誘導細胞凋亡的多核苷酸及其編碼的多肽和用途的製作方法

2023-04-25 01:06:51 2

專利名稱：誘導細胞凋亡的多核苷酸及其編碼的多肽和用途的製作方法
技術領域：
本發明屬於生物技術領域，涉及基因表達調控領域，具體地說，本發明涉及一類新的編碼具有誘導細胞凋亡功能的人蛋白的多核苷酸，及其編碼的多肽，多肽的抗體。本發明還涉及這類新的多核苷酸在宿主細胞中外源表達誘導細胞凋亡的應用。本發明還涉及所述多肽、抗體在製備預防和治療與人體細胞凋亡相關的疾病，尤其在開發如愛滋病、神經系統的退行性病變等自身免疫疾病和腫瘤的藥物上的用途。
背景技術：
人體內的細胞註定是要死亡的，有些死亡是生理性的，有些死亡則是病理性的，有關細胞死亡過程的研究，近年來已成為生物學、醫學研究的一個熱點，到目前為此，人們已經知道細胞的死亡起碼有兩種方式，即細胞壞死與細胞凋亡。細胞壞死是早已被認識到的一種細胞死亡方式，而細胞凋亡則是近年逐漸被認識的一種細胞死亡方式，細胞凋亡是細胞的一種基本生物學現象，在多細胞生物清除不需要的或異常的細胞中起著必要的作用。它在生物體的進化、內環境的穩定以及多個系統的發育中起著重要的作用。細胞凋亡不僅是一種特殊的細胞死亡類型，而且具有重要的生物學意義及複雜的分子生物學機制。
凋亡是多基因嚴格控制的過程。這些基因在種屬之間非常保守，如Bcl-2家族、caspase家族、癌基因如C-myc、抑癌基因P53等，隨著分子生物學技術的發展對多種細胞凋亡的過程有了相當的認識，但是迄今為止凋亡過程確切機制尚不完全清楚。
細胞凋亡之所以成為人們研究的一個熱點，在很大程度上決定於細胞凋亡與臨床疾病的密切關係。這種關係不僅表現在凋亡及其機制的研究，闡明了一大類免疫病的發病機制，而且由此可以導致疾病新療法的出現，特別是細胞凋亡與腫瘤及愛滋病之間的密切關係倍受人們重視。
1)HIV病毒感染造成CD4+T細胞減少是通過細胞凋亡機制HIV感染引起愛滋病，其主要的發病機制是HIV感染後特異性地破壞CD4+T細胞，使CD4+T以及與其相關的免疫功能缺陷，易導致機會性感染及腫瘤，但HIV感染後怎樣特異性破壞CD4+T細胞呢？近年認為，CD4+T淋巴細胞絕對數顯著減少的原因，主要是通過細胞凋亡機製造成的。這不僅闡明了AIDS是CD4+T細胞減少的主要原因，同時也為AIDS的治療研究指明了一個重要的探索方向。
2)從細胞凋亡角度看，腫瘤的發生是由於凋亡受阻所致一般認為惡性轉化的腫瘤細胞是因為失控生長，過度增殖，從細胞凋亡的角度看則認為是腫瘤的凋亡機制受到抑制而不能正常進行細胞死亡清除的結果。因此，從細胞凋亡角度來設計對腫瘤的治療方法就是重建腫瘤細胞的凋亡信號傳導系統，即抑制腫瘤細胞的生存基因的表達，激活死亡基因的表達。
3)細胞凋亡的研究將給自身免疫病帶來真正的突破自身免疫病包括一大類難治性的免疫紊亂而造成的疾病，自身反應性T淋巴細胞及產生抗體的B淋巴細胞是引起自身免疫病的主要免疫病理機制，正常情況下，免疫細胞的活化是一個極為複雜的過程。在自身抗原的刺激作用下，識別自身抗原的免疫細胞被活化，從而通過細胞凋亡的機制而得到清除。但如這一機制發生障礙，那麼識別自身抗原的免疫活性細胞的清除就會產生障礙，造成淋巴細胞增殖性的自身免疫疾患。
4)神經系統的退行性病變目前知道老年性痴呆是神經細胞凋亡的加速而產生的。阿爾茨海默病(AD)是一種不可逆的退行性神經疾病，澱粉樣前體蛋白(APP)、早老蛋白-1(PS1)及早老蛋白-2(PS2)的突變導致家族性阿爾茨海默病(FAD)。研究證明PS參與了神經細胞凋亡的調控，PS1、PS2的過表達能增強細胞對凋亡信號的敏感性。Bcl-2基因家族兩個成員Bcl-xl和Bcl-2參與對細胞凋亡的調節。
既然很多疾病的發生和發展與細胞凋亡失調相關，那麼對某些疾病進行治療性細胞凋亡幹預是合乎邏輯的。許多基因與促進或抑制腫瘤細胞凋亡有關，因此通過各種途徑的基因轉移誘導體內腫瘤細胞凋亡是研究腫瘤治療的新嘗試，治療價值是不可估量的。相反，用增強細胞對凋亡的耐受性就可以治療一些退行性變性疾病，因此，凋亡相關基因的發現及其機理研究對於進一步探討凋亡機制及今後疾病的基因治療具有重要意義。

發明內容
人基因組學研究目前是國際上的熱點，除大規模測序的方法外，還缺少從功能研究開始的高通量篩選具有一定功能的基因的方法。針對這種現狀及現有藥物或試劑的不足，本發明的目的是提供一類新的編碼具有誘導細胞凋亡的人蛋白的多核苷酸NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13。
本發明的另一目的是提供這類多核苷酸所編碼的多肽。
本發明的另一目的是提供含有這類多核苷酸的載體，和這類多核苷酸及其載體轉化或轉導的宿主細胞。
本發明的另一目的是提供這類多核苷酸所編碼的多肽的抗體和用於檢測的核酸分子。
本發明的另一目的是提供這類新的多核苷酸在宿主細胞中外源表達誘導細胞凋亡的應用。
本發明的另一目的是提供生產這些多核苷酸和其編碼的多肽的方法以及該多核苷酸及其編碼的多肽的用途。
為實現上述目的，本發明採用以下技術方案在本發明的第一方面，提供新穎的分離的多核苷酸，它包含編碼具有誘導細胞凋亡功能的蛋白的核苷酸序列，該核苷酸序列選自(a)與編碼含有SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8、SEQ ID NO10、SEQ ID NO12、SEQ ID NO14、SEQ ID NO16、SEQ ID NO18、SEQ ID NO20、SEQ ID NO22、SEQ ID NO24、SEQ ID NO26的胺基酸序列的多肽的多核苷酸有至少70％相似性的多核苷酸；(b)編碼含有與SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO10、SEQ ID NO12、SEQ ID NO14、SEQ ID NO16、SEQ ID NO18、SEQ ID NO20、SEQ ID NO22、SEQ ID NO24、SEQ ID NO26的胺基酸序列有至少70％相似性的胺基酸序列的多肽的多核苷酸；(c)與(a)或(b)的多核苷酸互補的多核苷酸。
較佳地，該多核苷酸編碼的多肽具有選自下組的胺基酸序列SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8、SEQ ID NO10、SEQ ID NO12、SEQ ID NO14、SEQ ID NO16、SEQ ID NO18、SEQ ID NO20、SEQ ID NO22、SEQ ID NO24、SEQ ID NO26。
較佳地，該多核苷酸的序列與選自下組的核苷酸序列有至少85％相似性(a)SEQ ID NO1、SEQ ID NO3、SEQ ID NO5、SEQ ID NO7、SEQ ID NO9、SEQ ID NO11、SEQ ID NO13、SEQ ID NO15、SEQ ID NO17、SEQ ID NO19、SEQ ID NO21、SEQ ID NO23、SEQ ID NO25的編碼區序列或全長序列；(b)在遺傳密碼簡併範圍內相應於(a)中提到的序列的至少一個序列；(c)與(a)或(b)中提到的序列互補的序列雜交的至少一個序列。
更佳地，該多核苷酸的序列選自SEQ ID NO1、SEQ ID NO3、SEQ ID NO5、SEQ ID NO7、SEQ ID NO9、SEQ ID NO11、SEQ ID NO13、SEQ ID NO15、SEQ ID NO17、SEQ ID NO19、SEQ ID NO21、SEQ ID NO23、SEQ ID NO25的編碼區序列或全長序列。
在本發明的第二方面，提供了上述核苷酸所編碼的多肽，它包含具有選自下組中的胺基酸序列的多肽SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8、SEQ ID NO10、SEQID NO12、SEQ ID NO14、SEQ ID NO16、SEQ ID NO18、SEQ ID NO20、SEQ ID NO22、SEQ ID NO24、SEQ ID NO26；或與以上任一胺基酸序列具有至少90％以上相似性的多肽，或其保守性變異多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
較佳地，該多肽是具有選自下組的胺基酸序列的多肽SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ IDNO6、SEQ ID NO8、SEQ ID NO10、SEQ ID NO12、SEQ ID NO14、SEQ ID NO16、SEQID NO18、SEQ ID NO20、SEQ ID NO22、SEQ ID NO24、SEQ ID NO26。
在本發明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的載體，以及被該載體轉化或轉導的宿主細胞，還提供了被上述多核苷酸轉化或轉導的宿主細胞。
在本發明的第四方面，提供了與上述多肽特異性結合的抗體，還提供了可用於檢測的核酸分子，它含有上述任一多核苷酸中8-100個連續的核苷酸。
在本發明的第五方面，提供了上述多核苷酸在宿主細胞中外源表達誘導細胞凋亡的應用。
在本發明的第六方面，提供了上述多核苷酸和多肽在製備預防和/或治療與人體細胞凋亡有關的疾病的藥物中的用途。較佳地，在製備預防和/或治療與人體細胞凋亡有關的如愛滋病、神經系統的退行性病變等自身免疫疾病和腫瘤的藥物中的用途。
在本發明地第七方面，提供了一種藥物組合物，它含有安全有效量的本發明中的具有誘導人體細胞凋亡功能的多肽及藥學上可接受的載體。
在本發明的第八方面，提供了一種自身免疫疾病或腫瘤的體外檢測方法，利用上述抗體或核酸片段來檢測宿主樣品中的多肽的存在或水平。
本發明的其他方面由於本文的技術的公開，對本領域技術人員而言是顯而易見的。
如本文所用，「分離的」是指物質從其原始環境中分離出來(如果是天然的物質，原始環境即是天然環境)。如活體細胞內的天然狀態下的多核苷酸和多肽是沒有分離純化的，但同樣的多核苷酸或多肽如果從天然狀態中與共同存在的其他物質分開，則為分離純化的。這樣的多核苷酸可能是某一載體的一部分，也可能這樣的多核苷酸或多肽是某一組合物的一部分，既然載體或組合物不是它們的天然環境的成分，這些多核苷酸或多肽仍然是分離的。
如本文所用，「相似性」是指核苷酸或多肽序列比對過程中用來描述檢測序列和目標序列之間相同DNA鹼基或胺基酸殘基順序所佔比例的高低，是一種直接的數量關係，通過部分相同或相似的百分比來度量核苷酸序列或者多肽序列之間相似的程度，此相似性百分比可以通過本領域已有的比對方法來計算，例子有兩兩序列間的比對方法FASTA程序(Pearson，W.R.and Lipman，D.J.1988.Improved tools for biological sequence comparison.Proc.Natl.Acad.Sci.852444-2448)，BLAST程序(Altschul，S.F.，et al.1990 Basic local alignment search tool.J.Mol.Biol.215403-410)等，或多序列比對方法CLUSTAL W(CORPET，F.1998 Multiple sequencealignment with hierarchical clustering.Nucleic Acids Res.，1610881-10890)等。同源序列是指從某一共同祖先經趨異進化而形成的不同序列，根據相似性百分比可以判斷比對序列間的同源性。當基因或蛋白質間相似程度很高時，表示它們具有一段共同的進化歷程，從而判斷它們會具有相似的生物學功能。當具有至少50％的相似程度時，比較容易推測檢測序列和目標序列可能是同源序列。較佳地，具有至少70％的相似程度；更佳地，具有至少85％的相似程度；最佳地，具有至少90％的相似程度。而當相似性程度低於20％時，就難以確定或者根本無法確定其是否具有同源性。
本發明的多核苷酸包括其互補鏈可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因組DNA或人工合成的DNA。DNA可以是單鏈的或是雙鏈的。DNA可以是編碼鏈或非編碼鏈。如本文所用，「編碼具有誘導細胞凋亡功能的多肽的多核苷酸」可以是包括編碼此多肽的多核苷酸，也可以是還包括附加編碼序列和/或非編碼序列的多核苷酸。以NIAG1所編碼的多肽為例，編碼成熟多肽的編碼區序列可以與SEQ ID NO1所示的編碼區序列相同或者是遺傳密碼簡併的變異體。如本文所用，「遺傳密碼簡併」是指一個胺基酸有幾個密碼子的現象。例如在本發明中NIAG1所編碼的多肽的遺傳密碼簡併的變異體指編碼具有SEQ ID NO2的多肽的核苷酸，且此核苷酸與SEQ IDNO1所示的編碼區序列有差別。對於其他具有誘導人體細胞凋亡功能的多肽，可依此類推。
本發明還涉及上述多核苷酸的變異體，它編碼與本發明有相同的胺基酸序列的多肽或多肽的片段、類似物和衍生物。該多核苷酸的變異體可以是天然發生的等位變異體或非天然發生的變異體。這些核苷酸變異體包括取代變異體、缺失變異體和插入變異體。如本領域所知的，等位變異體是一個多核苷酸的替換形式，它可能是一個或多個核苷酸的取代、缺失或插入，但不會從實質上改變其編碼的多肽的功能。
本發明還涉及與本發明所述多核苷酸序列的互補序列雜交且兩個序列間具有至少50％，較佳地至少70％，更佳地至少80％相同性的多核苷酸。本發明特別涉及在嚴格條件下與此多核苷酸序列的互補序列可雜交的多核苷酸。在本發明中，「嚴格條件」是指(1)在較低離子強度和較高溫度下的雜交和洗脫，如0.2×SSC，0.1％SDS，60℃；或(2)雜交時加有變性劑，如50％(v/v)甲醯胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll，42℃等；或(3)僅在兩條序列之間的相同性至少在95％以上，更好的是在97％以上時才發生雜交。並且，可雜交的多核苷酸編碼的多肽與本發明所述的多肽有相同的生物學功能和活性。
本發明的多核苷酸序列能用本領域已有的方法獲得。這些技術包括但不局限於(1)通過雜交技術分離DNA序列；(2)人工化學合成DNA序列；(3)通過構建cDNA文庫大規模獲得所需的多核苷酸；(4)PCR擴增技術。
第一種方法是先構建基因組文庫或者cDNA文庫，然後通過分子雜交等技術從基因組文庫或cDNA文庫中篩選出目的基因或序列。當生物基因組比較小時，此方法較易成功；當生物基因組很大時，構建其完整的基因組文庫較困難，再從龐大的文庫中去克隆目的基因的工程量也很大。
第二種方法是按設計好的序列一次合成100-200bp長的DNA片段，再用這些合成的片段組合連接成完整的基因。這種合成長的基因序列的方法的價格十分昂貴。此方法主要用於合成作為引物、接頭等的核酸片段。
第三種方法是用本領域通常的方法構建cDNA文庫，多次測序後，結合生物信息學分析技術(Ota et al.Nat Genet.2004 Jan；36(1)40-5)，大規模獲得目的cDNA克隆。生物信息學分析技術包括但不限於用BLAST或BLAT與已有的公共資料庫比對，如refseq資料庫等；用Phred算法評估測序質量；用計算轉錄起始密碼子ATG的出現概率的ATGpr算法篩選全長cDNA序列等。
第四種方法用PCR技術擴增DNA/RNA的方法(Saiki，et al.Science 1985；2301350-1354)。用於PCR的引物可根據本文所公開的本發明的序列信息適當地選擇，並可用常規方法合成。可用常規方法如通過凝膠電泳分離和純化擴增的DNA/RNA片段。本發明優選應用的方法是兩步法通量化RT-PCR技術在混合cDNA文庫中擴增得到大量的cDNA克隆。混合cDNA文庫包括現有的cDNA文庫和腫瘤文庫。
本發明的基因，或者各種DNA片段等核苷酸序列的測定可用常規方法，如雙脫氧鏈終止法(Sanger et al.PNAS，1977，745463-5467)；也可用商業測序試劑盒等。為了獲得全長的cDNA序列，測序需要反覆進行。有時需要測定多個克隆的cDNA序列，才能拼接成全長的cDNA序列。
本發明的多肽可以是重組多肽、天然多肽、合成多肽，優選重組多肽。本發明的多肽可以是天然純化的產物，或是化學合成的產物，或使用重組技術從原核或真核宿主(如細菌、酵母、高等植物、昆蟲和哺乳動物細胞)中產生。本發明的多肽可以是糖基化的，也可以是非糖基化的。本發明的多肽可以包括或不包括起始的甲硫氨酸殘基。
本發明還包括具有誘導人體細胞凋亡功能的多核苷酸編碼的人蛋白多肽的片段、衍生物和類似物。術語「片段」、「衍生物」和「類似物」是指基本上保持與本發明的天然具有誘導人體細胞凋亡功能的人蛋白多肽相同的生物學功能或活性的多肽。本發明的多肽片段、衍生物和類似物可以是(a)有一個或多個保守或非保守性胺基酸殘基(優先保守性胺基酸殘基)被取代的多肽，而這樣取代的胺基酸殘基可以是也可以不是由遺傳密碼編碼的，或(b)在一個或多個胺基酸殘基中具有取代基團的多肽，或(c)成熟多肽與另一個化合物(比如延長多肽半衰期的化合物)融合所形成的多肽，或(d)附加的胺基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前導序列或分泌序列或用來純化此多肽的序列或蛋白原序列)。
本發明的多肽可以通過常規的重組DNA技術，利用本發明的多核苷酸序列來表達或生產重組的具有誘導人體細胞凋亡功能的蛋白多肽(Science，1984；2241431)。包括以下步驟(1)用本發明的多核苷酸(或其變異體)，或用含有此多核苷酸的表達載體轉化或轉導合適的宿主細胞；(2)在合適的培養基中培養步驟(1)得到的宿主細胞；(3)從培養基或細胞中分離、純化所需的蛋白多肽。
本發明中的多核苷酸和多肽優選以分離的形式提供，更佳地被純化至均質。
本發明也涉及包含本發明所述多核苷酸的載體。本發明中，編碼具有誘導人體細胞凋亡功能的人蛋白多肽的多核苷酸序列可以插入到重組表達載體中。術語「重組表達載體」指本領域熟知的細菌質粒、噬菌體、酵母質粒、植物細胞病毒、哺乳動物細胞病毒，如腺病毒、逆轉錄病毒，或者其他載體。在本發明中適用的載體可以是原核表達載體，也可以是真核表達載體，如在細菌中表達的基於T7的表達載體(Rosenberg，et al.Gene，1987，56125)，在哺乳動物細胞中高表達的真核表達載體pcDNATM3.1/myc-hisB(-)(Invitrogen)，pcDNA3.1/V5-His-TOPO(Invitrogen，以下縮寫為pcDT)。本發明優選pcDT，它可以直接與PCR產物連接來構建真核表達載體，大大提高了規模化生產的效率。只要能在宿主體內複製和穩定，任何質粒和載體都可以應用。表達載體的一個重要特徵是通常含有複製起點、啟動子、標記基因和翻譯控制元件。用本領域的技術人員熟知的方法來構建含有本發明所述多核苷酸序列和轉錄/翻譯控制信號的表達載體即可。這些方法包括體外重組DNA技術、DNA合成技術、體內重組DNA技術等(Sambrook，et al.Molecular Cloning，a Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory.New York，1989)。
本發明的多核苷酸序列可有效地連接到表達載體中的適當的啟動子上來指導mRNA合成。這些啟動子的代表性例子有大腸桿菌的lac或trp啟動子；λ噬菌體的PL啟動子；真核啟動子包括CMV立即早期啟動子、HSV胸苷激酶啟動子、早期和晚期SV40啟動子、反轉錄病毒的LTRs和其他一些已知的可控制基因在原核或真核細胞或其病毒中表達的啟動子。表達載體還包括翻譯起始用的核糖體結合位點和轉錄終止子。表達載體優選的包含一個或多個選擇性標記基因，以提供用於選擇轉化的宿主細胞的表型性狀，如用於大腸桿菌的四環素或氨苄青黴素抗性、或真核細胞培養用的綠色螢光蛋白(GFP)、新黴素抗性及二氫葉酸還原酶。
本發明還涉及用上述載體或者本發明的多核苷酸經基因工程產生的宿主細胞。本發明的載體和多核苷酸可以用於轉化適當的宿主細胞，以使其能夠表達具有誘導人體細胞凋亡功能的蛋白質。宿主細胞可以是原核細胞，如細菌細胞；或是低等真核細胞，如酵母細胞；或是高等真核細胞，如哺乳動物細胞。代表性例子有大腸桿菌；植物細胞；果蠅S2或Sf9的昆蟲細胞；CHO、COS或Bowes黑素瘤細胞的動物細胞；293T、Hela細胞等。
本發明的多核苷酸在高等真核細胞中表達時，如果在載體中插入增強子序列時將會使轉錄增強。增強子是DNA的順式作用因子，通常有10-300個鹼基對，作用於啟動子以增強基因的轉錄。例子有在複製起始點下遊的100-270個鹼基對的SV40增強子、在複製起始點下遊的多瘤增強子以及腺病毒增強子等。
本領域的普通技術人員都知道如何選擇適當的載體、啟動子、增強子和宿主細胞。
用重組DNA轉化宿主細胞可用本領域技術人員熟知的常規技術進行。當宿主細胞為原核細胞如大腸桿菌時，能吸收DNA的感受態細胞可在指數生長期後收集，用CaCl2法處理，所用步驟是本領域眾所周知的。可供選擇的是MgCl2處理，也可用電穿孔的方法處理。當宿主是真核細胞時，可選擇以下轉染方法磷酸鈣共沉澱法、常規機械方法如顯微注射、電穿孔、脂質體包裝等。獲得的轉化子可以用常規方法培養，來表達本發明的多核苷酸所編碼的多肽。根據所選的宿主細胞選擇合適的常規培養基，在適於宿主細胞生長的條件下培養。當宿主細胞生長到適當的細胞密度後，用適當的方法如溫度轉化或化學誘導，來誘導選擇的啟動子，將細胞再培養一段時間。
上述方法中的重組多肽可包被於細胞內、細胞外或在細胞膜上表達或分泌到細胞外。如果需要，可利用其物理的、化學的和其他特性通過各種分離方法分離和純化重組多肽。這些方法是本領域技術人員所熟知的，如常規的復性處理，用蛋白沉澱劑處理(鹽析方法)、離心、滲透破菌、超聲波處理、超離心、分子篩層析(凝膠過濾)、吸附層析、離子交換層析、高效液相層析和其它各種液相層析技術或這些方法的結合。
本發明還涉及與本發明多核苷酸的任何一部分同源的核酸片段。如本文所用，「核酸片段」的長度至少含有15個核苷酸，較好的是至少30個核苷酸，更好的是至少50個核苷酸，最好的是至少100個核苷酸。此核酸片段通常是在本發明的核苷酸序列信息的基礎上化學合成的DNA序列。上述核酸片段可以用於PCR擴增技術(如作為引物)以確定和/或分離編碼具有誘導人體細胞凋亡功能的多核苷酸；也可以作為雜交所用的探針。也可以用於RNA幹擾技術。本發明的多核苷酸的一部分或全部也可作為探針固定在微陣列(Microarray)或DNA晶片上，用於分析組織中基因的差異表達和基因診斷。探針的標記可用放射性同位素，螢光素或酶(如鹼性磷酸酶)等。
本發明的多肽可以直接作為藥物治療疾病，如愛滋病、神經系統的退行性病變等自身免疫疾病和腫瘤等；還可用於篩選促進或對抗具有誘導細胞凋亡的功能的蛋白的抗體、多肽或其它配體，例如，篩選可用於促進或抑制本發明的蛋白的功能的抗體。用表達的重組的本發明的蛋白來篩選多肽庫，用於尋找有治療價值的能夠促進或抑制本發明的蛋白的功能的多肽分子。
本發明的多肽可以單獨使用或者與合適的藥物載體組合後使用。組合物包含安全有效量的多肽或拮抗劑及不影響藥物效果的載體和賦型劑。這些載體可以是水、葡萄糖、乙醇、鹽類、緩衝液、甘油及它們的組合。藥物組合物可以以方便的方式給藥，如通過局部、靜脈內、腹膜內、肌內、皮下、鼻內或皮內的給藥途徑。給藥於患者的用量取決於許多因素，如給藥方式、待治療者的健康條件和診斷醫生的判斷。
本發明的多肽也可以通過在活體表達這些多肽來使用。例如患者的細胞可以通過在體外用編碼本發明多肽的基因進行基因工程操作，然後將工程細胞提供給患者，使工程細胞在體內高表達這種多肽，從而達到治療的目的。
具有誘導細胞凋亡功能的人蛋白的多核苷酸也可用於多種治療目的。可用在基因治療技術中來治療由於具有誘導細胞凋亡的功能的人蛋白表達異常或活性異常導致的疾病。重組的基因治療載體(如病毒載體)可設計成表達變異的具有誘導細胞凋亡功能的人蛋白，來抑制內源性的具有誘導細胞凋亡功能的人蛋白的活性。重組的具有誘導細胞凋亡功能的人蛋白基因也可包裝到脂質體中轉移至細胞內。
抑制本發明多肽mRNA的寡聚核苷酸(包括反義RNA和DNA)以及核酸也在本發明的範圍之內。反義RNA和DNA以及核酸可用本領域已有的方法合成。為了增加核酸分子的穩定性，可用多種方法對其進行修飾，如增加兩側的序列長度，核糖核苷間的連接用磷酸硫酯鍵或肽鍵。
本發明的多肽及其片段、衍生物、類似物或表達它們的細胞可以作為抗原來生產抗體。這些抗體包括但不限於單克隆抗體、多克隆抗體、嵌合抗體、單鏈抗體、Fab片段和Fab表達文庫產生的抗體。本發明的多肽的抗體可用本領域公知的抗體製備方法來生產。例子有單克隆抗體可用雜交瘤技術生產(Kohler and Milstein.Nature，1975，256495-497)。多克隆抗體的生產可用本發明的多肽免疫動物，如家兔、小鼠、大鼠等。多種佐劑可用於增強免疫反應，包括但不限於弗氏佐劑。將人恆定區和非人源的可變區結合的嵌合抗體可用已有的技術產生(Morrison etal.PNAS，1985，816851)。單鏈抗體也可用已有的技術生產(U.S.Pat No.4946778)。
