTCCCTTTGTGGATCCGGATTCATGGACTCCAGGAGAAGTGATTCCCAAGAGATTGCAAGAGAAACAGAAGTCAGAACGGGAAACAGCCGTACGCATCTCCCAGGAGATTGGGAACCTTATGAAGGAAATCGAGACCCTTGTGGAAGAGAAGACCAAGGAGTCACTGGATGTGAGCAGACTGACCCGGGAAGGTGGCCCCCTGCTGTATGAAGGCATCAGTCTCACCATGAACTCCAAACTCCTGAATGGTTCCCAGCGGGTGGTGATGGACGGCGTAATCTCTGACCACGAGTGTCAGGAGCTGCAGAGACTGACCAATGTGGCAGCAACCTCAGGAGATGGCTACCGGGGTCAGACCTCCCCACATACTCCCAATGAAAAGTTCTATGGTGTCACTGTCTTCAAAGCCCTCAAGCTGGGGCAAGAAGGCAAAGTTCCTCTGCAGAGTGCCCACCTGTACTACAACGTGACGGAGAAGGTGCGGCGCATCATGGAGTCCTACTTCCGCCTGGATACGCCCCTCTACTTTTCCTACTCTCATCTGGTGTGCCGCACTGCCATCGAAGAGGTCCAGGCAGAGAGGAAGGATGATAGTCATCCAGTCCACGTGGACAACTGCATCCTGAATGCCGAGACCCTCGTGTGTGTCAAAGAGCCCCCAGCCTACACCTTCCGCGACTACAGCGCCATCCTTTACCTAAATGGGGACTTCGATGGCGGAAACTTTTATTTCACTGAACTGGATGCCAAGACCGTGACGGCAGAGGTGCAGCCTCAGTGTGGAAGAGCCGTGGGATTCTCTTCAGGCACTGAAAACCCACATGGAGTGAAGGCTGTCACCAGGGGGCAGCGCTGTGCCATCGCCCTGTGGTTCACCCTGGACCCTCGACACAGCGAGCGGGTGAGAGCAGCTCGAGCGGGTGAGAGCAGCTGGTGCTGTGGTGACCCGTTCCCAGAGCGCCCTTGGTTTGCCTTTCTCTTCCCCAAATCCCATTGCCAGTGGCTGAGACACGAAAGGAGCACTTGGGACACCAGCTCCAACGCCCTGTCATTATGGTCACATTGCCTTGTCCTCCCTGGGCCTGCTGTGAACGGGATCCAGGTGGGGAAAGAGGTCAAGACAGGGAGCGATGCTGAGTTCTTGGTTCCCTCCTTGGGCCCCACTTCAGCTGTCCTTTTCCAGAGAGTAGGACCTGCTGGGAAGGAGATGAGCCTGGGGCCATTAAGGAACCTTCCTTGTCCCCTGGGAAGTAGCAGCTGAGAGATAGCGAGTGTCTGGAGCGGAGGCCTCTCTGAATGGGCAGGGGTTTGTCCTTGCAGGACAGGGTGCAGGCAGATGACCTGGTGAAGATGCTCTTCAGCCCAGAAGAGATGGTCCTCTCCCAGGAGCAGCCCCTGGATGCCCAGCAGGGCCCCCCCGAACCTGCACAAGAGTCTCTCTCAGGCAGTGAATCGAAGCCCAAGGATGAGCTATGACAGCGTCCAGGTCAGACGGATGGGTGACTAGACCCATGGAGAGGAACTCTTCTGCACTCTGAGCTGGCCAGCCCCTCGGGGCTGCAGAGCAGTGAGCCTACATCTGCCACTCAGCCGAGGGGACCCTGCTCACAGCCTTCTACATGGTGCTACTGCTCTTGGAGTGGACATGACCAGACACCGCACCCCCTGGATCTGGCTGAGGGCTCAGGACACAGGCCCAGCCACCCCCAGGGGCCTCCACAGGCCGCTGCATAACAGCGATACAGTACTTAAGTGTCTGTGTAGACAACCAAAGAATAAATGATTCATGGTTTTTTTTSEQ ID NO71半胱氨酸蛋白酶抑制劑S>gi|19882254|ref|NM_001899.2|人類半胱氨酸蛋白酶抑制劑S(CST4),mRNA|qPCR正向引物匹配[343..361]|qPCR反向引物匹配[434..411]|qPCR探針匹配[382..410]GGCTCTCACCCTCCTCTCCTGCAGCTCCAGCTTTGTGCTCTGCCTCTGAGGAGACCATGGCCCGGCCTCTGTGTACCCTGCTACTCCTGATGGCTACCCTGGCTGGGGCTCTGGCCTCGAGCTCCAAGGAGGAGAATAGGATAATCCCAGGTGGCATCTATGATGCAGACCTCAATGATGAGTGGGTACAGCGTGCCCTTCACTTCGCCATCAGCGAGTACAACAAGGCCACCGAAGATGAGTACTACAGACGCCCGCTGCAGGTGCTGCGAGCCAGGGAGCAGACCTTTGGGGGGGTGAATTACTTCTTCGACGTAGAGGTGGGCCGCACCATATGTACCAAGTCCCAGCCCAACTTGGACACCTGTGCCTTCCATGAACAGCCAGAACTGCAGAAGAAACAGTTGTGCTCTTTCGAGATCTACGAAGTTCCCTGGGAGGACAGAATGTCCCTGGTGAATTCCAGGTGTCAAGAAGCCTAGGGGTCTGTGCCAGGCCAGTCACACCGACCACCACCCACTCCCACCCACTGTAGTGCTCCCACCCCTGGACTGGTGGCCCCCACCCTGCGGGAGGCCTCCCCATGTGCCTGTGCCAAGAGACAGACAGAGAAGGCTGCAGGAGTCCTTTGTTGCTCAGCAGGGCGCTCTGCCCTCCCTCCTTCCTTCTTGCTTCTAATAGACCTGGTACATGGTACACACACCCCCACCTCCTGCAATTAAACAGTAGCATCGCCSEQ ID NO72
分泌型frizzled相關蛋白4>gi|8400733|ref|NM_003014.2|人類分泌型frizzled相關蛋白4(SFRP4),mRNA|qPCR據assay_on_demand情況匹配[1079..1103]GGCGGGTTCGCGCCCCGAAGGCTGAGAGCTGGCGCTGCTCGTGCCCTGTGTGCCAGACGGCGGAGCTCCGCGGCCGGACCCCGCGGCCCCGCTTTGCTGCCGACTGGAGTTTGGGGGAAGAAACTCTCCTGCGCCCCAGAAGATTTCTTCCTCGGCGAAGGGACAGCGAAAGATGAGGGTGGCAGGAAGAGAAGGCGCTTTCTGTCTGCCGGGGTCGCAGCGCGAGAGGGCAGTGCCATGTTCCTCTCCATCCTAGTGGCGCTGTGCCTGTGGCTGCACCTGGCGCTGGGCGTGCGCGGCGCGCCCTGCGAGGCGGTGCGCATCCCTATGTGCCGGCACATGCCCTGGAACATCACGCGGATGCCCAACCACCTGCACCACAGCACGCAGGAGAACGCCATCCTGGCCATCGAGCAGTACGAGGAGCTGGTGGACGTGAACTGCAGCGCCGTGCTGCGCTTCTTCTTCTGTGCCATGTACGCGCCCATTTGCACCCTGGAGTTCCTGCACGACCCTATCAAGCCGTGCAAGTCGGTGTGCCAACGCGCGCGCGACGACTGCGAGCCCCTCATGAAGATGTACAACCACAGCTGGCCCGAAAGCCTGGCCTGCGACGAGCTGCCTGTCTATGACCGTGGCGTGTGCATTTCGCCTGAAGCCATCGTCACGGACCTCCCGGAGGATGTTAAGTGGATAGACATCACACCAGACATGATGGTACAGGAAAGGCCTCTTGATGTTGACTGTAAACGCCTAAGCCCCGATCGGTGCAAGTGTAAAAAGGTGAAGCCAACTTTGGCAACGTATCTCAGCAAAAACTACAGCTATGTTATTCATGCCAAAATAAAAGCTGTGCAGAGGAGTGGCTGCAATGAGGTCACAACGGTGGTGGATGTAAAAGAGATCTTCAAGTCCTCATCACCCATCCCTCGAACTCAAGTCCCGCTCATTACAAATTCTTCTTGCCAGTGTCCACACATCCTGCCCCATCAAGATGTTCTCATCATGTGTTACGAGTGGCGTTCAAGGATGATGCTTCTTGAAAATTGCTTAGTTGAAAAATGGAGAGATCAGCTTAGTAAAAGATCCATACAGTGGGAAGAGAGGCTGCAGGAACAGCGGAGAACAGTTCAGGACAAGAAGAAAACAGCCGGGCGCACCAGTCGTAGTAATCCCCCCAAACCAAAGGGAAAGCCTCCTGCTCCCAAACCAGCCAGTCCCAAGAAGAACATTAAAACTAGGAGTGCCCAGAAGAGAACAAACCCGAAAAGAGTGTGAGCTAACTAGTTTCCAAAGCGGAGACTTCCGACTTCCTTACAGGATGAGGCTGGGCATTGCCTGGGACAGCCTATGTAAGGCCATGTGCCCCTTGCCCTAACAACTCACTGCAGTGCTCTTCATAGACACATCTTGCAGCATTTTTCTTAAGGCTATGCTTCAGTTTTTCTTTGTAAGCCATCACAAGCCATAGTGGTAGGTTTGCCCTTTGGTACAGAAGGTGAGTTAAAGCTGGTGGAAAAGGCTTATTGCATTGCATTCAGAGTAACCTGTGTGCATACTCTAGAAGAGTAGGGAAAATAATGCTTGTTACAATTCGACCTAATATGTGCATTGTAAAATAAATGCCATATTTCAAACAAAACACGTAATTTTTTTACAGTATGTTTTATTACCTTTTGATATCTGTTGTTGCAATGTTAGTGATGTTTTAAAATGTGATGAAAATATAATGTTTTTAAGAAGGAACAGTAGTGGAATGAATGTTAAAAGATCTTTATGTGTTTATGGTCTGCAGAAGGATTTTTGTGATGAAAGGGGATTTTTTGAAAAATTAGAGAAGTAGCATATGGAAAATTATAATGTGTTTTTTTACCAATGACTTCAGTTTCTGTTTTTAGCTAGAAACTTAAAAACAAAAATAATAATAAAGAAAAATAAATAAAAAGGAGAGGCAGACAATGTCTGGATTCCTGTTTTTTGGTTACCTGATTTCCATGATCATGATGCTTCTTGTCAACACCCTCTTAAGCAGCACCAGAAACAGTGAGTTTGTCTGTACCATTAGGAGTTAGGTACTAATTAGTTGGCTAATGCTCAAGTATTTTATACCCACAAGAGAGGTATGTCACTCATCTTACTTCCCAGGACATCCACCCTGAGAATAATTTGACAAGCTTAAAAATGGCCTTCATGTGAGTGCCAAATTTTGTTTTTCTTCATTTAAATATTTTCTTTGCCTAAATACATGTGAGAGGAGTTAAATATAAATGTACAGAGAGGAAAGTTGAGTTCCACCTCTGAAATGAGAATTACTTGACAGTTGGGATACTTTAATCAGAAAAAAAGAACTTATTTGCAGCATTTTATCAACAAATTTCATAATTGTGGACAATTGGAGGCATTTATTTTAAAAAACAATTTTATTGGCCTTTTGCTAACACAGTAAGCATGTATTTTATAAGGCATTCAATAAATGCACAACGCCCAAAGGAAATAAAATCCTATCTAATCCTACTCTCCACTACACAGAGGTAATCACTATTAGTATTTTGGCATATTATTCTCCAGGTGTTTGCTTATGCACTTATAAAATGATTTGAACAAATAAAACTAGGAACCTGTATACATGTGTTTCATAACCTGCCTCCTTTGCTTGGCCCTTTATTGAGATAAGTTTTCCTGTCAAGAAAGCAGAAACCATCTCATTTCTAACAGCTGTGTTATATTCCATAGTATGCATTACTCAACAAACTGTTGTGCTATTGGATACTTAGGTGGTTTCTTCACTGACAATACTGAATAAACATCTCACCGGAATTCSEQ ID NO73Asporin>gi|41350213|ref|NM_017680.3|人類asporin(1類LRR)(ASPN),mRNA|qPCR正向引物匹配[798..823]|qPCR反向引物匹配[934..912]|qPCR探針匹配[842..875]AGTACTAACATGGACTAATCTGTGGGAGCAGTTTATTCCAGTATCACCCAGGGTGCAGCCACACCAGGACTGTGTTGAAGGGTGTTTTTTTTCTTTTAAATGTAATACCTCCTCATCTTTTCTTCTTACACAGTGTCTGAGAACATTTACATTATAGATAAGTAGTACATGGTGGATAACTTCTACTTTTAGGAGGACTACTCTCTTCTGACAGTCCTAGACTGGTCTTCTACACTAAGACACCATGAAGGAGTATGTGCTCCTATTATTCCTGGCTTTGTGCTCTGCCAAACCCTTCTTTAGCCCTTCACACATCGCACTGAAGAATATGATGCTGAAGGATATGGAAGACACAGATGATGATGATGATGATGATGATGATGATGATGATGATGATGAGGACAACTCTCTTTTTCCAACAAGAGAGCCAAGAAGCCATTTTTTTCCATTTGATCTGTTTCCAATGTGTCCATTTGGATGTCAGTGCTATTCACGAGTTGTACATTGCTCAGATTTAGGTTTGACCTCAGTCCCAACCAACATTCCATTTGATACTCGAATGCTTGATCTTCAAAACAATAAAATTAAGGAAATCAAAGAAAATGATTTTAAAGGACTCACTTCACTTTATGGTCTGATCCTGAACAACAACAAGCTAACGAAGATTCACCCAAAAGCCTTTCTAACCACAAAGAAGTTGCGAAGGCTGTATCTGTCCCACAATCAACTAAGTGAAATACCACTTAATCTTCCCAAATCATTAGCAGAACTCAGAATTCATGAAAATAAAGTTAAGAAAATACAAAAGGACACATTCAAAGGAATGAATGCTTTACACGTTTTGGAAATGAGTGCAAACCCTCTTGATAATAATGGGATAGAGCCAGGGGCATTTGAAGGGGTGACGGTGTTCCATATCAGAATTGCAGAAGCAAAACTGACCTCAGTTCCTAAAGGCTTACCACCAACTTTATTGGAGCTTCACTTAGATTATAATAAAATTTCAACAGTGGAACTTGAGGATTTTAAACGATACAAAGAACTACAAAGGCTGGGCCTAGGAAACAACAAAATCACAGATATCGAAAATGGGAGTCTTGCTAACATACCACGTGTGAGAGAAATACATTTGGAAAACAATAAACTAAAAAAAATCCCTTCAGGATTACCAGAGTTGAAATACCTCCAGATAATCTTCCTTCATTCTAATTCAATTGCAAGAGTGGGAGTAAATGACTTCTGTCCAACAGTGCCAAAGATGAAGAAATCTTTATACAGTGCAATAAGTTTATTCAACAACCCGGTGAAATACTGGGAAATGCAACCTGCAACATTTCGTTGTGTTTTGAGCAGAATGAGTGTTCAGCTTGGGAACTTTGGAATGTAATAATTAGTAATTGGTAATGTCCATTTAATATAAGATTCAAAAATCCCTACATTTGGAATACTTGAACTCTATTAATAATGGTAGTATTATATATACAAGCAAATATCTATTCTCAAGTGGTAAGTCCACTGACTTATTTTATGACAAGAAATTTCAACGGAATTTTGCCAAACTATTGATACATAAGGGTTGAGAGAAACAAGCATCTATTGCAGTTTCTTTTTGCGTACAAATGATCTTACATAAATCTCATGCTTGACCATTCCTTTCTTCATAACAAAAAAGTAAGATATTCGGTATTTAACACTTTGTTATCAAGCATATTTTAAAAAGAACTGTACTGTAAATGGAATGCTTGACTTAGCAAAATTTGTGCTCTTTCATTTGCTGTTAGAAAAACAGAATTAACAAAGACAGTAATGTGAAGAGTGCATTACACTATTCTTATTCTTTAGTAACTTGGGTAGTACTGTAATATTTTTAATCATCTTAAAGTATGATTTGATATAATCTTATTGAAATTACCTTATCATGTCTTAGAGCCCGTCTTTATGTTTAAAACTAATTTCTTAAAATAAAGCCTTCAGTAAATGTTCATTACCAACTTGATAAATGCTACTCATAAGAGCTGGTTTGGGGCTATAGCATATGCTTTTTTTTTTTTAATTATTACCTGATTTAAAAATCTCTGTAAAAACGTGTAGTGTTTCATAAAATCTGTAACTCGCATTTTAATGATCCGCTATTATAAGCTTTTAATAGCATGAAAATTGTTAGGCTATATAACATTGCCACTTCAACTCTAAGGAATATTTTTGAGATATCCCTTTGGAAGACCTTGCTTGGAAGAGCCTGGACACTAACAATTCTACACCAAATTGTCTCTTCAAATACGTATGGACTGGATAACTCTGAGAAACACATCTAGTATAACTGAATAAGCAGAGCATCAAATTAAACAGACAGAAACCGAAAGCTCTATATAAATGCTCAGAGTTCTTTATGTATTTCTTATTGGCATTCAACATATGTAAAATCAGAAAACAGGGAAATTTTCATTAAAAATATTGGTTTGAAATAAAAAAAAAAAAAASEQ 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NO74具有EF手型結構域1的細胞生長調節因子>gi|33589823|ref|NM_006569.2|人類具有EF手型結構域1的細胞生長調節因子(CGREF1),mRNA|qPCR正向引物匹配[378..394]|qPCR反向引物匹配[455..431]|qPCR探針匹配[396..415]CGCGCAGCCCCTCCGGCCGCGGGCGCAGCGGGGGCGCTGGTGGAGCTGCGAAGGGCCAGGTCCGGCGGGCGGGGCGGCGGCTGGCACTGGCTCCGGACTCTGCCCGGCCAGGGCGGCGGCTCCAGCCGGGAGGGCGACGTGGAGCGGCCACGTGGAGCGGCCCGGGGGAGGCTGGCGGCGGGAGGCGAGGCGCGGGCGGCGCAGCAGCCAGGAGCGCCCACGGAGCTGGACCCCCAGAGCCGCGCGGCGCCGCAGCAGTTCCAGGAAGGATGTTACCTTTGACGATGACAGTGTTAATCCTGCTGCTGCTCCCCACGGGTCAGGCTGCCCCAAAGGATGGAGTCACAAGGCCAGACTCTGAAGTGCAGCATCAGCTCCTGCCCAACCCCTTCCAGCCAGGCCAGGAGCAGCTCGGACTTCTGCAGAGCTACCTAAAGGGACTAGGAAGGACAGAAGTGCAACTGGAGCATCTGAGCCGGGAGCAGGTTCTCCTCTACCTCTTTGCCCTCCATGACTATGACCAGAGTGGACAGCTGGATGGCCTGGAGCTGCTGTCCATGTTGACAGCTGCTCTGGCCCCTGGAGCTGCCAACTCTCCTACCACCAACCCGGTGATATTGATAGTGGACAAAGTGCTCGAGACGCAGGACCTGAATGGGGATGGGCTCATGACCCCTGCTGAGCTCATCAACTTCCCGGGAGTAGCCCTCAGGCACGTGGAGCCCGGAGAGCCCCTTGCTCCATCTCCTCAGGAGCCACAAGCTGTTGGAAGGCAGTCCCTATTAGCTAAAAGCCCATTAAGACAAGAAACACAGGAAGCCCCTGGTCCCAGAGAAGAAGCAAAGGGCCAGGTAGAGGCCAGAAGGGAGTCTTTGGATCCTGTCCAGGAGCCTGGGGGCCAGGCAGAGGCTGATGGAGATGTTCCAGGGCCCAGAGGGGAAGCTGAGGGCCAGGCAGAGGCTAAAGGAGATGCCCCTGGGCCCAGAGGGGAAGCTGGGGGCCAGGCAGAGGCTGAAGGAGATGCCCCCGGGCCCAGAGGGGAAGCTGGGGGCCAGGCAGAGGCCAGGGAGAATGGAGAGGAGGCCAAGGAACTTCCAGGGGAAACACTGGAGTCTAAGAACACCCAAAATGACTTTGAGGTGCACATTGTTCAAGTGGAGAATGATGAGATCTAGATCTTGAAGATACAGGTACCCCACGAAGTCTCAGTGCCAGAACATAAGCCCTGAAGTGGGCAGGGGAAATGTACGCTGGGACAAGGACCATCTCTGTGCCCCCTGTCTGGTCCCAGTAGGTATCAGGTCTTTCTGTGCAGCTCAGGGAGACCCTAAGTTAAGGGGCAGATTACCAATAAAGAACTGAATGAATTCATCCCCCCGGGCCACCTCTCTACCCGTCCAGCCTGCCCAGACCCTCTCAGAGGAACGGGGTTGGGGACCGAAAGGACAGGGATGCCGCCTGCCCAGTGTTTCTGGGCCTCACGGTGCTCCGGCAGCAGAGCGCATGGTGCTAGCCATGGCCGGCTGCAGAGGACCCAGTGAGGAAAGCTCAGTCTATCCCTGGGCCCCAAACCCTCACCGGTTCCCCCTCACCTGGTGTTCAGACACCCCATGCTCTCCTGCAGCTCAGGGCAGGTGACCCCATCCCCAGTAATATTAATCATCACTAGAACTTTTTGAGAGCCTTGTACACATCAGGCATCATGCTGGGCATTTTATATATGATTTTATCCTCACAATAATTCTGTAGCCAAGCAGAATTGGTTCCATTTGACAGATGAAGAAATTGAGGCAGATTGCGTTAAGTGCTGTACCCTAAGGTGATATGCAGCTAATTAAATGGCAGATTTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAASEQ 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NO75激肽釋放酶10,轉錄物變體1>gi|22208981|ref|NM_002776.3|人類激肽釋放酶10(KLK10),轉錄物變體1,mRNA|qPCR正向引物匹配[851..874]|qPCR反向引物匹配[950..931]|qPCR探針匹配[890..914]CATCCTGCCACCCCTAGCCTTGCTGGGGACGTGAACCCTCTCCCCGCGCCTGGGAAGCCTTCTTGGCACCGGGACCCGGAGAATCCCCACGGAAGCCAGTTCCAAAAGGGATGAAAAGGGGGCGTTTCGGGCACTGGGAGAAGCCTGTATTCCAGGGCCCCTCCCAGAGCAGGAATCTGGGACCCAGGAGTGCCAGCCTCACCCACGCAGATCCTGGCCATGAGAGCTCCGCACCTCCACCTCTCCGCCGCCTCTGGCGCCCGGGCTCTGGCGAAGCTGCTGCCGCTGCTGATGGCGCAACTCTGGGCCGCAGAGGCGGCGCTGCTCCCCCAAAACGACACGCGCTTGGACCCCGAAGCCTATGGCTCCCCGTGCGCGCGCGGCTCGCAGCCCTGGCAGGTCTCGCTCTTCAACGGCCTCTCGTTCCACTGCGCGGGTGTCCTGGTGGACCAGAGTTGGGTGCTGACGGCCGCGCACTGCGGAAACAAGCCACTGTGGGCTCGAGTAGGGGATGACCACCTGCTGCTTCTTCAGGGAGAGCAGCTCCGCCGGACCACTCGCTCTGTTGTCCATCCCAAGTACCACCAGGGCTCAGGCCCCATCCTGCCAAGGCGAACGGATGAGCACGATCTCATGTTGCTGAAGCTGGCCAGGCCCGTAGTGCTGGGGCCCCGCGTCCGGGCCCTGCAGCTTCCCTACCGCTGTGCTCAGCCCGGAGACCAGTGCCAGGTTGCTGGCTGGGGCACCACGGCCGCCCGGAGAGTGAAGTACAACAAGGGCCTGACCTGCTCCAGCATCACTATCCTGAGCCCTAAAGAGTGTGAGGTCTTCTACCCTGGCGTGGTCACCAACAACATGATATGTGCTGGACTGGACCGGGGCCAGGACCCTTGCCAGAGTGACTCTGGAGGCCCCCTGGTCTGTGACGAGACCCTCCAAGGCATCCTCTCGTGGGGTGTTTACCCCTGTGGCTCTGCCCAGCATCCAGCTGTCTACACCCAGATCTGCAAATACATGTCCTGGATCAATAAAGTCATACGCTCCAACTGATCCAGATGCTACGCTCCAGCTGATCCAGATGTTATGCTCCTGCTGATCCAGATGCCCAGAGGCTCCATCGTCCATCCTCTTCCTCCCCAGTCGGCTGAACTCTCCCCTTGTCTGCACTGTTCAAACCTCTGCCGCCCTCCACACCTCTAAACATCTCCCCTCTCACCTCATTCCCCCACCTATCCCCATTCTCTGCCTGTACTGAAGCTGAAATGCAGGAAGTGGTGGCAAAGGTTTATTCCAGAGAAGCCAGGAAGCCGGTCATCACCCAGCCTCTGAGAGCAGTTACTGGGGTCACCCAACCTGACTTCCTCTGCCACTCCCTGCTGTGTGACTTTGGGCAAGCCAAGTGCCCTCTCTGAACCTCAGTTTCCTCATCTGCAAAATGGGAACAATGACGTGCCTACCTCTTAGACATGTTGTGAGGAGACTATGATATAACATGTGTATGTAAATCTTCATGGTGATTGTCATGTAAGGCTTAACACAGTGGGTGGTGAGTTCTGACTAAAGGTTACCTGTTGTCGTGASEQ ID NO76激肽釋放酶10,轉錄物變體2
