膠原和透明質酸的產生促進劑的製作方法

2023-05-25 01:05:41

專利名稱：：膠原和透明質酸的產生促進劑的製作方法
技術領域：
：本發明涉及膠原和/或透明質酸的產生促進劑。而且本發明涉及含有上述產生促進劑的皮膚外用劑和食品。
背景技術：
：由於柳衫、豚草等各種花粉成為花粉病的起因，目前認為花粉是變態反應原。而且，由於花粉刺激免疫系統，所以也在研究花粉對免疫系統的藥理作用。專利文獻1中公開了將花粉通過乳酸菌、雙歧桿菌或酵母等發酵而得到的培養物具有皮膚再生作用、抗皺作用等，將其混合到醫藥品、化妝品中。專利文獻2中公開了可以獲得來自油菜花粉的油體。專利文獻3中公開了以牧草、玉米、榛樹、黑麥、細柱柳、白楊、法國菊或松樹的花粉為原料的花粉提取物軟膠囊，該膠囊對前列腺炎、前列腺增生症有抑制效果。專利文獻l:日本特表2001-504510號公報專利文獻2:日本特表2002-503268號公報專利文獻3:日本特開平9-278665號公報非專利文獻l:《蜜蜂科學》7(1):9-12HoneybeeScience(1986)
發明內容本發明的目的在於，基於針對花粉、花粉團(花粉荷)或它們的提取物新發現的生理活性，提供它們的新用途。特別是，其目的在於，提供作為膠原或/和透明質酸的產生促進劑的用途、以及含有該產生促進劑的化妝材料或食品。本發明人對於花粉、花粉團或它們的提取物的生理活性作用迸行了研究，結果發現在巖薔薇、茶、油菜以及蕎麥的花粉團的提取物，特別是水或醇等極性溶劑的提取物中，具有強膠原產生促進作用或透明質酸產生促進作用。本發明是以上述發現為基礎而完成的，提供以下的膠原產生促進劑、透明質酸產生促進劑、皮膚外用劑及食品。I.膠原或/和透明質酸的產生促進劑(1-1)一種膠原或透明質酸中至少一個的產生促進劑，其特徵在於，包含選自由花粉、花粉團和它們的提取物組成的組中的至少一種。(1-2)根據(1-1)所述的產生促進劑，其中，上述花粉或花粉團來自屬於選自由十字花科、蓼科、茶科和半日花科組成的組中的至少一個科的植物。(1-3)根據(1-2)所述的產生促進劑，其中，上述植物是選自由巖薔薇、茶、油菜和蕎麥組成的組中的至少一種。(1-4)根據(1-1)(1-3)中任一項所述的產生促進劑，其中，上述提取物是選自由巖薔薇、茶、油菜和蕎麥組成的組中的至少一種植物的花粉或花粉團的水、乙醇或它們的混合物的提取物。(1-5)—種膠原產生促進劑，其特徵在於，包含選自由巖薔薇、茶、和油菜組成的組中的至少一種植物的花粉或花粉團、或它們中任一種的提取物。(1-6)—種透明質酸促進劑，其特徵在於，包含選自由油菜和蕎麥組成的組中的至少一種植物的花粉或花粉團、或它們中任一種的提取物。II.皮膚外用劑(n-i)—種皮膚外用劑，其中混合了上述(1-1)(1-4)中任一項所述的產生抑制劑。另外，該皮膚外用劑也可以如下所述。(II-a)—種皮膚外用劑，其特徵在於，包含選自由花粉、花粉團和它們的提取物組成的組中的至少一種。(II-b)根據(II-a)所述的皮膚外用劑，其中，上述花粉或花粉團來自屬於選自由十字花科、蓼科、茶科和半日花科組成的組中的至少一個科的植物。(n-c)根據(n-b)所述的皮膚外用劑，其中，上述植物是選自由巖薔薇、茶、油菜和蕎麥組成的組中的至少一種。(n-d)根據(n-a)(n-c)中任一項所述的皮膚外用劑，其中，上述提取物是選自由巖薔薇、茶、油菜和蕎麥組成的組中的至少一種植物的花粉或花粉團的水、乙醇或它們的混合物的提取物。