本發明的抗體可用於免疫組織化學技術中，檢測活體標本中的具有誘導細胞凋亡功能的蛋白。還可以在臨床上用於與具有誘導細胞凋亡功能的人蛋白相關的疾病的臨床診斷、治療、療效評價等。例如用放射性同位素標記與本發明的多肽結合的單克隆抗體，然後注入體內跟蹤其位置和分布，可以作為一種非創傷性診斷方法來定位腫瘤細胞，或判斷腫瘤細胞是否轉移。本發明中的抗體還可以用於治療或預防與具有誘導細胞凋亡功能的人蛋白相關的疾病。給予適當劑量的抗體可以刺激或阻斷具有誘導細胞凋亡功能的人蛋白的產生或活性。
本發明還涉及定量和定位檢測具有誘導細胞凋亡功能的蛋白水平的診斷試驗方法。這些試驗是本領域所熟知的，且包括FISH測定和放射免疫測定。實驗中檢測的具有誘導細胞凋亡功能的蛋白水平，可以用作解釋具有誘導細胞凋亡功能的蛋白在各種疾病中的重要性和用於診斷具有誘導細胞凋亡功能的蛋白起作用的疾病。
具有誘導細胞凋亡功能的蛋白的多核苷酸可用於具有誘導細胞凋亡功能的蛋白相關疾病的診斷和治療。在診斷方面，具有誘導細胞凋亡功能的蛋白的多核苷酸可用於檢測具有誘導細胞凋亡功能的蛋白的表達與否，或在疾病狀態下具有誘導細胞凋亡功能的蛋白的異常表達。如具有誘導細胞凋亡功能的蛋白的DNA序列可用於對活檢標本的雜交以判斷具有誘導細胞凋亡功能的蛋白的表達異常。雜交技術是本領域已公開的成熟技術，包括Southern印跡法、Northern印跡法、原位雜交等，相關的試劑盒可以從商業途徑獲得。本發明的多核苷酸的一部分或全部可作為探針固定在微陣列(Microarray)或DNA晶片上，用於分析組織中基因的差異表達和基因診斷。用具有誘導細胞凋亡功能的蛋白特異的引物進行RNA-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)體外擴增也可以檢測具有誘導細胞凋亡功能的蛋白的轉錄產物。
檢測具有誘導細胞凋亡功能的蛋白基因的突變也可用於診斷具有誘導細胞凋亡功能的蛋白相關的疾病。具有誘導細胞凋亡功能的蛋白基因的突變形式包括與正常野生型的具有誘導細胞凋亡功能的蛋白的DNA序列相比的點突變、易位、缺失、重組和其它任何異常等。可用本領域已有的技術如Southern印跡法、DNA序列分析、PCR和原位雜交檢測突變。另外，突變有可能影響蛋白的表達，因此用Northern印跡法、Westen印跡法可間接判斷基因有無突變。
基因NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13在實驗中所有用到的正常組織、胎兒組織、腫瘤組織中都有表達，說明其為人體自身重要的凋亡相關基因；在不同的組織中表達量高低有差別，說明其在不同的組織中發揮功能的程度不同。
以下對本發明的實施方案進一步詳細說明。
本發明通過對NCBI的refseq資料庫進行人功能未知預測基因檢索，獲得人未知功能基因序列，進一步利用Human_est資料庫通過BLASTn方法進行序列校正，根據校正後得到的序列設計基因特異引物，從混合人組織cDNA文庫中通過兩步法通量化RT-PCR技術擴增得到目的基因的編碼區cDNA片段。此編碼區cDNA片段與pcDT重組構建真核表達載體。採用pRL家族海腎螢光素酶報告基因法檢測本發明中的基因誘導細胞凋亡的功能。pRL載體組成性地表達海腎螢光素酶，在其它轉染條件相同的情況下，海腎螢光素酶活性的強弱可以反映出待檢基因對於細胞狀態的影響，如細胞數目、細胞存活率等。將與pcDT空質粒相比海腎螢光素酶活性明顯降低的基因挑選出來。將這些基因單獨轉染細胞後，利用LIVE/DEADViability/Cytotoxicity Kit(L-3224)染料對細胞進行染色，進一步觀察並驗證細胞存活狀態。該試劑盒中的試驗證明，Calcein-AM是一種胞漿螢光標記物，本身無螢光，滲入細胞後細胞內酯酶催化生成的水溶性綠色螢光物質不易透出細胞，用於活細胞染色。EthD-1不能進入活細胞但能進入膜已破損的死細胞，並結合於DNA上，產生一種紅色螢光，用於死細胞染色。通過螢光顯微鏡觀察紅綠螢光的比例即可反映出細胞的存活狀況。進而通過流式細胞實驗檢測所選基因對細胞的影響，均獲得陽性結果，均程度不同的對所轉染細胞有誘導凋亡的效果。實驗表明本發明的多肽具有顯著、穩定的誘導細胞凋亡作用。
由於採用了以上技術方案，本發明具有如下優點1、提供了規模化克隆和篩選新基因的技術平臺。
2、提供了人類新功能基因NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13的cDNA序列及其編碼多肽；3、首次發現人類新功能基因NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13具有誘導細胞凋亡的作用，並且高效、穩定；4、NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13在機體多數正常細胞表達，說明其為自身重要的細胞凋亡相關調控分子。
5、基於上述的4個優點，本發明為進一步研究凋亡機制，以及開發治療如愛滋病、神經系統的退行性病變等自身免疫疾病和腫瘤等的新藥物，為開創新的臨床診斷、療效評價及預後指標奠定必要的基礎。


圖1、真核表達載體pcDT-NIAGx的構建示意圖(NIAGx選自NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13)圖2、pRL家族海腎螢光素酶基因報告質粒結構3、NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13外源表達對pRL螢光素酶表達的影響圖4、NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13外源表達對細胞存活的影響(明場10×)圖5、NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13外源表達對細胞存活的影響(Calcein AM及EthD-1染色10×)圖6、NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13外源表達誘導細胞凋亡(流式細胞計數實驗)
具體實施例方式
下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，如《分子克隆實驗指南》(2002年第三版[美]薩姆布魯克等箸，科學出版社)中所述的條件，或按照製造廠商所建議的條件。
實施例1、兩步法通量化RT-PCR技術擴增目的基因(1)對NCBI的refseq資料庫進行人功能未知預測基因檢索，獲得人未知功能基因序列，並利用Human_est資料庫通過BLASTn方法進行序列校正，最終得到的序列設定為下組序列SEQID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO9、SEQ ID NO11、SEQ ID NO13、SEQ ID NO15、SEQ ID NO17、SEQ ID NO19、SEQ ID NO21、SEQ ID NO23、SEQ IDNO25。根據此類序列設計基因NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13的特異引物

(2)用上述引物，按目的基因的表達譜在現有的cDNA文庫和腫瘤文庫中選擇模板，進行初擴。現有的文庫包括12種人體正常組織(心、胰、睪丸、卵巢、前列腺、結腸、小腸、骨骼肌、胸腺、淋巴結、扁桃體、白細胞)；6種人腫瘤組織(肺癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、結腸癌、乳腺癌)；和8種胎兒組積(胎肺、胎心、胎肝、胎脾、胎腎、胎腦、胎骨骼肌、胎胸腺)的cDNA文庫(Clonetch，K1420-1，1241-1)。初擴反應條件如下50μl PCR反應

PCR延伸時間根據所擴目的基因的最長片段，按50sec/Kb的原則進行擴增
94℃5分鐘；94℃30秒，64℃30秒，72℃50sec/Kb；72℃10分鐘；4℃∞28個循環初擴產物純化到30μl，以去除PCR反應體系中大量的引物及dNTPs等，並濃縮整個體系，得到對應目的基因序列的二級擴增庫，作為二擴(大擴)的模板。
(3)將(2)中的純化產物作為模板，分別對每個目的基因進行二擴，反應條件如下50μl PCR(每個基因)反應

PCR延伸時間根據所擴目的基因的最長片段，按50sec/Kb的原則進行擴增94℃5分鐘；94℃30秒，64℃30秒，72℃50sec/Kb；72℃10分鐘；4℃∞30個循環得到的PCR產物取10μl上樣電泳，挑選有擴增條帶的PCR產物，進行等體積純化(40μl)。通過兩步PCR反應擴增出非單一條帶的基因用Qiagen膠回收試劑盒切膠回收目的片段。擴增的結果表明，這些組織的細胞中都存在基因NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13的cDNA，說明NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13在這些組織的細胞中都產生了基因NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13的轉錄產物，有較廣的表達圖譜，在多種組織中參與轉錄因子的調節。
實施例2、目的基因真核表達載體的構建將二擴純化產物和真核表達載體pcDNA3.1/V5-His-TOPO(Invitrogen，縮寫為pcDT)，按照試劑盒製造廠商建議的條件進行連接反應。連接產物電擊法轉化大腸桿菌DH5α，轉化物在含氨苄青黴素的固體LB平板培養基上生長，挑選生長的單一克隆菌落，提取質粒，用EcoRI酶切，酶切產物用瓊脂糖凝膠電泳鑑定，挑選有插入片段的陽性克隆，通過測序(ABI PRISM 3700 DNA分析儀)選出正確的正向插入克隆，各自命名為NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13。
同時收集培養液，用SDS-PAGE分析沉澱蛋白，獲得NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13多肽。
NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13蛋白分析結果顯示NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13蛋白序列如下組序列SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO10、SEQ ID NO12、SEQ ID NO14、SEQ ID NO16、SEQ ID NO18、SEQ ID NO20、SEQ ID NO22、SEQ ID NO24、SEQ ID NO26所示。
實施例3、海腎螢光素酶報告基因法測定目的基因誘導細胞凋亡的作用用目的基因和pRL家族海腎螢光素酶報告基因載體共轉染人胚胎腎293T細胞，通過檢測海腎螢光素酶的活性來測定目的基因對於細胞狀態的影響，如細胞數目、細胞存活率等。將與pcDT空質粒相比海腎螢光素酶活性明顯降低的基因篩選出來。具體操作步驟如下(1)細胞培養將1.2×104個293T細胞(ATCC NumberCRL-11268)用含10％胎牛血清的DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium)培養基(Hyclone，SH0022.02)鋪在96孔細胞培養板(Costar，3599)上(100μl培養液/孔)，在5％CO2，37℃的細胞培養箱(SANYO，MCO-15AC)中培養24小時。
(2)製備轉染工作液用2.5μl生理鹽水稀釋20ng pRL家族海腎螢光素酶報告基因載體和80ng待檢基因，輕輕混勻，室溫放置；同樣用2.5μl生理鹽水稀釋0.04μl VigoFect轉染試劑(威格拉斯生物技術(北京)有限公司)，輕輕混勻，室溫放置5分鐘；將稀釋的VigoFect轉染試劑逐滴加入稀釋的待檢基因與報告基因混合液中，輕輕混勻，是為轉染工作液，室溫放置15分鐘。
(3)轉染將轉染工作液輕輕混勻，逐滴加入至(1)中鋪好細胞的96孔細胞培養板中，置於37℃，5％CO2的細胞培養箱中培養24小時。
(4)檢測轉染24小時後，將96孔板的細胞以800轉/分鐘(Eppendorf Centrifuge，5810R)離心5分鐘，棄上清。每孔加入40μl細胞裂解液，混勻後將96孔板置於-80℃冰箱1小時以上。將96孔板從-80℃解凍後恢復至室溫，每孔吸取10μl細胞裂解液移至白色酶標板，用微孔板酶標儀(Genios Pro，Tecan)檢測海腎螢光素酶活性。海腎螢光素酶底物用量為每孔25μl。
pRL載體是將海腎螢光素酶基因與基礎性表達的啟動子偶聯，提供組成性表達的海腎螢光素酶。實驗過程中條件的改變會影響海腎螢光素酶的表達，這些因素包括細胞存活狀況(細胞數目、細胞健康狀況等)、轉染效率、細胞裂解效率及檢測效率等。在實驗系統誤差的前提下，同一塊96孔板的轉染及檢測效率基本近似，因此，海腎螢光素酶活性的明顯降低可以反映出細胞存活狀況的改變，我們以pcDT質粒作為對照，將與pRL質粒共轉染後引起海腎螢光素酶活性明顯降低的基因篩選出來。
結果如圖3所示基因NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13與pcDT比較，明顯降低了海腎螢光素酶活性。表明基因NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13可改變轉染細胞的存活狀況。
實施例4、利用染料觀察細胞存活狀況用實施例3中篩選出的基因單獨轉染293T細胞後，利用LIVE/DEADViability/Cytotoxicity Kit (Molecular Probe，L-3224)對細胞進行染色，按產品說明書所述進行操作，於倒置螢光顯微鏡(Zeiss，Axiovert 200M)下觀察細胞存活狀況(包括明場及螢光激發狀態)。具體操作步驟如下本實驗用96孔細胞培養板(Costar，3599)操作，每個待檢基因設置3個平行重複孔，分別以pcDT空質粒和Bax質粒做為空載體和陽性對照。下述步驟中的用量均為單孔用量。
(1)細胞培養將1.2×104個293T細胞用含10％胎牛血清的DMEM培養基鋪在96孔細胞培養板上(100μl培養液/孔)，置37℃，5％CO2的細胞培養箱中培養24小時。
(2)製備轉染工作液用2.5μl生理鹽水稀釋160ng待檢基因，輕輕混勻，室溫放置；同樣用2.5μl生理鹽水稀釋0.04μl VigoFect轉染試劑，輕輕混勻，室溫放置5分鐘；將稀釋的VigoFect轉染試劑逐滴加入至稀釋的待檢基因溶液中，輕輕混勻，是為轉染工作液，室溫放置15分鐘。
(3)轉染將轉染工作液輕輕混勻，逐滴加入至(1)中鋪好細胞的96孔細胞培養板中，輕輕混勻，置37℃，5％CO2細胞培養箱中培養24-48小時。
(4)鏡檢轉染24-48小時後，用Zeiss顯微鏡觀察細胞形態改變。待檢質粒分別與pcDT和Bax比較。結果如圖4所示，轉染NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13基因30小時後，所轉染的細胞基礎狀態較差，體積縮小，連接消失，核質濃縮色暗，且偏於一側。
(5)染色用5ml PBS稀釋10μl 2mM EthD-1(死細胞易染)儲存液至濃度為4μm，充分混勻；用5ml PBS溶液稀釋2.5μl 4mM Calcein AM(活細胞染料)儲存液，充分混勻；兩種染料終濃度分別為1μM Calcein AM和2μM EthD-1。棄去轉染細胞的培養液，用溫育的PBS(37℃)洗滌兩遍。加入50μl稀釋好的染料，置37℃，CO2培養箱中孵育30分鐘至1小時。
(6)鏡檢棄去染料，用PBS洗滌一遍，加入100μl PBS，用Zeiss倒置螢光顯微鏡觀察。Calcein AM激發光波長為485±10nm，發射光為530±12.5nm；EthD-1激發光波長為530±12.5nm，發射光為645±20nm。
結果如圖5所示，基因NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13與空載體比較，相同視野中所轉染細胞的存活狀態明顯不佳，紅染細胞(EthD-1染色細胞，發紅色螢光)較多，而綠染細胞(Calcein AM染色細胞，發綠色螢光)較少，與陽性對照Bax效果接近，說明NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13可明顯改變細胞存活狀態，並在不同程度上誘導所轉染細胞壞死或凋亡。
實施例5、流式細胞實驗用實施例3中篩選出的基因單獨轉染293T細胞後，利用流式細胞儀檢測待檢質粒的誘導細胞調亡的功能。具體操作步驟如下(1)細胞培養將293T細胞(1×105)用含10％胎牛血清的DMEM培養基鋪在24孔細胞培養板(Costar，3599)上，置37℃，5％CO2的細胞培養箱中培養16小時。
(2)製備轉染工作液用8μl生理鹽水稀釋500ng待檢質粒，輕輕混勻，室溫放置同樣用8μl生理鹽水稀釋0.16μl VigoFect轉染試劑，輕輕混勻，室溫放置5分鐘；將稀釋的VigoFect轉染試劑逐滴加入至稀釋的待檢質粒溶液中，輕輕混勻，室溫放置15分鐘。
(3)轉染將轉染工作液輕輕混勻，逐滴加入至細胞培養板(500μl培養液/孔)中，輕輕混勻，置37℃，5％CO2培養箱中培養24-48小時。
(4)製備單細胞懸液，流式細胞儀檢測轉染後24和48小時收穫細胞。吸出培養基，加入100μl胰酶(Hyclone，SH30042.01)，37℃消化3分鐘，再加入200μl含10％胎牛血清的DMEM培養基中和胰酶，吹吸數次使形成單細胞，移入流式管(FALCON，352052)，1500轉每分鐘(Eppendorf Centrifuge，5810R)室溫離心5分鐘，棄去上清。加入3ml PBS重懸細胞，1500轉每分鐘室溫離心5分鐘，棄去上清。重複上述洗細胞一次，並重懸於200μl Binding buffer(10mM Hepes，140mM NaCl，1mM MgCl2，5mM KCl，2.5mM CaCl2)，加入終濃度為1μg/ml FITC-Annexin-V(北京寶賽生物技術有限公司，CX1001-2)，室溫避光反應30分鐘，再加入終濃度為1μg/ml PI(北京寶賽生物技術有限公司，CX1001-2)。檢測使用流式細胞儀(FACSCalibur，BD，USA)。FITC標記的Annexin-V發綠色螢光，可以特異性結合於凋亡細胞特有的外翻於細胞膜外的磷脂醯絲氨酸，PI可以穿透死亡細胞的細胞膜，進而將細胞核染成紅色。Annexin-V與PI雙陰性的細胞即為活細胞，其餘為死亡細胞。
結果如圖6所示，不管是轉染24小時還是48小時，NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13與空載體比較均有陽性結果，與陽性對照Bax作用相似，只是各個基因作用程度不一，而48小時誘導細胞凋亡的效果比24小時更為顯著。說明NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13可以不同程度上誘導細胞調亡。
實施例6、抗體製備抗原選用原核細胞或真核細胞表達的NIAG1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13蛋白全長或部分肽段，也可以合成多肽作為抗原。
多克隆抗體的製備免疫動物選用成年雄性紐西蘭兔或BALb/c小鼠，初次免疫用200ug(紐西蘭兔)或20ug(BALb/c小鼠)抗原與等體積弗氏完全佐劑(FCA)充分乳化後，於背部皮下多點注射。初次免疫後21、42、63天，用弗氏不完全佐劑(FIA)完全乳化的抗原蛋白，各加強免疫1次，用量同前。每次免疫後7~10天，ELISA方法檢測血清效價，達到1×10-4時，放血分離血清.Western blot鑑定抗體特異性。
單克隆抗體製備免疫BALb/c小鼠同前，取脾臟製成B細胞懸液，與對數生長期的骨髓瘤細胞SP2/0融合，通過HAT(H次黃嘌呤；A氨基喋呤；T胸腺嘧啶核苷)選擇性培養，獲得雜交細胞系，再通過ELISA方法檢測抗體效價，篩選出特定的雜交瘤細胞系，並得到單克隆抗體。
序列表110北京諾賽基因組研究中心有限公司120誘導細胞凋亡的多核苷酸及其編碼多肽和用途130
16026170PatentIn version 3.321012111515212DNA213人220
221CDS222(217)..(804)4001cggaggagag cgcaggagga aacagtaccg gctggaggcc ggtcttgcag gagcggggga 60ctgctggggg cggggcttgg tggtgactgc tggcggggcg gggcctgggg ctcagagggg 120tgggctttgg agatcagagg gtcgacgctg cttcgttgcc tggactctgg tttccgccct 180ggagcaagcc ggggcctggt cggcagctgg gccgcc atg gag tcc acg ctg ggc 234Met Glu Ser Thr Leu Gly1 5gcg ggc atc gtg ata gcc gag gcg cta cag aac cag cta gcc tgg ctg 282Ala Gly Ile Val Ile Ala Glu Ala Leu Gln Asn Gln Leu Ala Trp Leu10 15 20gag aac gtg tgg ctc tgg atc acc ttt ctg ggc gat ccc aag atc ctc 330Glu Asn Val Trp Leu Trp Ile Thr Phe Leu Gly Asp Pro Lys Ile Leu25 30 35ttt ctg ttc tac ttc ccc gcg gcc tac tac gcc tcc cgc cgt gtg ggc 378Phe Leu Phe Tyr Phe Pro Ala Ala Tyr Tyr Ala Ser Arg Arg Val Gly40 45 50atc gcg gtg ctc tgg atc agc ctc atc acc gag tgg ctc aac ctc atc 426Ile Ala Val Leu Trp Ile Ser Leu Ile Thr Glu Trp Leu Asn Leu Ile55 60 65 70ttc aag tgg ttt ctt ttt gga gac agg ccc ttt tgg tgg gtc cat gag 474Phe Lys Trp Phe Leu Phe Gly Asp Arg Pro Phe Trp Trp Val His Glu
75 80 85tct ggt tac tac agc cag gct cca gcc cag gtt cac cag ttc ccc tct 522Ser Gly Tyr Tyr Ser Gln Ala Pro Ala Gln Val His Gln Phe Pro Ser90 95 100tct tgt gag act ggt cca ggc agc cct tct gga cac tgc atg atc aca 570Ser Cys Glu Thr Gly Pro Gly Ser Pro Ser Gly His Cys Met Ile Thr105 110 115gga gca gcc ctc tgg ccc ata atg acg gcc ctg tct tcg cag gtg gcc 618Gly Ala Ala Leu Trp Pro Ile Met Thr Ala Leu Ser Ser Gln Val Ala120 125 130act cgg gcc cgc agg cgc tgt cct ggg ctg gct gat gac tcc ccg agt 666Thr Arg Ala Arg Arg Arg Cys Pro Gly Leu Ala Asp Asp Ser Pro Ser135 140 145 150gcc tat gga gcg gga gct aag ctt cta tgg gtt gac tgc act ggc cct 714Ala Tyr Gly Ala Gly Ala Lys Leu Leu Trp Val Asp Cys Thr Gly Pro155 160 165cat gct agg cac cag cct cat cta ttg gac cct ctt tac act ggg cct 762His Ala Arg His Gln Pro His Leu Leu Asp Pro Leu Tyr Thr Gly Pro170 175 180gga tct ttc ttg gtc cat cag cct agc ctt caa gtg gtg tga 804Gly Ser Phe Leu Val His Gln Pro Ser Leu Gln Val Val185 190 195gcggcctgag tggatacacg tggatagccg gccctttgcc tccctgagcc gtgactcagg864ggctgccctg ggcctgggca ttgccttgca ctctccctgc tatgcccagg tgcgtcgggc924acagctggga aatggccaga agatagcctg ccttgtgctg gccatggggc tgctgggccc984cctggactgg ctgggccacc cccctcagat cagcctcttc tacattttca atttcctcaa1044gtacaccctc tggccatgcc tagtcctggc cctcgtgccc tgggcagtgc acatgttcag1104tgcccaggaa gcaccgccca tccactcttc ctgacttctt gtgtgcctcc ctttcctttc1164cctcccacaa agccaacact ctgtgaccac cacactccag gaggcagccc catccccttc1224cagcccctaa gtaggccctc ccctccctaa atctgcttcc gcaccacctg gtcttagccc1284caaagatggg ccttctctct cccagataag ttggtcctcc ctctgccttt cctctcaagc1344ccccaaagag caaaggcaac agcaagacca gcgggttctt gcaacactgt gaggggcagc1404cagggcggcc ccaataaagc ccttgaatac tttgaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa1464
