包含免疫調節化合物的組合物及其治療免疫缺陷疾病的用途的製作方法

2023-11-12 01:44:32 4

專利名稱：包含免疫調節化合物的組合物及其治療免疫缺陷疾病的用途的製作方法
專利說明包含免疫調節化合物的組合物及其治療免疫缺陷疾病的用途 1.發明領域 本發明涉及通過將一種或多種免疫調節化合物單獨施用或與其它治療劑組合施用來治療、預防和/或控制免疫缺陷疾病的方法。具體地，本發明包括使用藥物與其它常規治療的特定組合或「雞尾酒療法」。本發明還涉及藥物組合物和劑量方案。
2.
背景技術：
2.1免疫缺陷疾病 免疫缺陷疾病通常被分成兩類原發性和繼發性。繼發性免疫缺陷疾病是基礎疾病的結果。一般地，如果基礎疾病得到治療，則免疫缺陷會得到逆轉。原發性免疫缺陷疾病在無基礎疾病時發生，或者獨立於基礎疾病。免疫球蛋白缺乏症候群由缺陷性B細胞或抗體引起，其導致所有原發性免疫缺陷中的約50％。
X連鎖無丙種球蛋白血症是遺傳性疾病。在男性比在女性中更經常觀察到該缺陷。成熟B細胞能夠製備抗體並產生「記憶」，這是B細胞迅速識別並響應隨後它將遭遇到的感染物的特徵。已知無丙種球蛋白血症中所有抗體種類均能減少。
IgA缺乏是免疫系統的疾病，其特徵是對感染的敏感性增加。患有該疾病的患者不能產生正常數量的IgA。IgA為身體內表面提供第一線的防禦，來對抗肺、腸、口腔、泌尿生殖道和由黏膜隔離的其它區域的感染。相信IgA缺乏可能是因為B淋巴細胞不能成熟轉變為產生IgA抗體的血漿細胞。IgA缺乏是抗體系統的最常見疾病。症狀性患者會遭遇復發性嚴重感染，包括胃腸道、肺和竇感染，以及變應性疾病、癲癇症和癌症。目前沒有已知可治療IgA缺乏的基礎病因的療法。
嬰兒期暫時性低丙種球蛋白血症是未知原因的短期疾病。相信其是因為T輔助細胞的發育缺陷，在免疫響應中，T輔助細胞識別外來抗原並激活T細胞和B細胞。隨著患者年齡增長，T輔助細胞的數量和狀況可能會改善。低丙球蛋白血症的特徵是血液中的抗體水平低。在該疾病期間中，患者的IgG和IgA抗體水平減少，不能與感染物充分反應。
普通可變型免疫缺陷(CVID)是一組免疫缺陷症候群，其中B細胞免疫異常。大多數患者具有正常或接近正常數量的循環B細胞，但細胞不能分化成有效的血漿B細胞。於是，患者具有低數量或不可檢測量的血清抗體。該病症可能是由於B細胞的不足刺激，而非不能內化成B細胞。在美國和歐洲有數千名CVID患者，CVID在兩種性別中的發生率相等。大多數患者經歷急性、復發性細菌感染，包括肺炎、支氣管炎和竇炎。目前的治療包括定期施用靜脈內抗體，該抗體從來自數千名個體捐獻者的合併血液樣品中製備獲得。
免疫球蛋白重鏈刪除是遺傳性疾病，其中抗體分子的一部分不能得到製備。它導致損失幾種抗體種類和亞型，包括大多數IgG抗體和所有IgA和IgE抗體。相信該疾病是由於部分重鏈基因丟失而引起的。
選擇性IgG亞型缺陷是一組遺傳性疾病，其中一些IgG亞型不能得到製備。在IgG抗體種類中有四個亞型。在B細胞成熟時，它能從一個亞型轉化為另一個亞型。在這些疾病中，B細胞成熟缺陷導致轉化缺乏。
具有過多IgM的IgG缺陷是B細胞不能將IgM轉化為IgG所致的疾病。這使得存在的IgM抗體數量增加，IgG抗體數量減少。該疾病是基因突變的結果。
儘管目前已經預期可將各種常規療法用於免疫缺陷疾病，但仍需要這些疾病的安全、有效和方便的療法。
2.2 IMIDSTM 已經進行過許多研究，目的在於提供安全有效的化合物用於治療與TNF-α異常產生相關的疾病。參見例如Marriott，J.B.等，Expert Opin.Biol.Ther.1(4)1-8(2001)；G.W.Muller等，Journal of Medicinal Chemistry 39(17)3238-3240(1996)；和G.W.Muller等，Bioorganic&Medicinal Chemisty Letters82669-2674(1998)。一些研究已經在關注一組化合物，它們具有有效抑制LPS刺激PBMC所至TNF-α產生的能力。L.G.Corral等，Ann.Rheum.Dis.58(增刊I)1107-1113(1999)。這些化合物被稱為IMIDsTM(Celgene Corporation)或免疫調節藥，顯示不僅對TNF-α有強抑制作用，而且可顯著抑制LPS誘導的單核細胞IL1β和IL12產生。LPS誘導的IL6還受免疫調節化合物抑制，雖然只是部分抑制。這些化合物是LPS誘導的IL10的有效促進劑(同上)。IMiDsTM的具體例子包括但不限於皆授予G W.Muller等人的美國專利6,281,230和6,316,471中所述的取代的2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)苯鄰二甲酸亞胺和取代的2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代異吲哚。
3.發明概述 本發明包括治療、預防和/或控制免疫缺陷疾病或病症的方法。所述方法包括向需要這種治療、預防和/或控制的患者施用治療或預防有效量的免疫調節化合物、或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物(例如水合物)、立體異構體、或前藥。
在一些實施方案中，將免疫調節化合物與常規用於治療、預防或控制免疫缺陷疾病或病症的療法聯合施用。
本發明還包括在需要激發體液免疫的患者(例如可能暴露於病原的患者)體內激發體液免疫的方法。相信通過在患者暴露至免疫原之前，向患者施用預防有效量的免疫調節化合物、或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、立體異構體、或前藥，可獲得對該免疫原的增強的免疫響應。
在本發明的其它方法中，將免疫調節化合物與常規用於治療、預防或控制免疫缺陷疾病或病症的療法聯合施用。
4.附圖簡述

圖1A顯示流式細胞儀分析的結果，顯示了在用CD40L和IL4處理的正常B細胞上，免疫調節化合物上調CD80表達； 圖1B顯示了當用免疫調節化合物處理時，表達CD80的B細胞數量增加； 圖2A顯示了在用BAFF(也稱為TALL-1、zTNF4、THANK、BlyS、或TNFSF-20)或LPS(脂多糖)處理的正常B細胞上，免疫調節化合物上調CD80表達； 圖2B顯示了在用BAFF或LPS處理的正常B細胞上，免疫調節化合物上調HLA-DR表達； 圖3A顯示了FACS分析，表明了在用免疫調節化合物處理的CD19+B細胞中，CD69表達增加； 圖3B也顯示了FACS分析，表明了在用另一種免疫調節化合物處理的CD19+B細胞中，CD69表達增加； 圖4顯示了在用不同免疫調節化合物處理的活化CD19+細胞中，TNF-α的生成增加； 圖5顯示了IL-6表達對免疫調節化合物的劑量依賴性增加； 圖6顯示了用免疫調節化合物共活化的B淋巴細胞的形態變化； 圖7A顯示了免疫調節化合物對B細胞增殖的共刺激； 圖7B顯示了受刺激B細胞的形態變化比較； 圖7C顯示了通過免疫調節化合物促進LPS和BAFF刺激細胞的增殖； 圖8A顯示了在用免疫調節化合物共刺激的B細胞中，LTR9(toll樣受體9)表達增加； 圖8B顯示了在用免疫調節化合物、抗CD40和IL-4刺激的B細胞中，LTR9表達增加； 圖8C和D顯示了在用免疫調節化合物和抗IgM刺激的B細胞中，LTR9表達增加； 圖9A顯示了免疫調節化合物顯著抑制IL-4信號傳導； 圖9B顯示了免疫調節化合物抑制IL-4或(抗CD40+IL-4)介導B細胞的增殖； 圖9C顯示了免疫調節化合物對各種細胞因子介導的B細胞增殖的促進作用； 圖9D顯示了免疫調節化合物對細胞因子介導的B細胞增殖的總體效果； 圖10A和B顯示了在IL-4刺激的B細胞中，免疫調節化合物對CD69的表達沒有抑制效果； 圖11A和B顯示了免疫調節化合物抑制IgE的合成； 圖11C顯示了免疫調節化合物抑制IgG1的合成； 圖11D顯示了在IL-4刺激的B細胞中，免疫調節化合物抑制磷酸-STAT6； 圖11E顯示了免疫調節化合物對CD40+IL-4介導的HLA-DR表達沒有作用； 圖11F顯示了在BAFF處理的B細胞中，免疫調節化合物對CD40和HLA-D表達R的促進作用。
5.發明詳述 本發明的第一實施方案包括治療、控制和/或預防免疫缺陷疾病或病症的方法，該方法包括向需要這種治療或預防的患者施用治療或預防有效量的本發明的免疫調節化合物、或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、立體異構體、或前藥。
在該實施方案包括的具體方法中，將所述免疫調節化合物與治療、控制和/或預防免疫缺陷疾病或病症的其它藥物(「第二活性試劑」)或方法組合施用。第二活性試劑包括小分子和大分子(例如蛋白質和抗體)，本文提供了它們的例子、以及幹細胞。可與免疫調節化合物聯合施用的方法、或療法包括但不限於抗體注射或輸液和幹細胞移植。
免疫缺陷疾病或病症的例子包括但不限於腺苷脫氨酶缺乏、具有正常或升高免疫球蛋白的抗體缺乏、毛細血管擴張性共濟失調、裸淋巴細胞症候群、普通可變型免疫缺陷、具有過多IgM的免疫球蛋白缺乏、免疫球蛋白重鏈刪除、IgA缺乏、具有胸腺瘤的免疫缺陷、網狀組織發生不全、尼茲諾夫症候群、選擇性IgG子類缺乏、嬰兒期暫時性低丙種球蛋白血症、威-奧症候群、X連鎖無丙種球蛋白血症、X連鎖重症聯合免疫缺陷。
5.1定義 除非另有說明，本發明所用術語「藥學上可接受的鹽」指由藥學上可接受的無毒酸製備的鹽，包括無機酸和有機酸。合適的無毒酸包括無機酸和有機酸，例如但不限於乙酸、海藻酸、氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、甲酸、富馬酸、糠酸、葡糖酸、穀氨酸、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、縮水甘油酸、氫溴酸、氫氯酸、羥乙磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘液酸、硝酸、雙羥萘酸、泛酸、苯乙酸、丙酸、磷酸、水楊酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、硫酸、酒石酸、對甲苯磺酸等。合適的是氫氯酸、氫溴酸、磷酸和硫酸。
除非另有說明，本發明所用術語「溶劑化物」指本發明的化合物或其鹽，其還包括通過非共價分子間作用結合的化學計量量或非化學計量量的溶劑。當溶劑為水時，溶劑化物為水合物。
除非另有說明，本發明所用術語「前藥」指可在生物條件(體外或體內)下水解、氧化或以其它方式反應以提供化合物的該化合物的衍生物。前藥的例子包括但不限於含有可生物水解部分如可生物水解的醯胺、可生物水解的酯、可生物水解的氨基甲酸酯、可生物水解的碳酸酯、可生物水解的醯脲和可生物水解的磷酸酯類似物的化合物。前藥的其它例子包括含有-NO、-NO2、-ONO或-ONO2部分的化合物。前藥通常可用熟知的方法製備，如《伯格斯藥物化學和藥物探索》(Burger′s Medicinal Chemistry and DrugDiscovery)，172-178，949-982(Manfred E.Wolff編，第五版，1995)和《前藥設計》(Design of Prodrugs)(H.Bundgaard編，Elselvier，紐約，1985)中描述的方法。
除非另有說明，本發明所用術語「可生物水解的氨基甲酸酯」、「可生物水解的碳酸酯」、「可生物水解的醯脲」和「可生物水解的磷酸酯」在本文中分別用於表示化合物的氨基甲酸酯、碳酸酯、醯脲和磷酸酯，它們1)不影響該化合物的生物活性但可在體內賦予該化合物有益的特性，如攝取、作用持續時間或起效；或2)為無生物活性的，但在體內可轉變為生物活性化合物。可生物水解的氨基甲酸酯的例子包括但不限於低級烷基胺、取代的乙二胺、胺基酸、羥基烷基胺、雜環胺和雜芳胺、以及聚醚胺。
除非另有說明，本發明所用術語「立體異構體」包括所有對映異構體/立體異構體純的以及對映異構體/立體異構體富集的本發明的化合物。
除非另有說明，本發明所用術語「立體異構體純的」或「對映異構體純的」指化合物含有一種立體異構體且基本上不含該化合物的相反立體異構體或對映異構體。例如，當某化合物含有80％、90％或95％或更多某種立體異構體和20％、10％或5％或更少的相反立體異構體時，該化合物為立體異構體或對映異構體純的。某些情況下，就特定手性中心而言，當化合物約80％ee(對映異構體過量)或更高，優選等於或大於90％ee，且更優選為95％時，則就該手性中心而言，本發明的化合物被認為具有光學活性或是立體異構體/對映異構體純的(即基本上為R型或基本上為S型)。
除非另有說明，本發明所用術語「立體異構體富集的」或「對映異構體富集的」包括本發明化合物的外消旋混合物以及立體異構體的其它混合物(例如，R/S＝30/70、35/65、40/60、45/55、55/45、60/40、65/35和70/30)。
除非另有說明，本發明所用術語「治療」預期在患者遭遇具體疾病或病症時發生作用，從而減少所述疾病或病症的嚴重性，或阻止或減緩所述疾病或病症的進程。
除非另有說明，本發明所用術語「預防」預期在患者遭遇具體疾病或病症之前發生作用，從而抑制或減少所述疾病或病症的嚴重性。
除非另有說明，本發明所用術語「控制」包括預防特定疾病或病症在曾患有該疾病或病症的患者中復發，和/或延長已經患有這種疾病或病症的患者處於症狀減輕狀態的時間。該術語包括調節所述疾病或病症的域值、發展和/或持續時間，或者改變患者對所述疾病或病症的響應方式。
