含有艾塞那肽的藥物製劑的製作方法

2023-05-02 11:38:16

專利名稱：：含有艾塞那肽的藥物製劑的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種艾塞那肽的穩定藥物製劑，該藥物製劑可用於糖尿病患者的治療。
背景技術：
：艾塞那肽(exenatide或exendin-4)最先從大毒蜥(Helodermsuspectum)的唾液分泌物中分離出來(Eng，J.等，J.Biol.Chem.，265:20259-62，1990;Eng，J.等，J.Biol.Chem.，267:7402-05，1992)，這是一種39個胺基酸的多肽，其胺基酸序列與類胰高血糖素glucagon-likep印tide-1(GLP-1)有約53%的同源性(Goke等,J.Biol.Chem.,268:19650-55,1993)，其胺基酸序列結構如下His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gin-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-lie-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-GIy-AlarPro-Pro-Pro-Ser藥理學研究發現，艾塞那欣具有和glp-i相似的作用，即能刺激胰腺e細胞分泌胰島素。艾塞那肽可以在體外作用於某些分泌胰島素的細胞上的GLP-1受體、作用於來自豚鼠胰臟的散布腺泡細胞和作用於來自胃的壁細胞；還報導所述肽刺激促生長素抑制素釋放並且抑制分離的胃中的胃泌素釋放(Goke等，J.Biol.Chem.,268:19650-55,1993;Schepp等，Eur.J.Pharmacol.,69:183-91,1994;Eissele等，LifeSci.，55:629-34,1994)。艾塞那肽明顯比GLP-1的作用時間長(Eng,J.exendin-4對db/db小鼠的高血糖症的延長效應(Prolongedeffectofexendin-4onhyperglycemiaofdb/dbmice),Diabeteds1996年5月；45(增幹U2):152A(摘要554))。艾塞那肽可以和人類GLP-1受體結合併且激活該受體，從而促進胰島素的合成和分泌。艾塞那肽是一種新的分子實體，它與其他的降糖藥在結構上毫無相關性。雖然艾塞那肽呈血糖依賴性促進胰島素的分泌，但是它和胰島素也沒有結構相關性，並且臨床上也沒有證據表明它可以作為胰島素的替代品。艾塞那肽在人類和大鼠的基礎受體系統中誘導cAMP產生的作用與GLP-1基本相同，最顯著的受體結合部位在胰腺胰島部位。在灌流大鼠中發現艾塞那肽可以促進第一時相胰島素分泌和第二時相胰島素分泌。細胞水平的研究表明艾塞那肽在胰島素和生長抑素不存在的情況下可以阻斷胰高血糖素的作用。這就提示了艾塞那肽在單細胞水平也有作用。艾塞那肽還可以劑量依賴性地減慢胃排空速度，急性艾塞那肽注射可以劑量依賴性的減少攝食量至約75%(在動物或人類均有此現象)。在體內實驗中，艾塞那肽能通過多種作用機制改善禁食和餐後的血糖濃度，適合用於2型糖尿病患者的長期治療。該藥物由美國Amylin公司和禮來公司合作開發，FDA已批准其上市，商品名Byetta，用於對單獨使用二甲雙胍、磺脲類藥物或二甲雙胍和磺脲類藥物聯用治療未能獲得良好控制的2型糖尿病患者的輔助治療。目前國內外報導的有關艾塞那肽(exendin-4)的專利文獻有很多，茲列舉如下tableseeoriginaldocumentpage4tableseeoriginaldocumentpage5tableseeoriginaldocumentpage6艾塞那肽作為一種多肽類藥物，其穩定性還是無法與常規化學藥物相比，其理化、生物學性質在長期貯存時會因受到多種環境因素的影響而發生變化。例如對溫度，氧和紫外線高度敏感。由於這些因素的作用，可能發生多種物理或化學變化，例如吸附，聚合和氧化。因此如果貯存期間艾塞那肽的穩定性不能保證的話，會導致給藥劑量的變化從而影響療效。由於艾塞那肽注射液臨床用於II型糖尿病的治療，現有的方案是每次給藥5-10微克，每天給藥2-3次，使用周期長達半年以上。因此，製備一種穩定，方便病人給藥的製劑形式對於艾塞那肽的臨床應用是極其重要的。美國專利(US6902744和US7115569)公開了一種含有艾塞那肽的藥用組合物，根據該專利製備的製劑(商品名BYTTA)已在臨床中應用。但是，根據該專利所製備的藥用組合物，必須在低溫條件下保存以保證艾塞那肽的穩定性。此外，為了防止多劑量使用帶來的汙染而加入了防腐劑。而且，現有的製劑形式在實際使用中仍存在很多問題，由於穩定性問題，艾塞那肽藥劑需要低溫保存，現有的多劑量包裝形式在外出途中很難保證低溫貯存條件從而影響藥品質量，進而影響到療效；長期使用含有防腐劑的製品，可能帶來很多潛在的傷害等。因此，研究出一種能穩定保存艾塞那肽，並適合於實際臨床使用的藥物製劑是極其有意義的。本發明涉及的就是此方面內容。