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa a15152102211195212PRT213人4002Met Glu Ser Thr Leu Gly Ala Gly Ile Val Ile Ala Glu Ala Leu Gln1 5 10 15Asn Gln Leu Ala Trp Leu Glu Asn Val Trp Leu Trp Ile Thr Phe Leu20 25 30Gly Asp Pro Lys Ile Leu Phe Leu Phe Tyr Phe Pro Ala Ala Tyr Tyr35 40 45Ala Ser Arg Arg Val Gly Ile Ala Val Leu Trp Ile Ser Leu Ile Thr50 55 60Glu Trp Leu Asn Leu Ile Phe Lys Trp Phe Leu Phe Gly Asp Arg Pro65 70 75 80Phe Trp Trp Val His Glu Ser Gly Tyr Tyr Ser Gln Ala Pro Ala Gln85 90 95Val His Gln Phe Pro Ser Ser Cys Glu Thr Gly Pro Gly Ser Pro Ser100 105 110Gly His Cys Met Ile Thr Gly Ala Ala Leu Trp Pro Ile Met Thr Ala115 120 125Leu Ser Ser Gln Val Ala Thr Arg Ala Arg Arg Arg Cys Pro Gly Leu130 135 140Ala Asp Asp Ser Pro Ser Ala Tyr Gly Ala Gly Ala Lys Leu Leu Trp145 150 155 160
Val Asp Cys Thr Gly Pro His Ala Arg His Gln Pro His Leu Leu Asp165 170 175Pro Leu Tyr Thr Gly Pro Gly Ser Phe Leu Val His Gln Pro Ser Leu180 185 190Gln Val Val19521032112251212DNA213人220
221CDS222(186)..(1598)4003gacgtcacgg tcactgacag cgtgagcccg cggcggctgc tgccatggtg gctggcggcc 60gggtaagggt ctgagtggat ctcctgccag gccagagcgc cttcgggggc cgcggcggaa 120ggccaggagt ttgcagccag ggcgccgggt ttgtggtctg cagtgtcgtg aggctgaggt 180gcagc atg tct aga ctg gga gcc ctg ggt ggt gcc cgt gcc ggg ctg gga 230Met Ser Arg Leu Gly Ala Leu Gly Gly Ala Arg Ala Gly Leu Gly1 5 10 15ctg ttg ctg ggt acc gcc gcc ggc ctt gga ttc ctg tgc ctc ctt tac 278Leu Leu Leu Gly Thr Ala Ala Gly Leu Gly Phe Leu Cys Leu Leu Tyr20 25 30agc cag cga tgg aaa cgg acc cag cgt cat ggc cgc agc cag agc ctg 326Ser Gln Arg Trp Lys Arg Thr Gln Arg His Gly Arg Ser Gln Ser Leu35 40 45ccc aac tcc ctg gac tat acg cag act tca gat ccc gga cgc cac gtg 374Pro Asn Ser Leu Asp Tyr Thr Gln Thr Ser Asp Pro Gly Arg His Val50 55 60atg ctc ctg cgg gct gtc cca ggt ggg gct gga gat gcc tca gtg ctg 422Met Leu Leu Arg Ala Val Pro Gly Gly Ala Gly Asp Ala Ser Val Leu65 70 75ccc agc ctt cca cgg gaa gga cag gag aag gtg ctg gac cgc ctg gac 470Pro Ser Leu Pro Arg Glu Gly Gln Glu Lys Val Leu Asp Arg Leu Asp
80 85 90 95ttt gtg ctg acc agc ctt gtg gcg ctg cgg cgg gag gtg gag gag ctg 518Phe Val Leu Thr Ser Leu Val Ala Leu Arg Arg Glu Val Glu Glu Leu100 105 110aga agc agc ctg cga ggg ctt gcg ggg gag att gtt ggg gag gtc cga 566Arg Ser Ser Leu Arg Gly Leu Ala Gly Glu Ile Val Gly Glu Val Arg115 120 125tgc cac atg gaa gag aac cag aga gtg gct cgg cgg cga agg ttt ccg 614Cys His Met Glu Glu Asn Gln Arg Val Ala Arg Arg Arg Arg Phe Pro130 135 140ttt gtc cgg gag agg agt gac tcc act ggc tcc agc tct gtc tac ttc 662Phe Val Arg Glu Arg Ser Asp Ser Thr Gly Ser Ser Ser Val Tyr Phe145 150 155acg gcc tcc tcg gga gcc acg ttc aca gat gct gag agt gaa ggg ggt 710Thr Ala Ser Ser Gly Ala Thr Phe Thr Asp Ala Glu Ser Glu Gly Gly160 165 170 175tac aca aca gcc aat gcg gag tct gac aat gag cgg gac tct gac aaa 758Tyr Thr Thr Ala Asn Ala Glu Ser Asp Asn Glu Arg Asp Ser Asp Lys180 185 190gaa agt gag gac ggg gaa gat gaa gtg agc tgt gag act gtg aag atg 806Glu Ser Glu Asp Gly Glu Asp Glu Val Ser Cys Glu Thr Val Lys Met195 200 205ggg aga aag gat tct ctt gac ttg gag gaa gag gca gct tca ggt gcc 854Gly Arg Lys Asp Ser Leu Asp Leu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Gly Ala210 215 220tcc agt gcc ctg gag gct gga ggt tcc tca ggc ttg gag gat gtg ctg 902Ser Ser Ala Leu Glu Ala Gly Gly Ser Ser Gly Leu Glu Asp Val Leu225 230 235ccc ctc ctg cag cag gcc gac gag ctg cac agg ggt gat gag caa ggc 950Pro Leu Leu Gln Gln Ala Asp Glu Leu His Arg Gly Asp Glu Gln Gly240 245 250 255aag cgg gag ggc ttc cag ctg ctg ctc aac aac aag ctg gtg tat gga 998Lys Arg Glu Gly Phe Gln Leu Leu Leu Asn Asn Lys Leu Val Tyr Gly260 265 270agc cgg cag gac ttt ctc tgg cgc ctg gcc cga gcc tac agt gac atg 1046Ser Arg Gln Asp Phe Leu Trp Arg Leu Ala Arg Ala Tyr Ser Asp Met275 280 285tgt gag ctc act gag gag gtg agc gag aag aag tca tat gcc cta gat 1094
Cys Glu Leu Thr Glu Glu Val Ser Glu Lys Lys Ser Tyr Ala Leu Asp290 295 300gga aaa gaa gaa gca gag gct gct ctg gag aag ggg gat gag agt gct 1142Gly Lys Glu Glu Ala Glu Ala Ala Leu Glu Lys Gly Asp Glu Ser Ala305 310 315gac tgt cac ctg tgg tat gcg gtg ctt tgt ggt cag ctg gct gag cat 1190Asp Cys His Leu Trp Tyr Ala Val Leu Cys Gly Gln Leu Ala Glu His320 325 330 335gag agc atc cag agg cgc atc cag agt ggc ttt agc ttc aag gag cat 1238Glu Ser Ile Gln Arg Arg Ile Gln Ser Gly Phe Ser Phe Lys Glu His340 345 350gtg gac aaa gcc att gct ctc cag cca gaa aac ccc atg gct cac ttt 1286Val Asp Lys Ala Ile Ala Leu Gln Pro Glu Asn Pro Met Ala His Phe355 360 365ctt ctt ggc agg tgg tgc tat cag gtc tct cac ctg agc tgg cta gaa 1334Leu Leu Gly Arg Trp Cys Tyr Gln Val Ser His Leu Ser Trp Leu Glu370 375 380aaa aaa act gct aca gcc ttg ctt gaa agc cct ctc agt gcc act gtg 1382Lys Lys Thr Ala Thr Ala Leu Leu Glu Ser Pro Leu Ser Ala Thr Val385 390 395gaa gat gcc ctc cag agc ttc cta aag gct gaa gaa cta cag cca gga 1430Glu Asp Ala Leu Gln Ser Phe Leu Lys Ala Glu Glu Leu Gln Pro Gly400 405 410 415ttt tcc aaa gca gga agg gta tat att tcc aag tgc tac aga gaa cta 1478Phe Ser Lys Ala Gly Arg Val Tyr Ile Ser Lys Cys Tyr Arg Glu Leu420 425 430ggg aaa aac tct gaa gct aga tgg tgg atg aag ttg gcc ctg gag ctg 1526Gly Lys Asn Ser Glu Ala Arg Trp Trp Met Lys Leu Ala Leu Glu Leu435 440 445cca gat gtc acg aag gag gat ttg gct atc cag aag gac ctg gaa gaa 1574Pro Asp Val Thr Lys Glu Asp Leu Ala Ile Gln Lys Asp Leu Glu Glu450 455 460ctg gaa gtc att tta cga gac taa ccacgtttca ctggccttca tgacttgatg1628Leu Glu Val Ile Leu Arg Asp465 470ccactattta aggtgggggg gcggggaggc ttttttcctt agaccttgct gagatcagga 1688aaccacacaa atctgtctcc tgggtctgac tgctacccac taccactccc cattagttaa 1748
tttattctaa cctctaacct aatctagaat tggggcagta ctcatggctt ccgtttctgt 1808tgttctctcc cttgagtaat ctcttaaaaa aatcaagatt cacacctgcc ccaggattac 1868acatgggtag agcctgcaag acctgagacc ttccaattgc tggtgaggtg gatgaacttc 1928aaagctatag gaacaaagca cataacttgt cactttaatc tttttcactg actaatagga 1988ctcagtacat atagtcttaa gatcatacct tacctaccaa ggtaaaaaga gggatcagag 2048tggcccacag acattgcttt cttatcacct atcatgtgaa ttctacctgt attccagggc 2108tggaccactt gataacttcc agtgtcctgg cagcttttgg aatgacagca gtggtatggg 2168gtttatgatg ctataaaaca atgtctgaaa agttgcctag aatatatttt gttacaaact 2228tgaaataaac caaatttgat gtt 22512104211470212PRT213人4004Met Ser Arg Leu Gly Ala Leu Gly Gly Ala Arg Ala Gly Leu Gly Leu1 5 10 15Leu Leu Gly Thr Ala Ala Gly Leu Gly Phe Leu Cys Leu Leu Tyr Ser20 25 30Gln Arg Trp Lys Arg Thr Gln Arg His Gly Arg Ser Gln Ser Leu Pro35 40 45Asn Ser Leu Asp Tyr Thr Gln Thr Ser Asp Pro Gly Arg His Val Met50 55 60Leu Leu Arg Ala Val Pro Gly Gly Ala Gly Asp Ala Ser Val Leu Pro65 70 75 80Ser Leu Pro Arg Glu Gly Gln Glu Lys Val Leu Asp Arg Leu Asp Phe85 90 95Val Leu Thr Ser Leu Val Ala Leu Arg Arg Glu Val Glu Glu Leu Arg
100 105 110Ser Ser Leu Arg Gly Leu Ala Gly Glu Ile Val Gly Glu Val Arg Cys115 120 125His Met Glu Glu Asn Gln Arg Val Ala Arg Arg Arg Arg Phe Pro Phe130 135 140Val Arg Glu Arg Ser Asp Ser Thr Gly Ser Ser Ser Val Tyr Phe Thr145 150 155160Ala Ser Ser Gly Ala Thr Phe Thr Asp Ala Glu Ser Glu Gly Gly Tyr165 170 175Thr Thr Ala Asn Ala Glu Ser Asp Asn Glu Arg Asp Ser Asp Lys Glu180 185 190Ser Glu Asp Gly Glu Asp Glu Val Ser Cys Glu Thr Val Lys Met Gly195 200 205Arg Lys Asp Ser Leu Asp Leu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Gly Ala Ser210 215 220Ser Ala Leu Glu Ala Gly Gly Ser Ser Gly Leu Glu Asp Val Leu Pro225 230 235 240Leu Leu Gln Gln Ala Asp Glu Leu His Arg Gly Asp Glu Gln Gly Lys245 250 255Arg Glu Gly Phe Gln Leu Leu Leu Asn Asn Lys Leu Val Tyr Gly Ser260 265 270Arg Gln Asp Phe Leu Trp Arg Leu Ala Arg Ala Tyr Ser Asp Met Cys275 280 285Glu Leu Thr Glu Glu Val Ser Glu Lys Lys Ser Tyr Ala Leu Asp Gly290 295 300
Lys Glu Glu Ala Glu Ala Ala Leu Glu Lys Gly Asp Glu Ser Ala Asp305 310 315 320Cys His Leu Trp Tyr Ala Val Leu Cys Gly Gln Leu Ala Glu His Glu325 330 335Ser Ile Gln Arg Arg Ile Gln Ser Gly Phe Ser Phe Lys Glu His Val340 345 350Asp Lys Ala Ile Ala Leu Gln Pro Glu Asn Pro Met Ala His Phe Leu355 360 365Leu Gly Arg Trp Cys Tyr Gln Val Ser His Leu Ser Trp Leu Glu Lys370 375 380Lys Thr Ala Thr Ala Leu Leu Glu Ser Pro Leu Ser Ala Thr Val Glu385 390 395 400Asp Ala Leu Gln Ser Phe Leu Lys Ala Glu Glu Leu Gln Pro Gly Phe405 410 415Ser Lys Ala Gly Arg Val Tyr Ile Ser Lys Cys Tyr Arg Glu Leu Gly420 425 430Lys Asn Ser Glu Ala Arg Trp Trp Met Lys Leu Ala Leu Glu Leu Pro435 440 445Asp Val Thr Lys 6lu Asp Leu Ala Ile Gln Lys Asp Leu Glu Glu Leu450 455 460Glu Val Ile Leu Arg Asp465 47021052112310212DNA213人220
221CDS222(148)..(675)4005cggacgcgtg gggagaggct gtttaccaga acagcataac aagggcaggt ctgactgcaa60ggctgggact gggaggcaga gccgccgcca agggggcctc ggttaaacac tggtcgttca120atcacctgca agacgaagga ggcaagg atg ctg ttg gcc tgg gta caa gca ttc174Met Leu Leu Ala Trp Val Gln Ala Phe1 5ctc gtc agc aac atg ctc cta gca gaa gcc tat gga tct gga ggg gcc 222Leu Val Ser Asn Met Leu Leu Ala Glu Ala Tyr Gly Ser Gly Gly Ala10 15 20 25ggc aat cac agt tac tgc cga aac ccg gac gag gac ccg cgc ggg ccc 270Gly Asn His Ser Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Glu Asp Pro Arg Gly Pro30 35 40tgg tgc tac gtc agt ggc gag gcc ggc gtc cct gag aaa cgg cct tgc 318Trp Cys Tyr Val Ser Gly Glu Ala Gly Val Pro Glu Lys Arg Pro Cys45 50 55gag gac ctg cgc tgt cca gag acc acc tcc cag gcc ctg cca gcc ttc 366Glu Asp Leu Arg Cys Pro Glu Thr Thr Ser Gln Ala Leu Pro Ala Phe60 65 70acg aca gaa atc cag gaa gcg tct gaa ggg cca ggt gca gat gag gtg 414Thr Thr Glu Ile Gln Glu Ala Ser Glu Gly Pro Gly Ala Asp Glu Val75 80 85cag gtg ttc gct cct gcc aac gcc ctg ccc gct cgg agt gag gcg gca 462Gln Val Phe Ala Pro Ala Asn Ala Leu Pro Ala Arg Ser Glu Ala Ala90 95 100 105gct gtg cag cca gtg att ggg atc agc cag cgg gtg cgg atg aac tcc 510Ala Val Gln Pro Val Ile Gly Ile Ser Gln Arg Val Arg Met Asn Ser110 115 120aag gag aaa aag gac ctg gga act ctg ggc tac gtg ctg ggc att acc 558Lys Glu Lys Lys Asp Leu Gly Thr Leu Gly Tyr Val Leu Gly Ile Thr125 130 135atg atg gtg atc atc att gcc atc gga gct ggc atc atc ttg ggc tac 606Met Met Val Ile Ile Ile Ala Ile Gly Ala Gly Ile Ile Leu Gly Tyr140 145 150tcc tac aag agg ggg aag gat ttg aaa gaa cag cat gat cag aaa gta 654Ser Tyr Lys Arg Gly Lys Asp Leu Lys Glu Gln His Asp Gln Lys Val155 160 165
