仿生酶型水溶性亞硝酸鹽複合降解劑的製備方法
2024-03-26 02:50:05 1
專利名稱：仿生酶型水溶性亞硝酸鹽複合降解劑的製備方法
技術領域：
本發明涉及一種複合化合物溶液的製備方法，特別是涉及一種仿生酶型水溶性亞 硝酸鹽複合降解劑的製備方法。
背景技術：
亞硝酸鹽是肉類加工時常用的醃製劑，不僅能使肉製品呈良好色澤，而且還具有 防腐和增強風味的作用。但是，過量亞硝酸鹽具有致癌作用，還會使血紅蛋白失去攜氧功 能，因此研究食物中的亞硝酸鹽殘留及其降解情況，對食品工業及人類健康都具有十分重 要的意義。植物界亞硝酸還原酶(nitrite reductase，NiR)存在綠色組織的葉綠體中， 它可有效催化降解亞硝酸鹽。然而天然亞硝酸還原酶提取較繁瑣、價高、影響其活性的影響 因子也較多。
發明內容
本發明的目的在於提供一種安全無毒的具有亞硝酸還原酶催化降解亞硝酸鹽、阻 斷N-亞硝胺生成活性的水溶性綠色的仿生酶型水溶性亞硝酸鹽複合降解劑的製備方法。為實現上述目的，本發明的技術解決方案是
本發明是一種仿生酶型水溶性亞硝酸鹽複合降解劑的製備方法，它包括以下步驟
(1)複合色素溶液的製備(11)將板慄殼在35-65°C烘乾、粉碎，用5-60%(V/V)乙醇 溶液作為提取劑，用微波萃取儀進行微波萃取，設定微波萃取條件為溫度40-65°C，壓 力為1-5標準大氣壓，功率為300-5001;(12)待反應結束後冷卻至20-381，過濾，經旋轉 蒸發儀減壓濃縮成暗紅色浸膏，真空乾燥後得板慄殼色素，稱重；(13)分別在不鏽鋼或搪 瓷等穩定材料製成的容器中，加入蒸餾水、離子交換水、純淨水、涼開水中的一種，在5-45 攪拌下依次加入0. 01-10% (W/V)板慄殼色素或其它具有光穩定性、含量為0. 01-10% (W/V) 具有抗氧化性的天然食用色素，和水溶性防腐劑製成複合色素溶液；
(2)複合聚陽離子溶液的製備分別在用合成樹脂、不鏽鋼或搪瓷等穩定材料製成的容 器中加入1-3%醋酸水溶液，攪拌下依次加入含量為0. 01-3%(W/V)的天然聚陽離子、含量為 0.01-0.5mg/100g的活性型維生素B2、含量為0. 1- 136g/100g的Vc溶液製成複合聚陽離 子溶液；
(3)複合型香辛料溶液的製備分別在用合成樹脂、不鏽鋼或搪瓷等穩定材料製成的容 器中加入蒸餾水，依次加入含量為0. 01-30 mg/kg的水溶性單一或由複合天然香辛料的提 取物、含量為0. 1-1. 5%(ff/ff)的磷酸鹽製成複合型香辛料溶液；
(4)將複合型香辛料溶液加熱至45-100°C，攪拌l-45min，過濾，濾液在15-100 保溫 0.5- 後室溫靜置10-60min，攪拌下依次加入複合聚陽離子溶液與複合色素溶液，充分 攪拌均勻。步驟(13)中所述的抗氧化性的天然食用色素為多酚類衍生物色素、酮類衍生物色 素、醌類衍生物色素中的一種。
