一種速溶凍幹纖維蛋白原和凝血酶製劑組合物、製備方法及其用途的製作方法

2023-05-02 14:46:46

專利名稱：：一種速溶凍幹纖維蛋白原和凝血酶製劑組合物、製備方法及其用途的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種凍幹纖維蛋白原製劑和凝血酶製劑，具體講涉及一種纖維蛋白原製劑和凝血酶製劑組合物、製備方法和其用途。
背景技術：
：纖維蛋白原即凝血因子I，是血漿蛋白的主要成份之一，分子量約為34萬，纖維蛋白原在凝血酶的作用下可形成纖維蛋白，進而與血小板等一起形成穩固的纖維蛋白血栓，因而在臨床上與凝血酶一起用於急救止血、創口粘合。凝血酶即凝血因子n，是一種快速止血藥，直接作用於凝血過程中的最後步驟，在鈣離子與凝血因子xm的共同作用下，最終使纖維蛋白原轉變為穩定的纖維蛋白網發揮止血功效。因此纖維蛋白原和凝血酶組合物具有其它止血藥無法比擬的止血速度和作用強度。凝血酶的止血速度，僅需35秒鐘。纖維蛋白原和凝血酶組合物己被廣泛應用於外科手術過程中，使手術創面癒合時間縮短，感染發生率降低。用於血管和神經的顯微吻合手術，可以減少甚至完全不用縫合，使手術時間縮短，而且更安全，是一種理想的止血材料。纖維蛋白原離開機體後在液態時易失活，保存時間短。所以為了延長保存時間，將其製成凍千製劑，使用時用注射用水復溶。但純度較高的凍幹纖維蛋白原很難在室溫下溶解，即使在較低濃度12%也需在3037'C下才能徹底溶解，且溶解時間長達2030分鐘，不適應臨床手術和急救的需要。本製備工藝採用胺基酸緩衝液快速溶解纖維蛋白原，滿足了臨床需要。纖維蛋白原和凝血酶在臨床上應用的另一個問題是安全問題。採用人血為原料，若病毒滅活不徹底，就可能引起愛滋病病毒(HIV)、B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒(HCV)等病毒的傳染。若採用豬血或牛血為原料，雖然能夠避免以上問題，但由於動物疫情的出現，仍需要徹底滅活病毒。目前用於血液製品大規模生產的病毒滅活方法主要用S/D法和乾熱法兩次滅活。S/D法能破壞脂包膜病毒的外膜結構，因而可有效滅活乙腦等人畜共患脂包膜病毒。由於S/D法滅活病毒時條件比較溫和，對纖維蛋白原和凝血酶的結構和活性幾無破壞作用，但是S/D法不能滅活非脂包膜病毒。千熱處理能有效滅活脂包膜病毒和非脂包膜病毒如乙腦病毒、戊肝病毒、豬細小病毒、偽狂犬病毒等人畜共患病毒。乾熱滅活可作為纖維蛋白原和凝血酶分裝、凍幹、真空密封等生產程序的最後一步，不僅可以避免製品的再汙染，而且成本低，投資少，便於大規模生產。但乾熱滅活法會引起纖維蛋白原變性，加入甘露醇可減少乾熱對纖維蛋白原的變性作用。ZL98802175.7號專利公開了一種含纖維蛋白原、氨甲環酸和精氨酸或賴氨酸或精氨酸與賴氨酸的混合物，其中氨甲環酸的量為120%，精氨酸或賴氨酸的量為0.14%。此專利通過添加了胺基酸作為穩定劑，可以減少乾熱對纖維蛋白的變形作用，但是此發明披露的技術方案中纖維蛋白原和穩定劑組成的製劑仍為液態，所以存在儲存時間較短，穩定性較差和生物活性降低的缺點。