免疫測定的製作方法

2023-12-01 08:51:16 1

專利名稱：免疫測定的製作方法
技術領域：
本發明涉及利用磁性顆粒免疫學測量(免疫測定)流體(例如生物樣品)中抗原性物質的方法。
背景技術：
近年來在醫院、測試中心等地，由於人力短缺、成本削減目的、處理大量樣品的需要等，一直嘗試各種測試(包括臨床檢驗)的自動化和/或節約大量的測試時間。對於適合自動化的技術，其中利用不溶性磁性載體顆粒對抗原性物質進行定性或定量測定的方法引人注目。利用這種不溶性磁性載體顆粒的目的之一在於，在測定中利用磁場作用容易實現無法避免的B/F分離。
此外，在利用這種不溶性磁性載體顆粒的免疫化學領域，一直使用結合抗原或抗體的不溶性磁性顆粒(致敏的不溶性磁性顆粒)，其中該磁性載體攜帶與待測目標分析物相同的抗原或抗體。就測定流體(檢驗樣品)、例如生物樣品中的抗原性物質而言，本領域公知(例如JP，A，06-160387(1994)和JP，A，07-72,155(1995)所述)其包含以下兩個步驟，所述的檢驗樣品與預先吸附和攜帶能夠特異性結合所述抗原性物質或其片段的不溶性磁性顆粒混合，然後測定所述抗原性物質與不溶性磁性顆粒結合的程度，從而檢出或定量所述的抗原性物質。
然而，如果將抗體等預先吸附於不溶性磁性顆粒並用於測定，則致敏的不溶性磁性顆粒的穩定性問題不可避免。因此，無論如何努力，仍然存在包括試劑的使用期限(best-before-period)、製備困難等難題。此外，如果長期保存還有另一難題，致敏的不溶性磁性顆粒在其懸浮液中容易沉澱。
為了節約人力或短時間內處理大量樣品，引入完全自動化臨床檢驗的測試儀器等，測試中的B/F分離通常需要進行洗滌處理。為使測定有效和快速，減少幾個步驟或者以簡單方式進行測定是無法迴避的問題。為此目的，近來嘗試開發利用不溶性磁性顆粒為載體的免疫測定系統，但在洗滌步驟中難免損失所用的不溶性磁性顆粒。這也引起該載體攜帶的寶貴抗體等的消耗。因而，使用磁性顆粒的自動化臨床檢驗儀器的缺點在於，由於使用相對大量的磁性顆粒而比通常的免疫測定需要更多的抗體等。還有因多次洗滌而損失顆粒的問題。
發明概述本發明人通過深入研究成功發現，對於測定檢驗樣品中的抗原性物質，不使用攜帶可與所述抗原性物質特異性結合的抗體的任何不溶性磁性載體顆粒，而是提供了其上基本不結合所述抗體等的不溶性磁性載體顆粒，所述抗原性物質(待測定的目標分析物)自身可以吸附於所述的不含抗體的不溶性磁性載體顆粒，然後與特異性針對所得吸附於所述顆粒的抗原性物質的標記抗體反應，從而能夠以合適的自動化方式有效測定檢驗樣品中的抗原性物質。本發明人因而成功完成了本發明。
更具體而言，本發明的免疫測定包含以下步驟提供基本上不含任何抗體等的不溶性磁性載體顆粒，然後將檢驗樣品中的抗原性物質吸附或結合所述的不溶性磁性載體顆粒，以及將得到的混合物與可特異性和所述吸附的抗原性物質反應的標記抗體反應，本免疫測定法因而能夠選擇性測定不溶性磁性載體顆粒上攜帶的抗原性物質。
為了確保易於定量，本發明優選根據特定測定項目，選擇包括生物材料濃度以及不溶性載體顆粒懸浮液的緩衝液濃度在內的條件，以便生物材料中的抗原性物質可與其存在量成比例地吸附於不溶性載體顆粒。
本發明提供(1)使用不溶性載體顆粒的免疫測定，其包含
(i)使用基本上不含任何吸附的抗原和/或抗體的不溶性磁性載體顆粒，(ii)將檢驗樣品中的抗原性物質吸附或結合所述的不溶性磁性載體顆粒，(iii)將從上述處理(ii)得到的不溶性磁性載體顆粒與特異性和某些所述的抗原性物質反應的標記抗體反應，所述抗體特異性與固相形式的抗原性物質反應，但基本上不與天然形式的抗原性物質反應，其中所述固相形式的抗原性物質附著於所述的不溶性載體顆粒，所述的天然形式的抗原性物質則仍然存在於液相中，以及(iv)測定通過所述的固相抗原性物質捕獲得到的標記抗體上的標記作為指標。
(2)根據上述(1)的免疫測定，其中所述的免疫測定包含(A)將所述檢驗樣品中的抗原性物質吸附或結合所述的不溶性磁性載體顆粒，以及(B)然後無需洗滌去除所述的檢驗樣品，將捕獲的抗原性物質與所述固相抗原性物質的特異反應性抗體進行反應；(3)根據上述(1)或(2)的免疫測定，其中所述的免疫測定包含(a)將所述的標記抗體與吸附或結合檢驗樣品中抗原性物質的不溶性磁性載體顆粒反應，(b)然後在磁場作用下，將未反應的標記抗體與不溶性磁性載體顆粒分離，以及(c)測定通過固相抗原性物質捕獲得到的標記抗體上的標記作為指標。
(4)根據上述(1)-(3)中任一項的免疫測定，其中所述的抗體是單克隆抗體；(5)根據上述(1)-(3)中任一項的免疫測定，其中所述的抗體是多克隆抗體；(6)權利上述(1)-(5)中任一項的免疫測定，其中所述的不溶性磁性載體顆粒選自基本上不溶於水性液體介質、並由有機聚合物材料相和磁性材料相組成的微粒；(7)根據上述(1)-(6)中任一項的免疫測定，其中所述不溶性磁性載體顆粒選自不僅包含由一種或多種有機聚合物材料組成的表層相、而且包含由一種或多種磁性材料組成的核心相的微粒；(8)根據上述(1)-(7)中任一項的免疫測定，其中所述的不溶性磁性載體顆粒選自其(a)平均顆粒大小0.01-20微米以及(b)核心由一種或多種磁性材料組成的膠乳顆粒；(9)根據上述(1)-(7)中任一項的免疫測定，其中所述的不溶性磁性載體顆粒選自平均顆粒大小為0.1-6微米以及核心由一種或多種磁性材料組成的膠乳顆粒；(10)根據上述(1)-(9)中任一項的免疫測定，其中所述的免疫測定可利用適合磁性顆粒的自動化臨床檢驗儀器或臨床化學自動分析儀，從分發檢驗樣品到獲得測試結果以自動化形式進行；以及(11)根據上述(1)-(10)中任一項的免疫測定，其中檢驗樣品中的抗原性物質是HbAlc。
