免疫調節組合物及其使用方法

2023-05-25 00:37:26 4

專利名稱：免疫調節組合物及其使用方法
免疫調節組合物及其使用方法相關申請本申請要求2008年4月四日提交的美國臨時專利申請序列號61/071，437的優 先權，其在此全部引入作為參考。政府利益聲明本發明全部或部分在國立衛生研究院授予的基金號GM035010-22的政府資助下 完成。政府在本發明中享有某些權利。
背景技術：
真菌細胞壁引起強有力的免疫刺激應答，並且已計劃用作潛在的抗感染和抗腫 瘤藥物。真菌細胞還可激活樹突細胞並引發II類限制性抗原特異性T細胞應答。病 原真菌(白色念珠菌(Candida albicans))和非病原真菌(釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae))細胞壁的大部分(50-60%)由共價連接多種細胞表面甘露糖蛋白的β-葡 聚糖(β-1，3-和 3-1，6-葡聚糖)內層組成[Klis，F. Μ.等 Med Mycol 39Suppl 1,1-8, 2001 ；Klis, F. Μ.等，FEMS Microbiol Rev 26，239-56，2002]。巨噬細胞識別β -葡聚糖主要通過Dectin-I與包括TLR2在內的TLRs的協同 作用來進行[Brown, G. D.等 Nature 413，36-7，2001]。Dectin-1 活性被 β_1，3_ 葡聚糖 和β-1，6-葡聚糖抑制，β-1，3-葡聚糖昆布多糖具有最強效果。然而，寡糖微陣列結果 顯示Dectin-I特異性結合β-1，3-葡聚糖。嗜中性白細胞是專職的殺傷細胞，充分鑑定 了其在吞噬作用以及殺傷細菌和真菌中的作用。嗜中性個體對細菌和真菌感染更加敏感， 恢復至正常計數在感染消退中起重要作用。與巨噬細胞不同，嗜中性白細胞需要血清來進 行最佳吞噬作用和殺傷作用。主要的調理性受體是補體受體CR3和免疫球蛋白結合受體 FcyR0 CR3具有凝集素結構域[Brown, G. D.等Immunity 19，311-5，2003]，該結構域介導 嗜中性白細胞向β-1，3-葡聚糖和β-1，6-葡聚糖(PGG-葡聚糖)混合物的增加的遊動性 [ffakshul1, Ε.等 Immunopharmacology 41，89-107，1999]。已發現β -1,6-葡聚糖提供較強的抗真菌活性等，具有佐劑活性並激活補體。人和其他哺乳動物的補體(C)系統包含超過20種補體，參與有序的反應序列，產 生補體激活。來源於C成分激活的產物包括非自身識別分子C3b、C4b和C5b，以及影響多種 細胞免疫應答的過敏毒素 C3a、C4a和 C5a(Hugli 等(1982) 15th International Leucocyte Culture Conference, Asilomar, CA(Abstract) ；Fujii 等(1993)Protein Science2 1301-1312 ；Morgan 等(1982) J. Exp. Med. 155 :1412-1426 ；Morgan (1993) Complement Today 1 :56-75 ；Morgan 等(1983) J. Immunol. 130 :1257-1261)。補體激活主要經由「經典」途徑或 「替代」途徑發生。經典途徑起始於第一補體成分(Cl)通過Clq (—種涉及抗體結合的亞成 份)與免疫複合物的結合。Cl複合物由Clq和兩種同源的絲氨酸蛋白酶Clr和Cls組成 (1:2: 2摩爾比率)。與免疫複合物結合後，Clq經歷構象變化，導致Clr和Cls轉變為 它們的活化形式。活化的Cls切割C4和C2產生它們的片段的複合物C4t32a，其又將C3切 割為C3a和C3b。C3b結合免疫複合物。
替代途徑的激活不涉及抗體。通過C3與兩種絲氨酸蛋白酶，因子B和D的相互作 用由C3產生的Ob分子沉積在微生物表面上，在此處C3的活化得以擴增。任一途徑激活 所產生的Ob在隨後能夠溶解微生物的攻膜複合體形成中發揮中樞分子的作用，還發揮調 理素的作用。還不知道β-1，6-葡聚糖是否在所有受試者中產生強免疫應答以及通過何種機 制產生這樣的應答。發明概述在一個實施方案中，本發明提供了用於確定受試者對基於葡聚糖的疫苗或佐劑的 應答性的診斷方法，該方法包括>評估暴露於葡聚糖的受試者中免疫球蛋白G(IgG) 1、2、3和4同種型的相對效 價；和>使相對於IgG4，高IgGl或IgG2或IgG3或它們的組合的存在與對基於葡聚糖的 疫苗或佐劑的應答性相關聯。在一個實施方案中，該方法進一步包括在評估相對IgG同種型效價之前，將受試 者細胞與基於葡聚糖的疫苗或佐劑接觸，其中在一個實施方案中，包含0-乙醯化葡聚糖， 以及在另一個實施方案中，包含分離自或來源於地衣或真菌的葡聚糖，其中真菌任選地是 酵母，其中在一個實施方案中，其分離自或來源於石耳科(Umbilicariaceae)。在另一個實 施方案中，基於葡聚糖的疫苗或佐劑包含化學合成的或乙醯化的葡聚糖；在另一個實施方 案中，基於葡聚糖的疫苗或佐劑包含綴合於顆粒的葡聚糖。在一個實施方案中，該方法進一步包括給予所述受試者細胞因子，其中在一個實 施方案中，所述細胞因子包含白介素2、白介素12、幹擾素-γ或它們的組合在另一個實施方案中，本發明提供了用於確定受試者對基於葡聚糖的疫苗或佐劑 應答性的診斷試劑盒，所述試劑盒包含>與所述疫苗或佐劑中的葡聚糖相應或同源的葡聚糖；>用於檢測受試者樣品中相對免疫球蛋白G(IgG) 1、2、3和4同種型效價的試劑； 和>任選地來源於對所述基於葡聚糖的疫苗或佐劑陽性和陰性應答者的一系列標 準樣品。根據本發明的該方面，以及在一個實施方案中，葡聚糖附著於基質，其中在一個實 施方案中，所述基質是微量滴定板，或在另一個實施方案中所述基質是珠子。在一個實施方 案中，試劑包含可檢測的標記，使該檢測得以半定量。在另一個實施方案中，本發明提供了刺激受試者免疫應答的方法，其包括給予受 試者純化的β-1-6-葡聚糖以及試劑，其使抗體生產傾向於以產生與免疫球蛋白G(IgG)4 相比，相對更多量的免疫球蛋白G(IgG) 1、2或3。根據本發明的該方面，以及在一個實施方案中，同時給予受試者純化的 β -1-6-葡聚糖和試劑，或在另一個實施方案中，順序給予受試者純化的β -1-6-葡聚糖和 試劑。在另一個實施方案中，給予受試者所述純化的β-1-6-葡聚糖和所述細胞因子各自 至少兩次。在一個實施方案中，試劑是細胞因子，其中在一個實施方案中，所述細胞因子是白介素_2、白介素-12或幹擾素-Y或它們的組合。在另一個實施方案中，試劑下調白介素-4 或白介素-10產生或幹擾白介素-4或白介素-10活性。在一個實施方案中，受試者進一步暴露於與免疫應答的靶相關的抗原，其中在一 個實施方案中，所述抗原是腫瘤相關抗原。根據本發明的該方面，以及在一個實施方案中， 受試者具有增生性或瘤前病變；在另一個實施方案中，該方法對受試者的癌症進行治療、延 遲癌症的進展、延長癌症的緩解或降低癌症的發病率或嚴重程度。在另一個實施方案中，受 試者患有癌症。在另一個實施方案中，受試者未被診斷有癌症。在另一個實施方案中，受試 者未被診斷有腫瘤。在另一個實施方案中，抗原來源於病原體，其中在一個實施方案中，所述病原體是 真菌。在一個實施方案中，該方法對受試者的感染進行治療、延遲感染的進展、延長感染的 潛伏狀態或降低感染的發病率或嚴重程度。在一個實施方案中，本發明提供了基於葡聚糖的疫苗或佐劑，或包含含有β 1-6 葡聚糖的顆粒的葡聚糖的用途。在某些實施方案中，所述顆粒由按乾重計至少10%、20%、 30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%或 99% 的 β 1-6 葡聚糖組 成。在某些實施方案中，所述顆粒基本上由β 1-6葡聚糖組成。任選地，在某些實施方案中， 所述β 1-6葡聚糖富含0-乙醯基。本發明進一步提供了如本文所述的方法和試劑盒，其可 利用任何上述顆粒，或包含任何上述顆粒的組合物。在一個實施方案中，β 1-6葡聚糖富含0-乙醯基，其中在一個實施方案中，包含按 重量計至少25%的0-乙醯化葡聚糖。在另一個實施方案中，根據本發明使用的基於葡聚糖的疫苗或佐劑，或葡聚糖包 含具有β_1，6葡聚糖支鏈的β-1，3葡聚糖(也稱為β1，3/1，6，葡聚糖或β-1，6-支化 β -1，3-葡聚糖)，其中至少某些β -1，6葡聚糖支鏈富含0-乙醯基。在另一個實施方案中， 本發明使用了包含(i)富含0-乙醯基的β1_6葡聚糖和( )β-1，6-支化β-1，3-葡聚 糖的組合物。在本發明的任何實施方案中，關於術語「接觸」或其語法形式，所述接觸可發生在 受試者體外或體內。在一個實施方案中，將細胞從受試者中移除，與所述試劑或成分或組合 物接觸，然後在隨後的時間點給予受試者，其中在一些實施方案中，所述細胞是嗜中性白細 胞。將細胞(其中在一些實施方案中，所述細胞是嗜中性白細胞，或在其他實施方案中，所 述細胞是其他免疫系統細胞，例如其他專職的抗原呈遞細胞，例如巨噬細胞或樹突細胞、單 核細胞、NK細胞、B細胞等)在體外與本發明的試劑/成分或組合物接觸，然後在另一試劑 給予受試者的時間點返回至受試者，或將另一細胞群在體外與本發明的試劑/成分或組合 物接觸，然後返回至受試者。合適的時間段可以是例如在已進行治療但未獲得期望結果之 後，或例如期望更好的效果，例如免疫球蛋白G4(IgG4)產量太高，以及之後的重複給予細 胞因子，並隨後暴露於葡聚糖，產生更多的IgGl、2或3。在一些實施方案中，本發明提供了包含含有葡聚糖的基質的試劑盒。在一個實施 方案中，該基質是微粒、毫微粒、微量滴定板或任何適合於這樣的診斷測定法例如適合於自 動化測定法的材料的一部分，或以微粒、毫微粒、微量滴定板或任何適合於這樣的診斷測定 法例如適合於自動化測定法的材料的形式存在。本發明的一個方面涉及用於檢測應答於β_1，6-葡聚糖所分泌的免疫球蛋白G(IgG)抗體的量的方法；所述方法包括以下步驟在用β -1,6-葡聚糖攻擊前從受試者中獲得第一血樣；在用β -1,6-葡聚糖攻擊後從受試者中獲得第二血樣；在定量或測量IgG抗體存在的測定中，提供足夠的時間來產生在溶液中可讀的信 號並檢測所述IgG抗體結合的溶液中的該信號；計算來自所述第一和第二血樣的所述IgG抗體結合的信號，以確定IgG抗體分泌 的量，其中信號間的差異表明應答於β_1，6-葡聚糖所產生的IgG抗體的量；以及將所述差異與陽性和陰性對照進行比較；其中超過閾值的所述差異確定受試者對 β-1,6-葡聚糖的應答性。在某些實施方案中，所述抗體包含完整的免疫球蛋白G或其片段。在某些實施方案中，所述抗體可包含選自IgGl、IgG2、IgG3和IgG4的同種型。在某些實施方案中，所述抗體是IgG2。
在某些實施方案中，所述受試者可以是人。在某些實施方案中，所述β-1，6-葡聚糖分離自地衣、真菌或酵母。在某些實施方案中，所述β-1，6-葡聚糖分離自石耳科。在某些實施方案中，所述β-1，6-葡聚糖包含0-乙醯化的β-1，6_葡聚糖。在某些實施方案中，所述β-1，6-葡聚糖包含化學合成的、基因工程的或0-乙醯 化的β-1，6-葡聚糖。在某些實施方案中，通過酶聯免疫測定法、放射免疫測定法、免疫沉澱、螢光免疫 測定法、化學發光測定法、免疫印跡測定法、側向流測定法、凝集測定法或基於微粒的測定 法來測定IgG抗體的量。在某些實施方案中，該藥物組合物進一步包含連接靶向部分的β -1，6-葡聚糖。本發明的另一個方面涉及用於測量IgG水平的診斷試劑盒，其包含(i)包含β -1，6-葡聚糖的藥物組合物；(ii)用於檢測血樣中結合所述藥物組合物的IgG抗體的試劑；(iii)任選地來源於所述藥物組合物陽性和陰性應答者的一系列標準樣品；以及(ii)使用該藥物組合物來檢測血樣中IgG量的說明書。在某些實施方案中，所述β-1，6-葡聚糖處於溶液中或是凍幹的。在某些實施方案中，所述β-1，6-葡聚糖固定在基質上。在某些實施方案中，所述基質包含選自塑料、玻璃、凝膠、賽璐珞、紙、磁性樹脂、聚 偏二氟乙烯、尼龍、硝酸纖維素、瓊脂糖、膠乳和聚苯乙烯的材料。在某些實施方案中，所述基質包含ELISA板、浸漬片、微量滴定板、放射性免疫測 定平板、珠子、瓊脂糖珠、塑料珠、膠乳珠、免疫印跡膜和免疫印跡紙。在某些實施方案中，所述試劑綴合於可檢測的標記。在某些實施方案中，所述可檢測的標記選自放射性標記、螢光標記、化學發光標 記、生色標記、配體、螢光素、放射性同位素、磷酸酶、生物素、生物素相關化合物、抗生物素 蛋白、抗生物素蛋白相關化合物和過氧化物酶。本發明的另一個方面涉及包含連接靶向部分的β-1，6-葡聚糖的組合物。在某些實施方案中，所述葡聚糖是0-乙醯化的。
在某些實施方案中，所述葡聚糖包含按重量計至少25%的0-乙醯化葡聚糖。在某些實施方案中，所述葡聚糖分離自地衣、酵母、真菌、或是化學合成的，或是基 因工程的。在某些實施方案中，所述葡聚糖分離自石耳科。在某些實施方案中，所述靶向部分選自抗體、抗原、受體配體、表位、多糖、肽以及 它們的任意組合。在某些實施方案中，所述靶向部分是抗原；所述抗原選自糖蛋白、黏蛋白 (mucoprotein)、核酸、碳水化合物、蛋白聚糖、脂類、黏蛋白分子(mucin molecule)、腫瘤相 關抗原以及它們的任意組合。在某些實施方案中，所述抗原是腫瘤相關抗原。在某些實施方案中，所述腫瘤相關抗原存在於選自卵巢癌、黑素瘤、胰腺癌、結腸 直腸癌、伯基特氏淋巴瘤、B-細胞淋巴瘤、肺癌、白血病、乳腺癌、骨髓癌、結腸腺癌、胃癌、胚 胎性癌、前列腺癌和子宮內膜癌的癌細胞上。在某些實施方案中，所述癌細胞是卵巢癌；所述腫瘤相關抗原是CA125或CD46。在某些實施方案中，所述癌細胞是黑素瘤細胞；所述腫瘤相關抗原選自p97、 gp75、HMW-MAA、神經節苷脂GD2、神經節苷脂GD3、MAGE、BAGE, Mart_lR24、神經節苷脂GM2 和神經節苷脂GM3。在某些實施方案中，所述癌細胞是胰腺癌；所述存在的腫瘤相關抗原是ADMR或 CRLR0在某些實施方案中，所述癌細胞是癌胚癌；所述腫瘤相關抗原是CEA。在某些實施方案中，所述癌細胞是結腸直腸癌；所述腫瘤相關抗原選自TAG-72、 C017-1A、GICA 19-9, CTA-1、LEA、VEP8、VEP9、Myl、VIM-D5、D156-22、C4BP 和 DAF。在某些實施方案中，所述癌細胞是伯基特氏淋巴瘤；所述腫瘤相關抗原是抗 原-38. 13 或 CD19。在某些實施方案中，所述癌細胞是人B-淋巴瘤；所述腫瘤相關抗原是CD20或 CD33。在某些實施方案中，所述癌細胞是人肺癌；所述腫瘤相關抗原是L6、L20、F3或 CD117。在某些實施方案中，所述癌細胞是人白血病T細胞；所述腫瘤相關抗原是gp37、擬 糖蛋白、神經鞘脂類或AP0-1。在某些實施方案中，所述癌細胞是乳腺癌細胞；所述腫瘤相關抗原是EGFR、HER/ neu、CRl、M18 或 M39。在某些實施方案中，所述癌細胞是骨髓癌；所述腫瘤相關抗原是T5A7或SSEA-I。在某些實施方案中，所述癌細胞是結腸腺癌細胞；所述腫瘤相關抗原是C14、 C0-514 或 NS-10。在某些實施方案中，所述癌細胞是胃癌細胞；所述腫瘤相關抗原是黏蛋白、AH6或 FHL-I0在某些實施方案中，所述癌細胞是胚胎性癌細胞；所述腫瘤相關抗原選自Y半抗 原、Ley、FC 10. 2、4· 2、GD3、D1. 1、0FA—1、GM2、0FA—2、GD2 禾口 Ml 22 25 8。
在某些實施方案中，所述癌細胞是前列腺癌；所述腫瘤相關抗原是CD55或MCP。在某些實施方案中，所述癌細胞是子宮內膜癌；所述腫瘤相關抗原是CD35。在某些實施方案中，所述靶向部分是表位；所述表位選自T輔助細胞表位(TH)、趨 化因子表位、嗜中性白細胞表位、MHC II類分子和吞噬細胞表位。在某些實施方案中，所述表位是嗜中性白細胞表位；所述嗜中性白細胞表位選自 L-選擇蛋白、2-整聯蛋白、補體受體I(CR-I)、衰變加速因子(DAF)、Cfe受體、胞間黏附分 子-I(ICAM-I)禾Π ICAM-3。在某些實施方案中，所述表位是吞噬細胞表位；所述吞噬細胞表位是Fc受體。在某些實施方案中，所述表位是趨化因子表位；所述趨化因子表位是CD40、CD80 或 CD86。在某些實施方案中，所述表位是MHC II類分子；所述MHC II類分子選自⑶69、 ADAM8、CD 14、CD163、CD33、CD63、CD68、CD74、CHIT1、CHST10、CSF 1R、DPP4、FABP4、FCGR1A、 ICAM2、IL1R2、ITGAU ITGA2、S100A8 和 TNFRSF8。在某些實施方案中，所述TH表位能夠被抗原呈遞細胞(APC)攝入，所述TH表位能 夠被APC加工，由此APC在它的表面呈遞結合MHC II類分子的TH表位。在某些實施方案中，所述靶向部分是抗體；所述抗體選自單克隆抗體、多克隆抗 體、雙特異性抗體、雙抗體、三鏈抗體、四鏈抗體和微抗體。在某些實施方案中，所述抗體是單克隆抗體。在某些實施方案中，所述單克隆抗體選自阿侖單抗(Campath)、貝伐單抗 (Avastin)、西妥昔單抗(Erbitux)、吉姆單抗(Mylotarg)、替伊莫單抗(Zevalin)、帕尼單 抗(Vectibix)、利妥昔單抗(Rituxan)、託西莫單抗(Bexxar)、曲妥單抗(Here印tin)、在呼 吸道合胞病毒A和F蛋白中的帕利珠單抗(Synagis)以及免疫球蛋白G2。在某些實施方案中，所述單克隆抗體是阿侖單抗(Campath)；所述阿侖單抗 (Campath)靶向存在於胰腺癌細胞上的⑶52。在某些實施方案中，所述單克隆抗體是貝伐單抗(Avastin)；所述貝伐單抗 (Avastin)靶向存在於結腸直腸癌中的VEGF。在某些實施方案中，所述單克隆抗體是西妥昔單抗(Erbitux)；所述西妥昔單抗 (Erbitux)靶向存在於頭頸鱗狀細胞癌或乳腺癌上的EGFR。在某些實施方案中，所述單克隆抗體是吉姆單抗(Mylotarg)；所述吉姆單抗 (Mylotarg)靶向存在於骨髓性白血病上的⑶33。在某些實施方案中，所述單克隆抗體是替伊莫單抗(Zeval in)、帕尼單抗 (Vectibix)、利妥昔單抗(Rituxan)或託西莫單抗(Bexxar)；所述替伊莫單抗(Zevalin)、 帕尼單抗(Vectibix)、利妥昔單抗(Rituxan)或託西莫單抗(Bexxar)靶向存在於B-細胞 淋巴瘤上的⑶20。在某些實施方案中，所述單克隆抗體是曲妥單抗(Here印tin)；所述曲妥單抗 (Herceptin)靶向存在於乳腺癌上的HER/neu。在某些實施方案中，所述單克隆抗體是帕利珠單抗(Synagis)；所述帕利珠單抗 (Synagis)靶向存在於呼吸道合胞病毒上的A和F蛋白。在某些實施方案中，所述單克隆抗體是免疫球蛋白G ；所述免疫球蛋白G靶向存在於真菌或細菌性病原體上的β_1，6-葡聚糖。在某些實施方案中，所述抗體是多克隆抗體；所述多克隆抗體結合任意前述抗原 和表位。在某些實施方案中，所述抗體包含至少一個結合IgG2的抗原結合位點。在某些實施方案中，所述抗體包含針對任意前述抗原和表位的第二、第三或第四 抗原結合位點。在某些實施方案中，該組合物進一步包含同時或相繼給予佐劑、抗原、免疫調節化 合物或它們的組合。本發明的另一個方面涉及藥物製劑，其包含任意前述的連接靶向部分的β_1， 6-葡聚糖組合物中的一種組合物；以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。本發明的另一方面涉及用於調節受試者免疫應答的方法，其包括給予需要其的受 試者治療有效量的任意前述連接於靶向部分的β -1,6-葡聚糖的組合物中的一種組合物。在某些實施方案中，所述針對靶標癌細胞、感染劑、病原體或感染部位的免疫應答 被刺激。在某些實施方案中，所述免疫應答刺激或增強熱休克蛋白表達。在某些實施方案中，所述免疫應答誘導活性氧類別(RoQ產生。在某些實施方案中，所述免疫應答增強或刺激嗜中性白細胞吞噬作用或細胞毒溶 胞作用。在某些實施方案中，所述免疫應答增強或刺激補體-介導的溶胞作用。在某些實施方案中，該方法進一步包括同時或相繼給予佐劑、抗原、肽、免疫刺激 化合物、治療劑或它們的組合。在某些實施方案中，所述治療劑選自抗炎劑、抗病毒劑、抗生素、抗感染劑、葡聚糖 合成抑制劑、抗原蟲劑、抗組胺劑、減充血劑、抗精神病藥、有絲分裂抑制劑和它們的任意組