除非另有說明，本發明所用術語化合物的「治療有效量」指在治療或控制疾病或病症時，該量足以提供治病益處，或者足以使與疾病或病症相關的一種或多種症狀延遲或最小化。化合物的治療有效量指單獨或與其它療法聯合的治療劑的量，該量在治療或控制疾病或病症時可提供治療益處。術語「治療有效量」可包括改進總體治療、減少或避免疾病或病症的症狀或病因的量，或者提高另一種治療劑的治療效果的量。
除非另有說明，本發明所用術語「化合物的預防有效量」指該量足以預防疾病或病症、或者與所述疾病或病症相關的一種或多種症狀，或者防止其復發。化合物的預防有效量指單獨或與其它療法聯合的治療劑的量，該量在預防疾病時可提供預防益處。術語「預防有效量」可包括改進總體預防、或提高另一種治療劑的預防效果的量。
5.2免疫調節化合物 本發明的化合物可通過商業購得或按照本文所公開的專利或專利申請中描述的方法製備。此外，光學純的組合物可以是不對稱合成的或用已知的拆分劑或手性柱以及其它標準有機化學合成技術拆分。用於本發明的化合物可包括免疫調節化合物，這種化合物可以是外消旋的、立體異構體富集的或立體異構體純的，或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、立體異構體和前藥。
優選用於本發明的化合物是有機小分子，其分子量小於1,000g/mol且不是蛋白質、肽、寡核苷酸、寡糖或其它大分子。
除非另有說明，本發明所用術語「免疫調節化合物」和「IMIDsTM」(Celgene Corporation)包括有機小分子，其可顯著抑制TNF-α、LPS誘導的單核細胞IL1β和IL12，並部分抑制IL6產生。具體的免疫調節化合物如下所述。
TNF-α是一種在急性炎症過程中由巨噬細胞和單核細胞產生的炎性細胞因子。TNF-α負責細胞內範圍廣泛的信號發生事件。不受理論局限，本發明的免疫調節化合物的一種生物學作用是減少TNF-α的合成。本發明的免疫調節化合物可增強TNF-αmRNA的降解。
此外，不受理論局限，用於本發明的免疫調節化合物也是T細胞的強效共刺激物並能以劑量依賴方式顯著增加細胞增殖。相比CD4+T細胞，本發明的免疫調節化合物對CD8+T細胞亞類有較高的共刺激作用。此外，所述化合物優選具有抗炎特性，並能有效共刺激T細胞。此外，不受理論局限，用於本發明的免疫調節化合物也能夠通過細胞因子活化間接地或直接地作用於天然殺傷(「NK」)細胞，並提高NK細胞產生有益細胞因子的能力，例如但不限於IFN-γ的產生能力。
免疫調節化合物的具體例子包括但不限於取代的苯乙烯的氰基和羧基衍生物，如美國專利5,929,117中公開的那些；1-氧代-2-(2，6-二氧代-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚和1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代-3-氨哌啶-3-基)-異二氫吲哚，如美國專利5,874,448和5,955,476中所述的那些；美國專利5,798,368中所述的四取代的2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代異二氫吲哚；1-氧代和1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-異二氫吲哚(例如，沙利度胺的4-甲基衍生物)，包括但不限於美國專利5,635,517、6,476,052、6,555,554和6,403,613中公開的那些；美國專利6,380,239中所述在二氫吲哚環的4-或5-位被取代的1-氧代和1，3-二氧代異二氫吲哚(例如，4-(4-氨基-1，3-二氧代異二氫吲哚-2-基)-4-氨甲醯基丁酸)；美國專利6,458,810中所述在2-位被2，6-二氧代-3-羥基哌啶-5-基取代的異二氫吲哚-1-酮和異二氫吲哚-1，3-二酮(例如，2-(2，6-二氧代-3-羥基-5-氟哌啶-5-基)-4-氨基異二氫吲哚-1-酮)；美國專利5,698,579和5,877,200中公開的一類非多肽類環酞胺；氨基沙利度胺，以及氨基沙利度胺的類似物、水解產物、代謝物、衍生物和前體，以及取代的2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-苯鄰二甲醯亞胺和取代的2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代異吲哚，如美國專利6,281,230和6,316,471中所述的那些；以及異吲哚-醯亞胺化合物，如2001年10月5日提交的美國專利申請09/972,487、2001年12月21日提交的美國專利申請10/032,286和國際申請號PCT/US01/50401(國際公開號WO 02/059106)中所述的那些。這裡提到的各個專利和專利申請被全文納入本文作為參考。免疫調節化合物不包括沙利度胺。
其它具體的本發明的免疫調節化合物包括但不限於苯並環上被氨基取代的1-氧代-和1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-異二氫吲哚，如美國專利5,635,517中所述，該專利納入本文作為參考。這些化合物具有結構I
其中X和Y中的一個為C＝O，X和Y中的另一個為C＝O或CH2，R2為氫或低級烷基，尤其是甲基。具體的免疫調節化合物包括但不限於 1-氧代-2-(2，6-二氧代哌啶3-基)-4-氨基異二氫吲哚； 1-氧代-2-(2，6-二氧代哌啶3-基)-5-氨基異二氫吲哚； 1-氧代-2-(2，6-二氧代哌啶3-基)-6-氨基異二氫吲哚； 1-氧代-2-(2，6-二氧代哌啶3-基)-7-氨基異二氫吲哚； 1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶3-基)-4-氨基異二氫吲哚；和 1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶3-基)-5-氨基異二氫吲哚。
其它具體的本發明的免疫調節化合物屬於取代的2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-苯鄰二甲醯亞胺和取代的2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代異吲哚類，如美國專利6,281,230；6,316,471；6,335,349；和6,476,052，以及國際專利申請PCT/US97/13375(國際公開號WO 98/03502)中所述的那些，這些公開在此分別納入本文作為參考。代表性的化合物具有下式
其中X和Y中的一個為C＝O，X和Y中的另一個為C＝O或CH2； (i)R1、R2、R3和R4分別獨立地為滷素、含有1至4個碳原子的烷基、或含有1至4個碳原子的烷氧基，或者(ii)R1、R2、R3和R4之一為-NHR5，R1、R2、R3和R4中剩餘者為氫； R5為氫或含有1至8個碳原子的烷基； R6為氫、含有1至8個碳原子的烷基、苄基、或滷素； 條件是如果X和Y都為C＝O且(i)R1、R2、R3和R4分別為氟或者(ii)R1、R2、R3和R4之一為氨基，則R6不為氫。
代表這類的化合物具有下式

其中R1為氫或甲基。在獨立的實施方案中，本發明包括使用這些化合物的對映異構體純的形式(例如旋光純(R)或(S)對映異構體)。
其它具體的本發明的免疫調節化合物屬於異吲哚-醯亞胺類型，該類型公開於美國專利申請公開2003/0096841和2003/0045552，以及國際申請PCT/US01/50401(國際公開號WO 02/059106)，它們分別在此納入本文作為參考。代表性的化合物具有式II
及其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物、對映異構體、非對映異構體、外消旋物、及立體異構體的混合物，其中 X和Y中的一個為C＝O，另一個為CH2或C＝O； R1為氫、(C1-C8)烷基、(C3-C7)環烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、苄基、芳基、(C0-C4)烷基-(C1-C6)雜環烷基、(C0-C4)烷基-(C2-C5)雜芳基、C(O)R3、C(S)R3、C(O)OR4、(C1-C8)烷基-N(R6)2、(C1-C8)烷基-OR5、(C1-C8)烷基-C(O)OR5、C(O)NHR3、C(S)NHR3、C(O)NR3R3′、C(S)NR3R3′或(C1-C8)烷基-O(CO)R5； R2為氫、F、苄基、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、或(C2-C8)炔基； R3和R3′獨立地為(C1-C8)烷基、(C3-C7)環烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、苄基、芳基、(C0-C4)烷基-(C1-C6)雜環烷基、(C0-C4)烷基-(C2-C5)雜芳基、(C0-C8)烷基-N(R6)2、(C1-C8)烷基-OR5、(C1-C8)烷基-C(O)OR5、(C1-C8)烷基-O(CO)R5、或C(O)OR5； R4為(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C1-C4)烷基-OR5、苄基、芳基、(C0-C4)烷基-(C1-C6)雜環烷基、或(C0-C4)烷基-(C2-C5)雜芳基； R5為(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、苄基、芳基、或(C2-C5)雜芳基； 每個存在的R6獨立地為H、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、苄基、芳基、(C2-C5)雜芳基、或(C0-C8)烷基-C(O)O-R5，或者多個R6基團可能連接起來形成雜環烷基； n為0或1；和 *表示手性碳中心。
在式II的具體化合物中，當n為0時，則R1為(C3-C7)環烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、苄基、芳基、(C0-C4)烷基-(C1-C6)雜環烷基、(C0-C4)烷基-(C2-C5)雜芳基、C(O)R3、C(O)OR4、(C1-C8)烷基-N(R6)2、(C1-C8)烷基-OR5、(C1-C8)烷基-C(O)OR5、C(S)NHR3、或(C1-C8)烷基-O(CO)R5； R2為H或(C1-C8)烷基；和 R3為(C1-C8)烷基、(C3-C7)環烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、苄基、芳基、(C0-C4)烷基-(C1-C6)雜環烷基、(C0-C4)烷基-(C2-C5)雜芳基、(C5-C8)烷基-N(R6)2；(C0-C8)烷基-NH-C(O)O-R5；(C1-C8)烷基-OR5、(C1-C8)烷基-C(O)OR5、(C1-C8)烷基-O(CO)R5、或C(O)OR5；其它可變量具有相同的定義。
在式II的其它具體化合物中，R2為H或(C1-C4)烷基。
在式II的其它具體化合物中，R1為(C1-C8)烷基或苄基。
在式II的其它具體化合物中，R1為氫、(C1-C8)烷基、苄基、CH2OCH3、CH2CH2OCH3，或者
在式II化合物的另一個實施方案中，R1為
其中Q為O或S，每個存在的R7獨立地為H、(C1-C8)烷基、(C3-C7)環烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、苄基、芳基、滷素、(C0-C4)烷基-(C1-C6)雜環烷基、(C0-C4)烷基-(C2-C5)雜芳基、(C0-C8)烷基-N(R6)2、(C1-C8)烷基-OR5、(C1-C8)烷基-C(O)OR5、(C1-C8)烷基-O(CO)R5、或C(O)OR5，或者相鄰的R7可能結合起來形成雙環烷基或芳環。
在式II的其它具體化合物中，R1為C(O)R3。
在式II的其它具體化合物中，R3為(C0-C4)烷基-(C2-C5)雜芳基、(C1-C5)烷基、芳基、或(C0-C4)烷基-OR5。
在式II的其它具體化合物中，雜芳基為吡啶基、呋喃基、或噻吩基。
在式II的其它具體化合物中，R1為C(O)OR4。
在式II的其它具體化合物中，C(O)NHC(O)的H可能被(C1-C4)烷基、芳基、或苄基代替。
