山羊mTOR基因cDNA編碼區3』端核苷酸序列的製作方法
2024-01-19 12:13:15
專利名稱：山羊mTOR基因cDNA編碼區3』端核苷酸序列的製作方法
技術領域：
本發明涉及從山羊睪丸細胞分離的編碼mTOR蛋白的cDNA，更具體地說涉及編碼mTOR蛋白質的cDNA編碼區3』端核苷酸序列和與它對應的胺基酸序列。
背景技術：
TOR(target of rapamycin)屬於PIKK超家族，作為Ser/Thr激酶而起作用，首先在酵母中發現。在哺乳動物細胞中稱mTOR(the mammalian target of rapamycin)或FRAP，RAFT，RAPT，於1994年首次分離並克隆基因。與酵母不同，在哺乳動物細胞中只有一個TOR基因，但mTOR蛋白與不同成分構成兩種複合體，分別稱為mTORC1和mTORC2。mTORC1對雷帕黴素(rapamycin)敏感，介導與營養因子相關的信號轉導過程，調節細胞的生長與增殖過程，對其功能與調節機制了解較多；mTORC2對雷帕黴素(rapamycin)不敏感，目前僅知對肌動蛋白(actin)的組織和細胞骨架的形成起作用，但其細緻的上、下遊調節機制還不清楚。
mTOR基因cDNA的編碼序列在人為7650個核苷酸(NM004958)，編碼了2549個胺基酸(NP004949)，在大鼠為7650核苷酸(NM019906)，編碼了2549個胺基酸(NP063971)，在小鼠為7650個核苷酸(NM020009)，編碼了2549個胺基酸(AAF73196)，由此可以看出該基因在進化上的保守性。在mTOR蛋白的結構中，C端包含了FRB(與FKBP12蛋白和rapamycin結合的結構域)和kinase domain(激酶活性結構域)等主要功能結構域。
儘管目前對細胞生長和細胞周期分裂是如何協調的機制理解的還很少，但信號蛋白TOR(target ofrapamycin)在從酵母到果蠅直至哺乳動物細胞中作為細胞生長和細胞周期進程的中心協調器的作用已為人們所認識，這一在進化上保守的協調器調節著基本的生物加工過程。
如上所述mTOR的活性受免疫抑制劑類藥物rapamycin的特異性抑制，從而抑制依賴於TOR的信號通路的下遊轉導過程。早期發現用rapamycin處理可以誘導酵母細胞和哺乳動物淋巴細胞G1期阻滯；而在其他類型細胞中，rapamycin延滯細胞周期的進程，而不是絕對的阻斷。在哺乳動物細胞中，rapamycin處理可以使細胞形態變小，mTOR信號的重建可以拯救這種縮小的細胞形態表型。已經證明，mTOR對於小鼠早期胚胎發育和胚胎幹細胞的生長是致關重要的。所以，人們認為mTOR信號通路調節細胞周期進程和細胞的生長(或細胞形態大小)。
一般認為，在生長因子對mTOR活性的調節信號轉導通路中，mTOR上遊的Rheb(named for Rashomologue enriched in briain)是一個正調節物，而且具有整合營養和促細胞分裂的信號的功能；TSC1/TSC2(the tuberous sclerosis complex proteins，harmartin/tubrin)是TOR的負調節物，TSC2通過使Rheb失活而起作用；促有絲分裂原通過Akt/PKB使TSC2磷酸化抑制其活性，進而加強TOR信號通路。
最具特色的mTOR下遊效應器包括兩條信號通路，即S6K1(40S核糖體蛋白S6激酶)和4E-BP1(真核細胞翻譯啟始因子4E--eIF4E結合蛋白1)，他們在控制mRNA轉譯中起著平行的作用。mTOR依賴的信號與PI3K依賴的信號共同起作用，使得S6K1磷酸化並激活S6，使得4E-BP1磷酸化並失活，釋放出eIF4E。從而共同促進mRNA轉譯。
迄今，關於mTOR在哺乳動物細胞生長與增殖中發揮調節作用的研究已在人、鼠、牛等哺乳動物的細胞中開展並取得了許多成果，但尚未見有關山羊細胞中mTOR的研究報導，也未見有山羊mTOR基因的cDNA核苷酸序列和與它對應的胺基酸序列的報導。
在各種情況下，有重要的原因研究和開發與山羊mTOR蛋白相關的基因克隆及其重組表達，因為研究清楚山羊的mTOR基因和蛋白的功能，可以用在提高細胞培養、胚胎移植和發育及出生後新生兒的存活的質量等方面，由重組mTOR蛋白製備的抗體可以檢測mTOR基因在不同種類的細胞、不同的細胞周期及個體的不同發育階段的表達。