I=I O在某些實施方案中，所述治療劑是抗病毒劑；所述抗病毒劑是阿昔洛韋、奈非那韋 或病毒唑。在某些實施方案中，所述治療劑是抗生素；所述抗生素選自氨苄西林、青黴素G、 青黴素類、頭孢菌素類、氨基糖苷類、大環內酯類、碳青黴烯、青黴烯、單環內醯胺類、 β-內醯胺酶抑制劑、四環素類、多肽抗生素、氯黴素、夫西地酸、林可黴素、新生黴素、壯觀 黴素、聚醚離子載體和喹諾酮類。在某些實施方案中，所述治療劑是抗感染劑；所述抗感染劑選自苯扎氯銨、 洗必泰、氨苯碸、氯黴素、新黴素、頭孢克洛、頭孢羥氨苄、頭孢氨苄、頭孢拉定、紅黴素、 克林黴素、林可黴素、阿莫西林、氨苄西林、巴氨西林、羧苄西林、雙氯西林、環己西林、 picloxacillin、海他西林、甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林、青黴素、替卡西林、利福平、四環 素、二氟尼柳、布洛芬、噴哚美辛、甲氯胺苯酸鹽、甲芬那酸、萘普生、羥布宗、保泰松、吡羅昔 康、舒林酸、託美丁、阿司匹林、水楊酸鹽類和兩性黴素B。在某些實施方案中，所述治療劑是葡聚糖合成抑制劑；所述葡聚糖合成抑制劑選 自卡泊芬淨、米卡芬淨、阿尼芬淨(LY303366)、益康唑、特康唑、氟康唑、伏立康唑和灰黃黴
在某些實施方案中，所述治療劑是抗原蟲劑；所述抗原蟲劑是甲硝唑、妥布氯唑、 噻苯唑或奧芬唑。在某些實施方案中，所述治療劑是抗組胺劑；所述抗組胺劑是阿司咪唑、左卡巴斯 汀、西替利嗪或肉桂苯哌嗪。在某些實施方案中，所述治療劑是減充血劑；所述減充血劑是假麻黃鹼。在某些實施方案中，所述治療劑是抗精神病藥；所述抗精神病藥是氟司必林、五氟 利多、利培酮或齊拉西酮。在某些實施方案中，所述治療劑是有絲分裂抑制劑；所述有絲分裂抑制劑是依託 泊甙、秋水仙鹼，或長春花生物鹼類。在某些實施方案中，所述免疫應答被下調或消除。在某些實施方案中，所述免疫應答下調或消除幹擾素、白介素、腫瘤壞死因子、粒 細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)、粒細胞集落刺激 因子(G-CSF)、嗜中性白細胞活化蛋白(NAP)、巨噬細胞趨化及活化因子(MCAF)、RANTES或 巨噬細胞炎性肽的活化。在某些實施方案中，該方法進一步包括同時或相繼給予免疫抑制劑。本發明的另一個方面涉及對受試者的癌症進行治療、延遲癌症的進展、延長癌症 的緩解或降低癌症的發病率或嚴重程度的方法，其包括給予需要其的受試者治療有效量的 任意前述連接靶向部分的β -1,6-葡聚糖組合物中的一種組合物。在某些實施方案中，所述針對靶標癌細胞、增生性病變或瘤前病變的免疫應答被 刺激。在某些實施方案中，所述免疫應答增強嗜中性白細胞吞噬作用、刺激細胞毒溶胞 作用、誘導ROS產生、誘導熱休克蛋白的表達或增強補體-介導的溶胞作用。在某些實施方案中，該方法進一步包括同時或相繼給予化學治療劑、細胞毒劑、抗 腫瘤劑或它們的組合。在某些實施方案中，所述細胞毒劑選自ErtB受體抑制劑、VEGF受體抑制劑、酪氨 酸激酶抑制劑、蛋白激酶A抑制劑、抗血管生成劑、抗激素劑和細胞因子。在某些實施方案中，所述化學治療劑選自順鉬、多柔比星、吉西他濱、多西他賽、紫 杉醇和博來黴素。在某些實施方案中，所述抗腫瘤劑選自螺鉬、順鉬、卡鉬、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、阿 黴素、絲裂黴素、安絲菌素、博來黴素、阿糖胞苷、阿糖腺苷、巰基聚賴氨酸、長春新鹼、白 消安、苯丁酸氮芥、美法侖、PAM、L-PAM、苯丙氨酸氮芥、巰基嘌呤、米託坦、鹽酸丙卡巴胼 放線菌素D、鹽酸柔紅黴素、鹽酸多柔比星、紫杉醇和其他紫杉烷類、雷帕黴素、手黴素Α、 ΤΝΡ-470、普卡黴素、光輝黴素、氨魯米特、雌氮芥磷酸鈉、氟他胺、醋酸亮丙瑞林、醋酸甲 地孕酮、檸檬酸他莫昔芬、睪內酯、曲洛司坦、安吖啶(m-AMSA)、天冬醯胺酶(L-天冬醯胺 酶)歐文氏菌屬天冬醯胺酶、幹擾素α _2a、幹擾素α _2b、替尼泊甙(VM46)、硫酸長春鹼 (VLB)、硫酸長春新鹼、硫酸博來黴素、羥基脲、丙卡巴胼和達卡巴嗪。在某些實施方案中，該方法進一步包括同時或相繼給予佐劑、抗原、免疫調節化合 物或它們的組合。本發明的另一個方面涉及對受試者的感染進行治療、延遲感染的進展、延長感染的潛伏狀態或降低感染的發病率或嚴重程度的方法，其包括給予需要其的受試者治療有效 量的任意前述連接靶向部分的β_1，6-葡聚糖組合物。在某些實施方案中，所述針對靶標寄生蟲、病毒、真菌、病原體、細菌或感染劑的免 疫應答被刺激。在某些實施方案中，所述免疫應答增強嗜中性白細胞吞噬作用、刺激細胞毒溶胞 作用、誘導ROS產生、誘導熱休克蛋白的表達或增強補體-介導的溶胞作用。在某些實施方案中，該方法進一步包括同時或相繼給予抗生素、抗病毒劑、抗感染 劑、抗原蟲劑、佐劑、抗原、免疫調節化合物或它們的組合。本發明的另一個方面涉及對受試者的炎症進行治療、延遲炎症的進展、降低炎症 的發病率或嚴重程度的方法，其包括給予需要其的受試者治療有效量的任意前述連接靶向 部分的β-1，6-葡聚糖組合物。在某些實施方案中，位於靶標炎症病灶處的所述炎症被下調或消除。在某些實施方案中，該方法進一步包括同時或相繼給予佐劑、抗原、肽、免疫刺激 化合物、抗炎劑或它們的組合。在某些實施方案中，所述抗炎劑選自倍他米松、強的松龍、吡羅昔康、阿司匹林、氟 比洛芬和(+)-N-{4-[3-(4-氟代苯氧基)苯氧基]-2-環戊烯-1-基}-N-羥基脲。本發明的另一個方面涉及對受試者的自身免疫應答進行治療、延遲自身免疫應答 的進展或降低自身免疫應答的發病率或嚴重程度的方法，其包括給予需要其的受試者治療 有效量的任意前述連接靶向部分的β -1,6-葡聚糖組合物。在某些實施方案中，針對靶標移植組織、移植細胞、自身抗原或HIV感染的所述自 身免疫應答被下調或消除。在某些實施方案中，所述自身免疫應答下調白介素、腫瘤壞死因子或幹擾素的活 化。在某些實施方案中，該方法進一步包括同時或相繼給予免疫抑制劑。本發明的另一個方面涉及包含純化的連接靶向部分的β-1，6-葡聚糖的組合物， 其中該組合物是藥物組合物、食品或食物產品(foodproduct)、食品補充劑或化妝用組合 物。在某些實施方案中，該組合物包含已被加工的連接靶向部分的β -1,6-葡聚糖， 相對於未加工的β -1，6-葡聚糖，增加了它的介導免疫應答能力。在某些實施方案中，至少95%的包含於該組合物中的葡聚糖是連接靶向部分的 β-1,6-葡聚糖。本發明的另一個方面涉及包含連接靶向部分的β-1，6-葡聚糖的膠粒，其中所述 β-1,6-葡聚糖任選地是0-乙醯化的。本發明的另一個方面涉及包含連接靶向部分的β-1，6-葡聚糖和生物可降解的 聚合物的組合物，其中所述生物可降解的聚合物降解形成生物學活性的水楊酸鹽或α -羥 酸部分以及所述β -1，6-葡聚糖任選地是0-乙醯化的。本發明的另一個方面涉及包含微球的顆粒，該微球連接於任意前述連接靶向部分 的β-1，6-葡聚糖和生物可降解的聚合物的組合物。本發明的另一個方面涉及醫用裝置，其包含任意前述連接靶向部分的β-1，6_葡聚糖和生物可降解的聚合物的組合物中的組合物。在某些實施方案中，用包含連接靶向部分的β-1，6-葡聚糖的組合物塗覆至少一 部分表面。在某些實施方案中，該裝置選自導管、支架、瓣膜、起搏器、中心線(central line)、子宮託、管、分流器、飼管、引流管和矯形外科硬體裝置。在某些實施方案中，該組合物包含含有聚合物和連接靶向部分的β -1，6-葡聚糖 的塗層。在某些實施方案中，該組合物包含含有聚合物和連接靶向部分的β -1，6-葡聚糖 的塗層，其中該聚合物是生物可降解的。本發明的另一個方面涉及治療受試者的方法，其包括將任意前述醫用裝置植入或 導入需要其的受試者體內。本發明的另一個方面涉及塗覆材料，其包含(a)基質；和(b)與所述基質的至少 一部分表面在物理上相結合的包含連接靶向部分的β-1，6-葡聚糖組合物，其中所述組合 物任選地以凝膠或薄膜的形式存在。在某些實施方案中，該組合物是聚合物。在某些實施方案中，該組合物包含生物可降解的聚合物。在某些實施方案中，該基質至少部分由金屬、陶瓷或聚合物組成。本發明的另一個方面涉及治療受試者的方法，其包括將需要其的受試者的身體與 任意前述塗覆材料中的塗覆材料接觸。本文提及的所有出版物、專利和專利申請均在此全部引入作為參考，如同單個出 版物或專利被明確且單獨地說明引入作為參考。在說明書和引入的參考之間衝突的情況 下，應以說明書為準。在該文件中給出數值範圍處，端點包括在該範圍內。此外，應當理解 除非另有說明或明顯不同於上下文和本領域普通技術人員的理解，表示為範圍的值可取所 述範圍內的任何特定值或亞範圍，任選地包括或排除端點之一或兩者，在本發明不同的實 施方案中，除非上下文另有清楚說明，否則至範圍下限單位的十分之一。在百分數以關於固 有地具有整數單位的值列舉時，任何所得到的分數可大約至最接近的整數。附圖簡述

圖1顯示了 β-1，6_葡聚糖-包被的珠子㈧的吞入作用以及ROS產生⑶是抗 體依賴的，與補體(C)的存在無關。圖2顯示了 β-1，6-葡聚糖抗體在正常的成人血清中普遍存在。圖3顯示了選擇IgG同種型影響對β -葡聚糖的應答性。圖4顯示了 β -1,6-葡聚糖-Here印tin綴合物是功能性的。圖5顯示了 β-1，6-葡聚糖-Here印tin綴合物介導由補體和嗜中性白細胞進行 的殺傷癌細胞。應當理解的是為了圖解的簡單清楚起見，附圖中所顯示的要素不必按比例繪製。 例如，為了清楚起見，某些要素的尺寸相對於其他要素可被放大。此外，在考慮適合的情況 下，附圖標記可在附圖間重複以說明相應或類似的要素。發明詳述在下列詳細說明中，列出大量具體細節以提供本發明的詳盡理解。然而，本領域普通技術人員應當理解本發明無需這些具體細節就可實施。在其他的情況下，不詳細描述眾 所周知的方法、過程和成分，也不會使本發明難以理解。葡聚糖是迄今為止在所有研究的地衣真菌物種中都有發現的多糖。部分0-乙 醯化的石耳素是石耳科(Umbilicariacear)的特徵，並已在石耳屬(Umbilicaria)的 幾個種例如 U. pustulata 禾口 U. hirsute、U. angulata、U. caroliniana、以及複葉石耳 (U.polyphylla)中描述。本發明人發現對β-1，6-葡聚糖的應答性是抗體依賴的，並且發現該應答的穩定 性(robustness)與受試者具有特定免疫球蛋白G(IgG)同種型表達相關。因此，這樣的表 達可用於預測受試者對基於葡聚糖的疫苗或佐劑的應答性，並且這樣的活性可用於調節免 疫應答。在一個實施方案中，本發明提供了用於確定受試者對基於葡聚糖的疫苗或佐劑的 應答性的診斷方法，該方法包括>評估暴露於葡聚糖的受試者中免疫球蛋白G(IgG) 1、2、3和4同種型的相對效 價；和>使相對於IgG4，高IgGl或IgG2或IgG3或它們的組合的存在與對基於葡聚糖的 疫苗或佐劑的應答性相關聯。在一些實施方案中，這種方法可在受試者的任何生物液體或分離自受試者的任何 樣品上實施。在一些實施方案中，這種方法在分離自受試者的血清或血漿上實施。應當理解的是存在多種本領域已知的用於評估IgG同種型效價的方法，例如，可 進行改進的ELISA測定法，在此葡聚糖或其片段吸附於基質，然後與來自受試者的液體或 樣品溫育，使得可通過用酶標記的抗-IgG亞類特異性第二抗體的探測來測定葡聚糖誘導 的抗體同種型。還可利用其他測定法，例如Ouchterlony (雙擴散)測定法，或其他市售的 單步鑑定方法。在一個實施方案中，該方法特異性評估給定樣品中IgG同種型表達中的相對差 異，使得相對於IgG4，IgGU IgG2或IgG3的相對增加作為對基於葡聚糖的疫苗或佐劑的應 答性的指示劑。在一個實施方案中，該方法進一步包括在評估IgG同種型相對效價之前將受試者 中細胞與基於葡聚糖的疫苗或佐劑接觸，其中在一個實施方案中，所述葡聚糖包含0-乙醯 化葡聚糖，以及在另一個實施方案中，包含分離自或來源於地衣或真菌的葡聚糖，其中所述 真菌任選地是酵母，在一個實施方案中，其分離自或來源於石耳科。在一些實施方案中，本發明的方法使用了包含純化的β 1-6葡聚糖的組合物，其 中在本發明的多個實施方案中，該組合物是藥物組合物、食品或食物產品、食品補充劑或化 妝用組合物。在一些實施方案中，該組合物不同於例如石耳素的組合物或真菌細胞壁製品。 在本發明的某些實施方案中，按重量計包含在該組合物中的至少10 %、20 %、30 %、40 %、 50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%的葡聚糖是β 1_6葡聚糖。在某些實施方 案中，包含於組合物中的20%-50%的葡聚糖是β 1-6葡聚糖。在某些實施方案中，包含於 組合物中的50% -100%的葡聚糖是β 1-6葡聚糖。在本發明任意組合物或方法的一個實 施方案中，葡聚糖包含按重量計約15%-約30%的β1_6葡聚糖。在本發明任意組合物或 方法的另一個實施方案中，葡聚糖包含按重量計約10% -約35%的β 1-6葡聚糖，或在另一個實施方案中，按重量計約20 % -約50 %的β 1-6葡聚糖，或在另一個實施方案中，按重 量計約25% -約60%的β 1-6葡聚糖，或在另一個實施方案中，按重量計約35% -約80% 的β 1-6葡聚糖，或在另一個實施方案中，按重量計約18%-約35%的β 1-6葡聚糖，或 在另一個實施方案中，按重量計約約75%的β1_6葡聚糖。在某些實施方案中，所 述葡聚糖是寡聚物或聚合物的混合物，其中按那些寡聚物或聚合物的重量計，β-1，6-葡聚 糖大於約 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或 99%。在本發 明的某些實施方案中，「重量」指「乾重」。在其他實施方案中，「重量」指總重量。在本發明 的某些實施方案中，β 1-6葡聚糖是經加工的。這種加工可包括例如脫乙醯作用、用消化除 β 1-6葡聚糖以外的葡聚糖的酶處理、用消化β 1-6葡聚糖的酶進行有限消化、選擇特定的 分子量範圍等。在某些實施方案中，加工包括與其他葡聚糖如-葡聚糖、.1-3葡聚糖等分 離。在某些實施方案中，該加工包括從.1-3葡聚糖上除去β 1-6葡聚糖側鏈以及任選地分 離β 1-6葡聚糖側鏈。在某些實施方案中，該組合物包含經加工的β 1-6葡聚糖，其中相對 於未加工的葡聚糖或相對於未加工的β 1-6葡聚糖，該經加工的β 1-6葡聚糖顯示所期望 的調節免疫應答的能力有所增強。在一個實施方案中，本發明使用了富含0-乙醯基的β 1-6葡聚糖。在一個實施方 案中，在根據本發明的方法使用的任意製品中，葡聚糖包含按重量計至少25%的0-乙醯化 葡聚糖。在一個實施方案中，在根據本發明的方法使用的任意製品中，葡聚糖包含按重量計 約15% -約30%的0-乙醯化葡聚糖。在另一個實施方案中，在根據本發明的方法使用的 任意製品中，葡聚糖包含按重量計約10% -約35%的0-乙醯化葡聚糖，或在另一個實施 方案中，按重量計約20% -約50%的0-乙醯化葡聚糖，或在另一個實施方案中，按重量計 約25% -約60%的0-乙醯化葡聚糖，或在另一個實施方案中，按重量計約35% -約80% 的0-乙醯化葡聚糖，或在另一個實施方案中，按重量計約18% -約35%的0-乙醯化葡聚 糖，或在另一個實施方案中，按重量計約15%-約75%的0-乙醯化葡聚糖。在其他實施方 案中，葡聚糖包含按重量計約75% -100%的0-乙醯化葡聚糖，如按重量計75% -90%或 90 % -100 %的0-乙醯化葡聚糖。在一個實施方案中，在根據本發明的方法使用的任意製品 中，葡聚糖包含大約一定百分數的0-乙醯化的葡萄糖單元(按重量或數量計，在本發明的 多個實施方案中)，其產生自用.1-6內切葡聚糖酶消化天然存在的β 1-6葡聚糖(如石耳 素或本文提及的任何其他β 1-6葡聚糖)足以將按重量計至少90%的β 1-6葡聚糖消化為 包含5個或更少的葡萄糖單元的寡糖的時間，然後(i)從組合物中除去包含5個或更少的 葡萄糖殘基的那些寡糖或(ii)分離分子量大於5kD的所產生的組合物的一部分，或在某些 實施方案中，分子量大於10、20、30、50或100kD。在一些實施方案中，術語「富含0-乙醯化的殘基」指與天然葡聚糖分子相比，在葡 聚糖分子中的個體葡萄糖單元中具有增加百分比的0-乙醯化位點，在葡聚糖分子中具有 增加百分比的0-乙醯化的葡萄糖單元，或它們的組合。在一個實施方案中，提及富含特定 重量百分比的0-乙醯化葡聚糖的葡聚糖製品，是指與葡聚糖分子相比，在葡聚糖分子中的 個體葡萄糖單元中包含增加百分比的0-乙醯化位點的製品，在葡聚糖分子中包含增加百 分比的0-乙醯化的葡萄糖單元的製品，或它們的組合。在個體葡萄糖單元的0-乙醯化位點、葡聚糖分子中的0-乙醯化葡萄糖單元或它 們的組合中，源自不同來源的葡聚糖可包含不同量的0-乙醯化。根據本發明的該方面，在一些實施方案中，術語「富含0-乙醯化葡聚糖」指與該葡聚糖所來源的參考源相比，具有增 加的如本文所述的0-乙醯化，但並不代表與任何葡聚糖來源相比是總體富含的。在一個實施方案中，術語「富含0-乙醯化葡聚糖」指按重量計富含至少25%的 在至少一個葡萄糖單元上是0-乙醯化的葡聚糖鏈，或在該組合物的葡聚糖中存在的至少 25%的葡萄糖單元是0-乙醯化的或它們的組合。在一些實施方案中，在至少的β葡聚 糖鏈中的至少25%的葡萄糖單元是0-乙醯化的，或在另一個實施方案中，在至少5%的β 葡聚糖鏈中的至少25%的葡萄糖單元是0-乙醯化的。