這類化合物的其它例子包括但不限於[2-(2，6-二氧代-哌啶3-基)-1，3-二氧代-2，3-二氫-1H-異吲哚-4-基甲基]-醯胺；(2-(2，6-二氧代-哌啶3-基)-1，3-二氧代-2，3-二氫-1H-異吲哚-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯；4-(氨基甲基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-1，3-二酮；N-(2-(2，6-二氧代-哌啶3-基)-1，3-二氧代-2，3-二氫-1H-異吲哚-4-基甲基)-乙醯胺；N-{(2-(2，6-二氧代(3-哌啶基)-1，3-二氧代異二氫吲哚-4-基)甲基}環丙基-羧醯胺；2-氯-N-{(2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-1，3-二氧代異二氫吲哚-4-基)甲基}乙醯胺；N-(2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-1，3-二氧代異二氫吲哚-4-基)-3-吡啶基羧醯胺；3-{1-氧代-4-(苄基氨基)異二氫吲哚-2-基}哌啶-2，6-二酮；2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-4-(苄基氨基)異二氫吲哚-1，3-二酮；N-{(2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-1，3-二氧代異二氫吲哚-4-基)甲基}丙醯胺；N-{(2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-1，3-二氧代異二氫吲哚-4-基)甲基}-3-吡啶基羧醯胺；N-{(2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-1，3-二氧代異二氫吲哚-4-基)甲基}庚醯胺；N-{(2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-1，3-二氧代異二氫吲哚-4-基)甲基}-2-呋喃基羧醯胺；{N-(2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-1，3-二氧代異二氫吲哚-4-基)氨基甲醯基}乙酸甲酯；N-(2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-1，3-二氧代異二氫吲哚-4-基)戊醯胺；N-(2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-1，3-二氧代異二氫吲哚-4-基)-2-噻吩基羧醯胺；N-{[2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-1，3-二氧代異二氫吲哚-4-基]甲基}(丁基氨基)羧醯胺；N-{[2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-1，3-二氧代異二氫吲哚-4-基]甲基}(辛基氨基)羧醯胺；和N-{[2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-1，3-二氧代異二氫吲哚-4-基]甲基}(苄基氨基)羧醯胺。
其它具體的本發明的免疫調節化合物屬於異吲哚-醯亞胺類型，該類型公開於美國專利申請公開2002/0045643、國際公開WO 98/54170和美國專利6,395,754，它們在此分別納入本文作為參考。代表性的化合物具有式III
及其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物、對映異構體、非對映異構體、外消旋物、及立體異構體的混合物，其中 X和Y中的一個為C＝O，另一個為CH2或C＝O； R為H或CH2OCOR′； (i)R1、R2、R3和R4分別獨立地為滷素、含有1至4個碳原子的烷基、或含有1至4個碳原子的烷氧基，或者(ii)R1、R2、R3和R4之一為硝基或-NHR5，R1、R2、R3和R4中剩餘者為氫； R5為氫或含有1至8個碳的烷基； R6為氫、含有1至8個碳原子的烷基、苯並、氯、或氟； R′為R7-CHR10-N(R8R9)； R7為間亞苯基、對亞苯基或-(CnH2n)-，其中n值為0至4； R8和R9分別獨立地為氫或含有1至8個碳原子的烷基，或者R8和R9結合起來作為四亞甲基、五亞甲基、六亞甲基、或-CH2CH2X1CH2CH2-，其中X1為-O-、-S-或-NH-； R10為氫、含有1至8個碳原子的烷基、或苯基；和 *表示手性碳中心。
其它代表性化合物具有下式
其中 X和Y中的一個為C＝O，X和Y中另一個為C＝O或CH2； (i)R1、R2、R3和R4分別獨立地為滷素、含有1至4個碳原子的烷基、或含有1至4個碳原子的烷氧基，或者(ii)R1、R2、R3和R4之一為-NHR5，R1、R2、R3和R4中剩餘者為氫； R5為氫或含有1至8個碳原子的烷基； R6為氫、含有1至8個碳原子的烷基、苯並、氯、或氟； R7為間亞苯基、對亞苯基或-(CnH2n)-，其中n值為0至4； R8和R9分別獨立地為氫或含有1至8個碳原子的烷基，或者R8和R9結合起來作為四亞甲基、五亞甲基、六亞甲基、或-CH2CH2X1CH2CH2-，其中X1為-O-、-S-或-NH-； R10為氫、含有1至8個碳原子的烷基、或苯基。
其它代表性化合物具有下式
其中 X和Y中的一個為C＝O，X和Y中另一個為C＝O或CH2； (i)R1、R2、R3和R4分別獨立地為滷素、含有1至4個碳原子的烷基、或含有1至4個碳原子的烷氧基，或者(ii)R1、R2、R3和R4之一為硝基或受保護的氨基，R1、R2、R3和R4中剩餘者為氫；和 R6為氫、含有1至8個碳原子的烷基、苯並、氯、或氟。
其它代表性化合物具有下式
其中 X和Y中的一個為C＝O，X和Y中另一個為C＝O或CH2； (i)R1、R2、R3和R4分別獨立地為滷素、含有1至4個碳原子的烷基、或含有1至4個碳原子的烷氧基，或者(ii)R1、R2、R3和R4之一為-NHR5，R1、R2、R3和R4中剩餘者為氫； R5為氫、含有1至8個碳原子的烷基、或CO-R7-CH(R10)NR8R9，其中R7、R8、R9和R10分別如本文所定義；和 R6為含有1至8個碳原子的烷基、苯並、氯、或氟。
所述化合物的具體例子為下式
其中 X和Y中的一個為C＝O，X和Y中另一個為C＝O或CH2； R6為氫、含有1至8個碳原子的烷基、苄基、氯或氟； R7為間亞苯基、對亞苯基或-(CnH2n)-，其中n值為0至4； R8和R9分別獨立地為氫或含有1至8個碳原子的烷基，或者R8和R9結合起來作為四亞甲基、五亞甲基、六亞甲基、或-CH2CH2X1CH2CH2-，其中X1為-O-、-S-或-NH-；和 R10為氫、含有1至8個碳原子的烷基、或苯基。
本發明最優選的免疫調節化合物為4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-1，3-二酮和3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮。可通過標準合成方法獲得所述化合物(參見例如美國專利5,635,517，該文獻被納入本文作為參考)。可從Celgene Corporation，Warren，NJ獲得所述化合物。4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-1，3-二酮具有下列化學結構
化合物3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮具有下列化學結構
在另一個實施方案中，具體的本發明的免疫調節化合物包括3-(4-氨基-1-氧代-1，3二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮的多晶型形式，如2003年9月4日提交的美國臨時申請60/499,723和2004年9月3日提交的相應的美國非臨時申請中描述的A、B、C、D、E、F、G和H型，這兩個文獻均被納入本文作為參考。例如，3-(4-氨基-1-氧代-1，3二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮的A型是一種非溶劑化的結晶物，可從不含水的溶劑系統獲得。A型的X射線粉末衍射圖案在大約8、14.5、16、17.5、20.5、24和26度2θ處有明顯的峰，且差示掃描量熱法最大熔解溫度約為270℃。A型弱吸溼或不吸溼且似乎是迄今所發現的熱力學最穩定的3-(4-氨基-1-氧代-1，3二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮的無水多晶型物。
3-(4-氨基-1-氧代-1，3二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮的B型是一種半水合的結晶物，可從各種溶劑系統獲得，其中包括但不限於己烷、甲苯和水。B型的X射線粉末衍射圖案在大約16、18、22和27度2θ處有明顯的峰，DSC曲線顯示在約146℃和268℃處有吸熱峰，這在熱載臺顯微鏡實驗中表現為脫水和熔解。互變研究顯示，B型在含水溶劑系統中轉變為E型，而在丙酮和其它無水系統中轉變為其它形式。
3-(4-氨基-1-氧代-1，3二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮的C型是一種半溶劑化的結晶物，可從例如(但不限於)丙酮溶劑獲得。C型的X射線粉末衍射圖案在大約15.5和25度2θ處有明顯的峰，且差示掃描量熱法最大熔解溫度約為269℃。C型在低於約85％RH時不吸溼，但在較高的相對溼度下可轉變為B型。
3-(4-氨基-1-氧代-1，3二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮的D型是一種從乙腈和水的混合物中製備的溶劑化的多晶型晶體。D型的X射線粉末衍射圖案在大約27和28度2θ處有明顯的峰，且差示掃描量熱法最大熔解溫度約為270℃。D型弱吸溼或不吸溼，但在較高的相對溼度下通常將轉變為B型。
3-(4-氨基-1-氧代-1，3二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮的E型是一種結晶的二水合物，可通過在水中將3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮調成漿液然後在丙酮∶水比例約為9∶1的溶劑系統中緩慢蒸發3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮獲得。E型的X射線粉末衍射圖案在大約20、24.5和29度2θ處有明顯的峰，且差示掃描量熱法最大熔解溫度約為269℃。E型在丙酮溶劑系統中可轉變為C型，而在THF溶劑系統中可轉變為G型。在含水溶劑系統中E型似乎是最穩定的形式。對E型進行去溶劑化試驗顯示，在約125℃加熱約5分鐘E型可轉變為B型。在175℃加熱約5分鐘B型可轉變為F型。
3-(4-氨基-1-氧代-1，3二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮的F型是一種非溶劑化的結晶物，可通過將E型脫水獲得。F型的X射線粉末衍射圖案在大約19、19.5和25度2θ處有明顯的峰，且差示掃描量熱法最大熔解溫度約為269℃。
3-(4-氨基-1-氧代-1，3二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮的G型是一種非溶劑化的結晶物，可從B型和E型在溶劑(例如但不限於四氫呋喃(THF))中製漿而獲得。G型的X射線粉末衍射圖案在大約21、23和24.5度2θ處有明顯的峰，且差示掃描量熱法最大熔解溫度約為267℃。
3-(4-氨基-1-氧代-1，3二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮的H型是一種部分水合(約0.25摩爾)的結晶物，可通過將E型暴露於0％相對溼度下獲得。H型的X射線粉末衍射圖案在大約15、26和31度2θ處有明顯的峰，且差示掃描量熱法最大熔解溫度約為269℃。
本發明的其它具體免疫調節化合物包括但不限於1-氧代-2-(2，6-二氧代-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚和1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚，如美國專利5,874,448和5,955,476中所述的那些，這兩個文獻被分別納入本文作為參考。代表性化合物具有下式
其中Y為氧或H2，和 R1、R2、R3和R4分別獨立地為氫、滷素、含有1至4個碳原子的烷基、或含有1至4個碳原子的烷氧基、或氨基。
本發明的其它具體免疫調節化合物包括但不限於美國專利5,798,368中所述的四取代2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代異二氫吲哚，該文獻被納入本文作為參考。代表性化合物具有下式
其中R1、R2、R3和R4分別獨立地為滷素、含有1至4個碳原子的烷基、或含有1至4個碳原子的烷氧基。
本發明的其它具體免疫調節化合物包括但不限於美國專利6,403,613中公開的1-氧代和1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶3-基)-異二氫吲哚，該文獻被納入本文作為參考。代表性化合物具有下式
其中 Y為氧或H2， R1和R2中第一個為滷素、烷基、烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、氰基、或氨基甲醯基，R1和R2中第二個獨立於第一個，為氫、滷素、烷基、烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、氰基、或氨基甲醯基，和 R3為氫、烷基、或苄基。