發明內容
本發明人已經努力從山羊的不同組織細胞中分離mTOR基因。作為結果，本發明人從山羊睪丸組織細胞分離了mTOR基因的cDNA編碼區3』端片段，並且確定了它的核苷酸序列和由此推斷的胺基酸序列。本發明人根據已報導的人(GenBank登陸號NM004958)、大鼠(GenBank登陸號NM019906)、小鼠(GenBank登陸號NM020009)的mTOR基因cDNA編碼區3』端的序列，在不打破胺基酸編碼的前提下設計上遊引物(5』端從天然正確編碼開始)，下遊引物5』端起始於mTOR基因的天然終止密碼子TAA，設計出了一對用於通過RT-PCR方法擴增山羊mTOR基因cDNA編碼區3』端片段的簡併引物(上遊引物稱為P1，下遊引物稱為P2)，並應用這對引物擴增出了特異性片段，測序後得到了山羊mTOR基因的cDNA編碼區3』端612bp片段，序列分析表明與人的mTOR基因cDNA序列同源性為93％，與大鼠的同源性為90％，與小鼠的同源性為89％，且保持了正確的編碼，推導出的由此序列編碼的胺基酸序列與人的相比有1個胺基酸的差別，與大鼠和小鼠均有3個胺基酸的差別。這一cDNA片段稱為「gmTOR」。
所以，本發明的目的是通過已知的不同物種的mTOR的核苷酸序列設計簡併引物，然後通過RT-PCR方法克隆山羊mTOR基因的cDNA編碼區3』端片段。對該片段測序後提供編碼山羊mTOR蛋白的基因的cDNA的編碼區3』端核苷酸序列和由此推斷的胺基酸序列(序列詳見序列表)。
附圖的簡要說明 從下面給出的說明結合附圖，本發明的上面目的的特徵將變的明了。其中
圖1(A)顯示了人mTOR基因的cDNA的核苷酸序列(GenBank登陸號NM004958)。
圖1(B)顯示了大鼠mTOR基因的cDNA的核苷酸序列(GenBank登陸NM019906)。
圖1(C)顯示了小鼠mTOR基因的cDNA的核苷酸序列(GenBank登陸號NM020009)。
圖2顯示了612bp的山羊mTOR基因的cDNA的編碼區3』端核苷酸序列(SEQ ID NO1)和由此推斷的胺基酸序列(SEQ ID NO2)。
圖3是顯示從山羊睪丸組織分離的總RNA的RT-PCR的結果(612bp的cDNA gmTOR)的電泳圖。
圖4是顯示以質粒pMD19-T-gmTOR為模板，以P1、P2為引物進行PCR鑑定的電泳圖。
圖5是顯示將質粒pMD19-T-gmTOR進行Hind III和EcoR I酶切鑑定的電泳圖。
圖6(A)顯示了山羊mTOR基因cDNA的編碼區3』端核苷酸序列與人(NM004958)的mTOR基因cDNA的序列的比較。
圖6(B)顯示了山羊mTOR基因cDNA的編碼區3』端核苷酸序列與大鼠(NM019906)的mTOR基因cDNA的序列的比較。
圖6(C)顯示了山羊mTOR基因cDNA的編碼區3』端核苷酸序列與小鼠(NM020009)的mTOR基因cDNA的序列的比較。
具體實施例方式 為了從山羊組織細胞中分離mTOR基因，本發明人首先按照提取RNA的標準要求採集內蒙古白絨山羊(Inner Mongolia Cashmere Goat，Capra hircus)的各類組織樣本。即，現場宰殺內蒙古白絨山羊後立即採取肌肉、肝、胰腺、腎、淋巴結、脾及睪丸等組織塊(將組織塊大小控制在30～50μg)，放入冷凍管後立即入液氮保存，帶回實驗室後置於-80℃冰箱保存備用。然後利用TaKaRa的總RNA提取試劑盒(TaKaRa RNAiso Reagent)並按照使用說明書的操作程序提取山羊肌肉組織、睪丸組織、淋巴結組織及脾臟組織的總RNA，最後根據文獻報導的哺乳動物mTOR基因在各類組織中的表達情況和總RNA提取結果，選定以睪丸組織總RNA為模板進行反轉錄操作，得到cDNA第一鏈。再以此cDNA第一鏈為模板，利用特異性簡併引物P1、P2進行PCR擴增，得到目的片段。之後將電泳後分離的目的片段切膠回收，測定雙鏈cDNA的濃度，與pMD19-T克隆載體連接構建成質粒pMD19-T-gmTOR。
為了檢測連接反應是否成功和擴增質粒pMD19-T-gmTOR，將其轉化Ecoli DH5α感受態細胞，然後將此被質粒pMD19-T-gmTOR轉化了的Ecoli DH5α細胞塗在含有氨苄青黴素的選擇性平板上，並同時進行藍、白菌落篩選。37℃培養16小時後選取白色的重組菌落再進行平板劃線培養12小時。作為結果，初步認定白色菌落為獲得的重組菌落。