III.食品(ni-i)—種食品，其中混合了含有上述(i-4)所述的提取物的產生抑制劑。另外，該食品也可如下所述。(ni-a)—種食品，其特徵在於，包含花粉或花粉團的提取物。(III-b)根據(III-a)所述的食品，其中，上述花粉或花粉團來自屬於選自由十字花科、蓼科、茶科和半日花科組成的組中的至少一個科的植物。(ni-c)根據(in-b)所述的食品，其中，上述植物是選自由巖薔薇、茶、油菜和蕎麥組成的組中的至少一種。(III-d)根據(III-a)(ni-c)中任一項所述的食品，其中，上述提取物是選自由巖薔薇、茶、油菜和蕎麥組成的組中的至少一種植物的花粉或花粉團的水、乙醇或它們的混合物的提取物。這些食品的任一種在專門用於促進膠原或透明質酸中的至少一種產生的方面，能夠和通常的食品相區別。特別是含有油菜等屬於十字花科的植物的花粉或花粉團的提取物的食品，在用於促進膠原和透明質酸兩者的產生方面，能夠和通常的食品相區別。發明效果如後述試驗例所示，由於花粉、花粉團或它們的提取物增加膠原和透明質酸的產生，具有賦予肌膚張力與潤澤、保溼、美化肌膚、抗老化(改善皺紋等)、美白(改善肌膚暗淡)等作用，可以明確得知其可以作為皮膚外用劑(特別是化妝材料)和食品的原料使用。特別是油菜花粉團的水提取物同時強力促進膠原和透明質酸的產生，因此作為皮膚外用劑(特別是化妝材料)的有效成分，或者是作為食品原料極為優良。具體實施例方式(I)膠原或/和透明質酸的產生促進劑本發明的膠原或/和透明質酸的產生促進劑的特徵在於，以花粉、花粉團或它們的提取物作為有效成分。其中，花粉團是蜜蜂用蜜固化花粉而得到的，也被稱為花粉糰子(花粉e〔r:)。該花粉團與蜂蜜一同儲存於蜂窩中。此花粉團易於回收。本發明中，可以使用花粉和花粉團中的任何一種，但由於上述方便得到的原因，優選使用花粉團。而且，花粉和花粉團不但可以各自單獨使用，也可以混合兩者使用。作為本發明的花粉或/和花粉團(以下僅記為"花粉/花粉團")的來源，優選植物的科名、屬*種名、中文名(名稱)如下表1表3所示。表1tableseeoriginaldocumentpage7表2tableseeoriginaldocumentpage8表3tableseeoriginaldocumentpage9作為本發明中所使用的花粉/花粉團由來的優選植物，可以列舉十字花科、蓼科、茶科和半日花科。具體來說，作為十字花科植物，優選列舉紫羅蘭、油菜和二月蘭，特別優選油菜。作為蓼科植物，優選列舉蕎麥。作為茶科植物，優選列舉茶梅、茶、夏椿和山茶，特別優選茶。作為半日花科植物，優選列舉巖薔薇。而且，作為膠原產生促進劑的有效成分，可以優選列舉半日花科植物巖薔薇、茶科植物茶和十字花科植物油菜。另外，作為透明質酸產生促進劑的有效成分，可以優選列舉十字花科植物油菜和蓼科植物養麥。花粉/花粉團能夠以其原形態使用，也能夠以適當的溶劑製備成提取物的形態使用。其中，花粉/花粉團的提取可以通過水、含水溶劑、有機溶劑等溶劑進行。具體來說，可以列舉水、低級醇(甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇等)、酮類(丙酮、甲乙酮、甲基丁基酮等)、酯類(乙酸甲酯、乙酸乙酯等)、醚類(二甲基醚、二異丙基醚等)、芳香烴(甲苯、二甲苯等)、滷代烴(二氯甲垸、氯仿等)、二醇類(乙二醇、丙二醇)、二醇醚類(甲基溶纖劑、1,2-二甲氧基乙垸等)、甘油、四氫呋喃、乙腈、乙酸、丙酸、乙醯胺、二甲基甲醯胺、二甲基亞碸。