所述化合物的代表性例子具有下式
其中R1和R2中第一個為滷素、包含1至4個碳原子的烷基、包含1至4個碳原子的烷氧基、每個烷基包含1至4個碳原子的二烷基氨基、氰基、或氨基甲醯基， R1和R2中第二個與第一個獨立，為氫、滷素、包含1至4個碳原子的烷基、包含1至4個碳原子的烷氧基、烷基包含1至4個碳原子的烷基氨基、每個烷基包含1至4個碳原子的二烷基氨基、氰基、或氨基甲醯基，和 R3為氫、包含1至4個碳原子的烷基、或苄基。具體例子包括但不限於1-氧代-2-(2，6-二氧代哌啶3-基)-4-甲基異二氫吲哚。
其它代表性化合物具有下式
其中R1和R2中第一個為滷素、包含1至4個碳原子的烷基、包含1至4個碳原子的烷氧基、每個烷基包含1至4個碳原子的二烷基氨基、氰基、或氨基甲醯基， R1和R2中第二個與第一個獨立，為氫、滷素、包含1至4個碳原子的烷基、包含1至4個碳原子的烷氧基、烷基包含1至4個碳原子的烷基氨基、每個烷基包含1至4個碳原子的二烷基氨基、氰基、或氨基甲醯基，和 R3為氫、包含1至4個碳原子的烷基、或苄基。
本發明的其它具體免疫調節化合物包括但不限於美國專利6,380,239和2004年7月28日提交的共同未決美國申請10/900,270中所述在二氫吲哚環的4-或5-位被取代的1-氧代和1，3-二氧代異二氫吲哚，所述文獻被納入本文作為參考。代表性化合物為下式及其鹽
其中標有C*的碳原子構成手性中心(當n不為零而且R1與R2不相同時)；X1和X2中一個為氨基、硝基、包含一至六個碳的烷基、或NH-Z，X1和X2中另一個為氫；R1和R2分別獨立地為羥基或NH-Z；R3為氫、包含一至六個碳的烷基、滷素、或滷代烷基；Z為氫、芳基、包含一至六個碳的烷基、甲醯基、或包含一至六個碳的醯基；n值為0、1或2；條件是如果X1為氨基並且n為1或2，則R1和R2不同時為羥基。
其它代表性化合物為下式
其中當n不為零而且R1與R2不相同時，標有C*的碳原子構成手性中心；X1和X2中一個為氨基、硝基、包含一至六個碳的烷基、或NH-Z，X1和X2中另一個為氫；R1和R2分別獨立地為羥基或NH-Z；R3為包含一至六個碳的烷基、滷素或氫；Z為氫、芳基、或包含一至六個碳的烷基或醯基；n值為0、1或2。
具體的例子包括但不限於2-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-4-氨基甲醯基-丁酸和4-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-4-氨基甲醯基-丁酸、及其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、前藥和立體異構體，它們分別具有下列結構

和
其它代表性化合物為下式及其鹽
其中當n不為零而且R1與R2不相同時，標有C*的碳原子構成手性中心；X1和X2中一個為氨基、硝基、包含一至六個碳的烷基、或NH-Z，X1和X2中另一個為氫；R1和R2分別獨立地為羥基或NH-Z；R3為包含一至六個碳的烷基、滷素或氫；Z為氫、芳基、或包含一至六個碳的烷基或醯基；n值為0、1或2。
具體例子包括但不限於4-氨基甲醯基-4-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1，3-二氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基}-丁酸、4-氨基甲醯基-2-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1，3-二氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基}-丁酸、2-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1，3-二氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基}-4-苯基氨基甲醯基-丁酸和2-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1，3-二氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基}-戊二酸及其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、前藥和立體異構體，它們分別具有下列結構
。
所述化合物的其它具體例子為下式
其中X1和X2中一個為硝基、或NH-Z，X1和X2中另一個為氫； R1和R2分別獨立地為羥基或NH-Z； R3為包含一至六個碳的烷基、滷素、或氫； Z為氫、苯基、包含一至六個碳的醯基、或包含一至六個碳的烷基；和n值為0、1或2； 條件是如果X1和X2中一個為硝基並且n為1或2，則R1和R2不是羥基；和 如果-COR2和-(CH2)nCOR1不相同，則標有C*的碳原子構成手性中心。其它代表性化合物為下式
其中X1和X2中一個為包含一至六個碳的烷基； R1和R2分別獨立地為羥基或NH-Z； R3為包含一至六個碳的烷基、滷素、或氫； Z為氫、苯基、包含一至六個碳的醯基、或包含一至六個碳的烷基；和n值為0、1或2；和 如果-COR2和-(CH2)nCOR1不相同，則標有C*的碳原子構成手性中心。
本發明的其它具體免疫調節化合物包括但不限於美國專利6,458,810所述在2-位用2，6-二氧代-3-羥基哌啶-5-基取代的異二氫吲哚-1-酮和異二氫吲哚-1，3-二酮，該文獻被納入本文作為參考。代表性化合物為下式
其中 標有*的碳原子構成手性中心； X為-C(O)-或-CH2-； R1為包含1至8個碳原子的烷基或-NHR3； R2為氫、包含1至8個碳原子的烷基、或滷素；和 R3為氫， 包含1至8個碳原子的烷基，未取代或用包含1至8個碳原子的烷氧基、滷素、氨基、或包含1至4個碳原子的烷基氨基取代， 包含3至18個碳原子的環烷基， 苯基，未取代或用包含1至8個碳原子的烷基、包含1至8個碳原子的烷氧基、滷素、氨基、或包含1至4個碳原子的烷基氨基取代， 苄基，未取代或用包含1至8個碳原子的烷基、包含1至8個碳原子的烷氧基、滷素、氨基、或包含1至4個碳原子的烷基氨基、或-COR4取代，其中 R4為氫， 包含1至8個碳原子的烷基，未取代或用包含1至8個碳原子的烷氧基、滷素、氨基、或包含1至4個碳原子的烷基氨基取代， 包含3至18個碳原子的環烷基， 苯基，未取代或用包含1至8個碳原子的烷基、包含1至8個碳原子的烷氧基、滷素、氨基、或包含1至4個碳原子的烷基氨基取代，或者 苄基，未取代或用包含1至8個碳原子的烷基、包含1至8個碳原子的烷氧基、滷素、氨基、或包含1至4個碳原子的烷基氨基取代。
本發明的化合物可以是購得的或是按照這裡所述的專利或專利申請中描述的方法製備的。此外，光學純的化合物可以是不對稱合成的或用已知的拆分劑或手性柱以及其它標準有機化學合成技術拆分。
本發明的各種免疫調節化合物具有一個或多個手性中心，並可以對映異構體的外消旋混合物或非對映異構體的混合物存在。本發明包括這些化合物的立體異構純形式的應用以及這些形式的混合物的應用。例如，含有等量或非等量本發明所述具體免疫調節化合物的對映異構體的混合物可用於本發明的方法和組合物。這些異構體可以是不對稱合成的或用已知的拆分劑或手性柱以及其它標準有機化學合成技術拆分。參見例如Jacques，J.等，Enantiomers，Racemates and Resolutions(Wiley-Interscience，紐約，1981)；Wilen，S.H.等，Tetrahedron 332725(1977)；Eliel，E.L.，Stereochemistryof Carbon Compounds(McGraw-Hill，NY，1962)；和Wilen，S.H.，Tables ofResolviyzg Agents and Optical Resolutions p.268(E.L.Eliel編，Univ.of NotreDame Press，Notre Dame，IN，1972)。
需要注意的是，如果所示結構和該結構的名稱之間有差異，應以所示結構為準。此外，如果結構或結構的一部分的立體化學沒有用例如黑體或虛線表示，則表示該結構或其部分應解釋為包括它所有的立體異構體。
5.3第二活性試劑 在本發明的方法中，免疫調節化合物可與其它藥理活性化合物(「第二活性試劑」)組合。相信某些組合在治療、預防和/或控制免疫缺陷疾病時將發揮協同作用。免疫調節化合物也可減輕與某些第二活性試劑有關的不良作用，而某些第二活性試劑可用來減輕與免疫調節化合物有關的不良作用。
一種或多種第二活性成分或藥劑可與免疫調節化合物一起用於本發明的方法。第二活性試劑可以是大分子(例如蛋白質)或小分子(例如合成的無機、有機金屬或有機分子)。
本發明還包括使用自有、天然和重組蛋白質。
本發明還包括天然蛋白質的變種和衍生物(例如改性的形式)，它們在體內具有至少一部分其所基於的蛋白質的藥理學活性。變種的例子包括但不限於如下蛋白質，其具有一個或多個不同於天然蛋白質形式中相應殘基的氨基殘基。術語「變種」還包括如下蛋白質，其缺少天然形式中通常存在的糖部分(例如非糖基化的形式)。衍生物的例子包括但不限於聚乙二醇化的衍生物和稠合蛋白，例如通過將IgG1或IgG3稠合至蛋白質或相關蛋白質的活性部分而形成的蛋白質。參見例如Penichet，M.L.和Morrison，S.L，J Immunol.Methods 24891-101(2001)。
在本發明的一個實施方案中，所述第二活性試劑可減少、消除、或防止與施用免疫調節化合物有關的不良作用。根據具體的免疫調節化合物和被治療的疾病或病症，不良作用可包括但不限於睏倦和嗜睡、頭暈和直立性低血壓、嗜中性白細胞減少、嗜中性白細胞減少導致的感染、HIV病毒負荷增加、心動過緩、史-約症候群和中毒性表皮壞死溶解症和癲癇發作(例如癲癇大發作痙攣)。
作為小分子的第二活性試劑也可用於減輕與施用免疫調節化合物相關的副作用。然而，像一些大分子一樣，相信當與免疫調節化合物聯合施用(例如在之前、之後或同時)時，許多小分子也能夠提供協同效果。
具體的第二活性試劑包括但不限於抗生素(治療或預防性的)，例如但不限於氨苄青黴素、四環素、青黴素、頭孢菌素類、鏈黴素、卡那黴素和紅黴素；抗病毒藥，例如但不限於金剛烷胺、金剛乙胺、阿昔洛韋和利巴韋林；免疫球蛋白；血漿；免疫增強藥，例如但不限於左旋咪唑和異丙肌苷；生物劑，例如但不限於γ-球蛋白、轉移因子、白介素和幹擾素；激素，例如但不限於胸腺激素；和其它免疫劑，例如但不限於B細胞刺激物(例如BAFF/BlyS)、細胞因子(例如IL-2、IL-4和IL-5)、生長因子(例如TGF-β)、抗體(例如抗CD40和IgM)、含有未甲基化CpG基元的寡核苷酸(例如TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT)和疫苗(例如病毒和腫瘤肽疫苗)。
在另一個實施方案中，本發明的方法可與用於治療、預防和/或控制免疫缺陷疾病或病症的其它方法聯合使用。其它方法的例子包括但不限於幹細胞移植、使用例如牛腺苷脫氨酶綴合的聚乙二醇(PEG-ADA)的酶替代療法、胎兒胸腺移植、培養的新生胸腺移植、胸腺上皮細胞移植和胎兒肝移植。
5.4治療和預防方法 本發明的方法包括治療、預防和/或控制各種免疫缺陷疾病或病症的方法。所述免疫缺陷疾病或病症的例子包括但不限於腺苷脫氨酶缺乏、具有正常或升高免疫球蛋白的抗體缺乏、毛細血管擴張性共濟失調、裸淋巴細胞症候群、普通可變型免疫缺陷、迪喬治症候群、具有過多IgM的免疫球蛋白缺乏、免疫球蛋白重鏈刪除、IgA缺乏、具有胸腺瘤的免疫缺陷、網狀組織發生不全、尼茲諾夫症候群、選擇性IgG子類缺乏、嬰兒期暫時性低丙種球蛋白血症、威-奧症候群、X連鎖無丙種球蛋白血症和X連鎖重症聯合免疫缺陷。
本發明所包含的方法包括向患有或可能患有免疫缺陷疾病或病症的患者(例如人)施用一種或多種本發明的免疫調節化合物、或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、立體異構體、或前藥。
在本發明的一個實施方案中，能夠以約0.10至約150mg/天的量，單劑量或分開每日劑量口服施用本發明的免疫調節化合物。在具體實施方案中，可以以約0.1至約1mg/天、或者每隔一天約0.1至約5mg的量施用4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-1，3-二酮。在具體實施方案中，可以以約1至約25mg/天、或者每隔一天約10至約50mg的量施用3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮。在另一個實施方案中，可以以約50mg/天的量施用3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮。在另一個實施方案中，可以以約25mg/天的量施用3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮。在另一個實施方案中，可以以約10mg/天的量施用3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮。