在其他實施方案中，在至少5%的β 葡聚糖鏈中的 25% -35%,25% -50%,25% -75%U5% -45%,20% -60%,35% -80%，或 其他量的葡萄糖單元是0-乙醯化的等。在其他實施方案中，體現為在至少10%的β葡聚 糖鏈中的 25% -35%,25% -50%,25% -75%U5% -45%,20% -60%,35% _80%，或其他 量的葡萄糖單元是0-乙醯化的，或在另一個實施方案中，在至少15%的β葡聚糖鏈中，或 在另一個實施方案中，在至少20%的β葡聚糖鏈中上述含量的葡萄糖單元是0-乙醯化的。在一個實施方案中，葡聚糖分離自或來源於地衣，在一個實施方案中，其分離自或 來源於石耳屬。在一個實施方案中，葡聚糖分離自真菌。在一個實施方案中，葡聚糖分離自 酵母，或在另一個實施方案中，葡聚糖是化學合成的或乙醯化的。在另一個實施方案中，葡 聚糖綴合於固相支持物。葡聚糖是尤其在真菌細胞壁中發現的含葡萄糖的多糖。α -葡聚糖包含葡萄糖亞 單元之間的一個或更多個α-鍵，以及β-葡聚糖包括處於葡萄糖亞單元之間的一個或更 多個β-鍵。β -1，6-葡聚糖通常出現在真菌中，但罕見於真菌之外。根據本發明所使用的葡聚 糖包含β1，6葡聚糖。在一些實施方案中，β-葡聚糖來源於石耳科，例如U. pustulate和 U. hirsute、U. angulata、U. caroliniana、以及複葉石耳(U. polyphylla)。在一些實施方案中，β -葡聚糖來源於念珠菌屬(Candida)，例如白色 念珠菌(C. albicans)。其他可用到的β -葡聚糖所來源的生物包括粗球孢子菌 (Coccidioides immitis)、撫狀毛癬菌(Trichophyton verrucosum)、皮炎芽生菌 (Blastomyces dermatidis)、新型隱球菌(Cryptococcus neoformans)、莢膜組織胞菜菌 (Histoplasma capsulatum)、酉良酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、巴西畐Ij球孢子菌 (Paracoccidioides brasiliensis)禾口 Pythiumn insidiosum。在——些實施方案中，如本令頁 域所知的，葡聚糖是化學或酶促合成的，或在其他實施方案中，葡聚糖來源於任何 產生其的物種，並且例如經化學或酶促改變來增加該分子的0-乙醯化。在一些實施方案中，葡聚糖是真菌葡聚糖。「真菌」葡聚糖通常獲自真菌，但當 特定的葡聚糖結構見於真菌和非真菌(如細菌、低等植物或藻類)中時，則非真菌生物體可 用作替代來源。全長天然葡聚糖是不溶性的，並具有兆道爾頓範圍的分子量。在一些實施方 案中，本發明提供了可溶性β-1，6-葡聚糖。在一些實施方案中，本發明提供了可溶的0-乙 醯化的β_1，6-葡聚糖。在一些實施方案中，可通過將長的不溶性葡聚糖片段化來獲得增 溶。這可通過例如水解或在一些實施方案中通過用葡聚糖酶消化(如用β_1，3葡聚糖酶 消化或用β-1，3葡聚糖酶進行限制性消化)得以實現。在其他實施方案中，可合成製備葡 聚糖，以及例如在一些實施方案中，通過連接單糖構件(building blocks) 0這樣的葡聚糖的0-乙醯化可容易地通過本領域已知方法實現。這些方法可包括化學和/或酶促乙醯化， 例如本領域已知的。存在多種真菌β-葡聚糖來源。例如，純的β-葡聚糖是市售的，如石耳素 (Calbiochem)是從Umbilicaria papullosa中純化的β_1，6_葡聚糖。β-葡聚糖可以多 種方式從真菌細胞壁中純化，例如iTokunaka等[(1999) Carbohydr Res 316 :161-172]中所 描述的，並且通過本領域已知的方法產物可富含β-1，6-葡聚糖部分，或O-乙醯化的β-1， 6-葡聚糖部分。本領域普通技術人員應當能夠鑑定或選擇合適的方法來富集β-1，6_葡聚糖部 分和/或O-乙醯化的β-1，6-葡聚糖。在一個實施方案中，通過化學方法進行β-葡聚 糖的O-乙醯化。例如，在speed vac離心機中乾燥多糖(50mg)並重懸於1. 5mL乙酸酐 (Mallindcrockdt)中。在重懸後，添加少許的4_ 二甲基氨基吡啶晶體(Avocado Research Chemist,Ltd)作為催化劑。將反應在室溫下進行5、20或120分鐘，然後用2體積水終止。 然後用水將樣品透析過夜。應當理解如本領域普通技術人員顯而易見的，該過程可以改變 或按比例增大。在其他實施方案中，用於分離O-乙醯化的β-1，6-葡聚糖的方法包括一個 或更多個下列步驟，其可以不同順序來進行(a)基於更高的疏水性的分離，例如結合至任 何疏水基質/樹脂；(b)基於用合適的內切或外切葡聚糖酶或它們的組合消化的分離，其中 O-乙醯化的β-1，6-葡聚糖對該消化具有抗性；(c)使用結合β-1，6-葡聚糖或結合其中 O-乙醯基的抗體或其他部分的親和分離；(d)基於分子量的分離。在一個實施方案中，用消 化未乙醯化的和/或輕度乙醯化的β-1，6-葡聚糖的酶來消化β-1，6-葡聚糖。基於大小 或分子量分離所得到的物質，並分離包含高度乙醯化的葡聚糖的一部分。在一些實施方案 中，獲得β-1，6-葡聚糖製品，消化並將O-乙醯化的寡糖分離，或在另一個實施方案中，將 O-乙醯化的寡糖分離並用於製備新組合物。這樣的組合物代表了本發明的富含O-乙醯化 殘基的β-1，6-葡聚糖製品的實施方案。應當理解用於製備富含O-乙醯化的β -1,6-葡聚糖製品的任何方法的產物都應 當被認為是適合於本發明的方法和試劑盒使用的。在一些實施方案中，用於本發明的試劑盒和/或根據本發明的方法使用的葡聚糖 可包含天然葡聚糖製品中不存在的結構修飾。這樣的修飾可包含如本文所述的O-乙醯化。 在其他實施方案中，這樣的修飾可包括甲基化、烷基化、烷氧基化、硫酸化、磷酸化、脂類綴 合或如本領域普通技術人員所知的其他修飾。在一些實施方案中，該修飾包含用酸例如甲 酸、琥珀酸、檸檬酸或本領域已知的其他酸的修飾(如酯化)。在一些實施方案中，可通過任何一種或多種本領域已知方法實現將脂類綴合於 任何或所有的游離羥基，例如在Drouillat B，等，Pharm Sci. 1998Jan ；87(1) =25-30, B. N. A. Mbadugha,等，Org. Lett.，5 (22)，4041-4044，2003 中所描述的。在一些實施方案中，可通過任何一種或多種本領域已知方法來實現並驗證甲基 化，例如在 Mischnick 等 1994Carbohy dr. Res. ,264,293-304 ；Bowie 等 1984，Carbohydr. Res.，125，301-307 ；Sherman 禾口 Gray 1992，Carbohydr. Res.，231，221—235 ；Stankowski 和 Zeller 1992, Carbohydr. Res. ,234,337-341 ；Harris, P. J.,等(1984)Carbohydr. Res. 127, 59-73 ;Carpita,N.C.& Shea,Ε. M. (1989)Linkage structure of carbohydrates by gas chromatography-mass spectrometry(GC-MS)of partially methylated alditolacetates. In Analysis of carbohydrates byGLC禾口MS (Biermann,C. J. & McGinnis,G. D., 編)，pp. 157-216. CRCPress, Boca Raton, FL 中所描述的。在一些實施方案中，甲基化可通過如下得以確認進一步衍生的TMS酯類、醋酸酯 類或其他酯類的GLC，偶聯的MS,或消化為單糖，去-0-甲基化以及通過衍生化和GLC/MS的 分析，例如在 Pazur 1986, Carbohydrate Analysis-A Practical Approach, IRL Press, Oxford, pp. 55-96 ；Montreuil 等 1986, Glycoproteins. In M. F. Chaplin 禾口 J. F. Kennedy, (編)，Carbohydrate Analysis-a Practical Approach, IRL Press, Oxford, pp. 143-204; Sellers等 1990，Carbohydr. Res.，207，C1_C5 ；0' Neill 等1990，Pectic polysaccharides of primary cell walls. In P. M. Dey (編)，Methods in Plant Biochemistry, Volume 2, Carbohydrates, Academic Press, London, pp. 415-441 ；Stephen 等 1990, Methods in Plant Biochemistry,Volume 2, Carbohydrates,Academic Press,London,pp. 483-522 ；or Churms 1991, CRC Handbook of Chromatography. Carbohydrates, Volume 11, CRC Press, Boca Raton, Florida, USA)中所描述的。在一些實施方案中，磷酸化，任選地包括其他修飾的引入，以及所得產物的驗證可 通過本領域普通技術人員熟知的方法來完成，參見例如Brown，D. H.，Biochem. Biophys. Acta,7,487 (1951) ；Roseman, S.，禾口 Daffner，I.，Anal. Chem.，28，1743 (1956) ；Kornberg, A.,禾口 Horecker, . B. L. , in Methods in enzymology, Vol. I, Academic Press, New York, 1955，p. 323 ；美國專利號 4，818，752。在一些實施方案中，葡聚糖硫酸化以及所得產物的驗證可根據本領域公知的任 意方法來完成，例如在 Alban，S.，和 Franz，G. (2001), Biomacromolecules 2，354-361 ； Alban,等(1992)Arzneimittelforschung 42，1005-1008 ；或 Alban， S.，等(2001). Carbohydr. Polym. 47，267-276 中所描述的。本發明還提供包含β-1，6-葡聚糖的膠粒的應用。在某些實施方案中，膠粒包含 由含有β-1，6-葡聚糖的表面活性劑分子組成的複合物，其可分散於液態膠體中。在某些 實施方案中，表面活性劑分子是兩親性的，即它們同時包含疏水基(它們的「尾部」)和親水 基(它們的「頭部」)。在某些實施方案中，親水成分包含β_1，6-葡聚糖，任選地根據任意 一種或更多種本文描述的方法進行修飾。在某些實施方案中，處於水溶液中的膠粒形成聚 集體，親水「頭部」區與周圍溶劑相接觸，使得疏水尾部區隔絕在膠粒中心中。膠粒在形狀 上可以是球形的或近似球形的，但在某些實施方案中，膠粒是橢圓體、圓柱體或雙層。在一 些實施方案中，膠粒是聚合膠粒，例如在美國公開號20020035217中所描述的那些。在一些 實施方案中，膠粒包囊活性劑，如疏水分子。示例性活性劑包括抗感染劑例如抗細菌劑、抗 病毒劑、抗真菌劑、抗寄生蟲藥；用於治療癌症的化學治療劑；細胞因子、抗原等。本發明進一步提供了通過向其綴合脂類而被修飾的β-1，6-葡聚糖，其中在一些 實施方案中，該修飾容許產生包含β-1，6-葡聚糖的膠粒，其中脂類附著於β-1，6-葡聚糖 上。該脂類可以是直鏈或分支的，任選地被取代的烴。在一些實施方案中，該脂類包含脂肪 酸。在一些實施方案中，脂類如脂肪酸，包含4- 個或4-40個碳原子。本發明還提供了包含共價或非共價連接於包含酵母葡聚糖或基本上由酵母葡聚 糖組成的顆粒的β-1，6-葡聚糖的顆粒的應用或包含該顆粒的試劑盒。還提供了包含能與 酵母葡聚糖的官能團反應以形成共價鍵的反應部分的β-1，6-葡聚糖。酵母葡聚糖可包含β -1，6-葡聚糖、β -1，3-葡聚糖、其他葡聚糖或它們的組合。在另一個實施方案中，本發明提供了用於確定受試者對基於葡聚糖的疫苗或佐劑 的應答性的診斷試劑盒，所述試劑盒包含>與所述疫苗或佐劑中的葡聚糖相應或同源的葡聚糖；>用於檢測受試者樣品中免疫球蛋白G(IgG) 1、2、3和4同種型的相對效價的試 劑；以及>任選地來源於對所述基於葡聚糖的疫苗或佐劑陽性和陰性應答者的一系列標 準樣品。根據本發明的該方面，以及在一個實施方案中，葡聚糖附著於基質，在一個實施方 案中，基質是微量滴定板，或在另一個實施方案中，基質是珠子。在一個實施方案中，試劑包 含可檢測的標記，其使該檢測得以半定量。在一些實施方案中，受試者已暴露於環境葡聚糖，並且診斷用於測定受試者對特 定的基於葡聚糖的疫苗的應答性。根據該方面，該試劑盒應當包含與要被測定應答性的疫 苗中的葡聚糖相應的或是其片段，或與之高度同源的葡聚糖。根據該方面，以及在一個實施方案中，當提及如本文所述的葡聚糖時，術語「同源 性」指與相應的葡聚糖參照分子相比，結構同一性或根據候選分子中組成或含量的同一性 的一定百分數。在一個實施方案中，術語「同源性」、「同源物」或「同源的」在任何情況下表示所提 及的分子與參照分子顯示至少70% —致性。在另一個實施方案中，葡聚糖分子與參照分子 顯示至少72% —致性。在另一個實施方案中，葡聚糖分子與參照分子顯示至少75%—致 性。在另一個實施方案中，葡聚糖分子與參照分子顯示至少77% —致性。在另一個實施方 案中，葡聚糖分子與參照分子顯示至少80%—致性。在另一個實施方案中，葡聚糖分子與參 照分子顯示至少82% —致性。在另一個實施方案中，葡聚糖分子與參照分子顯示至少85% 一致性。在另一個實施方案中，葡聚糖分子與所示序列顯示至少87% —致性。在另一個實 施方案中，葡聚糖分子與參照分子顯示至少90 %—致性。在另一個實施方案中，葡聚糖分子 與參照分子顯示至少92% —致性。在另一個實施方案中，葡聚糖分子與參照分子顯示至少 95%或更多的一致性。在另一個實施方案中，葡聚糖分子與參照分子顯示至少95% -100% 一致性。關於與參照分子的一致性，這樣的一致性可指結構同一性或根據化學內含物的組 成同一性。在一些實施方案中，類似製備的葡聚糖用於本發明的試劑盒中，其與那些用於基 於葡聚糖的佐劑或疫苗中的葡聚糖是可以相比的，然而在試劑盒中使用的葡聚糖可以不被 進行所有的加工步驟，其包含用於基於葡聚糖的疫苗或佐劑的製備過程。在一個實施方案中，可通過本領域熟知的方法確定同源性，包括免疫印跡分析，或 利用經已建立的方法可獲得的多種軟體包的任何一種，通過計算機算法分析。本發明還提供的是包含含有β-1，6-葡聚糖和生物可降解的聚合物的組合物的 試劑盒或該組合物的應用。在一些實施方案中，生物可降解的聚合物包含生物學活性的亞 單位。在一些實施方案中，術語「生物可降解的」指在其被發現的細胞或受試者的生物環境 中被降解即破裂成較小片段的物質。在一個實施方案中，生物降解包括通過例如酶促或非 酶促水解、消化等，聚合物降解為其組成亞單位。在一個實施方案中，生物降解可包括聚合物骨架中的鍵(共價鍵或非共價鍵)切割。在另一個實施方案中，生物降解可包括側鏈內 部的或連接側鏈與聚合物骨架的鍵(共價或非共價)的切割。在一些實施方案中，降解產 物是受試者可代謝的。在一些實施方案中，降解產物可被受試者利用來合成較大的生物分 子。在一些實施方案中，降解產物被受試者排洩或以其他方式消除。在一些實施方案中，聚 合物和/或其降解產物是生物相容的，即當以與本發明相符合的量給予或以其他方式導入 受試者體內時，它們是基本上無毒並且不會產生無法接受的炎性或免疫應答。在一些實施方案中，術語「生物活性劑」包括當以有效量給予動物(如哺乳動物， 例如人)時提供治療所需效果的治療劑，應當理解不是所有的受試者都會受益於該治療 劑。在一些實施方案中，聚合物是聚酐，其任選地包含生物學活性的水楊酸鹽類和α-羥 酸。聚合物的降解釋放所述生物學活性的水楊酸鹽類和/或α-羥酸。在一些實施方案 中，β-1，6-葡聚糖共價或非共價附著於生物可降解的聚合物。合適的聚合物以及用於 製造其的方法描述於例如美國公開號20030035787和20050053577中。在某些實施方案 中，聚合物包含10-1000個，或50-500個，或約100個單體。在一個實施方案中，聚合物是 polyaspirin 。對於本領域普通技術人員而言，形成其中β -1，6-葡聚糖共價連接至聚合 物的化合物的方法是顯而易見的。β-ι，6-葡聚糖在聚合前可共價附著於單體，或在聚合 後可綴合於聚合物的官能團。在一些實施方案中，β-1，6-葡聚糖通過連接基團共價附著。 示例性連接基團描述於美國公開號20050053577中，其他連接基團對於本領域普通技術人 員應是顯而易見的。在一些實施方案中，所述試劑盒包含含有β -1，6-葡聚糖和生物可降解的聚合物 的顆粒以及所述方法利用了這些顆粒。在一些實施方案中，顆粒包被有或充滿β_1，6-葡 聚糖。在一些實施方案中，β-1，6-葡聚糖共價附著於聚合物。在一些實施方案中，組合物 包被植入物或如本文另外所述的其他醫學或外科手術裝置。進一步提供的是給予受試者β -1，6_葡聚糖和生物學活性的水楊酸鹽或α -羥酸 的方法，該方法包括給予受試者包含β-1，6-葡聚糖和生物可降解的聚合物的組合物，所 述聚合物包括所述生物學活性的水楊酸鹽類和/或α -羥酸，或將包含所述聚合物和所述 生物學活性的水楊酸鹽類和/ α -羥酸的裝置植入或導入受試者中。在一些實施方案中，本發明提供了包含低分子量葡聚糖的試劑盒和使用低分子量 葡聚糖的方法，該低分子量葡聚糖具有小於100kDa(如小於80、70、60、50、40、30、25、20或 15kDa)的分子量。在一些實施方案中，本發明提供了寡糖，如包含85個或更少的(如85、 84、83、82、81、80、79、78、77、76、75、74、73、72、71、70、69、68、67、66、65、64、63、62、61、60、 59、58、57、56、55、54、53、52、51、50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、 34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、 8、7、6、5、4個)葡萄糖單糖單元。在一些實施方案中，在本發明的試劑盒或方法中使用的β -1，6-葡聚糖包含低分 子量葡聚糖或基本上由其組成。在使用β-1，6-葡聚糖的本發明任意方法的一些實施方案 中，β-1，6-葡聚糖包含低分子量葡聚糖或基本上由其組成。任選地，在本發明的任意實施 方案中，至少某些低分子量0-1，6-葡聚糖富含0_乙醯基。測定葡聚糖中的鍵合類型和結構的常用技術是碳-13核磁共振波譜法 (13C-NMR)。