ZL03142013.3號專利公開了一種由纖維蛋白原和穩定劑組成的凍幹纖維蛋白原製劑，由纖維蛋白原和穩定劑組成，穩定劑由L-精氨酸或L-精氨酸鹽類和山梨醇組成，其中纖維蛋白原的濃度為0.515%,L-精氨酸或其鹽0.110。/。，山梨醇0,110%。此專利通過添加穩定劑，縮短了溶解時間，但此專利的不足為將纖維蛋白原與胺基酸一起製成凍乾粉，使用時用注射用水復溶，復溶速度仍然較慢，且在使用過程中量取注射用水復溶，操作不夠簡單快捷。
發明內容本發明的目的是提供一種速溶、使用方便、儲存時間長、耐乾熱法處理的凍幹纖維蛋白原和凝血酶製劑的組合物。本發明提供的凍幹纖維蛋白原和凝血酶製劑包括含纖維蛋白原凍乾粉和纖維蛋白原凍乾粉溶解液的組合物1，和含凝血酶凍乾粉和凝血酶凍乾粉溶解液的組合物2。本發明分別將纖維蛋白原和凝血酶製成凍乾粉，使用時用纖維蛋白原溶解液溶解纖維蛋白原凍乾粉，用凝血酶溶解液溶解凝血酶凍乾粉，再將溶解後的纖維蛋白原溶液和凝血酶溶液配合使用。由於纖維蛋白原由a、P、Y三組不同的多肽鏈所構成，根據相似相容的化學原理，易溶於具有一定離子強度的胺基酸緩衝溶液中。由於緩衝液中的酸基與纖維蛋白原分子中鹼性殘基的結合成鹽反應，緩衝液中的鹼基與纖維蛋白原分子酸性殘基的結合成鹽反應，這些成鹽反應加快了纖維蛋白原的溶解，所以纖維蛋白原在胺基酸的緩衝溶液中溶解速度加快。本發明提供的將纖維蛋白原製成凍乾粉的技術方案，解決了纖維蛋白原液態條件下保存時間不長的缺點，同時配製一定濃度的胺基酸緩衝液做為纖維蛋白原溶解液，纖維蛋白原凍乾粉可以迅速大量溶解，解決了纖維蛋白原凍乾粉在使用時溶解時間長、有效濃度低等缺點，適應了臨床的需要。在纖維蛋白原中加入聚山梨酯-80和甘露醇作為穩定劑，使纖維蛋白原凍乾粉可以耐乾熱處理，保護了生物活性。本發明的纖維蛋白原和凝血酶製劑組合物通過S/D法和乾熱法處理，確保滅活脂包膜和非脂包膜病毒。本發明採用技術方案為一種速溶的凍幹纖維蛋白封閉劑組合物包括-.組合物l，所述組合物1含纖維蛋白原凍乾粉和纖維蛋白原溶解液；所述纖維蛋白原凍乾粉含纖維蛋白原、檸檬酸鈉、氯化鈉、聚山梨酯-80和甘露醇；所述纖維蛋白原溶解液含精氨酸和穀氨酸；組合物2，所述的組合物2含凝血酶凍乾粉和凝血酶溶解液；所述的凝血酶凍乾粉含凝血酶、右旋糖酐20和甘氨酸；所述的凝血酶溶解液含氯化鈉和氯化鈣；另有說明除外，本發明中酶濃度用單位/ml表示，其它濃度用mg/ml表示，組合物1中各物質濃度為維蛋白原3570、檸檬酸鈉915、氯化鈉712、聚山纖梨酯-800.30.6、甘露醇1015、精氨酸48和穀氨酸3.55.5;組合物2中各物質濃度為凝血酶7001200、右旋糖酐2036、甘氨酸1525、氯化鈉57和氯化鈣47。本發明提供的優選方案為組合物l中各組分的濃度為纖維蛋白原4570、擰檬酸鈉1012.5、氯化鈉810、聚山梨酯-800.40.6、甘露醇1012、精氨酸57和穀氨酸45;組合物2中各組分的濃度為；凝血酶8001150、右旋糖酐2036、甘氨酸1525、氯化鈉67和氯化鈣56。