相信本發明的免疫調節化合物可有效激發患者的體液免疫。因此，在另一個實施方案中，本發明包括增強對免疫原的免疫響應的方法，該方法包括向需要這種增強的患者施用治療或預防有效量的本發明的免疫調節化合物、或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、立體異構體、或前藥。可以在患者暴露至免疫原之前、過程中、或之後施用免疫調節化合物。
在具體實施方案中，本發明的免疫調節化合物用於提高疫苗的效果，疫苗例如但不限於用於病原性疾病、癌症和自身免疫疾病的疫苗。疫苗的一個目標是提高對免疫原的免疫響應，從而形成對特定免疫原具有親和力的一群記憶B細胞(和T細胞)。不受具體理論的約束，相信由於本發明所用的免疫調節化合物顯示出提高B細胞TLR9的水平、增殖和活化，所以可增強記憶細胞的形成，可改進對抗免疫原的免疫保護。因此，本發明還包括增強患者對免疫原的免疫響應的方法，該方法包括向需要這種增強的患者施用免疫調節化合物和包括所述免疫原的疫苗。可以在施用疫苗之前、同時和之後施用免疫調節化合物。
可用於免疫調節化合物的合適疫苗包括但不限於包括來自動物、植物、細菌、原生動物、寄生蟲、病毒或其組合的抗原的疫苗。抗原性或免疫原性試劑可以是源自病毒的任何病毒肽、蛋白質、多肽、或其片段，包括但不限於RSV病毒蛋白，例如RSV F糖蛋白、RSV G糖蛋白；流感病毒蛋白，例如流感病毒神經氨酸酶、流感病毒血凝素；單純皰疹病毒蛋白，例如單純皰疹病毒糖蛋白，包括例如gB、gC、gD和gE。用於本發明組合物的抗原性或免疫原性試劑可以是病原性病毒的抗原，例如腺病毒(例如乳腺腺病毒和禽腺病毒)、皰疹病毒(例如單純皰疹病毒1、單純皰疹病毒2、單純皰疹病毒5和單純皰疹病毒6)、輕小病毒科(例如輕小病毒、腸桿菌相MS2、allolevirus)、痘病毒(例如脊椎動物痘病毒、副痘病毒、禽痘病毒、山羊痘病毒、兔痘病毒、豬痘病毒、軟體動物痘病毒和蟲痘病毒)、乳多空病毒(例如多瘤病毒和乳頭瘤病毒)、副粘病毒(例如副粘病毒、副流感病毒1)、mobillivirus(例如麻疹病毒)、麻疹病毒(例如流行性腮腺炎病毒)、肺病毒(例如肺病毒、人呼吸道合胞病毒)、肺炎病毒(例如禽肺炎病毒和人肺炎病毒)、微小RNA病毒(例如腸道病毒、鼻病毒、肝病毒(例如人肝炎A病毒)、心臟病毒和apthoviurs)、呼腸孤病毒(例如正呼腸病毒、環狀病毒、輪狀病毒、質型多角體病毒、fijivirus、phytoreovirus和oryzavirus)、逆轉錄病毒(例如哺乳動物B型逆轉錄病毒、哺乳動物C型逆轉錄病毒、鳥類C型逆轉錄病毒、D型逆轉錄病毒、BLV-HTLV逆轉錄病毒)、慢病毒(例如人免疫缺陷病毒1和人免疫缺陷病毒2)、泡沫病毒、黃病毒(例如C型肝炎病毒)、嗜肝DNA病毒(例如B型肝炎病毒)、披膜病毒(例如甲型病毒(例如辛德畢斯病毒)和風疹病毒(例如風疹病毒)、彈狀病毒(例如水皰病毒、狂犬病病毒、彈狀病毒、cytorhabdovirus和necleorhabdovirus)、沙粒病毒(例如沙粒病毒、淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒、Ippy病毒和拉沙病毒)和冠狀病毒(例如冠狀病毒和環曲病毒)的抗原。
在一個實施方案中，疫苗可以是包括癌症或腫瘤抗原的疫苗，包括但不限於KS 1/4 pan-癌抗原、卵巢癌抗原(CA 125)、前列腺烷酸磷酸鹽、前列腺特異性抗原、黑素瘤相關的抗原p97、黑素瘤抗原gp75、高分子量黑素瘤抗原(HMW-MAA)、前列腺特異性膜抗原、癌胚抗原(CEA)、多形上皮粘蛋白抗原、人奶脂肪小球抗原；結腸直腸腫瘤相關的抗原，例如CEA、TAG-72、CO 17-1A；GICA 19-9、CTA-1和LEA；伯基特淋巴瘤抗原38.13、CD 19；人B淋巴瘤抗原CD20、CD33；黑素瘤特異性抗原，例如神經節苷脂GD2、神經節苷脂GD3、神經節苷脂GM2、神經節苷脂GM3；細胞表面抗原的腫瘤特異性移植類型(TSTA)，例如病毒誘導的腫瘤抗原，包括T抗原DNA腫瘤病毒和RNA腫瘤病毒的包膜抗原；癌胚抗原-α-胎球蛋白，例如結腸CEA、膀胱腫瘤癌胚抗原；分化抗原，例如人肺癌抗原L6、L20、纖維肉瘤抗原、人白血病T細胞抗原Gp37、糖蛋白、鞘脂；乳腺癌抗原例如EGFR(表皮生長因子受體)、HER2抗原(p185HER2)、多形上皮粘蛋白(PEM)、惡性人淋巴細胞抗原APO-1；分化抗原如在胎兒紅細胞中發現的I抗原；原發性內胚層；在成人紅細胞中發生的I抗原；植入前胚胎、在胃腺癌中發現的I(Ma)；在乳腺上皮中發現的M18、M39；在骨髓細胞中發現的SSEA-1；在結腸直腸癌中發現的VEP8、VEP9、My1、VIM-D5、D156-22、TRA-1-85(血型H)；在結腸腺癌中發現的C14；在肺腺癌中發現的F3；在胃癌中發現的AH6、Y半抗原；在胚胎癌細胞中發現的Ley、TL5(血型A)；在A431細胞中發現的EGF受體；在胰腺癌中發現的E1系列(血型B)；在胚胎癌細胞中發現的FC 10.2；胃腺癌抗原；在腺癌中發現的CO-514(血型Lea)；在腺癌中發現的NS-10、CO-43(血型Leb)；在A431細胞的EGF受體中發現的G49；在結腸腺癌中發現的MH2(血型ALeb/Ley)；在結腸癌中發現的19.9；胃癌粘蛋白；在骨髓細胞中發現的T5A7；在黑素瘤中發現的R24；在胚胎癌細胞中發現的4.2、GD3、D1.1、OFA-1、GM2、OFA-2、GD2和M1:22:25:8；在8細胞階段胚胎中發現的SSEA-3和SSEA-4和來自皮膚T細胞淋巴瘤的T細胞受體來源的肽。
用於疫苗的免疫原可以是在正常條件下導致受體免疫響應的任何物質，包括但不限於多肽、肽、蛋白質、糖蛋白、脂質、核酸和多糖。可使用本領域技術人員已知的標準方法確定疫苗中免疫原的濃度，該濃度取決於免疫原的效能和性質。
可基於各種因素確定需要激發體液免疫的患者，這些因素包括但不限於人口統計學、遺傳因素和工作環境。居住在或旅行到高水平暴露至病原的地區的人可能是這種患者的一個例子。具有遺傳免疫疾病家庭史的人是另一個例子。而且，典型暴露於高水平病原(例如健康工作者)的人是這些患者的還一個例子。
除非另有說明，與當免疫響應一起使用時，術語「提高」在本文中指當向已經或正在用免疫調節化合物治療的受體施用抗原性或免疫原性試劑時，與單獨施用相同量的抗原性或免疫原性試劑的受體相比，抗體形成提高，這可通過本領域已知的確定抗體水平的任何常規方法來確定，例如比濁法、免疫電泳、輻射免疫測定和ELISA。在一些實施方案中，當使用本發明的方法時，與不使用所述方法時獲得的抗體形成相比，抗體形成增加約5％、10％、20％、50％、或100％或更多。
除非另有說明，本發明所用術語「免疫原」在本文中指可引發受體免疫響應，即形成抗體的任何外來物質。免疫原包括但不限於來自動物、植物、細菌、原生動物、寄生蟲、病毒或其組合的抗原。免疫原可以是導致受體免疫響應的任何物質，包括但不限於多肽、肽、蛋白質、糖蛋白和多糖。
5.4.1與第二活性試劑聯合治療 本發明的具體方法包括將本發明的免疫調節化合物、或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、立體異構體、或前藥與一種或多種第二活性試劑、或其它療法聯合施用。本文公開了本發明的免疫調節化合物的例子(參見例如5.2節)。本文還公開了第二活性試劑和其它療法的例子(參見例如5.3節)。
給患者施用免疫調節化合物和第二活性試劑可以以相同或不同的施用途徑同時或相繼進行。特定活性試劑的具體施用途徑的適用性將取決於活性試劑本身(例如，是否可口服施用而不會在進入血流之前分解)和被治療的疾病。本發明的免疫調節化合物的特別施用途徑是口服。施用第二活性試劑或本發明成分的特別途徑是本領域普通技術人員已知的。參見例如TheMerck Manual，1023-1041(第17版，1999)。
可基於所用具體試劑、被治療或控制的疾病類型、疾病的嚴重性和階段、以及本發明的免疫調節化合物和任何同時施用至患者的任選其它活性試劑的量，來確定第二活性試劑的施用量。根據本領域已知的常規程序，本領域普通技術人員能夠確定具體的數量。在開始時，可以從第二活性試劑的常規治療用量開始，然後根據上述因素調整數量。參見例如Physician′sDesk Reference(第56版，2004)。
在本發明的一個實施方案中，所述第二活性試劑是以約1至約1000mg、約5至約500mg、約10至約350mg、或約50至約200mg的量每天一次或每天兩次靜脈內或皮下施用的。第二活性試劑的具體劑量將取決於所用具體試劑、被治療或控制的疾病類型、疾病的嚴重性和階段、以及本發明的免疫調節化合物和任何同時施用至患者的任選其它活性試劑的量。
在一個實施方案中，本發明的免疫調節化合物可在使用常規療法之前、過程中或之後以約0.1至約150mg、優選約1至約25mg、更優選約2至約10mg的量每日單獨口服施用，或者與本文公開的第二活性試劑(參見例如5.3節)聯合施用。
5.4.2循環療法 在某些實施方案中，將本發明的預防或治療劑循環施用至患者。循環療法包括施用一段時間活性試劑，然後停止一段時間，並重複這種順序施用。循環療法可降低對一種或多種療法產生的抗性，避免或降低其中一種療法的副作用，和/或提高治療效果。
因此，在本發明的一個特定實施方案中，在四至六周的循環中，以單劑量或分劑量每日施用本發明的免疫調節化合物，循環中停藥約一周或二周。本發明還允許增加施用循環的頻率、數量和長度。因此，本發明的另一個特定實施方案包括施用更多循環本發明的免疫調節化合物，所述循環數高於單獨施用的典型循環數。在本發明的還一個特定實施方案中，以更高的循環次數施用本發明的免疫調節化合物，該循環次數在未同時施用第二活性成分的患者中典型地會造成劑量限制毒性。
在一個實施方案中，本發明的免疫調節化合物以約0.1至約150mg/天的劑量每日連續施用三周或四周，然後停止一或二周。優選每日連續施用4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-1，3-二酮，初次劑量為0.1至約5mg/天，以1至10mg/天的遞增劑量(每周)直至50mg/天的最大劑量，只要該療法可被耐受。在具體實施方案中，在四或六周的循環中，以約1、5、10或25mg/天的量、優選以約10mg/天的量將3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-1，6-二酮施用三至四周，然後停止一周或二周。
在本發明的一個實施方案中，本發明的免疫調節化合物和第二活性成分是口服施用的，在四到六周的循環中，在第二活性成分之前30至60分鐘施用本發明的免疫調節化合物。在本發明的另一個實施方案中，在每個循環中，在約90分鐘內，通過靜脈灌輸施用本發明的免疫調節化合物與第二活性成分的組合。在具體實施方案中，一個循環包括在三至四周內，每日施用約1至約25mg/天的3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮和約50至約200mg/m2/天的第二活性成分，然後停藥一或二周。在另一個具體實施方案中，每個循環包括在三至四周內，每天施用約5至約10mg/天的4-(氨基-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基)-異二氫吲哚-1，3-二酮和約50至約200mg/m2/天的第二活性成分，然後停藥一或二周。典型地，向患者施用的聯合治療的循環數將為約1至約24個循環，更典型地為約2至16個循環，甚至更典型地為約4至約3個循環。
5.5藥物組合物和劑型 藥物組合物可以以獨立的單一單位劑型製品使用。本發明的藥物組合物和劑型包括本發明的免疫調節化合物、或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、立體異構體、包合物、或前藥，和第二活性試劑。本發明的藥物組合物和劑型還可能包含一種或多種賦形劑。
本發明的藥物組合物和劑型也可能包含一種或多種額外的活性成分。因此，本發明的藥物組合物和劑型包含本文公開的活性成分(例如，免疫調節化合物和第二活性試劑)。本文公開了任選的第二或額外活性成分的例子(參見例如5.3節)。
本發明的單一單位劑型適合通過口服、黏膜(例如，鼻、舌下、陰道、口腔、或結腸)、腸胃外(例如皮下、靜脈內、大丸注射、肌內或動脈內)、局部(例如滴眼劑或其它眼科製劑)、透皮或經皮施用至患者。劑型的例子包括但不限於片劑；囊片；膠囊，如彈性軟明膠膠囊；扁囊劑；含片；錠劑；分散劑；栓劑；粉劑；氣霧劑(例如鼻噴霧或吸入劑)；凝膠劑；適合口服或黏膜施用至患者的液體劑型，包括懸浮劑(例如水性或非水性液體懸浮劑、水包油乳劑或油包水乳劑)、溶液劑和酏劑；適合腸胃外施用至患者的液體劑型；滴眼劑或適合局部施用的其它眼科製劑；以及可重配以提供適合腸胃外施用至患者的液體劑型的無菌固體(例如晶體或無定形固體)。