tgt gag agg gag atg cag tga atcactctgc ccttgtctgc cttcaccaac 705Cys Glu Arg Glu Met Gln170 175cccacctgtg agattgtgga tgagaagact gtcgtggtcc acaccagcca gactccagtt765gaccctcagg agggcagcac cccccttatg ggccaggccg ggactcctgg ggcctgagcc825cccccagtgg gcaggagccc atgcagacac tggtgcagga cagcccaccc tcctacagct885aggaggaact accactttgt gttctggtta aaaccctacc actcccccgc ttttttggcg945aatcctagta agagtgacag aagcaggtgg ccctgtgggc tgagggtaag gctgggtagg1005gtcctaacag tgctccttgt ccatcccttg gagcagattt tgtctgtgga tggagacagt1065ggcagctccc acagtgatgc tgctgctaag ggcttccaaa cattgcctgc acccctggaa1125ctgaaccagg gatagacggg gagctccccc aggctcctct gtgctttact aagatggcct1185cagtctccac tgtgggcttg agtggcatac actgttattc atggttaagg taaagcaggt1245caagggatgg cattgaaaaa atatatttag tttttaaaat atttgggatg gaactcccta1305ctgacctctg agaactggaa acgagtttgt acagaagtca gaactttggg ttgggaatga1365gatctaggtt gtggctgctg gtatgcttca gcttgctggc aatgatgtgc cttgacaacc1425gtgggccagg cctgggccca gggactcttc ctgtttcata aggaaaggaa gaattgcact1485gagcattcca cttaggaaga ggatagagaa ggatctgctc cgcctttggc cacaggagca1545gaggcagacc tgggatgccc cagtttctct tcagggatgg atagtgacct gtcttcattt1605tgcacaggta agagagtagt tagctaacct atgggaatta tactgtgggg ccttgtgagc1665tgcttctaag aggctaacct ggaaactaag ctcagaggca aggtaataaa gcacttcagg1725gcttgctccc caagtgggcc tgatttagca ggtggtcctg cgggcgtcca ggtcagcacc1785ttcctgtagg gcactggggc tagggtcaca gcccctaact cataaagcaa tcaaagaacc1845attagaaagg gctcattaag ccttttggac acaggacccc agagaggaaa aagtgacttg1905cccaaggtcg taagcaagct actggcatgg caagagccca gcttcctgac ggagcgcaac1965atttctccac tgcactgtgc tagcagctca gcagggcctc taacctgtga tgtcacactc2025aagaggcctt ggcagctcct agccatagag cttcctttcc agaacccttc cactgcccaa2085
tgtggagaca ggggttagtg gggctttcta tggagccatc tgctttgggg acctagacct2145caggtggtct cttggtgtta gtgatgctgg agaagagaat attactggtt tctacttttc2205tataaaggca tttctctata tacatgtttt atatacctca ttctgacacc tgcatatagt2265gtgggaaatt gctctgcatt tgacttaatt aaaaaaaaaa aaaaa23102106211175212PRT213人4006Met Leu Leu Ala Trp Val Gln Ala Phe Leu Val Ser Asn Met Leu Leu1 5 10 15Ala Glu Ala Tyr Gly Ser Gly Gly Ala Gly Asn His Ser Tyr Cys Arg20 25 30Asn Pro Asp Glu Asp Pro Arg Gly Pro Trp Cys Tyr Val Ser Gly Glu35 40 45Ala Gly Val Pro Glu Lys Arg Pro Cys Glu Asp Leu Arg Cys Pro Glu50 55 60Thr Thr Ser Gln Ala Leu Pro Ala Phe Thr Thr Glu Ile Gln Glu Ala65 70 75 80Ser Glu Gly Pro Gly Ala Asp Glu Val Gln Val Phe Ala Pro Ala Asn85 90 95Ala Leu Pro Ala Arg Ser Glu Ala Ala Ala Val Gln Pro Val Ile Gly100 105 110Ile Ser Gln Arg Val Arg Met Asn Ser Lys Glu Lys Lys Asp Leu Gly115 120 125Thr Leu Gly Tyr Val Leu Gly Ile Thr Met Met Val Ile Ile Ile Ala130 135 140
Ile Gly Ala Gly Ile Ile Leu Gly Tyr Ser Tyr Lys Arg Gly Lys Asp145 150 155 160Leu Lys Glu Gln His Asp Gln Lys Val Cys Glu Arg Glu Met Gln165 170 1752107211846212DNA213人220
221CDS222(102)..(653)4007ggcacgaggg agcacggccc gcgggcggcg ttcgctggag ctggtggacc gggcggcggg60gcagaccgct ggggactgcg ggcggcgctg tgtccgtcgc c atg aca gat cag acc116Met Thr Asp Gln Thr1 5tat tgt gac cgc ctg gtg cag gac acg cct ttc ctg aca ggc cat ggg 164Tyr Cys Asp Arg Leu Val Gln Asp Thr Pro Phe Leu Thr Gly His Gly10 15 20cgc ttg agt gag cag cag gtg gac agg atc atc ctc cag ctg aac cgt 212Arg Leu Ser Glu Gln Gln Val Asp Arg Ile Ile Leu Gln Leu Asn Arg25 30 35tac tac cca cag atc ctt acc aac aag gag gcg gaa aag ttc cgg aac 260Tyr Tyr Pro Gln Ile Leu Thr Asn Lys Glu Ala Glu Lys Phe Arg Asn40 45 50ccc aag gca tcc ttg cgt gtg cgg ctc tgt gac ctc ctg agc cac ctg 308Pro Lys Ala Ser Leu Arg Val Arg Leu Cys Asp Leu Leu Ser His Leu55 60 65cag cgg agc ggt gag cgg gac tgc cag gag ttc tac cga gcc ctg tat 356Gln Arg Ser Gly Glu Arg Asp Cys Gln Glu Phe Tyr Arg Ala Leu Tyr70 75 80 85atc cat gcc cag ccc ctg cac agc cgc ctg ccc agc cgc cac gct ctg 404Ile His Ala Gln Pro Leu His Ser Arg Leu Pro Ser Arg His Ala Leu90 95 100cag aac tca gat tgc aca gag cta gac tcg ggc agc cag agc ggc gag 452
Gln Asn Ser Asp Cys Thr Glu Leu Asp Ser Gly Ser Gln Ser Gly Glu105 110 115ctg agt aac agg gga ccc atg agc ttc ctg gct ggc ctg ggc ctt gct 500Leu Ser Asn Arg Gly Pro Met Ser Phe Leu Ala Gly Leu Gly Leu Ala120 125 130gtg gga ctg gcc ctg ctc ctg tac tgc tat ccg cca gac ccc aag ggc 548Val Gly Leu Ala Leu Leu Leu Tyr Cys Tyr Pro Pro Asp Pro Lys Gly135 140 145ctg cca ggg acc cgg cgc gtc ctc ggt ttc tcg cct gtc atc atc gac 596Leu Pro Gly Thr Arg Arg Val Leu Gly Phe Ser Pro Val Ile Ile Asp150 155 160 165aga cat gtc agc cgc tac ctg ctg gcc ttc ctg gca gat gac cta ggg 644Arg His Val Ser Arg Tyr Leu Leu Ala Phe Leu Ala Asp Asp Leu Gly170 175 180ggg ctc tga cagaccctgg acccagggcc tcacctgcca ctcaaccaaa 693Gly Leugagtcctcga gccggcctgc caaggggact gctgcttctt tttctaaatg catatttttc753attatttata atttgtgtaa aaaacacacc ttcaccttac aaggtgctga ccatattaaa813tgttcaagtt ctctcaaaaa aaaaaaaaaa aaa 8462108211183212PRT213人4008Met Thr Asp Gln Thr Tyr Cys Asp Arg Leu Val Gln Asp Thr Pro Phe1 5 10 15Leu Thr Gly His Gly Arg Leu Ser Glu Gln Gln Val Asp Arg Ile Ile20 25 30Leu Gln Leu Asn Arg Tyr Tyr Pro Gln Ile Leu Thr Asn Lys Glu Ala35 40 45Glu Lys Phe Arg Asn Pro Lys Ala Ser Leu Arg Val Arg Leu Cys Asp50 55 60
Leu Leu Ser His Leu Gln Arg Ser Gly Glu Arg Asp Cys Gln Glu Phe65 70 75 80Tyr Arg Ala Leu Tyr Ile His Ala Gln Pro Leu His Ser Arg Leu Pro85 90 95Ser Arg His Ala Leu Gln Asn Ser Asp Cys Thr Glu Leu Asp Ser Gly100 105 110Ser Gln Ser Gly Glu Leu Ser Asn Arg Gly Pro Met Ser Phe Leu Ala115 120 125Gly Leu Gly Leu Ala Val Gly Leu Ala Leu Leu Leu Tyr Cys Tyr Pro130 135 140Pro Asp Pro Lys Gly Leu Pro Gly Thr Arg Arg Val Leu Gly Phe Ser145 150 155 160Pro Val Ile Ile Asp Arg His Val Ser Arg Tyr Leu Leu Ala Phe Leu165 170 175Ala Asp Asp Leu Gly Gly Leu18021092111753212DNA213人220
221CDS222(211)..(786)4009gtttaggggt gggatcgggt cgggatccgg accagccaag gaagggtcca ggtgccgcgg60atcttgagaa ggaggcgtgg cctggcgctg ggattggcgc cggatgcacc ccgggttgtg120gagtttgggg atcctcatcc ggcgccctct ccccttccag gagtgcacag tctgcgggtg180
gaccggggaa agaagacgta cttcatcgtc atg cag agc gtc ttc tac ccc gcc 234Met Gln Ser Val Phe Tyr Pro Ala1 5ggc cgc atc tcc gag agg tat gac atc aaa ggc tgc gag gtg agc cgc 282Gly Arg Ile Ser Glu Arg Tyr Asp Ile Lys Gly Cys Glu Val Ser Arg10 15 20tgg gtg gat ccc gcc cct gag ggc agc ccc ctt gtt ctg gtg ctg aag 330Trp Val Asp Pro Ala Pro Glu Gly Ser Pro Leu Val Leu Val Leu Lys25 30 35 40gac ctc aac ttt cag ggc aag acc atc aac ctg ggg ccc cag cgg agc 378Asp Leu Asn Phe Gln Gly Lys Thr Ile Asn Leu Gly Pro Gln Arg Ser45 50 55tgg ttc ctc cgc cag atg gaa ctg gat acc acc ttc ctc cgg gag ctc 426Trp Phe Leu Arg Gln Met Glu Leu Asp Thr Thr Phe Leu Arg Glu Leu60 65 70aac gtg ctg gat tac agc ctc ctg ata gcc ttc caa cgt ctc cac gag 474Asn Val Leu Asp Tyr Ser Leu Leu Ile Ala Phe Gln Arg Leu His Glu75 80 85gat gag agg ggc ccg ggc agc agc ctc atc ttc cgc acg gcc agg tct 522Asp Glu Arg Gly Pro Gly Ser Ser Leu Ile Phe Arg Thr Ala Arg Ser90 95 100gtg caa ggg gca cag agc ccg gaa gag tcg aga gcc caa aac cgc cgg 570Val Gln Gly Ala Gln Ser Pro Glu Glu Ser Arg Ala Gln Asn Arg Arg105 110 115 120ctg ctg ccc gac gcc ccc aac gcc cta cac atc ctg gac ggg ccc gag 618Leu Leu Pro Asp Ala Pro Asn Ala Leu His Ile Leu Asp Gly Pro Glu125 130 135cag cgc tat ttc ctg ggc gtc gtg gat ctc gcc aca gtc tac ggg ctc 666Gln Arg Tyr Phe Leu Gly Val Val Asp Leu Ala Thr Val Tyr Gly Leu140 145 150cgc aag cgg ctg gag cac ctg tgg aag aca ctg cgc tac cca ggc cgg 714Arg Lys Arg Leu Glu His Leu Trp Lys Thr Leu Arg Tyr Pro Gly Arg155 160 165acc ttc tcc act gtc agc ccg gct cgc tac gcc cgt cgc ctc tgc cag 762Thr Phe Ser Thr Val Ser Pro Ala Arg Tyr Ala Arg Arg Leu Cys Gln170 175 180tgg gtg gag gcg cac acg gag tga cgggcgcccg gccccactct ccggatctgg 816Trp Val Glu Ala His Thr Glu185 190
acgatgggct cacgccagga acgccggttc ccccgggccc gggcatctcg cctgcgcttc876ctcctgatgg tcgccagagg gcagcatccc ctaactaata ccgtaaccgc gcagtcccgt936ttgacggtgg tgccgtgccc agcatcgtgc caaggactcc cctactttag ctcatttaat996cctcaaaaaa tgctattatt ctctttttac agaccatgaa atggaggctc agggggtgaa1056gggactgatc aagatcattc agcaataaat gctggaacca ggactcaacc atggcttttg1116gattccggag cctgtattct taaccaccag ctcctgcagc ttggtcctca tgatctgggc1176aaggggggag gctgaaggct gcagccctct tgtcatccag atggggaaac tgaggcccag1236agactttaag gggcgtaagc acgggtaagt ggcaaggtcg gccctgagta cccaggcctc1296ccggccccct gctcctggcc tgatactcta gggatgcagg tgggagaagc aggggtcctg1356ggggctgcct ggagctctgg gaggcattct gaacggggtc tactactgat ctcaggtgag1416ctctgccctc ctctgaaagt cacttttctc atcagttaaa tgggggcaag ggtccgtggt1476ccgaccaagg tcttggcttc acagacatca ccaggagcct gcatgcccct gatcactcct1536tctccttcct ccaggaaact ccagcctggc ctctgacccc agttcaatcc gaccatgccc1596aagcccaagc gggcctttcc tccagaactg ctccggggcc tggctgtgtg actggagcaa1656ggtgctaaac ctctctgtgc ctcgctggtc taatctgtaa aatgaaggaa tggaaacaga1716cctcattaac tcattaaata tttgttgagc acctgcc 175321010211191212PRT213人40010Met Gln Ser Val Phe Tyr Pro Ala Gly Arg Ile Ser Glu Arg Tyr Asp1 5 10 15Ile Lys Gly Cys Glu Val Ser Arg Trp Val Asp Pro Ala Pro Glu Gly20 25 30Ser Pro Leu Val Leu Val Leu Lys Asp Leu Asn Phe Gln Gly Lys Thr35 40 45
Ile Asn Leu Gly Pro Gln Arg Ser Trp Phe Leu Arg Gln Met Glu Leu50 55 60Asp Thr Thr Phe Leu Arg Glu Leu Asn Val Leu Asp Tyr Ser Leu Leu65 70 75 80Ile Ala Phe Gln Arg Leu His Glu Asp Glu Arg Gly Pro Gly Ser Ser85 90 95Leu Ile Phe Arg Thr Ala Arg Ser Val Gln Gly Ala Gln Ser Pro Glu100 105 110Glu Ser Arg Ala Gln Asn Arg Arg Leu Leu Pro Asp Ala Pro Asn Ala115 120 125Leu His Ile Leu Asp Gly Pro Glu Gln Arg Tyr Phe Leu Gly Val Val130 135 140Asp Leu Ala Thr Val Tyr Gly Leu Arg Lys Arg Leu Glu His Leu Trp145 150 155 160Lys Thr Leu Arg Tyr Pro Gly Arg Thr Phe Ser Thr Val Ser Pro Ala165 170 175Arg Tyr Ala Arg Arg Leu Cys Gln Trp Val Glu Ala His Thr Glu180 185 190210112112686212DNA213人220
221CDS222(78)..(1856)40011tcctcgatgc caagaagagc ctgaacctca acatcttcct gaagcaattt aagtgctcca60
acgaggaggt cgctgct atg atc cgg gct gga gat acc acc aag ttt gat110Met Ile Arg Ala Gly Asp Thr Thr Lys Phe Asp1 5 10gtg gag gtt ctc aaa caa ctc ctt aag ctc ctt ccc gag aag cac gag 158Val Glu Val Leu Lys Gln Leu Leu Lys Leu Leu Pro Glu Lys His Glu15 20 25att gaa aac ctg cgg gca ttc aca gag gag cga gcc aag ctg gcc agc 206Ile Glu Asn Leu Arg Ala Phe Thr Glu Glu Arg Ala Lys Leu Ala Ser30 35 40gcc gac cacttc tac ctc ctc ctg ctg gcc att ccc tgc tac cag ctg254Ala Asp His Phe Tyr Leu Leu Leu Leu Ala Ile Pro Cys Tyr Gln Leu45 50 55cga atc gag tgc atg ctg ctg tgt gag ggc gcg gcc gcc gtg ctg gac 302Arg Ile Glu Cys Met Leu Leu Cys Glu Gly Ala Ala Ala Val Leu Asp60 65 70 75atg gtg cgg ccc aag gcc cag ctg gtg ctg gct gcc tgc gaa agc ctg 350Met Val Arg Pro Lys Ala Gln Leu Val Leu Ala Ala Cys Glu Ser Leu80 85 90ctc acc agc cgc cag ctg ccc atc ttc tgc cag ctg atc ctg aga att 398Leu Thr Ser Arg Gln Leu Pro Ile Phe Cys Gln Leu Ile Leu Arg Ile95 100 105ggg aac ttc ctc aac tac ggc agc cac acc ggt gac gcc gac ggc ttc 446Gly Asn Phe Leu Asn Tyr Gly Ser His Thr Gly Asp Ala Asp Gly Phe110 115 120aag atc agc aca ttg ctg aag ctc acg gag acc aag tcc cag cag aac 494Lys Ile Ser Thr Leu Leu Lys Leu Thr Glu Thr Lys Ser Gln Gln Asn125 130 135cgc gtg acg ctg ctg cac cac gtg ctg gag gaa gcg gaa aag agc cac 542Arg Val Thr Leu Leu His His Val Leu Glu Glu Ala Glu Lys Ser His140 145 150 155ccc gac ctc ctg cag ctg ccc cgg gac ctg gaa cag ccc tcg caa gca 590Pro Asp Leu Leu Gln Leu Pro Arg Asp Leu Glu Gln Pro Ser Gln Ala160 165 170gca ggg atc aac ctg gag atc atc cgc tca gag gcc agc tcc aac ctg 638Ala Gly Ile Asn Leu Glu Ile Ile Arg Ser Glu Ala Ser Ser Asn Leu175 180 185aag aag ctt ctg gag acc gag cgg aag gtg tct gcc tcc gtg gcc gag 686Lys Lys Leu Leu Glu Thr Glu Arg Lys Val Ser Ala Ser Val Ala Glu190 195 200