在給定的波譜中"C信號的數目以及相對強度可用於測定葡聚糖聚合物中鍵合構型和位置。例如，與相應的未連接的碳相比，參與糖苷鍵的碳原子的化學位移(信號)向 低磁場處強烈移動(最多9ppm)。在一些實施方案中，本發明提供了包含β 1-6葡聚糖的試劑盒以及包含β 1-6葡 聚糖的組合物的應用，其中葡聚糖綴合於固相支持物。在一個實施方案中，固相支持物是珠 子或顆粒。在一個實施方案中，葡聚糖綴合的珠子或顆粒或基質包含變性蛋白(如人血清 白蛋白(Benacerraf 等，1957Brit. J.Exp· I^ath，38 :35))、不溶性物質(如碳黑、矽石、二 氧化矽、聚苯乙烯、膠乳)、金屬氧化物(如氧化鈦、鐵氧化物)和印度墨汁(即膠態碳顆 粒的懸浮液)(描述於 Reichard 和 Filkins, 1984，The Reticuloendothelial System ；A Comprehensive Treatise,pp. 73-101 (Plenum Press)，及其中的參考文獻)、水凝膠(例如， 如美國專利公開號20050191361中所述)、瓊脂糖凝膠(sepharose)或瓊脂糖(agarose) 珠子或微粒。在一些實施方案中，珠子或微粒成型自生物可降解的且無毒的材料(如聚 (α-羥酸)例如聚(丙交酯-乙交酯)共聚物、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚酐、聚已酸內酯 等)。本發明的珠子或顆粒可包含已清除它們細胞質的紅細胞(RBCs)，稱為「血影」 RBCs、 細菌(如通過RES清除的細菌；參見如Benacerraf和Miescher，1960，Ann NY Acad Sci, 88 :184-195)、細胞片段、脂質體、噬菌體、噬菌體片段以及無病毒核酸的病毒衣殼(如乙型 肝炎病毒表面抗原顆粒)等。在一個實施方案中，綴合於固相支持物是通過將固相化學交聯至本發明的葡聚糖 進行的。交聯化學是本領域熟知的。用於綴合葡聚糖和固相(如珠子或顆粒)的交聯劑的 性質可以是本領域已知的任何合適試劑。應當理解任何合適的交聯劑都可使用，但要注意 保持葡聚糖的活性。顆粒可以是噬菌體或細菌的片段。在某些實施方案中，顆粒的尺寸適合於被巨噬細胞、嗜中性白細胞或兩者所攝取。 顆粒可具有任何本文所述的組合物。在某些實施方案中，本發明提供了顆粒群，其中至少 50%的顆粒具有適合於被巨噬細胞、嗜中性白細胞或兩者所攝取的尺寸。本發明提供了顆 粒群，其中至少50%、75%或90%的顆粒落入期望的尺寸範圍內。在某些實施方案中，期 望的尺寸範圍在給定值的士 10%、士20%、士30%、土 40%或士50%中。該值可以是例如 20nm、100nm、500nm、1、5、10、20、50微米等。在任意這些實施方案中，顆粒可具有任何本文描 述的組合物。該群體可包含具有以任何比例存在的不同組合物的顆粒。顆粒群可用於任何 本文描述的目的，用於這種應用的方法是本發明的一個方面。可使用的交聯劑包括但不限於對-疊氮基苯甲醯基醯胼、N-G-[對-疊氮基水楊 醯氨基]-丁基)-3' (2'-吡啶基二硫)_丙醯胺、雙(β-[4_疊氮基水楊醯氨基]-乙 基)二硫化物、1，4- 二馬來醯亞氨基-2，3- 二羥基丁烷、1，6- 二馬來醯亞氨基己烷、1，5- 二 氟-2，4- 二硝基苯、二甲基己二亞醯胺-2HC1、二甲基辛二亞醯胺-2HC1、二甲基己二醯二亞 醯胺-2HC1、二甲基庚二亞醯胺-2HC1、雙琥珀醯亞氨基戊二酸酯、二琥珀醯亞氨基酒石酸 鹽、1-乙基-3- [3- 二甲基氨基丙基]碳二亞胺鹽酸化物、(N-羥基琥珀醯亞氨基)-4-疊氮 水楊酸、磺基琥珀醯亞氨基2-[7_疊氮基-4-甲基-香豆素-3-乙醯胺基甲基-1，3-氨基 丙酸酯、N-琥珀醯亞胺-4-碘代乙醯基氨基苯甲酸酯、N-琥珀醯亞氨基-3-[2-吡啶巰基] 丙酸酯和琥珀醯亞氨基6-[3-(2_吡啶巰基)_丙醯胺]己酸酯(Pierce Chemical Co.,Rockford, 111.) 在一個實施方案中，如 Nature Methods Vol 2No. 11，p.，845，2005 中所 述或類似方法衍生葡聚糖。在一個實施方案中，使用試劑例如2，6- 二氨基吡啶(DAP)，用提 供游離的、反應性伯胺的部分衍生葡聚糖。席夫鹼甲亞胺可例如通過氰基硼氫鈉被還原成 穩定的仲胺。在一個實施方案中，然後將衍生的葡聚糖與N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)酯例如 NHS-生物素反應。其他交聯劑包含醛、亞胺、氰基、滷素、羧基、活化的羧基、酐和馬來醯亞胺官能團。 在一些實施方案中，交聯劑可包含雜雙功能交聯劑例如ABH、M2C2H、MPBH和PDPH (Pierce Chemical Co. , Rockford, 111·)。 參見例如 Hermanson, G. Τ. (1996)Bioconjugate Techniques, Academic Press, Inc.,對交聯方法禾口試劑的進一步討論。在另一個實施方案中，可通過使用包含官能團的珠子將葡聚糖綴合於珠子或顆 粒，該官能團可根據如 Brumeanu 等(Genetic EngineeringNews, Oct. 1，1995，p. 16)公開的 方法被綴合。還有可能通過非共價方法將珠子/顆粒/固相支持物綴合至葡聚糖。獲得非共價 綴合的一種方便的方法包括利用針對葡聚糖的抗體，其共價或非共價地附著於顆粒、珠子 等。在另一個實施方案中，使用生物素-抗生物素蛋白(其中「抗生物素蛋白」應當理解為 任何形式的抗生物素蛋白)獲得非共價綴合。例如，抗生物素蛋白-包被的或綴合的珠子 可與用生物素部分衍生的葡聚糖接觸。在一些實施方案中，綴合的葡聚糖的製備包括基本上不含有未綴合的反應物的最 終綴合物的純化。可基於綴合物任意成分的性質通過親和力、凝膠過濾、疏水層析、切向超 濾、透濾或離子交換層析實現純化。例如，純化可減少一種或更多種未綴合的反應物(如葡 聚糖或固相支持物)的量至該未綴合的反應物原始存在的量的10%或更少、5%或更少、或
或更少的量。在一些實施方案中，本發明提供了包含β 1-6葡聚糖的顆粒，其中在一些實施方 案中，該β 1-6葡聚糖富含0-乙醯基。在一些實施方案中，該顆粒包含按重量計至少50% 得β 1-6葡聚糖。在一些實施方案中，β 1-6葡聚糖均勻分布於顆粒中。應當理解的是本 發明包含β 1-6葡聚糖的顆粒可又包含如本文所述的任何適合於其的實施方案。在一個實施方案中，綴合的葡聚糖富含0-乙醯基，以及在一個實施方案中，綴合 的葡聚糖包含按重量計至少25%的0-乙醯化葡聚糖，或如本文所述的任何相關實施方案。 在一個實施方案中，葡聚糖綴合於微球，在一個實施方案中，其具有約1-100微米的直徑。 在一個實施方案中，微球具有約10-50微米的直徑。在另一個實施方案中，微球具有約5-40 微米的直徑。在另一個實施方案中，直徑在0. 1-5微米。在另一個實施方案中直徑在0. 5-1 微米。在另一個實施方案中，顆粒或珠子處於納米範圍內，如100-500nm。在一個實施方案中，術語「珠子」或「顆粒」或「固相支持物」指球形材料。在另一 個實施方案中，術語「珠子」或「顆粒」或「固相支持物」指非球形材料。在一個實施方案中， 非球形珠子或顆粒在它們表面上任意兩點之間具有任意前述範圍內的最長的軸或最長的 尺寸。在一個實施方案中，選擇顆粒的尺寸(如直徑)以促進吞噬細胞例如嗜中性白細胞、 巨噬細胞或樹突細胞對顆粒的吞噬作用。在一個實施方案中，術語「珠子」或「顆粒」或「固相支持物」指可為吞噬細胞所攝 取、具有一定的大小和組成、葡聚糖可附著的任何固體或凝膠的，或基於溶膠凝膠的物質。
在一個實施方案中，本發明的試劑盒/組合物包含或本發明的方法使用了具有一 定尺寸和表面密度的葡聚糖(如_1，6葡聚糖，任選地富含0-乙醯基)的珠子或顆粒，當與 例如具有不同尺寸和/或表面密度的葡聚糖的顆粒相比時，該珠子或顆粒可被抗原呈遞細 胞有效地吞噬。在一個實施方案中，可用通過與包含反應性官能團的固相支持物起反應的直接鍵 合實現綴合於固相支持物。可使用任何已知的方法進行通過連接基團的鍵合，例如在美國專利號6，642，363 ； 4，882，317或4，695，624中描述的方法。有用類型的鍵合是己二酸接頭，其可通過將胺化的 葡聚糖上游離的-NH2基與己二酸偶聯(使用例如二醯亞胺活化)，然後將蛋白與所產生糖 類-己二酸中間體的偶聯來形成。另一種類型的鍵合是羰基鍵，其可通過將修飾的葡聚糖 的游離羥基與CDI起反應，繼之以與蛋白起反應以形成氨基甲酸酯接頭來形成。其他接頭 包括B-丙醯氨基、硝基苯乙胺、滷醯基滷化物(haloacyl halides)、糖苷鍵、6_氨基己酸、 ADH、C4-C12 部分等。在另一個實施方案中，本發明提供了包含β 1-6葡聚糖的顆粒。在某些實施方 案中，顆粒包含按乾重計至少 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、 96%,97^^98%或99%的β 1_6葡聚糖。在某些實施方案中，顆粒基本上由β 1_6葡聚糖 組成。在某些實施方案中，除任何溶劑成分例如水之外，顆粒基本上由β 1-6葡聚糖組成。 在某些實施方案中，β 1-6葡聚糖富含0-乙醯基。在某些實施方案中，顆粒包含按乾重計 小、於50%、40%、30%、20%、10%或5%的1_3葡聚糖。本發明進一步提供了組合物，其包 含任何上述顆粒，該顆粒包含或基本上由任選地富含0-乙醯基的β 1-6葡聚糖組成。該組 合物可進一步包含藥學上可接受的載體或佐劑。本發明進一步提供了調節哺乳動物受試者 的免疫應答的方法，其包括給予受試者任何上述顆粒，或包含任何上述顆粒的組合物。可使 用任何本領域已知方法製備顆粒。顆粒可被磨碎或過篩來獲得所需尺寸。在某些實施方案 中，β 1-6葡聚糖均勻地或均質地分布於顆粒中。在某些實施方案中，「均勻地分布」意味著 β 1-6葡聚糖不包囊在不同的材料中，並不僅僅包被由不同的材料組成的顆粒的表面，或不 是共價或非共價地附著於由不同的材料組成的顆粒表面。而在某些實施方案中，將β 1-6 葡聚糖任選地與另一種材料混合成型為顆粒，使得該β 1-6葡聚糖基本上遍布於顆粒的全 部體積中。應當理解的是β 1-6葡聚糖的密度可以改變，但通常在整個顆粒中逐步且連續 地而非突然地改變。在另一個實施方案中，本發明提供了綴合於固相支持物的β 1-6葡聚糖，其中該 固相支持物是基質，該基質上或其中可用於進行測定法。例如，以及在一些實施方案中，本 發明的試劑盒/方法使用了 β 1-6葡聚糖已附著的微量滴定板，或96孔板，並在該孔/平 板中進行測定法。這樣的基質可包含任何合適的材料，例如對溶劑耐受、透明的材料使得可 以對基質中樣品實施分光光度測定法。在一些實施方案中，用於本發明方法中的β 1-6葡聚糖可進一步包含靶向部分。 在一些實施方案中，該靶向部分針對特定細胞類型，或在一些實施方案中，針對患病細胞， 例如受感染細胞、或贅生性細胞或前腫瘤細胞。在一些實施方案中，例如可通過葡聚糖與病 毒共同受體的連接來實現靶向病毒感染的細胞。在一些實施方案中，靶向部分可包括整聯 蛋白或MHC II類分子，在受感染細胞例如專職抗原呈遞細胞上可被上調。
在一些實施方案中，靶向受感染細胞引起對受試者中感染的增強的治療應答。例 如，以及在一些實施方案中，靶向受感染細胞增強對病原體的吞噬作用和/或細胞毒性應 答，或在一些實施方案中，增強補體-介導的病原體溶胞作用。在一些實施方案中，靶向受 感染細胞增強對病原體的免疫應答。在一些實施方案中，靶向部分與如本文所述的並且包含其任何實施方案的贅生性 或前腫瘤細胞特異性相互作用。在一些實施方案中，使用連接於靶向贅生性或前腫瘤細胞 的靶向部分的β 1-6葡聚糖可促進宿主抗癌應答。在一些實施方案中，這樣的靶向促進腫 瘤細胞裂解，或在一些實施方案中，增強宿主抗腫瘤應答。在一些實施方案中，並且不受限制，使用葡聚糖、連接靶向部分的β 1-6葡聚糖 和/或本發明的組合物使得多糖靶向癌細胞上特異性表達的抗原，並從而增強該細胞的補 體-介導的溶胞作用。在一個實施方案中，本發明提供了刺激受試者免疫應答的方法，其包括給予受 試者純化的β-1-6-葡聚糖以及試劑，所述試劑使抗體生產傾向於產生與免疫球蛋白 G(IgG)4相比，相對更多量的免疫球蛋白G(IgG)l、2或3。根據本發明的該方面，以及在一個實施方案中，同時給予受試者純化的 β -1-6-葡聚糖和試劑，或在另一個實施方案中，順序給予受試者純化的β -1-6-葡聚糖和 試劑。在另一個實施方案中，給予受試者所述純化的β-1-6-葡聚糖和所述細胞因子各自 至少兩次。在一個實施方案中，試劑是細胞因子，其中在一個實施方案中，所述細胞因子是白 介素_2、白介素-12或幹擾素-Y或它們的組合。在另一個實施方案中，試劑下調白介素-4 或白介素-10產生或幹擾白介素-4或白介素-10活性。在一個實施方案中，受試者進一步暴露於與免疫應答的靶標相關的抗原，其中在 一個實施方案中，所述抗原是腫瘤相關抗原。根據本發明的該方面，以及在一個實施方案 中，受試者具有增生性或瘤前病變；在另一個實施方案中，該方法對受試者的癌症進行治 療、延遲癌症的進展、延長癌症的緩解或降低癌症的發病率或嚴重程度。在另一個實施方案 中，受試者患有癌症。在另一個實施方案中，受試者未被診斷有癌症。在另一個實施方案中， 受試者未被診斷有腫瘤。在另一個實施方案中，抗原來源於病原體，其中在一個實施方案中，所述病原體是 真菌。在一個實施方案中，該方法對受試者的感染進行治療、延遲感染的進展、延長感染的 潛伏狀態或降低感染的發病率或嚴重程度。在一些實施方案中，該方法包括將.葡聚糖和任選的細胞因子靶向贅生性或前腫 瘤細胞或組織、或腫瘤，其可通過靶向如本文所述的腫瘤抗原得以實現。在一些實施方案 中，這樣的細胞可表達腎上腺髓素受體(ADMR)、降鈣素受體-樣受體(CRLR)、⑶117或如本 文所述的腫瘤相關抗原的任何組合。根據該方面，以及在一個實施方案中，通過用本發明的連接的葡聚糖靶向表達腎 上腺髓素受體的細胞，可治療肺癌、胰腺癌、卵巢癌和其他相關癌症。在一些實施方案中，通 過用本發明的連接的葡聚糖靶向表達CRLR和/或CD117的細胞，可治療血管瘤、神經膠質 瘤和/或其他相關癌症。在一些實施方案中，本文提及的靶向部分應當理解為包含抗體，或如本文所述的其片段，針對所提及受體的天然存在的肽配體，或其修飾的形式，例如截短產物。在一些實 施方案中，本文提及的靶向部分應當理解為包含人工肽、小分子等。在一些實施方案中，本發明提供了將葡聚糖、連接靶向部分的β 1-6葡聚糖和/或 本發明的組合物(如本文所述的，包括它們的任何實施方案)作為一種方式來確定贅生性 或前腫瘤細胞或組織對治療方案的應答性的應用。在一些實施方案中，這種方法包括從含 有贅生性或前腫瘤細胞的受試者或活檢材料中獲得腫瘤樣品，評估細胞對體外裂解的敏感 性或耐受性和/或測定內源性補體控制蛋白的表達和/或分泌水平。在一些實施方案中，腫瘤細胞表達或過表達(如相對於該細胞類型的正常細胞或 該細胞所起源的組織)內源性補體調控蛋白例如補體受體1 (CRl或CD35)、衰變加速因子 (DAF或CD55)、膜輔因子蛋白(MCP或CD46)、補體因子H(fH)(或FHL-1)和/或C4b_結合 蛋白(C4BP)。在一些實施方案中，本發明提供了將葡聚糖、連接靶向部分的β 1-6葡聚糖和/或 本發明的組合物(如本文所述的，包括它們的任何實施方案)作為一種方式來靶向病理性 維管結構例如動脈粥樣硬化患者的維管結構的應用，或在一些實施方案中，為了增強這種 維管結構的消除，靶向病理性新生維管結構例如腫瘤相關新生維管結構。根據本發明的該方面以及在一些實施方案中，靶向部分尤其包含抗體或抗體片段 或與這樣的維管結構的成分特異性相互作用的配體，例如與VEGF、組織因子、凝血因子、血 管細胞黏著分子、整聯蛋白、選擇蛋白或任何其他在內皮細胞上表達或處於其表面的標記 特異性相互作用的試劑。在一個實施方案中，靶向部分是肽、抗體、抗體片段、受體、蛋白Α、蛋白G、生物素、 抗生物素蛋白、鏈黴抗生物素蛋白、金屬離子螯合物、酶輔因子、核酸或配體。在一些實施方案中，這樣的靶向部分可包含抗體或抗體片段。在一些實施方案中， 這樣的抗體或抗體片段會與如本文所述的期望靶標特異性相互作用，並且所述抗體或片段 與葡聚糖的連接不會抑制這樣的相互作用。在一些實施方案中，術語「抗體」指能與如本文所述的期望靶標特異性相互作用的 完整的分子及其功能片段，例如Fab、F(ab' )2和Fv。在一些實施方案中，抗體片段包含(l)Fab，包含抗體分子的單價抗原結合片段的片段，其可通過用木瓜蛋白酶消化 完整的抗體以產生完整的輕鏈和一條重鏈的一部分而產生；(2) Fab'，可通過用胃蛋白酶處理完整的抗體、接著還原以產生完整的輕鏈和一 條重鏈的一部分來獲得的抗體分子片段；每個抗體分子獲得兩條Fab'片段；(3) (Fab' ) 2，可通過用胃蛋白酶處理完整的抗體無需之後的還原而獲得的抗體 片段；F(ab' ) 2是通過兩個二硫鍵將兩條Fab'片段保持在一起的二聚體；G)Fv，包含表示為兩條鏈的輕鏈可變區和重鏈可變區的基因工程片段；和( 單鏈抗體("SCA")，包含輕鏈可變區和重鏈可變區的基因工程分子，其通過 合適的多肽接頭連接為基因融合的單鏈分子。製備這些片段的方法是本領域已知的。(參見例如Harlow和Lane，Antibodies A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,New York, 1988,在此引入作為參 考)。在一些實施方案中，可通過抗體的蛋白水解或編碼片段的DNA在大腸桿菌(E. coli)或哺乳動物細胞(如中國倉鼠卵巢細胞培養物或其他蛋白表達系統)中的表達來 製備抗體片段。在一些實施方案中，可用常規方法通過胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化完整的抗體 來獲得抗體片段。例如，可通過用胃蛋白酶的酶促切割抗體產生抗體片段來提供稱為 F(ab' ) 2的5S片段。該片段可進一步用巰基還原劑切割，並任選地使用針對二硫鍵切割所 產生的巰基的封閉基團，以產生3. 5S Fab'單價片段。可選地，使用胃蛋白酶的酶促切割直 接產生兩個單價Fab 『片段和Fc片段。這些方法在例如Goldenberg，美國專利號4，036，945 和4，331，647，以及其中包含的參考文獻所描述，該專利在此全部引入作為參考。還參見 Porter, R. R.，Biochem. J. ,73 =119-126,1959。還可使用其他切割抗體的方法例如分離重 鏈以形成單價輕-重鏈片段，片段的進一步切割，或其它酶促、化學或基因技術，只要片段 結合被完整的抗體識別的抗原即可。Fv片段包含締合的VH和VL鏈。該締合可以是非共價的，如在Inbar等，Proc. Nat' 1 Acad. Sci. USA 69 =2659-62,1972中所描述的。