本發明的組合物、形狀和劑型類型通常根據其用途而改變。例如，用於疾病快速治療的劑型所含一種或多種活性成分的量可大於用於相同疾病長期治療的劑型所含的量。類似地，腸胃外劑型所含一種或多種活性成分的量將小於用於治療相同疾病的口服劑型所含的量。這些本發明所包括的具體劑型的方式以及其它方式將是相互不同的，並且是本領域普通技術人員容易了解的。參見例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing，Easton PA(1990)。
典型的藥物組合物和劑型含有一種或多種賦形劑。合適的賦形劑是藥學領域的熟練技術人員熟知的，合適的賦形劑的非限制性例子在本文中提供。某一具體賦形劑是否適合摻在藥物組合物或劑型中取決於本領域熟知的多種因素，其中包括但不限於將該劑型施用於患者的途徑。例如，口服劑型(如片劑)可含有不適合用於腸胃外劑型的賦形劑。具體賦形劑的適用性還可取決於劑型中的具體活性成分。例如，一些賦形劑(如乳糖)，或當暴露於水時可加速一些活性成分的分解。含有伯胺或仲胺的活性成分對這種加速的分解特別敏感。因此，本發明包括含有極少(若有的話)乳糖和其它單糖或二糖的藥物組合物和劑型。術語「無乳糖」在這裡表示乳糖的含量(若有的話)不足以在實質上加快活性成分的降解速度。
本發明的無乳糖的組合物可含有本領域熟知的賦形劑，這些賦形劑列在，例如，《美國藥典》(USP)25-NF20(2002)。通常，無乳糖的組合物含有藥學上可配伍且藥學上可接受量的活性成分、粘合劑/填料和潤滑劑。優選無乳糖劑型含有活性成分、微晶纖維素、預膠凝澱粉和硬脂酸鎂。
本發明還包括含有活性成分的無水藥物組合物和劑型，因為水將促進某些化合物的降解。例如，加水(例如5％)是製藥領域廣泛接受的一種模擬長期儲存以確定製劑隨時間的保存期或穩定性特徵的方法。參見例如，JensT.Carstensen，《藥物穩定性原則和實踐》(Drug StabilityPrinciples&Practice)，第二版，Marcel Dekker，NY，NY，1995，第379-80頁。實際上，水和熱將加速一些化合物的分解。因此，水對於製劑的作用將非常顯著，因為在製劑的製造、處理、包裝、儲存、運輸和使用過程中通常會遇到水分和/或溼氣。
本發明的無水藥物組合物和劑型可用無水或水分含量低的成分並在低溫度條件下製造。如果在製造、包裝和/或儲存過程中預計將會接觸水分和/或溼氣，則含有乳糖以及至少一種包含伯胺或仲胺的活性成分的藥物組合物和劑型優選是無水的。
無水藥物組合物應以保持其無水特性的方式製備和儲存。因此，無水組合物優選用已知可防止將它們暴露於水的材料來包裝，例如可將它們裝在合適的製劑盒中。合適的包裝的例子包括但不限於氣密箔、塑料、單位劑量容器(如小瓶)、壓泡包裝和窄條包裝。
本發明還包括含有一種或多種可降低活性成分分解速度的化合物的藥物組合物和劑型。這樣的化合物在本文被稱為「穩定劑」，其包括但不限於抗氧化劑(如抗壞血酸)、pH緩衝劑或鹽緩衝劑。
像賦形劑的量和類型一樣，劑型中具體類型活性成分的量可根據各種因素而改變，這些因素包括但不限於患者給藥途徑。然而，本發明的典型劑型包括數量為約0.10至約150mg的本發明的免疫調節化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、立體異構體、或前藥。典型的劑型含有數量為約0.1、1、2、5、7.5、10、12.5、15、17.5、20、25、50、100、150、或200mg的本發明的免疫調節化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、立體異構體、或前藥。在具體實施方案中，優選的劑型含有數量為約1、2、5、10、25或50mg的4-(氨基)-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-1，3-二酮。在具體實施方案中，優選的劑型含有數量為約5、10、25或50mg的3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮。典型的劑型含有數量為1至約1000mg、約5至約500mg、約10至約350mg、或約50至約200mg的第二活性成分。當然，藥劑的具體數量將取決於所用的具體藥劑、被治療或控制的疾病類型、以及本發明的免疫調節化合物和任何任選的同時施用至患者的其它活性試劑的量。
5.5.1口服劑型 適合口服給藥的本發明的藥物組合物可被製成分散劑型，例如但不限於片劑(例如咀嚼片)、囊片劑、膠囊劑和液體劑(例如，調味糖漿)。這種劑型含有預定量的活性成分，並可用本領域普通技術人員熟知的製藥方法來製造。通常可參見《雷明頓藥物科學》，第18版，Mack Publishing，EastonPA(1990)。
本發明的典型口服劑型是按照常規藥物混合物技術將活性成分與至少一種賦形劑充分混合製造的。賦形劑可有多種形式，這取決於給藥所要求的製劑形式。例如，適合用於口服液體或氣溶膠劑型的賦形劑包括但不限於水、二醇、油、醇、矯味劑、防腐劑和著色劑。適合用於固體口服劑型(例如，粉末劑、片劑、膠囊劑和囊片)的賦形劑的例子包括但不限於澱粉、糖類、微晶纖維素、稀釋劑、制粒劑、潤滑劑、粘合劑和崩解劑。
片劑和膠囊劑由於易於施用，是最優選的口服單位劑型，其中可使用固體賦形劑。如果需要的話，可用標準的水性或非水性技術將片劑包衣。可用任何製藥方法製造這種劑型。通常，藥物組合物和劑型是將活性成分與液體載體、細分散的固體載體或這兩者充分均勻混合來製造，如果有必要然後將產物製成所需形狀。
例如，可通過壓縮或模壓來製造片劑。壓縮片可通過在合適的機器中壓縮任選與賦形劑混合的自由流動形式(如粉末或顆粒)的活性成分來製造。模壓片可通過在合適的機器中模壓被惰性液體稀釋劑溼潤的粉末化合物的混合物來製造。
可用於本發明口服劑型的賦形劑的例子包括但不限於粘合劑、填充劑、崩解劑和潤滑劑。適合用於藥物組合物和劑型的粘合劑包括但不限於玉米澱粉、馬鈴薯澱粉或其它澱粉、明膠、天然和合成樹膠(如阿拉伯膠)、藻酸鈉、海藻酸、其它藻酸鹽、粉末狀黃蓍膠、瓜爾膠、纖維素及其衍生物(例如，乙基纖維素、醋酸纖維素、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈣)、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纖維素、預膠凝澱粉、羥丙基甲基纖維素(例如2208號，2906號，2910號)、微晶纖維素，以及它們的混合物。
微晶纖維素的合適形式包括但不限於以AVICEL-PH-101、AVICEL-PH-103、AVICEL RC-581、AVICEL-PH-105出售的材料(購自FMCCorporation，American Viscose Division，Avicel Sales，Marcus Hook，PA)，以及它們的混合物。一種具體的粘合劑是以AVICEL RC-581出售的微晶纖維素和羧甲基纖維素鈉的混合物。合適的無水或低水分含量的賦形劑或添加劑包括AVICEL-PH-103TM和Starch 1500 LM。
適合用於這裡所述藥物組合物和劑型的填料的例子包括但不限於滑石、碳酸鈣(例如顆粒或粉末)、微晶纖維素、粉末狀纖維素、葡聚糖結合劑、高嶺土、甘露醇、矽酸、山梨糖醇、澱粉、預膠凝澱粉，以及它們的混合物。本發明的藥物組合物中粘合劑或填充劑佔藥物組合物或劑型的重量百分比通常約為50％至約99％。
崩解劑被用於本發明的組合物以使片劑在暴露於含水環境時崩解。含有過多崩解劑的片劑可能會在儲存時崩解，而含有過少崩解劑的片劑可能不會以所需速度崩解或不會在所需條件下崩解。因此，崩解劑的充足量應既不太多也不太少，太多或太少都會不利地改變本發明固體口服劑型的活性成分的釋放。所用崩解劑的量將根據製劑類型而變，並可由本領域的一般技術人員方便地確定。典型的藥物組合物含有約0.5至約15重量百分比，優選約1至約5重量百分比的崩解劑。
可用於本發明的藥物組合物和劑型的崩解劑包括但不限於瓊脂、海藻酸、碳酸鈣、微晶纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉、交聚維酮、聚克立林鉀、羧甲基澱粉鈉、馬鈴薯澱粉或木薯澱粉、其它澱粉、預膠凝澱粉、其它澱粉、粘土、其它藻素、其它纖維素、樹膠以及它們的混合物。
可用於本發明的藥物組合物和劑型的潤滑劑包括但不限於硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、礦物油、輕礦物油、甘油、山梨糖醇、甘露醇、聚乙二醇、其它二醇、硬脂酸、月桂基硫酸鈉、滑石、氫化植物油(例如花生油、棉籽油、葵花籽油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油)、硬脂酸鋅、油酸乙酯、月桂酸乙酯、瓊脂，以及它們的混合物。其它潤滑劑包括，例如，syloid矽膠(AEROSIL200，由W.R.Grace Co.of Baltimore，MD製造)、合成二氧化矽的凝固氣溶膠(由Degussa Co.of Plano，TX銷售)、CAB-O-SIL(由Cabot Co.of Boston，MA出售的熱解二氧化矽產品)，以及它們的混合物。如果使用的話，潤滑劑的用量通常為摻有它們的藥物組合物或劑型重量的不到約1％。
本發明的具體固體口服劑型含有本發明的免疫調節化合物、無水乳糖、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸、膠體無水二氧化矽和明膠。
5.5.2延遲釋放劑型 本發明的活性成分可通過控制釋放裝置或通過本領域的一般技術人員熟知的輸遞裝置給藥。其例子包括但不限於下列美國專利中描述的那些3,845,770、3,916,899、3,536,809、3,598,123、以及4,008,719、5,674,533、5,059,595、5,591,767、5,120,548、5,073,543、5,639,476、5,354,556和5,733,566，它們分別被納入本文作為參考。這樣的劑型可用來提供一種或多種活性成分的緩慢或控制釋放，使用例如羥丙基甲基纖維素、其它聚合物基質、凝膠、可滲透膜、等滲系統、多層包衣、微顆粒、脂質體、微球體或它們的組合來提供不同比例的所需釋放特徵。本領域的一般技術人員已知的合適的控釋製劑包括這裡所述的那些，並可方便地選擇以用於本發明的活性成分。因此，本發明包括適合口服給藥的單一單位劑型，例如但不限於適合用於控制釋放的片劑、膠囊、膠丸和囊片。
所有控制釋放藥物產品的一個共同目的，使其藥物療效優於其不可控制的對應物的療效。理想情況下，在藥物治療中使用最佳設計的控制釋放製劑能夠在最短時間內用最少的藥物來治癒或控制症狀。控釋製劑的優點包括藥物活性延長、給藥頻率降低以及患者順應性提高。此外，控釋製劑可用來影響起效時間或其它特性，例如藥物的血液水平，因此可影響副作用(例如不良作用)的發生。
大多數控釋製劑被設計成最初釋放能迅速產生所需治療效果的藥物(活性成分)量，並逐步且連續釋放其它藥物量以在較長時間內保持這種治療或預防效果的水平。為在體內維持這種恆定的藥物水平，藥物必須以能夠替換被代謝並排出體外的藥物的量的速度從劑型中釋放。可通過各種條件刺激活性成分的受控釋放，其中包括但不限於pH、溫度、酶、水，或其它生理條件或化合物。
5.5.3腸胃外劑型 腸胃外劑型可通過各種途徑施用於患者，其中包括但不限於皮下、靜脈內(包括大丸注射)、肌肉內和動脈內。由於這種劑型的施用通常繞過患者對汙染物的天然防禦，因此腸胃外劑型優選為無菌的或者能夠在用於患者之前被滅菌。腸胃外劑型的例子包括但不限於注射用溶液、將溶解或懸浮於藥學上可接受的注射用載體中的乾燥產品、注射用懸液以及乳劑。
可用於本發明的腸胃外劑型的合適的栽體是本領域普通技術人員熟知的。其例子包括但不限於USP注射用水；水性載體，例如但不限於氯化鈉注射液、Ringer′s注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化鈉注射液以及乳酸鹽Ringer′s注射液；可與水混溶的載體，例如但不限於乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；以及非水性載體，例如但不限於玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯和苯甲酸苄酯。
可以將能夠提高本文所披露的一種或多種活性成分的溶解度的化合物摻入本發明的腸胃外劑型。例如，可用環糊精及其衍生物來提高本發明的免疫調節化合物及其衍生物的溶解度。參見例如美國專利號5,134,127，該專利被納入本文作為參考。
5.5.4局部和黏膜劑型 本發明的局部和黏膜劑型包括但不限於噴霧劑、氣溶膠、溶液、乳劑、懸浮劑、滴眼劑或其它眼製劑，或其它本領域普通技術人員已知的形式。參見例如《雷明頓藥物科學》，第16和18版，Mack Publishing，Easton PA(1980和1990)；以及《藥物劑型介紹》(Introduction to Pharmaceutical DoseForms)，第4版，Lea&Febiger，Philadelphia(1985)。適用於治療口腔黏膜組織的劑型可被製成漱口液或口腔凝膠。