gtc cag gag cag tac acc gag cgc ctc cag gcc agc atc tcg gcc ttc 734Val Gln Glu Gln Tyr Thr Glu Arg Leu Gln Ala Ser Ile Ser Ala Phe205 210 215cgg gca ctg gac gag ctg ttt gag gcc atc gag cag aag caa cgg gag 782Arg Ala Leu Asp Glu Leu Phe Glu Ala Ile Glu Gln Lys Gln Arg Glu220 225 230 235ctg gcc gac tac ctg tgt gag gac gcc cag cag ctg tcc ctg gag gac 830Leu Ala Asp Tyr Leu Cys Glu Asp Ala Gln Gln Leu Ser Leu Glu Asp240 245 250acg ttc agc acc atg aag gct ttc cgg gac ctt ttc ctc cgc gcc ctg 878Thr Phe Ser Thr Met Lys Ala Phe Arg Asp Leu Phe Leu Arg Ala Leu255 260 265aag gag aac aag gac cgg aag gag cag gcg gcg aag gca gag agg agg 926Lys Glu Asn Lys Asp Arg Lys Glu Gln Ala Ala Lys Ala Glu Arg Arg270 275 280aag cag cag ctg gcg gag gag gag gcg cgg cgg cct cgg gga gag gac 974Lys Gln Gln Leu Ala Glu Glu Glu Ala Arg Arg Pro Arg Gly Glu Asp285 290 295ggg aag cct gtc agg aag ggg ccc ggg aag cag gag gag gtg tgt gtc 1022Gly Lys Pro Val Arg Lys Gly Pro Gly Lys Gln Glu Glu Val Cys Val300 305 310 315atc gat gcc ctg ctg gct gac atc agg aag ggc ttc cag ctg cgg aag 1070Ile Asp Ala Leu Leu Ala Asp Ile Arg Lys Gly Phe Gln Leu Arg Lys320 325 330aca gcc cgg ggc cgc ggg gac acc gac ggg ggc agc aag gca gcc tcc 1118Thr Ala Arg Gly Arg Gly Asp Thr Asp Gly Gly Ser Lys Ala Ala Ser335 340 345atg gat ccc cca aga gcc aca gag cct gtg gcc acc agt aac cct gca 1166Met Asp Pro Pro Arg Ala Thr Glu Pro Val Ala Thr Ser Asn Pro Ala350 355 360gga gac ccc gtg ggc agc acg cgc tgt ccc gcc tct gag ccc ggc ctt 1214Gly Asp Pro Val Gly Ser Thr Arg Cys Pro Ala Ser Glu Pro Gly Leu365 370 375gat gct aca aca gcc agc gag tcc cgg ggc tgg gac ctt gta gac gcc 1262Asp Ala Thr Thr Ala Ser Glu Ser Arg Gly Trp Asp Leu Val Asp Ala380 385 390 395gtg acc ccc ggc cct cag ccc acc ctg gag cag ttg gag gag ggt ggt 1310Val Thr Pro Gly Pro Gln Pro Thr Leu Glu Gln Leu Glu Glu Gly Gly
400 405 410ccg cgg ccc ctg gag agg cgt tct tcc tgg tat gtg gat gcc agc gat 1358Pro Arg Pro Leu Glu Arg Arg Ser Ser Trp Tyr Val Asp Ala Ser Asp415 420 425gtc cta acc act gag gat ccc cag tgc ccc cag ccc ttg gag ggg gcc 1406Val Leu Thr Thr Glu Asp Pro Gln Cys Pro Gln Pro Leu Glu Gly Ala430 435 440tgg ccg gtg act ctg gga gat gct cag gcc ctg aag ccc ctc aag ttc 1454Trp Pro Val Thr Leu Gly Asp Ala Gln Ala Leu Lys Pro Leu Lys Phe445 450 455tcc agc aac cag ccc cct gca gcc gga agt tca agg caa gat gcc aag 1502Ser Ser Asn Gln Pro Pro Ala Ala Gly Ser Ser Arg Gln Asp Ala Lys460 465 470 475gat ccc acg tcc ttg ctg ggc gtc ctc cag gcc gag gcc gac agc aca 1550Asp Pro Thr Ser Leu Leu Gly Val Leu Gln Ala Glu Ala Asp Ser Thr480 485 490agt gag ggg ctg gag gac gct gtc cac agc cgt ggt gcc aga ccc cct 1598Ser Glu Gly Leu Glu Asp Ala Val His Ser Arg Gly Ala Arg Pro Pro495 500 505gca gca ggc cca ggt ggg gat gag gac gag gac gag gag gac aca gcc 1646Ala Ala Gly Pro Gly Gly Asp Glu Asp Glu Asp Glu Glu Asp Thr Ala510 515 520cca gag tcc gca ctg gac aca tcc ctg gac aag tcc ttc tcc gag gat 1694Pro Glu Ser Ala Leu Asp Thr Ser Leu Asp Lys Ser Phe Ser Glu Asp525 530 535gcg gtg acc gac tcc tcg ggg tcg ggc aca ctc ccc agg gcc cgg ggc 1742Ala Val Thr Asp Ser Ser Gly Ser Gly Thr Leu Pro Arg Ala Arg Gly540 545 550 555cgg gcc tca aag ggg acc ggg aag cga agg aag aag cgt ccc tcc agg 1790Arg Ala Ser Lys Gly Thr Gly Lys Arg Arg Lys Lys Arg Pro Ser Arg560 565 570agc cag gaa gag gtt ccc cct gat tct gat gat aat aaa aca aag aaa 1838Ser Gln Glu Glu Val Pro Pro Asp Ser Asp Asp Asn Lys Thr Lys Lys575 580 585ctg tgt gtg atc cag taa ggcctcaggc ccaggcccaa ggccaagtga1886Leu Cys Val Ile Gln590gagagcccag gccacaggac atgctgccat tctgccaaga gaggctcttc tgggggccag 1946
gctgggactg ggccccggaa accaaaactc cgtgccttac ccagccgggg ccctcctgga 2006gccttcttgg ggtgttgtgg ctgggaaccc gacaggcacc agtgccctgc caggcctggt 2066gccctcctgg accgcctgca cgtgccagcc tcccacctgc ttcctaaagg caaccctggc 2126ccacacccgc atgcgcccgg tgcagcctgc caagggccag tcggggggtg ctgcgtcctg 2186ccagtgtcca ccacagctct gcctgccctt cagcccagca aggtttaatc aaaatgcaat 2246gctttgcaag tctttactgc ttggaggtgg ctgagttggg ggccctgggc aggggtaagc 2306tggcaggcag tgccatggca ggccagggtc ccctcccatg gggtctggcc cccgttccag 2366catgtccagc ccctgaagtt ggagttgggg gcggtctgcc tttgctgcca ctgccaggcc 2426tctgccctgc agctgaaact tggccatcac atcaacagaa aacccctccc agtgccagct 2486gcccagcgtg ggcaggccct ggggacaata caggtccacc tgaggggctg cagggtgaca 2546cccagcagcc gctgccccct cactgcccac ccagcgaggg cagcctaccc gagcctgccc 2606cctgccaggt gtgtgccctg aggctggcgg ctggatgcgt ggccaataaa aagcagacct 2666aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 268621012211592212PRT213人40012Met Ile Arg Ala Gly Asp Thr Thr Lys Phe Asp Val Glu Val Leu Lys1 5 10 15Gln Leu Leu Lys Leu Leu Pro Glu Lys His Glu Ile Glu Asn Leu Arg20 25 30Ala Phe Thr Glu Glu Arg Ala Lys Leu Ala Ser Ala Asp His Phe Tyr35 40 45Leu Leu Leu Leu Ala Ile Pro Cys Tyr Gln Leu Arg Ile Glu Cys Met50 55 60
Leu Leu Cys Glu Gly Ala Ala Ala Val Leu Asp Met Val Arg Pro Lys65 70 75 80Ala Gln Leu Val Leu Ala Ala Cys Glu Ser Leu Leu Thr Ser Arg Gln85 90 95Leu Pro Ile Phe Cys Gln Leu Ile Leu Arg Ile Gly Asn Phe Leu Asn100 105 110Tyr Gly Ser His Thr Gly Asp Ala Asp Gly Phe Lys Ile Ser Thr Leu115 120 125Leu Lys Leu Thr Glu Thr Lys Ser Gln Gln Asn Arg Val Thr Leu Leu130 135 140His His Val Leu Glu Glu Ala Glu Lys Ser His Pro Asp Leu Leu Gln145 150 155 160Leu Pro Arg Asp Leu Glu Gln Pro Ser Gln Ala Ala Gly Ile Asn Leu165 170 175Glu Ile Ile Arg Ser Glu Ala Ser Ser Asn Leu Lys Lys Leu Leu Glu180 185 190Thr Glu Arg Lys Val Ser Ala Ser Val Ala Glu Val Gln Glu Gln Tyr195 200 205Thr Glu Arg Leu Gln Ala Ser Ile Ser Ala Phe Arg Ala Leu Asp Glu210 215 220Leu Phe Glu Ala Ile Glu Gln Lys Gln Arg Glu Leu Ala Asp Tyr Leu225 230 235 240Cys Glu Asp Ala Gln Gln Leu Ser Leu Glu Asp Thr Phe Ser Thr Met245 250 255Lys Ala Phe Arg Asp Leu Phe Leu Arg Ala Leu Lys Glu Asn Lys Asp260 265 270
Arg Lys Glu Gln Ala Ala Lys Ala Glu Arg Arg Lys Gln Gln Leu Ala275 280 285Glu Glu Glu Ala Arg Arg Pro Arg Gly Glu Asp Gly Lys Pro Val Arg290 295 300Lys Gly Pro Gly Lys Gln Glu Glu Val Cys Val Ile Asp Ala Leu Leu305 310 315 320Ala Asp Ile Arg Lys Gly Phe Gln Leu Arg Lys Thr Ala Arg Gly Arg325 330 335Gly Asp Thr Asp Gly Gly Ser Lys Ala Ala Ser Met Asp Pro Pro Arg340 345 350Ala Thr Glu Pro Val Ala Thr Ser Asn Pro Ala Gly Asp Pro Val Gly355 360 365Ser Thr Arg Cys Pro Ala Ser Glu Pro Gly Leu Asp Ala Thr Thr Ala370 375 380Ser Glu Ser Arg Gly Trp Asp Leu Val Asp Ala Val Thr Pro Gly Pro385 390 395 400Gln Pro Thr Leu Glu Gln Leu Glu Glu Gly Gly Pro Arg Pro Leu Glu405 410 415Arg Arg Ser Ser Trp Tyr Val Asp Ala Ser Asp Val Leu Thr Thr Glu420 425 430Asp Pro Gln Cys Pro Gln Pro Leu Glu Gly Ala Trp Pro Val Thr Leu435 440 445Gly Asp Ala Gln Ala Leu Lys Pro Leu Lys Phe Ser Ser Asn Gln Pro450 455 460Pro Ala Ala Gly Ser Ser Arg Gln Asp Ala Lys Asp Pro Thr Ser Leu465 470 475 480
Leu Gly Val Leu Gln Ala Glu Ala Asp Ser Thr Ser Glu Gly Leu Glu485 490 495Asp Ala Val His Ser Arg Gly Ala Arg Pro Pro Ala Ala Gly Pro Gly500 505 510Gly Asp Glu Asp Glu Asp Glu Glu Asp Thr Ala Pro Glu Ser Ala Leu515 520 525Asp Thr Ser Leu Asp Lys Ser Phe Ser Glu Asp Ala Val Thr Asp Ser530 535 540Ser Gly Ser Gly Thr Leu Pro Arg Ala Arg Gly Arg Ala Ser Lys Gly545 550 555 560Thr Gly Lys Arg Arg Lys Lys Arg Pro Ser Arg Ser Gln Glu Glu Val565 570 575Pro Pro Asp Ser Asp Asp Asn Lys Thr Lys Lys Leu Cys Val Ile Gln580 585 590210132112190212DNA213人220
221CDS222(148)..(702)40013cggacgcgtg gggagaggct gtttaccaga acagcataac aagggcaggt ctgactgcaa 60ggctgggact gggaggcaga gccgccgcca agggggcctc ggttaaacac tggtcgttca 120atcacctgca agacgaagga ggcaagg atg ctg ttg gcc tgg gta caa gca ttc 174Met Leu Leu Ala Trp Val Gln Ala Phe1 5ctc gtc agc aac atg ctc cta gca gaa gcc tat gga tct gga gag acc 222Leu Val Ser Asn Met Leu Leu Ala Glu Ala Tyr Gly Ser Gly Glu Thr
10 15 20 25acc tcc cag gcc ctg cca gcc ttc acg aca gaa atc cag gaa gcg tct 270Thr Ser Gln Ala Leu Pro Ala Phe Thr Thr Glu Ile Gln Glu Ala Ser30 35 40gaa ggg cca ggt gca gat gag gtg cag gtg ttc gct cct gcc aac gcc 318Glu Gly Pro Gly Ala Asp Glu Val Gln ValPhe Ala Pro Ala Asn Ala45 50 55ctg ccc gct cgg agt gag gcg gca gct gtg cag cca gtg att ggg atc 366Leu Pro Ala Arg Ser Glu Ala Ala Ala Val Gln Pro Val Ile Gly Ile60 65 70agc cag cgg gtg cgg atg aac tcc aag gag aaa aag gac ctg gga act 414Ser Gln Arg Val Arg Met Asn Ser Lys Glu Lys Lys Asp Leu Gly Thr75 80 85ctg ggc tac gtg ctg ggc att acc atg atg gtg atc atc att gcc atc 462Leu Gly Tyr Val Leu Gly Ile Thr Met Met Val Ile Ile Ile Ala Ile90 95 100 105gga gct ggc atc atc ttg ggc tac tcc tac aag agg ggg aag gat ttg 510Gly Ala Gly Ile Ile Leu Gly Tyr Ser Tyr Lys Arg Gly Lys Asp Leu110 115 120aaa gaa cag cat gat cag aaa gta tgt gag agg gag atg cag cga atc 558Lys Glu Gln His Asp Gln Lys Val Cys Glu Arg Glu Met Gln Arg Ile125 130 135act ctg ccc ttg tct gcc ttc acc aac ccc acc tgt gag att gtg gat 606Thr Leu Pro Leu Ser Ala Phe Thr Asn Pro Thr Cys Glu Ile Val Asp140 145150gag aag act gtc gtg gtc cac acc agc cag act cca gtt gac cct cag 654Glu Lys Thr Val Val Val His Thr Ser Gln Thr Pro Val Asp Pro Gln155 160 165gag ggc acc acc ccc ctt atg ggc cag gcc ggg act cct ggg gcc tga 702Glu Gly Thr Thr Pro Leu Met Gly Gln Ala Gly Thr Pro Gly Ala170 175 180gcccccccag tgggcaggag cccatgcaga cactggtgca ggacagccca ccctcctaca762gctaggagga actaccactt tgtgttctgg ttaaaaccct accactcccc cgcttttttg822gcgaatccta gtaagagtga cagaagcagg tggccctgtg ggctgagggt aaggctgggt882agggtcctaa cagtgctcct tgtccatccc ttggagcaga ttttgtctgt ggatggagac942agtggcagct cccacagtga tgctgctgct aagggcttcc aaacattgcc tgcacccctg 1002