可選地，可變鏈可通過分子間二硫 鍵連接或通過化學藥品例如戊二醛交聯。優選地，Fv片段包含通過肽接頭連接的VH和VL 鏈。通過構建包含寡核苷酸連接的編碼VH和VL區的DNA序列的結構基因製備這些單鏈抗 原結合蛋白(sFv)。將該結構基因插入表達載體中，隨後導入宿主細胞例如大腸桿菌中。重 組宿主細胞合成用接頭肽橋連兩個V區的的單條多肽鏈。用於產生sFvs的方法描述於例 如 Whitlow 和 Filpula, Methods, 2 :97-105,1991 ；Bird 等，Science 242 :423-426,1988 ； Pack 等，Bio/technology 11 1271-77，1993 ；和 Ladner 等，美國專利號 4，946，778，其在此 全部引入作為參考。另一種形式的抗體片段是編碼單個互補決定區(OTR)的肽。可通過構建編碼目 標抗體的CDR的基因獲得CDR肽(「最小識別單位」)。舉例來說，通過使用聚合酶鏈反應 從產生抗體的細胞的RNA來合成可變區，從而製備這樣的基因。參見例如Larrick和Fry， Methods, 2 :106-10,1991。在一些實施方案中，如本文所述的抗體或片段可包含「人源化形式」的抗體。在一 些實施方案中，術語「人源化形式的抗體」指非人(如鼠)抗體，其是免疫球蛋白、免疫球蛋 白鏈或其片段(例如Fv、Fab、Fab'、F(ab' ). sub. 2或抗體的其他抗原結合亞序列)的 嵌合分子，包含來源於非人免疫球蛋白的最小序列。人源化抗體包括其中來自受體的互補 決定區(CDR)的殘基被來自具有期望特異性、親和力和能力的非人物種(供體抗體)例如 小鼠、大鼠或兔的CDR的殘基所取代的人免疫球蛋白(受體抗體)。在某些情況下，人免疫 球蛋白的Fv構架殘基被相應的非人殘基所取代。人源化抗體還可包含既未在受體抗體中 也未在輸入CDR或構架序列中發現的殘基。一般而言，人源化抗體應包含基本上全部的至 少一個，以及通常兩個可變區，其中全部或基本上全部的CDR區相應於非人免疫球蛋白的 那些⑶R區，以及全部或基本上全部的FR區是人免疫球蛋白共有序列的那些FR區。人源 化抗體最佳地還應包含至少一部分的免疫球蛋白恆定區(Fe)，通常是人免疫球蛋白的免疫 球蛋白恆定區(Fe) [Jones 等，Nature, 321 :522-525(1986) ；Riechmann 等，Nature, 332 323-329 (1988)；和 Presta，Curr. Op. Struct. Biol.，2 :593-596 (1992)]。用於人源化非人抗體的方法是本領域熟知的。通常，人源化抗體具有一個或 更多個來自非人來源並引入其中的胺基酸殘基。這些非人胺基酸殘基常被稱作輸入殘基，其通常取自輸入可變區。人源化可基本上根據Winter及其同事的方法，通過用 齧齒動物CDRs或CDR序列來取代人抗體相應的序列來進行[Jones等，Nature, 321 522-525(1986) ；Riechmann φ, Nature 332 :323-327(1988) ；Verhoeyen Science, 239 1534-1536 (1988)]。因此，這樣的人源化抗體是嵌合抗體(美國專利號4，816，567)，其中基 本上小於完整的人可變區的部分被來自非人物種的相應序列所取代。實際上，人源化抗體 通常是這樣的人抗體，其中某些CDR殘基以及可能的某些FR殘基被來自齧齒動物抗體中類 似位點的殘基所取代。還可使用多種本領域已知技術產生人抗體，包括噬菌體展示文庫[Hoogenboom和 Winter, J. Mol. Biol. ,227 :381 (1991) ；Marks 等，J. Mol. Biol.，222 :581 (1991) ]。Cole 等和Boerner等的技術也可用於製備人單克隆抗體(Cole等，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985)禾口 Boerner 等，J. Immunol. , 147 (1) 86-95(1991))。類似地，可通過將人免疫球蛋白基因座引入轉基因動物，例如其中內源免 疫球蛋白基因已經部分或完全失活的小鼠，來製備人抗體。一旦攻擊(challenge)，就觀 察到人抗體產生，其在所有方面包括基因重排、裝配和抗體所有組成部分均很接近地類似 於在人類中所見的。該方法描述於例如美國專利號5，545，807,5, 545，806,5, 569，825、 5,625, 126、5，633，425、5，661，016中，以及描述於下列科技出版物中:Marks等，Bio/ Technology 10,779-783(1992) ；Lonberg 等，Nature 368856-859(1994) ；Morrison, Nature 368812-13(1994) ；Fishwild 等，Nature Biotechnology 14,845-51 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology 14,826 (1996) ；Lonberg 禾口 Huszar, Intern. Rev. Immunol. 1365-93(1995)。在一個實施方案中，靶向部分是特異性識別嗜中性白細胞的抗體或其片段，，以及 例如特異性識別L-選擇蛋白、β 2-整聯蛋白、補體受體1 (CR-I)、衰變加速因子(DAF) X5a 受體、胞間黏附分子-1 (ICAM-I)、ICAM-3和本領域普通技術人員應當意識到的其他分子的 抗體。在一些實施方案中，吞噬細胞被與Fc受體、趨化因子受體、⑶40、⑶80、⑶86、MHC II 類分子、CD69、ADAM8、CD 14、CD163、CD33、CD63、CD68、CD74、CHITU CHST10, CSF 1R、 DPP4、FABP4、FCGR1A、ICAM2、IL1R2、ITGA1、ITGA2、S100A8、TNFRSF8 和本領域普通技術人員 應當意識到的相互作用的其他分子所靶向。在另一個實施方案中，靶向部分可以是任何合適的部分，例如適配子、天然存在的 或人工配體，或工程化的結合蛋白可包含如本文所述的靶向部分，如本文所述的它們與葡 聚糖的物理締合可通過任何本領域已知手段容易地實現，包括例如下文中所描述的方法， 或其變型，以適合所選擇的靶向部分的特定性質。在一個實施方案中，靶向部分增強了向細胞的附著，或在另一個實施方案中，增強 了向細胞的歸巢(homing)。在一個實施方案中，在提供能源後靶向部分增強了附著。在一 個實施方案中，靶向部分通過化學交聯基團被化學附著於葡聚糖，或在另一個實施方案中， 與葡聚糖形成穩定的締合，或在另一個實施方案中，與葡聚糖形成締合，該締合在環境條件 例如鹽濃度或PH改變後解離。在一個實施方案中，靶向部分可以是特異性識別目標分子例如蛋白或核酸的抗 體。在另一個實施方案中，抗體可特異性識別附著於目標分子的報導分子。在另一個實施方案中，靶向部分可以是抗體片段、蛋白A、蛋白G、生物素、抗生物素蛋白、鏈黴抗生物素蛋 白、金屬離子螯合物、酶輔因子或核酸。在另一個實施方案中，靶向部分可以是結合目標關 聯配體的受體，或可與目標細胞或分子締合，或在另一個實施方案中，靶向部分可以是配 體，其用於通過於其關聯受體的相互作用附著至細胞。可通過任何本領域已知手段實現將靶向部分連接至本發明的葡聚糖，例如本文實 施例7中所進一步描述的，或例如美國專利號5，965，714，或美國專利公開號20070141084， 或^^加一⑵。!！等，ProcNatl Acad Sci U S A. 2003 Jul 22 ；100(15) :8945-50, Lees 等， Vaccine. 1996Feb ； 14(3) :190-8中所描述，或通過使用如本文所述的交聯劑，或本領域普 通技術人員應當意識到的其他方法。在一些實施方案中，使用糖基化抗體，並將B-l，6_葡聚糖連接於抗體的糖基化殘 基，或在另一個實施方案中，如本領域普通技術人員應當理解的，鍵合可以是多個的，且涉 及在抗體或靶向部分上的多個位點。在一些實施方案中，連接葡聚糖至靶向部分引起增強的吞噬作用和/或靶細胞或 生物體的殺傷作用。在一些實施方案中，這樣的裂解可由任何專職抗原呈遞細胞或殺傷細 胞，例如，舉例來說，嗜中性白細胞、巨噬細胞、樹突細胞、自然殺傷細胞、細胞毒性T淋巴細 胞等介導。在一些實施方案中，任何0-乙醯化葡聚糖可與靶向部分物理締合，並包含本發明 的葡聚糖或組合物，代表其的一個實施方案。使用這樣的0-乙醯化葡聚糖，例如已被0-乙 醯化的-1，3-葡聚糖來調節免疫應答、治療癌症或癌前病變、促進感染消退或任何本文所 述的方法應被認為是本發明的一部分。在一些實施方案中，本發明的試劑盒中的以及本發明的方法使用的任何一種葡聚 糖製品可連接於標記試劑，使得該葡聚糖的檢測容易實現。在一個實施方案中，術語「標記 試劑」指使得與標記試劑相接觸的可容易檢測的分子。在一個實施方案中，標記試劑是標記 多肽。標記多肽可包含例如綠色螢光蛋白(GFP)、DS-RecK紅色螢光蛋白)、分泌型鹼性磷 酸酶(SEAP)、半乳糖苷酶、螢光素酶或本領域普通技術人員已知的任何數量的其他報 告蛋白。在另一個實施方案中，標記試劑可綴合於另一種提供針對要被標記的靶標更強特 異性的分子。舉例來說，以及在一個實施方案中，標記試劑是綴合於特異性結合給定的靶標 分子的抗體的螢光染料，或在另一個實施方案中，其特異性結合另一種抗體，該另一種抗體 結合靶標分子，例如為本領域普通技術人員所容易意識到的靶標分子。在一些實施方案中， 如本領域普通技術人員所應當意識到的，連接抗體的葡聚糖將螢光染料參入抗體中。在一個實施方案中，本發明提供了 葡聚糖和佐劑的組合使用，或包含葡 聚糖和佐劑的組合物，或在使用基於葡聚糖的佐劑時，將第二佐劑與葡聚糖一起 施用。在一些實施方案中，佐劑可包括但不限於(A)鋁化合物(如氫氧化鋁、磷酸鋁、羥基 磷酸鋁、羥基氧化鋁、正磷酸鋁、硫酸鋁等[如參見參考文獻96的第8和9章])，或不同的 鋁化合物的混合物，這些化合物採用任何合適的形式(如凝膠、晶體、無定形物等)，並且優 選是吸附的； "？日日巧^角鯊烯…；^吐溫80和0. 5%斯盤85，使用微型流化床配製成 亞微米顆粒)；(C)脂質體；0))130)1^，其可不含有另外的去垢劑；伍)34 ，包含10%角鯊 烷、0. 4%吐溫80、5%普流尼克-嵌段共聚物L121和thr_MDP，微流化成亞微米乳劑或渦 旋產生較大粒度的乳劑；(F) Ribi 佐劑體系(RAS)，(Ribi Immunochem)，包含2%角鯊烯、0.2%吐溫80和選自單磷醯脂質A (MPL)、海藻糖二黴菌酸酯(TDM)和細胞壁骨架(CWS)的 一種或更多種細菌細胞壁成分，優選MPL+CWS (Detox ) ； (G)皂苷佐劑，例如QuilA或QS21， 也稱為Stimulon ； (H)殼聚糖；⑴完全弗氏佐劑(CFA)和不完全弗氏佐劑(IFA) ； (J)細 胞因子，例如白介素(如IL-1、IL-2、IL-4、IL_5、IL_6、IL_7、IL-12等)、幹擾素(如幹擾 素-Y )、巨噬細胞集落刺激因子、腫瘤壞死因子等；⑷單磷醯脂質A(MPL)或3-0-去乙醯 MPL (3dMPL) ] ； (L) 3dMPL與例如QS21和/或水包油乳劑的組合；(M)包含CpG基序的寡核苷 酸，即包含至少一個CG 二核苷酸，其具有5-甲基胞嘧啶任選地置換胞嘧啶；(N)聚氧乙烯 醚或聚氧乙烯酯；(0)聚氧乙烯山梨醇酯表面活性劑與辛苯昔醇組合或聚氧乙烯烷基醚或 酯表面活性劑與至少一種另外的非離子型表面活性劑例如辛苯昔醇組合；(P)免疫刺激的 寡核苷酸(如CpG寡核苷酸)和皂苷；(Q)免疫刺激劑和金屬鹽顆粒；(R)皂苷和水包油乳 劑；(S)皂苷(如QS21)+3dMPL+IL12(任選地+甾醇)；(T)大腸桿菌不耐熱腸毒素(「LT」)， 或其脫毒突變體，例如K63或R72突變體；(U)霍亂毒素(「CT」)，或白喉毒素(「DT」)或 兩者之一的脫毒突變體；(V)雙鏈RNA ； (W)單磷醯脂質A模擬物，例如氨基烷基氨基葡糖苷 磷酸鹽衍生物，如RC-5^] ； (X)聚膦腈(PCPP)；或(Y)生物粘附劑，例如酯化的透明質酸微 球或黏膜粘著劑，例如聚(丙烯酸)、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、多糖和羧甲基纖維素的交 聯衍生物。胞壁醯肽包括N-乙醯基-胞壁醯基-L-蘇氨醯基-D-異穀氨醯胺(thr-MDP)、 N-乙醯基-正胞壁醯基-L-丙氨醯基-D-異穀氨醯胺(nor-MDP)、N_乙醯基胞壁醯基-L-丙 氨醯基-D-異穀氨醯胺基-L-丙氨酸-2-(1' -2'-棕櫚醯基-sn-丙三基-3-羥基磷醯 氧基)ZKMTP-PE)等。在另一個實施方案中，本發明提供了組合使用β -葡聚糖、試劑和抗原，所述試劑 使抗體生產傾向於產生與免疫球蛋白G(IgG)4相比，相對更多量的免疫球蛋白G(IgG) 1、2 或3。在多個實施方案中，抗原可以是任何被受試者免疫系統識別為外源的分子。例如， 抗原可以是任何外源分子，例如蛋白(包括修飾的蛋白例如糖蛋白、黏蛋白等)、核酸、碳水 化合物、蛋白聚糖、脂質、黏蛋白分子或其他類似分子，包括它們的任意組合。在另一個實施 方案中，抗原可以是細胞或其一部分，例如細胞表面分子。在另一個實施方案中，抗原可來 源於傳染性病毒、細菌、真菌、或其他生物體(如原生生物)、或它們的一部分。在一個實施 方案中，這些傳染性生物體可以是有活性的或無活性的，在另一個實施方案中，其可例如通 過暴露於熱或除去生物體複製所必需的至少一種蛋白或基因得以實現。在一個實施方案 中，抗原性蛋白或肽是分離出的，或在另一個實施方案中，是合成的。在一個實施方案中，術語「抗原，，指在暴露於或與之接觸後，刺激或增強免疫應答 的物質，例如蛋白、肽或任何片段。在一個實施方案中，抗原被受試者免疫系統詮釋為「危 險」信號，由於該信號而引發或增強免疫應答。在另一個實施方案中，抗原代表了宿主區分 「非自身」分子存在的能力。在一個實施方案中，抗原來源於病原體、受感染細胞、贅生性細胞或前腫瘤細胞。 在另一個實施方案中，抗原是自身抗原，或引發或增強自身免疫應答的分子。在一個實施方案中，抗原來源於寄生物，其在它的生活周期的至少某些階段期間 存在於細胞內。期望的細胞內寄生蟲包括例如原生動物。感染細胞的原生動物包括瘧(Plasmodium falciparum)、間日瘧原蟲(P. Vivax)、卵形瘧原蟲 (P. ovale)和三日瘧原蟲(P.malariae))、錐蟲屬、弓形蟲屬、利什曼原蟲屬、血吸蟲屬和隱 孢子蟲屬的寄生蟲。在另一個實施方案中，寄生物在它的生活周期的至少一部分期間存在 於胞外。實例包括線蟲、吸蟲(肝蛭)和絛蟲。在一些實施方案中，抗原來源於所述原生動 物感染的副產物，例如血吸蟲屬的蟲卵抗原、弓形蟲屬包囊專一性表達的抗原以及本領域 普通技術人員應當意識到的其他副產物。在一個實施方案中，抗原來源於患病和/或異常細胞。期望的患病或異常細胞包 括受感染細胞、贅生性細胞、前腫瘤細胞、炎性病灶、良性腫瘤或息肉、咖啡牛乳色斑、黏膜 白斑、其他皮膚痣、自身反應性細胞，包括T和/或NK細胞等。在一個實施方案中，抗原來源於傳染性病毒，尤其包括逆轉錄病毒科(如人免疫 缺陷病毒，例如HIV-I (也稱為HTLV-III, LAV或HTLV-III/LAV,或HIV-III ；和其他分離 株，例如HIV-LP)；細小RNA病毒科(如脊髓灰質炎病毒、A型肝炎病毒；腸病毒、人柯薩奇 病毒、鼻病毒、艾柯病毒)；杯狀病毒科(如引起胃腸炎的毒株)；披膜病毒科(如馬腦炎病 毒、風疹病毒)；黃病毒科(如登革熱病毒、腦炎病毒、黃熱病毒)；冠狀病毒科(如冠狀病 毒)；彈狀病毒科(如水泡性口膜炎病毒、狂犬病病毒)；纖絲病毒科(如伊波拉病毒)；副 粘液病毒科(如副流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞病毒)；正粘病毒科(如流 感病毒)；布尼亞病毒科(如漢坦病毒、布尼亞病毒、白蛉病毒和奈洛比病毒)；沙粒病毒科 (出血熱病毒)；呼腸孤病毒科(如呼腸孤病毒、環狀病毒和輪狀病毒)；雙RNA病毒科；嗜 肝DNA病毒科(B型肝炎病毒)；細小病毒科(細小病毒)；乳多空病毒科(乳頭瘤病毒、多 瘤病毒)；腺病毒科(大多數的腺病毒)；皰疹病毒科(單純皰疹病毒(HSV) 1和2、水痘帶 狀皰疹病毒、巨細胞病毒(CMV)、皰疹病毒)；痘病毒科(天花病毒、牛痘病毒、痘病毒)；和 虹膜病毒科(如非洲豬瘟病毒)；以及未分類的病毒物(如海綿樣腦病的病原物、丁型肝炎 的病原物(被認為是B型肝炎病毒的缺陷型衛星產物)、非甲非B型肝炎的病原物(第1類 =體內傳染；第2類=胃腸外傳染(即C型肝炎)；諾瓦克及相關病毒和星狀病毒)。在一個實施方案中，抗原來源於細菌，尤其包括幽門螺桿菌(HeliccAacter pylori) > 伯氏疏螺方 體(Borellia burgdorferi) > 嗜月市軍團菌(Legionella pneumophilia)、分枝桿菌屬(如結核分枝桿菌(M. tuberculosis)、鳥分枝桿菌 (M. avium)、細胞內分枝桿菌(M. intracellulare)、堪薩斯分枝桿菌(M. kansaii)、戈登 分枝桿菌(M. gordonae)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、淋病奈瑟氏菌 (Neisseria gonorrhoeae)、奈瑟氏腦膜炎菌(Neisseria meningitides)、單核細胞增 多性李司戎氏菌(Listeria monocytogenes)、酉良月農鏈球菌(Streptococcus pyogenes (A 組鏈球菌))、無乳鏈球菌(Str印tococcus agalactiae 組鏈球菌))、鏈球菌屬(綠 色組))、糞鏈球菌(Streptococcus faecalis)、牛鏈球菌(Streptococcus bovis)、 鏈球菌屬(厭氧組)、肺炎鏈球菌(Str印tococcus pneumoniae)、致病性彎曲桿菌 屬、腸球菌屬、衣原體屬、流感嗜血桿菌(Haemophi Ius influenzae)、炭疽芽孢桿菌 (Bacillus antracis)、白喉lif (corynebacterium diphtheriae)、_|f Iif屬、；
菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)、梭狀芽 包桿菌(Clostridium perfringers)、破傷 風桿菌(Clostridium tetani)、產氣腸桿菌(Enterobacter aerogenes)、月市炎克雷伯菌 (Klebsiella pneumoniae)、多殺巴斯德菌(Pasturella multocida)、擬桿菌屬、具核梭桿菌(Fusobacterium nucleatum)、念珠狀鏈桿菌(Streptobaci 1 Ius moniliformis)、蒼白密 螺旋體(Tr印onema pallidium)、細弱密螺旋體(Ti^ponema pertenue)、鉤端螺旋體屬、衣 氏方文線菌(Actinomyces israelii)禾口土拉熱弗朗西絲菌(Francisella tularensis)。