另外，提取溶劑可以使用這些中的一種，也可以使用2種以上任意組合的混合液。混合液可優選列舉含水有機溶劑、特別是含水乙醇、含水甲醇、以及含水丙醇等的含水醇。作為提取溶劑，優選水、乙醇、和它們的混合液(含水乙醇)。提取可以容易地如下進行將花粉/花粉團加入溶劑中，在0'C到溶劑的沸騰溫度、通常為IO(TC以下的溫度下，經約30分鐘到約24小時的浸漬提取，去除不溶物。本發明中的上述花粉/花粉團的提取液，可以直接作為膠原產生促進劑或/和透明質酸產生促進劑使用，但根據需要，也可以使用濃縮提取液所得液(濃縮液)、或者提取液的冷凍乾燥物、噴霧乾燥物等的乾燥品。為了除去顏色、味道或臭味，根據需要，也可以對上述得到的提取物進行脫色、掩蔽、或除臭等處理。作為這樣的處理，可以列舉利用活性碳等的吸附處理、利用柱色譜以及離子交換色譜等的純化處理。在各種植物(表13)的花粉團的提取物中，半日花科植物巖薔薇的花粉團的提取物(優選水或乙醇提取物)、茶科植物茶的花粉團的提取物(優選水或乙醇提取物)、以及十字花科植物油菜的花粉團的提取物(優選水提取物)具有優良的膠原產生促進作用，可以適合作為膠原產生促進劑的有效成分使用。另外，在各種植物(表13)的花粉團的提取物中，十字花科植物油菜的花粉團提取物(優選水提取物)、和蓼科植物蕎麥的花粉團的提取物(優選乙醇提取物)具有良好的透明質酸產生促進作用，可以適合作為透明質酸產生促進劑的有效成分使用。在本發明的膠原產生促進劑或/和透明質酸產生促進劑中，花粉/花粉團或它們的提取物的混合量，以乾燥物計，可以列舉0.0001100重量％、優選0.00150重量％、更優選0.0125重量％。本發明的膠原產生促進劑或/和透明質酸產生促進劑，可以優選作為化妝品的添加劑，或者作為具有膠原或/和透明質酸產生促進作用的美容用或能減輕關節炎、牙齦炎、風溼症等症狀的醫療用或功能性食品使用。作為本發明對象的透明質酸是由存在於真皮成纖維細胞的膜中的透明質酸合成酶(HAS)合成的酸性粘多糖(Y.Sugiyama等J.Invest.Dermatol.,110，116(1998))。透明質酸有助於細胞間隙的水分維持、基於組織內膠狀基質形成的細胞的維持、組織的潤滑性和柔軟性(BIOINDUSTRY，Vol8,346(1991))。公開了透明質酸隨年齡增加而減少(K.Matsuoka等Aging,1，47(1989))，或變性(L.A.M.Meyer等J.Invest.Dermatol.,102，385(1994))，這樣的變化是引起皮膚乾燥、皺紋、鬆弛等的一個原因。另外，作為本發明對象的膠原是構成真皮基質的重要成分。膠原分子由成纖維細胞合成並被分泌到細胞外後，規則交聯，維持結締組織的硬度，賦予皮膚張力和彈性。公開了皮膚由於長年暴露於紫外線中，真皮上層的膠原減少(L.H.Kligman等J.Invest.Dermatol.，84,272(1985))。另外，也公開了由於紫外線暴露，真皮的膠原纖維變性(Y.Nishimori等Abstract,20thIFSCCCongressCa匪s，1，117(1998))。