一種利用ssr指紋圖譜鑑別紫雲英品種的方法
2023-05-06 18:53:46 1
專利名稱：一種利用ssr指紋圖譜鑑別紫雲英品種的方法
技術領域：
本發明屬於分子生物學領域，更具體涉及一種利用SSR指紋圖譜鑑別綠肥作物紫 雲英品種的方法。
背景技術：
紫雲英(學名-Jistragalus ^iflicm)是豆科黃芪屬的植物。屬一年生或越年生草 本。又稱紅花草、翹搖。廣泛分布於北緯25 33度地區，多生長在溪邊、山坡及潮溼處。中 國早在明、清時代就已在長江中下遊地區大面積種植。紫雲英主根較肥大，一般入土 40 50釐米，側根入土較淺。紫雲英主根、側根及地表的細根上都能著生根瘤，以側根上居多 數。莖呈圓柱形，中空，柔嫩多汁，有疏茸毛。栽培品種株高一般80 120釐米，野生的只 有10 30釐米。葉多數為奇數羽狀複葉，具7 13枚小葉。小葉全緣，倒卵形或橢圓形。 花為傘形花序，一般腋生，少頂生，常有小花8 10多，族生在花梗上，排列成輪狀。莢果兩 列，聯合成三角形，稍彎，無毛，頂端有喙。每莢有種子4 10粒，種子腎狀，種皮光滑，一般 黃綠色。千粒重3 3. 5克。現在中國南方多用作稻田冬季綠肥栽種，一般在秋季套播於 晚稻田中，作早稻的基肥。紫雲英除用作綠肥外，還能直接或青貯紫雲英作飼料，營養價值 頗高。目前，紫雲英的品種鑑別以生育特性與形態外觀為主按生育期和成熟期可分 早、中、晚3個類型。紫雲英的主要優良品種，早熟種有信陽種、樂平種、閩紫1號等，中熟種 有餘江大葉籽、萍寧3號、常德種、閩紫6號等，晚熟品種有寧波大橋種、浙紫5號等。由於 紫雲英異花傳粉，雜交率較高，單靠形態觀察與生長特性難以準確地進行品種的鑑別。為了 更好地進行品種識別，達到保護品種知識權益的目的，需要有更為快速、準確的進行品種鑑 別的方法。
發明內容
本發明提供了一種利用SSR指紋圖譜鑑別紫雲英品種的方法，可以更準確地從植物基 因的分子水平鑑別紫雲英品種資源。本發明利用SSR指紋圖譜用於鑑別紫雲英品種，其中涉及一種紫雲英基因 組中特定的SSR位點，所述特定的SSR位點的序列由6條序列組成，其序列由短到長 排歹丨J 為① ACACACACAACACACACAAACACA ；② ACACACACACACACACAAACAAACACAAACAC ； ③ CTCTCTCTGATCTCTCTCTCCCTCTCCC TCTCCCTCTCCCTCT ；④ CTCTTCCTCTTCTTCTCTTTCATATG CTCCACT CTTCCTCTCTTCTTCTCT ；⑤ CCC ACACCACCACTCACCAACATCACCACTCACACACCAGCACCTTC CACTCCCTTCAACCACCCCCACCACTACTCAAACACCACCATCTCACCA ； ACACACACACACACACACACACGTG TGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGT GTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTG TGTGCGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGT GTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGCGAGTGTGTGTGTGTGTGTG TGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTACGTGCGCGTGTGTGTGTGCGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGCGTGCGT GCGTGTGTGTGTGTGT。