本領域技術人員從以下公開內容顯而易見本發明的上述目的及其它目的、特徵、優點以及各個方面。然而應當理解，本說明書的描述，包括以下實施本發明的最佳方式、實施例等，是闡述本發明的優選實施方案，並只為說明目的而提供。本領域技術人員應當清楚，根據本說明書以下部分及其它部分公開內容的知識，可能對本發明進行大量的變化和/或改變(或修飾)，而不背離其此處公開的實質和範圍。此處引用的所有專利出版物以及參考文獻均為了說明目的，其公開內容在此引入供參考。
附圖簡述

圖1顯示在利用標記的抗-HbAlc mAb的HbAlc測定中(包括HbAlc吸附於磁性膠乳顆粒的步驟)，不溶性磁性載體顆粒與所得信號之間顆粒的表面積-信號關係。
圖2顯示利用標記的抗-HbAlc mAb的HbAlc測定中(包括HbAlc吸附於磁性膠乳顆粒的步驟)，所得信號與系統中存在的抗體之間的信號-抗體數量關係。
圖3顯示在利用標記的抗-HbAlc mAb的HbAlc測定中(包括HbAlc吸附於磁性膠乳顆粒的步驟)，使用可直接檢測的標記的結果。
圖4顯示膠乳凝集方法與利用標記的抗-HbAlc mAb的HbAlc測定方法(包括HbAlc吸附於磁性膠乳顆粒的步驟)之間的相關性。
圖5顯示使用不同的不溶性磁性載體顆粒，對利用標記的抗-HbAlc mAb的HbAlc測定(包括HbAlc吸附於磁性膠乳顆粒的步驟)的影響。
實施本發明的最佳方式在本發明中，標記的抗體(標記Ab)、特別是標記的單克隆抗體(標記mAb)，有可能選擇性地與吸附或附著於不溶性磁性載體的特定抗原性物質反應，而所述的標記Ab(特別是所述的標記mAb)基本上不與仍存在於液相中的所述的特定抗原性物質反應。因此，在本發明的一個優選方面，其有可能將檢驗樣品中的抗原性物質吸附於不溶性載體，然後與上述免疫測定中的抗所述抗原性物質的mAb反應，而無需洗滌去除所述的檢驗樣品。
因此，在本發明的優選實施方案中，此處所用mAb選自與吸附於不溶性載體顆粒的抗原反應、而基本上不與液相中存在的未吸附(未結合)的抗原性物質反應的mAb，從而如今有可能基本上排除未吸附(未結合)成分的幹擾作用。
(抗原性物質)本發明的待測的抗原性物質包括能夠吸附(或附著)於不溶性磁性載體的任何抗原性物質，只要有可能製備或獲得該特定抗原性物質的至少一種多克隆或單克隆抗體，而不限於此處確定的抗原性物質範圍。然而，為了便於吸附到不溶性磁性載體，優先選擇生物樣品中包含的不少於100μg/mL(進一步不少於1mg/mL)或不少於1％(佔總蛋白質重量)的物質。另外，為了便於製備上述多克隆和/或單克隆抗體，優選上述抗原性物質應是分子量不低於10,000的物質(例如蛋白質)。
本發明的免疫測定的待測的「抗原性物質」包括可製備或獲得針對該目標抗原性物質的至少一種多克隆或單克隆抗體的任何″抗原性物質″。該″抗原性物質″包括各種物質，例如蛋白質、多肽以及利用基因工程技術製備的重組蛋白質。它們可能為免疫測定領域所公知或者是全新的物質。代表性的抗原性物質是HbAlc。
(抗原性物質的特異性抗體)此處所用術語″與抗原性物質特異性反應的抗體″可涵蓋任何多克隆抗體和/或單克隆抗體，及其完整分子或片段和衍生物，包括F(ab』)2、Fab』和Fab片段。製備單克隆抗體的優選技術包括，例如使用雜交瘤細胞的方法(G.Kohler和C.Milstein，Nature，256，pp.495-497(1975))；Brodeur等人，Monoclonal AntibodyProduction Techniques and Applications，pp.51-63，MarcelDekker，Inc.，New York(1987))等，此外，下列文件或其中引用的文件可能舉例說明相關抗體J.J.Langone等人(ed.)，″Methodsin Enzymology″，卷121(Immunochemical Techniques，Part IHybridoma Technology and Monoclonal Antibodies)，AcademicPress，New York(1986)，其公開內容在此引入供參考。
可以適當地採用Koehler Milstein(Nature，256，495-497，1975)報告的細胞融合技術等製備單克隆抗體。該方法本身是常規方法。因此不需要特別說明；然而該方法需要選擇有效產生目標單克隆抗體的雜交瘤細胞。所謂的ELISA(酶聯免疫吸附測定)容易處理大量樣品，所以經常用來進行這種選擇，其中預定抗原固相化於96孔板，然後與雜交瘤細胞培養上清反應，再與酶標抗小鼠免疫球蛋白反應。在抗原固相化的情況下，如果能夠組成使抗體在此固相抗原狀態下反應的測定系統，則可以接受該選擇方法，但某些情況下，經ELISA選擇獲得的雜交瘤細胞產生的單克隆抗體中存在於測定系統中非反應性的抗體，則該測定系統在液相中進行抗原-抗體相互作用，正如放射免疫測定(RIA)一樣。
儘管本領域公知或常見這種現象，但在使用這樣的單克隆抗體時，本發明的免疫測定能夠與不溶性載體顆粒上固相化的目標抗原性物質特異性反應，而沒有任何由於抗原性物質仍存在於液相中的抑制作用。
代表性的單克隆抗體包括，例如日本專利NO.2,677,753公開的單克隆抗體。特別代表性的單克隆抗體是，例如日本專利NO.2,677,753公開的單克隆抗HbAlc抗體(抗HbAlc mAbs)。
儘管通常使用的抗體是IgG，但也可能包括F(ab』)2、Fab』、Fab等在內的抗體片段，其是來自親本抗體經過消化酶(例如胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等)處理、有時經過還原劑(例如二硫蘇糖醇和巰基乙醇)還原的低級分子。
另外可能使用IgM而非IgG，或者使用來自親本IgM經過與IgG同樣處理的低級分子。此外可能使用識別表位互不相同的兩種或多種單克隆抗體的組合。
(抗體的標記)可利用適當的標誌標記此處所用抗體。