>gi|22208983|ref|NM_145888.1|人類激肽釋放酶10(KLK10),轉錄物變體2,mRNA|qPCR正向引物匹配[714..737]|qPCR反向引物匹配[813..794]|qPCR探針匹配[753..777]ACCAGCGGCAGACCACAGGCAGGGCAGAGGCACGTCTGGGTCCCCTCCCTCCTTCCTATCGGCGACTCCCAGGATCCTGGCCATGAGAGCTCCGCACCTCCACCTCTCCGCCGCCTCTGGCGCCCGGGCTCTGGCGAAGCTGCTGCCGCTGCTGATGGCGCAACTCTGGGCCGCAGAGGCGGCGCTGCTCCCCCAAAACGACACGCGCTTGGACCCCGAAGCCTATGGCTCCCCGTGCGCGCGCGGCTCGCAGCCCTGGCAGGTCTCGCTCTTCAACGGCCTCTCGTTCCACTGCGCGGGTGTCCTGGTGGACCAGAGTTGGGTGCTGACGGCCGCGCACTGCGGAAACAAGCCACTGTGGGCTCGAGTAGGGGATGACCACCTGCTGCTTCTTCAGGGAGAGCAGCTCCGCCGGACCACTCGCTCTGTTGTCCATCCCAAGTACCACCAGGGCTCAGGCCCCATCCTGCCAAGGCGAACGGATGAGCACGATCTCATGTTGCTGAAGCTGGCCAGGCCCGTAGTGCTGGGGCCCCGCGTCCGGGCCCTGCAGCTTCCCTACCGCTGTGCTCAGCCCGGAGACCAGTGCCAGGTTGCTGGCTGGGGCACCACGGCCGCCCGGAGAGTGAAGTACAACAAGGGCCTGACCTGCTCCAGCATCACTATCCTGAGCCCTAAAGAGTGTGAGGTCTTCTACCCTGGCGTGGTCACCAACAACATGATATGTGCTGGACTGGACCGGGGCCAGGACCCTTGCCAGAGTGACTCTGGAGGCCCCCTGGTCTGTGACGAGACCCTCCAAGGCATCCTCTCGTGGGGTGTTTACCCCTGTGGCTCTGCCCAGCATCCAGCTGTCTACACCCAGATCTGCAAATACATGTCCTGGATCAATAAAGTCATACGCTCCAACTGATCCAGATGCTACGCTCCAGCTGATCCAGATGTTATGCTCCTGCTGATCCAGATGCCCAGAGGCTCCATCGTCCATCCTCTTCCTCCCCAGTCGGCTGAACTCTCCCCTTGTCTGCACTGTTCAAACCTCTGCCGCCCTCCACACCTCTAAACATCTCCCCTCTCACCTCATTCCCCCACCTATCCCCATTCTCTGCCTGTACTGAAGCTGAAATGCAGGAAGTGGTGGCAAAGGTTTATTCCAGAGAAGCCAGGAAGCCGGTCATCACCCAGCCTCTGAGAGCAGTTACTGGGGTCACCCAACCTGACTTCCTCTGCCACTCCCTGCTGTGTGACTTTGGGCAAGCCAAGTGCCCTCTCTGAACCTCAGTTTCCTCATCTGCAAAATGGGAACAATGACGTGCCTACCTCTTAGACATGTTGTGAGGAGACTATGATATAACATGTGTATGTAAATCTTCATGGTGATTGTCATGTAAGGCTTAACACAGTGGGTGGTGAGTTCTGACTAAAGGTTACCTGTTGTCGTGA SEQ ID NO77金屬蛋白酶組織抑制劑1>gi|4507508|ref|NM_003254.1|人類金屬蛋白酶組織抑制劑1(促紅細胞活性劑、膠原酶抑制劑(TIMP1),mRNA|qPCR正向引物匹配[221..241]|qPCR反向引物匹配[359..340]|qPCR探針匹配[251..283]AGGGGCCTTAGCGTGCCGCATCGCCGAGATCCAGCGCCCAGAGAGACACCAGAGAACCCACCATGGCCCCCTTTGAGCCCCTGGCTTCTGGCATCCTGTTGTTGCTGTGGCTGATAGCCCCCAGCAGGGCCTGCACCTGTGTCCCACCCCACCCACAGACGGCCTTCTGCAATTCCGACCTCGTCATCAGGGCCAAGTTCGTGGGGACACCAGAAGTCAACCAGACCACCTTATACCAGCGTTATGAGATCAAGATGACCAAGATGTATAAAGGGTTCCAAGCCTTAGGGGATGCCGCTGACATCCGGTTCGTCTACACCCCCGCCATGGAGAGTGTCTGCGGATACTTCCACAGGTCCCACAACCGCAGCGAGGAGTTTCTCATTGCTGGAAAACTGCAGGATGGACTCTTGCACATCACTACCTGCAGTTTCGTGGCTCCCTGGAACAGCCTGAGCTTAGCTCAGCGCCGGGGCTTCACCAAGACCTACACTGTTGGCTGTGAGGAATGCACAGTGTTTCCCTGTTTATCCATCCCCTGCAAACTGCAGAGTGGCACTCATTGCTTGTGGACGGACCAGCTCCTCCAAGGCTCTGAAAAGGGCTTCCAGTCCCGTCACCTTGCCTGCCTGCCTCGGGAGCCAGGGCTGTGCACCTGGCAGTCCCTGCGGTCCCAGATAGCCTGAATCCTGCCCGGAGTGGAACTGAAGCCTGCACAGTGTCCACCCTGTTCCCACTCCCATCTTTCTTCCGGACAATGAAATAAAGAGTTACCACCCAGCSEQ ID NO78富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白質>gi|48675809|ref|NM_003118.2|人類富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白質(骨粘連蛋白)(SPARC),mRNA |qPCR正向引物匹配[788..810]|qPCR反向引物匹配[915..898]|qPCR探針匹配[818..839]GTTGCCTGTCTCTAAACCCCTCCACATTCCCGCGGTCCTTCAGACTGCCCGGAGAGCGCGCTCTGCCTGCCGCCTGCCTGCCTGCCACTGAGGGTTCCCAGCACCATGAGGGCCTGGATCTTCTTTCTCCTTTGCCTGGCCGGGAGGGCCTTGGCAGCCCCTCAGCAAGAAGCCCTGCCTGATGAGACAGAGGTGGTGGAAGAAACTGTGGCAGAGGTGACTGAGGTATCTGTGGGAGCTAATCCTGTCCAGGTGGAAGTAGGAGAATTTGATGATGGTGCAGAGGAAACCGAAGAGGAGGTGGTGGCGGAAAATCCCTGCCAGAACCACCACTGCAAACACGGCAAGGTGTGCGAGCTGGATGAGAACAACACCCCCATGTGCGTGTGCCAGGACCCCACCAGCTGCCCAGCCCCCATTGGCGAGTTTGAGAAGGTGTGCAGCAATGACAACAAGACCTTCGACTCTTCCTGCCACTTCTTTGCCACAAAGTGCACCCTGGAGGGCACCAAGAAGGGCCACAAGCTCCACCTGGACTACATCGGGCCTTGCAAATACATCCCCCCTTGCCTGGACTCTGAGCTGACCGAATTCCCCCTGCGCATGCGGGACTGGCTCAAGAACGTCCTGGTCACCCTGTATGAGAGGGATGAGGACAACAACCTTCTGACTGAGAAGCAGAAGCTGCGGGTGAAGAAGATCCATGAGAATGAGAAGCGCCTGGAGGCAGGAGACCACCCCGTGGAGCTGCTGGCCCGGGACTTCGAGAAGAACTATAACATGTACATCTTCCCTGTACACTGGCAGTTCGGCCAGCTGGACCAGCACCCCATTGACGGGTACCTCTCCCACACCGAGCTGGCTCCACTGCGTGCTCCCCTCATCCCCATGGAGCATTGCACCACCCGCTTTTTCGAGACCTGTGACCTGGACAATGACAAGTACATCGCCCTGGATGAGTGGGCCGGCTGCTTCGGCATCAAGCAGAAGGATATCGACAAGGATCTTGTGATCTAAATCCACTCCTTCCACAGTACCGGATTCTCTCTTTAACCCTCCCCTTCGTGTTTCCCCCAATGTTTAAAATGTTTGGATGGTTTGTTGTTCTGCCTGGAGACAAGGTGCTAACATAGATTTAAGTGAATACATTAACGGTGCTAAAAATGAAAATTCTAACCCAAGACATGACATTCTTAGCTGTAACTTAACTATTAAGGCCTTTTCCACACGCATTAATAGTCCCATTTTTCTCTTGCCATTTGTAGCTTTGCCCATTGTCTTATTGGCACATGGGTGGACACGGATCTGCTGGGCTCTGCCTTAAACACACATTGCAGCTTCAACTTTTCTCTTTAGTGTTCTGTTTGAAACTAATACTTACCGAGTCAGACTTTGTGTTCATTTCATTTCAGGGTCTTGGCTGCCTGTGGGCTTCCCCAGGTGGCCTGGAGGTGGGCAAAGGGAAGTAACAGACACACGATGTTGTCAAGGATGGTTTTGGGACTAGAGGCTCAGTGGTGGGAGAGATCCCTGCAGAACCCACCAACCAGAACGTGGTTTGCCTGAGGCTGTAACTGAGAGAAAGATTCTGGGGCTGTGTTATGAAAATATAGACATTCTCACATAAGCCCAGTTCATCACCATTTCCTCCTTTACCTTTCAGTGCAGTTTCTTTTCACATTAGGCTGTTGGTTCAAACTTTTGGGAGCACGGACTGTCAGTTCTCTGGGAAGTGGTCAGCGCATCCTGCAGGGCTTCTCCTCCTCTGTCTTTTGGAGAACCAGGGCTCTTCTCAGGGGCTCTAGGGACTGCCAGGCTGTTTCAGCCAGGAAGGCCAAAATCAAGAGTGAGATGTAGAAAGTTGTAAAATAGAAAAAGTGGAGTTGGTGAATCGGTTGTTCTTTCCTCACATTTGGATGATTGTCATAAGGTTTTTAGCATGTTCCTCCTTTTCTTCACCCTCCCCTTTTTTCTTCTATTAATCAAGAGAAACTTCAAAGTTAATGGGATGGTCGGATCTCACAGGCTGAGAACTCGTTCACCTCCAAGCATTTCATGAAAAAGCTGCTTCTTATTAATCATACAAACTCTCACCATGATGTGAAGAGTTTCACAAATCCTTCAAAATAAAAAGTAATGACTTAGAAACTGCCTTCCTGGGTGATTTGCATGTGTCTTAGTCTTAGTCACCTTATTATCCTGACACAAAAACACATGAGCATACATGTCTACACATGACTACACAAATGCAAACCTTTGCAAACACATTATGCTTTTGCACACACACACCTGTACACACACACCGGCATGTTTATACACAGGGAGTGTATGGTTCCTGTAAGCACTAAGTTAGCTGTTTTCATTTAATGACCTGTGGTTTAACCCTTTTGATCACTACCACCATTATCAGCACCAGACTGAGCAGCTATATCCTTTTATTAATCATGGTCATTCATTCATTCATTCATTCACAAAATATTTATGATGTATTTACTCTGCACCAGGTCCCATGCCAAGCACTGGGGACACAGTTATGGCAAAGTAGACAAAGCATTTGTTCATTTGGAGCTTAGAGTCCAGGAGGAATACATTAGATAATGACACAATCAAATATAAATTGCAAGATGTCACAGGTGTGATGAAGGGAGAGTAGGAGAGACCATGAGTATGTGTAACAGGAGGACACAGCATTATTCTAGTGCTGTACTGTTCCGTACGGCAGCCACTACCCACATGTAACTTTTTAAGATTTAAATTTAAATTAGTTAACATTCAAAACGCAGCTCCCCAATCACACTAGCAACATTTCAAGTGCTTGAGAGCCATGCATGATTAGTGGTTACCCTATTGAATAGGTCAGAAGTAGAATCTTTTCATCATCACAGAAAGTTCTATTGGACAGTGCTCTTCTAGATCATCATAAGACTACAGAGCACTTTTCAAAGCTCATGCATGTTCATCATGTTAGTGTCGTATTTTGAGCTGGGGTTTTGAGACTCCCCTTAGAGATAGAGAAACAGACCCAAGAAATGTGCTCAATTGCAATGGGCCACATACCTAGATCTCCAGATGTCATTTCCCCTCTCTTATTTTAAGTTATGTTAAGATTACTAAAACAATAAAAGCTCCTAAAAAATCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA SEQ ID NO79
轉化生長因子β誘導蛋白>gi|4507466|ref|NM_000358.1|人類68kDa的轉化生長因子β誘導蛋白(TGFBI),mRNA|qPCR據assay_on_demand情況匹配[170..194]GCTTGCCCGTCGGTCGCTAGCTCGCTCGGTGCGCGTCGTCCCGCTCCATGGCGCTCTTCGTGCGGCTGCTGGCTCTCGCCCTGGCTCTGGCCCTGGGCCCCGCCGCGACCCTGGCGGGTCCCGCCAAGTCGCCCTACCAGCTGGTGCTGCAGCACAGCAGGCTCCGGGGCCGCCAGCACGGCCCCAACGTGTGTGCTGTGCAGAAGGTTATTGGCACTAATAGGAAGTACTTCACCAACTGCAAGCAGTGGTACCAAAGGAAAATCTGTGGCAAATCAACAGTCATCAGCTACGAGTGCTGTCCTGGATATGAAAAGGTCCCTGGGGAGAAGGGCTGTCCAGCAGCCCTACCACTCTCAAACCTTTACGAGACCCTGGGAGTCGTTGGATCCACCACCACTCAGCTGTACACGGACCGCACGGAGAAGCTGAGGCCTGAGATGGAGGGGCCCGGCAGCTTCACCATCTTCGCCCCTAGCAACGAGGCCTGGGCCTCCTTGCCAGCTGAAGTGCTGGACTCCCTGGTCAGCAATGTCAACATTGAGCTGCTCAATGCCCTCCGCTACCATATGGTGGGCAGGCGAGTCCTGACTGATGAGCTGAAACACGGCATGACCCTCACCTCTATGTACCAGAATTCCAACATCCAGATCCACCACTATCCTAATGGGATTGTAACTGTGAACTGTGCCCGGCTCCTGAAAGCCGACCACCATGCAACCAACGGGGTGGTGCACCTCATCGATAAGGTCATCTCCACCATCACCAACAACATCCAGCAGATCATTGAGATCGAGGACACCTTTGAGACCCTTCGGGCTGCTGTGGCTGCATCAGGGCTCAACACGATGCTTGAAGGTAACGGCCAGTACACGCTTTTGGCCCCGACCAATGAGGCCTTCGAGAAGATCCCTAGTGAGACTTTGAACCGTATCCTGGGCGACCCAGAAGCCCTGAGAGACCTGCTGAACAACCACATCTTGAAGTCAGCTATGTGTGCTGAAGCCATCGTTGCGGGGCTGTCTGTAGAGACCCTGGAGGGCACGACACTGGAGGTGGGCTGCAGCGGGGACATGCTCACTATCAACGGGAAGGCGATCATCTCCAATAAAGACATCCTAGCCACCAACGGGGTGATCCACTACATTGATGAGCTACTCATCCCAGACTCAGCCAAGACACTATTTGAATTGGCTGCAGAGTCTGATGTGTCCACAGCCATTGACCTTTTCAGACAAGCCGGCCTCGGCAATCATCTCTCTGGAAGTGAGCGGTTGACCCTCCTGGCTCCCCTGAATTCTGTATTCAAAGATGGAACCCCTCCAATTGATGCCCATACAAGGAATTTGCTTCGGAACCACATAATTAAAGACCAGCTGGCCTCTAAGTATCTGTACCATGGACAGACCCTGGAAACTCTGGGCGGCAAAAAACTGAGAGTTTTTGTTTATCGTAATAGCCTCTGCATTGAGAACAGCTGCATCGCGGCCCACGACAAGAGGGGGAGGTACGGGACCCTGTTCACGATGGACCGGGTGCTGACCCCCCCAATGGGGACTGTCATGGATGTCCTGAAGGGAGACAATCGCTTTAGCATGCTGGTAGCTGCCATCCAGTCTGCAGGACTGACGGAGACCCTCAACCGGGAAGGAGTCTACACAGTCTTTGCTCCCACAAATGAAGCCTTCCGAGCCCTGCCACCAAGAGAACGGAGCAGACTCTTGGGAGATGCCAAGGAACTTGCCAACATCCTGAAATACCACATTGGTGATGAAATCCTGGTTAGCGGAGGCATCGGGGCCCTGGTGCGGCTAAAGTCTCTCCAAGGTGACAAGCTGGAAGTCAGCTTGAAAAACAATGTGGTGAGTGTCAACAAGGAGCCTGTTGCCGAGCCTGACATCATGGCCACAAATGGCGTGGTCCATGTCATCACCAATGTTCTGCAGCCTCCAGCCAACAGACCTCAGGAAAGAGGGGATGAACTTGCAGACTCTGCGCTTGAGATCTTCAAACAAGCATCAGCGTTTTCCAGGGCTTCCCAGAGGTCTGTGCGACTAGCCCCTGTCTATCAAAAGTTATTAGAGAGGATGAAGCATTAGCTTGAAGCACTACAGGAGGAATGCACCACGGCAGCTCTCCGCCAATTTCTCTCAGATTTCCACAGAGACTGTTTGAATGTTTTCAAAACCAAGTATCACACTTTAATGTACATGGGCCGCACCATAATGAGATGTGAGCCTTGTGCATGTGGGGGAGGAGGGAGAGAGATGTACTTTTTAAATCATGTTCCCCCTAAACATGGCTGTTAACCCACTGCATGCAGAAACTTGGATGTCACTGCCTGACATTCACTTCCAGAGAGGACCTATCCCAAATGTGGAATTGACTGCCTATGCCAAGTCCCTGGAAAAGGAGCTTCAGTATTGTGGGGCTCATAAAACATGAATCAAGCAATCCAGCCTCATGGGAAGTCCTGGCACAGTTTTTGTAAAGCCCTTGCACAGCTGGAGAAATGGCATCATTATAAGCTATGAGTTGAAATGTTCTGTCAAATGTGTCTCACATCTACACGTGGCTTGGAGGCTTTTATGGGGCCCTGTCCAGGTAGAAAAGAAATGGTATGTAGAGCTTAGATTTCCCTATTGTGACAGAGCCATGGTGTGTTTGTAATAATAAAACCAAAGAAACATA SEQ ID NO80包含EGF的纖蛋白樣細胞外基質蛋白質2>gi|8393298|ref|NM_016938.1|人類包含EGF的纖蛋白樣細胞外基質蛋白質2(EFEMP2),mRNA|qPCR據assay_on_demand情況匹配[1248..1272]CAAGCTTGGCACGAGGGCAGGCATTGCCCGAGCCAGCCGAGCCGCCAGAGCCGCGGGCCGCGCGGGTGTCGCGGGCCCAACCCCAGGATGCTCCCCTGCGCCTCCTGCCTACCCGGGTCTCTACTGCTCTGGGCGCTGCTACTGTTGCTCTTGGGATCAGCTTCTCCTCAGGATTCTGAAGAGCCCGACAGCTACACGGAATGCACAGATGGCTATGAGTGGGACCCAGACAGCCAGCACTGCCGGGATGTCAACGAGTGTCTGACCATCCCTGAGGCCTGCAAGGGGGAAATGAAGTGCATCAACCACTACGGGGGCTACTTGTGCCTGCCCCGCTCCGCTGCCGTCATCAACGACCTACACGGCGAGGGACCCCCGCCACCAGTGCCTCCCGCTCAACACCCCAACCCCTGCCCACCAGGCTATGAGCCCGACGATCAGGACAGCTGTGTGGATGTGGACGAGTGTGCCCAGGCCCTGCACGACTGTCGCCCCAGCCAGGACTGCCATAACTTGCCTGGCTCCTATCAGTGCACCTGCCCTGATGGTTACCGCAAGATCGGGCCCGAGTGTGTGGACATAGACGAGTGCCGCTACCGCTACTGCCAGCACCGCTGCGTGAACCTGCCTGGCTCCTTCCGCTGCCAGTGCGAGCCGGGCTTCCAGCTGGGGCCTAACAACCGCTCCTGTGTTGATGTGAACGAGTGTGACATGGGGGCCCCATGCGAGCAGCGCTGCTTCAACTCCTATGGGACCTTCCTGTGTCGCTGCCACCAGGGCTATGAGCTGCATCGGGATGGCTTCTCCTGCAGTGATATTGATGAGTGTAGCTACTCCAGCTACCTCTGTCAGTACCGCTGCGTCAACGAGCCAGGCCGTTTCTCCTGCCACTGCCCACAGGGTTACCAGCTGCTGGCCACACGCCTCTGCCAAGACATTGATGAGTGTGAGTCTGGTGCGCACCAGTGCTCCGAGGCCCAAACCTGTGTCAACTTCCATGGGGGCTACCGCTGCGTGGACACCAACCGCTGCGTGGAGCCCTACATCCAGGTCTCTGAGAACCGCTGTCTCTGCCCGGCCTCCAACCCTCTATGTCGAGAGCAGCCTTCATCCATTGTGCACCGCTACATGACCATCACCTCGGAGCGGAGAGTACCCGCTGACGTGTTCCAGATCCAGGCGACCTCCGTCTACCCCGGTGCCTACAATGCCTTTCAGATCCGTGCTGGAAACTCGCAGGGGGACTTTTACATTAGGCAAATCAACAACGTCAGCGCCATGCTGGTCCTCGCCCGGCCGGTGACGGGCCCCCGGGAGTACGTGCTGGACCTGGAGATGGTCACCATGAATTCCCTCATGAGCTACCGGGCCAGCTCTGTACTGAGGCTCACCGTCTTTGTAGGGGCCTACACCTTCTGAGGAGCAGGAGGGAGCCACCCTCCCTGCAGCTACCCTAGCTGAGGAGCCTGTTGTGAGGGGCAGAATGAGAAAGGCCCAGGGGCCCCCATTGACAGGAGCTGGGAGCTCTGCACCACGAGCTTCAGTCACCCCGAGAGGAGAGGAGGTAACGAGGAGGGCGGACTCCAGGCCCCGGCCCAGAGATTTGGACTTGGCTGGCTTGCAGGGGTCCTAAGAAACTCCACTCTGGACAGCGCCAGGAGGCCCTGGGTTCCATTCCTAACTCTGCCTCAAACTGTACATTTGGATAAGCCCTAGTAGTTCCCTGGGCCTGTTTTTCTATAAAACGAGGCAACTGGSEQ ID NO81
光亮蛋白聚糖>gi|21359858|ref|NM_002345.2|人類光亮蛋白聚糖(LUM),mRNA|qPCR正向引物匹配[61..84]|qPCR反向引物匹配[182..162]|qPCR探針匹配[117..152]GTATCACTCAGAATCTGGCAGCCAGTTCCGTCCTGACAGAGTTCACAGCATATATTGGTGGATTCTTGTCCATAGTGCATCTGCTTTAAGAATTAACGAAAGCAGTGTCAAGACAGTAAGGATTCAAACCATTTGCCAAAAATGAGTCTAAGTGCATTTACTCTCTTCCTGGCATTGATTGGTGGTACCAGTGGCCAGTACTATGATTATGATTTTCCCCTATCAATTTATGGGCAATCATCACCAAACTGTGCACCAGAATGTAACTGCCCTGAAAGCTACCCAAGTGCCATGTACTGTGATGAGCTGAAATTGAAAAGTGTACCAATGGTGCCTCCTGGAATCAAGTATCTTTACCTTAGGAATAACCAGATTGACCATATTGATGAAAAGGCCTTTGAGAATGTAACTGATCTGCAGTGGCTCATTCTAGATCACAACCTTCTAGAAAACTCCAAGATAAAAGGGAGAGTTTTCTCTAAATTGAAACAACTGAAGAAGCTGCATATAAACCACAACAACCTGACAGAGTCTGTGGGCCCACTTCCCAAATCTCTGGAGGATCTGCAGCTTACTCATAACAAGATCACAAAGCTGGGCTCTTTTGAAGGATTGGTAAACCTGACCTTCATCCATCTCCAGCACAATCGGCTGAAAGAGGATGCTGTTTCAGCTGCTTTTAAAGGTCTTAAATCACTCGAATACCTTGACTTGAGCTTCAATCAGATAGCCAGACTGCCTTCTGGTCTCCCTGTCTCTCTTCTAACTCTCTACTTAGACAACAATAAGATCAGCAACATCCCTGATGAGTATTTCAAGCGTTTTAATGCATTGCAGTATCTGCGTTTATCTCACAACGAACTGGCTGATAGTGGAATACCTGGAAATTCTTTCAATGTGTCATCCCTGGTTGAGCTGGATCTGTCCTATAACAAGCTTAAAAACATACCAACTGTCAATGAAAACCTTGAAAACTATTACCTGGAGGTCAATCAACTTGAGAAGTTTGACATAAAGAGCTTCTGCAAGATCCTGGGGCCATTATCCTACTCCAAGATCAAGCATTTGCGTTTGGATGGCAATCGCATCTCAGAAACCAGTCTTCCACCGGATATGTATGAATGTCTACGTGTTGCTAACGAAGTCACTCTTAATTAATATCTGTATCCTGGAACAATATTTTATGGTTATGTTTTTCTGTGTGTCAGTTTTCATAGTATCCATATTTTATTACTGTTTATTACTTCCATGAATTTTAAAATCTGAGGGAAATGTTTTGTAAACATTTATTTTTTTTAAAGAAAAGATGAAAGGCAGGCCTATTTCATCACAAGAACACACACATATACACGAATAGACATCAAACTCAATGCTTTATTTGTAAATTTAGTGTTTTTTTATTTCTACTGTCAAATGATGTGCAAAACCTTTTACTGGTTGCATGGAAATCAGCCAAGTTTTATAATCCTTAAATCTTAATGTTCCTCAAAGCTTGGATTAAATACATATGGATGTTACTCTCTTGCACCAAATTATCTTGATACATTCAAATTTGTCTGGTTAAAAAATAGGTGGTAGATATTGAGGCCAAGAATATTGCAAAATACATGAAGCTTCATGCACTTAAAGAAGTATTTTTAGAATAAGAATTTGCATACTTACCTAGTGAAACTTTTCTAGAATTATTTTTCACTCTAAGTCATGTATGTTTCTCTTTGATTATTTGCATGTTATGTTTAATAAGCTACTAGCAAAATAAAACATAGCAAATGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA SE QID