在一個實施方案中，抗原來源於真菌，尤其包括犁頭黴屬如傘枝犁頭黴 (Absidia corymbifera)，阿耶羅菌屬如莢膜阿耶羅菌(Ajellomyces capsulatus)、皮 炎組織胞漿菌(Ajellomyces dermatitidis)，節皮菌屬如苯黑末節皮菌(Arthroderma benhamiae)、粉節皮菌(Arthroderma fulvum)、石膏樣節皮菌(Arthroderma gypseum)、 內彎節皮菌(Arthroderma incurvatum)、太田節皮菌(Arthroderma otae)、萬博節皮 菌(Arthroderma vanbreuseghemii)，麴黴屬如黃麴黴(Aspergillus flavus)、煙曲 黴(Aspergillus fumigatus)、黑麴黴(Aspergillus niger)，芽生菌屬如皮炎芽生 菌(Blastomyces dermatitidis)，念珠菌屬如白色念珠菌(Candida albicans)、光滑 念珠菌(Candida glabrata)、吉利蒙念珠菌(Candida guilliermondii)、克魯斯念珠 |if (Candida krusei)、 ^Ρ 骨(Candida parapsilosis) > ^ ] ^ lif (Candida tropicalis)、菌膜假絲酵母(Candida pelliculosa)，支孢瓶黴屬(Cladophialophora) 如 Cladophialophora carrionii,球抱子菌屬如粗球抱子菌(Coccidioides immitis),隱 球菌屬如新型隱球菌(Cryptococcus neoformans)，小克銀黴屬，表皮癬菌屬如絮狀麥皮 痛菌(Epidermophyton floccosum)，夕卜瓶霄屬如皮炎夕卜瓶霄(Exophiala dermatitidis), 絲狀黑粉菌屬如新型線黑粉菌(Filobasidiella neoformans)，產色芽生菌屬如裴 氏著色黴(Fonsecaea pedrosoi),鐮刀菌屬如爺病鐮刀菌(Fusarium solani),地黴 屬如白地黴(Geotrichum candidum)，組織漿菌屬如莢膜組織胞漿菌(Histoplasma capsulatum)，何德霄屬(Hortaea)如威尼克何德霄(Hortaea werneckii)，伊薩酵母 屬如東方伊薩酵母(Issatschenkia orientalis)，馬杜拉分支菌屬如灰馬杜拉分支菌 (Madurella grisae)，馬拉色氏黴菌屬如糠秕馬拉色氏黴菌(Malassezia furfur)、球 形馬拉色菌(Malassezia globosa)、Malassezia obtuse、厚皮病馬拉色菌(Malassezia pachydermatis) > PSftjlJ^iifelii (Malassezia restricta) > Malassezia slooffiae>^f$[i| 馬拉色菌(Malassezia sympodialis),小孢黴屬如犬小孢黴(Microsporum canis)、黃褐 色小孢黴(Microsporum fulvum)、石膏樣小孢黴(Microsporum gypseum),毛黴屬如卷枝 毛霄菌(Mucor circinelloides),叢赤殼屬如Nectria haematococca,擬青霄屬如多變 擬青黴(Paecilomyces variotii)，副球孢子菌屬如巴西副球孢子菌(Paracoccidioides brasiliensis)，青黴屬如馬爾尼菲青黴(Penicillium marneffei)，畢赤酵母屬如異常畢 赤酵母(Pichia anomala)、季也蒙畢赤酵母(Pichia guilliermondii)，肺囊蟲屬如卡氏 肺囊蟲(Pneumocystis carinii)，假黴樣真菌屬如波氏假黴樣真菌(I^seudallescheria boydii)，根黴屬如米根黴(Rhizopus oryzae)，紅酵母屬如深紅類酵母菌(Rhodotorula rubra)，絲孢菌屬如尖端賽多孢子菌(Scedosporium apiospermum)，裂褶菌屬如裂褶菌 (Schizophyllum commune)，孢子絲菌屬如申氏孢子絲菌(Sporothrix schenckii)，毛癬菌 屬如鬚毛痛菌(Trichophyton mentagrophytes)、紅色毛痛菌(Trichophyton rubrum)、撫 狀毛癬菌(Trichophyton verrucosum)、紫色毛癬菌(Trichophytonviolaceum), ^ii^M 屬如阿氏毛孢子菌(Trichosporon asahii)、皮膚毛孢子菌(Trichosporon cutaneum)、墨 汁毛孢子菌(Trichosporon inkin)、粘性毛孢子菌(Trichosporon mucoides)等。
在一個實施方案中，病原真菌感染人宿主。在一個實施方案中，病原真菌感染非人 動物。在一些實施方案中，本發明的組合物和方法容許組合使用相同來源的多種抗原， 相同類別生物體的多種抗原，不同類別生物體的多種抗原，或它們的任意組合。在另一個實施方案中，本發明提供了對受試者的感染進行治療、延遲感染的進展、 延長感染的潛伏狀態或降低感染的發病率或嚴重程度的方法，所述方法包括給予所述受試 者包含純化的β 1-6葡聚糖的組合物。在本發明的某些實施方案中，該感染是歸因於病原 真菌的感染。在本發明的某些實施方案中，該感染是歸因於病原細菌、病毒或寄生蟲的感 染。在本發明的某些實施方案中，除本發明的組合物之外，受試者接受任何本領域已知對於 治療或預防受試者處於感染的風險中或受試者所遭受的感染有用的藥劑。因此，在一個實 施方案中，該方法包括給予受試者(i)包含β 1-6葡聚糖的本發明的組合物；和(ii)已知 的抗真菌劑、抗細菌劑、抗病毒劑或抗寄生蟲藥。該組合物和抗真菌劑可在單一組合物中給 予或分別給予。在一些實施方案中，這樣的分別給予可間隔最多M或最多48小時，以及在 一些實施方案中，間隔小於1小時。該組合物可適合於在人用、獸醫用或兩者均適用。在一些實施方案中，使用本發明的.葡聚糖和任選的試劑可刺激、增強或促進了 補體固定，其中所述試劑使抗體生產傾向於產生與免疫球蛋白G(IgG)4相比，相對更多量 的免疫球蛋白G(IgG) 1、2或3。在一些實施方案中，該效應是抗體-介導的。根據該方面，以及在一些實施方案中，使用本發明的.葡聚糖以及任選的試劑可 刺激、增強或促進了涉及補體固定的免疫應答，在受試者中產生治療作用，其中所述試劑使 抗體生產傾向於產生與免疫球蛋白G(IgG)4相比，相對更多量的免疫球蛋白G(IgG) 1、2或 3。在一些實施方案中，這樣的應用可涉及治療受試者的敗血症。在一些實施方案中，這樣 的應用可涉及治療受試者的恰加斯氏病、肺病原體、或寄生蟲或蠕蟲。在一些實施方案中， 這樣的應用涉及治療病毒感染，例如HSV。在一些實施方案中，根據本發明該方面的方法可進一步包括給予可促進補體級聯 確立的試劑。根據本發明該方面，在一些實施方案中，該方法可進一步包括給予特異性識別 受試者所感染的病原物的抗體。在另一個實施方案中，本發明刺激免疫應答的方法涉及刺激抗癌應答。在一個實 施方案中，該方法進一步包括將受試者暴露於抗原，所述抗原是腫瘤相關抗原。在一個實施 方案中，受試者具有增生性或瘤前病變。在另一個實施方案中，受試者患有癌症。在一個實施方案中，本發明的方法和組合物可治療或預防與下列癌症抗原相 關的癌症。KS 1/4 泛癌抗原(Perez 和 Walker，1990，J. Immunol. 142 :32-37 ；Bumal, 1988，Hybridoma 7(4) :407-415)，卵巢癌抗原(CA125) (Yu 等，1991，Cancer Res. 51(2) 48-475)，前列腺酸性磷酸鹽(Tailor 等，1990，Nucl. Acids Res. 18(1) :49 )，前列腺特 異性抗原(Henttu 禾口 Vihko，1989，Biochem. Biophys. Res. Comm. 10(2) :903-910 ；Israeli 等，1993，Cancer Res. 53 :227-230)，黑素瘤-相關抗原 p97 (Estin 等，1989，J. Natl. Cancer Instit. 81(6) :445-44)，黑素瘤抗原 gp75 (Vi jayasardahl 等，1990，J. Exp. Med. 171 (4) :1375-1380)，高分子量黑素瘤抗原(HMW-MAA) (Natali 等，1987，Cancer 59 55-3 ；Mittelman 等，1990，J. Clin. Invest. 86 :2136-2144)),前列腺特異性膜抗原，癌 胚抗原(CEA) (Foon 等，1994，Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 13 :294)，多態性上皮黏蛋白抗原，人乳脂肪球抗原，結腸直腸腫瘤相關抗原例如CEA、TAG-72aokata等，1992，Cancer Res. 52 :3402-3408)、CO 17-1A (Ragnhammar 等，1993，Int. J. Cancer 53:751-758)； GICA 19-9 (HerIyn 等，1982，J. Clin. Immunol. 2 :135)、CTA-I 和 LEA,伯基特氏淋巴瘤抗 原-38. 13、CD19(Ghetie 等，1994，Blood 83 :1329-1336)，人 B-淋巴瘤抗原-CD20 (Reff 等，1994，Blood 83 :435-445)，CD33 (Sgouros 等，1993，J. Nucl. Med. 34 :422-430)，黑素 瘤特異性抗原例如神經節苷脂GD2(&ileh等，1993，J. Immunol.，151，3390-3398)、神經 節苷脂 GD3 (Shitara 等，1993，Cancer Immunol. Immunother. 36 :373-380)、神經節苷脂 GM2 (Livingston 等，1994，J. Clin. Oncol. 12 1036-1044)、神經節苷脂 GM3 (Hoon 等，1993， Cancer Res. 53 :5M4_5250)，腫瘤特異性遷移型細胞表面抗原(TSTA)例如病毒誘導的腫 瘤抗原包括DNA腫瘤病毒的T-抗原和RNA腫瘤病毒的包膜抗原，癌胚抗原-甲胎蛋白例 如結腸的CEA、膀胱腫瘤癌胚抗原(Hellstrom等，1985，Cancer. Res. 45 :2210-2188)，分化 抗原例如人肺癌抗原 L6、L20 (Hellstrom 等，1986，Cancer Res. 46 :3917-3923)，纖維肉瘤 抗原，人白血病 T 細胞抗原-Gp37 (Bhattacharya-Chatteriee 等，1988，J. of Immun. 141 1398-1403)，擬糖蛋白，神經鞘脂類，乳腺癌抗原例如EGFR(表皮生長因子受體)，HER2抗 原(P185HER2)，多態性上皮黏蛋白(PEM) (Hilkens 等，1992，Trends in Bio. Chem. Sci. 17 359)，惡性人淋巴細胞抗原-AP0-1 (Bernhard 等，1989，Science 245 =301-304)，分化抗原 (Feizi,1985, Nature 314 :53-57)例如見於胎兒紅細胞和原內胚層中的I抗原、見於胃腺 癌中的I (Ma)、見於乳腺上皮中的M18和M39、見於骨髓細胞中的SSEA-I、見於結直腸癌中 的 VEP8、VEP9、Myl、VIM-D5 和 D156-22、TRA-1-85 (血型 H)、見於結腸腺癌中的 C14、見於 肺腺癌中的F3、見於胃癌中的AH6、Y半抗原、見於胚胎性癌細胞中的Ley、TL5 (血型A)、見 於A431細胞中的EGF受體、見於胰腺癌中的El系列(血型B)、見於胚胎性癌細胞、胃腺癌 中的FC 10. 2、見於腺癌中的C0-514(血型Lea)、見於腺癌中的NS-IO、C0-43 (血型Leb)、 G49、見於結腸腺癌中的EGF受體(血型ALeb/Ley)、見於結腸癌中的19. 9、胃癌黏蛋白、見 於骨髓細胞的T5A7、見於黑素瘤中的R24、4. 2、GD3、Dl. 1、OFA-U GM2、0FA-2、GD2、見於胚 胎性癌細胞中的Ml :22:25 8和見於4-8細胞將階段胚胎中的SSEA-3、SSEA-4。在另一個 實施方案中，抗原是來自皮膚T細胞淋巴瘤的T細胞受體衍生肽(參見Edelson，1998, The Cancer Journal 4 62)。在另一個實施方案中，抗原來源於HER2/neU或絨毛膜胚胎抗原(CEA)，用於阻抑/ 抑制表達這些抗原的乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、結腸癌、前列腺癌和肺癌。類似地，黏蛋白型 抗原例如MUC-I可用於抗多種癌症；MAGE、BAGE和Mart-I抗原可用於抗黑素瘤。在一個實 施方案中，對於具體癌患者可修改該方法，使得抗原性肽或蛋白的選擇基於該患者癌細胞 中所表達的抗原，在其他實施方案中，這可通過外科活檢或血細胞採樣然後進行免疫組織 化學來預先確定。在另一個實施方案中，本發明提供了 葡聚糖和試劑以及任選的另外的免疫調 節化合物的組合使用，其中所述試劑使抗體生產傾向於產生與免疫球蛋白G(IgG)4相比， 相對更多量的免疫球蛋白G(IgG) 1、2或3。有用的試劑的實例包括細胞因子、趨化因子、補體成分、免疫系統輔助和粘著分 子以及它們具有人或非人動物特異性的受體。有用的實例包括但不限於GM-CSF、IL-2、 IL-12、0X40、0X40L(gp34)、淋巴細胞趨化蛋白、CD40和CD40L。進一步有用的實例包括但不限於白介素例如白介素1-15，幹擾素α、β或Y，腫瘤壞死因子，粒細胞-巨噬細胞集 落刺激因子(GM-CSF)，巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)，粒細胞集落刺激因子(G-CSF)，趨 化因子例如嗜中性白細胞活化蛋白(NAP)，巨噬細胞趨化及活化因子(MCAF)，RANTES，巨噬 細胞炎性肽MIP-Ia和ΜΙΡ-lb，補體成分和它們的受體或輔助分子例如B7. 1、B7. 2、TRAP、 ICAM-1、2或3和細胞因子受體。0X40和0X40-配體(gp34)是進一步有用的免疫調控蛋白 的實例。應當理解的是，根據本發明的方法，可使用能夠刺激免疫應答產生傾向性以及參與 該傾向性過程、或促進該傾向性應答的激活、在給定的免疫應答中與如本文所述的葡聚糖 起協同作用的任何試劑，並且應被認為是本發明的一個實施方案。在一個實施方案中，根據本發明的應用還可包含給予另外的治療劑，其可包含抗 炎劑，例如倍他米松、強的松龍、吡羅昔康、阿司匹林、氟比洛芬和(+)-N-{4-[3-(4-氟代苯 氧基)苯氧基]-2_環戊烯-1-基} -N-羥基脲；抗病毒劑，例如阿昔洛韋、奈非那韋或病 毒唑；抗生素例如氨苄西林和青黴素G或屬於青黴素家族的抗生素、頭孢菌素類、氨基糖苷 類、大環內酯類、碳青黴烯和青黴烯、單環β -內醯胺類、β -內醯胺酶抑制劑、四環素類、多 肽類抗生素、氯黴素及衍生物、夫西地酸、林可黴素、新生黴素、壯觀黴素、聚醚離子載體、喹 諾酮類；抗感染劑，例如苯扎氯銨或洗必泰；氨苯碸、氯黴素、新黴素、頭孢克洛、頭孢羥氨 苄、頭孢氨苄、頭孢拉定、紅黴素、克林黴素、林可黴素、阿莫西林、氨苄西林、巴氨西林、羧苄 西林、雙氯西林、環己西林、picloxacillin、海他西林、甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林、青黴 素包括青黴素G和青黴素V、替卡西林、利福平和四環素；抗炎劑，例如二氟尼柳、布洛芬、 吲哚美辛、甲氯胺苯酸鹽、甲芬那酸、萘普生、羥布宗、保泰松、吡羅昔康、舒林酸、託美丁、阿 司匹林和水楊酸鹽類；抗真菌劑，例如兩性黴素B、葡聚糖合成抑制劑例如卡泊芬淨、米卡 芬淨，或阿尼芬淨(LY303366)、益康唑、特康唑、氟康唑、伏立康唑或灰黃黴素；抗原蟲劑例 如甲硝唑；咪唑型抗腫瘤劑例如妥布氯唑；驅腸蟲藥例如噻苯唑或奧芬唑；抗組胺劑，例如 阿司咪唑、左卡巴斯汀、西替利嗪或肉桂苯哌嗪；減充血劑例如假麻黃鹼；抗精神病藥，例 如氟司必林、五氟利多、利培酮或齊拉西酮；抗腫瘤劑，例如鉬化合物(如螺鉬、順鉬和卡 鉬)、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、阿黴素、絲裂黴素、安絲菌素、博來黴素、阿糖胞苷、阿糖腺苷、巰 基聚賴氨酸、長春新鹼、白消安、苯丁酸氮芥、美法侖(如PAM、L-PAM或苯丙氨酸氮芥)、巰 基嘌呤、米託坦、鹽酸丙卡巴胼更生黴素(放線菌素D)、鹽酸柔紅黴素、鹽酸多柔比星、紫 杉醇和其他紫杉烷類、雷帕黴素、手黴素A、TNP-470、普卡黴素(光輝黴素)、氨魯米特、雌 氮芥磷酸鈉、氟他胺、醋酸亮丙瑞林、醋酸甲地孕酮、檸檬酸他莫昔芬、睪內酯、曲洛司坦、安 吖啶(m-AMSA)、天冬醯胺酶(L-天冬醯胺酶)歐文氏菌屬天冬醯胺酶、幹擾素α _2a、幹擾 素α _2b、替尼泊甙(VM16)、硫酸長春鹼(VLB)、硫酸長春新鹼、硫酸博來黴素、羥基脲、丙 卡巴胼和達卡巴嗪；有絲分裂抑制劑例如依託泊甙、秋水仙鹼和長春花生物鹼類，放射性藥 物，例如放射性碘和磷產品，或它們的任意組合。在一些實施方案中，本發明的方法用於治療性或預防性處理處於升高的感染風險 中的動物或人，該風險歸因於即將來臨的外科手術、創傷、疾病、放射或化學治療，或其它對 免疫系統產生有害影響的情況。在一些實施方案中，本發明的方法用於治療具有這樣的疾 病或病症的患者，該疾病或病症導致正常的免疫應答降低或抑制，例如HIV感染(AIDS)，或 用於治療接受免疫抑制治療的患者(如作為移植候選人或已接受移植物的個體，患自身免 疫病的個體等)。在一些實施方案中，本發明的方法用於預引發經歷化學療法或放射療法的患者的免疫應答，或用於預引發處在升高的發展成繼發感染或手術後併發症風險中的患者 的免疫應答，該風險歸因於引起調動機體對感染的正常應答能力降低的疾病、病症或治療。在一個實施方案中，刺激所述免疫應答包含刺激抗原特異性應答。在一些實施方案中，如本文所述的葡聚糖的應用，以及如本文所述的方法可發揮 增強受試者中補體-介導的溶胞作用的功能。