本發明提供的再一優選方案為組合物1中各成分的濃度為纖維蛋白原50、檸檬酸鈉12、氯化鈉9、聚山梨酯-800.5、甘露醇12、精氨酸6和穀氨酸4.8;組合物2中各成分的濃度為凝血酶IOOO、右旋糖酐204.5、甘氨酸25、氯化鈉6和氯化鈣5.5。本發明提供的組合物的使用方法是在臨床應用時，將組合物1和2注入雙筒推液器，再施於手術創面，使用方便快捷。本發明採取的組合物l、2的製備步驟如下(1)組合物1中的纖維蛋白原凍乾粉的製備方法①豬全血每lml加入抗凝劑檸檬酸鈉3.8mg，3500r/min低溫25'C離心30分鐘，分離血漿，0.2pm微孔濾膜除菌過濾得濾液；②溶液降溫至-2'C時，加入預冷至-2(TC乙醇至終濃度為8y。，低溫沉澱，得蛋白沉澱物；③取上述纖維蛋白原沉澱1克，加入每毫升含檸檬酸鈉30mg和氯化鈉9mg的溶液2ml，使其完全溶解，每lml加入聚山梨酯-8010mg、磷酸三丁酯3mg，用1%氫氧化鈉溶液調至pH7.0;2428'C攪拌8小時滅活脂包膜病毒；⑤溶液降溫至-2。C時，加入預冷至-20"乙醇至終濃度為8%，低溫沉澱，將蛋白沉澱每克用每毫升含9mg氯化鈉和檸檬酸鈉12mg溶液lml溶解後，加入聚山梨酯-800.2mg和甘露醇12mg;0.2^un微孔濾膜除菌過濾、分裝、-70'C冷凍l-10pa千燥；⑦將製得的纖維蛋白原於95105"C乾熱滅活30分鐘。(2)組合物1中的纖維蛋白原溶解液的製備方法①取精氨酸按6mg用無熱原蒸餾水lml溶解；②再加入穀氨酸4.8mg攪拌溶解，控制穀氨酸加入量使pH值至7.47.8，；③0.2pm微孔濾膜除菌過濾、分裝；④將所製得的纖維蛋白原溶解液於95105t:乾熱滅活30分鐘；組合物1中各組分濃度為纖維蛋白原3570、檸檬酸鈉915、氯化鈉712、聚山梨酯-800.30.6、甘露醇1015、精氨酸48和穀氨酸3.55.5。(3)組合物2中的凝血酶凍乾粉的製備方法①在每ml豬全血中加入草酸鈉13.4g，離心分離出抗凝豬血槳；②按lml血漿加入硫酸鋇O.lg吸附豬凝血酶原，洗滌沉澱；③按每lg沉澱用lml的0.3mg/ml檸檬酸鈉溶液洗脫凝血酶原，每毫升加入組織凝血活酶5mg和氯化鈣3mg激活，離心去沉澱；每ml加入聚山梨酯-8010mg和磷酸三丁酯3mg;◎24—28t:攪拌8小時S/D滅活病毒，超濾洗滌純化，濃縮後得凝血酶溶液；◎在上述凝血酶溶液中按每ml加入右旋糖酐204.5mg和甘氨酸25mg，0.2pm微孔濾膜除菌過濾，-70°0冷凍l-10pa乾燥，；⑦對製得的凝血酶凍乾粉95105。C下乾熱滅活30分鐘；(4)組合物2中的凝血酶溶解液的製備①稱取氯化鈉、氯化鈣，用無熱原蒸餾水溶解；用NaOH和HCl控制pH5.86.3;②0.2pm微孔濾膜除菌過濾、分裝；③將分裝後凝血酶溶解液於95105t:乾熱滅活30分鐘。本發明提供的組合物具有以下有益效果1.本發明採用了豬血作為原料，避免了愛滋病病毒(HIV)、B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒(HCV)傳播的危險；由於採用了S/D和乾熱滅活病毒工藝，同時也避免了乙腦病毒、戊肝病毒、偽狂犬等人畜共患病毒感染的危險。2.