當歸根、莖葉榨汁的加工方法及幹預溶血性貧血的應用與流程

2024-03-28 22:31:05

本發明涉及中藥或天然藥物領域，具體涉及新鮮當歸根、莖葉榨汁液以及乾燥的當歸莖葉水提物在改善血虛症狀中的應用；本發明還涉及新鮮當歸根與新鮮當歸莖葉榨汁的加工方法。
背景技術：
：中藥當歸是我國臨床最常用的中藥品種之一，具有「補血聖藥」、「婦科要藥」之稱，在我國已經有二千多年的藥用歷史，素有「十方九歸」之說，為傳統的大宗藥材。隨著對當歸藥理作用及保健作用認識的不斷深入，當歸除供藥用外，2014年11月更被列入了藥食同源目錄中，受到食品行業的青睞，同時也進一步加速了當歸市場的需求。當歸傳統以根入藥，即傳統以乾燥的當歸根入藥，莖葉部分多丟棄，一方面造成資源的嚴重浪費，另一方面也造成了環境的汙染。因此，對當歸藥材進行不斷的開發與研究迫在眉睫，也是目前研究的熱點。對當歸治療貧血的研究已有大量文獻報導，如：不同提取方法的當歸補血湯對化療貧血模型的藥效學研究、當歸多糖鐵治療溶血性貧血小鼠的實驗研究、當歸補血湯幹預化療貧血模型小鼠藥效學研究等；但到目前為止，尚未見有關新鮮的當歸根榨汁物、新鮮的當歸莖葉榨汁物、當歸莖葉水提物幹預貧血的研究報導。技術實現要素：本發明的目的其一是提供新鮮當歸根與新鮮當歸莖葉榨汁的製備方法，以及當歸根榨汁物、當歸莖葉榨汁物在改善血虛症狀中的應用。本發明的另一目的是提供乾燥當歸莖葉水提物的製備方法，以及當歸莖葉水提物在治療改善血虛症狀中的應用。為了實現上述目的，本發明採取的技術方案分別如下所述。一種新鮮當歸根與新鮮當歸莖葉榨汁的加工方法，其特徵在於：取新鮮當歸根或新鮮當歸莖葉，剪成小段；用榨汁機進行榨汁，棄去殘渣，加水定容，得當歸根榨汁物或當歸莖葉榨汁物，於2～10℃保存備用；所述榨汁物為2g生藥·ml-1藥液。一種乾燥當歸莖葉水提物的製備方法，其特徵在於：取乾燥當歸莖葉，剪成小段；用25倍量的自來水浸泡30min，煎煮2次，第一次40min，第二次30min，合併兩次濾液，濃縮兩次提取物並定容，得當歸莖葉提取物，於2～10℃保存備用；所述提取物為2g生藥·ml-1藥液。一種當歸根榨汁物在治療改善血虛症狀中的應用，其特徵在於：以當歸根榨汁物作為活性成份，按照常規保健食品製備方法，製成臨床上可以接受的片劑、膠囊劑、茶劑、飲品。一種當歸莖葉榨汁物在治療改善血虛症狀中的應用，其特徵在於：以當歸莖葉榨汁物作為活性成份，按照常規保健食品製備方法，製成臨床上可以接受的片劑、膠囊劑、茶劑、飲品。一種當歸莖葉水提物在治療改善血虛症狀中的應用，其特徵在於：以當歸莖葉水提物作為活性成份，按照常規保健食品製備方法，製成臨床上可以接受的片劑、膠囊劑、茶劑、飲品。發明人經過研究發現，上述當歸莖葉榨汁物與水提物、當歸根榨汁物均具有保護紅細胞損傷的作用，對溶血性貧血具有一定的治療作用。本發明尚未見任何相關文獻報導及使用。尤其是當歸莖葉的有效功能，變廢為寶；本發明實質是對於當歸整體的開發利用，改變了僅以乾燥當歸根入藥的傳統方法。下述實驗例為當歸莖葉資源的回收利用提供一定的實驗依據以及提供當歸藥材資源有效利用的新方法。實驗例本發明幹預溶血性貧血藥效學研究結果。1當歸根、莖葉榨汁液與水提液對血虛動物模型影響1.1實驗材料受試藥物：當歸根水煎液、當歸根榨汁物、當歸莖葉水煎液、當歸莖葉榨汁物；受試動物：spf級小鼠，♀、♂各半，體重(20±2)g，由中國農業科學院蘭州獸醫研究所提供。