上述紫雲英基因組中特定的SSR位點的兩側設計的引物序列由6對引物對組成， 引物對序列如下① EG6-54 上遊CGCCCATAAATCTCTTCCA 下遊CTCCCTTTGATCAATCTCGC ；
②EG6-167 上遊TTTCACTTCTAGAAATTTGTTGACA，下遊ATGGATGGTCAACTCGGTAAC ；
③Bm2-8 上遊:GCTCGGCCTTTCACATGG,下遊GAGAAATAGGTACCAGTTCTAGGG ；
④Lm2-44 上遊GATTGACAAAGTCTGCCG，下遊ATGCTCCCCTCTTCACACA ；⑤ EG6-170 上 遊GGCCAACACTCACTACCCTCAT，下遊CAACCAACGATCACTCCCACC ；⑥ YAGT37 上遊 CGCCCATAAATCTCTTCCA，下遊TGCGCACACACAACG。引物的篩選方法，包括下列步驟紫雲英 總DNA的提取；用親和磁珠富集紫雲英基因組中的SSR位點，SSR位點兩側引物的設計篩 選；PCR擴增；PCR產物電泳及染色，根據電泳結果篩選具有多態性的引物。其中所述紫雲英總DNA提取方法，以紫雲英品種幼苗或成熟植株的葉片或莖段中 的一種或兩種為材料，提取基因組DNA，具體的操作步驟為①稱取0. 1克植物組織，用去離 子水衝洗乾淨，迅速轉入1. 5ml離心管中；②加入液氮，迅速用電鑽搗碎，加入600mlCTAB ； ③65°C水浴lh，混勻；④加等體積的氯仿一異戊醇，氯仿與異戊醇的體積比為24 :1，混勻；
⑤12000rpm離心6min，取上清液；⑥向上清液中加入2倍體積的無水乙醇或2/3體積的異 丙醇沉澱DNA，-20°C放置20min ；⑦12000rpm離心6min，棄上清液；⑧加75%的乙醇清洗 DNA, 12000rpm離心2min，棄上清液；⑨風乾後加入50ul的TE緩衝液溶解DNA，備用。所述PCR擴增，其PCR反應體系為25 μ L的PCR反應體系中包括提取的DNA溶 液 1 yL, 10nmol/L 引物 2 μ L, 2. 5 mmol/LdNTP 2 μ L, IOXPCRbuffer 2.5 μ L, Taq DNA聚合酶1 U ；PCR反應程序為94°C預變性7min;隨後30個循環，每個循環94°C變 性 30 s, 55°C退火 30 s, 72°C延伸 30s;最後 72°C延伸 10 min。所述PCR產物電泳及染色，採用6%聚丙烯醯胺凝膠電泳及銀染顯色。本發明的一種利用SSR指紋圖譜鑑別紫雲英品種的方法，其特徵在於所述方法 包括(1)紫雲英總DNA的提取；(2)根據所述特定的SSR位點兩側設計引物；(3)對引物 進行PCR擴增；(4)PCR產物經電泳及染色，形成不同紫雲英品種的SSR指紋圖譜，然後進行 紫雲英的品種鑑別。其中所述紫雲英總DNA提取方法，以紫雲英品種幼苗或成熟植株的葉片或莖段中 的一種或兩種為材料，提取基因組DNA，具體的操作步驟為①稱取0. 1克植物組織，用去離 子水衝洗乾淨，迅速轉入1. 5ml離心管中；②加入液氮，迅速用電鑽搗碎，加入600mlCTAB ； ③65°C水浴lh，混勻；④加等體積的氯仿一異戊醇，氯仿與異戊醇的體積比為24 :1，混勻； ⑤12000rpm離心6min，取上清液；⑥向上清液中加入2倍體積的無水乙醇或2/3體積的異 丙醇沉澱DNA，-20°C放置20min ；⑦12000rpm離心6min，棄上清液；⑧加75%的乙醇清洗 DNA, 12000rpm離心2min，棄上清液；⑨風乾後加入50ul的TE緩衝液溶解DNA，備用。所述PCR擴增，其PCR反應體系為25 μ L的PCR反應體系中包括提取的DNA溶 液 1 yL, 10nmol/L 引物 2 μ L, 2. 5 mmol/LdNTP 2 μ L, IOXPCRbuffer 2.5 μ L, Taq DNA聚合酶1 U。PCR反應程序為94°C預變性7min;隨後30個循環，每個循環94°C變 性 30 s, 55°C退火 30 s, 72°C延伸 30s;最後 72°C延伸 10 min。本發明的顯著優點