NO82Stannin>gi|29893560|ref|NM_003498.3|人類stannin(SNN),mRNAAGCGGGGCCGGACCGGGCGGGCGGAGCCGGGCCCGCGGGGCTGCTGCGGGGCGATCGGGCCGGGCCGCTGCCGCGCCATGGACTCCCGTGTCCAGCCTGAGTTCCAGCCTCACTGAGTGGCCACCCCCAAAGTGCTGCCAGCCGAGGAAGCCCCCAGCACTGACCATGTCTATTATGGACCACAGCCCCACCACGGGCGTGGTCACAGTCATCGTCATCCTCATTGCCATCGCGGCCCTGGGGGCCTTGATCCTGGGCTGCTGGTGCTACCTGCGGCTGCAGCGCATCAGCCAGTCAGAGGACGAGGAGAGCATCGTGGGGGATGGGGAGACCAAGGAACCCTTCCTGCTGGTGCAGTATTCGGCCAAGGGACCGTGCGTGGAGAGAAAGGCCAAGCTGATGACTCCCAACGGCCCGGAAGTCCACGGCTGAGCCAGGATGCAAGGCTCCTGGTCCTGTTTGCAGCCGGCCAAGAGGCGCTGGGAGGGGCAAAACCATACGGATGCGCTGCTGTCTGAGAGGAAGGGCTGACACTTGCTGGCATGGCCTCTGCGGGCTTCGTCATCGCATGCACTGATGCCCGGGGACCTGGCTGTCCTGGGCTTCCCCTCGGCCTCCAGGTGAGGCTGCCCATTGCAGGCACTGGGCAGGCCTGACCTTGCTGGGGCTCATGGCCCTGTAGCGCTTTTGTTACTTGAATGTCTAGCTGAGCCTGTTTTTGATGGAGCTACTACTGTAATGCGTGAACTAACAAACCTGTGAACTGTAAATAGGCCCCTGGAAGCACGTGCTTAAGCCCTTTTGCTGATTTTTAAAAATATCATCTAGCGCACACGGGACTGGTATTCTGGCTGTACTAATGACAAGCTGAGTCAAGACCCTGGAGGGTCATAGGCTTGTAAAGGCCCACGCCACACTCGGCAGGGGTCTCTCATGTGTGTCCATCTGCGTGTATGTCAAGGAAGTGAGATGCCAATTTGGGGTCTTGAGGCTGACCAGTTGGGGTGCTTGGGTGATCTCTGCTTCATTAGTCATGGGTGGAAGAAAAACCACACCCCCCGCACCCCTCCGTTCTTTCTGCATAGACTCACTTGTTAAATAGCAGTTCTGTTGAGAGTGGAGTTACTGCAGGGAAGCTACCGGACCTGCCTGGGAGCCAGTGAAGGGCGAGTCAGGGCACGCGTCCTGGAGGCTGCCAGCGTCCTTGTAGCAGAGCAGTTTCTTGCCGCTTGGGTCTTCAGCACGCCAAGCCCCCCACCAACCCTCCACCCCGAGTGAAGGCTTCGCTGAAATTGCTTTGGTCCTCATAGAGCCTGTGGTGGCTACTTTTGGTCTGAAACCCACTTGGCCCAGGAAAGAGAAAAGGTTGTATGTTTTGTGTTGGTGTTTCCTATTTTCTGCACTGGAGGGGAGGGGACTGTTGAGGTTCTGTCTTTTTTCTTCTTTTCCTCTTCCCTCTTCACATCACTTGGCTTCCTTTCCTCTCTGATGACCGTCCGCCTATGGGGTTCTGACTTCACTTTCCTCAGCGGGTCTCCAGTCCCCTGACCCAGCTCTAAAGGCACTTAGGACCCAGGGAACATTTCTCACGTGCACATTCCCCTAAGAGCCACCAGACTGCTTCCTGCCAGCCTGTGCTTGCGGCAGGGAGCCGGGGCAGGGCAGAGGTGAACTTGAAGTTCAGGACTTGACTCTCCCACAGGTGGTGAGCTGGTGGCTCTCTGGTGAGCTAGTGTCTCCACAGCCTGTCTCCAAGGCCTCCCCTATGTACATTTCAGTGAGCTCACTTTGATTTTTAATCCCACCACAAGCACATACTAATTTTATTTATGATTCAAATGTGACTCGTGCCTGCCCATCCCTGTAATAGATGGAAGGTCAGCCCCGGCTTAACCACAGAGCACTGGCCCTTCATGGCTGAGCTCAGAGCTCTGGCCTCCTGCTCAGACTAAAGGCACCTCCTCTGGCCTCACCCAAGCCTCTTCTAAAAACCATGTTGAATGAATCCACGTTCTGGAACCCCGAGGCGGGAGAAGTAGGGAGCTGTTCGTTTAAGCAGCATACACCTAAATTGGGGGTTTAAACATTAAGTAGGAGCTTGGGGTGGAAGAGGGACAGCCGGCTGGGCCACCTGAGCAGAAGGTGGTAATGAAACACCTCAGCTGGGCTCTTGGGAGACCTTAGGAAGCAGGAGAGGCAACACCTCTGGCTACTGATGGTGTGGCAAGTTCAGAAGAGGTGGTGGTGGGGTAGGCGTGATGTCAGCAGAAGCCCTGCAGGCTGGGTGGGCAGGACACGTGGTGGGGGCCACTGAAACCAGGCCTAGGAGGGAGAACAAGTTCCAAAGGTGCCGACTGGAAGAAGGGGGTAAAAGTTTGCTTTGGTGAGTGAGAAAAGGCTGGGGCGTGTGATCCATCCCCTCACGTTTCAGAACTTCCAGGCTTTCTACCTCGACTCTCACCACAGCCAGCACATACACCTAGGCTGTTTTTCCTTCCTCCACACCTGAGGGACGCAGCAACAGCTAGGATCTGCATTTTCAGGTTCCGAGCCTGACCCCTGGAACTGACCAGCGCTCGATTGTCAGCCTTGGCCTGGGGTTTTGACCTTGCCAGTGAAGTTTCGGTTTTGAAGTGATTAAATGTCACTTCCTCATCAGTTTCACTTCTGGAGGTTTTCTTATCCTACTCCCTGGTGCCAGGGACGTACCTGGGAGTTTGAATCAGGCCCATTTGAGCGTGGCAGCCGTGTTGGGTGAAGGTCCGGGGCTCGGTGAGGCACTGGGGGGGTTTTCGGGAGGAAAATGAAAATGCTTCTAGAATGAGTGAACCACATCATAGCTCTCACTGTTTTTTCAATAGCTACTTTTTTTAGCAGACACCAGAGCCACACTCAAATGGCTAAGTAGGTTATGACCTCTCTGGATTATTTTTGAATGCCCAACTGTTGCATTCAAGTTTTCTGACTAATAAGAAATTAAGCATTCATCCTTCGTATCACTGCAGAAGCAACAGTGGGGGCACAGGGAGGGAACTCTTGACACTGAGCCACTAAAATATGGACTAATTTTTTGGACAAATCTTCAAACGGACTGTGCTACTGTATTTGTCTCAAAGCTACCAAGTTTGTGCAATAAGTGGAAGGGATGTCATCCTTCTTCAATAAATGCTGAATGACATTCAAGCTGATTTTCTAGACCACTGAGAAAATCTTTATTTACAATAAATTTCAATAAAATTTGCATAAATATATTCCCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGAAAAAAAAAAAAA SEQ ID NO83分泌型磷蛋白1>gi|38146097|ref|NM_000582.2|人類分泌型磷蛋白1(骨橋蛋白、骨唾液酸蛋白I、早期T-淋巴細胞活化劑1)(SPP1),mRNA|qPCR據assay_on_demand情況匹配[253..277]CTCCCTGTGTTGGTGGAGGATGTCTGCAGCAGCATTTAAATTCTGGGAGGGCTTGGTTGTCAGCAGCAGCAGGAGGAGGCAGAGCACAGCATCGTCGGGACCAGACTCGTCTCAGGCCAGTTGCAGCCTTCTCAGCCAAACGCCGACCAAGGAAAACTCACTACCATGAGAATTGCAGTGATTTGCTTTTGCCTCCTAGGCATCACCTGTGCCATACCAGTTAAACAGGCTGATTCTGGAAGTTCTGAGGAAAAGCAGCTTTACAACAAATACCCAGATGCTGTGGCCACATGGCTAAACCCTGACCCATCTCAGAAGCAGAATCTCCTAGCCCCACAGACCCTTCCAAGTAAGTCCAACGAAAGCCATGACCACATGGATGATATGGATGATGAAGATGATGATGACCATGTGGACAGCCAGGACTCCATTGACTCGAACGACTCTGATGATGTAGATGACACTGATGATTCTCACCAGTCTGATGAGTCTCACCATTCTGATGAATCTGATGAACTGGTCACTGATTTTCCCACGGACCTGCCAGCAACCGAAGTTTTCACTCCAGTTGTCCCCACAGTAGACACATATGATGGCCGAGGTGATAGTGTGGTTTATGGACTGAGGTCAAAATCTAAGAAGTTTCGCAGACCTGACATCCAGTACCCTGATGCTACAGACGAGGACATCACCTCACACATGGAAAGCGAGGAGTTGAATGGTGCATACAAGGCCATCCCCGTTGCCCAGGACCTGAACGCGCCTTCTGATTGGGACAGCCGTGGGAAGGACAGTTATGAAACGAGTCAGCTGGATGACCAGAGTGCTGAAACCCACAGCCACAAGCAGTCCAGATTATATAAGCGGAAAGCCAATGATGAGAGCAATGAGCATTCCGATGTGATTGATAGTCAGGAACTTTCCAAAGTCAGCCGTGAATTCCACAGCCATGAATTTCACAGCCATGAAGATATGCTGGTTGTAGACCCCAAAAGTAAGGAAGAAGATAAACACCTGAAATTTCGTATTTCTCATGAATTAGATAGTGCATCTTCTGAGGTCAATTAAAAGGAGAAAAAATACAATTTCTCACTTTGCATTTAGTCAAAAGAAAAAATGCTTTATAGCAAAATGAAAGAGAACATGAAATGCTTCTTTCTCAGTTTATTGGTTGAATGTGTATCTATTTGAGTCTGGAAATAACTAATGTGTTTGATAATTAGTTTAGTTTGTGGCTTCATGGAAACTCCCTGTAAACTAAAAGCTTCAGGGTTATGTCTATGTTCATTCTATAGAAGAAATGCAAACTATCACTGTATTTTAATATTTGTTATTCTCTCATGAATAGAAATTTATGTAGAAGCAAACAAAATACTTTTACCCACTTAAAAAGAGAATATAACATTTTATGTCACTATAATCTTTTGTTTTTTAAGTTAGTGTATATTTTGTTGTGATTATCTTTTTGTGGTGTGAATAAATCTTTTATCTTGAATGTAATAAGAATTTGGTGGTGTCAATTGCTTATTTGTTTTCCCACGGTTGTCCAGCAATTAATAAAACATAACCTTTTTTACTGCCTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA SEQ ID NO84硫酸軟骨素蛋白聚糖2
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NO85N-醯基鞘氨醇醯胺水解酶1>gi|30089929|ref|NM_004315.2|人類N-醯基鞘氨醇醯胺水解酶(酸性神經醯胺酶)1(ASAH1),轉錄物變體2,mRNA|qPCR正向引物匹配[1212..1228]|qPCR反向引物匹配[1290..1266]|qPCR探針匹配[1233..1260]GGACTTTGAAATCCAACCCGGTCACCTACCCGCGCGACTGTGTCCACGGATGGCACGAAAGCCAAGCGAGTCCCCCTGCCGAGCTACTCGCGTCCGCCTCCTCCCAAGCTGAGCTCTGCTCCGCCCACCTGAGTCCTTCGCCAGTTAGGAGGAAACACAGCCGCTTAATGAACTGCTGCATCGGGCTGGGAGAGAAAGCTCGCGGGTCCCACCGGGCCTCCTACCCAAGTCTCAGCGCGCTTTTCACCGAGGCCTCAATTCTGGGATTTGGCAGCTTTGCTGTGAAAGCCCAATGGACAGAGGACTGCAGAAAATCAACCTATCCTCCTTCAGGACCAACGTACAGAGGTGCAGTTCCATGGTACACCATAAATCTTGACTTACCACCCTACAAAAGATGGCATGAATTGATGCTTGACAAGGCACCAATGCTAAAGGTTATAGTGAATTCTCTGAAGAATATGATAAATACATTCGTGCCAAGTGGAAAAGTTATGCAGGTGGTGGATGAAAAATTGCCTGGCCTACTTGGCAACTTTCCTGGCCCTTTTGAAGAGGAAATGAAGGGTATTGCCGCTGTTACTGATATACCTTTAGGAGAGATTATTTCATTCAATATTTTTTATGAATTATTTACCATTTGTACTTCAATAGTAGCAGAAGACAAAAAAGGTCATCTAATACATGGGAGAAACATGGATTTTGGAGTATTTCTTGGGTGGAACATAAATAATGATACCTGGGTCATAACTGAGCAACTAAAACCTTTAACAGTGAATTTGGATTTCCAAAGAAACAACAAAACTGTCTTCAAGGCTTCAAGCTTTGCTGGCTATGTGGGCATGTTAACAGGATTCAAACCAGGACTGTTCAGTCTTACACTGAATGAACGTTTCAGTATAAATGGTGGTTATCTGGGTATTCTAGAATGGATTCTGGGAAAGAAAGATGCCATGTGGATAGGGTTCCTCACTAGAACAGTTCTGGAAAATAGCACAAGTTATGAAGAAGCCAAGAATTTATTGACCAAGACCAAGATATTGGCCCCAGCCTACTTTATCCTGGGAGGCAACCAGTCTGGGGAAGGTTGTGTGATTACACGAGACAGAAAGGAATCATTGGATGTATATGAACTCGATGCTAAGCAGGGTAGATGGTATGTGGTACAAACAAATTATGACCGTTGGAAACATCCCTTCTTCCTTGATGATCGCAGAACGCCTGCAAAGATGTGTCTGAACCGCACCAGCCAAGAGAATATCTCATTTGAAACCATGTATGATGTCCTGTCAACAAAACCTGTCCTCAACAAGCTGACCGTATACACAACCTTGATAGATGTTACCAAAGGTCAATTCGAAACTTACCTGCGGGACTGCCCTGACCCTTGTATAGGTTGGTGAGCACACGTCTGGCCTACAGAATGCGGCCTCTGAGACATGAAGACACCATCTCCATGTGACCGAACACTGCAGCTGTCTGACCTTCCAAAGACTAAGACTCGCGGCAGGTTCTCTTTGAGTCAAAAGCTTGTCTTCGTCCATCTGTTGACAAATGACAGACCTTTTTTTTTCCCCCATCAGTTGATTTTTCTTATTTACAGATAACTTCTTTAGGGGAAGTAAAACAGTCATCTAGAATTCACTGAGTTTTGTTTCACTTTGACATTTGGGGATCTGGTGGGCAGTCGAACCATGGTGAACTCCACCTCCGTGGAATAAATGGAGATTCAGCGTGGGTGTTGAATCCAGCACGTCTGTGTGAGTAACGGGACAGTAAACACTCCACATTCTTCAGTTTTTCACTTCTACCTACATATTTGTATGTTTTTCTGTATAACAGCCTTTTCCTTCTGGTTCTAACTGCTGTTAAAATTAATATATCATTATCTTTGCTGTTATTGACAGCGATATAATTTTATTACATATGATTAGAGGGATGAGACAGACATTCACCTGTATATTTCTTTTAATGGGCACAAAATGGGCCCTTGCCTCTAAATAGCACTTTTTGGGGTTCAAGAAGTAATCAGTATGCAAAGCAATCTTTTATACAATAATTGAAGTGTTCCCTTTTTCATAATTACTGTACTTCCCAGTAACCCTAAGGAAGTTGCTAACTTAAAAAACTGCATCCCACGTTCTGTTAATTTAGTAAATAAACAAGTCAAAGACTTGTGGAAAATAGGAAGTGAACCCATATTTTAAATTCTCATAAGTAGCATTCATGTAATAAACAGGTTTTTAGTTTGTTCTTCAGATTGATAGGGAGTTTTAAAGAAATTTTAGTAGTTACTAAAATTATGTTACTGTATTTTTCAGAAATCAAACTGCTTATGAAAAGTACTAATAGAACTTGTTAACCTTTCTAACCTTCACGATTAACTGTGAAATGTACGTCATTTGTGCAAGACCGTTTGTCCACTTCATTTTGTATAATCACAGTTGTGTTCCTGACACTCAATAAACAGTCATTGGAAAGAGTGCCAGTCAGCAGTCATGCA SEQ ID NO86N-醯基鞘氨醇醯胺水解酶1轉錄物變體1>gi|30089927|ref|NM_177924.1|人類N-醯基鞘氨醇醯胺水解酶(酸性神經醯胺酶)1(ASAH1),轉錄物變體1,mRNA |qPCR正向引物匹配[1050..1066]|qPCR反向引物匹配[1128..1104]|qPCR探針匹配[1071..1098]GGCTCTTCTTTGCCTCTGCTGGAGTCCGGGGAGTGGCGTTGGCTGCTAGAGCGATGCCGGGCCGGAGTTGCGTCGCCTTAGTCCTCCTGGCTGCCGCCGTCAGCTGTGCCGTCGCGCAGCACGCGCCGCCGTGGACAGAGGACTGCAGAAAATCAACCTATCCTCCTTCAGGACCAACGTACAGAGGTGCAGTTCCATGGTACACCATAAATCTTGACTTACCACCCTACAAAAGATGGCATGAATTGATGCTTGACAAGGCACCAATGCTAAAGGTTATAGTGAATTCTCTGAAGAATATGATAAATACATTCGTGCCAAGTGGAAAAGTTATGCAGGTGGTGGATGAAAAATTGCCTGGCCTACTTGGCAACTTTCCTGGCCCTTTTGAAGAGGAAATGAAGGGTATTGCCGCTGTTACTGATATACCTTTAGGAGAGATTATTTCATTCAATATTTTTTATGAATTATTTACCATTTGTACTTCAATAGTAGCAGAAGACAAAAAAGGTCATCTAATACATGGGAGAAACATGGATTTTGGAGTATTTCTTGGGTGGAACATAAATAATGATACCTGGGTCATAACTGAGCAACTAAAACCTTTAACAGTGAATTTGGATTTCCAAAGAAACAACAAAACTGTCTTCAAGGCTTCAAGCTTTGCTGGCTATGTGGGCATGTTAACAGGATTCAAACCAGGACTGTTCAGTCTTACACTGAATGAACGTTTCAGTATAAATGGTGGTTATCTGGGTATTCTAGAATGGATTCTGGGAAAGAAAGATGCCATGTGGATAGGGTTCCTCACTAGAACAGTTCTGGAAAATAGCACAAGTTATGAAGAAGCCAAGAATTTATTGACCAAGACCAAGATATTGGCCCCAGCCTACTTTATCCTGGGAGGCAACCAGTCTGGGGAAGGTTGTGTGATTACACGAGACAGAAAGGAATCATTGGATGTATATGAACTCGATGCTAAGCAGGGTAGATGGTATGTGGTACAAACAAATTATGACCGTTGGAAACATCCCTTCTTCCTTGATGATCGCAGAACGCCTGCAAAGATGTGTCTGAACCGCACCAGCCAAGAGAATATCTCATTTGAAACCATGTATGATGTCCTGTCAACAAAACCTGTCCTCAACAAGCTGACCGTATACACAACCTTGATAGATGTTACCAAAGGTCAATTCGAAACTTACCTGCGGGACTGCCCTGACCCTTGTATAGGTTGGTGAGCACACGTCTGGCCTACAGAATGCGGCCTCTGAGACATGAAGACACCATCTCCATGTGACCGAACACTGCAGCTGTCTGACCTTCCAAAGACTAAGACTCGCGGCAGGTTCTCTTTGAGTCAAAAGCTTGTCTTCGTCCATCTGTTGACAAATGACAGACCTTTTTTTTTCCCCCATCAGTTGATTTTTCTTATTTACAGATAACTTCTTTAGGGGAAGTAAAACAGTCATCTAGAATTCACTGAGTTTTGTTTCACTTTGACATTTGGGGATCTGGTGGGCAGTCGAACCATGGTGAACTCCACCTCCGTGGAATAAATGGAGATTCAGCGTGGGTGTTGAATCCAGCACGTCTGTGTGAGTAACGGGACAGTAAACACTCCACATTCTTCAGTTTTTCACTTCTACCTACATATTTGTATGTTTTTCTGTATAACAGCCTTTTCCTTCTGGTTCTAACTGCTGTTAAAATTAATATATCATTATCTTTGCTGTTATTGACAGCGATATAATTTTATTACATATGATTAGAGGGATGAGACAGACATTCACCTGTATATTTCTTTTAATGGGCACAAAATGGGCCCTTGCCTCTAAATAGCACTTTTTGGGGTTCAAGAAGTAATCAGTATGCAAAGCAATCTTTTATACAATAATTGAAGTGTTCCCTTTTTCATAATTACTGTACTTCCCAGTAACCCTAAGGAAGTTGCTAACTTAAAAAACTGCATCCCACGTTCTGTTAATTTAGTAAATAAACAAGTCAAAGACTTGTGGAAAATAGGAAGTGAACCCATATTTTAAATTCTCATAAGTAGCATTCATGTAATAAACAGGTTTTTAGTTTGTTCTTCAGATTGATAGGGAGTTTTAAAGAAATTTTAGTAGTTACTAAAATTATGTTACTGTATTTTTCAGAAATCAAACTGCTTATGAAAAGTACTAATAGAACTTGTTAACCTTTCTAACCTTCACGATTAACTGTGAAATGTACGTCATTTGTGCAAGACCGTTTGTCCACTTCATTTTGTATAATCACAGTTGTGTTCCTGACACTCAATAAACAGTCATTGGAAAGAGTGCCAGTCAGCAGTCATGCASEQ ID NO87絲氨酸蛋白酶11>gi|21327712|ref|NM_002775.2|人類絲氨酸蛋白酶11(IGF結合絲氨酸蛋白酶)(PRSS11),mRNA |qPCR正向引物匹配[1030..1048]|qPCR反向引物匹配[1106..1083]|qPCR探針匹配[1080..1050]CCGGCCCTCGCCCTGTCCGCCGCCACCGCCGCCGCCGCCAGAGTCGCCATGCAGATCCCGCGCGCCGCTCTTCTCCCGCTGCTGCTGCTGCTGCTGGCGGCGCCCGCCTCGGCGCAGCTGTCCCGGGCCGGCCGCTCGGCGCCTTTGGCCGCCGGGTGCCCAGACCGCTGCGAGCCGGCGCGCTGCCCGCCGCAGCCGGAGCACTGCGAGGGCGGCCGGGCCCGGGACGCGTGCGGCTGCTGCGAGGTGTGCGGCGCGCCCGAGGGCGCCGCGTGCGGCCTGCAGGAGGGCCCGTGCGGCGAGGGGCTGCAGTGCGTGGTGCCCTTCGGGGTGCCAGCCTCGGCCACGGTGCGGCGGCGCGCGCAGGCCGGCCTCTGTGTGTGCGCCAGCAGCGAGCCGGTGTGCGGCAGCGACGCCAACACCTACGCCAACCTGTGCCAGCTGCGCGCCGCCAGCCGCCGCTCCGAGAGGCTGCACCGGCCGCCGGTCATCGTCCTGCAGCGCGGAGCCTGCGGCCAAGGGCAGGAAGATCCCAACAGTTTGCGCCATAAATATAACTTTATCGCGGACGTGGTGGAGAAGATCGCCCCTGCCGTGGTTCATATCGAATTGTTTCGCAAGCTTCCGTTTTCTAAACGAGAGGTGCCGGTGGCTAGTGGGTCTGGGTTTATTGTGTCGGAAGATGGACTGATCGTGACAAATGCCCACGTGGTGACCAACAAGCACCGGGTCAAAGTTGAGCTGAAGAACGGTGCCACTTACGAAGCCAAAATCAAGGATGTGGATGAGAAAGCAGACATCGCACTCATCAAAATTGACCACCAGGGCAAGCTGCCTGTCCTGCTGCTTGGCCGCTCCTCAGAGCTGCGGCCGGGAGAGTTCGTGGTCGCCATCGGAAGCCCGTTTTCCCTTCAAAACACAGTCACCACCGGGATCGTGAGCACCACCCAGCGAGGCGGCAAAGAGCTGGGGCTCCGCAACTCAGACATGGACTACATCCAGACCGACGCCATCATCAACTATGGAAACTCGGGAGGCCCGTTAGTAAACCTGGACGGTGAAGTGATTGGAATTAACACTTTGAAAGTGACAGCTGGAATCTCCTTTGCAATCCCATCTGATAAGATTAAAAAGTTCCTCACGGAGTCCCATGACCGACAGGCCAAAGGAAAAGCCATCACCAAGAAGAAGTATATTGGTATCCGAATGATGTCACTCACGTCCAGCAAAGCCAAAGAGCTGAAGGACCGGCACCGGGACTTCCCAGACGTGATCTCAGGAGCGTATATAATTGAAGTAATTCCTGATACCCCAGCAGAAGCTGGTGGTCTCAAGGAAAACGACGTCATAATCAGCATCAATGGACAGTCCGTGGTCTCCGCCAATGATGTCAGCGACGTCATTAAAAGGGAAAGCACCCTGAACATGGTGGTCCGCAGGGGTAATGAAGATATCATGATCACAGTGATTCCCGAAGAAATTGACCCATAGGCAGAGGCATGAGCTGGACTTCATGTTTCCCTCAAAGACTCTCCCGTGGATGACGGATGAGGACTCTGGGCTGCTGGAATAGGACACTCAAGACTTTTGACTGCCATTTTGTTTGTTCAGTGGAGACTCCCTGGCCAACAGAATCCTTCTTGATAGTTTGCAGGCAAAACAAATGTAATGTTGCAGATCCGCAGGCAGAAGCTCTGCCCTTCTGTATCCTATGTATGCAGTGTGCTTTTTCTTGCCAGCTTGGGCCATTCTTGCTTAGACAGTCAGCATTTGTCTCCTCCTTTAACTGAGTCATCATCTTAGTCCAACTAATGCAGTCGATACAATGCGTAGATAGAAGAAGCCCCACGGGAGCCAGGATGGGACTGGTCGTGTTTGTGCTTTTCTCCAAGTCAGCACCCAAAGGTCAATGCACAGAGACCCCGGGTGGGTGAGCGCTGGCTTCTCAAACGGCCGAAGTTGCCTCTTTTAGGAATCTCTTTGGAATTGGGAGCACGATGACTCTGAGTTTGAGCTATTAAAGTACTTCTTACACATTG