1.2造模及給藥84隻小鼠，隨機分為空白組、陽性組、模型組、當歸根水煎液組、當歸根榨汁組、當歸莖葉榨汁組、當歸莖葉水煎液組，共7組，每組12隻，雌雄各半。除空白組外，其餘各組分別於實驗第1，4，7天皮下注射乙醯苯肼(aph)的生理鹽水，aph劑量為0.2、0.1、0.1g/kg,按體重0.01ml/g給藥。同時並限制給食，給食量為每隻每天5g。於造模第1天開始灌胃給予當歸各部分提取物(2g生藥·ml-1)。陽性對照組給予複方阿膠漿0.4ml/次，空白組和模型組給予等量生理鹽水，一天一次，連續給藥13天。1.3觀測指標第13天給藥30min後，股動脈採血，取部分血液檢測其紅細胞(rbc)、血紅蛋白(hgb)和血小板數量(plt)，剩餘的置於離心管中，室溫靜置30～60min,於低溫離心機3000r/min，4℃離心10min，收集血清，-80℃冰箱保存，用於試劑盒檢測分析。用脊椎脫臼法將小鼠全部處死，取其胸腺和脾臟、肝臟，稱重，根據公式計算胸腺指數、肝臟指數和脾臟指數。胸腺指數(ti)＝胸腺溼重(g)/體重(g)×100，脾臟指數(si)＝脾臟溼重(g)/體重(g)×100，肝臟指數＝肝臟溼重(g)/體重(g)×100，再取各組小鼠脾臟、肝臟保存於10％甲醛中，並進行常規he染色，以備病理組織學觀察。1.4統計學處理採用spss17.0統計分析軟體處理數據，計量數據以表示。2結果2.1一般外觀特徵觀察與正常對照組相比，模型組中各小鼠被毛蓬亂，精神倦怠，自發活動少，眼睛暗淡，耳朵、尾均為白色，喜扎堆、進食量少。與模型組相比，各給藥組喜動，耳朵、尾巴為粉紅色，進食量多。2.2血常規檢測2.2.1當歸根榨汁與當歸根水煎液對小鼠hb、rbc、plt的影響表1.各組小鼠hb、rbc、plt變化的比較(n＝10)分組hb(g/l)rbc(×1012/l)plt(×109/l)空白組100.35±7.946.25±0.41612.5±172.10模型組79.05±6.43△4.96±0.28△419.39±114.95△陽性組106.85±8.31*6.23±0.47*570.6±109.51*當歸根水煎液110.1±13.47*6.28±0.71*705.4±250.95*當歸根榨汁115.15±11.84*6.34±0.64*846.67±341.99**與空白組比較△p<0.05；與模型組比較*p<0.05，**p<0.012.2.2當歸莖葉榨汁與當歸莖葉水煎液對小鼠hb、rbc、plt的影響表2.各組小鼠hb、rbc、plt變化的比較(n＝10)分組hb(g/l)rbc(×1012/l)plt(×109/l)空白組100.35±7.946.25±0.41612.5±172.10模型組79.05±6.43△4.96±0.28△419.39±114.95△陽性組106.85±8.31*6.23±0.47*570.6±109.51*當歸莖葉水煎液107±8.63*6.05±0.40*611.9±199.10*當歸莖葉榨汁107.89±19.55*6.20±0.53*826.41±232.90*與空白組比較△p<0.05；與模型組比較*p<0.05，**p<0.012.3小鼠體重、胸腺指數、脾指數、肝指數的計算2.3.1當歸根榨汁與當歸根水煎液對小鼠體重、胸腺指數、脾指數、肝指數的影響表3.