一種測定雷公藤甲素含量的方法
2023-12-05 18:03:36
專利名稱：一種測定雷公藤甲素含量的方法
技術領域：
本發明涉及雷公藤甲素，具體地說，是一種利用氣相色譜定量測定雷公藤甲素的方法。
雷公藤甲素亦稱雷公藤內酯醇(Tripdiolide)，分子式C20H24O6，分子量36016，化學結構式
雷公藤內酯醇是雷公藤的主要活性成分，含量僅為生藥的0.00030％-0.0068％，(《中草藥》1994，25(10)，359-341)，提取率更低，有兩篇報導為25萬分之一(《藥學學報》1993，28(2)，110-115；《華東醫藥通訊》1996，7(10)，4-5)，有的報導更低。
報導雷公藤甲素的測定方法有薄層色譜-比色法，μg水平，顯色斑點不穩定，解析度差(《中藥材》1991，14(11)，37-38)。放免法，解析度差，放射源汙染(《中藥藥理與臨床》1991，7(3)，21-24)。高效液相色譜法，μg水平，遠紫外區(218mm)檢測，受條件限制測不準(《中國藥學雜誌》1991，26(8)，478-479；《中國醫院藥學雜誌》1996，12(2)，76-78)。
本發明的目的是提供一種精確測定雷公藤製劑和血液中雷公藤甲素含量的方法。
本發明的技術方案如下一種測定雷公藤製劑中雷公藤甲素含量的方法，它是定量的取雷公藤製劑加入溶劑，與過量的三氟醋酐反應生成雷公藤甲素三氟醋酸衍生物，吹乾，用定量溶劑溶解，然後用氣相色譜法測定其含量。
上述測定雷公藤甲素含量的方法中，所加入的反應溶劑是四氫呋喃。
上述測定雷公藤甲素含量的方法，氣相色譜法是採用電子捕獲檢測器測定雷公藤甲素三氟醋酸衍生物的峰高，用標準曲線校正方程換算成雷公藤甲素的量。
上述測定雷公藤甲素含量的方法，氣相色譜法採用內填SE-30的Chromosorb WDMCS擔體的不鏽鋼柱，高純N2作載氣。
一種測定血漿中雷公藤甲素含量的方法，它是定量的取血漿加入定量的乙醚-氯仿混合液和碳酸鹽溶液提取，定量取上清液，吹乾，加入溶劑與過量的三氟醋酐反應生成雷公藤甲素三氟醋酸衍生物，吹乾，用定量溶劑溶解，然後用氣相色譜法測定其含量。
上述測定血漿中雷公藤甲素含量的方法，乙醚-氯仿混合液是三份體積乙醚和一份體積氯仿組成的混合液。
上述測定血漿中雷公藤甲素含量的方法中，所加入的反應溶劑是四氫呋喃。
上述測定血漿中雷公藤甲素含量的方法，氣相色譜法是採用電子捕獲檢測器測定雷公藤甲素三氟醋酸衍生物的峰高，用標準曲線校正方程換算成雷公藤甲素的量。氣相色譜儀採用內填SE-30的Chromosorb W DMCS擔體的不鏽鋼柱，高純N2作載氣。
本發明的測定雷公藤甲素含量的方法能精確的測定雷公藤製劑中雷公藤甲素的含量。最小檢測量為20ng，相關係數r＝0.99993。日內RSD＜3.8％，日間RSD＜5.5％。
本發明的測定雷公藤甲素含量的方法還能精確地測定服用雷公藤製劑的患者血漿中雷公藤甲素的含量，其回收率達95％以上。
圖1是雷公藤甲素的氣相色譜圖，其中A.雷公藤甲素標準品；B.雷公藤製劑；C.血漿樣品。
實施例線性範圍試驗精密稱取雷公藤甲素標準品，用甲醇溶解，配成0.5mg/mL的標準儲備液，用時用甲醇稀釋成25μg/mL標準液。分別取標準液2、4、10、20、40μL，分別含雷公藤甲素50、100、250、500、1000ng，吹乾後，加入50μL四氫呋喃，50μL三氟醋酐，密閉40℃反應30min以上，冷卻，N2吹乾，以50μL甲苯溶解，進樣1μL。分別測出峰高H，以H為縱坐標，以雷公藤甲素的量W為橫坐標，作出標準曲線校正方程為H＝0.0174W＋0.0034，其中H為色譜峰高，W為雷公藤甲素標準品的量。
取空白血漿1mL，分別加入2、4、10、20μL雷公藤甲素標準品配成的標準液，使血漿中雷公藤甲素濃度成50、100、250、500ng/mL，分別加3.50mL乙醚-氯仿(3∶1)，加50μL飽和K2C03溶液，振蕩，離心，取3.00mL上清液，40℃空氣吹乾，加50μL四氫呋喃，50μL三氟醋酐，密閉40℃反應30min以上，冷卻，N2吹乾，以50μL甲苯溶解，進樣1μL，分別測出峰高H，以H為縱坐標，以血漿中雷公藤甲素濃度為橫坐標，作出標出曲線校正方程。
樣品製備取雷公藤製劑少許稱重，於50mL容量瓶中，氯仿定容，取50μL，吹乾溶劑，加入50μL四氫呋喃，50μL三氟醋酐，密閉40℃反應30min以上，冷卻，N2吹乾，以50μL甲苯溶解，進樣1μL。