標記可能包括酶、酶底物、酶抑制劑、輔基、輔酶、酶前體、脫輔基酶、螢光物質、色素、化學發光化合物、發光物質、顏料物質、磁性物質、金屬微粒例如膠體金、放射性物質等。酶可能包括脫氫酶、氧化還原酶例如還原酶和氧化酶；催化功能基團(例如氨基、羧基、甲基、醯基和磷酸基)轉移的轉移酶；水解各種鍵(例如酯、糖苷、醚和肽鍵)的水解酶；裂解酶；異構酶；連接酶等。可能以結合形式使用多種酶進行檢測。
例如，也可以利用酶的循環。用於標記的代表性酶包括過氧化物酶，例如辣根過氧化物酶；半乳糖苷酶，例如大腸桿菌(E.coli)β-D-半乳糖苷酶；馬來酸脫氫酶；葡糖-6-磷酸脫氫酶；葡萄糖氧化酶；葡糖澱粉酶；乙醯膽鹼酯酶；過氧化氫酶；鹼性磷酸酶，例如牛腸鹼性磷酸酶和大腸桿菌鹼性磷酸酶等。使用鹼性磷酸酶時，通過監測或檢查底物(例如傘形酮衍生物包括4-甲基傘形苯磷酸鹽(4-methyl-umbellipheryl phosphate)、磷酸化苯酚衍生物例如硝基苯基磷酸鹽、螢光素衍生物和二氧雜環丁烷(dioxetane)衍生物)；利用NADP的酶循環系統等產生的螢光、發光等進行測定。也可能利用螢光素/螢光素酶系統。如果利用過氧化氫發生反應，產生氧，則可以利用電極等進行檢測。電極可能是玻璃電極、使用不溶性鹽膜的離子電極、液膜型電極、聚合物膜電極等。酶標記可能替換為生物素標記和酶標親和素(鏈親和素)。對於標記，可以使用多種不同類型的標記或標誌。在這種情況下，有可能連續、或不連續、和/或同時、或分別進行多種測定。
根據本發明，可以使用酶-試劑組合形成信號，例如辣根過氧化物酶或其它過氧化物酶與選自4-羥基苯乙酸、1，2-苯二胺、四甲基聯苯胺等之一的組合；β-D-半乳糖苷酶或葡糖-6-磷酸脫氫酶與選自傘形苯(umbelliferyl)半乳糖苷、硝基苯半乳糖苷等之一的組合等。利用能夠酶學形成醌醇(quinole)化合物(例如氫醌、羥基苯醌(hydroxybenzoquinone)和羥基蒽醌)；硫醇化合物，例如硫辛酸和穀胱甘肽；苯酚衍生物；二茂鐵衍生物等的物質形成信號。
螢光物質和化學發光化合物可能包括異硫氰酸螢光素(fluorescein isothiocyanate)；羅丹明(Rhodamine)衍生物，例如羅丹明B異硫氰酸鹽和四甲羅丹明異硫氰酸鹽；丹磺醯氯(dancylchloride)(5-(二甲基氨基)-1-萘磺醯氯)、丹磺醯氟(dancylfluoride)、螢光胺(4-苯基螺[呋喃-2(3H)，1』-(3』H)-異苯基呋喃]-3，3』-二酮(4-phenylspiro[furan-2(3H)，1』-(3』H)-isobenzofuran]-3，3』-dione))；藻膽蛋白，例如藻青蛋白和藻紅蛋白；吖啶翁(acridinium)鹽；氨基苯二醯一肼化合物，例如螢光素、螢光素酶和水母發光蛋白；咪唑；草酸酯；稀土元素例如銪(Eu)、鋱(Tb)和釤(Sm)的螯合物；香豆素衍生物，例如7-氨基-4-甲基香豆素等。
抗體和標記的偶聯可以通過下列方法進行物理方法，例如吸附；化學方法，使用偶聯劑等或活化的反應物；使用化學相互作用的偶聯方法。可以通過硫醇基與馬來醯亞胺基反應、吡啶二硫基與硫醇基反應、氨基與醛基反應等，進行標記。另外，本領域熟練的技術人員可以從公知的方法中適當選擇易於實施的方法、技術及其任何變化的方法。偶聯劑包括，例如甲醛、戊二醛、己二異氰酸酯、己二異硫氰酸酯、N，N』-聚亞甲基雙碘乙醯胺、N，N』-乙烯雙馬來醯亞胺、乙二醇二琥珀醯亞胺基琥珀酸酯、雙重氮聯苯胺、1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亞胺、琥珀醯亞胺基3-(2-吡啶二硫)丙酸酯(SPDP)、N-琥珀醯亞胺基4-(N-馬來醯亞胺甲基)環己烷-1-羧酸酯(SMCC)、N-硫代琥珀醯亞胺基4-(N-馬來醯亞胺甲基)-環己烷-1-羧酸酯、N-琥珀醯亞胺基(4-碘乙醯)-氨基苯甲酸酯、N-琥珀醯亞胺基4-(1-馬來醯亞胺苯基)丁酸酯、N-(ε-馬來醯亞胺己醯氧基)琥珀醯亞胺(EMCS)、巰醇亞胺(iminothiolane)、S-乙醯巰基琥珀酸酐、甲基-3-(4』-二硫代吡啶)丙亞胺酯(propionimidate)、甲基-4-巰基-丁醯基乙胺酯(butyrylimidate)、甲基-3-巰基丙亞胺酯、N-琥珀醯亞胺基-S-乙醯巰基乙酸酯等。
(不溶性磁性載體顆粒)此處所用不溶性磁性載體顆粒優選微粒，其中該微粒基本上不溶於水性液體介質，並包含有機聚合物材料相和磁性材料或物質相。代表性的不溶性磁性載體顆粒為微粒，其均不僅包含由一種或多種有機聚合物材料組成的表層相，也包含由一種或多種磁性材料或物質組成的核心相。所述的不溶性磁性載體顆粒可能包括，例如包含一種或多種選自四氧化三鐵(Fe3O4)、三氧化二鐵(γ-Fe2O3)、各種鐵酸鹽、金屬例如鐵、錳、鎳、鈷和鉻、合金例如鈷合金、鎳合金、錳合金等的微粒；其中包含磁性顆粒的膠乳顆粒、明膠顆粒、脂質體顆粒等。適當地，所述的不溶性磁性載體顆粒包括由膠乳表層包裹磁性材料或物質的核心構成的膠乳顆粒。術語膠乳最初是指橡膠樹經切割或受傷滲出的乳狀樹液，但此處所用膠乳也指水溶液中懸浮或分散不連續微粒的懸浮液或乳劑。此處所用不溶性磁性顆粒優選包括但不限於所述的磁性顆粒核心的表面經過有機物質等進行表面處理的微粒。