所述的多酚類衍生物為花青素或兒茶素。所述的酮類衍生物為薑黃或紅曲。所述的醌類衍生物為蟲膠或胭脂蟲紅。步驟(13)中所述的水溶性防腐劑為山梨酸鉀，含量為0. 02%—10% ( W/V)。步驟(3)中所述的複合天然香辛料為0. 005mg^25mg/kg的麥芽酚或乙基麥芽酚。步驟(3)中所述的複合天然香辛料為花椒、八角、桂皮、果皮中的一種。步驟(3)中所述的單一或複合天然香辛料提取物為香精或酊劑，或以上兩種或多 種香料的複合物。步驟(3)中所述的磷酸鹽為三聚磷酸鈉、六偏磷酸鈉、焦磷酸鈉、磷酸三鈉、磷酸氫 二鈉、磷酸二氫鈉、酸式焦磷酸鈉、焦磷酸二氫二鈉中的一種。採用上述方案後，由於本發明以水溶性天然無毒色素為基料，純淨水為載體，輔以 (配以)麥芽酚、聚陽離子、複合磷酸鹽。按以上配方配製的綠色仿生酶型亞硝酸鹽複合降 解劑，不僅對亞硝酸鹽具有很好的清除作用，而且對有毒亞硝胺的合成也具有明顯的阻斷 作用。添加於加工食品中，不僅可有效降解亞硝酸鹽，而且具有上色、調味及一定的抗氧化、 抗菌活性。豐富食品的保健功能，有益人體健康。下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明。
具體實施例方式一、實施例
本發明是一種仿生酶型水溶性亞硝酸鹽複合降解劑的製備方法，它包括以下步驟
(1)複合色素溶液的製備(11)將板慄殼在35-65°C烘乾、粉碎，用5-60%(V/V)乙醇 溶液作為提取劑，用微波萃取儀進行微波萃取，設定微波萃取條件為溫度40-65°C，壓 力為1-5標準大氣壓，功率為300-5001;(12)待反應結束後冷卻至20-381，過濾，經旋轉 蒸發儀減壓濃縮成暗紅色浸膏，真空乾燥後得板慄殼色素，稱重；(13)分別在不鏽鋼或搪 瓷等穩定材料製成的容器中，加入蒸餾水、離子交換水、純淨水、涼開水中的一種，在5-45 攪拌下依次加入0. 01-10% (W/V)板慄殼色素或其它具有光穩定性、含量為0. 01-10% (W/V) 具有抗氧化性的天然食用色素，和水溶性防腐劑製成複合色素溶液；
(2)複合聚陽離子溶液的製備分別在用合成樹脂、不鏽鋼或搪瓷等穩定材料製成的容 器中加入1-3%醋酸水溶液，攪拌下依次加入含量為0. 01-3%(W/V)的天然聚陽離子、含量為 0.01-0.5mg/100g的活性型維生素B2、含量為0. 1- 136g/100g的Vc溶液製成複合聚陽離 子溶液；
(3)複合型香辛料溶液的製備分別在用合成樹脂、不鏽鋼或搪瓷等穩定材料製成的容 器中加入蒸餾水，依次加入含量為0. 01-30 mg/kg的水溶性單一或由複合天然香辛料提取 物、含量為0. 1-1. 5%(ff/ff)的磷酸鹽製成複合型香辛料溶液；
(4)將複合型香辛料溶液加熱至45-100 ,攪拌l-45min，過濾，濾液在15-100 保溫 0.5- 後室溫靜置10-60min，攪拌下依次加入複合聚陽離子溶液與複合色素溶液，充分 攪拌均勻。在上述實施例中，步驟(13)中所述的抗氧化性的天然食用色素為多酚類衍生物色 素、酮類衍生物色素、醌類衍生物色素中的一種。所述的多酚類衍生物為花青素或兒茶素。所述的酮類衍生物為薑黃或紅曲。所述的醌類衍生物為蟲膠或胭脂蟲紅。步驟(13)中所述的水溶性防腐劑為山梨酸鉀，含量為0. 02%—10% ( W/V)。步驟(3)中所述的複合天然香辛料為0. 005mg^25mg/kg的麥芽酚或乙基麥芽酚。步驟(3)中所述的複合天然香辛料為花椒、八角、桂皮、果皮(為柚子皮、橘皮)中的一種。步驟(3)中所述的單一或複合天然香辛料提取物為香精或酊劑，或以上兩種或多 種香料的複合物。步驟(3)中所述的磷酸鹽為三聚磷酸鈉、六偏磷酸鈉、焦磷酸鈉、磷酸三鈉、磷酸氫 二鈉、磷酸二氫鈉、酸式焦磷酸鈉、焦磷酸二氫二鈉中的一種。在本實施例中，各成分功能為