重組菌落和重組質粒pMD19-T-gmTOR的進一步鑑定則分為三個步驟進行。首先挑取劃線培養的菌落用Kieser法提質粒，再以此質粒為模板，用特異性簡併引物P1、P2進行PCR鑑定，陽性的初步認定為重組質粒，其相應的菌落則為重組菌落。然後，再挑取初步認定為重組的菌落進行液體培養，精提質粒，再以此精提的質粒為模板進行PCR鑑定，陽性的質粒進一步進行Hind III和EcoRI雙酶切和EcoR I單酶切鑑定。經過了PCR和酶切雙重鑑定的質粒確定為重組質粒pMD19-T-gmTOR。作為結果，得到了顯示陽性反應的重組質粒和重組菌落。將含有重組質粒pMD19-T-gmTOR的Ecoli DH5α液體培養的樣品送北京華大基因公司測序。作為結果，獲得了612bp的山羊mTOR基因cDNA編碼區3』端片段的核苷酸序列。
顯示上面提到的特徵的本發明的特異性PCR簡併引物P1和P2，可以利用RT-PCR方法擴增出山羊的mTOR基因的cDNA編碼區3』端片段。根據本發明獲得的羊mTOR基因cDNA的核苷酸序列可進一步通過RT-PCR或雜交的方法檢測mTOR基因的組織表達特異性，也可進一步實現羊mTOR基因全長cDNA的克隆。將本發明的cDNA重組到表達載體上可能會表達出完整的mTOR蛋白，進而可用於抗體生產，檢測山羊各類細胞和組織、早期胚胎、個體在不同狀態下的mTOR基因的表達情況等等。
在下面的實施例中進一步說明了本發明，但這並不限制本發明的範圍。
實施例1山羊mTOR基因的cDNA編碼區3』端片段的克隆 為了克隆來自山羊睪丸組織細胞的mTOR包含3』端編碼區的cDNA，根據圖1(A，B，C)公開的核苷酸序列(NM004958、NM019906、NM020009)，首先製備允許擴增612bp的cDNA的PCR簡併引物，即上遊引物5』-GAC CGT/G CTG AGT GGG/A AAG-3』和下遊引物5』-TTA CCA GAA A/GGGG/ACA CCA G-3』。然後在上遊引物5『端加上BamH I酶切位點，在下遊引物5』端加上Xba I酶切位點，即有上遊引物P15『GC GGATCC GAC CGT/G CTG AGT GGG/AAAG 3』，下遊引物P25『GC TCTAGATTA CCA GAAA/GGG G/ACA CCA G 3』。
為了利用RT-PCR方法克隆mTOR的cDNA，從山羊睪丸組織分離山羊總RNA，利用TaKaRa總RNA提取試劑盒(TaKaRa RNAi so Reagent)並按照使用說明書的操作程序提取山羊睪丸組織總RNA，進行電泳檢測和紫外測定RNA濃度後置於-80℃冰箱保存備用。然後，利用TaKaRa的M-MLV反轉錄酶並按照使用說明書的操作程序進行反轉錄反應，得到cDNA第一鏈。
以上面得到的cDNA第一鏈為模板，以上述合成的P1、P2為引物，利用TaKaRa Premix Taq DNA聚合酶進行PCR反應。PCR反應體系為25μl模板cDNA 2μl，P1P2 1μl，Premix Taq 12.5μl，d3H2O 9.5μl；反應循環為94℃4分鐘；94℃1分鐘，50℃1分鐘，72℃，1分鐘，35個循環；72℃10分鐘。PCR反應結束後，取PCR產物10μl進行1％瓊脂糖凝膠電泳(0.5％TAE，電壓8v/cm，1.5h)。電泳結束，0.5μg/ml的EB染色液中染色20分鐘，再清水浸泡10分鐘後置於凝膠成像儀觀察照相。作為結果，得到了612bp的特異性目的片段(參見圖3)。
為了將獲得的612bp的cDNA特異性目的片段連接到pMD19-T克隆載體上，首先將電泳分離的612bp的cDNA特異性目的片段進行切膠，然後利用膠回收試劑盒回收目的片段cDNA，紫外測定濃度後按照pMD19-T克隆載體說明書操作程序完成連接。為了檢測連接反應是否成功和進一步擴增質粒pMD19-T-gmTOR，將其轉化E.coli DH5α感受態細胞，然後將此被質粒pMD19-T-gmTOR轉化了的E.coliDH5α細胞塗在含有氨苄青黴素和X-gal的選擇性平板上，並同時塗上IPTG進行誘導，實現藍、白菌落篩選。塗布的平板37℃培養16小時後選取白色的重組菌落再進行平板劃線培養12小時。作為結果，得到了白色的重組菌落。