小鼠體重、胸腺指數、脾指數、肝臟指數的比較(n＝10)分組給藥後體重變化(g)肝指數脾指數胸腺指數空白組9.57±1.704.82±0.370.33±0.110.31±0.07模型組7.91±1.76△5.53±0.42△△1.05±0.23△△0.23±0.07△陽性組10.25±2.32*5.07±0.53*0.86±0.14*0.36±0.07**當歸根水煎液11.10±3.01*5.23±0.13*0.84±0.06*0.34±0.05**當歸根榨汁9.57±2.08*4.35±0.31**0.65±0.08**0.28±0.03*與空白組比較△p<0.05，△△p<0.01；與模型組比較*p<0.05，**p<0.012.3.2當歸莖葉榨汁與當歸莖葉水煎液對小鼠體重、胸腺指數、脾指數、肝指數的影響表4.小鼠體重、胸腺指數、脾指數、肝臟指數的比較(n＝10)分組給藥後體重變化(g)肝指數脾指數胸腺指數空白組9.57±1.704.82±0.370.33±0.110.31±0.07模型組7.91±1.76△5.53±0.42△△1.05±0.23△△0.23±0.07△陽性組10.25±2.32*5.07±0.53*0.86±0.14*0.36±0.07**當歸莖葉水煎液10.48±3.74*5.26±0.710.77±0.11*0.30±0.06*當歸莖葉榨汁11.32±3.32**4.77±1.37*0.78±0.25*0.31±0.09*與空白組比較△p<0.05，△△p<0.01；與模型組比較*p<0.05，**p<0.012.4各項生化指標的檢測2.4.1小鼠血液中g6pd含量的檢測2.4.1.1當歸根榨汁與當歸根水煎液對小鼠g6pd含量的影響表5.各組小鼠血液中g6pd含量的測定(n＝10)組別給藥劑量g6pd(ng/ml)空白組——0.67±0.04*模型組——0.16±0.02陽性組0.4ml/次0.82±0.03*當歸根水煎液40g/kg0.79±0.10*當歸根榨汁40g/kg0.67±0.09*與模型組比較*p<0.052.4.1.2當歸莖葉榨汁與當歸莖葉水煎液對小鼠g6pd含量的影響表6.各組小鼠血液中g6pd含量的測定(n＝10)組別給藥劑量g6pd(ng/ml)空白組——0.67±0.04*模型組——0.16±0.02陽性組0.4ml/次0.82±0.03*當歸莖葉水煎液40g/kg0.76±0.003*當歸莖葉榨汁40g/kg0.95±0.03*與模型組比較*p<0.052.4.2不同加工方法對小鼠血液中gr的影響2.4.2.1當歸根榨汁與當歸根水煎液對小鼠gr含量的影響表7.各組小鼠血液中gr含量的測定(n＝10)組別給藥劑量gr(u/l)空白組——143.71±9.40*模型組——128.26±5.51陽性組0.4ml/次144.12±5.46*當歸根水煎液40g/kg158.76±4.95*當歸根榨汁40g/kg158.06±3.33*與模型組比較*p<0.052.4.2.2當歸莖葉榨汁與當歸莖葉水煎液對小鼠gr含量的影響表8.各組小鼠血液中gr含量的測定(n＝10)組別給藥劑量gr(u/l)空白組——143.71±9.40*模型組——128.26±5.51陽性組0.4ml/次144.12±5.46*當歸莖葉水煎液40g/kg149.07±12.42*當歸莖葉榨汁40g/kg149.88±3.85*與模型組比較*p<0.052.4.3不同加工方法對小鼠血液中il-2的影響2.4.3.1當歸根榨汁與當歸根水煎液對小鼠il-2含量的影響表9.