抗氧化天然食用色素、維生素亞硝酸鹽及亞硝胺生成阻斷。聚陽離子亞硝酸鹽及亞硝胺生成阻斷、抗菌。磷酸鹽品質改良劑；持水劑、金屬離子絡合劑。活性型維生素轉遞氫離子的輔酶。天然香辛料風味劑、抗氧化劑。實施例1
本發明是一種仿生酶型水溶性亞硝酸鹽複合降解劑的製備方法，它包括以下步驟
(1)複合色素溶液的製備(11)將板慄殼在35°c烘乾、粉碎，用5%(V/V)乙醇溶液作 為提取劑，用微波萃取儀進行微波萃取，設定微波萃取條件為溫度40°C，壓力為1標準 大氣壓，功率為300W ； (12)待反應結束後冷卻至20°C，過濾，經旋轉蒸發儀減壓濃縮成暗 紅色浸膏，真空乾燥後得板慄殼色素，稱重；(13)分別在不鏽鋼或搪瓷等穩定材料製成的 容器中，加入蒸餾水、離子交換水、純淨水、涼開水中的一種，在5 攪拌下依次加入0.01% (W/V)板慄殼色素或含量為0. 01% (W/V)具有抗氧化性的花青素、薑黃、蟲膠和含量為0. 02% W/V)的山梨酸鉀，製成複合色素溶液；
(2)複合聚陽離子溶液的製備分別在用合成樹脂、不鏽鋼或搪瓷等穩定材料製成的 容器中加入1%醋酸水溶液，攪拌下依次加入含量為0.01%(W/V)的天然聚陽離子、含量為 0.01mg/100g的活性型維生素B2、含量為0. lg/100g的Vc溶液製成複合聚陽離子溶液；
(3)複合型香辛料溶液的製備分別在用合成樹脂、不鏽鋼或搪瓷等穩定材料製成的容 器中加入蒸餾水，依次加入含量為0. 01mg/kg的水溶性單一或由0. 005mg/kg花椒的提取的 香精或酊劑、含量為0. 1%(W/W)的三聚磷酸鈉製成複合型香辛料溶液；
(4)將複合型香辛料溶液加熱至45 ,攪拌lmin，過濾，濾液在15 保溫0.證後室溫 靜置lOmin，攪拌下依次加入複合聚陽離子溶液與複合色素溶液，充分攪拌均勻。實施例2
本發明是一種仿生酶型水溶性亞硝酸鹽複合降解劑的製備方法，它包括以下步驟 (1)複合色素溶液的製備(11)將板慄殼在65°c烘乾、粉碎，用60% (V/V)乙醇溶液作 為提取劑，用微波萃取儀進行微波萃取，設定微波萃取條件為溫度65°C，壓力為5標準 大氣壓，功率為500W ； (12)待反應結束後冷卻至38°C，過濾，經旋轉蒸發儀減壓濃縮成暗紅 色浸膏，真空乾燥後得板慄殼色素，稱重；(13)分別在不鏽鋼或搪瓷等穩定材料製成的容 器中，加入蒸餾水、離子交換水、純淨水、涼開水中的一種，在45 攪拌下依次加入10%(W/V)板慄殼色素或含量為10% (W/V)的抗氧化性的天然食用色素兒茶素、紅曲胭脂蟲紅和含 量為10% ( w/ν)的山梨酸鉀，製成複合色素溶液；