進行定量免疫測定時，這種膠乳顆粒通常要求其顆粒大小均勻性或一致性、其表面狀態控制、其內部結構選擇等處於高水平。這種適用於檢測試劑的高質量膠乳顆粒可以選自商品化供應的產品。可以用來構成上述顆粒的有機聚合物材料可包括但不限於現有技術公開的有機聚合物材料微粒(例如JP，A，58-11575(1983))。該有機聚合物材料包括，例如疏水性聚合物，如聚苯乙烯、聚丙烯腈、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚己醯胺(polycapramide)和聚對苯二甲酸乙二酯；交聯的親水聚合物，例如聚丙烯醯胺、聚甲基丙烯醯胺、聚乙烯吡咯烷酮、聚(乙烯醇)、聚(2-乙氧基丙烯酸酯)、聚(2-乙氧基甲基丙烯酸酯)、聚(2，3-二丙氧基丙烯酸酯)、聚(2，3-二丙氧基甲基丙烯酸酯)和聚乙二醇甲基丙烯酸酯；包含大約2-4種每種單體的共聚物等。雖然不特別限於膠乳材料，優選使用苯乙烯類型膠乳，例如聚苯乙烯膠乳、丙烯酸類型膠乳等。為便於順利吸附蛋白質或肽，優選使用表面疏水性強的膠乳(例如聚苯乙烯膠乳)。根據需要，也可能使用各種類型的變性膠乳(例如羧酸變性膠乳)。此處所用上述不溶性載體優選包括膠乳，例如聚苯乙烯膠乳。特別優選的膠乳顆粒是使用非乳化劑通過乳化聚合方法製備的聚苯乙烯顆粒。由於表面上的負電荷彼此相斥，這種膠乳即使沒有任何乳化劑也能穩定存在。商品化供應的代表性不溶性磁性載體顆粒為Dynabeads M-270 Epoxy、Dynabeads M-270Amine、Dynabeads M-270 Carboxylic Acid、Dynabeads M-270Tosylactivated、Dynabeads M-450 Epoxy和Dynabeads M-450Tosylactivated(VERITAS Corporation，Japan)、IMMUTEX-MAG(JSR Corporation，Japan)以及SMG-11(Fujikura Kasei Co.，Ltd.，Japan)。載體顆粒還可得自Bangs Laboratories，Inc.等。
此處所用不溶性磁性載體顆粒的顆粒大小為0.01μm-20μm。優選顆粒大小0.1μm-6μm的不溶性磁性顆粒。將抗原性物質吸附或結合不溶性磁性顆粒的方法可能包括檢驗樣品中的抗原性物質物理吸附或結合或化學結合。適當地，這是物理吸附或結合。
為了將檢驗樣品中包含的抗原性物質吸附於膠乳顆粒，對於懸浮該膠乳顆粒的緩衝液，可利用基本上等同於將抗原吸附ELISA平板等的方法。某些膠乳顆粒易發生自然聚集。如果這樣，考慮到穩定性，優選懸浮於弱鹼性甘氨酸緩衝液或硼酸緩衝液。至於膠乳的濃度，優選使用按重量計0.05-1％的懸浮液。
(抗原-抗體相互作用)在本發明中，將檢驗樣品中包含的抗原性物質固相化(或固定化)，然後與可特異性和該固相化的抗原性物質反應的標記Ab反應，以標記在由膠乳等組成的不溶性磁性載體上捕獲的抗原性物質。為此使用的水溶液優選包含包含大約0.1-0.3％表面活性劑(例如Tween20)，以防止該抗體吸附於膠乳等組成的不溶性載體。
本發明對於進行反應的容器沒有特別限制。有可能使用普通的管狀形式容器(試管；例如聚苯乙烯試管)。如果考慮容易同時處理數以千計或數以百計的樣品，使用具有復孔的ELISA板、例如96孔ELISA板(NUNC-IMMUNO PLATE等)極為方便。下文將會述及，為了易於利用光學方法測定，優選使用基本透明的容器進行反應。如果使用下文所述自動分析儀，應注意通常在該分析儀的反應器中進行反應。
(測定)對測定不溶性磁性載體顆粒標記水平的方法沒有特別限制。例如，如果定性或半定量測定標記，有可能根據與已知樣品濁度水平的比較，目視判斷上述不溶性載體顆粒的標記水平。如果定量測定所述的標記，為了簡單方便，優選進行光學測量。
對於由膠乳等組成的不溶性磁性載體顆粒上的標記的光學測量方法，可以使用常規已知的方法。
在本發明中，有可能進行檢驗樣品的測量處理；從樣品分發處理直到測定結果採集步驟，利用自動化儀器、例如磁性顆粒的臨床檢驗自動分析儀。這種臨床檢驗的自動化儀器(系統)包括ADVIATM(商品名，Bayer)、ARCHITECTTM(商品名，Dinabbot)、IMxTM(商品名，Dinabbot)、AccessTM(商品名，Beckmann)、ECLusysTM(商品名，Roche Diagnostics)、LUMIPULSETM(商品名，FUJIREBIO)等。這種儀器已經廣泛用於免疫測定系統(利用抗原-抗體相互作用)，只要是這樣的儀器，本發明就可以沒有任何限制地採用。這些儀器的特徵在於具有如下的優點和有利條件，包括能夠以隨機存取方式測定多個對象、測定靈敏度高、可能測定的範圍廣、能夠短時間內完成測定，由於從分發到獲得測定結果的所有步驟均以自動化方式進行，因而測定精度高，由於使用獨立的反應管而很少汙染等。
如果在普通樣品中測定抗原，則在常規的自動化臨床檢驗儀器中使用抗體致敏的磁性顆粒，其中步驟包含(a)第一步反應(1)磁性顆粒與樣品中抗原反應，以及(2)然後洗滌，(b)第二步反應(3)將得到的產物與針對所述抗原的第二抗體反應(使用例如酶或螢光物質等標記作為標誌)，以及(4)然後洗滌，以及(c)第三步反應(5)將得到的產物與所述標誌的底物反應，以及(6)然後測定。
然而，根據本發明，可以如下減少洗滌次數(a)第一步反應(1)磁性顆粒與樣品中抗原反應，(b)第二步反應(2)將得到的產物與針對所述抗原的第二抗體反應(使用例如酶或螢光物質的標記作為標誌)，以及(3)然後洗滌，以及(c)第三步反應(5)將得到的產物與所述標誌的底物反應，以及(6)然後測定。
因此本發明能夠大大防止顆粒損失。
在光學檢測膠乳顆粒聚集的方法中，必須使用相對大量的顆粒。然而本發明可以檢測與顆粒結合的物質數量。因此，本發明較常用方法可以測定十分之一乃至更少數量的顆粒以及標誌標記的抗體。
根據本發明，有可能避免與常規方法中使用的抗體複合物的製備難題，其中難題包括製備方法中的困難、在實際使用濃度下的不穩定性等。因此，本發明只使用單個Ab便改善了物質的穩定性，而且製備批次之間沒有差異，從而能夠穩定、可靠地製備。只使用mAb可以利用其優點。例如，有可能排除抗體批次之間的差異，並提供高度可靠的質量穩定試劑。
由於本發明的不溶性載體顆粒試劑從未用抗原等致敏，試劑盒極大改善了顆粒批次差異的問題。另外，顆粒不僅包含由磁性材料或物質組成的核心，而且包含由塑料組成的表層，其抗原性物質吸附或結合特性良好。