SEQ ID NO88分泌型frizzled相關蛋白2>gi|42656988|ref|NM_050625.4|人類分泌型frizzled相關蛋白2(SFRP2),mRNA|qPCR正向引物匹配[686..703]|qPCR反向引物匹配[750..728]|qPCR探針匹配[705..726]CCGGGTCGGAGCCCCCCGGAGCTGCGCGCGGGCTTGCAGCGCCTCGCCCGCGCTGTCCTCCCGGTGTCCCGCTTCTCCGCGCCCCAGCCGCCGGCTGCCAGCTTTTCGGGGCCCCGAGTCGCACCCAGCGAAGAGAGCGGGCCCGGGACAAGCTCGAACTCCGGCCGCCTCGCCCTTCCCCGGCTCCGCTCCCTCTGCCCCCTCGGGGTCGCGCGCCCACGATGCTGCAGGGCCCTGGCTCGCTGCTGCTGCTCTTCCTCGCCTCGCACTGCTGCCTGGGCTCGGCGCGCGGGCTCTTCCTCTTTGGCCAGCCCGACTTCTCCTACAAGCGCAGCAATTGCAAGCCCATCCCTGCCAACCTGCAGCTGTGCCACGGCATCGAATACCAGAACATGCGGCTGCCCAACCTGCTGGGCCACGAGACCATGAAGGAGGTGCTGGAGCAGGCCGGCGCTTGGATCCCGCTGGTCATGAAGCAGTGCCACCCGGACACCAAGAAGTTCCTGTGCTCGCTCTTCGCCCCCGTCTGCCTCGATGACCTAGACGAGACCATCCAGCCATGCCACTCGCTCTGCGTGCAGGTGAAGGACCGCTGCGCCCCGGTCATGTCCGCCTTCGGCTTCCCCTGGCCCGACATGCTTGAGTGCGACCGTTTCCCCCAGGACAACGACCTTTGCATCCCCCTCGCTAGCAGCGACCACCTCCTGCCAGCCACCGAGGAAGCTCCAAAGGTATGTGAAGCCTGCAAAAATAAAAATGATGATGACAACGACATAATGGAAACGCTTTGTAAAAATGATTTTGCACTGAAAATAAAAGTGAAGGAGATAACCTACATCAACCGAGATACCAAAATCATCCTGGAGACCAAGAGCAAGACCATTTACAAGCTGAACGGTGTGTCCGAAAGGGACCTGAAGAAATCGGTGCTGTGGCTCAAAGACAGCTTGCAGTGCACCTGTGAGGAGATGAACGACATCAACGCGCCCTATCTGGTCATGGGACAGAAACAGGGTGGGGAGCTGGTGATCACCTCGGTGAAGCGGTGGCAGAAGGGGCAGAGAGAGTTCAAGCGCATCTCCCGCAGCATCCGCAAGCTGCAGTGCTAGTCCCGGCATCCTGATGGCTCCGACAGGCCTGCTCCAGAGCACGGCTGACCATTTCTGCTCCGGGATCTCAGCTCCCGTTCCCCAAGCACACTCCTAGCTGCTCCAGTCTCAGCCTGGGCAGCTTCCCCCTGCCTTTTGCACGTTTGCATCCCCAGCATTTCCTGAGTTATAAGGCCACAGGAGTGGATAGCTGTTTTCACCTAAAGGAAAAGCCCACCCGAATCTTGTAGAAATATTCAAACTAATAAAATCATGAATATTTTTATGAAGTTTAAAAA SEQ ID NO89XIIB組磷脂酶A2>gi|45505134|ref|NM_032562.2|人類XIIB組磷脂酶A2(PLA2G12B),mRNATGTCCCTGGAATTCTGGGACACTGGCTGGGGTTTGAGGAGAGAAGCCAGTACCTACCTGGCTGCAGGATGAAGCTGGCCAGTGGCTTCTTGGTTTTGTGGCTCAGCCTTGGGGGTGGCCTGGCTCAGAGCGACACGAGCCCTGACACGGAGGAGTCCTATTCAGACTGGGGCCTTCGGCACCTCCGGGGAAGCTTTGAATCCGTCAATAGCTACTTCGATTCTTTTCTGGAGCTGCTGGGAGGGAAGAATGGAGTCTGTCAGTACAGGTGCCGATATGGAAAGGCACCAATGCCCAGACCTGGCTACAAGCCCCAAGAGCCCAATGGCTGCGGCTCCTATTTCCTGGGTCTCAAGGTACCAGAAAGTATGGACTTGGGCATTCCAGCAATGACAAAGTGCTGCAACCAGCTGGATGTCTGTTATGACACTTGCGGTGCCAACAAATATCGCTGTGATGCAAAATTCCGATGGTGTCTCCACTCGATCTGCTCTGACCTTAAGCGGAGTCTGGGCTTTGTCTCCAAAGTGGAAGCAGCCTGTGATTCCCTGGTTGACACTGTGTTCAACACCGTGTGGACCTTGGGCTGCCGCCCCTTTATGAATAGTCAGCGGGCAGCTTGCATCTGTGCAGAGGAGGAGAAGGAAGAGTTATGAGGAAGAAGTGATTCCTTCCTGGTTTTGAGTGACACCACAGCTGTCAGCCTTCAAGATGTCAAGTCTTCGAGTCAGCGTGACTCATTCATTCTTCCAACAGTTTGGACACCACAAAGCAGGAGAAAGGGAACATTTTTCTACAGCTGGAAAGTGAGTCCTATCCTTTGAGGAAATTTGAAAAAAGACATGGAGTGGTTTGAAAGCTACTCTTCATTTAAGACTGCTCTCCCCAACCAAGACACATTTGCCTGGAAATTCAGTTCTTAGCTTAAAGACTAAAATGCAAGCAAACCCTGCAATTCCTGGACCTGATAGTTATATTCATGAGTGAAATTGTGGGGAGTCCAGCCATTTGGGAGGCAATGACTTTCTGCTGGCCCATGTTTCAGTTGCCAGTAAGCTTCTCACATTTAATAAAGTGTACTTTTTAGAACATTSEQ ID NO90細胞外基質蛋白質Spondin 2>gi|6912681|ref|NM_012445.1|人類細胞外基質蛋白質spondin 2(SPON2),mRNAGCACGAGGGAAGAGGGTGATCCGACCCGGGGAAGGTCGCTGGGCAGGGCGAGTTGGGAAAGCGGCAGCCCCCGCCGCCCCCGCAGCCCCTTCTCCTCCTTTCTCCCACGTCCTATCTGCCTCTCGCTGGAGGCCAGGCCGTGCAGCATCGAAGACAGGAGGAACTGGAGCCTCATTGGCCGGCCCGGGGCGCCGGCCTCGGGCTTAAATAGGAGCTCCGGGCTCTGGCTGGGACCCGACCGCTGCCGGCCGCGCTCCCGCTGCTCCTGCCGGGTGATGGAAAACCCCAGCCCGGCCGCCGCCCTGGGCAAGGCCCTCTGCGCTCTCCTCCTGGCCACTCTCGGCGCCGCCGGCCAGCCTCTTGGGGGAGAGTCCATCTGTTCCGCCAGAGCCCCGGCCAAATACAGCATCACCTTCACGGGCAAGTGGAGCCAGACGGCCTTCCCCAAGCAGTACCCCCTGTTCCGCCCCCCTGCGCAGTGGTCTTCGCTGCTGGGGGCCGCGCATAGCTCCGACTACAGCATGTGGAGGAAGAACCAGTACGTCAGTAACGGGCTGCGCGACTTTGCGGAGCGCGGCGAGGCCTGGGCGCTGATGAAGGAGATCGAGGCGGCGGGGGAGGCGCTGCAGAGCGTGCACGCGGTGTTTTCGGCGCCCGCCGTCCCCAGCGGCACCGGGCAGACGTCGGCGGAGCTGGAGGTGCAGCGCAGGCACTCGCTGGTCTCGTTTGTGGTGCGCATCGTGCCCAGCCCCGACTGGTTCGTGGGCGTGGACAGCCTGGACCTGTGCGACGGGGACCGTTGGCGGGAACAGGCGGCGCTGGACCTGTACCCCTACGACGCCGGGACGGACAGCGGCTTCACCTTCTCCTCCCCCAACTTCGCCACCATCCCGCAGGACACGGTGACCGAGATAACGTCCTCCTCTCCCAGCCACCCGGCCAACTCCTTCTACTACCCGCGGCTGAAGGCCCTGCCTCCCATCGCCAGGGTGACACTGGTGCGGCTGCGACAGAGCCCCAGGGCCTTCATCCCTCCCGCCCCAGTCCTGCCCAGCAGGGACAATGAGATTGTAGACAGCGCCTCAGTTCCAGAAACGCCGCTGGACTGCGAGGTCTCCCTGTGGTCGTCCTGGGGACTGTGCGGAGGCCACTGTGGGAGGCTCGGGACCAAGAGCAGGACTCGCTACGTCCGGGTCCAGCCCGCCAACAACGGGAGCCCCTGCCCCGAGCTCGAAGAAGAGGCTGAGTGCGTCCCTGATAACTGCGTCTAAGACCAGAGCCCCGCAGCCCCTGGGGCCCCCGGAGCCATGGGGTGTCGGGGGCTCCTGTGCAGGCTCATGCTGCAGGCGGCCGAGGCACAGGGGGTTTCGCGCTGCTCCTGACCGCGGTGAGGCCGCGCCGACCATCTCTGCACTGAAGGGCCCTCTGGTGGCCGGCACGGGCATTGGGAAACAGCCTCCTCCTTTCCCAACCTTGCTTCTTAGGGGCCCCCGTGTCCCGTCTGCTCTCAGCCTCCTCCTCCTGCAGGATAAAGTCATCCCCAAGGCTCCAGCTACTCTAAATTATGGTCTCCTTATAAGTTATTGCTGCTCCAGGAGATTGTCCTTCATCGTCCAGGGGCCTGGCTCCCACGTGGTTGCAGATACCTCAGACCTGGTGCTCTAGGCTGTGCTGAGCCCACTCTCCCGAGGGCGCATCCAAGCGGGGGCCACTTGAGAAGTGAATAAATGGGGCGGTTTCGGAAGCGTCAGTGTTTCCATGTTATGGATCTCTCTGCGTTTGAATAAAGACTATCTCTGTTGCTCAC SEQ ID NO91嗅介蛋白1,轉錄物變體3>gi|34335282|ref|NM_058199.2|人類嗅介蛋白1(OLFM1),轉錄物變體3,mRNACCCGCCCCCGCCCCTTCCGAGCAAACTTTTGGCACCCACCGCAGCCCAGCGCGCGTTCGTGCTCCGCAGGGCGCGCCTCTCTCCGCCAATGCCAGGCGCGCGGGGGAGCCATTAGGAGGCGAGGAGAGAGGAGGGCGCAGCTCCCGCCCAGCCCAGCCCTGCCCAGCCCTGCCCGGAGGCAGACGCGCCGGAACCGGGACGCGATAAATATGCAGAGCGGAGGCTTCGCGCAGCAGAGCCCGCGCGCCGCCCGCTCCGGGTGCTGAATCCAGGCGTGGGGACACGAGCCAGGCGCCGCCGCCGGAGCCAGCGGAGCCGGGGCCAGAGCCGGAGCGCGTCCGCGTCCACGCAGCCGCCGGCCGGCCAGCACCCAGGGCCCTGCATGCCAGGTCGTTGGAGGTGGCAGCGAGACATGCACCCGGCCCGGAAGCTCCTCAGCCTCCTCTTCCTCATCCTGATGGGCACTGAACTCACTCAAAATAAAAGAGAAAACAAAGCAGAGAAGATGGGAGGGCCAGAGAGCGAGAGGAAGACCACAGGAGAGAAGACACTGAACGAGCTTCCCTTGTTTTGCCTGGAAGCCCACGCTGGCTCCCTGGCTCTGCCCAGGATGTGCAGTCCAAATCCCAATCCAGCAGTGGGGTTATGTCGTCCCGCTTACCCTCAGAGCCCTTCTCCTGGTGCTGCCCAGACGATCAGCCAGTCCCTCCTGGAGAGGTTCTGCATGGCCTCTAGGAGAGAAGTTTTCTTGGCCCCAGGAAGGCCTGGTGGAGGGTGGTGGTTGTGCACTGTTGCTGGACAGATGCATTCATTCATGTGCACACACACACACACACATGCACACACAGGGGAGCAGATACCTGCAGAGAAGAGCCAACCAGGTCCTGATTAGTGGCAAGCTGCCCCACAAAGGGCTATGCCTGTGTCTTATTGAGACACCTTGGCAAAGAGATGGCTGATTCTGGGTGGTCCTGGACATGGCCGCACCCAAGGGCCCTCCAAGCCTTAATGGCACCCTGAAGCCTCCATGCCCAGGCCAAAAGATGCTTTTCCTCCCTAAAAAAAAAAAAAAAAAAASEQ ID NO92包含重複的血小板反應蛋白1>gi|38016903|ref|NM_019032.2|人類包含重複的血小板反應蛋白1(TSRC1),mRNAGGGGCCCCAGTGGCCGCCGCGGAGCGAGGTTGCCTGGAGAGAGCGCCTGGGCGCAGAAGGGTTAACGGGCCACCGGGGGCTCGCAGAGCAGGAGGGTGCTCTCGGACGGTGTGTCCCCCACTGCACTCCTGAACTTGGAGGACAGGGTCGCCGCGAGGGACGCAGAGAGCACCCTCCACGCCCAGATGCCTGCGTAGTTTTTGTGACCAGTCCGCTCCTGCCTCCCCCTGGGGCAGTAGAGGGGGAGCGATGGAGAACTGGACTGGCAGGCCCTGGCTGTATCTGCTGCTGCTTCTGTCCCTCCCTCAGCTCTGCTTGGATCAGGAGGTGTTGTCCGGACACTCTCTTCAGACACCTACAGAGGAGGGCCAGGGCCCCGAAGGTGTCTGGGGACCTTGGGTCCAGTGGGCCTCTTGCTCCCAGCCCTGCGGGGTGGGGGTGCAGCGCAGGAGCCGGACATGTCAGCTCCCTACAGTGCAGCTCCACCCGAGTCTGCCCCTCCCTCCCCGGCCCCCAAGACATCCAGAAGCCCTCCTCCCCCGGGGCCAGGGTCCCAGACCCCAGACTTCTCCAGAAACCCTCCCCTTGTACAGGACACAGTCTCGGGGAAGGGGTGGCCCACTTCGAGGTCCCGCTTCCCACCTAGGGAGAGAGGAGACCCAGGAGATTCGAGCGGCCAGGAGGTCCCGGCTTCGAGACCCCATCAAGCCAGGAATGTTCGGTTATGGGAGAGTGCCCTTTGCATTGCCACTGCACCGGAACCGCAGGCACCCTCGGAGCCCACCCAGATCTGAGCTGTCCCTGATCTCTTCTAGAGGGGAAGAGGCTATTCCGTCCCCTACTCCAAGAGCAGAGCCATTCTCCGCAAACGGCAGCCCCCAAACTGAGCTCCCTCCCACAGAACTGTCTGTCCACACCCCATCCCCCCAAGCAGAACCTCTAAGCCCTGAAACTGCTCAGACAGAGGTGGCCCCCAGAACCAGGCCTGCCCCCCTACGGCATCACCCCAGAGCCCAGGCCTCTGGCACAGAGCCCCCCTCACCCACGCACTCCTTAGGAGAAGGTGGCTTCTTCCGTGCATCCCCTCAGCCACGAAGGCCAAGTTCCCAGGGTTGGGCCAGTCCCCAG GTAGCAGGGAGACGCCCTGATCCTTTTCCTTCGGTCCCTCGGGGCCGAGGCCAGCAGGGCCAAGGGCCTTGGGGAACGGGGGGGACTCCTCACGGGCCCCGCCTGGAGCCTGACCCTCAGCACCCGGGCGCCTGGCTGCCCCTGCTGAGCAACGGCCCCCATGCCAGCTCCCTCTGGAGCCTCTTTGCTCCCAGTAGCCCTATTCCAAGATGTTCTGGGGAGAGTGAACAGCTAAGAGCCTGCAGCCAAGCGCCCTGCCCCCCTGAGCAGCCAGACCCCCGGGCCCTGCAGTGCGCAGCCTTTAACTCCCAGGAATTCATGGGCCAGCTGTATCAGTGGGAGCCCTTCACTGAAGTCCAGGGCTCCCAGCGCTGTGAACTGAACTGCCGGCCCCGTGGCTTCCGCTTCTATGTCCGTCACACTGAAAAGGTCCAGGATGGGACCCTGTGTCAGCCTGGAGCCCCTGACATCTGTGTGGCTGGAC
GCTGTCTGAGCCCCGGCTGTGATGGGATCCTTGGCTCTGGCAGGCGTCCTGATGGCTGTGGAGTCTGTGGGGGTGATGATTCTACCTGTCGCCTTGTTTCGGGGAACCTCACTGACCGAGGGGGCCCCCTGGGCTATCAGAAGATCTTGTGGATTCCAGCGGGAGCCTTGCGGCTCCAGATTGCCCAGCTCCGGCCTAGCTCCAACTACCTGGCACTTCGTGGCCCTGGGGGCCGGTCCATCATCAATGGGAACTGGGCTGTGGATCCCCCTGGGTCCTACAGGGCCGGCGGGACCGTCTTTCGATATAACCGTCCTCCCAGGGAGGAGGGCAAAGGGGAGAGTCTGTCGGCTGAAGGCCCCACCACCCAGCCTGTGGATGTCTATATGATCTTTCAGGAGGAAAACCCAGGCGTTTTTTATCAGTATGTCATCTCTTCACCTCCTCCAATCCTTGAGAACCCCACCCCAGAGCCCCCTGTCCCCCAGCTTCAGCCGGAGATTCTGAGGGTGGAGCCCCCACTTGCTCCGGCACCCCGCCCAGCCCGGACCCCAGGCACCCTCCAGCGTCAGGTGCGGATCCCCCAGATGCCCGCCCCGCCCCATCCCAGGACACCCCTGGGGTCTCCAGCTGCGTACTGGAAACGAGTGGGACACTCTGCATGCTCAGCGTCCTGCGGGAAAGGTGTCTGGCGCCCCATTTTCCTCTGCATCTCCCGTGAGTCGGGAGAGGAACTGGATGAACGCAGCTGTGCCGCGGGTGCCAGGCCCCCAGCCTCCCCTGAACCCTGCCACGGCACCCCATGCCCCCCATACTGGGAGGCTGGCGAGTGGACATCCTGCAGCCGCTCCTGTGGCCCCGGCACCCAGCACCGCCAGCTGCAGTGCCGGCAGGAATTTGGGGGGGGTGGCTCCTCGGTGCCCCCGGAGCGCTGTGGACATCTCCCCCGGCCCAACATCACCCAGTCTTGCCAGCTGCGCCTCTGTGGCCATTGGGAAGTTGGCTCTCCTTGGAGCCAGTGCTCCGTGCGGTGCGGCCGGGGCCAGAGAAGCCGGCAGGTTCGCTGTGTTGGGAACAACGGTGATGAAGTGAGCGAGCAGGAGTGTGCGTCAGGCCCCCCGCAGCCCCCCAGCAGAGAGGCCTGTGACATGGGGCCCTGTACTACTGCCTGGTTCCACAGCGACTGGAGCTCCAAGTGCTCAGCCGAGTGTGGGACGGGAATCCAGCGGCGCTCTGTGGTCTGCCTTGGGAGTGGGGCAGCCCTCGGGCCAGGCCAGGGGGAAGCAGGAGCAGGAACTGGGCAGAGCTGTCCAACAGGAAGCCGGCCCCCTGACATGCGCGCCTGCAGCCTGGGGCCCTGTGAGAGAACTTGGCGCTGGTACACAGGGCCCTGGGGTGAGTGCTCCTCCGAATGTGGCTCTGGCACACAGCGTAGAGACATCATCTGTGTATCCAAACTGGGGACGGAGTTCAACGTGACTTCTCCGAGCAACTGTTCTCACCTCCCCAGGCCCCCTGCCCTGCAGCCCTGTCAAGGGCAGGCCTGCCAGGACCGATGGTTTTCCACGCCCTGGAGCCCATGTTCTCGCTCCTGCCAAGGGGGAACGCAGACACGGGAGGTCCAGTGCCTGAGCACCAACCAGACCCTCAGCACCCGATGCCCTCCTCAACTGCGGCCCTCCAGGAAGCGCCCCTGTAACAGCCAACCCTGCAGCCAGCGCCCTGATGATCAATGCAAGGACAGCTCTCCACATTGCCCCCTGGTGGTACAGGCCCGGCTCTGCGTCTACCCCTACTACACAGCCACCTGTTGCCGCTCTTGCGCACATGTCCTGGAGCGGTCTCCCCAGGATCCCTCCTGAAAGGGGTCCGGGGCACCTTCACGGTTTTCTGTGCCACCATCGGTCACCCATTGATCGGCCCACTCTGAACCCCCTGGCTCTCCAGCCTGTCCCAGTCTCAGCAGGGATGTCCTCCAGGTGACAGAGGGTGGCAAGGTGACTGACACAAAGTGACTTTCAGGGCTGTGGTCAGGCCCATGTGGTGGTGTGATGGGTGTGTGCACATATGCCTCAGGTGTGCTTTTGGGACTGCATGGATATGTGTGTGCTCAAACGTGTATCACTTTTCAAAAAGAGGTTACACAGACTGAGAAGGACAAGACCTGTTTCCTTGAGACTTTCCTAGGTGGAAAGGAAAGCAAGTCTGCAGTTCCTTGCTAATCTGAGCTACTTAGAGTGTGGTCTCCCCACCAACTCCAGTTTTGTGCCCTAAGCCTCATTTCTCATGTTCAGACCTCACATCTTCTAAGCCGCCCTGTGTCTCTGACCCCTTCTCATTTGCCTAGTATCTCTGCCCCTGCCTCCCTAATTAGCTAGGGCTGGGGTCAGCCACTGCCAATCCTGCCTTACTCAGGAAGGCAGGAGGAAAGAGACTGCCTCTCCAGAGCAAGGCCCAGCTGGGCAGAGGGTGAAAAAGAGAAATGTGAGCATCCGCTCCCCCACCACCCCGCCCAGCCCCTAGCCCCACTCCCTGCCTCCTGAAATGGTTCCCACCCAGAACTAATTTATTTTTTATTAAAGATGGTCATGACAAATGAAAAAAAAAAAAAAAAAAASEQ ID NO93血小板反應蛋白2>gi|40317627|ref|NM_003247.2|人類血小板反應蛋白2(THBS2),mRNA|qPCR正向引物匹配[3558..3580]|qPCR反向引物匹配[3682..3655]|qPCR探針匹配[3597..3623]GAGGAGGAGACGGCATCCAGTACAGAGGGGCTGGACTTGGACCCCTGCAGCAGCCCTGCACAGGAGAAGCGGCATATAAAGCCGCGCTGCCCGGGAGCCGCTCGGCCACGTCCACCGGAGCATCCTGCACTGCAGGGCCGGTCTCTCGCTCCAGCAGAGCCTGCGCCTTTCTGACTCGGTCCGGAACACTGAAACCAGTCATCACTGCATCTTTTTGGCAAACCAGGAGCTCAGCTGCAGGAGGCAGGATGGTCTGGAGGCTGGTCCTGCTGGCTCTGTGGGTGTGGCCCAGCACGCAAGCTGGTCACCAGGACAAAGACACGACCTTCGACCTTTTCAGTATCAGCAACATCAACCGCAAGACCATTGGCGCCAAGCAGTTCCGCGGGCCCGACCCCGGCGTGCCGGCTTACCGCTTCGTGCGCTTTGACTACATCCCACCGGTGAACGCAGATGACCTCAGCAAGATCACCAAGATCATGCGGCAGAAGGAGGGCTTCTTCCTCACGGCCCAGCTCAAGCAGGACGGCAAGTCCAGGGGCACGCTGTTGGCTCTGGAGGGCCCCGGTCTCTCCCAGAGGCAGTTCGAGATCGTCTCCAACGGCCCCGCGGACACGCTGGATCTCACCTACTGGATTGACGGCACCCGGCATGTGGTCTCCCTGGAGGACGTCGGCCTGGCTGACTCGCAGTGGAAGAACGTCACCGTGCAGGTGGCTGGCGAGACCTACAGCTTGCACGTGGGCTGCGACCTCATAGACAGCTTCGCTCTGGACGAGCCCTTCTACGAGCACCTGCAGGCGGAAAAGAGCCGGATGTACGTGGCCAAAGGCTCTGCCAGAGAGAGTCACTTCAGGGGTTTGCTTCAGAACGTCCACCTAGTGTTTGAAAACTCTGTGGAAGATATTCTAAGCAAGAAGGGTTGCCAGCAAGGCCAGGGAGCTGAGATCAACGCCATCAGTGAGAACACAGAGACGCTGCGCCTGGGTCCGCATGTCACCACCGAGTACGTGGGCCCCAGCTCGGAGAGGAGGCCCGAGGTGTGCGAACGCTCGTGCGAGGAGCTGGGAAACATGGTCCAGGAGCTCTCGGGGCTCCACGTCCTCGTGAACCAGCTCAGCGAGAACCTCAAGAGAGTGTCGAATGATAACCAGTTTCTCTGGGAGCTCATTGGTGGCCCTCCTAAGACAAGGAACATGTCAGCTTGCTGGCAGGATGGCCGGTTCTTTGCGGAAAATGAAACGTGGGTGGTGGACAGCTGCACCACGTGTACCTGCAAGAAATTTAAAACCATTTGCCACCAAATCACCTGCCCGCCTGCAACCTGCGCCAGTCCATCCTTTGTGGAAGGCGAATGCTGCCCTTCCTGCCTCCACTCGGTGGACGGTGAGGAGGGCTGGTCTCCGTGGGCAGAGTGGACCCAGTGCTCCGTGACGTGTGGCTCTGGGACCCAGCAGAGAGGCCGGTCCTGTGACGTCACCAGCAACACCTGCTTGGGGCCCTCCATCCAGACACGGGCTTGCAGTCTGAGCAAGTGTGACACCCGCATCCGGCAGGACGGCGGCTGGAGCCACTGGTCACCTTGGTCTTCATGCTCTGTGACCTGTGGAGTTGGCAATATCACACGCATCCGTCTCTGCAACTCCCCAGTGCCCCAGATGGGGGGCAAGAATTGCAAAGGGAGTGGCCGGGAGACCAAAGCCTGCCAGGGCGCCCCATGCCCAATCGATGGCCGCTGGAGCCCCTGGTCCCCGTGGTCGGCCTGCACTGTCACCTGTGCCGGTGGGATCCGGGAGCGCACCCGGGTCTGCAACAGCCCTGAGCCTCAGTACGGAGGGAAGGCCTGCGTGGGGGATGTGCAGGAGCGTCAGATGTGCAACAAGAGGAGCTGCCCCGTGGATGGCTGTTTATCCAACCCCTGCTTCCCGGGAGCCCAGTGCAGCAGCTTCCCCGATGGGTCCTGGTCATGCGGCTCCTGCCCTGTGGGCTTCTTGGGCAATGGCACCCACTGTGAGGACCTGGACGAGTGTGCCCTGGTCCCCGACATCTGCTTCTCCACCAGCAAGGTGCCTCGCTGTGTCAACACTCAGCCTGGCTTCCACTGCCTGCCCTGCCCGCCCCGATACAGAGGGAACCAGCCCGTCGGGGTCGGCCTGGAAGCAGCCAAGACGGAAAAGCAAGTGTGTGAGCC 