gaactgaacc agggatagac ggggagctcc cccaggctcc tctgtgcttt actaagatgg 1062cctcagtctc cactgtgggc ttgagtggca tacactgtta ttcatggtta aggtaaagca 1122ggtcaaggga tggcattgaa aaaatatatt tagtttttaa aatatttggg atggaactcc 1182ctactgacct ctgagaactg gaaacgagtt tgtacagaag tcagaacttt gggttgggaa 1242tgagatctag gttgtggctg ctggtatgct tcagcttgct ggcaatgatg tgccttgaca 1302accgtgggcc aggcctgggc ccagggactc ttcctgtttc ataaggaaag gaagaattgc 1362actgagcatt ccacttagga agaggataga gaaggatctgctccgccttt ggccacagga1422gcagaggcag acctgggatg ccccagtttc tcttcaggga tggatagtga cctgtcttca 1482ttttgcacag gtaagagagt agttagctaa cctatgggaa ttatactgtg gggccttgtg 1542agctgcttct aagaggctaa cctggaaact aagctcagag gcaaggtaat aaagcacttc 1602agggcttgct ccccaagtgg gcctgattta gcaggtggtc ctgcgggcgt ccaggtcagc 1662accttcctgt agggcactgg ggctagggtc acagccccta actcataaag caatcaaaga 1722accattagaa agggctcatt aagccttttg gacacaggac cccagagagg aaaaagtgac 1782ttgcccaagg tcgtaagcaa gctactggca tggcaagagc ccagcttcct gacggagcgc 1842aacatttctc cactgcactg tgctagcagc tcagcagggc ctctaacctg tgatgtcaca 1902ctcaagaggc cttggcagct cctagccata gagcttcctt tccagaaccc ttccactgcc 1962caatgtggag acaggggtta gtggggcttt ctatggagcc atctgctttg gggacctaga 2022cctcaggtgg tctcttggtg ttagtgatgc tggagaagag aatattactg gtttctactt 2082ttctataaag gcatttctct atatacatgt tttatatacc tcattctgac acctgcatat 2142agtgtgggaa attgctctgc atttgactta attaaaaaaa aaaaaaaa219021014211184212PRT213人40014Met Leu Leu Ala Trp Val Gln Ala Phe Leu Val Ser Asn Met Leu Leu1 5 10 15
Ala Glu Ala Tyr Gly Ser Gly Glu Thr Thr Ser Gln Ala Leu Pro Ala20 25 30Phe Thr Thr Glu Ile Gln Glu Ala Ser Glu Gly Pro Gly Ala Asp Glu35 40 45Val Gln Val Phe Ala Pro Ala Asn Ala Leu Pro Ala Arg Ser Glu Ala50 55 60Ala Ala Val Gln Pro Val Ile Gly Ile Ser Gln Arg Val Arg Met Asn65 70 75 80Ser Lys Glu Lys Lys Asp Leu Gly Thr Leu Gly Tyr Val Leu Gly Ile85 90 95Thr Met Met Val Ile Ile Ile Ala Ile Gly Ala Gly Ile Ile Leu Gly100 105 110Tyr Ser Tyr Lys Arg Gly Lys Asp Leu Lys Glu Gln His Asp Gln Lys115 120 125Val Cys Glu Arg Glu Met Gln Arg Ile Thr Leu Pro Leu Ser Ala Phe130 135 140Thr Asn Pro Thr Cys Glu Ile Val Asp Glu Lys Thr Val Val Val His145 150 155 160Thr Ser Gln Thr Pro Val Asp Pro Gln Glu Gly Thr Thr Pro Leu Met165 170 175Gly Gln Ala Gly Thr Pro Gly Ala180210152111817212DNA213人
220
221CDS222(439)..(897)40015agcataacct gtttgtgaaa ctgcaaaaag gttgacatgg ctgaagcaga agatgggttg 60gtactgaatg gttgggagag atatgtagcg gctgaccctg aaggacgttg cagcccatgc120tatggagacc tgattttatt ttgtaagagg tgggcaaccc ctgaagcatt ttagtgatgc180gaacagatgt gtctgttacc aagcaaagcc agttaaagaa ggtcacagag gaggaatgat240cacaaagagt ctgagaagcc aactggggcc aaacaagttt tagaacctct actggctgat300gccaacatca tcagagatga actgttctta ccagaaactt ctctgctcct gacaccccac360ctctccccag aagagaagaa ggagagtggc cacgttgatt cagccaagca cctccaggag420gtcccctctg gatgtccc atg agg ctg ccc ctc agc cac agc cca gag cac 471Met Arg Leu Pro Leu Ser His Ser Pro Glu His1 5 10gtg gag atg gct ttg ctc agc aac atc cta gcg gcc tat tcc ttt gtc 519Val Glu Met Ala Leu Leu Ser Asn Ile Leu Ala Ala Tyr Ser Phe Val15 20 25tca gaa aat cct gag cga gca gct ctg tac ttt gtt tct ggc gtg tgc 567Ser Glu Asn Pro Glu Arg Ala Ala Leu Tyr Phe Val Ser Gly Val Cys30 35 40atc ggg ctg gtg ctg acc ctg gct gct ctg gtg ata agg atc tct tgc 615Ile Gly Leu Val Leu Thr Leu Ala Ala Leu Val Ile Arg Ile Ser Cys45 50 55cac aca gac tgc agg cgg cgt ccc ggg aag aag ttc ctg cag gac aga 663His Thr Asp Cys Arg Arg Arg Pro Gly Lys Lys Phe Leu Gln Asp Arg60 65 70 75gag agc agc agc gac agc agc gac agc gag gat ggc agt gag gac acc 711Glu Ser Ser Ser Asp Ser Ser Asp Ser Glu Asp Gly Ser Glu Asp Thr80 85 90gtg tcc gat ctc tcc gtg cgg aga cac cgc cgc ttc gag agg act ttg 759Val Ser Asp Leu Ser Val Arg Arg His Arg Arg Phe Glu Arg Thr Leu95 100 105aac aag aat gtg ttc acc tct gcg gag gag ctg gag cgc gcc cag cgg 807Asn Lys Asn Val Phe Thr Ser Ala Glu Glu Leu Glu Arg Ala Gln Arg110 115 120
ctg gag gag cgc gag cgc atc atc agg gag atc tgg atg aat ggc cag 855Leu Glu Glu Arg Glu Arg Ile Ile Arg Glu Ile Trp Met Asn Gly Gln125 130 135cct gag gtg ccc ggg acc agg agc ctg aat cgc tac tat tag 897Pro Glu Val Pro Gly Thr Arg Ser Leu Asn Arg Tyr Tyr140 145 150ggagcagcag gaccccggaa accactggag gccgcctgga aaggagagcg tctgcaggga957cagtgggcac aaggaactga acccagctct gctaatattg tgatttcaga gaaaaagcag1017gacatgcccc ttttctagcc aggaggattg ctcctttttg gccaaatgta tggagaagta1077gaaaaatcaa agcagttcat caccctttcc aggtctcgga atggtgctga aaaatcctct1137ccaacactgt ggatggagat cggagaaacg cgactgtggt ttctcttgat ttctgaggat1197ctcagaagtt tcagcagact tccttgctct gtgttattcc tttgcaaaag gaaagatcat1257tatagcatga gggctgggaa tagcagggtg aacttaaccc aataaatgca atttcctaaa1317tgacttcatg ctatggaggt gattctgatt caaatagcat gatccatgct tattatttaa1377ggctgatttt taaaatcttg tgttgcaagg gcaacctcgt ccattttaac tggcacctca1437gggattaaaa tcctactttt tagtgtagtt cccacctcat tcatgaaaat gaatagaact1497attgtattat gggagatgtg tcagtgaact agaaaatgtc aataacctca aaggatgaag1557ggtttttatt ttaaatagtt tataaaatat atattgacat gcatatttga aaatgctgca1617taaaaataaa agtggtgtgt tttccccctc tttggagaca agaaaatttt attatgactc1677tagataattg tgattttaaa cactttgttt tttttttttt ttttttaatt ggatttcaaa1737gaaaagaatg gaaatgagag gtaaggatta aagccaaagt taggatggga attaaaaaaa1797taaacattac ataaaatctt181721016211152212PRT213人40016Met Arg Leu Pro Leu Ser His Ser Pro Glu His Val Glu Met Ala Leu1 5 10 15
Leu Ser Asn Ile Leu Ala Ala Tyr Ser Phe Val Ser Glu Asn Pro Glu20 25 30Arg Ala Ala Leu Tyr Phe Val Ser Gly Val Cys Ile Gly Leu Val Leu35 40 45Thr Leu Ala Ala Leu Val Ile Arg Ile Ser Cys His Thr Asp Cys Arg50 55 60Arg Arg Pro Gly Lys Lys Phe Leu Gln Asp Arg Glu Ser Ser Ser Asp65 70 75 80Ser Ser Asp Ser Glu Asp Gly Ser Glu Asp Thr Val Ser Asp Leu Ser85 90 95Val Arg Arg His Arg Arg Phe Glu Arg Thr Leu Asn Lys Asn Val Phe100 105 110Thr Ser Ala Glu Glu Leu Glu Arg Ala Gln Arg Leu Glu Glu Arg Glu115 120 125Arg Ile Ile Arg Glu Ile Trp Met Asn Gly Gln Pro Glu Val Pro Gly130 135 140Thr Arg Ser Leu Asn Arg Tyr Tyr145 150210172111868212DNA213人220
221CDS222(403)..(870)40017agtttcggaa ccccagccag ctcacctctg cgccgctgaa cccgatccga gcctccggca60
aaggtttttc cctcctcccc cggccgaggg cttctgccgc ccgggcaccc ccgccccgcg120gcgccccaca ttcccccagc ccggggccct tggcgcgtgc gctccgtgcg gctgtgctcc180gcgggacttt gtttgtttcc tcctcgtccc tctttgttgg gctgaacacc agcctcgtca240aagcccccca ctccggaggg agttcggctt ctccagcagg gcggctgcag cgcgctgccc300cgaccccgcc tgcggcccct cacgccgcta gtgctcccac cccgccctcc tggcaccccg360cctgcgtccg ttcgcccgag gaagccaacc gcgacttcat tg atg cac cca ttc 414Met His Pro Phe1cag tgg tgt aac ggg tgt ttc tgt ggc ctg gga ctg gtt agc acc aac 462Gln Trp Cys Asn Gly Cys Phe Cys Gly Leu Gly Leu Val Ser Thr Asn5 10 15 20aag tcc tgc tcg atg cca ccc atc agt ttc cag gac ctt ccg ctc aac 510Lys Ser Cys Ser Met Pro Pro Ile Ser Phe Gln Asp Leu Pro Leu Asn25 30 35atc tat atg gtc atc ttc ggc aca ggc atc ttt gtc ttc atg ctc agc 558Ile Tyr Met Val Ile Phe Gly Thr Gly Ile Phe Val Phe Met Leu Ser40 45 50ctt atc ttc tgc tgc tat ttt atc agc aaa ctg cgg aac cag gca cag 606Leu Ile Phe Cys Cys Tyr Phe Ile Ser Lys Leu Arg Asn Gln Ala Gln55 60 65agt gag cga tac gga tat aag gag gtg gtg ctt aaa ggt gat gcc aag 654Ser Glu Arg Tyr Gly Tyr Lys Glu Val Val Leu Lys Gly Asp Ala Lys70 75 80aag tta caa tta tat ggg cag acc tgc gca gtc tgt ctg gaa gac ttc 702Lys Leu Gln Leu Tyr Gly Gln Thr Cys Ala Val Cys Leu Glu Asp Phe85 90 95 100aag ggg aag gat gag tta ggc gtg ctc ccg tgc caa cac gcc ttt cac 750Lys Gly Lys Asp Glu Leu Gly Val Leu Pro Cys Gln His Ala Phe His105 110 115cgc aag tgt ctg gtg aaa tgg ctg gaa gtt cgc tgt gtc tgc ccc atg 798Arg Lys Cys Leu Val Lys Trp Leu Glu Val Arg Cys Val Cys Pro Met120 125 130tgt aac aag ccc att gct agt ccc tca gag gcc acg cag aac att ggg 846Cys Asn Lys Pro Ile Ala Ser Pro Ser Glu Ala Thr Gln Asn Ile Gly135 140 145att cta ttg gat gag ctg gtg tga gtgctgccgc tacaccgaga cctggagaag 900
Ile Leu Leu Asp Glu Leu Val150 155acctcttgcc tcatggatgt ctggtccctc tgcacagctc caaccaacag gactgtaggg960tgatgacgat cactttccca gtgatgagaa gggtggtcta ggactgggct tctaccctca 1020gtgcaagacc agtgccagat gtgcccccac ttcctgcctc ctgaagcctt cttccctgct 1080actccatgct ggtggcctca cccatcaaga ccactgtctc ctggtactgg actatctacc 1140tgccttgtcc ctgttctggg ggaaggtgtc caccccgatc aagaacatgg agaaagtcct 1200ctttcaaggc tcccattagg aggatgagct gccttgaccc agaagggatg agacgggctc 1260ttacctctct acaaccttcc ctccccttcc cactccttcc ggagtaaggt tagaagggaa 1320ggaaggaaag atcaaggaac caagcgcctc cacgggaggc gagggaggct ctgtatgaaa 1380cagaagagca gggacataaa ggaaaatgtc agtgtttaca tgggacctat ggaaacaaag 1440gctggcgggc gccagctgac tccagagtaa gagagggccc ttcccctgcc aggacccacg 1500gtgctatcca ttcagtctct tcctcagtta atctcggagc ttcctattcc atgttgaggt 1560ttgtgggccc ctctagagga gggctagttc tatacttaaa ttgattccca ggggcctttt 1620tttttttttt tttttttttt ttgatcaaaa ggggtgtggg gatgggggtg tctacggtta 1680agcaacagat acctccttcc ctttgtaaat agtattttta tacttcatcc tcgcctctca 1740ggctttagat acgaaatctc cagaatggaa gggggtgggg attttctgtt cctccctgga 1800gtgggtgagg gtgggagaaa gttacatatt taaagaaaaa taaatttaat aacaagtttc 1860tctaacct186821018211155212PRT213人40018Met His Pro Phe Gln Trp Cys Asn Gly Cys Phe Cys Gly Leu Gly Leu1 5 10 15Val Ser Thr Asn Lys Ser Cys Ser Met Pro Pro Ile Ser Phe Gln Asp20 25 30
Leu Pro Leu Asn Ile Tyr Met Val Ile Phe Gly Thr Gly Ile Phe Val35 40 45Phe Met Leu Ser Leu Ile Phe Cys Cys Tyr Phe Ile Ser Lys Leu Arg50 55 60Asn Gln Ala Gln Ser Glu Arg Tyr Gly Tyr Lys Glu Val Val Leu Lys65 70 75 80Gly Asp Ala Lys Lys Leu Gln Leu Tyr Gly Gln Thr Cys Ala Val Cys85 90 95Leu Glu Asp Phe Lys Gly Lys Asp Glu Leu Gly Val Leu Pro Cys Gln100 105 110His Ala Phe His Arg Lys Cys Leu Val Lys Trp Leu Glu Val Arg Cys115 120 125Val Cys Pro Met Cys Asn Lys Pro Ile Ala Ser Pro Ser Glu Ala Thr130 135 140Gln Asn Ile Gly Ile Leu Leu Asp Glu Leu Val145 150 155210192112651212DNA213人220
221CDS222(196)..(1599)40019ggcacgaggg gacgcgataa atatgcagag cggaggcttc gcgcagcaga gcccgcgcgc60cgcccgctcc gggtgctgaa tccaggcgtg gggacacgag ccaggcgccg ccgccggagc120cagcggagcc ggggccagag ccggagcgcg tccgcgtcca cgcagccgcc ggccggccag180
cacccagggc cctgc atg cca ggt cgt tgg agg tgg cag cga gac atg cac 231Met Pro Gly Arg Trp Arg Trp Gln Arg Asp Met His1 5 10ccg gcc cgg aag ctc ctc agc ctc ctc ttc ctc atc ctg atg ggc act 279Pro Ala Arg Lys Leu Leu Ser Leu Leu Phe Leu Ile Leu Met Gly Thr15 20 25gaa ctc act caa gtg ctg ccc acc aac cct gag gag agc tgg cag gtg 327Glu Leu Thr Gln Val Leu Pro Thr Asn Pro Glu Glu Ser Trp Gln Val30 35 40tac agc tct gcc cag gac agc gag ggc agg tgt atc tgc aca gtg gtc 375Tyr Ser Ser Ala Gln Asp Ser Glu Gly Arg Cys Ile Cys Thr Val Val45 50 55 60gcc cca cag cag acc atg tgt tca cgg gat gcc cgc aca aaa cag ctg 423Ala Pro Gln Gln Thr Met Cys Ser Arg Asp Ala Arg Thr Lys Gln Leu65 70 75agg cag cta ctg gag aag gtg cag aac atg tct caa tcc ata gag gtc 471Arg Gln Leu Leu Glu Lys Val Gln Asn Met Ser Gln Ser Ile Glu Val80 85 90ttg gac agg cgg acc cag aga gac ttg cag tac gtg gag aag atg gag 519Leu Asp Arg Arg Thr Gln Arg Asp Leu Gln Tyr Val Glu Lys Met Glu95 100 105aac caa atg aaa gga ctg gag tcc aag ttc aaa cag gtg gag gag agt 567Asn Gln Met Lys Gly Leu Glu Ser Lys Phe Lys Gln Val Glu Glu Ser110 115 120cat aag caa cac ctg gcc agg cag ttt aag gcg ata aaa gcg aaa atg 615His Lys Gln His Leu Ala Arg Gln Phe Lys Ala Ile Lys Ala Lys Met125 130 135 140gat gaa ctt agg cct ttg ata cct gtg ttg gaa gag tac aag gcc gat 663Asp Glu Leu Arg Pro Leu Ile Pro Val Leu Glu Glu Tyr Lys Ala Asp145 150 155gcc aaa ttg gta ttg cag ttt aaa gag gag gtc cag aat ctg acg tca 711Ala Lys Leu Val Leu Gln Phe Lys Glu Glu Val Gln Asn Leu Thr Ser160 165 170gtg ctt aac gag ctg caa gag gaa att ggc gcc tat gac tac gat gaa 759Val Leu Asn Glu Leu Gln Glu Glu Ile Gly Ala Tyr Asp Tyr Asp Glu175 180 185ctt cag agc aga gtg tcc aat ctt gaa gaa agg ctc cgt gca tgc atg 807Leu Gln Ser Arg Val Ser Asn Leu Glu Glu Arg Leu Arg Ala Cys Met190 195 200