本發明可以使用的適用於不溶性磁性載體顆粒的測定儀器包括，例如FUJIREBIO LUMIPULSTM(ALP-AMPPDTM)；Beckmann CoulterAccessTM(ALP-LumigenTMPPD)；Beckmann Coulter LUMIWARDTM(ALP-LumigenTMPPD)；Nippon DPC Corporation″Immulize″TM(ALP-AMPPDTM)；Bayer ACSTM(吖啶鎓酯(acridiniumm ester))；Ortho Clinical Diagnostics VITROSTMECi(HRP-Luminol)；Precision System Science Co.，Ltd.HiMICOTM；DinabbotARCHITECTTM(吖啶鎓酯)；Roche PicolumiTM(釕複合物)；TosohAIA-600II(ALP-4MUP)等。這些儀器可能還包括利用酶化學發光、釕複合物電化學發光、吖啶鎓酯化學發光等的儀器。
(血紅蛋白Alc的測定實施方案)下文描述了血紅蛋白Alc(HbAlc)的測定實施例，作為較好說明本發明免疫測定特徵的實施方案，儘管本發明的免疫測定不限於血紅蛋白Alc測定。
上述″血紅蛋白Alc″是指一種特定類型的糖基化(或糖化)血紅蛋白，通過葡萄糖非酶促吸附到血紅蛋白(Hb)β-鏈N端胺基酸殘基纈氨酸的α-氨基而形成。血液血紅蛋白Alc的數量反映了糖尿病相對長期的血糖控制狀況。因此，為了評價糖血的控制，測定HbAlc臨床意義極大(參看例如Nippon-Rinsho，48，Special Issue，315-322(1990))。
血紅蛋白是異四聚體，基本由兩條α-鏈和兩條β-鏈組成。血紅蛋白Alc的特徵在於兩條β-鏈之一的N端α-氨基糖基化。因此，在血紅蛋白Alc上有一個特徵性反應位點。換句話說，鑑於與血紅蛋白Alc特異性mAb的反應性，血紅蛋白Alc起一價抗原的作用。
在本發明的免疫測定中，例如為了測定血紅蛋白Alc，檢驗樣品(例如通過在全血中加入淨化水(purified water)而製備的溶血樣品)可以吸附於不溶性磁性載體顆粒(包被膠乳的磁性顆粒)，然後與標記的抗血紅蛋白Alc mAb反應，選擇性標記膠乳層上的血紅蛋白Alc。測定所述的選擇性標記的標誌水平，可以定量測定血紅蛋白Alc。
例如，利用本發明的免疫測定同時定量通過HPLC或其它方法測定的血紅蛋白Alc百分率已知的標準樣品，製作標準曲線。根據該標準曲線，有可能確定未知樣品中血紅蛋白Alc的％值。
(抗HbAlc的單克隆抗體)此處所用抗HbAlc mAb包括只要基本上與吸附或固相化的HbAlc反應、基本上不與固相化的HbAO反應的任何抗HbAlc mAb，而沒有任何特別限制(優選地，該抗HbAlc mAb另外基本上不與仍存在於液相中的HbAlc或HbAO反應)。使用糖化肽作為免疫原製備mAb時，可以獲得這樣的單克隆抗體。可以測定與HbAlc和HbAO的反應性，例如按日本專利No.2,677,753公開的方式。
如日本專利No.2,677,753所述，按照免疫讀板機的標準，本發明優選該所述的抗HbAlc mAb的HbAlc反應性不少於1.0(更優選不少於2.0)。按照該標準，還優選所述的抗-HbAlc mAb的HbAO反應性不多於0.1(更優選不多於0.05)。
本發明優選所述的抗-HbAlc mAb、甚至是10μg/mL(或更進一步20μg/mL)的抗HbAlc mAb在液相中不與非變性HbAlc、HbAO、變性HbAO等反應，但是1μg/mL(或更進一步0.5μg/mL)或更少的抗HbAlc mAb在液相中與變性HbAlc反應。
此處將公開本發明測定HbAlc的優選實施方案。
在本發明中，通常將大約1μl-20μl(或2μl-5μl)溶血的血溶液分發到各管中，作為檢驗樣品。還可以使用甘氨酸緩衝液等，按5-10倍稀釋度稀釋檢驗樣品(例如1mL淨化水加入50μl全血))，獲得此處實際使用的溶血的血溶液。
此後，每管中加入一等份(大約100-300μl(或150-200μl))的磁性膠乳顆粒懸浮液(例如0.12μm磁性顆粒包被的膠乳懸浮液，濃度0.2％)，然後37℃靜置大約1-30分鐘(或3-20分鐘)，以便樣品中HbAlc吸附於膠乳。優選如此使用的磁性膠乳顆粒懸浮液是利用甘氨酸緩衝液等稀釋磁性膠乳顆粒原液的產物。
然後，將一等份(大約100-300μl(或150-200μl))利用適當標誌標記的抗HbAlc mAb(例如小鼠腹水來源的mAb)加入吸附於乳膠的HbAlc中，使混合物37℃靜置(溫育)大約2-30分鐘(或3-10分鐘)，以便HbAlc與所述的標記的mAb反應。優選最佳設置此處使用的mAb溶液的濃度，例如根據製備的系列稀釋的抗HbAlc mAb。用來稀釋的緩衝液可能包括0.05-0.1M甘氨酸緩衝液(GBS甘氨酸緩衝鹽溶液；pH8.1-8.5，包含0.15M NaCl)等。為此使用的緩衝液優選包含大約0.1-0.5％(或0.2-0.3％)的表面活性劑(例如Tween 20)，以防止膠乳表面上mAb的物理性吸附作用。
在本領域中，如果將膠乳顆粒用作不溶性磁性載體顆粒，不容易製備質量完全一致的膠乳試劑(其上攜帶抗原、抗體等的乳膠)，也不容易保持製品的穩定狀態，防止發生非特異性聚集和沉澱。
相反，本發明的不溶性磁性載體(膠乳等)未被抗原和抗體致敏，可以應用商品化供應的本身未致敏的磁性膠乳作為不溶性磁性載體。此外，並非總是需要抗體是純品。另外，由於試劑簡單，有可能保持較高的儲存穩定性，從而還有利於製備。如上所述，本發明試劑可以簡單、容易地製備，因而如今有可能提供使用高儲存穩定性試劑的方法。