各組小鼠血液中il-2含量的測定(n＝10)組別給藥劑量il-2(pg/ml)空白組——33.63±0.63*模型組——19.77±6.35陽性組0.4ml/次31.12±5.83*當歸根水煎液40g/kg36.02±0.58*當歸根榨汁40g/kg43.86±3.83*與模型組比較*p<0.052.4.3.2當歸莖葉榨汁與當歸莖葉水煎液對小鼠il-2含量的影響表10.各組小鼠血液中il-2含量的測定(n＝10)組別給藥劑量il-2(pg/ml)空白組——33.63±0.63*模型組——19.77±6.35陽性組0.4ml/次31.12±5.83*當歸莖葉水煎液40g/kg32.01±3.75*當歸莖葉榨汁40g/kg37.53±1.56*與模型組比較*p<0.052.4.4不同加工方法對小鼠血液中epo的影響2.4.4.1當歸根榨汁與當歸根水煎液對小鼠epo含量的影響表11.各組小鼠血液中epo含量的測定(n＝10)組別給藥劑量epo(iu/l)空白組——1.76±0.18*模型組——0.95±0.37陽性組0.4ml/次2.47±0.11*當歸根水煎液40g/kg3.41±0.14*當歸根榨汁40g/kg3.72±0.59*與模型組比較*p<0.052.4.4.2當歸莖葉榨汁與當歸莖葉水煎液對小鼠epo含量的影響表12.各組小鼠血液中epo含量的測定(n＝10)組別給藥劑量epo(iu/l)空白組——1.76±0.18*模型組——0.95±0.37陽性組0.4ml/次2.47±0.11*當歸莖葉水煎液40g/kg3.23±0.29*當歸莖葉榨汁40g/kg3.47±0.83*與模型組比較*p<0.052.5小鼠臟器病理切片結果正常組小鼠臟器he染色，色彩均勻，細胞排列緊密，無淤血及點狀壞死。模型組小鼠臟器細胞內充盈大量血液，細胞因壞死、崩解而明顯減少，並有散在的點狀壞死，細胞排列疏鬆，部分肝臟細胞還存在水腫樣變。給藥組小鼠臟器結構均有不同程度的恢復，淤血及點狀壞死均有所減少。3結論乙醯苯肼(aph)製造血虛模型屬於溶血法，它是一種強氧化劑，對紅細胞有緩慢的進行性氧化損傷作用，突出表現在幹擾紅細胞內葡萄糖--磷酸脫氫酶,使紅細胞易於崩解而出現溶血性貧血，使紅細胞和血紅蛋白明顯減少，對免疫和造血系統均有不同程度的損傷，主要表現為肝脾腫大、胸腺縮小。從表1至表4可以得出：本研究設模型組與空白組作對照，血常規檢測結果、臟器指數和生化指標檢測結果與文獻報導一致相符。模型組小鼠在給予乙醯苯肼後，rbc、plt、hb、胸腺指數較空白對照組均降低，肝臟指數與脾臟指數均有所增大，且均有顯著性差異(p<0.05)，說明模型複製成功。本實驗結果還顯示給予當歸莖葉榨汁液、當歸根榨汁液、當歸莖葉水煎液與當歸根水煎液後，各項指標均有所改善，其中榨汁效果較好。表明當歸莖葉水煎液或榨汁液均可減輕aph所致小鼠紅細胞氧化性損傷，對溶血性貧血具有一定的治療作用。從表6至表12可以得出：g6pd、gr、il-2、epo對紅細胞均有一定的保護作用，各組小鼠血液中g6pd、gr、il-2、epo含量可作為衡量紅細胞氧化損傷程度的重要指標，模型組血液中g6pd、gr、il-2、epo含量降低，表明模型組小鼠出現了溶血性貧血的病理過程。本研究結果顯示當歸莖葉水煎液或榨汁液均能顯著提高血液中g6pd、gr、il-2、epo的水平，提示當歸莖葉水煎液或榨汁液均對溶血性貧血具有一定的治療作用。從圖1～圖4可以得出：圖1、圖3均為小鼠肝臟he染色病理切片，結果顯示，與空白組相比，模型組肝臟細胞大面積發生點狀壞死，細胞排列絮亂，有明顯的水腫及淤血，表明aph對肝臟細胞具有一定的損傷作用；與模型組相比，當歸莖葉、當歸根榨汁液與水煎液組肝臟細胞點狀壞死明顯減少，水腫程度也有所減緩，細胞排列整齊，大小均勻，其中榨汁效果較好。