(2)皮膚外用劑、優選化妝材料含有本發明的膠原產生促進劑或/和透明質酸產生促進劑的皮膚外用劑，基於該膠原產生促進劑的膠原產生促進作用或/和透明質酸產生促進劑的透明質酸促進作用，分別對人的皮膚有良好的膠原產生促進作用或/和透明質酸產生促進作用，因而能賦予肌膚張力和潤澤、防治肌膚老化、消除或減輕皺紋、使肌膚水嫩、使斑、暗淡不明顯、具有美化皮膚的效果、能維持健康的肌膚。因此，該皮膚外用劑，特別是作為美白化妝材料、抗老化化妝材料、美化肌膚化妝材料、或皮膚護理化妝材料等的化妝材料有用。故而，本發明所說的皮膚外用劑中，包含作為這些化妝材料的用途。該皮膚外用劑中的花粉/花粉團或它們的提取物的混合量，在皮膚外用劑總量中，以乾燥物計為0.000520重量％，優選0.00110重量％。如果低於0.0005重量％很多，有本發明的效果不能充分發揮的傾向，如果超過20重量％很多，則有製劑化變難的傾向。另外，特別優選花粉/花粉團或它們的提取物以0.01約1重量％的濃度進行配合併應用於皮膚。本發明的皮膚外用劑中，除了花粉/花粉團或它們的提取物，可以根據需要適當混合通常用於皮膚外用劑，特別是化妝品的成分，例如，美白劑、保溼劑、防氧化劑、油性成分、紫外線吸收劑、表面活性劑、增稠劑、醇類、粉末成分、色素、水性成分、水、各種皮膚營養劑等。本發明的皮膚外用劑的劑型，可以採用水溶液型、增溶型、乳化型、粉末型、油液型、凝膠型、軟膏型、氣霧劑型、水一油2相型、以及水一油一粉末3相型等廣泛的劑型。例如在皮膚外用劑為基礎化妝品的情況下，作為其形態，可以列舉洗面奶、化妝水、乳液、膏劑、凝膠、精油、美容液、剝撕式面膜(八。、7夕)、面膜等。另外，皮膚外用劑為臉部化妝用化妝品(>一夕7、;/7°)也可，其形態可以列舉粉底、口紅、腮紅、眼影、眼線膏、睫毛膏等。其它形態可以列舉洗面奶、按摩用劑、潔膚用劑、胡後水、剃鬚水、剃鬚膏、沐浴露、肥皂、洗髮劑、潤發素、護髮素、定型膏、生髮油、毛髮生長劑、止汗劑、衛生用品等。(3)食品本發明的食品的特徵為，混合(1)中所記載的具有膠原產生促進作用或/和透明質酸產生促進作用的花粉/花粉團的提取物作為膠原產生促進劑或/和透明質酸產生促進劑。因此，本發明的食物中，基於它們的作用，包含了以美白、美化肌膚、保溼、抗老化等為目的的美容用飲食品、或以減輕關節、牙齦等的由於膠原/透明質酸減少而導致的功能低下疾病(例如關節炎、牙齦炎、齦齒潰瘍、風溼症等)的症狀為目的而使用的食品。該食品中，具體來說，可以列舉飲劑類(drink)、飲料類(清涼飲料、乳飲料、乳酸菌飲料、酸奶飲料、碳酸飲料、酒類等)、塗抹食品、醬、蛋糕、日式糕點、冰淇淋、罐頭食品、方便食品、瓶裝及罐裝食品、膠狀食品、調味料、肉湯、蜂產品(蜂蜜、蜂王漿、蜂膠等)、乳製品、加工水果、加工蔬菜、穀類加工食品、醃漬品、醃漬品原料、魚肉製品、畜肉製品、珍味、乾菜、預加工食品、冷凍食品、油脂食品等。另外，本發明的食品也可以為，添加、混合作為膠原產生促進劑或/和透明質酸產生促進劑的(1)中所述花粉/花粉團的提取物後所能製得的，所謂健康食品、功能性食品、營養輔助食品、添加劑、特定保健食品、患者食品和患者組合食品(厚生勞動省，一種特殊用途的食品)或老年人食品(厚生勞動省，一種特殊用途的食品)的形式，這種情況下，可以是未包衣片、薄膜衣片、糖衣片、顆粒、粉末、片劑、膠囊(硬膠囊和軟膠囊均包括)、咀嚼型、糖漿型、飲劑型等。