在一些實施方案中，這樣的增強作用可涉及 吞噬細胞應答，例如，增強嗜中性白細胞或巨噬細胞、或其他專職抗原呈遞細胞的吞噬作用 和細胞毒性應答。在一些實施方案中，這樣的增強作用可不依賴於吞噬細胞的參與，例如通 過增強攻膜複合體的形成和/或活性。應當理解的是，本發明的方法通過刺激免疫應答從而預防疾病和/或改善疾病和 /或改變疾病進展，應被認為是本發明的一部分。在一些實施方案中，術語「接觸」或「給予」指直接和間接暴露於所示物質。在一些實施方案中，本發明的方法利用了未滅菌的或無菌載體或多種載體來將期 望的試劑給予細胞、組織或生物體，例如適合於個體給予的藥學載體。這樣的載體可包括但 不限於鹽水、緩衝鹽水、葡萄糖、水、甘油以及它們的組合。製劑應當適合給予方式。試劑可以任何有效的、便利的方式給予，包括例如通過血管內(i.v.)、肌內 (i. m.)、鼻內(i. n.)、皮下(s. c.)、經口、直腸、陰道內遞送來給予，或通過葡聚糖/組合物 可被遞送至組織的任何方式(如針或導管)給予。可選地，局部給藥可期望用於插入上皮細 胞中。另一種給予方法是通過吸入或氣溶膠製劑。在一些實施方案中，該方法包括通過將 包含葡聚糖如作為塗層成分的植入物或其他醫學或外科手術裝置植入或導入受試者體內， 給予所述的試劑/葡聚糖。在一個實施方案中，本發明提供了包含β 1-6葡聚糖和/或其他本文描述的試劑 的食品補充劑。在一些實施方案中，食品或食物產品是可被生物體代謝以產生能量並構建組織的 基本上無毒的任何物質。在一些實施方案中，食品或食物產品指旨在被哺乳動物如人所攝 取的具有營養價值的產品。在一些實施方案中，食品或食物產品指被美國食品和藥物管理 局(FDA)所規定的作為食品或食物產品的產品。在一些實施方案中，食品或食物產品是包 裝在容器中的產品，帶有說明該產品是食品或食物產品的標籤。在一些實施方案中，食品 或食物產品是包裝在容器中的產品，帶有提供關於該產品的營養信息例如卡路裡、脂肪或 蛋白質含量，或一種或更多種維生素或礦物質含量的標籤。在一些實施方案中，食品補充 劑(也稱為「飲食補充劑」)是添加到食品或食物產品中的任何物質。在一些實施方案中， 除本發明的葡聚糖之外，食品補充劑包含一種或更多種必需營養素，例如維生素、礦物質和 蛋白。在一些實施方案中，食品補充劑是旨在攝食作為飲食補充劑的任何產品，除了本發明 的葡聚糖之外還可包含一種或更多種維生素、礦物質、草本、植物和其他植物來源的物質； 胺基酸；以及這些物質的濃縮物、代謝物、組分和提取物。在一些實施方案中，食品、食物產 品、食品補充劑，或化妝用組合物並不旨在診斷、治癒、減輕、治療或預防疾病。在一些實施 方案中，食品補充劑提供在如根據現行美國法律和/或FDA指南，標記有說明內含物是食 品或飲食補充劑的容器或其他包裝材料中。在一些實施方案中，食品補充劑或產品包含約 0.01-30w/w%的葡聚糖，並且可另外包含維生素、寡糖、膳食成分、蛋白或它們的組合。在一些實施方案中，成分的比例不固定，或在其他實施方案中，這樣的比例可為每100W/W%約0. 01-30W/W%的範圍。其中包含本發明前述葡聚糖的食品實例是多種食物、飲 料、口香糖、維生素複合物、健康改善食品等。組合物可另外包含一種或多於一種的有機酸，例如檸檬酸、富馬酸、己二酸、乳酸、 蘋果酸；磷酸鹽，例如磷酸鹽、磷酸鈉、硫酸鉀、酸式焦磷酸鹽、多磷酸鹽；天然抗氧化劑，例 如多酚、兒茶素、α -生育酚、迷迭香提取物、維生素C、甘草提取物、殼聚糖、丹寧酸、植酸等。在一些實施方案中，作為本發明的方法的一部分給予的試劑/葡聚糖被配製為局 部用軟膏、洗劑、凝膠或乳膏，其包含例如以0. 0001-50% w/w，如0. 075-20% w/w的量存在 的活性成分(包括在0. -20%範圍內以0. 1 % w/w增力Π，例如0.6% w/w、0.7% w/w等的 活性成分，通常為0. 2-15% w/w以及最通常為0. 5-10% w/w)。在一些實施方案中，當配製 為軟膏時，活性成分可與石蠟或水溶性軟膏基質一起使用。在一些實施方案中，活性成分可 配製為具有水包油乳膏基質的乳膏。在一些實施方案中，乳膏基質的水相可包括例如至少30% w/w的多元醇，即具有 兩個或更多個羥基的醇，例如丙二醇、1，3_ 丁二醇、甘露糖醇、山梨糖醇、甘油和聚乙二醇 (包括PEG 400)以及它們的混合物。在一些實施方案中，局部用製劑可包括可增強活性成 分透皮或穿透其他的作用區域的吸收或滲透的化合物。這樣的皮膚穿透增強劑的實例包括 二甲亞碸和相關類似物。在一些實施方案中，作為本發明的方法的一部分給予的試劑/葡聚糖被配製用作 為滴眼劑，其中活性成分(或多種活性成分)溶解或懸浮於合適的賦形劑(或多種賦形劑) 中，例如活性成分水溶劑，其在接近中性的PH值如約pH 6-8下包含一種或更多種電荷。在 一些實施方案中，活性成分(或多種活性成分)以約0.5-20% w/w、一般約1-10% w/w、通 常約2-5% w/w的濃度存在於這樣的製劑中。在一些實施方案中，作為本發明方法的一部分給予的試劑/葡聚糖被配製為用於 口腔內的局部給予，並可包括在調味基質中含有活性成分的糖錠，其可包含蔗糖和阿拉伯 膠或黃蓍膠；包含在惰性基料例如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯樹膠等中含有活性成分的錠 劑；或包含在合適的液體賦形劑中含有活性成分的漱口水，或本領域普通技術人員應當意 識到的其他形式。用於直腸給藥的製劑可以具有包含例如可可油或水楊酸鹽的合適基質的栓劑存 在。適合於肺內或鼻黏膜給予的製劑具有例如0. 01-500微米(包括在0. 01-500微 米範圍內以0. 1微米或其他值增加的平均粒度，如以0. 05,0. 1,0. 5、1、1. 5,2. 0,2. 5,3. 0、 3. 5,4. 0,4. 5,5. 0、6、7、8、9、10、20、25、30、35、50、75、100 等微米增加)的顆粒尺寸，其通過
經鼻快速吸入或通過口吸入給予以使其到達肺泡囊。合適的微粒化製劑包括活性成分(或 多種活性成分)的水或油溶液或懸浮液。適合於氣溶膠、乾粉或片劑給藥的製劑可根據常 規方法製備並可與其他治療劑如迄今用於治療或預防如本文所述的病毒或其他感染的化 合物一起遞送。這樣的製劑可例如經口、胃腸外(i.v.、i.m.、s. c.)、局部或通過含服途徑給予。適合於陰道給予的製劑可以陰道栓劑、棉球、乳膏、凝膠、糊劑、泡沫或噴霧製劑存 在，除活性成分之外還應意識到包含本領域已知的這樣的賦形劑。
適合於胃腸外給藥的製劑包括含水的以及非水的滅菌注射溶液，其可包含抗氧化 劑、緩衝劑、抑菌劑和使得該製劑與預期受體的血液等滲的溶質；以及含水的和非水的無菌 懸浮液，其可包括懸浮劑和增稠劑。製劑存在於單位劑量或多劑量容器例如密封安瓿和管形瓶中，並可貯藏在冷凍幹 燥的(凍幹的)條件中，僅在立即使用前需要添加無菌液體賦形劑例如注射用水。臨時配 制的注射溶液和懸浮液製備自之前所描述的無菌粉劑、粒劑和片劑類型。單位劑量製劑是 包含活性成分的日劑量或如本文所述的單位日亞劑量，或它們的合適部分分的單位劑量制 劑。應當理解除了上述特別提及的成分之外，本發明的製劑還可包括本領域關於所述 製劑類型常規的其它試劑或賦形劑，例如適合於口服給予的製劑可包括芳香劑。對本領域普通技術人員顯而易見的是，可對本發明的組合物、應用和製品進行各 種修飾及改變而不偏離本發明的精神或範圍。為了給予哺乳動物，特別是人，期望的是在藥物治療的情況下，醫師或其它有資格 的衛生保健提供者可確定治療的實際劑量和持續時間，其應當最適於個體並可依具體個體 的年齡、體重和應答而改變。應當理解的是，在非處方(如「0TC」)用藥、食品、食物產品、食 品補充劑、化妝用和個人護理組合物的情況下，用量可由使用者自行確定，任選地依據標籤 或合適的衛生保健提供者或其他顧問所指導。
實施例材料和方法製備IgG-耗竭的血清用PBS洗滌蛋白G-瓊脂糖凝膠珠子或未處理的瓊脂糖凝膠珠子(對照)三次。將 血清在PBS中稀釋2倍並添加到珠子中。在對接(end-to-end)混合器上，在室溫下溫育珠 子30分鐘。通過離心除去珠子。匯集來自10位未免疫的正常健康供體的血清。SRBC 測定用明膠佛羅那緩衝溶液(Sigma)洗滌SRBC (Accurate chemical and scientific corp.)並用兔抗-SRBC 抗體(Accurate chemical and scientific corp.)在室溫下調理 30分鐘。將IgG-耗竭的血清(來自蛋白G-瓊脂糖凝膠珠子)或含IgG的血清(來自未處 理的瓊脂糖凝膠珠子)添加到SRBC中並在37C下溫育1小時。添加水作為陽性對照(完 全裂解)，以及添加緩衝液作為陰性對照(無裂解)。通過直接顯微鏡肉眼觀察(圖IC a) 或通過0. D. 414nm(其檢測分泌自裂解的SRBC的血紅素)來檢測裂解。製備β -1，6-葡聚糖-包被的珠子和FACS分析(吞噬作用和ROS產生)如Rubin-Bejerano,I.等，Phagocytosis by human neutrophils is stimulated by a unique fungal cell wall component. Cell Host Microbe,2007.2 (1) :p. 55-67 中 所述來進行這些方法。細胞培養在補充有10% FBS 的 McCoy，s 5A 培養基(Gibco)中培養 SK-BR-3 細胞(ATCC)。綴合
在用偏高碘酸鈉(Pierce)氧化後，將Here印tin (Genentech，Inc.)或IgG 1同種 型對照(Sigma)綴合於β-1，6-葡聚糖。嗜中性白細胞新鮮的人血和血清由 Research Blood Components (Brighton, MA)提供。通過使 用Histopaque 1077和Histopaque 1119 (Sigma)，根據MIT人類實驗對象使用委員會(MIT Committee on Use of Humans as Experimental Subjects)核准的實驗方案，從新鮮的人 血中分離出嗜中性白細胞。調理作用在37°C下，將乳腺癌細胞在不含氯化鈣和不含氯化鎂的磷酸鹽緩衝液(PBS) (Gibco)中的40%血清中調理15分鐘。然後用補充有0.(Mmg/ml的蛋白酶抑制劑 AEBSF(Sigma)的冷PBS洗滌細胞3次。抗體結合和C3沉積螢光活化細胞分選(FACS)分析用於檢測結合乳腺癌細胞的Here印tin (通過使用 抗-人IgGl抗體，Sigma)以及C3沉積(通過使用抗-人C3抗體，Accurate Chem.)。細胞毒性通過CytoTox 96 非放射性細胞毒性測定法O^omega)檢測在與β -1,6-葡聚 糖-綴合的或未綴合的Herceptin和血清溫育後對乳腺癌細胞的細胞毒性，其檢測裂解的 細胞所釋放的乳酸脫氫酶。對於嗜中性白細胞依賴的殺傷作用，在測定細胞毒性後，將上述 細胞與嗜中性白細胞在37°C下培養。實施例1β -1，6-葡聚糖刺激的補體激活依賴於抗體為了測試抗體是否涉及β_1，6-葡聚糖引起的補體激活，通過使用蛋白G瓊脂糖 凝膠珠子對在補體激活測定中使用的血清進行抗體耗竭。這種IgG-耗竭的血清用於調理 β-1，6-葡聚糖-包被的珠子。然後，在利用人嗜中性白細胞實施的吞噬作用測定中檢測該 珠子。當用IgG-耗竭的血清調理β-1，6-葡聚糖-包被的珠子時，吞噬作用和ROS產生減 少(圖IA和B)，這表明經典途徑在β-1，6-葡聚糖引起的補體激活中發揮主要作用。IgG-耗竭的血清包含功能性補體因子。在綿羊紅細胞(SRBC)測定中，當使用 IgG-耗竭的血清時，用抗-SRBC抗體調理的SRBC發生裂解(圖1C)。實施例2在正常成人中針對β-1，6-葡聚糖的抗體普遍存在從10位人類供體匯集的血清具有高水平的結合β -1，6-葡聚糖的IgG抗體，其與 低水平的結合-1，3-葡聚糖的IgG形成對比。為了測試在不同的供體中抗-1，6-葡聚 糖抗體普遍存在的程度，我們收集了 12位個體的血清。這些血清用於調理β-1，6-葡聚 糖-或-1，3-葡聚糖-包被的珠子，並將珠子與人嗜中性白細胞溫育。12份血清中的11份 具有匯集血清所具有的高應答，其介導有效的吞入作用和ROS產生(圖2Aa，高應答者的代 表性血清)。一份血清以較低的有效性介導吞入作用和ROS產生(圖2Ab，低應答者)。實施例3β-1，6-葡聚糖通過嗜中性白細胞介導有效的吞噬作用及活性氧類別的產生為了評估哪種IgG同種型介導β -1，6-葡聚糖識別，在暴露於調理的β -1，6-葡聚糖-包被的珠子後，特異性針對IgGl、IgG2、IgG3或IgG4的抗體用於測定具有對β _1， 6-葡聚糖高或低應答的供體血清中IgG同種型的使用。與低應答者相比，高應答者產生更 多的IgGU IgG2和IgG3，而非IgG4(圖3)。特別是，在高應答者中IgG2水平顯著更高，可 能是因為多糖傾向於誘導IgG2同種型的產生。不同的同種型在它們的補體激活性質上有所差別。IgG3具有最高的補體激活性 質，之後是IgGl，IgG2次之，而IgG4無法激活補體。IgG2是經典途徑的弱激活劑，但它能 通過替代途徑來激活補體，並且是經嗜中性白細胞吞噬作用的良好底物。實施例4綴合於Here印tin單克隆抗體的β _1，6_葡聚糖介導針對乳腺癌細胞的補體和嗜 中性白細胞的募集為了評估連接靶向部分的綴合的β-1，6-葡聚糖是否能介導補體和嗜中性白細 胞募集來裂解並殺死為該靶向部分所結合的靶細胞，在乳腺癌細胞(SK-BR-3)體系中測試 連接Here印tin單克隆抗體(mAb)的1，6_葡聚糖。Here印tin mAb針對在SK-BR-3細胞上 過表達的Her-2/neu蛋白。β _1，6_葡聚糖與Here印tin的綴合併不影響其與乳腺癌細胞 的結合(圖4Aa)。此外，該綴合物介導高C3沉積(圖4Ab)，表明β _1，6-葡聚糖保持功能。 綴合於β-1，6-葡聚糖的非特異性同種型對照抗體無法結合乳腺癌細胞(圖4Ba)，並因此 不能介導補體激活和這些細胞上的C3沉積(圖4Bb)。將β -1,6-葡聚糖與未化學綴合的 mAb混合不能介導這些乳腺癌細胞上的C3沉積(圖4C，比較綠色和藍色)。因此，結論是 β-1，6-葡聚糖與靶向部分的綴合是將補體以及由此的嗜中性白細胞引導至靶向細胞所需 的。在用綴合於β-1，6-葡聚糖而非β-1，3-葡聚糖的Here印tin處理的乳腺癌細胞上檢 測到C3沉積(圖4D，比較藍色和綠色)，表明β -1，6-葡聚糖的確比β -1，3-葡聚糖在吸 引補體上更有效。實施例4綴合於Here印tin單克隆抗體的β _1，6_葡聚糖介導經補體和嗜中性白細胞引起 的乳腺癌細胞殺傷作用在乳腺癌細胞上補體蛋白C3的沉積導致這些癌細胞裂解。Here印tin-β -1，6-葡 聚糖綴合物對乳腺癌細胞顯示劑量依賴的細胞毒效應，而未綴合的Here印tin則缺乏任何 效應(圖5A)。此外，Here印tin-i3-l，6-葡聚糖綴合物顯示嗜中性白細胞對癌細胞增加的 殺傷作用(圖5B)。VIII.等同和範圍本領域普通技術人員應當理解可在其中進行形式和細節上的各種改變，而不背離 如所附權利要求所示的本發明的精神和範圍。僅使用常規試驗，本領域普通技術人員就應 當認識到或能確定許多本文所述的本發明的具體實施方案的等同方案。這樣的等同方案意 圖是被包含在權利要求的範圍內。在權利要求書各項中，除非有相反說明或上下文另有明確指出，例如「一」(「a」、 "an")和「其」(「the」)意味著一個或更多個。除非有相反說明或上下文另有明確指出， 如果一個、多於一個或所有的組成員存在於給定產品或方法中、被用於給定產品或方法或 與給定產品或方法相關，則在組成員之間包括「或」或「和/或」的權利要求或說明書被認 為是滿足要求的。本發明包括了其中恰好一個組成員存在於給定產品或方法中、被用於給定產品或方法或與給定產品或方法相關的實施方案。本發明還包括了其中多於一個的組成 員或所有的組成員存在於給定產品或方法中、被用於給定產品或方法或與給定產品或方法 相關的實施方案。此外，除非另有說明或除非本領域普通技術人員明顯地認識到會有矛盾 或不一致出現，應當理解本發明在多個實施方案中提供了所有改變、組合以及排列，其中來 自於一項或更項所列權利要求的一個或更多個限制、要素、分句、描述性術語等被引入另一 項從屬於相同的基礎權利要求的權利要求中。當要素以列表如以馬庫什組形式等存在時， 應當理解該要素的每個亞組均被公開，並且可從該組中除去任何要素(或多個要素)。應當 理解通常在本發明或本發明的方面中被稱為包含特定要素、特徵等時，本發明的某些實施 方案或本發明的方面由這樣的要素、特徵等組成、或基本上由這樣的要素、特徵等組成。為 了簡要起見，那些實施方案沒有在每一種情況下都明確地用這些語言在本文中陳述。為方 便起見，某些權利要求以從屬形式存在，但申請人保留將任何從屬權利要求改寫為獨立權 利要求形式以包括該權利要求所從屬的獨立權利要求以及任何其他權利要求的要素或限 制的權利，並且這樣改寫的權利要求應當被認為在各個方面均等同於該從屬權利要求，而 與其在改寫為獨立權利要求形式之前所存在的形式無關(修改或未修改的)。
權利要求
1.一種用於檢測應答於β-1，6-葡聚糖所分泌的免疫球蛋白G(IgG)抗體的量的方法， 所述方法包括以下步驟在用β-1，6-葡聚糖攻擊前從受試者中獲得第一血樣； 在用β-1，6-葡聚糖攻擊後從受試者中獲得第二血樣；在定量或測量IgG抗體存在的測定法中，提供足夠的時間來產生在溶液中可讀的信號 並檢測所述IgG抗體結合的溶液中的該信號；計算來自所述第一和第二血樣的所述IgG抗體結合的信號，以確定IgG抗體分泌的量， 其中信號間的差異表明應答於β_1，6-葡聚糖所產生的IgG抗體的量；以及將所述差異與陽性和陰性對照進行比較；其中超過閾值的所述差異確定受試者對 β-1,6-葡聚糖的應答性。
2.權利要求1的方法，其中所述抗體包含完整的免疫球蛋白G或其片段。
3.權利要求1的方法，其中所述抗體包含選自IgGl、IgG2、IgG3和IgG4的同種型。
4.權利要求1的方法，其中所述抗體是IgG2。
5.權利要求1的方法，其中所述受試者是人。
6.權利要求1的方法，其中所述β-1，6-葡聚糖分離自地衣、真菌或酵母。
7.權利要求6的方法，其中所述β-1，6-葡聚糖分離自石耳科。
8.權利要求1的方法，其中所述β-1，6-葡聚糖包含0-乙醯化的β-1，6-葡聚糖。
9.權利要求1的方法，其中所述β-1，6-葡聚糖包含化學合成的、基因工程的或0-乙 醯化的β-1，6-葡聚糖。
10.權利要求1的方法，其中通過酶聯免疫測定法、放射免疫測定法、免疫沉澱反應、熒 光免疫測定法、化學發光測定法、免疫印跡測定法、側向流測定法、凝集測定法或基於微粒 的測定法來測定IgG抗體的量。
11.權利要求1的方法，其中所述藥物組合物進-步包含連接靶向部分的β-1，6-葡聚糖。
12.一種用於測量IgG水平的診斷試劑盒，其包含 (i)包含β-1，6-葡聚糖的藥物組合物；( )用於檢測血樣中結合所述藥物組合物的IgG抗體的試劑；(iii)任選地來源於所述藥物組合物陽性和陰性應答者的一系列標準樣品；以及( )使用該藥物組合物來檢測血樣中IgG量的說明書。