可用於本發明的局部和黏膜劑型的合適的賦形劑(例如載體和稀釋劑)以及其它材料是製藥領域普通技術人員熟知的，並取決於所給藥物組合物或劑型將施用的具體組織。典型的賦形劑包括但不限於水、丙醇、乙醇、乙二醇、丙二醇、丁-1，3-二醇、肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、礦物油，以及它們的混合物，用來形成無毒且藥學上可接受的溶液、乳劑或凝膠。如果需要的話也可在藥物組合物和劑型中添加潤溼劑或保溼劑。這種添加成分的例子是本領域熟知的。參見例如《雷明頓藥物科學》，第16和18版，Mack Publishing，Easton PA(1980和1990)。
可調節藥物組合物或劑型的pH值以促進一種或多種活性成分的遞送。類似地，可調節溶劑載體的極性、其離子強度或張力以促進遞送。可在藥物組合物或劑型中添加硬脂酸酯之類的化合物以有利的改變一種或多種活性成分的親水性或親脂性，以便促進遞送。在這點上，硬脂酸酯可作為製劑的脂質載體、乳化劑或表面活性製劑，以及作為遞送增強劑或滲透增強劑。還可用活性成分的不同的鹽、水合物或溶劑化物來調節所得組合物的特性。
5.5.5試劑盒 通常，本發明的活性成分優選不同時或不通過相同給藥途徑施用於患者。因此，本發明包括試劑盒，當執業醫師使用這種試劑盒時能夠簡化將適當量的活性成分施用於患者。
典型的本發明的試劑盒包含本發明的免疫調節化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、立體異構體、前藥的劑型。本發明的試劑盒中還可含有其它活性成分。其它活性成分的例子包括但不限於這裡所述的那些(參見例如5.3節)。
本發明的試劑盒還可包含用來施用所述活性成分的裝置。這種裝置的例子包括但不限於針筒、滴液袋、貼片和吸入器。
本發明的試劑盒還可包括移植用的細胞或血液以及用於施用一種或多種活性成分的藥學上可接受的運載體。例如，如果活性成分以必須重新配製以進行胃腸外給藥的固體形式提供，則試劑盒可含有裝有合適載體的密封容器，所述活性成分可溶於這種運載體以形成適合腸胃外給藥的不含顆粒的無菌溶液。藥學上可接受的載體的例子包括但不限於USP注射用水；水性運載體，例如但不限於氯化鈉注射液、Ringer′s注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化鈉注射液以及乳酸鹽Ringer′s注射液；可與水混溶的運載體，例如但不限於乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；以及非水性運載體，例如但不限於玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯和苯甲酸苄酯。
6.實施例 通過下面非限制性實施例說明本發明的某些實施方案。
6.1材料和方法 6.1.1材料 從San Diego Blood Bank獲得來自健康捐獻者的血沉棕黃層(50ml)。抗CD40(#5555587)、FITC綴合的抗人CD69(#5555530)、FITC綴合的抗人CD40(#555588)、PE綴合的抗人CD80(#557227)、PerCP-Cy5.5綴合的抗人HLA-DR(#552764)CD40配體(CD154，#555698)購自BD Pharmingen。來自大腸桿菌(#L6529)的LPS購自Sigma。重組人IL-4(#200-04)購自Pepro Tech。羊抗人IgM(Fc5u片段，#109-006-129)購自Jackson Immuno Research，LabInc。細胞增殖ELISA(BrdU，#1-647-229)購自Roche Applied Science。PE抗人TLR 9(#12-9099，克隆# eB72-1665)購自eBioscience。磷酸-STAT6(#9361)購自Cell Signaling。
6.1.2 HPBMCS的純化和CD19+細胞的分離 用50ml無菌PBS(不含Ca++、Mg++)稀釋人血沉棕黃層(50ml)，輕柔地混合。將25ml等份的稀釋血沉棕黃層轉移到各50ml離心管中，將Histopaque-1077(14ml，#1077-1，Sigma)輕柔地鋪到試管底部。在室溫下，以2,000rpm將樣品離心30min。將包含單核細胞的界面轉移到50ml離心管中，用PBS(1200rpm，5min)洗滌一次。棄去上清液。將細胞小丸再懸浮於Miltenyi緩衝液中。將抗CD 19+微珠添加到懸浮液中(107細胞在80μl緩衝液中，20μl抗體珠子用於107細胞)，在4℃培育15min。將細胞小丸洗滌一次，再懸浮於1ml Miltenyi緩衝液中。將細胞懸浮液添加到磁性柱上，在柱中用10ml Miltenyi緩衝液洗滌。通過無磁場的1ml Miltenyi緩衝液釋放CD19+細胞。用RPMI完全培養基將CD19+細胞洗滌兩次。將B細胞(2×105)鋪到96孔平板上。
6.1.3用抗IgM、抗CD40、LPS、BAFF和IL-4刺激B細胞 用濃度為60μM、6μM、0.6μM、0.06μM、0.006μM和0.0006μM的1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚或1-氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚將B細胞預處理30分鐘，然後添加2μg/ml抗IgM、2μg/ml抗CD40、40ng/ml IL-4、100ng/ml重組BAFF和/或0.5μg/mlLPS。典型地單獨用免疫調節化合物或在一種或多種上述刺激物存在的情況下，將B細胞處理3天。將用或沒有用免疫調節化合物處理的受刺激B細胞用於細胞增殖測定和細胞因子分析。
6.1.4 IgE ELISA 在抗CD40(2μg/ml)和IL-4(40ng/ml)存在的情況下，用免疫調節化合物將人PBMC(1×106/ml)處理三周。根據製造商的說明書，將15μl上清液用於IgE ELISA。通過ELISA讀數計，在OD＝450nm處讀取吸光度。
6.1.5 Western印跡 用10μM和1μM的1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚將CD-19 B細胞(2×106/ml)預處理30分鐘。在30分鐘內，將IL-4(100ng/ml)添加到細胞懸浮液中，用PBS將細胞小丸洗滌一次，用50μl樣品緩衝液裂解。將細胞裂解物在100℃加熱5分鐘，將20μl細胞裂解物裝載到4-20％ Tris-甘氨酸SDS-PAGE(Invitrogen)上。將轉移膜用1∶1000抗磷酸STAT6抗體(Cell signaling)在4℃孵育過夜，然後用HRP綴合的抗兔抗體的第二抗體孵育。根據製造商的說明書，通過ECL試劑盒產生膜信號。
6.2 CD80、CD40和HLA-DR表達的FACS分析 在LPS；CD40配體和IL-4；或BAFF存在的情況下，用1μM 1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚將B細胞處理3天。用PBS將B細胞懸浮液洗滌一次，用FITC綴合的抗人CD40、PE綴合的抗人CD80、或PerCP-Cy5.5綴合的抗人HLA-DR在暗處孵育30分鐘。使用BDFACSAria(BD biosciences)，對B細胞進行FACS分析。
CD80、CD40和HLA-DR是B細胞活化的分子標記物。如圖1A所示，在CD40配體和IL-4存在的情況下，用1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚處理的正常B細胞具有增加的CD80表達。而且，如圖1B所示，當用1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚處理細胞時，表達CD80的B細胞數量也增加了。在用BAFF或LPS處理的B細胞中，1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚還上調了CD40(圖2A)和HLA-DR的表達。這些結果顯示，本發明的免疫調節化合物能夠刺激B細胞活化。
6.3 CD69表達的FACS分析 在抗IgM、抗CD40和IL-4存在的情況下，用1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚(圖3A)或1-氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚(圖3B)將B細胞處理3天。用PBS將B細胞懸浮液洗滌一次，用FITC綴合的抗人CD69在暗處孵育30分鐘。使用流式細胞儀(EPICSXL-MCL，Beckman Coulter Company)，對B細胞進行FACS分析。
CD69是B細胞活化的另一種分子標記物。如圖3A和3B所示，在用抗人IgM、抗人CD40和重組人IL-4處理的CD19+B細胞中，1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚和1-氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚兩者都可劑量依賴性地提高CD69的表達。這些結果顯示，本發明的免疫調節化合物能夠增強B細胞活化。
6.4 IMiDs對TNF-α表達的影響 在用1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚或1-氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚處理的B細胞中，使用TNFαELISA確定TNFα水平。如圖4所示，1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚和1-氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚兩者都可劑量依賴性地提高B細胞中TNFα的產生。
6.5通過LUMINEX測定細胞因子IL-6 在抗IgM、抗CD40和IL-4存在的情況下，用60μM、6μM、0.6μM、0.06μM、0.006μM和0.0006μM 1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚將B細胞處理3天。收集上清液(25μl)，用25μl抗IL-6珠子孵育約1小時。將珠子洗滌三次，然後用25μl檢測抗體、然後用鏈黴抗生物素-藻紅蛋白培育1小時。將珠子洗滌三次，然後再懸浮在100μl鞘液中。在Bio-Plex儀(Bio-Rad)上讀取平板。如圖5所示，1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚與抗IgM、抗CD40和IL-4組合時，免疫調節化合物以劑量依賴的方式提高IL-6的表達(圖5B)，但單獨時不能提高IL-6的表達(圖5A)。
6.6活化B細胞的形態變化 在抗IgM、抗CD40和IL-4存在的情況下，用1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚將B細胞處理3天。用MetaMorph軟體，使用相差顯微鏡捕獲圖像。
6.7 BrdU ELISA的細胞增殖 B細胞受體抗原(「BCR」)的交聯是B細胞活化以響應抗原的基本信號，這對於啟動隨後的B細胞活化、增殖和分化很關鍵。要評價B細胞活化，在刺激物的存在下，用1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚將B細胞處理3天。將25μl BrdU添加到250μl細胞培養物中，在24小時後收穫細胞。在除去標記上清液後，將B細胞在60℃乾燥。在室溫下，加入100μl FixDenat溶液以固定細胞30分鐘。通過輕敲平板除去FixDenat溶液，然後在室溫下，向各孔添加100μl抗BrdU-POD孵育90分鐘，將平板洗滌3次。將100μl底物添加到平板中孵育10分鐘，然後添加100μl停止溶液。通過使用ELISA微板讀數計(Molecular Devices)，在OD 450nm處測量吸光度。如圖7A所示，儘管兩種免疫調節化合物單獨對B細胞活化具有很小的效果，但當與IgM組合時，它們均可提高B細胞的增殖，IgM起到使B細胞表面的BCR交聯的作用，從而導致活化B細胞。
形態變化也支持IMiDs共刺激B細胞以驅使它們增殖。如圖7B所示，當用1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚和抗IgM處理時，B細胞形成巨大的聚集物，這明顯不同於未刺激的B細胞或用單獨的1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚、或者1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚與抗CD40加IL-4處理的B細胞。顯然，IMiDs可作為BCR的共刺激物來促進B細胞增殖。
其它因素也可導致B細胞活化和增殖。在這點上，還檢查了由LPS和BAFF信號介導的B細胞增殖。如圖7C所示，1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚顯示出與抗IgM類似的效果。LPS結合至BCR以活化B細胞，而BAFF通過BAFF受體引發獨特的B細胞響應。1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚對BCR和BAFF細胞信號的調節顯示，IMiDs能夠有效促進體液免疫響應，尤其是胸腺非依賴性響應。