添加和混合本發明所涉及的花粉/花粉團的提取物作為膠原產生促進劑或/和透明質酸產生促進劑的食品的製備能夠使用公知的方法進行。實施例下面，利用實施例、試驗例以及配方例對本發明作詳細說明，但本發明不限於這些實施例。實施例l:花粉團的乙醇提取物的製備花粉團(巖薔薇、茶、油菜、蕎麥)各10克中加入30ml乙醇，乳缽研磨，移入其他容器，並在室溫振蕩混合1620小時。轉速為1500rpm下離心分離5分鐘，得到上清液和沉澱。於所得沉澱物中加入2倍量的乙醇，再次用乳缽研磨，移入其他容器，並在室溫振蕩混合2小時。轉速為1500rpm下離心分離5分鐘，得到上清液。將此與之前得到的上清液合併，使用旋轉蒸發機(EYELA制)濃縮，得到各植物(巖薔薇、茶、油菜、蕎麥)的花粉團的乙醇提取物。實施例2:花粉團的水提取物的製備向實施例1的乙醇提取所得到的最終沉澱物中加入3倍量的水，研碎，並在室溫下振蕩1620小時。然後，在轉速為2000rpm下離心分離IO分鐘，並冷凍乾燥所得上清液。將其作為各植物(巖薔薇、茶、油菜、蕎麥)的花粉團的水提取物，用於下述試驗例。試驗例對於實施例1和2所得到的提取物中，實驗中得到充分量的提取物的巖薔薇花粉團的水提取物以及乙醇提取物、茶花粉團的水提取物和乙醇提取物、以及油菜花粉團的水提取物，進行了膠原產生促進試驗，另外，對於油菜花粉團的水提取物和蕎麥花粉團的乙醇提取物進行透明質酸產生促進試驗。試驗例1膠原產生促進試驗在含有10%FCS(胎牛血清)的RPMI-1640培養基中，調節人正常成纖維細胞株化系(樹立株)WI-38細胞為lXls細胞/ml(細胞懸浮液)，每孔中加入100ul細胞懸浮液。然後，將此板於37。C、5%C02一95%空氣中培養過夜，用RPMI-1640培養基150|iL與PBS(-)40jiL的混合物進行培養基交換，在各孔中添加實施例1和2製備的花粉團提取物，在37。C下在5。/。C02-95。/。空氣中培養48小時。然後以1500rpm離心分離所得培養物，得到上清液。(1)測定用樣品的製備(1-1)培養上清液中的膠原的胃蛋白酶處理(i)溶解胃蛋白酶(MIKUNI化學工業(株)制)於150mM的醋酸水溶液(關東化學(株)帝'j)中，使其濃度為0.6mg/mL。(ii)向0.2mL培養細胞上清液中加入O.lmL上述胃蛋白酶溶液，利用顛倒混合充分攪拌。(iii)4。C下放置一夜。(iv)加入含有O.lmL的200mMTris禾B150mMNaCl的水溶液進行中和，顛倒混合充分攪拌，將所得液體作為測定用膠原液。(1-2)作為細胞外基質沉澱的膠原的胃蛋白酶處理(i)溶解胃蛋白酶(MIKUNI化學工業(株)制)於50mM的醋酸水溶液(關東化學(株)帝lj)中，使其濃度為0.1mg/mL。(ii)從培養皿中除去培養液後，用微細胞刮器剝下細胞，向培養皿中加入與培養液等量的胃蛋白酶溶液。(iii)4"C下振蕩一夜。(iv)10000Xg下離心分離10分鐘，回收上清液。(v)加入所加胃蛋白酶溶液的3分之l量的含有200mMTris和150mMNaCl的水溶液，利用顛倒混合充分攪拌，將所得液體作為測定用膠原液。(1-3)測定用樣品的製備混合由上述(1-1)和(1-2)製備的測定用膠原液得到測定樣品。(2)測定以由上述方法製得的測定樣品作為對象，使用人膠原型1ELISA試劑盒(ACBio公司制)測定膠原產生促進率。測定方法根據試劑盒的使用說明書。