進一步的工作是對重組菌落和重組質粒進行鑑定(理論上將只有含有重組質粒的菌落才是真正的重組菌落)。首先將白色的重組菌落進行劃線培養12小時，然後挑取菌落，用Kieser法提質粒。再以此質粒為模板，用特異性引物P1、P2進行PCR鑑定。對陽性的菌落進行搖床振蕩液體培養12小時，精提質粒，紫外檢測濃度並進行1％瓊脂糖凝膠電泳(0.5％TAE，電壓8v/cm，1.5h)檢測，作為結果，得到了與預期結果大小相符的質粒。最後一步是對精提的質粒利用PCR反應和酶切反應進行二次鑑定。PCR反應以質粒為模板，以P1、P2為引物，反應體系為25μl質粒DNA(123μg/ml)0.1μl，P1P2 1μl，Premix Taq12.5μl，d3H2O 11.4μl；反應循環為94℃4分鐘；94℃30秒，50℃30秒，72℃，40秒，35個循環；72℃10分鐘。PCR反應結束後，取PCR產物10μl進行1％瓊脂糖凝膠電泳(0.5％TAE，電壓8v/cm，1.5h)。電泳結束，0.5μg/ml的EB染色液中染色20分鐘，再清水浸泡10分鐘後置於凝膠成像儀觀察照相。作為結果，得到了612bp的特異性目的片段(參見圖4)。酶切鑑定採用TaKaRa EcoR I和Hind III雙酶切，同時進行單酶切。作為結果，雙酶切和單酶切都得到了與預期結果大小相符的片段(參見圖5)。
經過兩次鑑定的重組質粒，與其相應的菌落即是重組菌落。將液體培養的重組菌落樣品1ml送往北京華大基因公司用測序。作為結果，獲得了612bp的山羊mTOR基因的cDNA編碼區3』端片段的核苷酸(參見圖2)。
實施例2山羊mTOR基因的cDNA的核苷酸序列 圖2顯示了實施例1中獲得的cDNA克隆的核苷酸序列(SEQ ID NO1)，和由此推斷的胺基酸序列(SEQ ID NO2)。在圖2中，顯示的序列是mTOR的核苷酸序列，它包括了cDNA編碼區3』端的612bp的核苷酸序列，編碼形成分子量推斷的23.1KDa的成熟蛋白質的203個胺基酸。
圖6(A、B、C)顯示了山羊mTOR基因cDNA的核苷酸序列與人(NM004958)、大鼠(NM019906)和小鼠(NM020009)的mTORcDNA的核苷酸序列的比較。表明1)山羊mTOR基因cDNA的核苷酸序列與人的mTOR基因cDNA核苷酸序列有93％的同源性；與大鼠的mTOR基因cDNA核苷酸序列有90％的同源性；與小鼠的mTOR核苷酸序列有89％的同源性。由山羊的這段核苷酸序列推導出的胺基酸序列與人的mTOR蛋白相同位置片段的胺基酸序列相比(NP004949)有1個胺基酸的差別，同源性99％；與大鼠的mTOR蛋白(NP063971)和小鼠的mTOR蛋白(AAF7319)均有3個胺基酸的差別，同源性98％。
正如清楚說明的和如上說明，本發明提供利用RT-PCR法克隆山羊mTOR基因cDNA編碼區3』端的引物和編碼山羊的mTOR蛋白質C端的包括3』端的612bp的cDNA和由此推斷的胺基酸序列。cDNA包括了612bp的核苷酸序列，它編碼含有203胺基酸的蛋白質，經過進一步的改造後它可以重組到如pET或pcDNA3.1等原核或真核表達載體上進行表達。重組的cDNA可能會表達出完整的mTOR蛋白的C端多肽段，進而可用於抗體生產，檢測山羊各類細胞和組織、早期胚胎、個體在不同狀態下的mTOR基因的表達情況等等。
1.山羊mTOR基因cDNA的編碼區3』端612bp片段，它的核苷酸序列如SEQ ID NO1所述。
2.由cDNA編碼區3』端的612bp核苷酸序列推斷出的山羊mTOR蛋白質的C端胺基酸序列如SEQ ID NO2所述。
山羊mTOR基因cDNA編碼區3』端核苷酸序列.ST25
SEQUENCE LISTING
旭，日幹
吳，應積
王，志鋼
山羊mTOR基因cDNA編碼區3』端核苷酸序列
no
no
2007-02-02
2
PatentIn version 3.3
1
612
DNA
Capra hircus
CDS
(1)..(609)
1
gac cgt ctg agt ggg aag att ctg cac att gac ttt ggg gac tgc ttt 48
Asp Arg Leu Ser Gly Lys Ile Leu His Ile Asp Phe Gly Asp Cys Phe