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NO94Adlican>gi|18390318|ref|NM_015419.1|人類adlican(DKFZp564I1922),mRNA|qPCR據assay_on_demand情況匹配[694..718]ATGCCCAAGCGCGCGCACTGGGGGGCCCTCTCCGTGGTGCTGATCCTGCTTTGGGGCCATCCGCGAGTGGCGCTGGCCTGCCCGCATCCTTGTGCCTGCTACGTCCCCAGCGAGGTCCACTGCACGTTCCGATCCCTGGCTTCCGTGCCCGCTGGCATTGCTAGACACGTGGAAAGAATCAATTTGGGGTTTAATAGCATACAGGCCCTGTCAGAAACCTCATTTGCAGGACTGACCAAGTTGGAGCTACTTATGATTCACGGCAATGAGATCCCAAGCATCCCCGATGGAGCTTTAAGAGACCTCAGCTCTCTTCAGGTTTTCAAGTTCAGCTACAACAAGCTGAGAGTGATCACAGGACAGACCCTCCAGGGTCTCTCTAACTTAATGAGGCTGCACATTGACCACAACAAGATCGAGTTTATCCACCCTCAAGCTTTCAACGGCTTAACGTCTCTGAGGCTACTCCATTTGGAAGGAAATCTCCTCCACCAGCTGCACCCCAGCACCTTCTCCACGTTCACATTTTTGGATTATTTCAGACTCTCCACCATAAGGCACCTCTACTTAGCAGAGAACATGGTTAGAACTCTTCCTGCCAGCATGCTTCGGAACATGCCGCTTCTGGAGAATCTTTACTTGCAGGGAAATCCGTGGACCTGCGATTGTGAGATGAGATGGTTTTTGGAATGGGATGCAAAATCCAGAGGAATTCTGAAGTGTAAAAAGGACAAAGCTTATGAAGGCGGTCAGTTGTGTGCAATGTGCTTCAGTCCAAAGAAGTTGTACAAACATGAGATACACAAGCTGAAGGACATGACTTGTCTGAAGCCTTCAATAGAGTCCCCTCTGAGACAGAACAGGAGCAGGAGTATTGAGGAGGAGCAAGAACAGGAAGAGGATGGTGGCAGCCAGCTCATCCTGGAGAAATTCCAACTGCCCCAGTGGAGCATCTCTTTGAATATGACCGACGAGCACGGGAACATGGTGAACTTGGTCTGTGACATCAAGAAACCAATGGATGTGTACAAGATTCACTTGAACCAAACGGATCCTCCAGATATTGACATAAATGCAACAGTTGCCTTGGACTTTGAGTGTCCAATGACCCGAGAAAACTATGAAAAGCTATGGAAATTGATAGCATACTACAGTGAAGTTCCCGTGAAGCTACACAGAGAGCTCATGCTCAGCAAAGACCCCAGAGTCAGCTACCAGTACAGGCAGGATGCTGATGAGGAAGCTCTTTACTACACAGGTGTGAGAGCCCAGATTCTTGCAGAACCAGAATGGGTCATGCAGCCATCCATAGATATCCAGCTGAACCGACGTCAGAGTACGGCCAAGAAGGTGCTACTTTCCTACTACACCCAGTATTCTCAAACAATATCCACCAAAGATACAAGGCAGGCTCGGGGCAGAAGCTGGGTAATGATTGAGCCTAGTGGAGCTGTGCAAAGAGATCAGACTGTCCTGGAAGGGGGTCCATGCCAGTTGAGCTGCAACGTGAAAGCTTCTGAGAGTCCATCTATCTTCTGGGTGCTTCCAGATGGCTCCATCCTGAAAGCGCCCATGGATGACCCAGACAGCAAGTTCTCCATTCTCAGCAGTGGCTGGCTGAGGATCAAGTCCATGGAGCCATCTGACTCAGGCTTGTACCAGTGCATTGCTCAAGTGAGGGATGAAATGGACCGCATGGTATATAGGGTACTTGTGCAGTCTCCCTCCACTCAGCCAGCCGAGAAAGACACAGTGACAATTGGCAAGAACCCAGGGGAGTCGGTGACATTGCCTTGCAATGCTTTAGCAATACCCGAAGCCCACCTTAGCTGGATTCTTCCAAACAGAAGGATAATTAATGATTTGGCTAACACATCACATGTATACATGTTGCCAAATGGAACTCTTTCCATCCCAAAGGTCCAAGTCAGTGATAGTGGTTACTACAGATGTGTGGCTGTCAACCAGCAAGGGGCAGACCATTTTACGGTGGGAATCACAGTGACCAAGAAAGGGTCTGGCTTGCCATCCAAAAGAGGCAGACGCCCAGGTGCAAAGGCTCTTTCCAGAGTCAGAGAAGACATCGTGGAGGATGAAGGGGGCTCGGGCATGGGAGATGAAGAGAACACTTCAAGGAGACTTCTGCATCCAAAGGACCAAGAGGTGTTCCTCAAAACAAAGGATGATGCCATCAATGGAGACAAGAAAGCCAAGAAAGGGAGAAGAAAGCTGAAACTCTGGAAGCATTCGGAAAAAGAACCAGAGACCAATGTTGCAGAAGGTCGCAGAGTGTTTGAATCTAGACGAAGGATAAACATGGCAAACAAACAGATTAATCCGGAGCGCTGGGCTGATATTTTAGCCAAAGTCCGTGGGAAAAATCTCCCTAAGGGCACAGAAGTACCCCCGTTGATTAAAACCACAAGTCCTCCATCCTTGAGCCTAGAAGTCACACCACCTTTTCCTGCTGTTTCTCCCCCCTCAGCATCTCCTGTGCAGACAGTAACCAGTGCTGAAGAATCCTCAGCAGATGTACCTCTACTTGGTGAAGAAGAGCACGTTTTGGGTACCATTTCCTCAGCCAGCATGGGGCTAGAACACAACCACAATGGAGTTATTCTTGTTGAACCTGAAGTAACAAGCACACCTCTGGAGGAAGTTGTTGATGACCTTTCTGAGAAGACTGAGGAGATAACTTCCACTGAAGGAGACCTGAAGGGGACAGCAGCCCCTACACTTATATCTGAGCCTTATGAACCATCTCCTACTCTGCACACATTAGACACAGTCTATGAAAAGCCCACCCATGAAGAGACGGCAACAGAGGGTTGGTCTGCAGCAGATGTTGGATCGTCACCAGAGCCCACATCCAGTGAGTATGAGCCTCCATTGGATGCTGTCTCCTTGGCTGAGTCTGAGCCCATGCAATACTTTGACCCAGATTTGGAGACTAAGTCACAACCAGATGAGGATAAGATGAAAGAAGACACCTTTGCACACCTTACTCCAACCCCCACCATCTGGGTTAATGACTCCAGTACATCACAGTTATTTGAGGATTCTACTATAGGGGAACCAGGTGTCCCAGGCCAATCACATCTACAAGGACTGACAGACAACATCCACCTTGTGAAAAGTAGTCTAAGCACTCAAGACACCTTACTGATTAAAAAGGGTATGAAAGAGATGTCTCAGACACTACAGGGAGGAAATATGCTAGAGGGAGACCCCACACACTCCAGAAGTTCTGAGAGTGAGGGCCAAGAGAGCAAATCCATCACTTTGCCTGACTCCACACTGGGTATAATGAGCAGTATGTCTCCAGTTAAGAAGCCTGCGGAAACCACAGTTGGTACCCTCCTAGACAAAGACACCACAACAGTAACAACAACACCAAGGCAAAAAGTTGCTCCGTCATCCACCATGAGCACTCACCCTTCTCGAAGGAGACCCAACGGGAGAAGGAGATTACGCCCCAACAAATTCCGCCACCGGCACAAGCAAACCCCACCCACAACTTTTGCCCCATCAGAGACTTTTTCTACTCAACCAACTCAAGCACCTGACATTAAGATTTCAAGTCAAGTGGAGAGTTCTCTGGTTCCTACAGCTTGGGTGGATAACACAGTTAATACCCCCAAACAGTTGGAAATGGAGAAGAATGCAGAACCCACATCCAAGGGAACACCACGGAGAAAACACGGGAAGAGGCCAAACAAACATCGATATACCCCTTCTACAGTGAGCTCAAGAGCGTCCGGATCCAAGCCCAGCCCTTCTCCAGAAAATAAACATAGAAACATTGTTACTCCCAGTTCAGAAACTATACTTTTGCCTAGAACTGTTTCTCTGAAAACTGAGGGCCCTTATGATTCCTTAGATTACATGACAACCACCAGAAAAATATATTCATCTTACCCTAAAGTCCAAGAGACACTTCCAGTCACATATAAACCCACATCAGATGGAAAAGAAATTAAGGATGATGTTGCCACAAATGTTGACAAACATAAAAGTGACATTTTAGTCACTGGTGAATCAATTACTAATGCCATACCAACTTCTCGCTCCTTGGTCTCCACTATGGGAGAATTTAAGGAAGAATCCTCTCCTGTAGGCTTTCCAGGAACTCCAACCTGGAATCCCTCAAGGACGGCCCAGCCTGGGAGGCTACAGACAGACATACCTGTTACCACTTCTGGGGAAAATCTTACAGACCCTCCCCTTCTTAAAGAGCTTGAGGATGTGGATTTCACTTCCGAGTTTTTGTCCTCTTTGACAGTCTCCACACCATTTCACCAGGAAGAAGCTGGTTCTTCCACAACTCTCTCAAGCATAAAAGTGGAGGTGGCTTCAAGTCAGGCAGAAACCACCACCCTTGATCAAGATCATCTTGAAACCACTGTGGCTATTCTCCTTTCTGAAACTAGACCACAGAATCACACCCCTACTGCTGCCCGGATGAAGGAGCCAGCATCCTCGTCCCCATCCACAATTCTCATGTCTTTGGGACAAACCACCACCACTAAGCCAGCACTTCCCAGTCCAAGAATATCTCAAGCATCTAGAGATTCCAAGGAAAATGTTTTCTTGAATTATGTGGGGAATCCAGAAACAGAAGCAACCCCAGTCAACAATGAAGGAACACAGCATATGTCAGGGCCAAATGAATTATCAACACCCTCTTCCGACCGGGATGCATTTAACTTGTCTACAAAGCTGGAATTGGAAAAGCAAGTATTTGGTAGTAGGAGTCTACCACGTGGCCCAGATAGCCAACGCCAGGATGGAAGAGTTCATGCTTCTCATCAACTAACCAGAGTCCCTGCCAAACCCATCCTACCAACAGCAACAGTGAGGCTACCTGAAATGTCCACACAAAGCGCTTCCAGATAC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SEQ ID NO95半胱氨酸蛋白酶抑制劑SA>gi|19882252|ref|NM_001322.2|人類半胱氨酸蛋白酶抑制劑SA(CST2),mRNA|qPCR正向引物匹配[302..320]|qPCR反向引物匹配[393..370]|qPCR探針匹配[341..369]GCCTCCGAGGAGACCATGGCCTGGCCCCTGTGCACCCTGCTGCTCCTGCTGGCCACCCAGGCTGTGGCCCTGGCCTGGAGCCCCCAGGAGGAGGACAGGATAATCGAGGGTGGCATCTATGATGCAGACCTCAATGATGAGCGGGTACAGCGTGCCCTTCACTTTGTCATCAGCGAGTATAACAAGGCCACTGAAGATGAGTACTACAGACGCCTGCTGCGGGTGCTACGAGCCAGGGAGCAGATCGTGGGCGGGGTGAATTACTTCTTCGACATAGAGGTGGGCCGAACCATATGTACCAAGTCCCAGCCCAACTTGGACACCTGTGCCTTCCATGAACAGCCAGAACTGCAGAAGAAACAGTTGTGCTCTTTCCAGATCTACGAAGTTCCCTGGGAGGACAGAATGTCCCTGGTGAATTCCAGGTGTCAAGAAGCCTAGGGATCTGTGCCAGGGAGTCACACTGACCACCTCCTACTCCCACCCCTTGTAGTGCTCCCACCCCTGGACTGGTGGCCCCCACCCTGTGGGAGGTCTCCCCATGCACCTGCAGCAGGAGAAGACAGAGAAGGCTGCAGGAGGCCTTTGTTGCTCAGCAGGGGACTCTGCCCTCCCTCCTTCCTTTTGCTTCTCATAGCCCTGGTACATGGTACACACACCCCCACCTCCTGCAATTAAACAGTAGCATCACCTCSEQ ID NO96半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN>gi|19882250|ref|NM_001898.2|人類半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN(CST1),mRNA|qPCR正向引物匹配[358..376]|qPCR反向引物匹配[449..426]|qPCR探針匹配[397..425]GGGCTCCCTGCCTCGGGCTCTCACCCTCCTCTCCTGCAGCTCCAGCTTTGTGCTCTGCCTCTGAGGAGACCATGGCCCAGTATCTGAGTACCCTGCTGCTCCTGCTGGCCACCCTAGCTGTGGCCCTGGCCTGGAGCCCCAAGGAGGAGGATAGGATAATCCCGGGTGGCATCTATAACGCAGACCTCAATGATGAGTGGGTACAGCGTGCCCTTCACTTCGCCATCAGCGAGTATAACAAGGCCACCAAAGATGACTACTACAGACGTCCGCTGCGGGTACTAAGAGCCAGGCAACAGACCGTTGGGGGGGTGAATTACTTCTTCGACGTAGAGGTGGGCCGCACCATATGTACCAAGTCCCAGCCCAACTTGGACACCTGTGCCTTCCATGAACAGCCAGAACTGCAGAAGAAACAGTTGTGCTCTTTCGAGATCTACGAAGTTCCCTGGGAGAACAGAAGGTCCCTGGTGAAATCCAGGTGTCAAGAATCCTAGGGATCTGTGCCAGGCCATTCGCACCAGCCACCACCCACTCCCACCCCCTGTAGTGCTCCCACCCCTGGACTGGTGGCCCCCACCCTGCGGGAGGCCTCCCCATGTGCCTGCGCCAAGAGACAGACAGAGAAGGCTGCAGGAGTCCTTTGTTGCTCAGCAGGGCGCTCTGCCCTCCCTCCTTCCTTCTTGCTTCTAATAGCCCTGGTACATGGTACACACCCCCCCACCTCCTGCAATTAAACAGTAGCATCGCCTCCCTCTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAASEQ ID NO97賴氨醯氧化酶樣酶2>gi|4505010|ref|NM_002318.1|人類賴氨醯氧化酶樣酶2(LOXL2),mRNA|qPCR正向引物匹配[2205..2223]|qPCR反向引物匹配[2286..2269]|qPCR探針匹配[2261..2229]ACTCCAGCGCGCGGCTACCTACGCTTGGTGCTTGCTTTCTCCAGCCATCGGAGACCAGAGCCGCCCCCTCTGCTCGAGAAAGGGGCTCAGCGGCGGCGGAAGCGGAGGGGGACCACCGTGGAGAGCGCGGTCCCAGCCCGGCCACTGCGGATCCCTGAAACCAAAAAGCTCCTGCTGCTTCTGTACCCCGCCTGTCCCTCCCAGCTGCGCAGGGCCCCTTCGTGGGATCATCAGCCCGAAGACAGGGATGGAGAGGCCTCTGTGCTCCCACCTCTGCAGCTGCCTGGCTATGCTGGCCCTCCTGTCCCCCCTGAGCCTGGCACAGTATGACAGCTGGCCCCATTACCCCGAGTACTTCCAGCAACCGGCTCCTGAGTATCACCAGCCCCAGGCCCCCGCCAACGTGGCCAAGATTCAGCTGCGCCTGGCTGGGCAGAAGAGGAAGCACAGCGAGGGCCGGGTGGAGGTGTACTATGATGGCCAGTGGGGCACCGTGTGCGATGACGACTTCTCCATCCACGCTGCCCACGTCGTCTGCCGGGAGCTGGGCTATGTGGAGGCCAAGTCCTGGACTGCCAGCTCCTCCTACGGCAAGGGAGAAGGGCCCATCTGGTTAGACAATCTCCACTGTACTGGCAACGAGGCGACCCTTGCAGCATGCACCTCCAATGGCTGGGGCGTCACTGACTGCAAGCACACGGAGGATGTCGGTGTGGTGTGCAGCGACAAAAGGATTCCTGGGTTCAAATTTGACAATTCGTTGATCAACCAGATAGAGAACCTGAATATCCAGGTGGAGGACATTCGGATTCGAGCCATCCTCTCAACCTACCGCAAGCGCACCCCAGTGATGGAGGGCTACGTGGAGGTGAAGGAGGGCAAGACCTGGAAGCAGATCTGTGACAAGCACTGGACGGCCAAGAATTCCCGCGTGGTCTGCGGCATGTTTGGCTTCCCTGGGGAGAGGACATACAATACCAAAGTGTACAAAATGTTTGCCTCACGGAGGAAGCAGCGCTACTGGCCATTCTCCATGGACTGCACCGGCACAGAGGCCCACATCTCCAGCTGCAAGCTGGGCCCCCAGGTGTCACTGGACCCCATGAAGAATGTCACCTGCGAGAATGGGCTGCCGGCCGTGGTGAGTTGTGTGCCTGGGCAGGTCTTCAGCCCTGACGGACCCTCGAGATTCCG 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NO98甲狀腺球蛋白>gi|33589851|ref|NM_003235.3|人類甲狀腺球蛋白(TG),mRNA|qPCR正向引物匹配[886..905]|qPCR反向引物匹配[962..941]|qPCR探針匹配[915..939]GCAGTGGTTTCTCCTCCTTCCTCCCAGGAAGGGCCAGGAAAATGGCCCTGGTCCTGGAGATCTTCACCCTGCTGGCCTCCATCTGCTGGGTGTCGGCCAATATCTTCGAGTACCAGGTTGATGCCCAGCCCCTTCGTCCCTGTGAGCTGCAGAGGGAAACGGCCTTTCTGAAGCAAGCAGACTACGTGCCCCAGTGTGCAGAGGATGGCAGCTTCCAGACTGTCCAGTGCCAGAACGACGGCCGCTCCTGCTGGTGTGTGGGTGCCAACGGCAGTGAAGTGCTGGGCAGCAGGCAGCCAGGACGGCCTGTGGCTTGTCTGTCATTTTGTCAGCTACAGAAACAGCAGATCTTACTGAGTGGCTACATTAACAGCACAGACACCTCCTACCTCCCTCAGTGTCAGGATTCAGGGGACTACGCGCCTGTTCAGTGTGATGTGCAGCATGTCCAGTGCTGGTGTGTGGACGCAGAGGGGATGGAGGTGTATGGGACCCGCCAGCTGGGGAGGCCAAAGCGATGTCCAAGGAGCTGTGAAATAAGAAATCGTCGTCTTCTCCACGGGGTGGGAGATAAGTCACCACCCCAGTGTTCTGCGGAGGGAGAGTTTATGCCTGTCCAGTGCAAATTTGTCAACACCACAGACATGATGATTTTTGATCTGGTCCACAGCTACAACAGGTTTCCAGATGCATTTGTGACCTTCAGTTCCTTCCAGAGGAGGTTCCCTGAGGTATCTGGGTATTGCCACTGTGCTGACAGCCAAGGGCGGGAACTGGCTGAGACAGGTTTGGAGTTGTTACTGGATGAAATTTATGACACCATTTTTGCTGGCCTGGACCTTCCTTCCACCTTCACTGAAACCACCCTGTACCGGATACTGCAGAGACGGTTCCTCGCAGTTCAATCAGTCATCTCTGGCAGATTCCGATGCCCCACAAAATGTGAAGTGGAGCGGTTTACAGCAACCAGCTTTGGTCACCCCTATGTTCCAAGCTGCCGCCGAAATGGCGACTATCAGGCGGTGCAGTGCCAGACGGAAGGGCCCTGCTGGTGTGTGGACGCCCAGGGGAAGGAAATGCATGGAACCCGGCAGCAAGGGGAGCCGCCATCTTGTGCTGAAGGCCAATCTTGTGCCTCCGAAAGGCAGCAGGCCTTGTCCAGACTCTACTTTGGGACCTCAGGCTACTTCAGCCAGCACGACCTGTTCTCTTCCCCAGAGAAAAGATGGGCCTCTCCAAGAGTAGCCAGATTTGCCACATCCTGCCCACCCACGATCAAGGAGCTCTTTGTGGACTCTGGGCTTCTCCGCCCAATGGTGGAGGGACAGAGCCAACAGTTTTCTGTCTCAGAAAATCTTCTCAAAGAAGCCATCCGAGCAATTTTTCCCTCCCGAGGGCTGGCTCGTCTTGCCCTTCAGTTTACCACCAACCCAAAGAGACTCCAGCAAAACCTTTTTGGAGGGAAATTTTTGGTGAATGTTGGCCAGTTTAACTTGTCTGGAGCCCTTGGCACAAGAGGCACATTTAACTTCAGTCAATTTTTCCAGCAACTTGGTCTTGCAAGCTTCTTGAATGGAGGGAGACAAGAAGATTTGGCCAAGCCACTCTCTGTGGGATTAGATTCAAATTCTTCCACAGGAACCCCTGAAGCTGCTAAGAAGGATGGTACTATGAATAAGCCAACTGTGGGCAGCTTTGGCTTTGAAATTAACCTACAAGAGAACCAAAATGCCCTCAAATTCCTTGCTTCTCTCCTGGAGCTTCCAGAATTCCTTCTCTTCTTGCAACATGCTATCTCTGTGCCAGAAGATGTGGCAAGAGATTTAGGTGATGTGATGGAAACGGTACTCGACTCCCAGACCTGTGAGCAGACACCTGAAAGGCTATTTGTCCCATCATGCACGACAGAAGGAAGCTATGAGGATGTCCAATGCTTTTCCGGAGAGTGCTGGTGTGTGAATTCCTGGGGCAAAGAGCTTCCAGGCTCAAGAGTCAGAGATGGACAGCCAAGGTGCCCCACAGACTGTGAAAAGCAAAGGGCTCGCATGCAAAGCCTCATGGGCAGCCAGCCTGCTGGCTCCACCTTGTTTGTCCCTGCTTGTACTAGTGAGGGACATTTCCTGCCTGTCCAGTGCTTCAACTCAGAGTGCTACTGTGTTGATGCTGAGGGTCAGGCCATTCCTGGAACTCGAAGTGCAATAGGGAAGCCCAAGAAATGCCCCACGCCCTGTCAATTACAGTCTGAGCAAGCTTTCCTCAGGACGGTGCAGGCCCTGCTCTCTAACTCCAGCATGCTACCCACCCTTTCCGACACCTACATCCCACAGTGCAGCACCGATGGGCAGTGGAGACAAGTGCAATGCAATGGGCCTCCTGAGCAGGTCTTCGAGTTGTACCAACGATGGGAGGCTCAGAACAAGGGCCAGGATCTGACGCCTGCCAAGCTGCTAGTGAAGATCATGAGCTACAGAGAAGCAGCTTCCGGAAACTTCAGTCTCTTTATTCAAAGTCTGTATGAGGCTGGCCAGCAAGATGTCTTCCCGGTGCTGTCACAATACCCTTCTCTGCAAGATGTCCCACTAGCAGCACTGGAAGGGAAACGGCCCCAGCCCAGGGAGAATATCCTCCTGGAGCCCTACCTCTTCTGGCAGATCTTAAATGGCCAACTCAGCCAATACCCGGGGTCCTACTCAGACTTCAGCACTCCTTTGGCACATTTTGATCTTCGGAACTGCTGGTGTGTGGATGAGGCTGGCCAAGAACTGGAAGGAATGCGGTCTGAGCCAAGCAAGCTCCCAACGTGTCCTGGCTCCTGTGAGGAAGCAAAGCTCCGTGTACTGCAGTTCATTAGGGAAACGGAAGAGATTGTTTCAGCTTCCAACAGTTCTCGGTTCCCTCTGGGGGAGAGTTTCCTGGTGGCCAAGGGAATCCGGCTGAGGAATGAGGACCTCGGCCTTCCTCCGCTCTTCCCGCCCCGGGAGGCTTTCGCGGAGTTTCTGCGTGGGAGTGATTACGCCATTCGCCTGGCGGCTCAGTCTACCTTAAGCTTCTATCAGAGACGCCGCTTTTCCCCGGACGACTCGGCTGGAGCATCCGCCCTTCTGCGGTCGGGCCCCTACATGCCACAGTGTGATGCGTTTGGAAGTTGGGAGCCTGTGCAGTGCCACGCTGGGACTGGGCACTGCTGGTGTGTAGATGAGAAAGGAGGGTTCATCCCTGGCTCACTGACTGCCCGCTCTCTGCAGATTCCACAGTGCCCGACAACCTGCGAGAAATCTCGAACCAGTGGGCTGCTTTCCAGTTGGAAACAGGCTAGATCCCAAGAAAACCCATCTCCAAAAGACCTGTTCGTCCCAGCCTGCCTAGAAACAGGAGAATATGCCAGGCTGCAGGCATCGGGGGCTGGCACCTGGTGTGTGGACCCTGCATCAGGAGAAGAGTTGCGGCCTGGCTCGAGCAGCAGTGCCCAGTGCCCAAGCCTCTGCAATGTGCTCAAGAGTGGAGTCCTCTCTAGGAGAGTCAGCCCAGGCTATGTCCCAGCCTGCAGGGCAGAGGATGGGGGCTTTTCCCCAGTGCAATGTGACCAGGCCCAGGGCAGCTGCTGGTGTGTCATGGACAGCGGAGAAGAGGTGCCTGGGACGCGCGTGACCGGGGGCCAGCCCGCCTGTGAGAGCCCGCGGTGTCCGCTGCCATTCAACGCGTCGGAGGTGGTTGGTGGAACAATCCTGTGTGAGACAATCTCGGGCCCCACAGGCTCTGCCATGCAGCAGTGCCAATTGCTGTGCCGCCAAGGCTCCTGGAGCGTGTTTCCACCAGGGCCATTGATATGTAGCCTGGAGAGCGGACGCTGGGAGTCACAGCTGCCTCAGCCCCGGGCCTGCCAACGGCCCCAGCTGTGGCAGACCATCCAGACCCAAGGGCACTTTCAGCTCCAGCTCCCGCCGGGCAAGATGTGCAGTGCTGACTACGCGGGTTTGCTGCAGACTTTCCAGGTTTTCATATTGGATGAGCTGACAGCCCGCGGCTTCTGCCAGATCCAGGTGAAGACTTTTGGCACCCTGGTTTCCATTCCTGTCTGCAACAACTCCTCTGTGCAGGTGGGTTGTCTGACCAGGGAGCGTTTAGGAGTGAATGTTACATGGAAATCACGGCTTGAGGACATCCCAGTGGCTTCTCTTCCTGACTTACATGACATTGAGAGAGCCTTGGTGGGCAAGGATCTCCTTGGGCGCTTCACAGATCTGATCCAGAGTGGCTCATTCCAGCTTCATCTGGACTCCAAGACGTTCCCAGCGGAAACCATCCGCTTCCTCCAAGGGGACCACTTTGGCACCTCTCCTAGGACACGGTTTGGGTGCTCGGAAGGATTCTACCAAGTCTTGACAAGTGAGGCCAGTCAGGACGGACTGGGATGCGTTAAGTGCCATGAAGGAAGCTATTCCCAAGATGAGGAATGCATTCCTTGTCCTGTTGGATTCTACCAAGAACAGGCAGGGAGCTTGGCCTGTGTCCCATGTCCTGTGGGCAGAACGACCATTTCTGCCGGAGCTTTCAGCCAGACTCACTGTGTCACTGACTGTCAGAGGAACGAAGCAGGCCTGCAATGTGACCAGAATGGCCAGTATCGAGCCAGCCAGAAGGACAGGGGCAGTGGGAAGGCCTTCTGTGTGGACGGCGAGGGGCGGAGGCTGCCATGGTGGGAAACAGAGGCCCCTCTTGAGGACTCACAGTGTTTGATGATGCAGAAGTTTGAGAAGGTTCCAGAATCAAAGGTGATCTTCGACGCCAATGCTCCTGTGGCTGTCAGATCCAAAGTTCCTGATTCTGAGTTCCCCGTGATGCAGTGCTTGACAGATTGCACAGAGGACGAGGCCTGCAGCTTC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NO100絲氨酸蛋白酶抑制劑,進化枝H,成員1>gi|32454740|ref|NM_001235.2|人類絲氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制劑,進化枝H(熱休克蛋白47)成員1(膠原結合蛋白1)(SERPINH1),mRNA|qPCR據assay_on_demand情況匹配[184..208]TCTTTGGCTTTTTTTGGCGGAGCTGGGGCGCCCTCCGGAAGCGTTTCCAACTTTCCAGAAGTTTCTCGGGACGGGCAGGAGGGGGTGGGGACTGCCATATATAGATCCCGGGAGCAGGGGAGCGGGCTAAGAGTAGAATCGTGTCGCGGCTCGAGAGCGAGAGTCACGTCCCGGCGCTAGCCCAGCCCGACCCAGGCCCACCGTGGTGCACGCAAACCACTTCCTGGCCATGCGCTCCCTCCTGCTTCTCAGCGCCTTCTGCCTCCTGGAGGCGGCCCTGGCCGCCGAGGTGAAGAAACCTGCAGCCGCAGCAGCTCCTGGCACTGCGGAGAAGTTGAGCCCCAAGGCGGCCACGCTTGCCGAGCGCAGCGCCGGCCTGGCCTTCAGCTTGTACCAGGCCATGGCCAAGGACCAGGCAGTGGAGAACATCCTGGTGTCACCCGTGGTGGTGGCCTCGTCGCTAGGGCTCGTGTCGCTGGGCGGCAAGGCGACCACGGCGTCGCAGGCCAAGGCAGTGCTGAGCGCCGAGCAGCTGCGCGACGAGGAGGTGCACGCCGGCCTGGGCGAGCTGCTGCGCTCACTCAGCAACTCCACGGCGCGCAACGTGACCTGGAAGCTGGGCAGCCGACTGTACGGACCCAGCTCAGTGAGCTTCGCTGATGACTTCGTGCGCAGCAGCAAGCAGCACTACAACTGCGAGCACTCCAAGATCAACTTCCGCGACAAGCGCAGCGCGCTGCAGTCCATCAACGAGTGGGCCGCGCAGACCACCGACGGCAAGCTGCCCGAGGTCACCAAGGACGTGGAGCGCACGGACGGCGCCCTGCTAGTCAACGCCATGTTCTTCAAGCCACACTGGGATGAGAAATTCCACCACAAGATGGTGGACAACCGTGGCTTCATGGTGACTCGGTCCTATACCGTGGGTGTCATGATGATGCACCGGACAGGCCTCTACAACTACTACGACGACGAGAAGGAAAAGCTGCAAATCGTGGAGATGCCCCTGGCCCACAAGCTCTCCAGCCTCATCATCCTCATGCCCCATCACGTGGAGCCTCTCGAGCGCCTTGAAAAGCTGCTAACCAAAGAGCAGCTGAAGATCTGGATGGGGAAGATGCAGAAGAAGGCTGTTGCCATCTCCTTGCCCAAGGGTGTGGTGGAGGTGACCCATGACCTGCAGAAACACCTGGCTGGGCTGGGCCTGACTGAGGCCATTGACAAGAACAAGGCCGACTTGTCACGCATGTCAGGCAAGAAGGACCTGTACCTGGCCAGCGTGTTCCACGCCACCGCCTTTGAGTTGGACACAGATGGCAACCCCTTTGACCAGGACATCTACGGGCGCGAGGAGCTGCGCAGCCCCAAGCTGTTCTACGCCGACCACCCCTTCATCTTCCTAGTGCGGGACACCCAAAGCGGCTCCCTGCTATTCATTGGGCGCCTGGTCCGGCCTAAGGGTGACAAGATGCGAGACGAGTTATAGGGCCTCAGGGTGCACACAGGATGGCAGGAGGCATCCAAAGGCTCCTGAGACACATGGGTGCTATTGGGGTTGGGGGGGAGGTGAGGTACCAGCCTTGGATACTCCATGGGGTGGGGGTGGAAAAACAGACCGGGGTTCCCGTGTGCCTGAGCGGACCTTCCCAGCTAGAATTCACTCCACTTGGACATGGGCCCCAGATACCATGATGCTGAGCCCGGAAACTCCACATCCTGTGGGACCTGGGCCATAGTCATTCTGCCTGCCCTGAAAGTCCCAGATCAAGCCTGCCTCAATCAGTATTCATATTTATAGCCAGGTACCTTCTCACCTGTGAGACCAAATTGAGCTAGGGGGGTCAGCCAGCCCTCTTCTGACACTAAAACACCTCAGCTGCCTCCCCAGCTCTATCCCAACCTCTCCCAACTATAAAACTAGGTGCTGCAGCCCCTGGGACCAGGCACCCCCAGAATGACCTGGCCGCAGTGAGGCGGATTGAGAAGGAGCTCCCAGGAGGGGCTTCTGGGCAGACTCTGGTCAAGAAGCATCGTGTCTGGCGTTGTGGGGATGAACTTTTTGTTTTGTTTCTTCCTTTTTTAGTTCTTCAAAGATAGGGAGGGAAGGGGGAACATGAGCCTTTGTTGCTATCAATCCAAGAACTTATTTGTACATTTTTTTTTTCAATAAAACTTTTCCAATGACATTTTGTTGGAGCGTGGAAAAAA SEQ ID NO101絲氨酸蛋白酶抑制劑,進化枝B,成員5>gi|4505788|ref|NM_002639.1|人類絲氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制劑,進化枝B(卵清蛋白),成員5(SERPINB5),mRNA|qPCR正向引物匹配[36..56]|qPCR反向引物匹配[106..86]|qPCR探針匹配[60..80]GGCACGAGTTGTGCTCCTCGCTTGCCTGTTCCTTTTCCACGCATTTTCCAGGATAACTGTGACTCCAGGCCCGCAATGGATGCCCTGCAACTAGCAAATTCGGCTTTTGCCGTTGATCTGTTCAAACAACTATGTGAAAAGGAGCCACTGGGCAATGTCCTCTTCTCTCCAATCTGTCTCTCCACCTCTCTGTCACTTGCTCAAGTGGGTGCTAAAGGTGACACTGCAAATGAAATTGGACAGGTTCTTCATTTTGAAAATGTCAAAGATATACCCTTTGGATTTCAAACAGTAACATCGGATGTAAACAAACTTAGTTCCTTTTACTCACTGAAACTAATCAAGCGGCTCTACGTAGACAAATCTCTGAATCTTTCTACAGAGTTCATCAGCTCTACGAAGAGACCCTATGCAAAGGAATTGGAAACTGTTGACTTCAAAGATAAATTGGAAGAAACGAAAGGTCAGATCAACAACTCAATTAAGGATCTCACAGATGGCCACTTTGAGAACATTTTAGCTGACAACAGTGTGAACGACCAGACCAAAATCCTTGTGGTTAATGCTGCCTACTTTGTTGGCAAGTGGATGAAGAAATTTCCTGAATCAGAAACAAAAGAATGTCCTTTCAGACTCAACAAGACAGACACCAAACCAGTGCAGATGATGAACATGGAGGCCACGTTCTGTATGGGAAACATTGACAGTATCAATTGTAAGATCATAGAGCTTCCTTTTCAAAATAAGCATCTCAGCATGTTCATCCTACTACCCAAGGATGTGGAGGATGAGTCCACAGGCTTGGAGAAGATTGAAAAACAACTCAACTCAGAGTCACTGTCACAGTGGACTAATCCCAGCACCATGGCCAATGCCAAGGTCAAACTCTCCATTCCAAAATTTAAGGTGGAAAAGATGATTGATCCCAAGGCTTGTCTGGAAAATCTAGGGCTGAAACATATCTTCAGTGAAGACACATCTGATTTCTCTGGAATGTCAGAGACCAAGGGAGTGGCCCTATCAAATGTTATCCACAAAGTGTGCTTAGAAATAACTGAAGATGGTGGGGATTCCATAGAGGTGCCAGGAGCACGGATCCTGCAGCACAAGGATGAATTGAATGCTGACCATCCCTTTATTTACATCATCAGGCACAACAAAACTCGAAACATCATTTTCTTTGGCAAATTCTGTTCTCCTTAAGTGGCATAGCCCATGTTAAGTCCTCCCTGACTTTTCTGTGGATGCCGATTTCTGTAAACTCTGCATCCAGAGATTCATTTTCTAGATACAATAAATTGCTAATGTTGCTGGATCAGGAAGCCGCCAGTACTTGTCATATGTAGCCTTCACACAGATAGACCTTTTTTTTTTTCCAATTCTATCTTTTGTTTCCTTTTTTCCCATAAGACAATGACATACGCTTTTAATGAAAAGGAATCACGTTAGAGGAAAAATATTTATTCATTATTTGTCAAATTGTCCGGGGTAGTTGGCAGAAATACAGTCTTCCACAAAGAAAATTCCTATAAGGAAGATTTGGAAGCTCTTCTTCCCAGCACTATGCTTTCCTTCTTTGGGATAGAGAATGTTCCAGACATTCTCGCTTCCCTGAAAGACTGAAGAAAGTGTAGTGCATGGGACCCACGAAACTGCCCTGGCTCCAGTGAAACTTGGGCACATGCTCAGGCTACTATAGGTCCAGAAGTCCTTATGTTAAGCCCTGGCAGGCAGGTGTTTATTAAAATTCTGAATTTTGGGGATTTTCAAAAGATAATATTTTACATACACTGTATGTTATAGAACTTCATGGATCAGATCTGGGGCAGCAACCTATAAATCAACACCTTAATATGCTGCAACAAAATGTAGAATATTCAGACAAAATGGATACATAAAGACTAAGTAGCCCATAAGGGGTCAAAATTTGCTGCCAAATGCGTATGCCACCAACTTACAAAAACACTTCGTTCGCAGAGCTTTTCAGATTGTGGAATGTTGGATAAGGAATTATAGACCTCTAGTAGCTGAAATGCAAGACCCCAAGAGGAAGTTCAGATCTTAATATAAATTCACTTTCATTTTTGATAGCTGTCCCATCTGGTCATGTGGTTGGCACTAGACTGGTGGCAGGGGCTTCTAGCTGACTCGCACAGGGATTCTCACAATAGCCGATATCAGAATTTGTGTTGAAGGAACTTGTCTCTTCATCTAATATGATAGCGGGAAAAGGAGAGGAAACTACTGCCTTTAGAAAATATAAGTAAAGTGATTAAAGTGCTCACGTTACCTTGACACATAGTTTTTCAGTCTATGGGTTTAGTTACTTTAGATGGCAAGCATGTAACTTATATTAATAGTAATTTGTAAAGTTGGGTGGATAAGCTATCCCTGTTGCCGGTTCATGGATTACTTCTCTATAAAAAATATATATTTACCAAAAAATTTTGTGACATTCCTTCTCCCATCTCTTCCTTGACATGCATTGTAAATAGGTTCTTCTTGTTCTGAGATTCAATATTGAATTTCTCCTATGCTATTGACAATAAAATATTATTGAACTACCSEQ ID NO102癌胚抗原相關細胞黏附分子5>gi|11386170|ref|NM_004363.1|人類癌胚抗原相關細胞黏附分子5(CEACAM5),mRNA|qPCR據assay_on_demand情況匹配[2128..2152]CTCAGGGCAGAGGGAGGAAGGACAGCAGACCAGACAGTCACAGCAGCCTTGACAAAACGTTCCTGGAACTCAAGCTCTTCTCCACAGAGGAGGACAGAGCAGACAGCAGAGACCATGGAGTCTCCCTCGGCCCCTCCCCACAGATGGTGCATCCCCTGGCAGAGGCTCCTGCTCACAGCCTCACTTCTAACCTTCTGGAACCCGCCCACCACTGCCAAGCTCACTATTGAATCCACGCCGTTCAATGTCGCAGAGGGGAAGGAGGTGCTTCTACTTGTCCACAATCTGCCCCAGCATCTTTTTGGCTACAGCTGGTACAAAGGTGAAAGAGTGGATGGCAACCGTCAAATTATAGGATATGTAATAGGAACTCAACAAGCTACCCCAGGGCCCGCATACAGTGGTCGAGAGATAATATACCCCAATGCATCCCTGCTGATCCAGAACATCATCCAGAATGACACAGGATTCTACACCCTACACGTCATAAAGTCAGATCTTGTGAATGAAGAAGCAACTGGCCAGTTCCGGGTATACCCGGAGCTGCCCAAGCCCTCCATCTCCAGCAACAACTCCAAACCCGTGGAGGACAAGGATGCTGTGGCCTTCACCTGTGAACCTGAGACTCAGGACGCAACCTACCTGTGGTGGGTAAACAATCAGAGCCTCCCGGTCAGTCCCAGGCTGCAGCTGTCCAATGGCAACAGGACCCTCACTCTATTCAATGTCACAAGAAATGACACAGCAAGCTACAAATGTGAAACCCAGAACCCAGTGAGTGCCAGGCGCAGTGATTCAGTCATCCTGAATGTCCTCTATGGCCCGGATGCCCCCACCATTTCCCCTCTAAACACATCTTACAGATCAGGGGAAAATCTGAACCTCTCCTGCCACGCAGCCTCTAACCCACCTGCACAGTACTCTTGGTTTGTCAATGGGACTTTCCAGCAATCCACCCAAGAGCTCTTTATCCCCAACATCACTGTGAATAATAGTGGATCCTATACGTGCCAAGCCCATAACTCAGACACTGGCCTCAATAGGACCACAGTCACGACGATCACAGTCTATGCAGAGCCACCCAAACCCTTCATCACCAGCAACAACTCCAACCCCGTGGAGGATGAGGATGCTGTAGCCTTAACCTGTGAACCTGAGATTCAGAACACAACCTACCTGTGGTGGGTAAATAATCAGAGCCTCCCGGTCAGTCCCAGGCTGCAGCTGTCCAATGACAACAGGACCCTCACTCTACTCAGTGTCACAAGGAATGATGTAGGACCCTATGAGTGTGGAATCCAGAACGAATTAAGTGTTGACCACAGCGACCCAGTCATCCTGAATGTCCTCTATGGCCCAGACGACCCCACCATTTCCCCCTCATACACCTATTACCGTCCAGGGGTGAACCTCAGCCTCTCCTGCCATGCAGCCTCTAACCCACCTGCACAGTATTCTTGGCTGATTGATGGGAACATCCAGCAACACACACAAGAGCTCTTTATCTCCAACATCACTGAGAAGAACAGCGGACTCTATACCTGCCAGGCCAATAACTCAGCCAGTGGCCACAGCAGGACTACAGTCAAGACAATCACAGTCTCTGCGGAGCTGCCCAAGCCCTCCATCTCCAGCAACAACTCCAAACCCGTGGAGGACAAGGATGCTGTGGCCTTCACCTGTGAACCTGAGGCTCAGAACACAACCTACCTGTGGTGGGTAAATGGTCAGAGCCTCCCAGTCAGTCCCAGGCTGCAGCTGTCCAATGGCAACAGGACCCTCACTCTATTCAATGTCACAAGAAATGACGCAAGAGCCTATGTATGTGGAATCCAGAACTCAGTGAGTGCAAACCGCAGTGACCCAGTCACCCTGGATGTCCTCTATGGGCCGGACACCCCCATCATTTCCCCCCCAGACTCGTCTTACCTTTCGGGAGCGAACCTCAACCTCTCCTGCCACTCGGCCTCTAACCCATCCCCGCAGTATTCTTGGCGTATCAATGGGATACCGCAGCAACACACACAAGTTCTCTTTATCGCCAAAATCACGCCAAATAATAACGGGACCTATGCCTGTTTTGTCTCTAACTTGGCTACTGGCCGCAATAATTCCATAGTCAAGAGCATCACAGTCTCTGCATCTGGAACTTCTCCTGGTCTCTCAGCTGGGGCCACTGTCGGCATCATGATTGGAGTGCTGGTTGGGGTTGCTCTGATATAGCAGCCCTGGTGTAGTTTCTTCATTTCAGGAAGACTGACAGTTGTTTTGCTTCTTCCTTAAAGCATTTGCAACAGCTACAGTCTAAAATTGCTTCTTTACCAAGGATATTTACAGAAAAGACTCTGACCAGAGATCGAGACCATCCTAGCCAACATCGTGAAACCCCATCTCTACTAAAAATACAAAAATGAGCTGGGCTTGGTGGCGCGCACCTGTAGTCCCAGTTACTCGGGAGGCTGAGGCAGGAGAATCGCTTGAACCCGGGAGGTGGAGATTGCAGTGAGCCCAGATCGCACCACTGCACTCCAGTCTGGCAACAGAGCAAGACTCCATCTCAAAAAGAAAAGAAAAGAAGACTCTGACCTGTACTCTTGAATACAAGTTTCTGATACCACTGCACTGTCTGAGAATTTCCAAAACTTTAATGAACTAACTGACAGCTTCATGAAACTGTCCACCAAGATCAAGCAGAGAAAATAATTAATTTCATGGGACTAAATGAACTAATGAGGATTGCTGATTCTTTAAATGTCTTGTTTCCCAGATTTCAGGAAACTTTTTTTCTTTTAAGCTATCCACTCTTACAGCAATTTGATAAAATATACTTTTGTGAACAAAAATTGAGACATTTACATTTTCTCCCTATGTGGTCGCTCCAGACTTGGGAAACTATTCATGAATATTTATATTGTATGGTAATATAGTTATTGCACAAGTTCAATAAAAATCTGCTCTTTGTATAACAGAAAAA SEQ ID NO103基質金屬蛋白酶2>gi|113426651ref|NM_004530.1|人類基質金屬蛋白酶2(明膠酶A,72kDa明膠酶,72kDa IV型膠原酶)(MMP2),mRNA|qPCR正向引物匹配[1713..1732]|qPCR反向引物匹配[1793..1775]|qPCR探針匹配[1751..1773]TGTTTCCGCTGCATCCAGACTTCCTCAGGCGGTGGCTGGAGGCTGCGCATCTGGGGCTTTAAACATACAAAGGGATTGCCAGGACCTGCGGCGGCGGCGGCGGCGGCGGGGGCTGGGGCGCGGGGGCCGGACCATGAGCCGCTGAGCCGGGCAAACCCCAGGCCACCGAGCCAGCGGACCCTCGGAGCGCAGCCCTGCGCCGCGGACCAGGCTCCAACCAGGCGGCGAGGCGGCCACACGCACCGAGCCAGCGACCCCCGGGCGACGCGCGGGGCCAGGGAGCGCTACGATGGAGGCGCTAATGGCCCGGGGCGCGCTCACGGGTCCCCTGAGGGCGCTCTGTCTCCTGGGCTGCCTGCTGAGCCACGCCGCCGCCGCGCCGTCGCCCATCATCAAGTTCCCCGGCGATGTCGCCCCCAAAACGGACAAAGAGTTGGCAGTGCAATACCTGAACACCTTCTATGGCTGCCCCAAGGAGAGCTGCAACCTGTTTGTGCTGAAGGACACACTAAAGAAGATGCAGAAGTTCTTTGGACTGCCCCAGACAGGTGATCTTGACCAGAATACCATCGAGACCATGCGGAAGCCACGCTGCGGCAACCCAGATGTGGCCAACTACAACTTCTTCCCTCGCAAGCCCAAGTGGGACAAGAACCAGATCACATACAGGATCATTGGCTACACACCTGATCTGGACCCAGAGACAGTGGATGATGCCTTTGCTCGTGCCTTCCAAGTCTGGAGCGATGTGACCCCACTGCGGTTTTCTCGAATCCATGATGGAGAGGCAGACATCATGATCAACTTTGGCCGCTGGGAGCATGGCGATGGATACCCCTTTGACGGTAAGGACGGACTCCTGGCTCATGCCTTCGCCCCAGGCACTGGTGTTGGGGGAGACTCCCATTTTGATGACGATGAGCTATGGACCTTGGGAGAAGGCCAAGTGGTCCGTGTGAAGTATGGCAACGCCGATGGGGAGTACTGCAAGTTCCCCTTCTTGTTCAATGGCAAGGAGTACAACAGCTGCACTGATACTGGCCGCAGCGATGGCTTCCTCTGGTGCTCCACCACCTACAACTTTGAGAAGGATGGCAAGTACGGCTTCTGTCCCCATGAAGCCCTGTTCACCATGGGCGGCAACGCTGAAGGACAGCCCTGCAAGTTTCCATTCCGCTTCCAGGGCACATCCTATGACAGCTGCACCACTGAGGGCCGCACGGATGGCTACCGCTGGTGCGGCACCACTGAGGACTACGACCGCGACAAGAAGTATGGCTTCTGCCCTGAGACCGCCATGTCCACTGTTGGTGGGAACTCAGAAGGTGCCCCCTGTGTCTTCCCCTTCACTTTCCTGGGCAACAAATATGAGAGCTGCACCAGCGCCGGCCGCAGTGACGGAAAGATGTGGTGTGCGACCACAGCCAACTACGATGACGACCGCAAGTGGGGCTTCTGCCCTGACCAAGGGTACAGCCTGTTCCTCGTGGCAGCCCACGAGTTTGGCCACGCCATGGGGCTGGAGCACTCCCAAGACCCTGGGGCCCTGATGGCACCCATTTACACCTACACCAAGAACTTCCGTCTGTCCCAGGATGACATCAAGGGCATTCAGGAGCTCTATGGGGCCTCTCCTGACATTGACCTTGGCACCGGCCCCACCCCCACACTGGGCCCTGTCACTCCTGAGATCTGCAAACAGGACATTGTATTTGATGGCATCGCTCAGATCCGTGGTGAGATCTTCTTCTTCAAGGACCGGTTCATTTGGCGGACTGTGACGCCACGTGACAAGCCCATGGGGCCCCTGCTGGTGGCCACATTCTGGCCTGAGCTCCCGGAAAAGATTGATGCGGTATACGAGGCCCCACAGGAGGAGAAGGCTGTGTTCTTTGCAGGGAATGAATACTGGATCTACTCAGCCAGCACCCTGGAGCGAGGGTACCCCAAGCCACTGACCAGCCTGGGACTGCCCCCTGATGTCCAGCGAGTGGATGCCGCCTTTAACTGGAGCAAAAACAAGAAGACATACATCTTTGCTGGAGACAAATTCTGGAGATACAATGAGGTGAAGAAGAAAATGGATCCTGGCTTTCCCAAGCTCATCGCAGATGCCTGGAATGCCATCCCCGATAACCTGGATGCCGTCGTGGACCTGCAGGGCGGCGGTCACAGCTACTTCTTCAAGGGTGCCTATTACCTGAAGCTGGAGAACCAAAGTCTGAAGAGCGTGAAGTTTGGAAGCATCAAATCCGACTGGCTAGGCTGCTGAGCTGGCCCTGGCTCCCACAGGCCCTTCCTCTCCACTGCCTTCGATACACCGGGCCTGGAGAACTAGAGAAGGACCCGGAGGGGCCTGGCAGCCGTGCCTTCAGCTCTACAGCTAATCAGCATTCTCACTCCTACCTGGTAATTTAAGATTCCAGAGAGTGGCTCCTCCCGGTGCCCAAGAATAGATGCTGACTGTACTCCTCCCAGGCGCCCCTTCCCCCTCCAATCCCACCAACCCTCAGAGCCACCCCTAAAGAGATCCTTTGATATTTTCAACGCAGCCCTGCTTTGGGCTGCCCTGGTGCTGCCACACTTCAGGCTCTTCTCCTTTCACAACCTTCTGTGGCTCACAGAACCCTTGGAGCCAATGGAGACTGTCTCAAGAGGGCACTGGTGGCCCGACAGCCTGGCACAGGGCAGTGGGACAGGGCATGGCCAGGTGGCCACTCCAGACCCCTGGCTTTTCACTGCTGGCTGCCTTAGAACCTTTCTTACATTAGCAGTTTGCTTTGTATGCACTTTGTTTTTTTCTTTGGGTCTTGTTTTTTTTTTCCACTTAGAAATTGCATTTCCTGACAGAAGGACTCAGGTTGTCTGAAGTCACTGCACAGTGCATCTCAGCCCACATAGTGATGGTTCCCCTGTTCACTCTACTTAGCATGTCCCTACCGAGTCTCTTCTCCACTGGATGGAGGAAAACCAAGCCGTGGCTTCCCGCTCAGCCCTCCCTGCCCCTCCTTCAACCATTCCCCATGGGAAATGTCAACAAGTATGAATAAAGACACCTACTGAGTGGC