13.權利要求12的試劑盒，其中所述β-1，6-葡聚糖處於溶液中或是凍幹的。
14.權利要求12的試劑盒，其中所述β-1，6-葡聚糖固定在基質上。
15.權利要求14的試劑盒，其中所述基質包含選自塑料、玻璃、凝膠、賽璐珞、紙、磁性 樹脂、聚偏二氟乙烯、尼龍、硝酸纖維素、瓊脂糖、膠乳和聚苯乙烯的材料。
16.權利要求14的試劑盒，其中所述基質包含ELISA板、浸漬片、微量滴定板、放射性免 疫測定平板、珠子、瓊脂糖珠、塑料珠、膠乳珠、免疫印跡膜和免疫印跡紙。
17.權利要求14的試劑盒，其中所述試劑綴合於可檢測的標記。
18.權利要求17的試劑盒，其中所述可檢測的標記選自放射性標記、螢光標記、化學發 光標記、生色標記、配體、螢光素、放射性同位素、磷酸酶、生物素、生物素相關化合物、抗生 物素蛋白、抗生物素蛋白相關化合物和過氧化物酶。
19.一種包含連接靶向部分的β-1，6-葡聚糖組合物。
20.權利要求19的組合物，其中所述葡聚糖是0-乙醯化的。
21.權利要求20的組合物，其中所述葡聚糖包含按重量計至少25%的0-乙醯化葡聚糖。
22.權利要求19的組合物，其中所述葡聚糖分離自地衣、酵母、真菌、或是化學合成的， 或是基因工程的。
23.權利要求22的組合物，其中所述葡聚糖分離自石耳科。
24.權利要求19的組合物，其中所述靶向部分選自抗體、抗原、受體配體、表位、多糖、 肽和它們的任意組合。
25.權利要求對的組合物，其中所述靶向部分是抗原；所述抗原選自糖蛋白、黏蛋白、 核酸、碳水化合物、蛋白聚糖、脂類、黏蛋白分子、腫瘤相關抗原和它們的任意組合。
26.權利要求25的組合物，其中所述抗原是腫瘤相關抗原。
27.權利要求沈的組合物，其中所述腫瘤相關抗原存在於選自卵巢癌、黑素瘤、胰腺 癌、結腸直腸癌、伯基特氏淋巴瘤、B-細胞淋巴瘤、肺癌、白血病、乳腺癌、骨髓癌、結腸腺癌、 胃癌、胚胎性癌、前列腺癌和子宮內膜癌的癌細胞上。
28.權利要求27的組合物，其中所述癌細胞是卵巢癌；所述腫瘤相關抗原是CA125或 CD46。
29.權利要求27的組合物，其中所述癌細胞是黑素瘤細胞；所述腫瘤相關抗原選自 p97、gp75、HMW-MAA、神經節苷脂⑶2、神經節苷脂⑶3、MAGE、BAGE, Mart_lR24、神經節苷脂 GM2和神經節苷脂GM3。
30.權利要求27的組合物，其中所述癌細胞是胰腺癌；所述存在的腫瘤相關抗原是 ADMR 或 CRLR0
31.權利要求27的組合物，其中所述癌細胞是癌胚癌；所述腫瘤相關抗原是CEA。
32.權利要求27的組合物，其中所述癌細胞是結腸直腸癌；所述腫瘤相關抗原選自 TAG-72、C017-1A、GICA 19-9, CTA-1、LEA、VEP8、VEP9、Myl、VIM-D5、D156-22、C4BP 和 DAF。
33.權利要求27的組合物，其中所述癌細胞是伯基特氏淋巴瘤；所述腫瘤相關抗原是 抗原-38. 13 或 CD19。
34.權利要求27的組合物，其中所述癌細胞是人B-淋巴瘤；所述腫瘤相關抗原是CD20 或 CD33。
35.權利要求27的組合物，其中所述癌細胞是人肺癌；所述腫瘤相關抗原是L6、L20、 F3 或 CD117。
36.權利要求27的組合物，其中所述癌細胞是人白血病T細胞；所述腫瘤相關抗原是 gp37、擬糖蛋白、神經鞘脂類或AP0-1。
37.權利要求27的組合物，其中所述癌細胞是乳腺癌細胞；所述腫瘤相關抗原是EGFR、 HER/neu、CRl、M18 或 M39。
38.權利要求27的組合物，其中所述癌細胞是骨髓癌；所述腫瘤相關抗原是T5A7或 SSEA-I。
39.權利要求27的組合物，其中所述癌細胞是結腸腺癌細胞；所述腫瘤相關抗原是C 14、C0-514 或 NS-10。
40.權利要求27的組合物，其中所述癌細胞是胃癌細胞；所述腫瘤相關抗原是黏蛋白、 AH6 或 FHL-1。
41.權利要求27的組合物，其中所述癌細胞是胚胎性癌細胞；所述腫瘤相關抗原選自Y 半抗原、Ley、FC10. 2、4. 2、GD3、D1. 1、0FA-1、GM2、0FA-2、GD2 和 Ml:22:25:8。
42.權利要求27的組合物，其中所述癌細胞是前列腺癌；所述腫瘤相關抗原是CD55或MCP。
43.權利要求27的組合物，其中所述癌細胞是子宮內膜癌；所述腫瘤相關抗原是CD35。
44.權利要求M的組合物，其中所述靶向部分是表位；所述表位選自T輔助細胞表位 (TH)、趨化因子表位、嗜中性白細胞表位、MHCII類分子和吞噬細胞表位。
45.權利要求44的組合物，其中所述表位是嗜中性白細胞表位；所述嗜中性白細胞表 位選自L-選擇蛋白、2-整聯蛋白、補體受體l(CR-l)、衰變加速因子(DAF)、Cfe受體、胞間 黏附分子-1 (ICAM-I)和 ICAM-3。
46.權利要求44的組合物，其中所述表位是吞噬細胞表位；所述吞噬細胞表位是Fc受體。
47.權利要求44的組合物，其中所述表位是趨化因子表位；所述趨化因子表位是CD40、 CD80 或 CD86。
48.權利要求44的組合物，其中所述表位是MHCII類分子；所述MHC II類分子選自 CD69、ADAM8、CD14、CD163、CD33、CD63、CD68、CD74、CHITl、CHST10, CSF1R、DPP4、FABP4、 FCGR1A、ICAM2、IL1R2、ITGAU ITGA2、S100A8 和 TNFRSF8。
49.權利要求44的組合物，其中所述TH表位能夠被抗原呈遞細胞(APC)所攝入。
50.權利要求49的組合物，其能夠被APC所加工，由此APC在它的表面呈遞結合MHCII 類分子的TH表位。
51.權利要求對的組合物，其中所述靶向部分是抗體；所述抗體選自單克隆抗體、多克 隆抗體、雙特異性抗體、雙抗體、三鏈抗體、四鏈抗體和微抗體。
52.權利要求51的組合物，其中所述抗體是單克隆抗體。
53.權利要求52的組合物，其中所述單克隆抗體選自阿侖單抗(Campath)、貝伐單抗 (Avastin)、西妥昔單抗(Erbitux)、吉姆單抗(Mylotarg)、替伊莫單抗(Zevalin)、帕尼單 抗(Vectibix)、利妥昔單抗(Rituxan)、託西莫單抗(Bexxar)、曲妥單抗(Here印tin)、在呼 吸道合胞病毒A和F蛋白中的帕利珠單抗(Synagis)以及免疫球蛋白G2。
54.權利要求52的組合物，其中所述單克隆抗體是阿侖單抗(Campath)；所述阿侖單抗 (Campath)靶向存在於胰腺癌細胞上的⑶52。
55.權利要求52的組合物，其中所述單克隆抗體是貝伐單抗(Avastin)；所述貝伐單抗 (Avastin)靶向存在於結腸直腸癌中的VEGF。
56.權利要求52的組合物，其中所述單克隆抗體是西妥昔單抗(Erbitux)；所述西妥昔 單抗(Erbitux)靶向存在於頭頸鱗狀細胞癌或乳腺癌上的EGFR。
57.權利要求52的組合物，其中所述單克隆抗體是吉姆單抗(Mylotarg)；所述吉姆單 抗(Mylotarg)靶向存在於骨髓性白血病上的⑶33。
58.權利要求52的組合物，其中所述單克隆抗體是替伊莫單抗(Zevalin)、帕尼單抗 (Vectibix)、利妥昔單抗(Rituxan)或託西莫單抗(Bexxar ；所述替伊莫單抗(Zevalin)、帕尼單抗(Vectibix)、利妥昔單抗(Rituxan)或託西莫單抗(Bexxar)靶向存在於B-細胞淋 巴瘤上的⑶20。
59.權利要求52的組合物，其中所述單克隆抗體是曲妥單抗(Here印tin)；所述曲妥單 抗(Here印tin)靶向存在於乳腺癌上的HER/neu。
60.權利要求52的組合物，其中所述單克隆抗體是帕利珠單抗(Synagis)；所述帕利珠 單抗(Synagis)靶向存在於呼吸道合胞病毒上的A和F蛋白。
61.權利要求52的組合物，其中所述單克隆抗體是免疫球蛋白G；所述免疫球蛋白G靶 向存在於真菌或細菌性病原體上的β-1，6-葡聚糖。
62.權利要求M的組合物，其中所述抗體是多克隆抗體；所述多克隆抗體結合權利要 求25-50任意一項所述的抗原或表位。
63.權利要求51的組合物，其中所述抗體包含至少一個結合IgG2的抗原結合位點。
64.權利要求63的組合物，其中所述抗體包含針對權利要求25-50任意一項所述的抗 原或表位的第二、第三或第四抗原結合位點。
65.權利要求19的組合物，進一步包含同時或相繼給予佐劑、抗原、免疫調節化合物或 它們的組合。
66.一種藥物製劑，其包含權利要求19的組合物；以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或 賦形劑。
67.一種用於調節受試者免疫應答的方法，其包括給予需要其的受試者治療有效量的 權利要求19-65任意一項所述的組合物。
68.權利要求67的方法，其中所述針對靶標癌細胞、感染劑、病原體或感染部位的免疫 應答被刺激。
69.權利要求68的方法，其中所述免疫應答刺激或增強熱休克蛋白表達。
70.權利要求68的方法，其中所述免疫應答誘導活性氧類別(R0Q產生。
71.權利要求68的方法，其中所述免疫應答增強或刺激嗜中性白細胞吞噬作用或細胞 毒溶胞作用。
72.權利要求68的方法，其中所述免疫應答增強或刺激補體-介導的溶胞作用。
73.權利要求67的方法，其進一步包括同時或相繼給予佐劑、抗原、肽、免疫刺激化合 物、治療劑或它們的組合。
74.權利要求73的方法，其中所述治療劑選自抗炎劑、抗病毒劑、抗生素、抗感染劑、葡 聚糖合成抑制劑、抗原蟲劑、抗組胺劑、減充血劑、抗精神病藥、有絲分裂抑制劑和它們的任 思組合。
75.權利要求74的方法，其中所述治療劑是抗病毒劑；所述抗病毒劑是阿昔洛韋、奈非 那韋或病毒唑。
76.權利要求74的方法，其中所述治療劑是抗生素；所述抗生素選自氨苄西林、青黴 素G、青黴素、頭孢菌素類、氨基糖苷類、大環內酯類、碳青黴烯、青黴烯、單環β -內醯胺類、 β -內醯胺酶抑制劑、四環素類、多肽類抗生素、氯黴素、夫西地酸、林可黴素、新生黴素、壯 觀黴素、聚醚離子載體和喹諾酮類。
77.權利要求74的方法，其中所述治療劑是抗感染劑；所述抗感染劑選自苯扎氯 銨、洗必泰、氨苯碸、氯黴素、新黴素、頭孢克洛、頭孢羥氨苄、頭孢氨苄、頭孢拉定、紅黴素、克林黴素、林可黴素、阿莫西林、氨苄西林、巴氨西林、羧苄西林、雙氯西林、環己西林、 picloxacillin、海他西林、甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林、青黴素、替卡西林、利福平、四環 素、二氟尼柳、布洛芬、噴哚美辛、甲氯胺苯酸鹽、甲芬那酸、萘普生、羥布宗、保泰松、吡羅昔 康、舒林酸、託美丁、阿司匹林、水楊酸鹽類和兩性黴素B。
78.權利要求74的方法，其中所述治療劑是葡聚糖合成抑制劑；所述葡聚糖合成抑制 劑選自卡泊芬淨、米卡芬淨、阿尼芬淨(LY303366)、益康唑、特康唑、氟康唑、伏立康唑和灰 黃黴素。
79.權利要求74的方法，其中所述治療劑是抗原蟲劑；所述抗原蟲劑是甲硝唑、妥布氯 唑、噻苯唑或奧芬唑。
80.權利要求74的方法，其中所述治療劑是抗組胺劑；所述抗組胺劑是阿司咪唑、左卡 巴斯汀、西替利嗪或肉桂苯哌嗪。
81.權利要求74的方法，其中所述治療劑是減充血劑；所述減充血劑是假麻黃鹼。
82.權利要求74的方法，其中所述治療劑是抗精神病藥；所述抗精神病藥是氟司必林、 五氟利多、利培酮或齊拉西酮。
83.權利要求74的方法，其中所述治療劑是有絲分裂抑制劑；所述有絲分裂抑制劑是 依託泊甙、秋水仙鹼或長春花生物鹼類。
84.權利要求67的方法，其中所述免疫應答被下調或消除。
85.權利要求84的方法，其中所述免疫應答被下調或消除幹擾素、白介素、腫瘤壞死 因子、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)、粒細胞 集落刺激因子(G-CSF)、嗜中性白細胞活化蛋白(NAP)、巨噬細胞趨化及活化因子(MCAF)、 RANTES或巨噬細胞炎性肽的活化。
86.權利要求67的方法，其進一步包括同時或相繼給予免疫抑制劑。
87.一種對受試者的癌症進行治療、延遲癌症的進展、延長癌症的緩解或降低癌症的發 病率或嚴重程度的方法，其包括給予需要其的受試者治療有效量的權利要求19-65任意一 項所述的組合物。
88.權利要求87的方法，所述針對靶標癌細胞、增生性病變或瘤前病變的免疫應答被 刺激。
89.權利要求88的方法，其中所述免疫應答增強嗜中性白細胞吞噬作用、刺激細胞毒 溶胞作用、誘導ROS產生、誘導熱休克蛋白的表達或增強補體-介導的溶胞作用。
90.權利要求87的方法，其進一步包括同時或相繼給予化學治療劑、細胞毒劑、抗腫瘤 劑或它們的組合。
91.權利要求90的方法，其中所述細胞毒劑選自ErbB受體抑制劑、VEGF受體抑制劑、 酪氨酸激酶抑制劑、蛋白激酶A抑制劑、抗血管生成劑、抗激素劑和細胞因子。
92.權利要求90的方法，其中所述化學治療劑選自順鉬、多柔比星、吉西他濱、多西他 賽、紫杉醇和博來黴素。
93.權利要求90的方法，其中所述抗腫瘤劑選自螺鉬、順鉬、卡鉬、甲氨蝶呤、氟尿嘧 啶、阿黴素、絲裂黴素、安絲菌素、博來黴素、阿糖胞苷、阿糖腺苷、巰基聚賴氨酸、長春新 鹼、白消安、苯丁酸氮芥、美法侖、PAM、L-PAM、苯丙氨酸氮芥、巰基嘌呤、米託坦、鹽酸丙卡 巴胼放線菌素D、鹽酸柔紅黴素、鹽酸多柔比星、紫杉醇和其他紫杉烷類、雷帕黴素、手黴素A、TNP-470、普卡黴素、光輝黴素、氨魯米特、雌氮芥磷酸鈉、氟他胺、醋酸亮丙瑞林、醋酸甲 地孕酮、檸檬酸他莫昔芬、睪內酯、曲洛司坦、安吖啶(m-AMSA)、天冬醯胺酶(L-天冬醯胺 酶)歐文氏菌屬天冬醯胺酶、幹擾素α _2a、幹擾素α _2b、替尼泊甙(VM46)、硫酸長春鹼 (VLB)、硫酸長春新鹼、硫酸博來黴素、羥基脲、丙卡巴胼和達卡巴嗪。
94.權利要求87的方法，其進一步包括同時或相繼給予佐劑、抗原、免疫調節化合物或 它們的組合。
95.一種對受試者的感染進行治療、延遲感染的進展、延長感染的潛伏狀態或降低感染 的發病率或嚴重程度的方法，其包括給予需要其的受試者治療有效量的權利要求19-65任 意一項所述的組合物。
96.權利要求95的方法，其中所述針對靶標寄生蟲、病毒、真菌、病原體、細菌或感染劑 的免疫應答被刺激。
97.權利要求96的方法，其中所述免疫應答增強嗜中性白細胞吞噬作用、刺激細胞毒 溶胞作用、誘導ROS產生、誘導熱休克蛋白的表達或增強補體-介導的溶胞作用。
98.權利要求95的方法，進一步包括同時或相繼給予抗生素、抗病毒劑、抗感染劑、抗 原蟲劑、佐劑、抗原、免疫調節化合物或它們的組合。
99.一種對受試者的炎症進行治療、延遲炎症的進展、降低炎症的發病率或嚴重程度的 方法，其包括給予需要其的受試者治療有效量的權利要求19-65任意一項所述的組合物。
100.權利要求99的方法，其中位於靶標炎症病灶處的所述炎症被下調或消除。
101.權利要求99的方法，其進一步包括同時或相繼給予佐劑、抗原、肽、免疫刺激化合 物、抗炎劑或它們的組合。
102.權利要求101的方法，其中所述抗炎劑選自倍他米松、強的松龍、吡羅昔康、阿司 匹林、氟比洛芬和(+)-N-{4-[3-(4-氟代苯氧基)苯氧基]-2-環戊烯-1-基}-N-羥基脲。
103.—種對受試者的自身免疫應答進行治療、延遲自身免疫應答的進展或降低自身 免疫應答的發病率或嚴重程度的方法，其包括給予需要其的受試者治療有效量的權利要求 27-72任意一項所述的組合物。
104.權利要求103的方法，其中針對靶標移植組織、移植細胞、自身抗原或HIV感染的 所述自身免疫應答被下調或消除。
105.權利要求104的方法，其中所述自身免疫應答下調白介素、腫瘤壞死因子或幹擾 素的活化。
106.權利要求103的方法，進一步包括同時或相繼給予免疫抑制劑。
107.一種包含純化的連接靶向部分的β-1，6-葡聚糖組合物，其中所述組合物是藥物 組合物、食品或食物產品、食品補充劑或化妝用組合物。
108.權利要求107的組合物，其中所述組合物包含已被加工的連接靶向部分的β-1， 6-葡聚糖，相對於未加工的β -1，6-葡聚糖，增加了它的介導免疫應答能力。。
109.權利要求107的組合物，其中至少95%的包含於所述組合物中的葡聚糖是連接靶 向部分的β-1，6-葡聚糖。
110.一種包含連接靶向部分的β-1，6-葡聚糖的膠粒，其中所述β-1，6-葡聚糖任選 地是0-乙醯化的。
111.一種包含連接靶向部分的β-1，6-葡聚糖和生物可降解的聚合物的組合物，其中所述生物可降解的聚合物降解形成生物學活性的水楊酸鹽或α-羥酸部分以及所述β-1， 6-葡聚糖任選地是0-乙醯化的。
112.—種包含連接於權利要求111的組合物的微球的顆粒。
113.一種包含權利要求111的組合物的醫用裝置。
114.權利要求113的醫用裝置，其中用包含連接靶向部分的β-1，6-葡聚糖組合物塗 覆至少一部分表面。
115.權利要求113的醫用裝置，其中該裝置選自導管、支架、瓣膜、起搏器、中心線、子 宮託、管、分流器、飼管、引流管和矯形外科硬體裝置。
116.權利要求113的醫用裝置，其中所述組合物包含含有聚合物和連接靶向部分的 β-1，6-葡聚糖的塗層。
117.權利要求113的醫用裝置，其中所述組合物包含含有聚合物和連接靶向部分的 β-1，6-葡聚糖的塗層，其中所述聚合物是生物可降解的。
118.一種治療受試者的方法，其包括將權利要求113所述的醫用裝置植入或導入需要 其的受試者體中。
119.一種塗覆材料，其包含(a)基質；和(b)與所述基質的至少一部分表面在物理上 相結合的包含連接靶向部分的β-1，6-葡聚糖組合物，其中所述組合物任選地以凝膠或薄 膜的形式存在。
120.權利要求119的塗覆材料，其中所述組合物是聚合物。
121.權利要求119的塗覆材料，其中所述組合物包含生物可降解的聚合物。
122.權利要求119的塗覆材料，其中所述基質至少部分由金屬、陶瓷或聚合物組成。
123.—種治療受試者的方法，其包括將需要其的受試者的身體與權利要求119所述的 塗覆材料接觸。
全文摘要
本發明涉及β1-6葡聚糖、組合物、診斷試劑盒和包含上述物質的裝置，及其在免疫應答的調節和癌症、感染、炎症及自身免疫病的治療、延遲進展、降低發病率或嚴重程度中的使用方法。本發明某些實施方案的β1-6葡聚糖富含O-乙醯基和/或綴合於固相支持物或連接靶向部分。本發明某些實施方案的β1-6葡聚糖募集免疫球蛋白G抗體以介導補體和嗜中性白細胞殺傷作用。本發明某些實施方案的綴合的β1-6葡聚糖靶向細胞以通過激活補體-介導的溶胞作用及募集嗜中性白細胞從而在靶位置刺激免疫應答。
文檔編號G01N33/563GK102119332SQ200980124834
公開日2011年7月6日 申請日期2009年4月29日 優先權日2008年4月29日
發明者G·R·芬克, I·魯賓-貝耶拉諾 申請人:免疫刺激公司