表明當歸莖葉水煎液或榨汁液均可減輕aph所致小鼠肝臟細胞水腫及淤血，對肝臟細胞損傷具有一定的修復作用。圖2、圖4均為小鼠脾臟he染色病理切片，結果顯示，正常小鼠的脾臟he染色，為均勻的紅色，淋巴細胞排列緊密，無淤血及點狀壞死。模型組小鼠的脾臟脾髓內充盈大量血液，脾臟細胞因壞死、崩解而明顯減少；白髓體積明顯縮小，只有少數淋巴細胞殘留在中央動脈周圍；紅髓中的細胞成分也明顯減少，含血量明顯增多；有散在的點狀壞死，淋巴細胞排列疏鬆，表明aph對脾臟細胞具有一定的損傷作用；當歸莖葉、當歸根榨汁液與水煎液組小鼠的脾臟結構均有不同程度的恢復，淤血及點狀壞死均有所減少。表明當歸莖葉水煎液或榨汁液均可減輕aph所致小鼠脾臟細胞的點狀壞死及淤血，對脾臟細胞損傷具有一定的修復作用。本實驗研究均顯示當歸莖葉水煎液或榨汁液對aph誘導的小鼠溶血性貧血均有較好的治療作用。提示當歸莖葉水煎液或榨汁液對血虛症狀具有一定的改善作用，旨在為當歸資源的綜合利用提供新的用途。附圖說明圖1是當歸莖葉水煎液、榨汁對小鼠肝臟組織病理變化的影響(he染色×40)；圖2是當歸莖葉水煎液、榨汁對小鼠脾臟組織病理變化的影響(he染色10)；圖3是當歸根水煎液、榨汁對小鼠肝臟組織病理變化的影響(he染色×40)；圖4是當歸根水煎液、榨汁對小鼠脾臟組織病理變化的影響(he染色×10)。圖1至圖4中：a：空白組，b：模型組，c：陽性組，d：水煎液組，e：榨汁組。具體實施方式下述當歸藥材，由甘肅中醫學院鑑定教研室晉玲副教授鑑定，為radixangelicasinensis。實施例1製備當歸莖葉汁飲品將新鮮當歸莖葉剪成小段，用榨汁機進行榨汁，棄去殘渣，得當歸莖葉汁；同時將蘋果、山楂榨汁。按體積比例當歸莖葉汁：蘋果汁：山楂汁為3:1:1的製成當歸莖葉汁飲品。用法及功效：代茶頻飲，具有滋陰養血，活血化瘀的功效。實施例2製備當歸根汁袋泡茶將新鮮當歸根剪成小段，用榨汁機進行榨汁，棄去殘渣，得當歸根汁；常規方法將當歸根汁進行真空冷凍乾燥得當歸根汁粉末；取當歸根汁粉末9g，川芎3g，用茶葉濾紙袋進行包裝，得當歸根汁袋泡茶。用法及功效：用沸水衝泡代茶頻飲，具有補血化瘀，通經止痛的功效。實施例3製備當歸莖葉袋泡茶稱取乾燥當歸莖葉粉末18g，川芎粉末3g，用茶葉濾紙袋進行包裝，即得當歸莖葉袋泡茶。用法及功效：用沸水衝泡代茶頻飲，具有補血活血，通經止痛的功效。實施例4製備當歸莖葉飲品稱取乾燥當歸莖葉10g，枸杞5g，用茶葉濾紙袋進行包裝，得當歸莖葉枸杞袋泡茶。用法及功效：用沸水衝泡代茶頻飲，具有補血活血，明目的功效。實施例5製備當歸根汁膠囊按照實施例2提供的方法製備當歸根汁粉末；將當歸根粉末過60目篩，稱取當歸根汁粉末100g，加60g微粉矽膠混勻，用全自動膠囊填充機填充入0號硬膠囊，每粒裝量0.5g。用法用量：口服，一次5～6粒，一日3次。功效：補血活血，調經止痛，潤腸通便，適用於血虛便秘，經期腹痛的人群。實施例6製備當歸根汁咀嚼片按照實施例2提供的方法製備當歸根汁粉末；將30％當歸根汁粉末與30％乳糖、30％糊精、1.5％檸檬酸、8％甘露醇混合均勻，過100目篩；用70％乙醇為潤溼劑制軟材，擠壓法過18目篩制粒，乾燥。在幹顆粒中加入3g硬脂酸鎂、30g滑石粉混勻，用14目篩整粒後壓片，每片重0.5g。用法用量：口服，一次5～6片，一日3次。功效：補血活血，調經止痛，潤腸通便，適用於血虛便秘，經期腹痛的人群。當前第1頁12