caa aaa cta gct tgc ggg aag ttg acg ggc atc agt gac ccc gtg act 855Gln Lys Leu Ala Cys Gly Lys Leu Thr Gly Ile Ser Asp Pro Val Thr205 210 215 220gtc aag acc tcc ggc tcg agg ttc gga tcc tgg atg aca gac cct ctc 903Val Lys Thr Ser Gly Ser Arg Phe Gly Ser Trp Met Thr Asp Pro Leu225 230 235gcc cct gaa ggc gat aac cgg gtg tgg tac atg gac ggc tat cac aac 951Ala Pro Glu Gly Asp Asn Arg Val Trp Tyr Met Asp Gly Tyr His Asn240 245 250aac cgc ttc gta cgt gag tac aag tcc atg gtt gac ttc atg aac acg 999Asn Arg Phe Val Arg Glu Tyr Lys Ser Met Val Asp Phe Met Asn Thr255 260 265gac aat ttc acc tcc cac cgt ctc ccc cac ccc tgg tcg ggc acg ggg 1047Asp Asn Phe Thr Ser His Arg Leu Pro His Pro Trp Ser Gly Thr Gly270 275 280cag gtg gtc tac aac ggt tct atc tacttc aac aag ttc cag agc cac 1095Gln Val Val Tyr Asn Gly Ser Ile Tyr Phe Asn Lys Phe Gln Ser His285 290 295 300atc atc atc agg ttt gac ctg aag aca gag acc atc ctc aag acc cgc 1143Ile Ile Ile Arg Phe Asp Leu Lys Thr Glu Thr Ile Leu Lys Thr Arg305 310 315agc ctg gac tat gcc ggt tac aac aac atg tac cac tac gcc tgg ggt 1191Ser Leu Asp Tyr Ala Gly Tyr Asn Asn Met Tyr His Tyr Ala Trp Gly320 325 330ggc cac tcg gac atc gac ctc atg gtg gac gag agc ggg ctg tgg gcc 1239Gly His Ser Asp Ile Asp Leu Met Val Asp Glu Ser Gly Leu Trp Ala335 340 345gtg tac gcc acc aac cag aac gct ggc aac atc gtg gtc agt agg ctg 1287Val Tyr Ala Thr Asn Gln Asn Ala Gly Asn Ile Val Val Ser Arg Leu350 355 360gac ccc gtg tcc ctg cag acc ctg cag acc tgg aac acg agc tac ccc 1335Asp Pro Val Ser Leu Gln Thr Leu Gln Thr Trp Asn Thr Ser Tyr Pro365 370 375 380aag cgc agc gcc ggg gag gcc ttc atc atc tgc ggc acg ctg tac gtc 1383Lys Arg Ser Ala Gly Glu Ala Phe Ile Ile Cys Gly Thr Leu Tyr Val385 390 395acc aac ggc tac tca ggg ggt acc aag gtc cac tat gca tac cag acc 1431Thr Asn Gly Tyr Ser Gly Gly Thr Lys Val His Tyr Ala Tyr Gln Thr
400 405 410aat gcc tcc acc tat gaa tac atc gac atc cca ttc cag aac aaa tac 1479Asn Ala Ser Thr Tyr Glu Tyr Ile Asp Ile Pro Phe Gln Asn Lys Tyr415 420 425tcc cac atc tcc atg ctg gac tac aac ccc aag gac cgg gcc ctg tat 1527Ser His Ile Ser Met Leu Asp Tyr Asn Pro Lys Asp Arg Ala Leu Tyr430 435 440gcc tgg aac aac ggc cac cag atc ctc tac aac gtg acc ctc ttc cac 1575Ala Trp Asn Asn Gly His Gln Ile Leu Tyr Asn Val Thr Leu Phe His445 450 455 460gtc atc cgc tcc gac gag ttg tag ctccctcctc ctggaagcca agggcccacg1629Val Ile Arg Ser Asp Glu Leu465tcctcaccac aaagggactc ctgtgaaact gctgccaaaa agataccaat aacactaaca 1689ataccgatct tgaaaaatca tcagcagtgc ggattctgac atcgagggat ggcattacct 1749ccgtgtttct ccctttcgag ccggcgggcc acagacgtcg gaagaaactc ccgtatttgc 1809agctggaact gcagcccacg gcgccccggt tttcctcccc gccctgtccc tctctggtca 1869aacaacatac taaagaggcg aggcaatgac tgttggccag ttctcaccgg ggaaaaaccc 1929actgttagga tggcatgaac atttccttag atcgtggtca gctccgagga atgtggcgtc 1989caggctcttt gagagccatg ggctgcaccc ggccgtaggc tagtgtaact cgcatcccat 2049tgcagtgccg tttcttgact gtgttgctgt ctcttagatt aaccgtgctg aggctccaca 2109tagctcctgg acctgtgtct agtacatact gaagcgatgg tcagagtgtg tagagtgaag 2169ttgctgtgcc cacattgttt gaactcgcgt accccgtaga tacattgtgc aacgttcttc 2229tgttattccc ttgaggtggt aacttcgtat gttcagttta tgcgatgatt gttgtaaatg 2289caatgccgta gtttggatta ataagtggat ggtttttgtt tctaaaaaga aaaaaaaaat 2349cagtgttcac ccttatagag acatagtcaa gttcatgttg ataataatca aaggaattac 2409tctcttcttg ttaaattagc taaatcatgt aaccgcagat aggaagggct cacctgggga 2469aactctggtt tccgatggga caggaaagtc atacgggcaa cagtatgcgg aaagtacgtt 2529tttttaagta aaaaacaaag gcaaactttg tactatccag ttatctaagg aacaataaaa 2589acattaggag aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2649
aa 265121020211467212PRT213人40020Met Pro Gly Arg Trp Arg Trp Gln Arg Asp Met His Pro Ala Arg Lys1 5 10 15Leu Leu Ser Leu Leu Phe Leu Ile Leu Met Gly Thr Glu Leu Thr Gln20 25 30Val Leu Pro Thr Asn Pro Glu Glu Ser Trp Gln Val Tyr Ser Ser Ala35 40 45Gln Asp Ser Glu Gly Arg Cys Ile Cys Thr Val Val Ala Pro Gln Gln50 55 60Thr Met Cys Ser Arg Asp Ala Arg Thr Lys Gln Leu Arg Gln Leu Leu65 70 75 80Glu Lys Val Gln Asn Met Ser Gln Ser Ile Glu Val Leu Asp Arg Arg85 90 95Thr Gln Arg Asp Leu Gln Tyr Val Glu Lys Met Glu Asn Gln Met Lys100 105 110Gly Leu Glu Ser Lys Phe Lys Gln Val Glu Glu Ser His Lys Gln His115 120 125Leu Ala Arg Gln Phe Lys Ala Ile Lys Ala Lys Met Asp Glu Leu Arg130 135 140Pro Leu Ile Pro Val Leu Glu Glu Tyr Lys Ala Asp Ala Lys Leu Val145 150 155 160
Leu Gln Phe Lys Glu Glu Val Gln Asn Leu Thr Ser Val Leu Asn Glu165 170 175Leu Gln Glu Glu Ile Gly Ala Tyr Asp Tyr Asp Glu Leu Gln Ser Arg180 185 190Val Ser Asn Leu Glu Glu Arg Leu Arg Ala Cys Met Gln Lys Leu Ala195 200 205Cys Gly Lys Leu Thr Gly Ile Ser Asp Pro Val Thr Val Lys Thr Ser210 215 220Gly Ser Arg Phe Gly Ser Trp Met Thr Asp Pro Leu Ala Pro Glu Gly225 230 235 240Asp Asn Arg Val Trp Tyr Met Asp Gly Tyr His Asn Asn Arg Phe Val245 250 255Arg Glu Tyr Lys Ser Met Val Asp Phe Met Asn Thr Asp Asn Phe Thr260 265 270Ser His Arg Leu Pro His Pro Trp Ser Gly Thr Gly Gln Val Val Tyr275 280 285Asn Gly Ser Ile Tyr Phe Asn Lys Phe Gln Ser His Ile Ile Ile Arg290 295 300Phe Asp Leu Lys Thr Glu Thr Ile Leu Lys Thr Arg Ser Leu Asp Tyr305 310 315 320Ala Gly Tyr Asn Asn Met Tyr His Tyr Ala Trp Gly Gly His Ser Asp325 330 335Ile Asp Leu Met Val Asp Glu Ser Gly Leu Trp Ala Val Tyr Ala Thr340 345 350Asn Gln Asn Ala Gly Asn Ile Val Val Ser Arg Leu Asp Pro Val Ser355 360 365
Leu Gln Thr Leu Gln Thr Trp Asn Thr Ser Tyr Pro Lys Arg Ser Ala370 375 380Gly Glu Ala Phe Ile Ile Cys Gly Thr Leu Tyr Val Thr Asn Gly Tyr385 390 395 400Ser Gly Gly Thr Lys Val His Tyr Ala Tyr Gln Thr Asn Ala Ser Thr405 410 415Tyr Glu Tyr Ile Asp Ile Pro Phe Gln Asn Lys Tyr Ser His Ile Ser420 425 430Met Leu Asp Tyr Asn Pro Lys Asp Arg Ala Leu Tyr Ala Trp Asn Asn435 440 445Gly His Gln Ile Leu Tyr Asn Val Thr Leu Phe His Val Ile Arg Ser450 455 460Asp Glu Leu465210212112087212DNA213人220
221CDS222(106)..(1023)40021tttctccggg aaccgtgccg ggagagcgcg cggtgctgga gccgcaccgg gtggccgaag60cagaagactt tccggaagct gctgggggat gtctgactag ctctc atg gag ctc cac117Met Glu Leu His1tac ctt gct aag aag agc aac cag gca gac ctc tgt gat gcc agg gac 165Tyr Leu Ala Lys Lys Ser Asn Gln Ala Asp Leu Cys Asp Ala Arg Asp5 10 15 20tgg agt tca aga ggg ctg cct ggt gac cag gca gat aca gca gcc aca 213
Trp Ser Ser Arg Gly Leu Pro Gly Asp Gln Ala Asp Thr Ala Ala Thr25 30 35aga gct gct ctc tgc tgt cag aaa cag tgt gca tcc acc cca aga gca 261Arg Ala Ala Leu Cys Cys Gln Lys Gln Cys Ala Ser Thr Pro Arg Ala40 45 50acc gag atg gaa ggg tct aaa ctt agt tct tct cca gca tcc ccc tcc 309Thr Glu Met Glu Gly Ser Lys Leu Ser Ser Ser Pro Ala Ser Pro Ser55 60 65tcc tct ctg caa aac agt act ctt cag cca gat gcc ttt cca cca gga 357Ser Ser Leu Gln Asn Ser Thr Leu Gln Pro Asp Ala Phe Pro Pro Gly70 75 80ctt ctc cac tca ggg aac aac caa ata aca gcg gaa cgg aaa gtc tgt 405Leu Leu His Ser Gly Asn Asn Gln Ile Thr Ala Glu Arg Lys Val Cys85 90 95 100aac tgc tgc agc cag gaa tta gaa act tct ttt acc tat gtg gac aaa 453Asn Cys Cys Ser Gln Glu Leu Glu Thr Ser Phe Thr Tyr Val Asp Lys105 110 115aac atc aac ttg gag cag cgg aac cgg agc tcg cca tca gca aaa ggg 501Asn Ile Asn Leu Glu Gln Arg Asn Arg Ser Ser Pro Ser Ala Lys Gly120 125 130cat aat cac cct ggg gag ctt ggc tgg gaa aat cca aat gag tgg tcc 549His Asn His Pro Gly Glu Leu Gly Trp Glu Asn Pro Asn Glu Trp Ser135 140 145caa gag gct gcc ata tct ttg ata tct gaa gag gag gat gat aca agt 597Gln Glu Ala Ala Ile Ser Leu Ile Ser Glu Glu Glu Asp Asp Thr Ser150 155 160tca gaa gcc acg tct tca ggg aag tct ata gac tat ggt ttc atc agc 645Ser Glu Ala Thr Ser Ser Gly Lys Ser Ile Asp Tyr Gly Phe Ile Ser165 170 175 180gcc atc ttg ttc ttg gtc act ggg atc ctg ctc gtg atc atc tct tac 693Ala Ile Leu Phe Leu Val Thr Gly Ile Leu Leu Val Ile Ile Ser Tyr185 190 195atc gtc cca cgg gaa gtg act gtg gac ccc aac act gtg gca gcc cgg 741Ile Val Pro Arg Glu Val Thr Val Asp Pro Asn Thr Val Ala Ala Arg200 205 210gag atg gag cgc ctg gag aag gag agt gcg agg ctg ggg gct cac ctg 789Glu Met Glu Arg Leu Glu Lys Glu Ser Ala Arg Leu Gly Ala His Leu215 220 225
gac cgc tgt gtg att gcg ggg ctc tgc ctc ctc acg ctg ggg ggc gtc 837Asp Arg Cys Val Ile Ala Gly Leu Cys Leu Leu Thr Leu Gly Gly Val230 235 240atc ctg tcc tgc ttg tta atg atg tcc atg tgg aag ggg gag ctc tat 885Ile Leu Ser Cys Leu Leu Met Met Ser Met Trp Lys Gly Glu Leu Tyr245 250 255 260cgt cga aac aga ttt gcc tct tcc aaa gag tct gca aaa ctc tat ggt 933Arg Arg Asn Arg Phe Ala Ser Ser Lys Glu Ser Ala Lys Leu Tyr Gly265 270 275tct ttc aac ttc agg atg aaa acc agc acg aat gaa aac act ctg gaa 981Ser Phe Asn Phe Arg Met Lys Thr Ser Thr Asn Glu Asn Thr Leu Glu280 285 290ctg tcc ttg gta gag gaa gat gcg ctt gct gta cag agt taa 1023Leu Ser Leu Val Glu Glu Asp Ala Leu Ala Val Gln Ser295 300 305ttctggttgt gaatatcttg agagtctgcc ttggcatttt ataatatgaa aaaagttaat 1083ttataaaaat tcacagtgca atttatttgc ctggcaagaa aagtttattt cacaaaccaa 1143cagccagtaa gtgtttttgt tctctatgtg tcttctattt agaagaaaag ccatgtaaga 1203tgtataagaa accacaacca gccacaccta tccttctgaa gagctgaagg ctaattaatc 1263tgtaatggcc aagaacttct acttcgatag aaaaatattt ctaatgaccc agtctacaaa 1323ttatttcttt tacacaaata tatgatgtta ttctttggac actaggtggt cctacacaca 1383gtaggatcaa ttgctaatct actttgtgaa aaagaactaa gcactaatca ataataaggc 1443ttacatctaa ttctcaaagg tgcttatcca ttttcttgct aaattatcct tcttgtaatt 1503tggctaaaca ctaaaacatg gaatttttag tttgaatatt ttgaagtttg aggatgttgg 1563gctttcctta ttgtaaaaaa tgttatgttt gaaattattc ctgttttcaa aaatggtaat 1623taagtcatta ggataaactt tctaataaaa aaaaattatg taaatcattg taagaccaat 1683gtgaatttaa accacagtgt tggtgccaga tattagccag ggtcacaggc tcttttttaa 1743aatgaagtca aattagttac tgatataagt tttatatttt gtgattttgc catcatactg 1803gttatctgtg ctcttgaagt ctgctggttc tcacaccagc agcaagaggc aaggcatgag 1863acattttaaa tatatttcca gacatctaaa catctagaca ggcctgagtc atgattggct 1923ctggtgtgct tccaggtaac atcttgttat tgctgtttgg ggaaaaccac caatagaatt 1983
gcagctagac ttttggggac tgtgcctcgc aggctgtatc acttgctgta ggccaagcaa2043cgagcacttc cctcatggta gcaacagtcc ttaagcccaa agcc 208721022211305212PRT213人40022Met Glu Leu His Tyr Leu Ala Lys Lys Ser Asn Gln Ala Asp Leu Cys1 5 10 15Asp Ala Arg Asp Trp Ser Ser Arg Gly Leu Pro Gly Asp Gln Ala Asp20 25 30Thr Ala Ala Thr Arg Ala Ala Leu Cys Cys Gln Lys Gln Cys Ala Ser35 40 45Thr Pro Arg Ala Thr Glu Met Glu Gly Ser Lys Leu Ser Ser Ser Pro50 55 60Ala Ser Pro Ser Ser Ser Leu Gln Asn Ser Thr Leu Gln Pro Asp Ala65 70 75 80Phe Pro Pro Gly Leu Leu His Ser Gly Asn Asn Gln Ile Thr Ala Glu85 90 95Arg Lys Val Cys Asn Cys Cys Ser Gln Glu Leu Glu Thr Ser Phe Thr100 105 110Tyr Val Asp Lys Asn Ile Asn Leu Glu Gln Arg Asn Arg Ser Ser Pro115 120 125Ser Ala Lys Gly His Asn His Pro Gly Glu Leu Gly Trp Glu Asn Pro130 135 140Asn Glu Trp Ser Gln Glu Ala Ala Ile Ser Leu Ile Ser Glu Glu Glu145 150 155 160