1)以提取的紫雲英總DNA為鑑定材料，它可以在紫雲英的任何生長時期與生長部位進 行取材提取而不影響反應結果，從而避免紫雲英生長狀態與生長時期對品種鑑別的幹擾與影響；2)採用的分子標記技術為微衛星分子標記，也稱SSR標記。這種標記廣泛隨機分布於 真核生物基因組中，具有高度的多態性、高信息含量、高度的可重複性和共顯性遺傳方式。 因此，SSR標記方法比其他標記方法具有簡便、快捷、特異、穩定、所揭示的等位基因多樣性 高等特點；3)通過大量的篩選工作，得到了可在紫雲英不同品種中形成多態性的SSR位點， 用這種SSR位點兩翼序列設計的引物，可以用於構建紫雲英不同品種的指紋圖譜，達到鑑 別紫雲英品種的目的。
圖1為引物EG6-54的指紋帶型； 圖2為引物EG6-167的指紋帶型；
圖3為引物Bm2-8的指紋帶型； 圖4為引物Lm2-44的指紋帶型； 圖5為引物EG6-170的指紋帶型； 圖6為引物YAGT37的指紋帶型；
圖7為紫雲英9個參試品種在75bp-300bp範圍形成的指紋帶型。
具體實施例方式1、紫雲英總DNA的提取
(1)參試紫雲英品種1 閩紫1號；2 信陽種；3 寧波大橋種；4 =8324411 ；5 閩紫6 號；6:8410441; 7 :8487711 ;8 弋江籽；9 餘江大葉籽；其中閩紫1號、8324411、閩紫6 號、8410441、8487711由福建省農業科學院提供，信陽種由河南省信陽市農業科學研究所提 供，餘江大葉籽由江西省農業科學院提供，弋江籽由安徽省農業科學院提供，寧波大橋種由 浙江省農業科學院提供。(2)以紫雲英品種幼苗為材料，採用CTAB法提取基因組DNA，由於CTAB法對於 不同作物的提取程序有所不同，我們經過改進，簡化了針對紫雲英的步驟，具體過程為① 稱取0. 1克植物組織植物組織包括紫雲英幼苗的莖和葉的部分，用去離子水衝洗乾淨，迅 速轉入1. 5ml離心管中；②加入液氮，迅速用電鑽搗碎，加入600mlCTAB(CTAB購自Amresco 公司)；③65°C水浴Ih (每20min反轉搖勻一次)；④加等體積的氯仿一異戊醇(體積比24 1)，顛倒混勻；⑤12000rpm離心6min，取上清於新管中；⑥向上清中加入2倍體積的無水乙 醇(或2/3體積的異丙醇)沉澱DNA，-20°C放置20min 』⑦12000rpm離心6min，去上清；⑧ 加75%的乙醇清洗DNA，12000rpm離心2min，去上清；⑨風乾後加入50ul的TE緩衝液溶 解DNA，備用；上述使用的有機溶劑均購自北京化工廠。2.用親和磁珠富集紫雲英基因組中特定的SSR序列本步驟應用Invitrogen公 司的Dynal磁珠與生物素標記的微衛星探針(CT) 15、(AG) 15、(GT) 15、(AC) 15與紫雲英基因組 DNA酶切片段雜交，酶切使用的內切酶為Ec0RI，MSeI，均購自NEB公司，酶切步驟為；取10 μ g提取的紫雲英DNA在50 μ 1反應體系中用限制性內切酶EcoRI和MseI酶切消化3小 時，取5μ1酶切產物電泳檢測酶切效果，確定酶切完全。而後按Dynal磁珠的操作說明用 以捕獲300-1500 bp含有微衛星序列的DNA片段，連接到pMD18_T載體(購自Takara公 司)中，構建富集微衛星序列的小片段插入文庫。利用PMD18-T載體兩端的測序接頭引物(引物可以直接購自Takara公司也可以按其產品目錄提供的序列合成)和根據微衛星核心 序列設計的引物(CT) 15、(AG)15, (GT)15, (AC)15 (由上海生工合成)配合組成引物對用以直接 進行文庫PCR篩選，從800個轉化子中獲得了 236個陽性克隆，對其進行測序分析，獲 得了 133個微衛星序列，微衛星序列的富集效率達到16. 7%。