1 5 10 15
gag gtt gct atg acc aga gag aaa ttc cca gag aag att cca ttt aga 96
Glu Val Ala Met Thr Arg Glu Lys Phe Pro Glu Lys Ile Pro Phe Arg
20 25 30
cta acg aga atg ctg acc aat gct atg gag gtc acg ggc ctt gat ggc144
Leu Thr Arg Met Leu Thr Asn Ala Met Glu Val Thr Gly Leu Asp Gly
35 40 45
aac tac cgg atc acg tgc cac acc gtg atg gag gtg ctc cgg gag cac192
Asn Tyr Arg Ile Thr Cys His Thr Val Met Glu Val Leu Arg Glu His
50 55 60
aag gac agc gtc atg gcc gtg ctg gaa gcc ttc gtc tat gac ccc ctg240
Lys Asp Ser Val Met Ala Val Leu Glu Ala Phe Val Tyr Asp Pro Leu
65 70 75 80
ctg aac tgg agg ctg atg gac aca aat acc aaa ggt aac aag cga tca288
Leu Asn Trp Arg Leu Met Asp Thr Asn Thr Lys Gly Asn Lys Arg Ser
85 90 95
cgg acg agg acc gat tcc tac tct gct ggc cag tca gta gaa att ttg336
Arg Thr Arg Thr Asp Ser Tyr Ser Ala Gly Gln Ser Val Glu Ile Leu
100 105 110
gat ggt gtg gaa ctt ggg gaa cca gcc cat aag aaa acg ggg acc acg384
Asp Gly Val Glu Leu Gly Glu Pro Ala His Lys Lys Thr Gly Thr Thr
115 120 125
gtg cca gaa tct att cat tct ttc att gga gat ggt ttg gtg aaa cca432
Val Pro Glu Ser Ile His Ser Phe Ile Gly Asp Gly Leu Val Lys Pro
130 135 140
gag gcc cta aat aag aaa gct att caa att att aac agg gtt cga gat480
Glu Ala Leu Asn Lys Lys Ala Ile Gln Ile Ile Asn Arg Val Arg Asp
145 150 155 160
aaa ctc act ggt cgg gac ttc tct cat gac gaa acc ctg gat gtc cca528
Lys Leu Thr Gly Arg Asp Phe Ser His Asp Glu Thr Leu Asp Val Pro
165 170 175
aca caa gtc gag ctg ctc atc aaa caa gcg aca tcc cat gaa aac ctc576
Thr Gln Val Glu Leu Leu Ile Lys Gln Ala Thr Ser His Glu Asn Leu
180 185 190
tgc cag tgc tac att ggc tgg tgc cct ttc tgg taa612
Cys Gln Cys Tyr Ile Gly Trp Cys Pro Phe Trp
195 200
2
203
PRT
Capra hircus
2
Asp Arg Leu Ser Gly Lys Ile Leu His Ile Asp Phe Gly Asp Cys Phe
1 5 10 15