(2)複合聚陽離子溶液的製備分別在用合成樹脂、不鏽鋼或搪瓷等穩定材料製成 的容器中加入3%醋酸水溶液，攪拌下依次加入含量為3%(W/V)的天然聚陽離子、含量為
0.5mg/100g的活性型維生素B2、含量為136g/100g的Vc溶液製成複合聚陽離子溶液；
(3)複合型香辛料溶液的製備分別在用合成樹脂、不鏽鋼或搪瓷等穩定材料製成的 容器中加入蒸餾水，依次加入含量為30 mg/kg的水溶性單一或由八角提取的酊劑、含量為
1.5%(ff/ff)的六偏磷酸鈉，製成複合型香辛料溶液；
(4)將複合型香辛料溶液加熱至100°C，攪拌45min，過濾，濾液在IOOtlC保溫池後室溫 靜置60min，攪拌下依次加入複合聚陽離子溶液與複合色素溶液，充分攪拌均勻。實施例3
本發明是一種仿生酶型水溶性亞硝酸鹽複合降解劑的製備方法，它包括以下步驟
(1)複合色素溶液的製備(11)將板慄殼在50°c烘乾、粉碎，用30%(V/V)乙醇溶液 作為提取劑，用微波萃取儀進行微波萃取，設定微波萃取條件為溫度48°C，壓力為3標 準大氣壓，功率為400W ； (12)待反應結束後冷卻至30°C，過濾，經旋轉蒸發儀減壓濃縮成 暗紅色浸膏，真空乾燥後得板慄殼色素，稱重；(13)分別在不鏽鋼或搪瓷等穩定材料製成 的容器中，加入蒸餾水、離子交換水、純淨水、涼開水中的一種，在25 攪拌下依次加入5% (W/V)板慄殼色素或含量為5% (W/V)的抗氧化性的花青素、紅曲、蟲膠和含量為5% ( W/ V)為山梨酸鉀，製成複合色素溶液；
(2)複合聚陽離子溶液的製備分別在用合成樹脂、不鏽鋼或搪瓷等穩定材料製成 的容器中加入洲醋酸水溶液，攪拌下依次加入含量為觀⑶八)的天然聚陽離子、含量為 O.ang/lOOg的活性型維生素B2、含量為80g/100g的Vc溶液製成複合聚陽離子溶液；
(3)複合型香辛料溶液的製備分別在用合成樹脂、不鏽鋼或搪瓷等穩定材料製成的容 器中加入蒸餾水，依次加入含量為20 mg/kg的水溶性單一或16mg/kg的桂皮提取的香精、 含量為1%(W/W)磷酸氫二鈉，製成複合型香辛料溶液；
(4)將複合型香辛料溶液加熱至70 ,攪拌30min，過濾，濾液在60 保溫Ih後室溫靜 置40min，攪拌下依次加入複合聚陽離子溶液與複合色素溶液，充分攪拌均勻。二、本發明亞硝酸鹽清除率的測定 鹽酸萘乙二胺法
取6支2 5-50 mL比色管，均加入模擬胃液A或B(模擬胃液A:稱取2. OgNaCl (AR) 加去離子水溶解，加入7mL濃HC1，加去離子水定容至1000 mL ；模擬胃液B 分別稱取2 .OgNaCl(AR)與3. 2g胃蛋白酶，加去離子水分別溶解，加入7mL濃HC1，去離子水定容 至 1000mL。)1 0 mL，在 3 7°C水浴 1 0 mi η取出，分別加入 0.01%，0.05 % , 0. 1 %，0.396，0.5 %, 1 %的樣品水溶液2mL，再加入5 g / m L的亞硝酸鈉標液2m L， 分別在3 7°C水浴1 0、3 0、6 Omi η取出，立即加入0.4 %對氨基苯磺酸2 mL,混 勻，靜置5 mi η後，各加1.0 mL 0. 