在本發明免疫測定的應用中，通過採納一般由本領域技術人員在適合每種方法的通用條件和操作的基礎上提出的技術思考，可能構造適於本發明的目標或與其活性基本相同的目標物質的測定系統。
常規技術方法的細節可參看各種綜述、教材、書籍等。例如，Hiroshi Irie(ed.)，″Radioimmunoassay″，Kodansha Ltd.，Japan，1974；Hiroshi Irie(ed.)，″Zoku-Radioimmunoassay″(Radioimmunoassay；Second Edition)，Kodansha Ltd.，Japan，1979；Eiji Ishikawa等(ed.)，″Koso Meneki Sokuteiho″(EnzymeImmunoassays)，Igaku-Shoin Ltd.，Japan，1978；Eiji Ishikawa等(ed.)，″Koso Meneki Sokuteiho″(Enzyme Immunoassays)(2ndEdition)，Igaku-Shoin Ltd.，Japan，1982；Eiji Ishikawa等(ed.)，』Koso Meneki Sokuteiho″(Enzyme Immunoassays)(3rdEdition)，Igaku-Shoin Ltd.，Japan，1987；H.V.Vunakis等(ed.)，″Methods in Enzymology″，Vol.70(ImmunochemicalTechniques，Part A)，Academic Press，New York(1980)；J.J.Langone等(ed.)，″Methods in Enzymology″，Vol.73(Immunochemical Techniques，Part B)，Academic Press，NewYork(1981)；J.J.Langone等(ed.)，″Methods in Enzymology″，Vol.74(Immunochemical Techniques，Part C)，Academic Press，New York(1981)；J.J.Langone等(ed.)，″Methods inEnzymology″，Vol.84(Immunochemical Techniques，Part DSelected Immunoassays)，Academic Press，New York(1982)；J.J.Langone等(ed.)，″Methods in Enzymology″，Vol.92(Immunochemical Techniques，Part EMonoclonal Antibodiesand General Immunoassay Methods)，Academic Press，New York(1983)；J.J.Langone等(ed.)，″Methods in Enzymology″，Vol.121(Immunochemical Techniques，Part IHybridomaTechnology and Monoclonal Antibodies)，Academic Press，NewYork(1986)；J.J.Langone等(ed.)，″Methods in Enzymology』，Vol.178(Antibodies，Antigens，and Molecular Mimicry)，Academic Press，New York(1989)；M.Wilchek等(ed.)，″Methods in Enzymology″，Vol.184(Avidin-BiotinTechnology)，Academic Press，New York(1990)；J.J.Langone等(ed.)，″Methods in Enzymology″，Vol.203(MolecularDesign and ModelingConcepts and Applications，Part BAntibodies and Antigens，Nucleic Acids，Polysaccharides，and Drugs)，Academic Press，New York(1991)等；以及上述文件引用的參考文獻，其公開內容在此引入供參考。
實施例利用以下只為說明目的而提供的實施例、並參考本發明的特定實施方案具體描述了本發明。儘管為了公開本發明的特定實施方案而提供這些說明性實施例，但不應認為其限制或約束了此處公開的本發明範圍。應當理解，根據本發明的實質可以實施多種不同的形式。
除非另外說明，利用本領域普通技術人員熟知或常見的標準方法，實施或能夠實施所有的實施例。
實施例1顆粒表面積與產生信號之間的關係溶血血液從人收集的血紅細胞(5μl)中加入淨化水(500μl)進行溶血，將得到的混合物用作檢驗樣品。
生物素標記的抗HbAlc mAb將NHS-LC-Biotin(No.21335；Pierce)用作生物素化試劑。抗HbAlc mAb根據所述生物素化試劑所附說明書進行生物素化。重複透析去除未反應的生物素。所用抗HbAlcmAb公開於專利No.2,677,753(該單克隆抗體也可以使用血紅蛋白Alc(HbAlc)檢測試劑″RAPIDIA AUTO HbAlc″(銷售商FUJIREBIO Inc.，Japan；製造商SRL，Inc.，Japan))中包括的抗HbAlc試劑)。
不溶性磁性載體顆粒使用SMG-11(Fujikura Kasei Co.，Ltd.，Japan)。該磁性膠乳顆粒製品具有下列物理特性顆粒大小(nm)990，密度1.58。用水稀釋該不溶性磁性載體顆粒，形成水性稀釋系列2.5％、0.25％和0.025％。
在100μl 2.5％水性磁性膠乳顆粒稀釋液中，顆粒數目為3.12E+0.9，表面積(m2)為9.59E-03；0.25％稀釋液的顆粒數目為3.12E+0.8，表面積(m2)為9.59E-04；0.025％稀釋液的顆粒數目為3.12E+0.7，表面積(m2)為9.59E-05。