3. SSR引物的設計篩選及PCR擴增含有微衛星序列的DNA片段對SSR序列進行 分析，其中35個微衛星重複序列的兩端均存在較長的鹼基序列(>30bp)。據其設計特異 引物對，對9個品種紫雲英全基因組DNA進行2次篩選。PCR反應體系為25 μ L的PCR 反應體系中包括提取的DNA溶液1 yL，10nmol/L引物2 μ L, 2. 5 mmol/LdNTP 2 μ L, IOXPCRbuffer 2.5 μ L, Taq DNA 聚合酶 1 U。PCR 反應程序為94°C預變性 7min ；隨後 30個循環，每個循環94°C變性30 s, 55°C退火30 s, 72°C延伸30s ；最後72°C延伸10 min0由於SSR引物具有很高的特異性，這些引物對一般的反應結果可以分為不反應、無多 態性以及有多態性。根據PCR的電泳結果只選取帶型清晰，且有多態性的引物形成的不同 指紋帶型作為品種鑑別的依據。這裡不必要進行結果統計，因為統計的結果主要用於構建 品種聚類群，而無助於進行品種間的鑑別。結果共得到可在不同品種中可擴增出帶型清晰， 且有多態性的6對引物。證明這些引物對之間的SSR位點在紫雲英不同品種的基因組中存 在著明顯的多態性，PCR的電泳結果可用於構建品種間的指紋圖譜。4.聚丙烯醯胺凝膠電泳及銀染顯色，具體操作程序為①配製6%聚丙烯醯胺凝 膠，吸取PCR產物7μ L和IyL的上樣緩衝液，充分混勻上樣。上樣完畢後140 V電壓電 泳。當溴酚藍指示劑距下邊1 cm 2 cm時，結束電泳。②電泳結束後，關閉電泳儀，拿出 玻璃板並用藥匙柄小心撬開，移走上層玻璃板，將附有凝膠的玻璃板以凝膠面朝下浸入已 準備好的放有雙蒸水的乾淨的瓷盤中，凝膠即落下，或輕輕用藥匙柄把膠剝開一角，即可落 入盤內；③凝膠的固定倒掉瓷盤中的水，加入固定液(100 mL/L乙醇)，在搖床上緩緩搖 動15 min;倒掉瓷盤中的固定液，用雙蒸水洗2次；④凝膠的染色倒掉瓷盤中的水，加入 染色液(20 g/L AgNO3),在搖床上緩緩搖動染色20 min;⑤洗膠倒掉瓷盤中的染色液，用 雙蒸水洗2次，共計1 min;⑥凝膠的顯影加少量顯色液(30 g/L Na2CO3)衝洗15 s，再加 一定體積顯色液，輕搖瓷盤直到看到清晰的條帶，一般為5 min 6 min，時間不要過長，否 則背景會過深；⑦終止顯影倒掉瓷盤中的顯影液，迅速倒入定影液(100 mL/L HAC),緩 緩搖動2 min 3 min;⑧識讀序列倒掉瓷盤中的定影液，用雙蒸水洗2次，每次2 min, 將凝膠放在空氣中乾燥，識讀序列。也可用數位相機或凝膠成像儀攝像。5. SSR指紋圖譜結果分析及判定6對引物對應的SSR位點在不同紫雲英品種中 形成的指紋帶型見圖1-圖6。其中圖1能對紫雲英參試品種在150bp-300bp範圍形成4種 指紋帶型；
圖2能對紫雲英參試品種在80bp-150bp範圍形成5種指紋帶型；圖3能對紫雲英參試 品種在75bp-100bp範圍形成5種指紋帶型；圖4能對紫雲英參試品種在70bp-150bp範圍 形成4種指紋帶型；圖5能對紫雲英參試品種在240bp-300bp範圍形成3種指紋帶型；圖6 能對紫雲英參試品種在250bp-650bp範圍形成3種指紋帶型；
下面我們以6個SSR位點中的2個位點為例說明如何根據其電泳的指紋圖譜帶型對參 試的9個品種進行區別。實施例1一、參試紫雲英品種1 閩紫1號；2 信陽種；3 寧波大橋種；4 =8324411 ；5 閩紫6 號；6:8410441; 7 :8487711 ;8 弋江籽；9 餘江大葉籽；其中閩紫1號、8324411、閩紫6 號、8410441、8487711由福建省農業科學院提供，信陽種由河南省信陽市農業科學研究所提 供，餘江大葉籽由江西省農業科學院提供，弋江籽由安徽省農業科學院提供，寧波大橋種由 浙江省農業科學院提供。二、SSR標記的鑑別結果