本發明將纖維蛋白原和凝血酶製成凍乾粉，比液態製品保存時間增長，藥物的穩定性增加。3.本發明在纖維蛋白原凍乾粉中加入了特定濃度的甘露醇和聚山梨酯-80作為穩定劑，在凝血酶凍乾粉中加入了特定濃度的右旋糖酐20和甘氨酸作為穩定劑，從而使得纖維蛋白原和凝血酶穩定性增強，減少了乾熱法滅活病毒過程中變性作用，保護了生物活性。4.本發明中的纖維蛋白原溶解液為特定濃度的胺基酸緩衝液，根據相似相容的化學原理，纖維蛋白原凍乾粉可以在室溫下迅速溶解於胺基酸緩衝液，與無機鹽及其緩衝液作為溶解液相比較，溶解速度快，避免了使用部位的高滲引起的局部蓄液以及大量無機鹽對組織的刺激性，並且有利於創傷部位的癒合。5.本發明採用S/D滅活病毒法和乾熱滅活病毒法同時使用，從而最大限度保證了產品的安全性。6.本發明採用的凍乾粉和溶解液分別配製，獨立包裝，不僅使貯存時間增長，而且使用方便，滿足臨床和野外急救的需要。具體實施例方式下面對本發明所述製備方法做進一步的描述，但不限制本發明。實施例1(1)組合物1中的纖維蛋白原的製備方法1.豬全血每ml中加入抗凝劑檸檬酸鈉3.8mg，4。C下、以3500r/min低溫離心30分鐘，分離血漿，0.2pm微孔濾膜除菌過濾得濾液；2.對所得濾液降溫至-5。C時，加入預冷-2(TC乙醇至8%濃度，3500r/min離心得到富含纖維蛋白原的沉澱；3.所得纖維蛋白沉澱按每mg加入含檸檬酸鈉12mg和氯化鈉9mg的溶液2ml，使其完全溶解，每ml加入聚山梨酯-8010mg，磷酸三丁酯3mg，用1%NA0H溶液調至pH值為7.0;4.24'C攪拌8小時滅活脂包膜病毒；5.降溫至-2。C時，加入預冷至-2(TC的乙醇至終濃度8。/a低溫乙醇沉澱，將纖維蛋白沉澱用含氯化鈉9mg和檸檬酸鈉6mg溶液2ml溶解，加入聚山梨酯-800.2mg和甘露醇12mg;6.0.2pm微孔濾膜除菌過濾、分裝、-70"冷凍l一10pa真空乾燥；7.對分裝凍幹後的纖維蛋白原於95'C千熱滅活30分鐘。(2)組合物1的纖維蛋白原溶解液的製備1.取精氨酸5mg用無熱原蒸餾水lml溶解；2.再加入穀氨酸4mg攪拌溶解，控制pH值至7.4，3.0.2pm微孔濾膜除菌過濾、分裝；4.對分裝後的纖維蛋白原溶解液於95'C乾熱滅活30分鐘。(3)組合物2的凝血酶凍乾粉的製備1.在豬全血lml中加入草酸鈉13.5mg，以3500r/min低溫離心30分鐘，分離出抗凝豬血漿；2.按lml血漿加入硫酸鋇0.1g吸附豬凝血酶原，使用純化水洗滌沉澱；3.按每lg沉澱用lml的0.3mg/ml檸檬酸鈉溶液洗脫凝血酶原，每毫升加入組織凝血活酶5mg和氯化鈣3mg激活，將凝血酶原激活成為凝血酶，離心去沉澱,用截流分子量10萬慮膜超濾去除大分子蛋白質。4.每ml溶液中加入聚山梨酯-8010mg和磷酸三丁酯3mg;於24°C攪拌8小時S/D滅活病毒；5.用截流分子量2萬慮膜超濾去出小分子物質，濃縮得凝血酶溶液；6.在上述每ml凝血酶溶液中加入右旋糖酐204.5mg和甘氨酸25mg，0.2l^m微孔除菌過濾，-70'C冷凍lpa乾燥；7.對分裝後的凝血酶凍乾粉95i:乾熱滅活30分鐘。