100μl水性磁性膠乳顆粒稀釋液中加入5μl溶血的血溶液，混合物於室溫靜置5分鐘，使其上吸附抗原性物質。然後其中加入50μl0.07mg/ml生物素化的抗HbAlc mAb。混合物室溫靜置5分鐘，用ALP緩衝液(1％BSA、50mM咪唑、150mM NaCl、1mM MgCl2、0.1mMZnCl2、0.05％Tween 20；pH 7.6)洗滌一次，然後加入100μl親和素-ALP(*5000；DAKO D-365)。
得到的混合物室溫靜置5分鐘，因使用生物素-親和素系統而用ALP緩衝液洗滌4次。加入AMPPD(100μl，Lumigen PPD；Wako PureChemical Industries，Ltd.，Japan)以後，將混合物轉到白色平板。10分鐘後測定發光量。結果如圖1所示。
結果推測該溶血溶液的蛋白質數量為10μg。因此可以假定，如果顆粒濃度為2.5％，表面積為9.6E-0.3m2，則蛋白質的數量太少，在反應期間將發生聚集，從而不可能測定進入載體中的分析物。使用的顆粒大小為1μm時，表面積值大約9.6E-03m2，似乎較為適當。
實施例2抗體數量與信號之間的關係將5μl溶血溶液(按實施例1同樣方法製備)加入100μl 0.025％水性磁性膠乳顆粒稀釋液(使用與實施例1不溶性磁性載體顆粒相同的膠乳製品)中，使混合物室溫靜置5分鐘，其中加入一等份生物素化的抗HbAlc mAb(按實施例1相同方法製備，為0.048mg/mL(50μl，2.4μg)、0.0048mg/mL(50μl，0.24μg)或0.00048mg/mL(50μl，0.024μg))。該混合物室溫靜置5分鐘，用ALP緩衝液(1％BSA、50mM咪唑、150mM NaCl、1mM MgCl2、0.1mM ZnCl2、0.05％Tween20；pH 7.6)洗滌一次。然後其中加入100μl親和素-ALP(與實施例1相同的試劑)。得到的混合物室溫靜置5分鐘，因使用生物素-親和素系統而用ALP緩衝液洗滌4次。然後加入100μl AMPPD(與實施例1相同的試劑)，將混合物轉到白色平板。10分鐘後測定發光量。
結果如圖2所示。結果發現抗HbAlc mAb的足夠量為大約0.25μg。
實施例3利用直接標記的抗體進行測定為了簡化測定、提高可重複性，直接用ALP標記抗HbAlc mAb。
(1)用異硫氰酸螢光素(FITC；DOJINDO，Japan)標記鹼性磷酸酶(ALP；Oriental Yeast，Co.，Ltd.，Japan)。首先將ALP(10mg/mL，100μl)加入0.1M NaHCO3緩衝液(400μl)中，然後其中加入10μl FITC溶液(4mg FITC溶於二甲基甲醯胺(DMF，1mL)中(ALP∶FITC＝1∶10)。混合物室溫攪拌10分鐘，利用PD-10(Pharmacia)回收終產物。使用0.1M pH 7.5 NaH2PO4緩衝液洗脫。回收FITC標記的ALP(1.7mL)。
將上述製備的FITC標記的ALP(ALP-FITC)馬來醯亞胺化。首先利用Centricon 30(Millipore)將以上回收的ALP-FITC濃縮到500μl。其後加入10μl EMCS溶液(N-(ε-馬來醯亞胺己醯氧基)-琥珀醯亞胺(EMCS，6mg)DMF溶液(1mL))(ALP-FITC∶EMCS＝1∶20)。混合物室溫攪拌30分鐘，利用PD-10(Pharmacia)回收終產物。使用包含5mM乙二胺四乙酸(EDTA)的0.1M NaH2PO4緩衝液，pH 6.3進行洗脫。回收馬來醯亞胺化的ALP-FITC溶液(1.7mL)。
同時將抗HbAlc mAb(與實施例1所用相同的抗體)轉變為SH形式。因此將19.1mg抗HbAlc mAb(52.4μl)加入0.1M NaH2PO4，pH7.5緩衝液中(450μl)，然後其中加入10μl AMSA溶液(S-乙醯巰基琥珀酸酐(AMSA，6mg)DMF溶液(1mL))(抗體∶AMSA＝1∶50)。混合物室溫攪拌30分鐘，然後其中加入包含50mM EDTA的1M Tris緩衝液，pH 7.0(20μl)，以及1M鹽酸羥胺溶液，pH7.0(20μl)。混合物室溫攪拌15分鐘，利用PD-10(Pharmacia)回收終產物。使用包含5mM EDTA的0.1M NaH2PO4緩衝液，pH 6.3進行洗脫。回收SH形式的抗體(IgG SH，1.7mL)。
其後將總量的上述製備的馬來醯亞胺化ALP-FITC與總量的上述製備的IgG SH混合。假定混合比為ALP∶IgG＝1.5∶1(摩爾比)。室溫反應2小時以後，利用Centricon(Millipore)濃縮混合物到500μl，通過凝膠過濾(使用的載體SuperoseTM12；Pharmacia)得到ALP標記的抗HbAlc mAb。
(2)在100μl 0.025％磁性膠乳顆粒稀釋液(與實施例1相同的膠乳稀釋液)中加入5μl溶血的血溶液(與實施例1相同的血液樣品)。混合物室溫靜置5分鐘，然後其中加入ALP標記的抗HbAlc mAb。抗體加入50μl 5μg/mL IgG。還使用利用PBS-Tween稀釋的抗體稀釋液以及利用包含BSA的緩衝液稀釋的另一抗體稀釋液，進行比較。混合物室溫靜置5分鐘，然後用PBS-Tween洗滌4次。加入AMPPD(100μl，與實施例1相同的試劑)以後，將混合物轉到白色平板。15分鐘後測定發光量。結果如圖3所示。
存在蛋白質時加入抗體，觀察到背景下降。由於背景下降，可以預期重複性提高。已經證實信號較之親和素-ALP提高。圖4顯示檢驗血紅蛋白Alc(HbAlc)檢驗試劑″RAPIDIA AUTO HbAlc″(銷售商FUJIREBIO Inc.，Japan；製造商SRL，Inc.，Japan)與本發明膠乳聚集方法之間相關性的結果。證實存在較好的相關性。