Glu Val Ala Met Thr Arg Glu Lys Phe Pro Glu Lys Ile Pro Phe Arg
20 25 30
Leu Thr Arg Met Leu Thr Asn Ala Met Glu Val Thr Gly Leu Asp Gly
35 40 45
Asn Tyr Arg Ile Thr Cys His Thr Val Met Glu Val Leu Arg Glu His
50 55 60
Lys Asp Ser Val Met Ala Val Leu Glu Ala Phe Val Tyr Asp Pro Leu
65 70 75 80
Leu Asn Trp Arg Leu Met Asp Thr Asn Thr Lys Gly Asn Lys Arg Ser
85 90 95
Arg Thr Arg Thr Asp Ser Tyr Ser Ala Gly Gln Ser Val Glu Ile Leu
100 105 110
Asp Gly Val Glu Leu Gly Glu Pro Ala His Lys Lys Thr Gly Thr Thr
115 120 125
Val Pro Glu Ser Ile His Ser Phe Ile Gly Asp Gly Leu Val Lys Pro
130 135 140
Glu Ala Leu Asn Lys Lys Ala Ile Gln Ile Ile Asn Arg Val Arg Asp
145 150 155 160
Lys Leu Thr Gly Arg Asp Phe Ser His Asp Glu Thr Leu Asp Val Pro
165 170 175
Thr Gln Val Glu Leu Leu Ile Lys Gln Ala Thr Ser His Glu Asn Leu
180 185 190
Cys Gln Cys Tyr Ile Gly Trp Cys Pro Phe Trp
195 200
權利要求
獨立權利要求
本發明涉及一段從山羊睪丸細胞分離的編碼mTOR蛋白的cDNA，更具體地說涉及編碼mTOR蛋白質的cDNA編碼區3』端核苷酸序列和與它對應的胺基酸序列。目前應用RT-PCR方法克隆基因並獲得相應的核苷酸序列是獲得基因(cDNA)核苷酸序列的常用方法。本項發明設計了一對簡併引物並應用這對引物通過RT-PCR方法擴增出了山羊mTOR基因cDNA的編碼區3』端特異性片段，經過測序後得到這一片段的612bp的核苷酸序列，其特徵是在沒有羊mTOR基因核苷酸序列的情況下，通過比較已知的人、大鼠、小鼠的mTOR基因的核苷酸序列，找到保守區，然後在不打破胺基酸編碼的前提下設計PCR簡併引物，進而通過RT-PCR方法擴增出了山羊mTOR基因cDNA編碼區3』端特異性片段，測序後得到了612bp的核苷酸序列和與它對應的胺基酸序列，這一山羊mTOR基因cDNA編碼區3』端片段的核苷酸序列和與它對應的胺基酸序列在國內外是首次獲得。
基於上述說明的本發明的技術特徵，本發明的獨立權利要求表述為一種自山羊分離的多核苷酸序列和與它對應的胺基酸序列，是下列序列之一1)序列表中SEQ ID NO1的cDNA序列；2)與序列表中SEQID NO1的cDNA序列對應的標註為SEQ ID NO2的胺基酸序列。
全文摘要
本發明涉及從山羊睪丸細胞分離的編碼mTOR蛋白的cDNA和與它對應的胺基酸序列。本發明通過比較已知的人、大鼠、小鼠mTOR基因的核苷酸序列，找到保守區，在不打破胺基酸編碼的前提下設計出了一對用於RT-PCR擴增山羊mTOR基因cDNA編碼區3』端片段的簡併引物並用這對引物通過RT-PCR方法擴增出了特異性片段，測序後得到了羊mTOR基因cDNA的編碼區3』端612bp的核苷酸序列和與它對應的胺基酸序列。獲得的這612bp的核苷酸序列可進一步用於羊mTOR基因全長cDNA的克隆及用於通過RT-PCR或雜交的方法檢測mTOR基因的組織表達特異性，也可用於重組表達得到蛋白後製備檢測mTOR的抗體。
文檔編號C12N15/12GK101245346SQ200710084518
公開日2008年8月20日 申請日期2007年2月12日 優先權日2007年2月12日
發明者旭日幹, 吳應積, 王志鋼 申請人:旭日幹, 吳應積, 王志鋼