2%鹽酸萘乙二胺溶液，靜置IOmi η,加水至 刻度混勻，在523n m下測定吸光度Al，同時做以去離子水代替亞硝酸鈉標液的空白 對照實驗測定吸光度Atll與以去離子水作為空白對照實驗測定吸光度Atl2t5 亞硝酸鹽清除率 ％ =[ (A02 + A01 -A1 ) / A02 1X10 0實驗結果隨著濃度的提高與處理時間的延長，樣品液對亞硝酸鹽的清除率提 高，且在模擬胃液A中清除效果優於模擬胃液B。在濃度為1 %，模擬胃液A中處理 6 0 mi η時對亞硝酸鹽的清除率最高，達到97. 3 %。
亞硝胺阻斷率測定(採用分光光度法)結果
取6支2 5 mL比色管中加入模擬胃酸1 0 mL，在3 7°C水浴5_10 mi η取出 ，力口入 0.01 %，0.40 %，0. 15%,0. 5 % ,0. 65%, 1 % 的樣品水溶液 2 mL，再 加入1匪ο 1 / L的二甲胺溶液1 mL，1匪ο 1 / L的Na N0，溶液1 mL，用蒸 餾水稀釋至刻度，在3 7°C下恆溫1 h。用移液管吸取1 mL上述溶液加到試管中， 加人質量分數0.5% N a2 C 0溶液0.5m L，於紫外分析儀上斜放照射1 5 mi n(254nm)。取出後加入質量分數1 %對氨基苯磺酸1. 5mL，再加入質量分數 0. 15 %. 萘胺1.5 mL,去離子水0.5 mL，搖勻靜置5min在520n m下測定吸光度A1， 同時做以去離子水代替亞硝酸鈉標液的空白對照實驗測定吸光度Atll與以去離子水代替 樣品溶液的空白對照實驗測定吸光度A020
阻斷率 / % =[(A02 + A01 -A1 ) / A02 ] X 1 0 0
實驗結果亞硝胺的阻斷率與樣品液的濃度成線性關係且差異極顯著，阻斷率隨著樣 品液濃度提高而迅速提高。在3 7°C、樣品濃度為1 %，pH=3、反應20- 6 0 mi η條件下 對亞硝胺合成的阻斷率最高可達63%。
權利要求
1.一種仿生酶型水溶性亞硝酸鹽複合降解劑的製備方法，其特徵在於它包括以下步驟(1)複合色素溶液的製備(11)將板慄殼在35-65°C烘乾、粉碎，用5-60%(V/V)乙醇 溶液作為提取劑，用微波萃取儀進行微波萃取，設定微波萃取條件為溫度40-65°C，壓 力為1-5標準大氣壓，功率為300-5001;(12)待反應結束後冷卻至20-381，過濾，經旋轉 蒸發儀減壓濃縮成暗紅色浸膏，真空乾燥後得板慄殼色素，稱重；(13)分別在不鏽鋼或搪 瓷等穩定材料製成的容器中，加入蒸餾水、離子交換水、純淨水、涼開水中的一種，在5-45 攪拌下依次加入0. 01-10% (W/V)板慄殼色素或其它具有光穩定性、含量為0. 01-10% (W/V) 具有抗氧化性的天然食用色素，和水溶性防腐劑製成複合色素溶液；(2)複合聚陽離子溶液的製備分別在用合成樹脂、不鏽鋼或搪瓷等穩定材料製成的容 器中加入1-3%醋酸水溶液，攪拌下依次加入含量為0. 01-3%(W/V)的天然聚陽離子、含量為 0.01-0.5mg/100g的活性型維生素B2、含量為0. 1- 136g/100g的Vc溶液製成複合聚陽離 子溶液；(3)複合型香辛料溶液的製備分別在用合成樹脂、不鏽鋼或搪瓷等穩定材料製成的容 器中加入蒸餾水，依次加入含量為0. 01-30 mg/kg的水溶性單一或由複合天然香辛料的提 取物、含量為0. 1-1. 5%(ff/ff)的磷酸鹽製成複合型香辛料溶液；(4)將複合型香辛料溶液加熱至45-100°C，攪拌l-45min，過濾，濾液在15-100 保溫 0.5- 後室溫靜置10-60min，攪拌下依次加入複合聚陽離子溶液與複合色素溶液，充分 攪拌均勻。