實施例4不溶性磁性載體顆粒差異的比較使用與實施例3相同的操作與試劑。實施例1-3使用的FujikuraKasei膠乳顆粒(Fujikura Kasei Co.，Ltd.，Japan)與VERITAS膠乳顆粒(VERITAS Corporation，Japan)作比較。所用每種磁性顆粒試劑的總表面積設為相同，進行測定。
VERITAS膠乳顆粒的顆粒大小為2.8μm，顆粒濃度為4.0E+09顆粒/mL，面積(計算值)為2.46E-11，每次測定的表面積為9.59E-05m2/顆粒(調整到m2需要1μl)。用水稀釋VERITAS膠乳顆粒，形成100倍的稀釋液。使用100μl VERITAS膠乳顆粒稀釋液。
在100μl每種磁性顆粒懸浮液(表面積9.59E-11m2)中加入5μl溶血的血溶液，混合物室溫靜置5分鐘。其後將ALP標記的抗HbAlcmAb加入混合物中。抗體加入50μl 5μg/mL IgG。混合物室溫靜置5分鐘，然後用PBS-Tween洗滌4次，其中加入100μl AMPPD(與實施例1相同的試劑)。將得到的混合物轉到白色平板。15分鐘後測定發光量。
結果如圖5所示。使用血紅蛋白Alc(HbAlc)檢驗試劑″RAPIDIAAUTO HbAlc″(銷售商FUJIREBIO Inc.，Japan；製造商SRL，Inc.，Japan)作為校準物。
工業應用性本發明的免疫測定可以簡單、方便並快速測定檢驗樣品中的抗原性物質，而無需任何麻煩的預處理，從而大大便於對相當大量樣品同時進行平行處理。此外，該測定方法適於全自動化儀器的臨床檢驗。因此有可能使測定步驟自動化，並進行批量處理。另外，本發明的優點不僅在於測定本身，也在於試劑的製備。通常，製備磁性膠乳試劑(結合抗原、抗體等的膠乳)時，並不總是容易製備質量相同的試劑。此外，需要防止存儲期間聚集和沉澱的知識。膠乳材料的成本一般只佔診斷性膠乳試劑費用的小部分，大部分試劑費用是生物材料的費用，以及生物材料包被膠乳顆粒的步驟所需費用。在這方面，根據本發明，所述的不溶性磁性載體(例如膠乳)基本上既不用任何抗原、也不用任何抗體致敏，從而能夠將商品化供應的不溶性磁性載體本身不經任何修飾用作檢驗試劑，而不必重新製備一種″膠乳試劑″。此外，本發明的抗體未必要求是純化產品，其需要量也大大減少。因而檢驗試劑的製備更為容易，儲存穩定性具有很大優點。
儘管參照某些實施方案及其實施例詳細具體描述了本發明，但顯然可能以其它形式實施。根據公開內容，應當理解各種修飾和變化也在所附權利要求的實質和範圍之內。
權利要求
1.使用不溶性載體顆粒的免疫測定，其包含(i)使用基本上不含任何吸附的抗原和/或抗體的不溶性磁性載體顆粒，(ii)將檢驗樣品中的抗原性物質吸附或結合所述的不溶性磁性載體顆粒，(iii)將從上述(ii)處理得到的不溶性磁性載體顆粒與特異性和某些所述的抗原性物質反應的標記抗體反應，所述抗體特異性與固相形式的抗原性物質反應，但基本上不與天然形式的抗原性物質反應，其中所述固相形式的抗原性物質附著於所述的不溶性載體顆粒，所述的天然形式的抗原性物質則存在於液相中，以及(iv)測定通過所述固相抗原性物質捕獲得到的標記抗體上的標記，作為指標。
2.權利要求1的免疫測定，其中所述的免疫測定包含(A)將所述檢驗樣品中的抗原性物質吸附或結合所述的不溶性磁性載體顆粒，以及(B)然後不用洗滌去除所述檢驗樣品，將捕獲的抗原性物質與所述的與固相抗原性物質特異反應的抗體進行反應。
3.權利要求1或2的免疫測定，其中所述的免疫測定包含(a)將所述的標記抗體與吸附或結合了檢驗樣品中抗原性物質的不溶性磁性載體顆粒進行反應，(b)然後在磁場作用下，將未反應的標記抗體與不溶性磁性載體顆粒分離，以及(c)測定通過所述的固相抗原性物質捕獲得到的標記抗體上的標記，作為指標。
4.權利要求1-3中任一項的免疫測定，其中所述的抗體是單克隆抗體。
5.權利要求1-3中任一項的免疫測定，其中所述的抗體是多克隆抗體。
6.權利要求1-5中任一項的免疫測定，其中所述的不溶性磁性載體顆粒選自基本上不溶於水性液體介質、並由有機聚合物材料相和磁性材料相組成的微粒。
7.權利要求1-6中任一項的免疫測定，其中所述的不溶性磁性載體顆粒選自不僅包含由一種或多種有機聚合物材料組成的表層相、而且包含由一種或多種磁性材料組成的核心相的微粒。
8.權利要求1-7中任一項的免疫測定，其中所述的不溶性磁性載體顆粒選自其具有(a)0.01-20微米的平均顆粒大小以及(b)由一種或多種磁性材料組成的核心的膠乳顆粒。
9.權利要求1-7中任一項的免疫測定，其中所述的不溶性磁性載體顆粒選自其具有0.1-6微米的平均顆粒大小以及由一種或多種磁性材料組成的核心的膠乳顆粒。
10.權利要求1-9中任一項的免疫測定，其中所述的免疫測定可利用適合磁性顆粒的臨床化學自動分析儀，從分發檢驗樣品到獲得測試結果以自動化形式進行。
11.權利要求1-10中任一項的免疫測定，其中檢驗樣品中的抗原性物質是HbAlc。
全文摘要
本發明提供了使用不溶性磁性載體顆粒進行免疫測定的方法，該方法適於節約人力以及在短時間內處理大量樣品，同時避免了致敏的不溶性磁性顆粒的穩定性及其製備的困難。測定檢驗樣品中的抗原性物質時，不使用攜帶抗原性物質特異的抗體的不溶性磁性顆粒，而是提供了基本上不吸附抗體等的不溶性磁性載體顆粒。然後待測定的抗原性物質吸附於不溶性磁性載體顆粒，隨後與特異性針對該吸附的抗原性物質的標記抗體進行反應。從而以適合自動化的方式有效測定檢驗樣品中的抗原性物質。
文檔編號G01N33/543GK1491359SQ02804719
公開日2004年4月21日 申請日期2002年4月26日 優先權日2001年5月18日
發明者櫻井正明, 高梨直樹, 岡昌則, 平田稔, 樹 申請人:愛賜愛兒股份有限公司