Asp Asp Thr Ser Ser Glu Ala Thr Ser Ser Gly Lys Ser Ile Asp Tyr165 170 175Gly Phe Ile Ser Ala Ile Leu Phe Leu Val Thr Gly Ile Leu Leu Val180 185 190Ile Ile Ser Tyr Ile Val Pro Arg Glu Val Thr Val Asp Pro Asn Thr195 200 205Val Ala Ala Arg Glu Met Glu Arg Leu Glu Lys Glu Ser Ala Arg Leu210 215 220Gly Ala His Leu Asp Arg Cys Val Ile Ala Gly Leu Cys Leu Leu Thr225 230 235 240Leu Gly Gly Val Ile Leu Ser Cys Leu Leu Met Met Ser Met Trp Lys245 250 255Gly Glu Leu Tyr Arg Arg Asn Arg Phe Ala Ser Ser Lys Glu Ser Ala260 265 270Lys Leu Tyr Gly Ser Phe Asn Phe Arg Met Lys Thr Ser Thr Asn Glu275 280 285Asn Thr Leu Glu Leu Ser Leu Val Glu Glu Asp Ala Leu Ala Val Gln290 295 300Ser305210232111882212DNA213人220
221CDS222(534)..(1505)
40023ggcacgaggg ttagattagt ctgaagccgc caccagcccc aggcccccgt gcagaagaaa60agcgggaggg aacggcggag gccgccgctg ccctgcaccg ccctcctgga ggccacttgg120agagtccggc cccgaggagg ccatggccac aagtgcccac agctggcccc aggttgccag180cgtcgctaca gcccagacca aggcagaata atctccggat gagctggtgg caccgctgag240cctttggtct caccagggct tcctgttgct ggcaggcggg gtggagcgga gctgctggga300ggctgctgga taggagaggg gtcacggctg cggaagagga ggttcttcgg gacacccgtg360gatggacacg gcaaggaaac accaggccaa ccacagctgg ggataaaata gcacaaccac420accctgccgt ccagcgcctc ccagcctgtg ccccttccta gtaccaccag caaccatcaa480tcccgtctcc tcctgcctcc tctcctgcaa tccaccccgc cacgactatc gcc atg 536Met1gca gcc ctg atc gca gag aac ttc cgc ttc ctg tca ctt ttc ttc aag 584Ala Ala Leu Ile Ala Glu Asn Phe Arg Phe Leu Ser Leu Phe Phe Lys5 10 15agc aag gat gtg atg att ttc aac ggc ctg gtg gca ctg ggc acg gtg 632Ser Lys Asp Val Met Ile Phe Asn Gly Leu Val Ala Leu Gly Thr Val20 25 30ggc agc cag gag ctg ttc tct gtg gtg gcc ttc cac tgc ccc tgc tcg 680Gly Ser Gln Glu Leu Phe Ser Val Val Ala Phe His Cys Pro Cys Ser35 40 45ccg gcc cgg aac tac ctg tac ggg ctg gcg gcc atc ggc gtg ccc gcc 728Pro Ala Arg Asn Tyr Leu Tyr Gly Leu Ala Ala Ile Gly Val Pro Ala50 55 60 65ctg gtg ctc ttc atc att ggc atc atc ctc aac aac cac acc tgg aac 776Leu Val Leu Phe Ile Ile Gly Ile Ile Leu Asn Asn His Thr Trp Asn70 75 80ctc gtg gcc gag tgc cag cac cgg agg acc aag aac tgc tcc gcc gcc 824Leu Val Ala Glu Cys Gln His Arg Arg Thr Lys Asn Cys Ser Ala Ala85 90 95ccc acc ttc ctc ctt cta agc tcc atc ctg gga cgt gcg gct gtg gcc 872Pro Thr Phe Leu Leu Leu Ser Ser Ile Leu Gly Arg Ala Ala Val Ala100 105 110cct gtc acc tgg tct gtc atc tcc ctg ctg cgt ggt gag gct tat gtc 920
Pro Val Thr Trp Ser Val Ile Ser Leu Leu Arg Gly Glu Ala Tyr Val115 120 125tgt gct ctc agt gag ttc gtg gac cct tcc tca ctc acg gcc agg gaa 968Cys Ala Leu Ser Glu Phe Val Asp Pro Ser Ser Leu Thr Ala Arg Glu130 135 140 145gag cacttc cca tca gcc cac gcc act gaa atc ctg gcc agg ttc ccc 1016Glu His Phe Pro Ser Ala His Ala Thr Glu Ile Leu Ala Arg Phe Pro150 155 160tgc aag gag aac cct gac aac ctg tca gac ttc cgg gag gag gtc agc 1064Cys Lys Glu Asn Pro Asp Asn Leu Ser Asp Phe Arg Glu Glu Val Ser165 170 175cgc agg ctc agg tat gag tcc cag ctc ttt gga tgg ctg ctc atc ggc 1112Arg Arg Leu Arg Tyr Glu Ser Gln Leu Phe Gly Trp Leu Leu Ile Gly180 185 190gtg gtg gcc atc ctg gtg ttc ctg acc aag tgc ctc aag cat tac tgc 1160Val Val Ala Ile Leu Val Phe Leu Thr Lys Cys Leu Lys His Tyr Cys195 200 205tca cca ctc agc tac cgc cag gag gcc tac tgg gcg cag tac cgc gcc 1208Ser Pro Leu Ser Tyr Arg Gln Glu Ala Tyr Trp Ala Gln Tyr Arg Ala210 215 220 225aat gag gac cag ctg ttc cag cgc acg gcc gag gtg cac tct cgg gtg 1256Asn Glu Asp Gln Leu Phe Gln Arg Thr Ala Glu Val His Ser Arg Val230 235 240ctc gct gcc aac aat gtg cgc cgc ttc ttt ggc ttt gtg gcg ctc aac 1304Leu Ala Ala Asn Asn Val Arg Arg Phe Phe Gly Phe Val Ala Leu Asn245 250 255aag gat gat gag gaa ctg att gcc aac ttc cca gtg gaa ggc acg cag 1352Lys Asp Asp Glu Glu Leu Ile Ala Asn Phe Pro Val Glu Gly Thr Gln260 265 270cca cgg cca cag tgg aat gcc atc acc ggc gtc tac ttg tac cgt gag 1400Pro Arg Pro Gln Trp Asn Ala Ile Thr Gly Val Tyr Leu Tyr Arg Glu275 280 285aac cag ggc ctc cca ctc tac agc cgc ctg cac aag tgg gcc cag ggt 1448Asn Gln Gly Leu Pro Leu Tyr Ser Arg Leu His Lys Trp Ala Gln Gly290 295 300 305ctg gca ggc aac ggc gcg gcc cct gac aac gtg gag atg gcc ctg ctc 1496Leu Ala Gly Asn Gly Ala Ala Pro Asp Asn Val Glu Met Ala Leu Leu310 315 320
ccc tcc taa ggaggtgctt cccatgctct ttgtaaatgg cactacttgg 1545Pro Sertcccaaactg aaccccactg cttgctcaca tccatatcag aaggggattt ttaaaaaact 1605gttatcttct tggccagggg aaaggaccac aaggcaatct ggggtgtgga cagacccagt 1665agacaatgga agccccagcc agcagggcca ggtgacagtg aagctcacca gtgggctcct 1725ttatggtact ctatgcagtt aacatgtatc tagctgcata gggacaccca gcgcagcagt 1785gcaccactgg gaagtggcct ccagtgcagc ctctggcctt attttatata tttaaatttt 1845tgataaagtt tttcttacta aaaggaaaaa aaaaaaa188221024211323212PRT213人40024Met Ala Ala Leu Ile Ala Glu Asn Phe Arg Phe Leu Ser Leu Phe Phe1 5 10 15Lys Ser Lys Asp Val Met Ile Phe Asn Gly Leu Val Ala Leu Gly Thr20 25 30Val Gly Ser Gln Glu Leu Phe Ser Val Val Ala Phe His Cys Pro Cys35 40 45Ser Pro Ala Arg Asn Tyr Leu Tyr Gly Leu Ala Ala Ile Gly Val Pro50 55 60Ala Leu Val Leu Phe Ile Ile Gly Ile Ile Leu Asn Asn His Thr Trp65 70 75 80Asn Leu Val Ala Glu Cys Gln His Arg Arg Thr Lys Asn Cys Ser Ala85 90 95Ala Pro Thr Phe Leu Leu Leu Ser Ser Ile Leu Gly Arg Ala Ala Val100 105 110
Ala Pro Val Thr Trp Ser Val Ile Ser Leu Leu Arg Gly Glu Ala Tyr115 120 125Val Cys Ala Leu Ser Glu Phe Val Asp Pro Ser Ser Leu Thr Ala Arg130 135 140Glu Glu His Phe Pro Ser Ala His Ala Thr Glu Ile Leu Ala Arg Phe145 150 155 160Pro Cys Lys Glu Asn Pro Asp Asn Leu Ser Asp Phe Arg Glu Glu Val165 170 175Ser Arg Arg Leu Arg Tyr Glu Ser Gln Leu Phe Gly Trp Leu Leu Ile180 185 190Gly Val Val Ala Ile Leu Val Phe Leu Thr Lys Cys Leu Lys His Tyr195 200 205Cys Ser Pro Leu Ser Tyr Arg Gln Glu Ala Tyr Trp Ala Gln Tyr Arg210 215 220Ala Asn Glu Asp Gln Leu Phe Gln Arg Thr Ala Glu Val His Ser Arg225 230 235 240Val Leu Ala Ala Asn Asn Val Arg Arg Phe Phe Gly Phe Val Ala Leu245 250 255Asn Lys Asp Asp Glu Glu Leu Ile Ala Asn Phe Pro Val Glu Gly Thr260 265 270Gln Pro Arg Pro Gln Trp Asn Ala Ile Thr Gly Val Tyr Leu Tyr Arg275 280 285Glu Asn Gln Gly Leu Pro Leu Tyr Ser Arg Leu His Lys Trp Ala Gln290 295 300Gly Leu Ala Gly Asn Gly Ala Ala Pro Asp Asn Val Glu Met Ala Leu305 310 315 320
Leu Pro Ser21025211673212DNA213人220
221CDS222(135)..(467)40025cttccgagca agatggcgcc gcgggcattt cttccactgc ccgtctgagg gaacgctaag60tagtgtgtcc ggcgccgtgt tccagctccg cgttgttccg cgagaaagcg agaggccgag120cctgggctgg tgcg atg gcc gcg gtg gtg gcc aag cgg gaa ggg ccg ccg 170Met Ala Ala Val Val Ala Lys Arg Glu Gly Pro Pro1 5 10ttc atc agc gag gcg gcc gtg cgg ggc aac gcc gcc gtc ctg gat tat 218Phe Ile Ser Glu Ala Ala Val Arg Gly Asn Ala Ala Val Leu Asp Tyr15 20 25tgc cgg acc tcg gtg tca gcg ctg tcg ggg gcc acg gcc ggc atc ctc 266Cys Arg Thr Ser Val Ser Ala Leu Ser Gly Ala Thr Ala Gly Ile Leu30 35 40ggc ctc acc ggc ctc tac ggc ttc atc ttc tac ctg ctc gcc tcc gtc 314Gly Leu Thr Gly Leu Tyr Gly Phe Ile Phe Tyr Leu Leu Ala Ser Val45 50 55 60ctg ctc tcc ctg ctc ctc att ctc aag gcg gga agg agg tgg aac aaa 362Leu Leu Ser Leu Leu Leu Ile Leu Lys Ala Gly Arg Arg Trp Asn Lys65 70 75tat ttc aaa tca cgg aga cct ctc ttt aca gga ggc ctc atc ggg ggc 410Tyr Phe Lys Ser Arg Arg Pro Leu Phe Thr Gly Gly Leu Ile Gly Gly80 85 90ctc ttc acc tac gtc ctg ttc tgg acg ttc ctc tac ggc atg gtg cac 458Leu Phe Thr Tyr Val Leu Phe Trp Thr Phe Leu Tyr Gly Met Val His95 100 105gtc tac tga aatgggggcc cgggggactt ttttaaaaaa ccagatcggg 507Val Tyr
110aggactgtgg ccagcaatta acaccatgta gacttcctta gttcttaagt ggttgaattc567gctgcttgtt ctgtaacgtt ataaataatt tatatctgaa gacggagagc ctgtaatatt627cttcagatta aatgaagcgt gagacaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa 67321026211110212PRT213人40026Met Ala Ala Val Val Ala Lys Arg Glu Gly Pro Pro Phe Ile Ser Glu1 5 10 15Ala Ala Val Arg Gly Asn Ala Ala Val Leu Asp Tyr Cys Arg Thr Ser20 25 30Val Ser Ala Leu Ser Gly Ala Thr Ala Gly Ile Leu Gly Leu Thr Gly35 40 45Leu Tyr Gly Phe Ile Phe Tyr Leu Leu Ala Ser Val Leu Leu Ser Leu50 55 60Leu Leu Ile Leu Lys Ala Gly Arg Arg Trp Asn Lys Tyr Phe Lys Ser65 70 75 80Arg Arg Pro Leu Phe Thr Gly Gly Leu Ile Gly Gly Leu Phe Thr Tyr85 90 95Val Leu Phe Trp Thr Phe Leu Tyr Gly Met Val His Val Tyr100 105 110
權利要求
1.一種分離的多核苷酸，其特徵在於，所述多核苷酸含有編碼具有誘導細胞凋亡功能的多肽的核苷酸序列，該核苷酸序列選自(a)與編碼含有SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8、SEQ ID NO10、SEQ ID NO12、SEQ ID NO14、SEQ ID NO16、SEQ ID NO18、SEQ ID NO20、SEQ IDNO22、SEQ ID NO24、SEQ ID NO26的胺基酸序列的多肽的多核苷酸有至少70％相似性的多核苷酸；(b)編碼含有與SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8、SEQ ID NO10、SEQ ID NO12、SEQ ID NO14、SEQ ID NO16、SEQ ID NO18、SEQ ID NO20、SEQ IDNO22、SEQ ID NO24、SEQ ID NO26的胺基酸序列有至少70％相似性的胺基酸序列的多肽的多核苷酸；(c)與(a)或(b)的多核苷酸互補的多核苷酸。
2.如權利要求1所述的多核苷酸，其特徵在於，所述多核苷酸編碼的多肽具有選自下組的胺基酸序列SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8、SEQ ID NO10、SEQ IDNO12、SEQ ID NO14、SEQ ID NO16、SEQ ID NO18、SEQ ID NO20、SEQ ID NO22、SEQ ID NO24、SEQ ID NO26。
3.如權利要求1所述的多核苷酸，其特徵在於，所述多核苷酸的序列與選自下組的核苷酸序列有至少85％相似性(a)SEQ ID NO1、SEQ ID NO3、SEQ ID NO5、SEQ ID NO7、SEQ ID NO9、SEQ IDNO11、SEQ ID NO13、SEQ ID NO15、SEQ ID NO17、SEQ ID NO19、SEQ ID NO21、SEQ ID NO23、SEQ ID NO25的編碼區序列或全長序列；(b)在遺傳密碼簡併範圍內相應於(a)中提到的序列的至少一個序列；(c)與(a)或(b)中提到的序列互補的序列雜交的至少一個序列。
4.如權利要求3所述的多核苷酸，其特徵在於，所述多核苷酸的序列選自SEQ ID NO1、SEQ IDNO3、SEQ ID NO5、SEQ ID NO7、SEQ ID NO9、SEQ ID NO11、SEQ ID NO13、SEQ IDNO15、SEQ ID NO17、SEQ ID NO19、SEQ ID NO21、SEQ ID NO23、SEQ ID NO25的編碼區序列或全長序列。
5.權利要求1所述的多核苷酸編碼的多肽，其特徵在於，所述多肽包含選自下組中的胺基酸序列的多肽SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8、SEQ ID NO10、SEQID NO12、SEQ ID NO14、SEQ ID NO16、SEQ ID NO18、SEQ ID NO20、SEQ ID NO22、SEQ ID NO24、SEQ ID NO26；或與以上任一胺基酸序列具有至少90％相似性的多肽；或其保守性變異多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
6.權利要求5所述的多肽，其特徵在於，所述多肽具有選自下組的胺基酸序列SEQ ID NO2、SEQ ID NO4、SEQ ID NO6、SEQ ID NO8、SEQ ID NO10、SEQ ID NO12、SEQ ID NO14、SEQ ID NO16、SEQ ID NO18、SEQ ID NO20、SEQ ID NO22、SEQ ID NO24、SEQ ID NO26。
7.一種載體，其特徵在於，所述載體含有權利要求1所述的多核苷酸。
8.一種遺傳工程宿主細胞，其特徵在於，所述宿主細胞選自(a)用權利要求7所述的載體轉化或轉導的宿主細胞；(b)用權利要求1所述的多核苷酸轉化或轉導的宿主細胞。
9.一種抗體，其特徵在於，所述抗體是能與權利要求5所述的多肽特異性結合的抗體。
10.一種核酸片段，其特徵在於，所述核酸片段含有權利要求1所述的任一多核苷酸中8-100個連續的核苷酸。
11.權利要求1所述的多核苷酸在誘導細胞凋亡中的應用，其特徵在於所述多核苷酸在宿主細胞中外源表達會誘導細胞凋亡。
12.權利要求11所述的應用，其特徵在於所述的宿主細胞選自權利要求8所述的宿主細胞。
13.權利要求1所述的多核苷酸或權利要求5所述的多肽在製備預防和/或治療與人體細胞凋亡有關的疾病的藥物中的用途。
14.根據權利要求13所述的用途，其中所述疾病選自如愛滋病、神經系統的退行性病變等自身免疫疾病和腫瘤。
15.含有權利要求5所述的多肽和藥學上可接受的載體的藥物組合物。
16.一種自身免疫疾病或腫瘤的體外檢測方法，其特徵在於，利用權利要求9所述的抗體或權力要求10所述的核酸片段來檢測宿主樣品中的多肽的存在或水平。
全文摘要
本發明公開了一類新的編碼具有誘導細胞凋亡功能的人蛋白的多核苷酸，及其編碼的多肽，多肽的抗體。本發明還公開了這類新的多核苷酸在宿主細胞中外源表達誘導細胞凋亡的應用。本發明還公開了所述多肽、抗體在製備預防和治療與人體細胞凋亡相關的疾病，尤其在開發如愛滋病、神經系統的退行性病變等自身免疫疾病和腫瘤的藥物上的用途。
文檔編號C12N15/63GK1900279SQ200510085500
公開日2007年1月24日 申請日期2005年7月22日 優先權日2005年7月22日
發明者石太平, 王蘭, 馬大龍, 高霞, 高鵬, 於傳飛, 鄧唯唯, 郭金海, 馬進京, 程華玲, 王欣宇, 童鬱蓉 申請人:北京諾賽基因組研究中心有限公司