SEQ ID NO104前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin類型5>gi|20336245|ref|NM_006200.2|人類前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin類型5(PCSK5),mRNA|qPCR正向引物匹配[2677..2697]|qPCR反向引物匹配[2821..2801]|qPCR探針匹配[2737..2765]CGGAGGGAGCGCTGGGAGCGAGCAAGCGAGCGTTTGGAGCCCGGGCCAGCAGAGGGGGCGCCCGGTCGCTGCCTGTACCGCTCCCGCTGGTCATCTCCGCCGCGCTCGGGGGCCCCGGGAGGAGCGAGACCGAGTCGGAGAGTCCGGGAGCCAAGCCGGGCGAAACCCAACTGCGGAGGACGCCCGCCCCACTCAGCCTCCTCCTGCGTCCGAGCCGGGGAGCATCGCCGAGCGCCCCACGGGCCGGAGAGCTGGGAGCACAGGTCCCGGCAGCCCCAGGGATGGTCTAGGAGCCGGCGTAAGGCTCGCTGCTCTGCTCCCTGCCGGGGCTAGCCGCCTCCTGCCGATCGCCCGGGGCTGCGAGCTGCGGCGGCCCGGGGCTGCTCGCCGGGCGGCGCAGGCCGGAGAAGTTAGTTGTGCGCGCCCTTAGTGCGCGGAACCAGCCAGCGAGCGAGGGAGCAGCGAGGCGCCGGGACCATGGGCTGGGGGAGCCGCTGCTGCTGCCCGGGACGTTTGGACCTGCTGTGCGTGCTGGCGCTGCTCGGGGGCTGCCTGCTCCCCGTGTGTCGGACGCGCGTCTACACCAACCACTGGGCAGTCAAAATCGCCGGGGGCTTCCCGGAGGCCAACCGTATCGCCAGCAAGTACGGATTCATCAACATAGGACAGATAGGGGCCCTGAAGGACTACTACCACTTCTACCATAGCAGGACGATTAAAAGGTCAGTTATCTCGAGCAGAGGGACCCACAGTTTCATTTCAATGGAACCAAAGGTGGAATGGATCCAACAGCAAGTGGTAAAAAAGCGGACAAAGAGGGATTATGACTTCAGTCGTGCCCAGTCTACCTATTTCAATGATCCCAAGTGGCCCAGCATGTGGTATATGCACTGCAGTGACAATACACATCCCTGCCAGTCTGACATGAATATCGAAGGAGCCTGGAAGAGAGGCTACACGGGAAAGAACATTGTGGTCACTATCCTGGATGACGGAATTGAGAGAACCCATCCAGATCTGATGCAAAACTACGATGCTCTGGCAAGTTGCGACGTGAATGGGAATGACTTGGACCCAATGCCTCGTTATGATGCAAGCAACGAGAACAAGCATGGGACTCGCTGTGCTGGAGAAGTGGCAGCCGCTGCAAACAATTCGCACTGCACAGTCGGAATTGCTTTCAACGCCAAGATCGGAGGAGTGCGAATGCTGGACGGAGATGTCACGGACATGGTTGAAGCAAAATCAGTTAGCTTCAACCCCCAGCACGTGCACATTTACAGCGCCAGCTGGGGCCCGGATGATGATGGCAAGACTGTGGACGGACCAGCCCCCCTCACCCGGCAAGCCTTTGAAAACGGCGTTAGAATGGGGCGGAGAGGCCTCGGCTCTGTGTTTGTTTGGGCATCTGGAAATGGTGGAAGGAGCAAAGACCACTGCTCCTGTGATGGCTACACCAACAGCATCTACACCATCTCCATCAGCAGCACTGCAGAAAGCGGAAAGAAACCTTGGTACCTGGAAGAGTGTTCATCCACGCTGGCCACAACCTACAGCAGCGGGGAGTCCTACGATAAGAAAATCATCACTACAGATCTGAGGCAGCGTTGCACGGACAACCACACTGGGACGTCAGCCTCAGCCCCCATGGCTGCAGGCATCATTGCGCTGGCCCTGGAAGCCAATCCGTTTCTGACCTGGAGAGACGTACAGCATGTTATTGTCAGGACTTCCCGTGCGGGACATTTGAACGCTAATGACTGGAAAACCAATGCTGCTGGTTTTAAGGTGAGCCATCTTTATGGATTTGGACTGATGGACGCAGAAGCCATGGTGATGGAGGCAGAGAAGTGGACCACCGTTCCCCGGCAGCACGTGTGTGTGGAGAGCACAGACCGACAAATCAAGACAATCCGCCCTAACAGTGCAGTGCGCTCCATCTACAAAGCTTCAGGCTGCTCGGATAACCCCAACCGCCATGTCAACTACCTGGAGCACGTCGTTGTGCGCATCACCATCACCCACCCCAGGAGAGGAGACCTGGCCATCTACCTGACCTCGCCCTCTGGAACTAGGTCTCAGCTTTTGGCCAACAGGCTATTTGATCACTCCATGGAAGGATTCAAAAACTGGGAGTTCATGACCATTCATTGCTGGGGAGAAAGAGCTGCTGGTGACTGGGTCCTTGAAGTTTATGATACTCCCTCTCAGCTAAGGAACTTTAAGACTCCAGGTAAATTGAAAGAATGGTCTTTGGTCCTCTACGGCACCTCCGTGCAGCCATATTCACCAACCAATGAATTTCCGAAAGTGGAACGGTTCCGCTATAGCCGAGTTGAAGACCCCACAGACGACTATGGCACAGAGGATTATGCAGGTCCCTGCGACCCTGAGTGCAGTGAGGTTGGCTGTGACGGGCCAGGACCAGACCACTGCAATGACTGTTTGCACTACTACTACAAGCTGAAAAACAATACCAGGATCTGTGTCTCCAGCTGCCCCCCTGGCCACTACCACGCCGACAAGAAGCGCTGCAGGAAGTGTGCCCCCAACTGTGAGTCCTGCTTTGGGAGCCATGGTGACCAATGCATGTCCTGCAAATATGGATACTTTCTGAATGAAGAAACCAACAGCTGTGTTACTCACTGCCCTGATGGGTCATATCAGGATACCAAGAAAAATCTTTGCCGGAAATGCAGTGAAAACTGCAAGACATGTACTGAATTCCATAACTGTACAGAATGTAGGGATGGGTTAAGCCTGCAGGGATCCCGGTGCTCTGTCTCCTGTGAAGATGGACGGTATTTCAACGGCCAGGACTGCCAGCCCTGCCACCGCTTCTGCGCCACTTGTGCTGGGGCAGGAGCTGATGGGTGCATTAACTGCACAGAGGGCTACTTCATGGAGGATGGGAGATGCGTGCAGAGCTGTAGTATCAGCTATTACTTTGACCACTCTTCAGAGAATGGATACAAATCCTGCAAAAAATGTGATATCAGTTGTTTGACGTGCAATGGCCCAGGATTCAAGAACTGTACAAGCTGCCCTAGTGGGTATCTCTTAGACTTAGGAATGTGTCAAATGGGAGCCATTTGCAAGGATGCAACGGAAGAGTCCTGGGCGGAAGGAGGCTTCTGTATGCTTGTGAAAAAGAACAATCTGTGCCAACGGAAGGTTCTTCAACAACTTTGCTGCAAAACATGTACATTTCAAGGCTGAGCAGCCATCTTAGATTTCTTTGTTCCTGTAGACTTATAGATTATTCCATATTATTAAAAAGAAAAAAAAAAGCCAAAAAG SEQ ID NO105羧肽酶N,多肽2,83kDa>gi|18554966|ref|NM_087358.1|人類羧肽酶N,多肽2,83kDa(CPN2),mRNAATGGGTTGTGACTGCTTCGTCCAGGAGGTGTTCTGCTCAGATGAGGAGCTTGCCACCGTCCCGCTGGACATCCCGCCATATACGAAAAACATCATCTTTGTGGAGACCTCGTTCACCACATTGGAAACCAGAGCTTTTGGCAGTAACCCCAACTTGACCAAGGTGGTCTTCCTCAACACTCAGCTCTGCCAGTTTAGGCCGGATGCCTTTGGGGGGCTGCCCAGGCTGGAGGACCTGGAGGTCACAGGCAGTAGCTTCTTGAACCTCAGCACCAACATCTTCTCCAACCTGACCTCGCTGGGCAAGCTCACCCTCAACTTCAACATGCTGGAGGCTCTGCCCGAGGGTCTTTTCCAGCACCTGGCTGCCCTGGAGTCCCTCCACCTGCAGGGGAACCAGCTCCAGGCCCTGCCCAGGAGGCTCTTCCAGCCTCTGACCCATCTGAAGACACTCAACCTGGCCCAGAACCTCCTGGCCCAGCTCCCGGAGGAGCTGTTCCACCCACTCACCAGCCTGCAGACCCTGAAGCTGAGCAACAACGCGCTCTCTGGTCTCCCCCAGGGTGTGTTTGGCAAACTGGGCAGCCTGCAGGAGCTCTTCCTGGACAGCAACAACATCTCGGAGCTGCCCCCTCAGGTGTTCTCCCAGCTCTTCTGCCTAGAGAGGCTGTGGCTGCAACGCAACGCCATCACGCACCTGCCGCTCTCCATCTTTGCCTCCCTGGGTAATCTGACCTTTCTGAGCTTGCAGTGGAACATGCTTCGGGTCCTGCCTGCCGGCCTCTTTGCCCACACCCCATGCCTGGTTGGCCTGTCTCTGACCCATAACCAGCTGGAGACTGTCGCTGAGGGCACCTTTGCCCACCTGTCCAACCTGCGTTCCCTCATGCTCTCATACAATGCCATTACCCACCTCCCAGCTGGCATCTTCAGAGACCTGGAGGAGTTGGTCAAACTCTACCTGGGCAGCAACAACCTTACGGCGCTGCACCCAGCCCTCTTCCAGAACCTGTCCAAGCTGGAGCTGCTCAGCCTCTCCAAGAACCAGCTGACCACACTTCCGGAGGGCATCTTCGACACCAACTACAACCTGTTCAACCTGGCCCTGCACGGTAACCCCTGGCAGTGCGACTGCCACCTGGCCTACCTCTTCAACTGGCTGCAGCAGTACACCGATCGGCTCCTGAACATCCAGACCTACTGCGCTGGCCCTGCCTACCTCAAAGGCCAGGTGGTGCCCGCCTTGAATGAGAAGCAGCTGGTGTGTCCCGTCACCCGGGACCACTTGGGCTTCCAGGTCACGTGGCCGGACGAAAGCAAGGCAGGGGGCAGCTGGGATCTGGCTGTGCAGGAAAGGGCAGCCCGGAGCCAGTGCACCTACAGCAACCCCGAGGGCACCGTGGTGCTCGCCTGTGACCAGGCCCAGTGTCGCTGGCTGAACGTCCAGCTCTCTCCTTGGCAGGGCTCCCTGGGACTGCAGTACAATGCTAGTCAGGAGTGGGACCTGAGGTCGAGCTGCGGTTCTCTGCGGCTCACCGTGTCTATCGAGGCTCGGGCAGCAGGGCCCTAGTAGCAGCGCATACAGGAGCTGGGGAAGGGGGCTTTGGGGCCTGCCCACGCGACAGGTAGGGGCGGAGGGGAGCTGAGTCTCCGAAGCTTGGCTTTSEQ ID NO106透明質酸和蛋白聚糖連接蛋白4>gi|30794471|ref|NM_023002.1|人類透明質酸和蛋白聚糖連接蛋白4(HAPLN4),mRNACGGGGGCCGCGCGGGCAAGATGGTGTGCGCTCGGGCGGCCCTCGGTCCCGGCGCGCTCTGGGCCGCGGCCTGGGGCGTCCTGCTGCTCACAGCCCCTGCGGGGGCGCAGCGTGGCCGGAAGAAGGTCGTGCACGTGCTGGAGGGTGAGTCGGGCTCGGTAGTGGTACAGACAGCGCCTGGGCAGGTGGTAAGCCACCGTGGTGGCACCATCGTCTTGCCCTGCCGCTACCACTATGAGGCAGCCGCCCACGGTCACGACGGCGTCCGGCTCAAGTGGACAAAGGTGGTGGACCCGCTGGCCTTCACCGACGTCTTCGTGGCACTAGGCCCCCAGCACCGGGCATTCGGCAGCTACCGTGGGCGGGCTGAGCTGCAGGGCGACGGGCCTGGGGATGCCTCCCTGGTCCTCCGCAACGTCACGCTGCAAGACTACGGGCGCTATGAGTGCGAAGTCACCAATGAGCTGGAAGATGACGCTGGCATGGTCAAGCTGGACCTGGAAGGCGTGGTCTTTCCCTACCACCCCCGTGGAGGCCGATACAAGCTGACCTTCGCGGAGGCGCAGCGCGCGTGCGCCGAGCAGGACGGCATCCTGGCATCTGCAGAACAGCTGCACGCGGCCTGGCGCGACGGCCTGGACTGGTGCAACGCGGGCTGGTTGCGCGACGGCTCAGTGCAATACCCCGTGAACCGGCCCCGGGAGCCCTGCGGCGGCCTGGGGGGGACCGGGAGTGCAGGGGGCGGCGGTGATGCCAACGGGGGCCTGCGCAACTACGGGTATCGCCATAACGCCGAGGAACGCTACGACGCCTTCTGCTTCACGTCCAACCTGCCGGGGCGCGTGTTCTTCCTGAAGCCGCTGCGACCTGTACCCTTCTCCGGAGCTGCGCGCGCGTGTGCTGCGCGTGGCGCGGCCGTGGCCAAGGTGGGGCAGCTGTTCGCCGCGTGGAAGCTGCAGCTGCTAGACCGCTGCACCGCGGGTTGGCTGGCCGATGGCAGTGCGCGCTACCCCATCGTGAACCCGCGAGCGCGCTGCGGAGGCCGCAGGCCTGGTGTGCGCAGCCTCGGCTTCCCGGACGCCACCCGACGGCTCTTCGGCGTCTACTGCTACCGCGCTCCAGGAGCACCGGACCCGGCACCTGGCGGCTGGGGCTGGGGCTGGGCGGGCGGCGGCGGCTGGGCAGGGGGCGCGCGCGATCCTGCTGCCTGGACCCCTCTGCACGTCTAGGCTGGGAGTAGGCGGACAGCCAGGGCGCTTGACCACTGGTCTAGAGCCCTGTGGTCCCCTGGAGCCTGGCCACGCCCTTGAAGCCCTGGACACTGGCCACATTCCCTGTGGTCCCTTACAAACTAACTGTGCCCCTGGGGTCCCTGAAGACTGGCTAGTCCTGGCAGAACAGTACTTTGGAGTTCCCTGGAGCCTGGCCAGCCCTCACCTCTTCTGGATAGAGGATTCCCCCAACTCCCCAACTTTCTCCATGAGGGTCACGCCCCCTGAGGACCTCAGGAGGCCAGCAGAACCCGCAGGCTCCTGAAGACTGGCCACGCCTCCTGAGACCACTTGGAAACAGACCAACTGCCCCCGTGGTCGCCTGGTGGCTGGACCCCCGGGATTGACTAGAGACCGGCCGTACACCTTCTGCATCTCACTGGAGACTGAACACTAGTCCCTTGCGGTCACGTGGGACACTGGGCGCCTCCTCCTCCCCCTCCTCCTCACCTGGAGAGACTACAGGAACTTCAGGGTCACTCCCCGTGGTCACATGGAGGTTGTGGGCCGAGGCGCTTATTTTCCCTTATGGTGACCTGAGTCCTGGAGACTCCCATTCTCCCCCTCTCCCTGAGAGTCCCCTGCAGTTTCTGGGTAACAGGGCACACCCCTCTAGTTTCATGGGCGAGCACCCCCATCTGCCACCTCAGACTGACACACAGCCAGCTGGCTCACTTACTGGGGGCCACGTCCCACCCCTCAGATATTTCTTTGAAGGGAGAGCAAACCCACCCTGTCCTCTGACGTCCCTTTCCCAACTGTCACCAAACAGACCATCTTCCCAGGCCTGGGGACCGGTAAGATCCATGTCACTAGTTATGCAGAGCAGTTGCCTTGGGTCCCACTGTCACCAAGGCAACCAGTCCTGCTGCTACCTGTCACCTAGAGTCACACACCCCTTCCCTCATCAGGCACACCCATGAAGACAGTGCCTCCCTCCTCCAGCTGTAACCATGGATACCACACATTTCTCATCTCATTGGCCCCCACCCCAGAGACCTCCACCTCAACTTCTGGCTGTCCCTACCCTGACTCACCGCCATGGAGATCACCCTCCCCGAAGCTGTCGCCAGGGTGACCCAACATCCAGTTCTCCGGCTCTCACCATGGAAACAAACTGTCCCTGTCCCCAGGCCCACTCCAGTTCCAGACCACCCTCCATGCTCCACCCCCAGGCGGTTTGGACCCCACCACTGTTGCCATGGTGACCAAACTCTGGAGTCCGAGGTAACAGAACACCTGTCCCCCTAGGCTTTTCCTTGTGGACAACGGGGCCCTGTTCACCAAGCTGTTGCCATAGAGACTGTCAACGTTGTCCTCATGACAACCAGACTTCCAGTTCTCAGGAACTTCTCATTGTGGGCCAGAAGTCCTGGGTGCCTCCTACTAGGGCTACCCTACTGCACCCCATCAGGGGCCTGATGGCTGCCCCTTCCCCAGACAGGGCTGGACTTCTGGAGCTGCTAAGCCACCCTCCGTTTGCACGTTAACTCTATGCCGGATAGCAGCTGTGCACGAGACAATCTTGCAACACCCGGGCATGTTTGTCGTCGTCCTACAAATGAGGAAACCGAGCCTATGGCGTGCCCTGGTCTGTTGAGATATGCAAGCACTGAGCTCCTCTTTTGTCCTCTGAGACCCCATCTCCATTCTCACCCAGTTCCTCTCTCCTTCCCTGACCCCCACCCACATTTCCCTCCTTAGAGATCCAGGAGGGATGGAATGTTCTTTAAAATTCAACACCCACCAGGCTCTAAGCGGCGATCTGTGCTAAGAGGTCAGGACCCAGCCGAAGTCCTCGGCGTTGACAGGCAGCTGGGGGGACATGATCCATGGACAAGGCCATCCCGGCCGTGGGAGACCCCAGTCCCGAAGTCTTGCCTGCAGGAGTACTGGGGTCCCCCTGGGGCCCTCTTTACTGTCACGTCATCTCTAGGAAACCTATCTCTGAGTTTTGGGACCAGGTCGGTTTGGGTTTGAATTCTGCCTCTTCTTGCTCACTGTGTGACCAAGTGACAAACTCCTTCTGAACCTGTGTTCTCCCACTGTACCAGGGCTGTTCTGTGGTCCCCGTGAGTGCCAAGCATACAGTAGGGGCTCAATAAATCCTTGTSEQ ID NO107免疫組織化學從組織塊切下8μM厚的冰凍切片並粘貼於APES玻片上。將組織切片放入丙酮中固定10分鐘後空氣乾燥。然後玻片在含有0.3%過氧化氫的甲醇中浸潤10分鐘,再用磷酸緩衝鹽溶液(PBS)衝洗。通過用20%的適當動物血清孵育玻片來封閉非特異性結合位點,再次用PBS衝洗。用含有1%血清的PBS稀釋初級抗體,然後滴加到玻片上。孵育1小時後,再次用PBS衝洗玻片,然後用次級抗體再孵育1小時。PBS最後衝洗之後,使用溶解於Tris緩衝鹽溶液(TBS)的二氨基聯苯胺四鹽酸鹽檢測次級抗體,再用TBS和水衝洗。然後玻片經蘇木素復染,並置於光學顯微鏡下觀察。
在某些實施方案中,可以使用基於本發明癌症標記物的染色對胃腫瘤進行原位(in situ)定位。至少一種標記物可形成澱粉樣結構從而能用剛果紅或等效的、非特異性的澱粉樣蛋白染色劑進行顯色。
體液中胃癌標記物的檢測在幾個實施方案中,可以對從血液、血漿、血清、諸如使用腹膜灌洗獲得的腹膜液或其它體液如尿液、淋巴液、腦脊液、胃液或者糞便樣品中獲得的樣品如願地進行GTM分析。
一般而言,用於分析這些液體中的寡核苷酸、蛋白質和肽的方法是本領域技術中已知的。寡核苷酸的檢測可以採用雜交方法如Northern印跡、Southern印跡或微陣列方法或者qPCR進行。檢測蛋白質的方法包括例如酶聯免疫吸附測定(ELISA)、具有抗體的蛋白質晶片、懸浮珠放射免疫測定(RIA)、Western印跡和凝集素結合試驗。然而,為了說明的目的,可以使用夾心法酶聯免疫吸附測定(ELISA)對液體中GTM水平進行定量檢測。對於血漿分析,在微量滴定板的孔中加入5μL的適當稀釋樣品的等分試樣或連續稀釋的標準GTM和75μL結合有過氧化物酶的抗人GTM抗體。30℃孵育30分鐘之後,用含0.05%Tween 20的磷酸緩衝鹽溶液(PBS)洗滌各孔以除去未結合的抗體。然後,將GTM和抗GTM抗體的結合複合物用含有H2O2的鄰苯二胺於30℃孵育15分鐘。加入1MH2SO4終止反應,並用微量滴定板讀板機測定492nm處的吸光度。
應該意識到,抗GTM抗體可以是單克隆抗體或者多克隆抗血清。還應該意識到,任何其它的體液能夠進行適當的研究。
已知一些標記物存在於血漿或血清中。這些標記物包括骨橋蛋白(Hotte等人,Cancer 95(3)507-510(2002))、前列腺特異性抗原(Martin等人,Prostate Cancer Prostatic Dis.(2004年3月9日)(Pub Med NoPMID15007379))、甲狀腺球蛋白(Hall等人,Laryngoscope 113(1)77-81(2003);Mazzaferri等人,J.Clin.Endocrinol.Metab.88(4)1433-14421(2003))、基質金屬蛋白酶2和9(Kuo等人,Clin.Chem.Acta.294(1-2)157-168(2000))、CEA和TIMP1(Pellegrini等人,Cancer Immunol.Immunother.49(7)388-394(2000))。因此,由於上述標記物中的一些對於GTM也是有用的標記物,所以對它們進行檢測和定量的血漿、血清或其它體液分析法早已經是可得的。因為許多蛋白質或者是(1)由細胞分泌、或者是(2)從細胞膜脫落、或者是(3)處於細胞死亡的細胞丟失的,所以其它GTM也可存在於體液如血漿、血清等中。因此,在本發明的實施方案中,對方便獲得的樣品進行GTM檢測是有用且合意的,並能作為胃癌診斷的基礎。
Western分析使用TriReagent和鹽酸胍提取法從胃組織中抽提出蛋白質。從TriReagent提取RNA獲得的非水相與1.5倍體積乙醇混合併離心去除DNA和OCT介質。將0.5mL上清液與0.75mL異丙醇混合,室溫孵育10分鐘,然後離心。沉澱物用1mL含0.3M鹽酸胍的95%乙醇洗滌3次,再單用乙醇洗滌1次,然後重懸於50μL的1%SDS中。
採用標準方法,將蛋白質定量並進行SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳。簡言之,按照標準方法學使用BioRad(trans-biot電轉槽)將分離的蛋白質轉移至PVDF膜上。然後用含有脫脂奶粉的溶液封閉30分鐘,再用初級抗體室溫孵育2小時。洗滌之後,加次級抗體室溫孵育1小時。最後一次洗滌之後,用ECL檢測系統(Amersham Biosciences)顯色所結合抗體。
通過用已知方法準備血清樣品,然後或者使用寡核苷酸探針或者使用抗目的蛋白質的抗體對血清樣品進行分析,從而完成血清中標記物的檢測。包括Western印跡分析在內的免疫印跡對於確定備選表達的蛋白質在血清中是否存在是特別有用的。另外,包括腹膜液、腦脊液等在內的其它體液中可能包含標記物。有用的標記物沒有必要是生理學意義上被分泌的。相反地,標記物蛋白質或基因進入血清的任何機制都能有效產生可檢測的、可量化水平的標記物。因此,可溶性蛋白質從細胞中正常分泌、膜蛋白從質膜脫落、可變剪接形式的mRNA或從其表達的蛋白質的分泌、細胞死亡(或者凋亡細胞)能夠產生足夠水平的有用標記物。對於血清標記物作為多種癌症類型的診斷和/或治療效果評價工具的用途得到越來越多的支持。
Yoshikawa等人(Cancer Letters,15181-86(2000))描述了胃癌患者血漿中的基質金屬蛋白酶組織抑制劑1。
Rudland等人(Cancer Research 623417-3427(2002))描述了作為人乳腺癌轉移相關蛋白的骨橋蛋白。
Buckhaults等人(Cancer Research 616996-7001(2002))描述了結腸直腸腫瘤中的某些分泌的和細胞表面表達的基因。
Kim等人(JAMA 287(13)1671-1679(2002))描述了作為潛在的卵巢癌診斷生物標記物的骨橋蛋白。
Hotte等人(AJ.American Cancer Society 95(3)507-512(2002))描述了作為人體液中可檢測蛋白質以及與某些惡性腫瘤相關的骨橋蛋白。
Martin等人(Prostate Cancer Prostatic Dis.2004年3月9日(PMID15007379))(摘要)描述了人激肽釋放酶2、前列腺特異性抗原(PSA)和游離PSA作為檢測前列腺癌的標記物的用途。
Hall等人(Laryngoscope 113(1)77-81(2003)(PMID12679418))(摘要)描述了甲狀腺癌患者血清甲狀腺球蛋白的預測值。
Mazzaferri等人(J.Clin.Endocrinol.Metab.88(4)1433-1441(2003))(摘要)描述了作為甲狀腺癌患者潛在監測方法的甲狀腺球蛋白。
Whitley等人(Clin.Lab.Med.24(1)29-47(2004))(摘要)描述了作為甲狀腺癌血清標記物的甲狀腺球蛋白。
Kuo等人(Clin.Chim.Acta.294(1-2)157-168(2000))(摘要)描述了HCV和HBV感染患者的血清基質金屬蛋白酶2和9。
Koopman等人(Cancer Epidemiol.Biomarkers Prev 13(3)487-491(2004))(摘要)描述了作為胰腺癌生物標記物的骨橋蛋白。
Pellegrini等人(Cancer Immunol.Immunother.49(7)388-394(2000))(摘要)描述了作為侵襲前結腸直腸癌標記物的可溶性癌胚抗原和TIMP1的測定。