6.8 FACS陣列的TLR9表達 在刺激物存在的情況下，用濃度為60μM、6μM、0.6μM、0.06μM、0.006μM和0.0006μM的1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚將B細胞處理3天。用1％多聚甲醛將B細胞固定30分鐘，然後用1％Triton X-100將細胞滲透化30分鐘。用抗人TLR 9抗體R-PHYCOERYTHIN(PF)綴合的抗人TLR9抗體將B細胞在暗處孵育1小時(0.5μg/106細胞)。然後用PBS將B細胞洗滌一次。將B細胞再懸浮在包含1％BSA的150μl PBS中，在FACS陣列儀(BD Bioscience)中讀數。圖8A-8D顯示，免疫調節化合物與其它刺激物、尤其是與IgM組合，可增加TLR表達。
6.9對細胞因子信號的作用 使用上面6.1.3節所述的方法，檢查免疫調節化合物對影響B細胞增殖的細胞因子信號的作用。如圖9A-9C所示，免疫調節化合物對IL-4誘導的細胞增殖顯示抑制作用，而對IL-2、IL-5和IFN-γ誘導的細胞增殖顯示促進作用。結果總結於圖9D中。
6.9.1對IL-4介導的B細胞活化的作用 要評價免疫調節化合物對IL-4信號的作用是否會影響IL-4介導的B細胞活化，使用1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚或1-氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚，在一式三份的六個劑量下檢查立即早期表達標記物CD69表達的FACS陣列。如圖10A和B所示，在IL-4刺激的CD19+ B細胞中，兩種免疫調節化合物都沒有抑制CD69表達。因此，顯然免疫調節化合物對該過程沒有影響。
6.9.2 IMiDs通過STAT 6信號抑制IgE合成 在免疫球蛋白類轉化過程中，IL-4是B細胞產生IgE的獨特信號。要評價免疫調節化合物是否能夠調節IgE合成，在CD40+IL-4存在的情況下，將1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚或1-氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚與人PBMC培育三周。數據顯示，這些化合物事實上以劑量依賴的方式抑制IgE合成，其IC50為約0.1μM-0.3μM(圖11A和B)。
免疫調節化合物還抑制IgG1的合成，該合成也由IL-4信號介導(圖11C)。已經顯示IL-4與受體結合，以引發STAT 6信號來促進IgE基團轉錄。由於STAT6的活化對IL-4誘導的IgE和IgG1類轉化很重要，所以研究免疫調節化合物是否能夠抑制STAT6的磷酸化。用1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚將B細胞預處理30分鐘，然後用100ng/ml IL-4刺激30分鐘。通過抗磷酸STAT6(Tyr 641)評價STAT6的活化。數據顯示，免疫調節化合物可阻斷STAT6的磷酸化(圖11D)。
除了抑制IL-4誘導的增殖外，還檢查了CD40+IL-4誘導的HLA-DR表達。用1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚和CD40L+IL-4將B細胞處理72小時，用FACS測量細胞表面表達標記物CD40和HLA-DR。數據顯示，B細胞能夠被活化以響應單獨的刺激，但沒有觀察到免疫調節化合物的提高作用(圖11E)。相反，對於用BAFF處理的B細胞，1，3-二氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚可將CD40的表達提高60％，將HLA-DR的表達提高86％(圖11F)。該數據與前面的觀察一致，即免疫調節化合物對CD40+IL-4信號沒有影響。因此，顯示免疫調節化合物可阻斷與B細胞增殖的抑制相關的CD40/IL-4/IgE信號。
6.10各種IMiDs對IgE產生的抑制 6.10.1 方法 PBMC的處理將200μl的1×106/ml人PBMC鋪到96孔平板中，以給定濃度(60、6、0.6、0.06、0.006、0.0006μM)的IMiDs將細胞預處理30分鐘。將抗CD40(#AHS4002，Biosource，2μg/ml)和IL-4(#200-04，PeproTech，40ng/ml)添加到各孔中。在IMiDs、抗CD40和IL-4存在的情況下，將人PBMC培育三周。對15μl上清液進行IgE ELISA。
IgE ELISAIgE ELISA定量試劑盒購自Bethyl Laboratories，Inc.(#E80-108)。在室溫下，用1∶1000山羊抗人IgE包被Nunc-Immuno ELISA平板(Nalge Nunc International)1小時，用1％BSA將平板封閉30分鐘。將15μl上清液和100μl IgE標準添加到各孔中，在室溫下培育2小時。然後用PBS將平板洗滌3次。將100μl山羊抗人IgE-HRP綴合的抗體添加到各孔中，孵育60分鐘。在ELISA平板讀數計中，在OD＝450nm處讀取ELISA平板。
6.10.2結果 如下面表1所示，在12個IMiDs測定中，五個在抑制IgE合成方面顯示出特別有效的性質。IgE的抑制與IMiDs的抗炎性質相關。表2顯示IgE抑制與IMiDs對IFN-γ和IL-2的EC50的相關性。由於IFN-γ是IL-4/IgE信號的強大拮抗劑，所以結果提示，該體系中IFN-γ的有效刺激可能涉及IgE抑制的機理。這些結果暗示IMiDs在所有變應性疾病中的治療功效。
表1IgE抑制與促炎細胞因子之間的相關性 表2 IgE抑制與IFN-γ/IL-2刺激之間的相關性 本文引用的所有文獻均被全文納入本文作為參考。儘管根據具體實施方案描述了本發明，但本領域技術人員將明白，在不背離所附權利要求書指出的本發明精神或範圍的情況下，可以進行各種變化和修改。
上述發明實施方案僅僅用於示例，僅使用常規實驗，本領域技術人員將意識到或者將能夠確定具體化合物、材料和方法的許多等價物。認為所有這些等價物均在本發明的範圍內，並包括在所附權利要求書中。
權利要求
1.一種治療、控制或預防免疫缺陷疾病或病症的方法，所述方法包括向需要這種治療、控制或預防的患者施用治療或預防有效量的免疫調節化合物、或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、或立體異構體。
2.一種治療、控制或預防免疫缺陷疾病或病症的方法，所述方法包括向需要這種治療、控制或預防的患者施用治療或預防有效量的免疫調節化合物、或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、或立體異構體，和治療或預防有效量的第二活性試劑。
3.如權利要求1或2所述的方法，其中所述免疫缺陷疾病或病症是原發性免疫缺陷或繼發性免疫缺陷。
4.如權利要求3所述的方法，其中所述免疫缺陷疾病或病症是原發性免疫缺陷。
5.如權利要求1或2所述的方法，其中所述免疫缺陷疾病或病症為腺苷脫氨酶缺乏、具有正常或升高的免疫球蛋白的抗體缺乏、毛細血管擴張性共濟失調、裸淋巴細胞症候群、普通可變型免疫缺陷、迪喬治症候群、具有過多IgM的免疫球蛋白缺乏、免疫球蛋白重鏈刪除、IgA缺乏、具有胸腺瘤的免疫缺陷、網狀組織發生不全、尼茲諾夫症候群、選擇性IgG亞型缺乏、嬰兒期暫時性低丙種球蛋白血症、威-奧症候群、X連鎖無丙種球蛋白血症、或X連鎖重症聯合免疫缺陷。
6.如權利要求5所述的方法，其中所述免疫缺陷疾病或病症為X連鎖無丙種球蛋白血症。
7.如權利要求2所述的方法，其中所述第二活性試劑為抗生素、抗病毒藥、免疫球蛋白、血漿、免疫增強藥、生物劑、或激素。
8.如權利要求7所述的方法，其中所述抗生素為氨苄青黴素、四環素、青黴素、頭孢菌素類、鏈黴素、卡那黴素、或紅黴素。
9.如權利要求7所述的方法，其中所述抗病毒藥為金剛烷胺、金剛乙胺、阿昔洛韋、或利巴韋林。
10.如權利要求7所述的方法，其中所述免疫增強藥為左旋咪唑或異丙肌苷。
11.如權利要求7所述的方法，其中所述生物劑為轉移因子、白介素、或幹擾素。
12.如權利要求7所述的方法，其中所述激素為胸腺激素。
13.一種增強對免疫原的免疫響應的方法，該方法包括向有需要的患者施用治療或預防有效量的免疫調節化合物、或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、或立體異構體。
14.如權利要求13所述的方法，其中在個體暴露至免疫原之前施用所述免疫調節化合物。
15.如權利要求13所述的方法，其中在個體暴露至免疫原的過程中施用所述免疫調節化合物。
16.如權利要求13所述的方法，其中在個體暴露至免疫原之後施用所述免疫調節化合物。
17.如權利要求1、2、或13所述的方法，其中所述免疫調節化合物為4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-1，3-二酮。
18.如權利要求17所述的方法，其中所述免疫調節化合物是對映異構體純的。
19.如權利要求1、2、或13所述的方法，其中所述免疫調節化合物為3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮。
20.如權利要求19所述的方法，其中所述免疫調節化合物是對映異構體純的。
21.如權利要求1、2、或1 3所述的方法，其中所述免疫調節化合物為式(I)的化合物
其中X和Y中的一個為C＝O，X和Y中的另一個為C＝O或CH2；R2為氫或低級烷基。
22.如權利要求21所述的方法，其中所述免疫調節化合物是對映異構體純的。
23.如權利要求1、2、或13所述的方法，其中所述免疫調節化合物為式(II)的化合物
其中
X和Y中的一個為C＝O，另一個為CH2或C＝O；
R1為氫、(C1-C8)烷基、(C3-C7)環烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、苄基、芳基、(C0-C4)烷基-(C1-C6)雜環烷基、(C0-C4)烷基-(C2-C5)雜芳基、C(O)R3、C(S)R3、C(O)OR4、(C1-C8)烷基-N(R6)2、(C1-C8)烷基-OR5、(C1-C8)烷基-C(O)OR5、C(O)NHR3、C(S)NHR3、C(O)NR3R3′、C(S)NR3R3′或(C1-C8)烷基-O(CO)R5；
R2為氫、F、苄基、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、或(C2-C8)炔基；
R3和R3′獨立地為(C1-C8)烷基、(C3-C7)環烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、苄基、芳基、(C0-C4)烷基-(C1-C6)雜環烷基、(C0-C4)烷基-(C2-C5)雜芳基、(C0-C8)烷基-N(R6)2、(C1-C8)烷基-OR5、(C1-C8)烷基-C(O)OR5、(C1-C8)烷基-O(CO)R5、或C(O)OR5；
R4為(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C1-C4)烷基-OR5、苄基、芳基、(C0-C4)烷基-(C1-C6)雜環烷基、或(C0-C4)烷基-(C2-C5)雜芳基；
R5為(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、苄基、芳基、或(C2-C5)雜芳基；
每個存在的R6獨立地為H、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、苄基、芳基、(C2-C5)雜芳基、或(C0-C8)烷基-C(O)O-R5，或者多個R6基團連接起來形成雜環烷基；
n為0或1；和
*表示手性碳中心。
24.如權利要求23所述的方法，其中所述免疫調節化合物是對映異構體純的。
25.一種藥物組合物，其包括免疫免疫調節化合物、或其藥學上可接受的鹽、溶劑化物、或立體異構體，和第二活性成分，其中所述第二活性成分為抗生素、抗病毒藥、免疫球蛋白、血漿、免疫增強藥、生物劑、或激素。
26.如權利要求25所述的藥物組合物，其中所述抗生素為氨苄青黴素、四環素、青黴素、頭孢菌素類、鏈黴素、卡那黴素、或紅黴素。
27.如權利要求25所述的藥物組合物，其中所述抗病毒藥為金剛烷胺、金剛乙胺、阿昔洛韋、或利巴韋林。
28.如權利要求25所述的藥物組合物，其中所述免疫增強藥為左旋咪唑或異丙肌苷。
29.如權利要求25所述的藥物組合物，其中所述生物劑為轉移因子、白介素、或幹擾素。
30.如權利要求25所述的藥物組合物，其中所述激素為胸腺激素。
全文摘要
本發明公開了治療、預防和/或控制免疫缺陷疾病或病症的方法。具體的方法包括單獨或與第二活性試劑組合施用免疫調節化合物。本發明還公開了激發體液免疫的方法。
文檔編號A61P37/02GK101111234SQ200580047364
公開日2008年1月23日 申請日期2005年11月30日 優先權日2004年12月1日
發明者徐偉明, 蘿拉·G·克拉爾 申請人:細胞基因公司