(4)組合物2的凝血酶溶解液的製備1.稱取氯化鈉6mg、氯化鈣55mg，用無熱原蒸餾水lml溶解，使溶液終濃度為氯化鈉5mg/ml、氯化鈣4mg/ml;0.2pm微孔濾膜除菌，過濾，分裝；2.將分裝後的凝血酶溶解液於95。C乾熱滅活30分鐘。實施例2(1)組合物1中的纖維蛋白原的製備1.豬全血lml中加入抗凝劑檸檬酸鈉3.8mg，8'C下、以3500r/min低溫離心30分鐘，分離血漿，0.2jam微孔濾膜除菌過濾得濾液；2.對所得濾液降溫至-5。C時，加入預冷至-20。C乙醇至終濃度8%，低溫乙醇沉澱，3500r/min離心得到富含纖維蛋白原的沉澱；3.所得纖維蛋白原沉澱按每mg加入含檸檬酸鈉12mg和氯化鈉9mg溶液2ml，使其完全溶解，每ml加入聚山梨酯-8010mg和磷酸三丁酯3mg，用1%氫氧化鈉溶液pH值為7.0;4.2428t:攪拌8小時滅活脂包膜病毒，5.降溫至-2。C時，加入預冷至-2(TC的乙醇至終濃度8y。，低溫乙醇沉澱，將纖維蛋白沉澱lg用含氯化鈉9mg和擰檬酸鈉6mg溶液lml溶解後，每ml加入聚山梨酯-800.2mg和甘露醇12mg;6.0.2pm微孔濾膜除菌過濾、分裝、-70匸冷凍10pa乾燥，7.對分裝凍幹後的纖維蛋白原於105'C乾熱滅活30分鐘。(2)組合物l中纖維蛋白原溶解液的製備1.取精氨酸7mg按用無熱原蒸餾水lml溶解，2.再加入穀氨酸5mg攪拌溶解，控制pH值至7.8，3.0.2^m微孔濾膜除菌過濾、分裝，4.對分裝後的纖維蛋白原溶解液於105'C乾熱滅活30分鐘。(3)組合物2中的凝血酶凍乾粉的製備1.豬全血lml中加入草酸鈉13.5mg，分離出抗凝豬血漿；2.按lml血漿加入硫酸鋇0.1g吸附豬凝血酶原，使用純化水洗滌凝血酶原沉澱；3.按每lg沉澱用lml的0.3mg/ml檸檬酸鈉溶液洗脫凝血酶原，每毫升加入組織凝血活酶5mg和氯化鈣3mg激活，將凝血酶原激活成為凝血酶，離心去沉澱，用截流分子量10萬慮膜超濾去除大分子蛋白質；4.每ml溶液中加入聚山梨酯-80lOmg和磷酸三丁酯3mg;於24°C攪拌8小時S/D滅活病毒；5.用截流分子量2萬慮膜超濾去出小分子物質，濃縮得凝血酶溶液；6.在上述含凝血酶1200單位酶溶液中，加入右旋糖酐206mg和甘氨酸25mg，除菌過濾，-70°〇冷凍,1(^&乾燥，7.對分裝後的凝血酶凍乾粉105'C乾熱滅活30分鐘。(4)組合物2中的凝血酶溶解液的製備1.稱取氯化鈉6mg、氯化鈣55mg，用無熱原蒸餾水lml溶解，使溶液終濃度為氯化鈉5mg、氯化鈣4mg，pH6.3，0.2pm微孔濾膜除菌，過濾，分裝；2.將分裝後的凝血酶溶解液於105t:乾熱滅活30分鐘實施例3:纖維蛋白原溶解液比較試驗將實施例2中製備的纖維蛋白原用以下溶劑系統溶解，觀察纖維蛋白原的溶解時間，實驗條件統一控制為37'C。tableseeoriginaldocumentpage1227sec.觀察結果:胺基酸緩衝液溶解速度較快，而且溶液性質穩定，在室溫放置60天保持纖維蛋白原凝固活力基本不變。(1)NaOH-HCl溶劑、精氨酸-醋酸緩衝液和精氨酸-穀氨酸緩衝液的溶解速度較快，且溶液澄明。