2.根據權利要求1所述的仿生酶型水溶性亞硝酸鹽複合降解劑的製備方法，其特徵在 於步驟(13)中所述的抗氧化性的天然食用色素為多酚類衍生物色素、酮類衍生物色素、 醌類衍生物色素中的一種。
3.根據權利要求2所述的仿生酶型水溶性亞硝酸鹽複合降解劑的製備方法，其特徵在 於所述的多酚類衍生物為花青素或兒茶素。
4.根據權利要求2所述的仿生酶型水溶性亞硝酸鹽複合降解劑的製備方法，其特徵在 於所述的酮類衍生物為薑黃或紅曲。
5.根據權利要求2所述的仿生酶型水溶性亞硝酸鹽複合降解劑的製備方法，其特徵在 於所述的醌類衍生物為蟲膠或胭脂蟲紅。
6.根據權利要求1所述的仿生酶型水溶性亞硝酸鹽複合降解劑的製備方法，其特徵在 於步驟(13)中所述的水溶性防腐劑為山梨酸鉀，含量為0. 02%—10% ( W/V)。
7.根據權利要求1所述的仿生酶型水溶性亞硝酸鹽複合降解劑的製備方法，其特徵在 於步驟(3)中所述的複合天然香辛料為0. 005mg^25mg/kg的麥芽酚或乙基麥芽酚。
8.根據權利要求1所述的仿生酶型水溶性亞硝酸鹽複合降解劑的製備方法，其特徵在 於步驟(3)中所述的複合天然香辛料為花椒、八角、桂皮、果皮中的一種。
9.根據權利要求1所述的仿生酶型水溶性亞硝酸鹽複合降解劑的製備方法，其特徵在 於步驟(3)中所述的單一或複合天然香辛料提取物為香精或酊劑，或以上兩種或多種香 料的複合物。
10.根據權利要求1所述的仿生酶型水溶性亞硝酸鹽複合降解劑的製備方法，其特徵 在於步驟(3)中所述的磷酸鹽為三聚磷酸鈉、六偏磷酸鈉、焦磷酸鈉、磷酸三鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、酸式焦磷酸鈉、焦磷酸二氫二鈉中的一種。
全文摘要
本發明公開了一種仿生酶型水溶性亞硝酸鹽複合降解劑的製備方法，其步驟包括複合色素溶液的製備、複合聚陽離子溶液的製備、複合型香辛料溶液的製備，將複合型香辛料溶液加熱、攪拌、過濾、靜置後，攪拌下依次加入複合聚陽離子溶液與複合色素溶液,充分攪拌均勻等。由於本發明以水溶性天然無毒色素為基料，純淨水為載體，輔以麥芽酚、聚陽離子、複合磷酸鹽，按以上配方配製的綠色仿生酶型亞硝酸鹽複合降解劑，不僅對亞硝酸鹽具有很好的清除作用，而且對有毒亞硝胺的合成也具有明顯的阻斷作用。添加於加工食品中，不僅可有效降解亞硝酸鹽，而且具有上色、調味及一定的抗氧化、抗菌活性。豐富食品的保健功能，有益人體健康。
文檔編號A23L1/29GK102077931SQ20101059100
公開日2011年6月1日 申請日期2010年12月16日 優先權日2010年12月16日
發明者馬建華, 黃麗萍 申請人:集美大學