1、由不同的SSR位點設計引物擴增形成的參試紫雲英樣品的帶型圖譜圖7為引物 EG6-54 (圖7中右側)及引物EG6-167 (圖7中左側)對紫雲英9個參試品種在75bp_300bp 範圍形成的指紋帶型(Μ為分子量標準，0為空白對照，1-9為參試樣品編號)。2、紫雲英品種帶型的指紋分析將圖7中擴增明顯的主帶定義為不同帶型，如圖7 所示分別用大寫英文字母Α，B, C, D, Ε, F，G表示，可通過表1將紫雲英參試品種的帶型的指 紋圖譜加以總結。表1紫雲英參試品種的帶型的指紋圖譜分析
「 + 」表示1-9號參試品種所具有的帶型。
由表1可見只要根據所用的2個SSR位點的多態性就可將參試的9個樣品分為8個 類型，即除3號與9號之間不能區別外，其餘樣品之間均不同。因而可從分子水平對紫雲英 品種加以鑑別。
權利要求
一種紫雲英基因組中特定的SSR位點，其特徵在於，所述特定的SSR位點的序列由6條序列組成，其序列由短到長排列為①ACACACACAACACACACAAACACA；②ACACACACACACACACAAACAAACACAAACAC；③CTCTCTCTGATCTCTCTCTCCCTCTCCC TCTCCCTCTCCCTCT； ④CTCTTCCTCTTCTTCTCTTTCATATGCTCCACT CTTCCTCTCTTCTTCTCT；⑤CCC ACACCACCACTCACCAACATCACCACTCACACACCAGCACCTTCCACTCCCTTCAACCACCCCCACCACTACTCAAACACCACCATCTCACCA；⑥ACACACACACACACACACACACGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGT GTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGCGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGCGAGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTACGTGCGCGTGTGTGTGTGCGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGCGTGCGTGCGTGTGTGTGTGTGT。
2.一種利用權利要求1所述紫雲英基因組中特定的SSR位點的兩側設計的 引物，其特徵在於，所述引物序列由6對引物對組成，引物對序列如下①EG6-54 上遊:CGCCCATAAATCTCTTCCA 下遊CTCCCTTTGATCAATCTCGC ；② EG6-167 上 遊:TTTCACTTCTAGAAATTTGTTGACA,下遊ATGGATGGTCAACTCGGTAAC ；③ Bm2_8 上 遊:GCTCGGCCTTTCACATGG,下遊GAGAAATAGGTACCAGTTCTAGGG ；④ Lm2_44 上 遊:GATTGACAAAGTCTGCCG,下遊ATGCTCCCCTCTTCACACA ；⑤ EG6-170 上遊 GGCCAACACTCACTACCCTCAT,下遊CAACCAACGATCACTCCCACC ；⑥ YAGT37 上遊 CGCCCATAAATCTCTTCCA,下遊TGCGCACACACAACG。
3.—種如權利要求2所述的引物的篩選方法，其特徵在於所述方法包括下列步驟紫 雲英總DNA的提取；用親和磁珠富集紫雲英基因組中的SSR位點，SSR位點兩側引物的設 計篩選；PCR擴增；PCR產物電泳及染色，根據電泳結果篩選具有多態性的引物。