(2)NaOH-HCI溶劑離子濃度增大時，溶解時間不變。(3)精氨酸-醋酸緩衝液和精氨酸-穀氨酸緩衝液隨離子濃度增大，溶解時間延長。(4)精氨酸-醋酸緩衝液不穩定，高溫高壓放置後易形成胺基酸-醋酸鹽結晶。結論在本實驗所選用的溶解液系統中，NaOH-HCl溶解液由於晶體滲透壓的特性，易形成機體組織局部高滲積液的現象；精氨酸-醋酸溶解液由於易形成精氨酸-醋酸鹽結晶；而本發明提供的技術方案中，精氨酸-穀氨酸緩衝液為纖維蛋白原的緩衝系統具有溶解速度快，溶液性質穩定，在2025'C放置60天，溶液澄清，纖維蛋白原的凝固活力保持不變。實施例4將實施例1中組合物1中的纖維蛋白原的製備方法中第4步S/D法處理後的纖維蛋白原用以下溶液溶解後製成凍幹品，tableseeoriginaldocumentpage13置IO(TC水浴加熱30分鐘後，1號使用注射用水復溶，2和3號使用含精氨酸5mg/ml，穀氨酸4mg/ml的溶解液復溶，觀察復溶時間、外觀、凝固活力，結果見表2:tableseeoriginaldocumentpage13上述結果顯示使用亮氨酸和山梨醇為穩定劑的效果沒有使用聚山梨酯-80和甘露醇的效果好。權利要求1.一種速溶凍幹纖維蛋白封閉劑組合物，其特徵在於所述組合物包括組合物1和組合物2；組合物1包括纖維蛋白原凍乾粉和纖維蛋白原溶解液，組合物2包括凝血酶凍乾粉和凝血酶溶解液；按mg/ml計組合物1的濃度為纖維蛋白原35～70、檸檬酸鈉9～15、氯化鈉7～12、聚山梨酯-800.3～0.6、甘露醇10～15、精氨酸4～8和穀氨酸3.5～5.5；組合物2的濃度為凝血酶700～1200單位/ml，右旋糖酐203～6，甘氨酸15～25、氯化鈉5～7和氯化鈣4～7。2.—種如權利要求l所述的速溶的凍幹纖維蛋白封閉劑組合物，其特徵在於組合物l的濃度為纖維蛋白原4570、檸檬酸鈉1012.5、氯化鈉810、聚山梨酯-800.40.6、甘露醇1012、精氨酸57和穀氨酸45;組合物2的濃度為凝血酶8001150單位/ml、右旋糖酐2036、甘氨酸1525、氯化鈉67和氯化鈣56。3.—種如權利要求1或2所述的速溶的凍幹纖維蛋白封閉劑組合物，其特徵在於組合物l的濃度為纖維蛋白原50，檸檬酸鈉12，氯化鈉9，聚山梨酯-800.5,甘露醇12、精氨酸6和穀氨酸4.8;組合物2的濃度為凝血酶1000單位/ml，右旋糖酐204.5，甘氨酸25、氯化鈉6和氯化鈣5.5。4.一種如權利要求3所述的速溶凍幹纖維蛋白原和凝血酶封閉劑組合物，其特徵在於組合物1的pH值為7.47.8。5.—種如權利要求3所述的速溶凍幹纖維蛋白原和凝血酶封閉劑組合物，其特徵在於組合物2的pH值為5.86.3。6.上述任一權利要求所說的凍幹纖維蛋白原和凝血酶封閉劑的製備方法，其特徵在於所說組合物1和組合物2的製備方法如下(1)組合物1中纖維蛋白原凍千粉的製備方法①每ml豬全血中加入抗凝劑檸檬酸鈉3.8mg，以3500轉/分、04"低溫離心30分鐘，0.2pm微孔濾膜過濾得濾液；②所得濾液降溫至-2。