取1mL血漿，加3.50mL乙醚-氯仿(3∶1)，加50μL飽和K2CO3溶液，振蕩，離心，取3.00mL上清液，40℃空氣吹乾，加50μL四氫呋喃，50μL三氟醋酐，密閉40℃反應30min以上，冷卻，N2吹乾，以50μL甲苯溶解，進樣1μL。
血漿回收率試驗空白血漿1mL，分別加入2、8、20μL雷公藤甲素標準品配成的標準液，使血漿中雷公藤濃度成50、200、500ng/mL，按「樣品製備」項處理，測得峰高H，與同濃度的雷公藤甲素標準品直接進樣所測得的峰高Hs相比較，(H/Hs)×100％即為回收率。測定結果見表1。
精密度試驗分別配成50、200、500ng/mL的雷公藤甲素標準品，每種濃度7份，24小時內測定，計算每種濃度的平均色譜峰高(X1)，以及標準偏差(SD1)，日內RSD＝(SD1/X1)×100％。測定結果見表2。
上述濃度連續測定7天，計算每種濃度的7天平均色譜峰高(X2)，以及標準偏差(SD2)，日間RSD＝(SD2/X2)×100％。測定結果見表2。
色譜條件1001氣相色譜儀-63Ni電子捕獲檢測器柱1m×3mmLD不鏽鋼柱，內填5％SE-30擔體Chromosorb W DMCS(80-100目)溫度進樣口280℃，檢測器300℃，柱箱260℃載氣N2(99.999％)，流量30mL/min脈衝電流1.0nA雷公藤甲素的保留時間為7.36min，分析色譜圖見圖1。
表1.回收率濃度 峰高(cm) 回收率 平均回收率(mg/ml) 直接進樣 血樣提取 (％) (％)50 0.90 0.8695.56200 3.45 3.3095.6596.62±1.7580014.0013.8198.64表2.精密度(n＝7)濃度 日內日間(ng/ml)峰高±SD(cm) RSD(％)峰高±SD(cm)RSD(％)50 0.72±0.0273 3.80 0.69±0.038 5.50200 2.83±0.045 1.58 2.85±0.12 4.21800 13.4±0.37 2.76 12 9±0.65 5.0權利要求
1.一種測定雷公藤製劑中雷公藤甲素含量的方法，其特徵是取一定量的雷公藤製劑加入溶劑與過量的三氟醋酐反應生成雷公藤甲素三氟醋酸衍生物，吹乾，用定量溶劑溶解，然後用氣相色譜法測定其含量。
2.根據權利要求1所述的測定雷公藤甲素含量的方法，其特徵是所加的反應溶劑是四氫呋喃。
3.根據權利要求1所述的測定雷公藤甲素含量的方法，其特徵是氣相色譜法採用電子捕獲檢測器測定雷公藤甲素三氟醋酸衍生物的峰高，用標準曲線校正方程換算成雷公藤甲素的量。
4.根據權利要求1所述的測定雷公藤甲素含量的方法，其特徵是氣相色譜儀採用內填SE-30的Chromosorb W DMCS擔體的不鏽鋼柱，高純N2作載氣。
5.一種測定血漿中雷公藤甲素含量的方法，其特徵是定量的取血漿加入定量的乙醚一氯仿混合液和碳酸鹽溶液提取，定量取上清液吹乾，加入溶劑與過量的三氟醋酐反應生成雷公藤甲素三氟醋酸衍生物，吹乾用定量溶劑溶解，然後用氣相色譜法測定其含量。
6.根據權利要求5所述的測定血漿中雷公藤甲素含量的方法，其特徵是乙醚-氯仿混合液是三份體積乙醚和一份體積氯仿組成的混合液。
7.根據權利要求5所述的測定血漿中雷公藤甲素含量的方法，其特徵是所加的反應溶劑是四氫呋喃。
8.根據權利要求5所述的測定血漿中雷公藤甲素含量的方法，其特徵是氣相色譜法採用電子捕獲檢測器測定雷公藤甲素三氟醋酸衍生物的峰高，用標準曲線校正方程換算成雷公藤甲素的量。
9.根據權利要求5所述的測定血漿中雷公藤甲素含量的方法，其特徵是氣相色譜法採用內填SE-30的Chromosorb W DMCS擔體的不鏽鋼柱，高純N2作載氣。
全文摘要
本發明公開了一種測定雷公藤製劑和人血中的雷公藤甲素的方法。採用氣相色譜電子捕獲檢測器測定雷公藤甲素三氟醋酸衍生物。該方法能排除其它雷公藤二萜類的幹擾,線性範圍50—1000ng,最小檢測量20ng。血漿中雷公藤甲素回收率95%以上,日內和日間RSD分別小於3.8%和5.5%。本發明十分精確地定量測定雷公藤甲素含量。
文檔編號G01N33/50GK1222678SQ9710718
公開日1999年7月14日 申請日期1997年11月4日 優先權日1997年11月4日
發明者袁倚盛, 楊麗莉, 張昕 申請人:中國人民解放軍南京軍區南京總醫院