4.根據權利要求3所述的引物的篩選方法，其特徵在於所述紫雲英總DNA提取方法， 以紫雲英品種幼苗或成熟植株的葉片或莖段中的一種或兩種為材料，提取基因組DNA，具體 的操作步驟為①稱取0. 1克植物組織，用去離子水衝洗乾淨，迅速轉入1. 5ml離心管中； ②加入液氮，迅速用電鑽搗碎，加入600mlCTAB ；③65°C水浴lh，混勻；④加等體積的氯仿一 異戊醇，氯仿與異戊醇的體積比為24 :1，混勻；⑤12000rpm離心6min，取上清液；⑥向上清 液中加入2倍體積的無水乙醇或2/3體積的異丙醇沉澱DNA，_20°C放置20min ；⑦12000rpm 離心6min，棄上清液；⑧加75%的乙醇清洗DNA，12000rpm離心2min，棄上清液；⑨風乾 後加入50ul的TE緩衝液溶解DNA，備用。
5.根據權利要求3所述的引物的篩選方法，其特徵在於所述PCR擴增，其PCR反應 體系為25 yL的PCR反應體系中包括提取的DNA溶液1 μ L，IOnmol L—1引物2 μ L, 2.5 mmol L-1ClNTP 2 μ L, IOXPCRbuffer 2.5 μ L, Taq DNA 聚合酶 1 U ;PCR 反應程序 為94°C預變性7min;隨後30個循環，每個循環94°C變性30 s, 55°C退火30 s, 72°C 延伸30s;最後72°C延伸10 min。
6.根據權利要求3所述的引物的篩選方法，其特徵在於所述PCR產物電泳及染色， 採用6%聚丙烯醯胺凝膠電泳及銀染顯色。
7.一種利用SSR指紋圖譜鑑別紫雲英品種的方法，其特徵在於所述方法包括(1)紫 雲英總DNA的提取；(2)根據權利要求1所述的SSR位點兩側設計引物；(3)對引物進行 PCR擴增；(4)PCR產物經電泳及染色，形成不同紫雲英品種的SSR指紋圖譜，然後進行紫雲英的品種鑑別。
8.根據權利要求7所述的利用SSR指紋圖譜鑑別紫雲英品種的方法，其特徵在於所 述紫雲英總DNA提取方法，以紫雲英品種幼苗或成熟植株的葉片或莖段中的一種或兩種 為材料，提取基因組DNA，具體的操作步驟為①稱取0. 1克植物組織，用去離子水衝洗幹 淨，迅速轉入1. 5ml離心管中；②加入液氮，迅速用電鑽搗碎，加入600mlCTAB ；③65°C水浴 lh，混勻；④加等體積的氯仿一異戊醇，氯仿與異戊醇的體積比為24 :1，混勻；⑤12000rpm 離心6min，取上清液；⑥向上清液中加入2倍體積的無水乙醇或2/3體積的異丙醇沉 澱DNA，-20°C放置20min ；⑦12000rpm離心6min，棄上清液；⑧加75%的乙醇清洗DNA， 12000rpm離心2min，棄上清液；⑨風乾後加入50ul的TE緩衝液溶解DNA，備用。
9.根據權利要求7所述的利用SSR指紋圖譜鑑別紫雲英品種的方法，其特徵在於所 述PCR擴增，其PCR反應體系為25 μ L的PCR反應體系中包括提取的DNA溶液1 μ L, IOnmol L-1 引物 2 μ L, 2.5 mmol L-1ClNTP 2 μ L, IOXPCRbuffer 2.5 μ L, Taq DNA 聚 合酶1 U。PCR反應程序為94°C預變性7min ；隨後30個循環，每個循環94°C變性30 s, 55°C退火 30 s, 72°C延伸 30s;最後 72°C延伸 10 min。
全文摘要
本發明提供了一種利用SSR指紋圖譜鑑別紫雲英品種的方法。本發明涉及的紫雲英基因組中特定的SSR位點及其兩側引物序列如SEQ.NO.1-18，利用篩選的引物進行PCR擴增得到的指紋圖譜可用於鑑別紫雲英品種，鑑別方法主要包括提取紫雲英總DNA,用親和磁珠富集法從基因組DNA中篩選出特定的SSR位點並設計引物，通過對不同紫雲英品種的PCR擴增最終得到6個SSR位點的引物對可形成顯著條帶差異，用其構建的指紋圖譜有效地用於鑑別紫雲英品種。
文檔編號C12Q1/68GK101974516SQ20101051038
公開日2011年2月16日 申請日期2010年10月19日 優先權日2010年10月19日
發明者張輝, 朱炳耀, 林新堅, 陳堅, 陳濟琛 申請人:福建省農業科學院土壤肥料研究所