C，加入預冷至-2(TC的低溫乙醇分步分離得纖維蛋白原沉澱物；③按每g所得纖維蛋白原沉澱加入每毫升含檸檬酸鈉12mg和氯化鈉9mg的溶解液2ml，使其完全溶解，加入聚山梨酯-8010mg和磷酸三丁酯3mg，用1%NaOH調至pH7.0;2428'C下攪拌8小時滅活脂包膜病毒；⑤降溫至-2。C，加入預冷至-2(TC的低溫乙醇分離沉澱，將纖維蛋白原按每g沉澱用每毫升含氯化鈉9mg和檸檬酸鈉6mg的溶解液2ml溶解，加入聚山梨酯-800.2mg和甘露醇12mg;0.2nm微孔濾膜除菌過濾、-7(TC冷凍、l-10pa真空乾燥；⑦對所得凍幹後的纖維蛋白原於95105'C乾熱滅活30分鐘；(2)組合物1的纖維蛋白原溶解液的製備①取精氨酸5mg用無熱原蒸餾水lml溶解；②再加入穀氨酸4mg攪拌溶解，溶液應為pH7.47.8;③0.2pm微孔濾膜除菌過濾；對所製得的纖維蛋白原溶解液於95105'C乾熱滅活30分鐘；(3)組合物2的凝血酶凍乾粉的製備①按lml豬全血中加入草酸鈉13.4mg的比例加入草酸鈉，3500r/min離心30min分離出抗凝豬血漿；②按每ml所得血漿加入硫酸鋇O.lg的比例加入硫酸鋇吸附凝血酶原，使用純化水洗滌沉澱；③每lg沉澱用lml的0.3mg/ml檸檬酸鈉溶液洗脫，每毫升洗脫液加入組織凝血活酶5mg和氯化鈣3mg，將凝血酶原激活成為凝血酶，離心去沉澱；截留分子量10萬超濾去除大分子蛋白④在每ml溶液中加入聚山梨酯-8010mg和磷酸三丁酯3mg;⑤於2428'C攪拌8小時S/D滅活病毒，截留分子量2萬超濾洗滌純化，濃縮得凝血酶溶液；⑥在上述每ml凝血酶溶液中加入右旋糖酐204.5mg和甘氨酸25mg，0.2pm微孔除菌過濾，-70"冷凍l-10pa真空乾燥；⑦將凍幹後的凝血酶於95105。C乾熱滅活30分鐘；(4)組合物2的凝血酶溶解液的製備①取氯化鈉6mg，氯化鈣55mg，用無熱原蒸餾水lml溶解，除菌過濾，分裝；②將分裝後凝血酶溶解液於95105。C乾熱滅活30分。7.—種如權利要求1所述的凍幹纖維蛋白原和凝血酶封閉劑組合物的使用方法，其特徵在於將組合物1和組合物2注入雙筒推液器，噴灑或滴注於手術創面。全文摘要本發明提供了一種速溶凍幹纖維蛋白原和凝血酶製劑組合物、製備方法及其用途，所述組合物包括按mg/ml計的、各組分濃度為纖維蛋白原35～70、檸檬酸鈉9～15、氯化鈉7～12、聚山梨酯-800.3～0.6、甘露醇10～15、精氨酸4～8和穀氨酸3.5～5.5的纖維蛋白原凍乾粉和纖維蛋白原溶解液的組合物1和各組分濃度為凝血酶700～1200單位/ml、右旋糖酐203～6、甘氨酸15～25、氯化鈉5～7和氯化鈣4～7的組合物2。本發明的封閉劑避免了愛滋病病毒等傳播的危險；增加藥物穩定性、減少乾熱法滅活病毒過程中變性作用；保護生物活性、避免使用部位的高滲引起的局部蓄液及大量無機鹽對組織的刺激性，有利於創傷部位的癒合；最大限度保證產品的安全性、獨立包裝，不僅增長貯存時間，而且使用方便，滿足臨床和野外急救的需要。文檔編號A61P7/04GK101371921SQ200810167199公開日2009年2月25日申請日期2008年10月8日優先權日2008年10月8日發明者餘美倫申請人:餘美倫