因此,我們已經鑑定了對於研發檢測和評價胃癌的試劑、裝置和試劑盒有用的許多基因和/或蛋白質。可以單獨或聯合使用一種或多種胃癌標記物以便提供用於胃癌檢測的可靠分子檢驗。
實施例本文描述的實施例其目的是為說明本發明的實施方案。其它的實施方案、方法和分析類型處於分子診斷技術領域中普通技術人員所掌握的範圍內,從而不必在此詳細描述。可以將本技術領域範圍內的其它實施方案看作是本發明的一部分。
實施例1胃惡性腫瘤標記物的鑑定圖2描述了使用經上述標準所選擇的38種胃腫瘤標記物進行研究的結果列表。圖2包括基因的符號(「符號」)、MWG oligo號、NCBI mRNA參考序列號、蛋白質參考序列號、腫瘤和非腫瘤基因表達之間的變化倍數、在微陣列分析中相對於其它基因的變化倍數的等級、原始未調整的Student′s t-檢驗結果、經Bonferroni調整的p值結果和兩個樣品的Wilcoxon檢驗結果。
這34種基因的中值變化倍數(腫瘤組織非惡性腫瘤組織)範圍是1.6-7,並且變化倍數等級的中值變化範圍為-16,995-25,783。變化倍數秩中最大的可能變化是-29,718。對於每一種顯示的標記物,它們作為癌症標記物的特異性具有極其高的統計學意義。一般來說,Bonferroni調整的p值全部低於10-6或更低,這提示使用這些標記物進行的診斷與胃癌的相關性非常高。
三種半胱氨酸蛋白酶抑制劑(CST1、CST2和CST4)高度同源並且在微陣列上為同一寡核苷酸,除非另外說明,將它們集體稱作「CST1,2,4」。
通過使用SMART軟體包(歐洲分子生物實驗室)預測,圖2中描述的所有蛋白質均具有信號肽。已知信號肽能引導合成的蛋白質到達細胞外區室,因而分泌至組織液,其可以從組織液進入血液。事實上,本發明的一些蛋白質已經在血清中檢測到。
圖2中描述的每一種基因顯示了強度等級大於陣列中對應於CEA的2個寡核苷核的變化,CEA為在監控胃癌進展的的臨床實踐中最常用的標記物。
實施例2qPCR分析對於圖3中顯示的基因亞類,使用qPCR獲得基因表達的更加靈敏和精確的定量。在從46份腫瘤樣品和49非惡性腫瘤樣品得到的RNA中分析了通過微陣列分析(圖2)鑑定的23個基因,結果見圖3。圖3包括基因符號、在癌組織和正常組織之間的變化倍數中值,以及表達高於非腫瘤樣品中表達水平第95百分位數的腫瘤樣品的百分比(%)。由於高(>75%)的正常細胞汙染、高程度的壞死(>40%)或者在微陣列上雜交信號較差,將12份腫瘤樣品和9份正常樣品排除在外,不進行分析。這23個基因的倍數變化中值範圍從3倍至525倍(圖3)。
對於≥90%的情況,基因ASPN、CST1,2,4、LOXL2、TIMP1、SPP1、SFRP4、INHBA、THBS2和SPARC在腫瘤中表達水平高於在非惡性腫瘤中表達範圍的第95百分位數(圖3)。對於剩餘的基因,在>50%的樣品中,其在腫瘤中的表達高於第95百分位數。每一個腫瘤中至少7個基因的過表達高於第95百分位數,這表明標記物組合將全面覆蓋所有胃腫瘤。
實施例3使用qPCR對微陣列數據的驗證使用24種基因的探針對腫瘤樣品和非惡性腫瘤樣品進行定量實時PCR(qPCR)來驗證微陣列數據。在所有研究的24種基因中,有20種基因顯示了兩種技術之間具有強烈的相關性。圖4a-4d顯示了這些分析中的四個分析,這些圖描述了使用微陣列和qPCR方法檢測四種所選癌症標記物的相對表達圖。對於圖4中的每一個圖,橫軸代表微陣列檢測基因表達的變化倍數的log2數值,而縱軸代表qPCR檢測基因表達的變化倍數的log2數值。我們發現,如由兩種方法之間的協變關系所表明,這兩種方法之間具有強烈的相關性。這種強烈的相關性提示微陣列和qPCR的變化倍數分析是檢測胃癌標記物基因表達變化的合適方法,並且因此能用作精確的、敏感的篩選方法。從圖4a-4d還可以理解qPCR比微陣列方法能更靈敏地檢測表達的變化。因此,在尤其需要早期檢測的情況下,qPCR特別有用。
圖5a-5w描述了對於正常組織(未填充直條)和腫瘤組織(黑色直條),比較一系列23種基因中每一種基因表達的觀測頻率(縱軸)和此基因表達變化倍數的log2數值(橫軸)關係的柱狀圖。我們意外發現這23種基因中的每一種基因在正常組織和腫瘤組織之間的頻率分布基本上是分離的,這如頻率分布曲線之間的低重疊程度所反映。例如,圖5b描述了CST1,2,4的結果,其中只有一份正常樣品的表達水平在腫瘤表達水平範圍內。在其它情況中(例如,圖5n;PRS11),每一個頻率分布曲線相對狹窄並有一定程度的重疊。然而,甚至對於此標記物,變化倍數log2數值的中值顯示基因表達量間基本上是分離的。在其它情況中(例如,圖5a;ASPN),儘管頻率分布曲線有些重疊,但在正常樣品和腫瘤樣品之間的表達倍數log2數值中值明顯分離。
圖6描述了與正常樣品相比,腫瘤樣品中顯示表達明顯增加(「過表達」)的基因數量(縱軸)和各個測試樣品之間關係的柱狀圖。在每一情況中,腫瘤樣品表現為的多重基因表達水平升高。在E123樣品中,表達升高的基因數量最低,為7個基因。此發現說明,在多重基因相對正常組織過表達的情況下,癌症檢測的可靠性非常高,從而使癌症診斷更加確定。然而,在一些情況中,單一標記物基因的表達升高足以對癌症做出診斷。
對於與血清標記物CEA(當前最常用於胃癌檢測)的先前比較是基於腫瘤樣品和正常樣品之間微陣列數據強度等級的差別。使用標記物和CEA的qPCR數據驗證該比較。
圖7a-7c描述了與腫瘤標記物基因CEA的表達相比,在各個腫瘤樣品和非惡性腫瘤樣品中標記物的相對log2表達(與參考RNA製品相比)圖。CEA是當前最常用的監測胃癌進展的血清標記物。零點定義為每一種標記物的正常表達中值。可以看到CEA基因(CEACAM5)的表達在腫瘤樣品和正常樣品之間具有廣泛重疊。而在胃癌標記物ASPN、CSPG2、CST1,2,4、IGFBP7、INHBA、LOXL2、LUM、SFRP4、SPARC、SPP1、THBS2、TIMP1、adlican、LEPRE1和EFEMP2中該種重疊明顯減少。對於圖7b-7c中的其它標記物ASAH1、SFRP2、GGH、MMP12、KLK10、TG、PRSS11和TGFBI,在腫瘤組織中表達範圍和非惡性腫瘤組織中表達範圍之間的重疊大於上述標記物的表達重疊情況,但仍然低於CEA的表達重疊情況,這說明本文描述的所有新標記物在定量上好於CEA,因此能提供更加可靠的診斷。
為了把不同組織處理的影響減到最低,使用來自同一患者的腫瘤組織和非惡性腫瘤組織樣品的qPCR數據來計算腫瘤正常(非惡性腫瘤)變化倍數。這樣的配對分析校正了基因在不同個體表達的背景水平的差異,並將組織處理對RNA定量的影響降到最低。例如,如果將切除的胃在室溫下放置1小時,則正常樣品和腫瘤樣品中轉錄物的降解程度相同。
圖8總結了通過qPCR測定的標記物的T:N表達水平,但是使用了來自同一個體的配對數據(即腫瘤樣品和非惡性腫瘤樣品)。圖8還包括了圖3中未包括的六種基因的表達數據。這些額外研究基因是MMP2、CGR11、TGFB1、PCSK5、SERPINB5和SERPINH1。鑑定信息和探針顯示於圖1和圖2。圖8顯示了29種胃癌標記物在這些40位患者「配對」樣品中的T:N變化倍數中值和T:N變化倍數最大值。在29種標記物中有27種標記物T:N變化倍數中值大於或等於在先技術標記物CEA的T:N變化倍數中值。全部29種標記物具有較高的、在腫瘤樣品中的表達超過正常樣品中的表達的配對樣品百分比。
圖9a-9d描述了來自同一個體腫瘤組織和正常組織的數據的散點圖。每一個點代表了標記物在患者腫瘤組織中表達相對於在非腫瘤組織中表達的變化倍數。所有研究的標記物均比CEA具有更好的區別腫瘤組織和非腫瘤組織的能力。CST1,2,4、ASPN和SFRP4三種標記物能夠對配對的腫瘤和正常樣品進行100%的區別。即這些標記物在每一個腫瘤組織中的表達高於來自同一個體的相應非腫瘤組織。在其它許多標記物中,例如Adlican、CSPG2、EFEMP2、IGFBP7、INHBA、LOXL2、LUM、SERPINH1、SPARC、SPP1、TGFbI、THBS2和TIMP1,每一種標記物在腫瘤組織中的表達低於非腫瘤組織的個別點僅有2個或3個。因此,對於這些標記物而言,在任何一組配對腫瘤組織和非腫瘤組織中可能產生假陰性的可能性相對低(例如,40份中有3份為陰性或7.5%的假陰性,40份中有2份為陰性或5%的假陰性,40份中有1份為陰性或2.5%的假陰性)。因此,即使使用上面剛剛列舉的其它標記物,使用來自同一患者的多個樣品也能產生可靠的診斷信息。
上文顯示了這些標記物的基因序列,以及用來檢測它們的引物和探針的位置。
為了確定標記物基因過表達是否不依賴於胃腫瘤的分期,將配對T:N變化倍數的log2數值對腫瘤分期作圖(圖10a-10ad)。觀察發現,對於圖8中列舉的26種標記物在腫瘤中的表達不具有腫瘤分期依賴性。這些標記物在腫瘤早期和腫瘤晚期的過表達情況類似。然而,KLK10在腫瘤1期和2期的過表達更一致,而PCSK5和SERPINB5在腫瘤4期的過表達更一致。因此KLK10、PCSK5和SERPINB5能用於確定胃腫瘤的時期。
在類似的分析中,將配對T:N變化倍數的log2數值對腫瘤Lauren分類(或者為擴散型或者為腸型)作圖。圖11a-11ab顯示不管腫瘤類型是腸型(I)或是擴散型(D),29種GTM中的每一個能夠區別腫瘤組織和非腫瘤組織。
實施例4多重標記物的使用如上面所描述,某些標記物表現出具有在100%的樣品中區別腫瘤組織和非腫瘤組織的能力。可以將同為上述的其它標記物組合使用,以便實現非常高程度地區分腫瘤組織和非腫瘤組織。圖12描述了三種標記物SERPINH1、CST1,2,4和INHBA表達的三維圖,其表示為在一系列胃腫瘤樣品和非惡性腫瘤胃樣品中T:N變化倍數的log2數值。兩組樣品發生完全分離。
通過總結於圖13的統計學分析進一步說明了使用標記物的組合成功區別腫瘤樣品和非腫瘤樣品的可靠性。此分析比較了使用qPCR產生的來自配對的腫瘤和非惡性腫瘤樣品基因表達數據的正態分布,分析顯示增加用來區別腫瘤樣品和非惡性腫瘤樣品的標記物數量對檢測敏感性(將特異性固定在95%)的影響。儘管此分析中29種標記物(如圖8所示)在單獨應用時很少具有大於90%、95%或99%的敏感性,但是兩種或三種標記物的組合能夠達到使用大量組合所能達到的高敏感性。例如,三種標記物的50種組合能以≥99%的敏感性和≥95%的特異性區別腫瘤樣品和非惡性腫瘤樣品。
實施例5胃腫瘤標記物蛋白質的檢測在更進一步的實施方案中,GTM蛋白質可以作為診斷的基礎來檢測。在某些情況下,特殊樣品(如不含細胞的樣品)中的mRNA濃度很難使用微陣列或qPCR方法來檢測基因表達的提高。因此,在某些實施方案中,使用抗完整蛋白質、蛋白質片段(肽)或蛋白質核心的抗體實現GTM蛋白質的檢測。檢測和定量蛋白質和肽表達的方法在本技術領域是已知的,並且包括依靠抗蛋白質或肽的特異性抗體的方法。單克隆抗體和多克隆抗血清的製備可以使用本技術領域眾所周知的方法進行,因而不需要在本文中進一步描述。
為了證明GTM蛋白質能用來區分腫瘤組織和非腫瘤組織,得到了商品化的抗SPARC抗體(RD Systems;目錄號AF941)、抗THBS2抗體(Santa Cruz Biotechnology Inc;目錄號sc-7655)、抗CSPG2抗體(Calbiochem;目錄號428060)和抗IGFBP7抗體(RD Systems;目錄號AF1334)。另外的抗半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN肽序列50-66(C)FAISEYNKATKDDYYRR(SEQ ID NO108)的多克隆抗體在家兔中產生。
在腫瘤胃組織和非惡性腫瘤胃組織的免疫組織化學分析或Western分析中使用這些抗體。這些標記物中的每一個在蛋白質水平顯示了強的腫瘤正常差異。這證實在RNA水平所觀察到的這些基因的高表達同樣也發生在蛋白質水平。
圖14顯示了使用抗由SPARC、CST1(半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN)、IGFBP7和THBS2所編碼蛋白質的抗體對兩份配對從腫瘤組織和非惡性腫瘤組織中提取的總蛋白進行的Western印跡分析。對於每一個標記物,在腫瘤樣品中的信號明顯高於非腫瘤樣品。
抗半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN抗體檢測到三條主要條帶,其分別對應大約34、45和65kDa的分子量。圖14顯示最低分子量條帶。該蛋白質種類大於對照半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN蛋白質,提示腫瘤產生的蛋白質已經經過翻譯後修飾或多聚化。圖14說明無論引起CST蛋白質分子量差異的機制如何,CST在非腫瘤組織中低表達,但是在腫瘤來源蛋白質印跡中容易觀察到CST表達。
圖14還顯示SPARC蛋白質在腫瘤組織中以高於非腫瘤組織的程度相當大地表達。SPARC蛋白質的凝膠遷移率慢於血清中檢測到的該蛋白質形式(圖15),這還提示惡性胃腫瘤細胞產生的蛋白質出現不同的翻譯後修飾。不管引起任何此種修飾的機制如何,關於SPARC在腫瘤組織相對非惡性腫瘤組織過表達的這一發現提示SPARC是一種有用的蛋白質標記物。同樣地,IGFBP7和THBS2在腫瘤組織中相對非惡性腫瘤組織過表達。
使用抗由CSPG2(多功能蛋白聚糖)和CST1(半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN)所編碼蛋白質的抗體對腫瘤組織和非惡性腫瘤組織進行免疫組織化學分析。使用抗多功能蛋白聚糖抗體對組織的免疫組織化學分析鑑定出在腫瘤組織的細胞外基質有強染色,但在非惡性腫瘤組織中沒有。使用抗半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN抗體,能夠在腫瘤細胞外周區域觀察到強染色。在非惡性腫瘤細胞中,使用該抗體的染色較弱,並只在組織的粘模表面和胃小凹內層(lining)觀察到。這說明在非惡性腫瘤細胞中,半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN蛋白質被指引出細胞至粘模表面而不進入細胞外間隙。因此,不但半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN蛋白質在腫瘤組織中的產生量高於非惡性腫瘤組織,而且與非惡性腫瘤組織產生的蛋白質不同,腫瘤組織產生的半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN與組織的脈管系統直接接觸。為了擴大這些觀察,使用單克隆抗體(RD Systems;目錄號MAB1285)從胃癌細胞系AGS上清液中免疫沉澱半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN(圖16)。在上清液中檢測到大量的半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN,這證實該蛋白質由胃上皮細胞產生並分泌。
實施例6血清中腫瘤標記物的分析對於能用於快速篩選的標記物,需要標記物在血清中達到足以檢測的水平。在圖8中描述的某些蛋白質能夠從胃癌分泌入血達到可檢測的水平。TIMP1是一個已知的從胃腫瘤分泌入血達到可檢測水平的標記物。然而,如果蛋白質是從粘模表面以外的任何細胞表面分泌或脫落,那麼它將與間質液接觸。該蛋白質能從間質液通過毛細管直接進入血流或經過淋巴系統進入血流。因此,任何脫落的GTM將存在於血液中。以前已經描述過骨橋蛋白、甲狀腺球蛋白以及MMP和激肽釋放酶的家族成員在上皮癌患者血清中濃度升高,而在胃癌患者血清中不升高。然而,以前已經觀察到TIMP1在胃癌患者血清中有所升高。這些發現提示本研究中標記物的選擇標準(即分泌的蛋白質在腫瘤組織中過表達但不在非惡性腫瘤組織中過表達)能有效用於檢測血清中標記物,並且因此基本上具有臨床用途且不必進行組織或器官活檢。
根據圖15,很明顯血清中SPARC具有不同的分子量(此處以Western印跡圖示),腫瘤SPARC的分子量低於血細胞產生的SPARC。因此,即使SPARC由腫瘤和非腫瘤的血細胞產生,腫瘤SPARC的存在也能夠使用分子大小進行確定(如通過Western分析確定)或使用對腫瘤細胞產生的糖基化蛋白質特異的抗體來確定。
在其它研究中,我們檢測了胃癌細胞系AGS上清液中的半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN。圖16描述了單獨培養基或培養的AGS細胞上清液中的Western分析。圖16中右側泳道顯示出對應半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN蛋白質的緻密條帶。
因此,我們從圖10推斷本發明GTM適於診斷疾病進展早期、中期或晚期的胃癌。
儘管某些標記物蛋白質能被糖基化,但糖基化模式的變化在某些情況下能夠導致對缺少常見糖基化模式的GTM形式的錯誤檢測。因此,在本發明某些實施方案中,GTM免疫原包括去糖基化的GTM或去糖基化的GTM片段。可使用本技術領域中已知的一種或多種糖苷酶完成去糖基化。備選地,GTM eDNA能夠在糖基化缺陷細胞系如包括大腸肝菌(E.coli)的原核細胞中表達,從而產生非糖基化的蛋白質或肽。還應該意識到糖基化的水平和質量對糖側鏈必需前體的存在敏感。因此,在缺乏必需糖質的情況下,「正常」糖基化不會發生,但是可以發現更短的或缺失側鏈的糖。此種「糖基化變體」可以用作免疫原,從便產生對不同類型標記物基因特異的抗體。
另外,某些GTM可以形成同源二聚體或異二聚體或其它類型多聚體形式。例如,抑制蛋白βA是47kDa的蛋白質,其能形成分子量97kDa的同源二聚體(激活蛋白A),並與45kDa的蛋白質抑制蛋白βB形成92kDa的異源二聚體(也稱作激活蛋白AB)。因此,應該意識到Western分析或者提供分子量的其它類型分析不必僅限於檢測GTM的單體形式。相反,人們能夠容易地意識到可以檢測任何形式的GTM而不管其分子量如何。因此,對GTM多聚體形式的檢測可以容易地用於診斷胃癌的存在。此外,對於那些對胃腫瘤分期(1-4)或胃腫瘤類型(擴散型或腸型)有選擇性的GTM,對其多聚體形式的檢測能提供用於評價胃癌分期或類型的指標。
一旦產生抗GTM的抗體或抗血清,此種抗體製品能用於多種方法。首先,使用酶聯免疫吸附測定(ELISA)或放射免疫測定(RIA)方法定量GTM的蛋白質或肽。使用免疫組織化學可以在組織樣品中進行免疫檢測。這些方法在本技術領域中全部已知,因此不必在本文進一步描述。
實施例7包含GTM寡核苷酸的載體本發明其它實施方案包括對於標記物基因或其部分(「標記物肽」)、或標記物基因產物片段的體外表達有用的載體。例如,可製備具有編碼GTM的寡核苷酸的載體。許多此類載體基於本技術領域已知的標準載體。本發明還包括能用於轉染多種細胞系以製備產GTM細胞系的載體,其中所述細胞能用來產生所需量的GTM從而開發用於GTM檢測或GTM標準化改良測定法的特異性抗體或其它試劑。
應當理解為了製備這樣的載體,把包含完整可讀框或編碼待表達蛋白質部分的此可讀框部分的寡核苷酸插入含有啟動子區、一個或多個增強子區域的載體中,其中啟動子區和增強子區可操作性地與具有起始密碼子、可讀框和終止密碼子的寡核苷酸連接。產生表達載體的方法在本技術領域是已知的從而不必在本文重複。
還應該意識到可以將一個或多個選擇標記插入表達載體,以便允許選擇出的含有目的表達載體的細胞系擴大培養。而且,還可以在框架中插入本技術領域已知的前導區,從而指引蛋白質或蛋白質片段的分泌、內部貯存或膜插入。
實施例8用包含GTM的載體轉染的細胞在仍然進一步的實施方案中,提供的細胞能表達GTM、GTM片段或肽標記物。原核細胞和真核細胞都能如此使用。例如,大腸肝菌(一種原核細胞)能用來產生大量的缺乏成熟糖基化的GTM(如果特定GTM在正常情況下是糖基化的)。COS細胞、293細胞和多種其它真核細胞能用來產生糖基化的或者具有正確摺疊(並因此具有天然形式GTM蛋白質三維結構)的GTM。轉染此種細胞的方法在本技術領域中是已知的從而不必在本文中進一步描述。
實施例9試劑盒以本發明發現為基礎,可生產幾種類型的檢測試劑盒。首先,試劑盒能製備成具有預先裝載檢測分子(或「捕獲試劑」)的檢測裝置。在檢測GTMmRNA的實施方案中,此種裝置包括基質(如玻璃、矽、石英、金屬等),在其上面是作為可與待檢測的RNA雜交的捕獲試劑的寡核苷酸。在一些實施方案中,通過mRNA(標記有cy3、cy5、放射性標記或其它標記)與基質上的寡核苷酸雜交完成對mRNA的直接檢測。在其它實施方案中,通過先製備目的mRNA的互補DNA(cDNA)來實現對mRNA的檢測。然後標記的cDNA與基質上的寡核苷酸雜交並檢測。
無論採用的是何種檢測方法,要對測試的GTM表達與標準的表達測定比較。例如,RNA表達要對總的細胞DNA,組成型表達RNA(例如,核糖體RNA)的表達或者其它相對恆定的標記物進行標準化。
抗體還可在試劑盒中用作捕獲試劑。在一些實施方案中,基質(如多孔板)可以具有連接於其上的特異GTM捕獲試劑。在一些實施方案中,試劑盒內附有封閉試劑。封閉試劑用於減少非特異性結合。例如,使用任何方便來源但不含有GTM寡核苷酸的過量DNA如鮭精DNA能減少非特異的寡核苷酸結合。使用過量封閉蛋白質如血清白蛋白能減少非特異性抗體結合。應該認識到檢測寡核苷酸和蛋白質的許多方法在本技術領域中已知,並且在本發明範圍內可以使用和考慮能夠特異性檢測GTM相關分子的任何策略。
在依靠抗體檢測的實施方案中,GTM蛋白質或肽可以基於每個細胞來表示,或者基於總的細胞、組織或液體蛋白質、液體體積、組織質量(重量)來表示。此外,血清中GTM可以基於相對高豐度血清蛋白質如白蛋白來表示。
檢測試劑盒除了包括基質外還包括捕獲試劑(如探針),洗滌溶液(如SSC、其它鹽類、緩衝液、去汙劑等)以及檢測部分(如cy3、cy5、放射性標記等)。試劑盒還包括使用說明書和包裝物。
儘管本發明關於其中特定的實施方案進行了描述,但應該認識到可以在不脫離本發明的範圍在內使用涉及使用本公開標記物的其它實施方案。
工業適用性用於檢測GTM家族成員的方法包括使用微陣列和/或實時PCR方法檢測核苷酸以及檢測蛋白質和肽。本發明的組合物和方法可用於診斷裝置和試劑盒的製造、疾病的診斷、治療效果的評價,並且也可用於生產適於在生物樣品中測定GTM家族成員表達的試劑。
序列表110環太平洋生物技術有限公司查爾斯·戴維斯·小法默120用於胃癌檢測的標記物130JX225559140PCT/US2004/01229591412004-07-16150US60/487,9061512003-07-17160108170PatentIn版本3.3210121126212DNA213人類4001aaatacaaaa ggacacattc aaagga 26210221120212DNA213人類4002gccagtggaa ggatgttccc 20210321119212DNA213人類4003agtcccagcc caacttgga 19210421117212DNA213人類4004gtggcaatgc cgctgaa 17210521118
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權利要求
1.用於檢測胃癌的方法,其包括(a)準備生物學樣品;和(b)檢測上述樣品中GTM家族成員的過表達。
2.權利要求1的方法,其中所述GTM家族成員選自羧肽酶N,多肽2,83kDa鏈(CPN2)、基質金屬蛋白酶12(MMP12)、抑制素(「INHBA」)、胰島素樣生長因子7(「IGFBP7」)、γ-穀氨醯水解酶(「GGH」)、富含亮氨酸脯氨酸的蛋白多糖(「LEPRE1」)、半胱氨酸蛋白酶抑制劑S(「CST4」)、分泌型frizzled相關蛋白4(「SFRP4」)、asporin(「ASPN」)、具有EF手型結構域1的細胞生長調節因子(「CGREF1」)、激肽釋放酶10(KLK10)、金屬蛋白酶組織抑制劑1(「TIMP1」)、富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白質(「SPARC」)、轉化生長因子β誘導蛋白(「TGFBI」)、包含EGF的纖蛋白樣細胞外基質蛋白質2(「EFEMP2」),光亮蛋白聚糖(「LUM」),stannin(「SNN」)、分泌型磷蛋白1(「SPP1」)、硫酸軟骨素蛋白聚糖2(「CSPG2」)、N-醯基鞘氨醇醯胺水解酶(「ASAH1」)、絲氨酸蛋白酶11(「PRSS11」)、分泌型frizzled相關蛋白2(「SFRP2」)、XIIB組磷脂酶A2(「PLA2G12B」)、細胞外基質蛋白質spondin 2(「SPON2」)、嗅介蛋白1(「OLFM1」)、包含重複的血小板反應蛋白1(「TSRC1」)、血小板反應蛋白2(「THBS2」)、adlican、半胱氨酸蛋白酶抑制劑SA(「CST2」)、半胱氨酸蛋白酶抑制劑SN(「CST1」)、賴氨醯氧化酶樣酶2(「LOXL2」)、甲狀腺球蛋白(「TG」)、轉化生長因子β1(「TGFB1」)、絲氨酸或半胱氨酸蛋白酶抑制劑進化枝H(「SERPINH1」)、絲氨酸或半胱氨酸蛋白酶抑制劑進化枝B(「SERPINB5」)、基質金屬蛋白酶2(「MMP2」)、前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin類型5(「PCSK5」)和透明質酸糖蛋白連接蛋白4(「HAPLN4」)。
3.權利要求1或2的方法,其中所述檢測步驟通過檢測GTM mRNA的過表達實現。
4.權利要求1或2的方法,其中所述檢測步驟通過檢測GTM cDNA的過表達實現。
5.權利要求4的方法,其中所述檢測步驟使用與所述GMT cDNA的至少一部分互補的寡核苷酸實現。
6.權利要求4的方法,其中所述檢測步驟使用利用正向引物和反向引物的qPCR方法實現。
7.權利要求1或2的方法,其中所述檢測步驟通過檢測GTM蛋白質的過表達實現。
8.權利要求1或2的方法,其中所述檢測步驟通過檢測GTM肽的過表達實現。
9.權利要求7或8的方法,其中所述檢測步驟使用抗所述GTM的抗體實現。
10.權利要求7-9中任意一項的方法,其中所述檢測步驟使用夾心型免疫測定法實現。
11.權利要求7-10中任意一項的方法,其中所述抗體是單克隆抗體。
12.權利要求7-10中任意一項的方法,其中所述抗體是多克隆抗血清。
13.檢測GTM的裝置,其包括在其上具有GTM捕獲試劑的基質;和與所述基質關聯的檢測器,所述檢測器能夠檢測與所述捕獲試劑有關的GTM。
14.權利要求13的裝置,其中所述GTM捕獲試劑是寡核苷酸。
15.權利要求13的裝置,其中所述GTM捕獲試劑是對GTM寡核苷酸、GTM蛋白質或者GTM肽特異性的抗體。
16.檢測癌症的試劑盒,其包括在其上具有GTM捕獲試劑的基質;用於顯現所述GTM捕獲試劑和GTM的複合物的裝置;試劑;和使用說明書。
17.權利要求16的試劑盒,其中所述GTM捕獲試劑是GTM特異性寡核苷酸。
18.權利要求16的試劑盒,其中所述GTM捕獲試劑是對GTM寡核苷酸、GTM蛋白質或者GTM肽具有選擇性的GTM特異性抗體。
19.檢測胃癌的方法,其包括步驟從懷疑患有胃癌的患者製備測試樣品;測定所述測試樣品中GTM蛋白質的存在;和將所述測試樣品中存在的GTM數量與來自未患有胃癌的受試者的對照樣品中的數值相比較。
20.篩選胃癌的方法,其包括步驟從測試受試者製備測試樣品;測定所述測試樣品中GTM的存在;和將所述測試樣品中存在的GTM數量與來自未患有胃癌的受試者的對照樣品中的數值相比較。
21.權利要求19的方法,其中所述GTM是GTM蛋白質或肽。
22.權利要求19的方法,其中所述GTM是對GTM特異性的寡核苷酸。
23.權利要求22的方法,其中所述寡核苷酸是DNA。
24.權利要求22的方法,其中所述寡核苷酸是RNA。
25.權利要求18-24中任意一項的方法,其中所述測定步驟使用ELISA測定法。
26.權利要求19-21中任意一項的方法,其中所述測試樣品從血漿中獲得。
27.權利要求19-21中任意一項的方法,其中所述測試樣品從組織、尿液、胃液、血清和糞便中獲得。
全文摘要
腫瘤的早期檢測是患有腫瘤(包括胃腫瘤)的患者存活的主要決定因素。GTM基因家族成員在胃腫瘤組織和其它腫瘤組織中過表達,因此其可以用作胃癌和其它類型癌症的標記物。GTM蛋白質可以從癌細胞中釋放出來,並在血清和/或其它體液中達到足夠高的濃度從而得以檢測它們。因此,用於GTM檢測和定量的方法和檢測試劑盒能夠提供胃癌診斷的有價值的工具。
文檔編號C12Q1/68GK1867679SQ200480026675
公開日2006年11月22日 申請日期2004年7月16日 優先權日2003年7月17日
發明者P·J·吉爾福德, A·J·霍利約克 申請人:環太平洋生物技術有限公司