結果如表4所示。另外，把加入lOixg水代替花粉團的各提取物的情況下的膠原量設定為100%，計算得到膠原產生促進率(增加率)。表4complextableseeoriginaldocumentpage16試驗例2透明質酸產生促進試驗在含有10XFCS(胎牛血清)的RPMI-1640培養基中，調節人正常成纖維細胞株化系(樹立株)WI-38細胞為lXlS細胞/ml(細胞懸浮液)，每孔中加入100ul細胞懸浮液。然後，將此板於37°C、5%C02—95%空氣中培養過夜，用RPMI-1640培養基150(iL與PBS(-)40|iL的混合物進行培養基交換，在各孔中添加實施例1和2製備的花粉團提取物，在37°C下在5。/。C02-95。/。空氣中培養48小時。然後，在1500rpm下離心分離所得培養物15分鐘，得到上清液。使用市售透明質酸測定試劑盒(HyaluronanAssayKit:生化學工業(株)制)測定所得上清液中的透明質酸量。把加入10Ug水代替花粉團的各提取物的情況下的透明質酸量設定為100%，計算得到透明質酸產生促進率(增加率)。結果如表5所示。表5tableseeoriginaldocumentpage17由上述結果可知，作為本發明對象的花粉團提取物，具有良好的膠原產生促進作用或透明質酸產生促進作用。特別是明確知道了，油菜花粉團水提取物的膠原產生促進作用和透明質酸產生促進作用均很強，作為具有美化肌膚作用、抗老化作用、美白作用、保溼作用等各種作用的化妝品材料、以及食品材料有用。配方例l:化妝水使用如下表6所示各成分，依常法製造化妝水。表6tableseeoriginaldocumentpage17配方例2:美容液使用如下表7所示各成分，依常法製造美容液。tableseeoriginaldocumentpage18權利要求1.一種膠原或透明質酸中至少一個的產生促進劑，其特徵在於，包含選自由花粉、花粉團以及它們的提取物組成的組中的至少一種。2.根據權利要求l所述的產生促進劑，其中，所述花粉或花粉團來自屬於選自由十字花科、蓼科、茶科和半日花科組成的組中的至少一個科的植物。3.根據權利要求2所述的產生促進劑，其中，所述植物是選自由巖薔薇、茶、油菜和蕎麥組成的組中的至少一種。4.根據權利要求l所述的產生促進劑，其中，所述提取物是選自由巖薔薇、茶、油菜和蕎麥組成的組中的至少一種植物的花粉或花粉團的水、乙醇或它們的混合物的提取物。5.—種皮膚外用劑，其中混合有權利要求14中任一項所述的產生抑制劑。6.—種食品，其中混合有含有權利要求4中所述的提取物的產生抑制劑。7.根據權利要求6所述的食品，其為促進膠原或透明質酸中至少一個的產生的功能食品。全文摘要本發明提供具有膠原產生促進作用或/和透明質酸產生促進作用的藥劑(膠原/透明質酸產生促進劑)、以及具有膠原產生促進作用或/和透明質酸產生促進作用的皮膚外用劑或食品。作為膠原產生促進劑或/和透明質酸產生促進劑的有效成分，使用選自由花粉、花粉團以及它們的提取物組成的組中的至少一種。另外，作為皮膚外用劑、以及膠原和/或透明質酸產生促進用食品的有效成分，使用上述產生抑制劑。文檔編號A61K8/96GK101199465SQ20071016799公開日2008年6月18日申請日期2007年10月31日優先權日2006年10月31日發明者寺內白梅薰,山田英生申請人:株式會社山田養蜂場本社