發明內容本發明的目的是提出一種含有艾塞那肽的穩定藥劑，其在室溫條件下具有良好的穩定性，並且不含防腐劑，具有更好的安全性。根據艾塞那肽的臨床使用特點，最為安全理想的注射製劑形式是單劑量包裝，給藥劑量精確，不含潛在的危險物質，在常溫下穩定以方便外出攜帶和保存。由於艾塞那肽注射液臨床每次給藥劑量極小，一般每次給藥5-10微克，因此製備穩定、方便應用的單劑量是極其困難的。艾塞那肽作為一種多肽類藥物，其常溫穩定性很低，而且因為臨床劑量小，在單劑量包裝內艾塞那肽的含量僅為10微克，極易被包裝器材的器壁所吸附。即使增加起始包裝中艾塞那肽的含量也無法解決這個問題，因為器壁的吸附是與時間相關的，無法通過定量增加額外的裝量來彌補器壁的吸附；另一方面，為了方便患者攜帶和使用，單劑量包裝的艾塞那肽注射藥劑最好是室溫穩定的，這樣可以方便患者外出的攜帶和保存，方便外出旅行途中的使用。根據美國專利(US6卯2744和US7115569)所提供的藥用組合物處方，並不能完全達到上述的效果。例如，根據該技術方案製備的單劑量應用的艾塞那肽注射劑，在單支劑量很低的情況下(<20微克/支)，在預充注射器中保存過程中隨時間的變化，含量會逐漸下降。而且，根據該技術方案製備的藥用注射劑，在室溫條件下，穩定性也比較有限，短時間存放後，即出現含量下降，有關物質增加等現象。到目前為止，尚沒有一種技術方案，可以製備便於臨床使用的可以在常溫保存的單次使用的艾塞那肽藥用製劑。本研究的發明者通過大量的處方篩選和穩定性實驗，意外地獲得了一種包含低濃度艾塞那肽的藥用組合物。與現有的技術方案相比，該組合物極大的降低了器壁對艾塞那肽的吸附，使製備極低規格的單劑量使用艾塞那肽注射液成為可能。而且，發明者通過穩定性實驗還意外發現，根據本發明所製備的艾塞那肽注射液，與現有的技術方案相比較，具有更好的熱穩定性，可以在室溫下保存較長時間而不影響其含量和質量，從而有利於糖尿病患者的日常使用，特別是旅行期間的攜帶和使用(見實例2的比較結果)。本發明的藥物製劑除了艾塞那肽作為有效成分外，還含有能夠維持製劑在水溶液狀態下pH值為3.0-7.0緩衝液及增強艾塞那肽穩定性的輔料，溶液的pH範圍在3.0-7.0，優選4.0-6.0，最優選pH為4.5。本發明的優點在於通過添加一些能被人體接受的成分，增強了艾塞那肽的理化與生物學活性的穩定，從而製備出一種適合於臨床使用，特別是注射使用的製劑。這種製劑可以防止有效成分(艾塞那^:)由於容器吸附，或因降解、氧化等多種因素而導致失效，從而方便運輸、長期保存和臨床使用。上述藥物製劑中，艾塞那肽在液體製劑中的濃度為10-500ug/ml，優選30-150ug/ml，最優選為50ug/ml。上述藥物製劑中，適用於本發明的緩衝液為能夠維持製劑在水溶液狀態下pH值為3.0-7.0的任何一種緩衝液，可任選自磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液、磷酸緩衝液、醋酸緩衝液、巴比妥鈉緩衝液或檸檬酸緩衝液，濃度為5-100mmol/L，優選10-30mmol/L，最優選20mmol/L;緩衝液的pH範圍在3.0-7.0，優選4.0-6.0,最優選pH為4.5。其中，緩衝液優選磷酸緩衝液、磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液或醋酸-醋酸鈉緩衝液，最優選的是磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液，濃度為5-100mmol/L，優選10-30mmol/L，最優選的濃度為20mmol/L,溶液的pH範圍在3.0-7.0之間，優選4.0-6.0，最優選pH為4.5。上述藥物製劑中，增強艾塞那肽穩定性的輔料可選用甲硫氨酸、葡萄糖、蔗糖、甘露醇或甘氨酸的一種或幾種，優選甲硫氨酸。甲硫氨酸的濃度(重量/溶液體積，w/v)為1%-6%，優選為2%-4%，最優選為3%。根據需要，還可將上述的藥物製劑製備為凍乾粉針，凍幹前的液體製劑基本上為等張和或等滲的，因此凍幹後加入適量的注射用水能夠還原形成等張或等滲溶液。本發明使用一次性預灌封注射器、西林瓶或安瓿瓶作為本製劑的貯存容器，優選預灌封注射器，最優選lml容量的預灌封注射器，其優點是使用方便，可減少中間過程的汙染，另外在小劑量、小體積注射時可保證藥液能被充分使用，因而特別適合微量注射時使用。本發明的優點在於通過添加一些能被人體接受的成分，增強了艾塞那肽的理化與生物學活性的穩定，從而製備出一種適合於臨床使用，特別是注射使用的製劑。這種製劑可以防止有效成分(艾塞那肽)由於容器吸附，或因降解、氧化等多種因素而導致失效，從而方便運輸、長期保存和臨床使用。適用於本發明的緩衝液為能夠維持製劑在水溶液狀態下pH值為3.0-7.0的任何一種緩衝液，如磷酸緩衝液、醋酸緩衝液、巴比妥鈉緩衝液和檸檬酸緩衝液等。本發明優選的緩衝液為磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液，pH值優選4.0-6.0，最優選為4.5。為了考察不同pH條件下製劑的穩定性，按如下條件進行了不同pH條件對製劑穩定性的影響實驗通過篩選不同pH值條件下的艾塞那肽穩定性，方法如下稱取艾塞那肽，加水溶解成10ug/0.2ml的艾塞那肽溶液，將該溶液分為4份，分別用不同pH的緩衝液調pH至3.5、4.5、5.5、6.5，用lml的預裝針將4種pH值溶液分別分裝0.2m1/支，然後放入40OC烘箱中加速試驗十天，用HPLC檢測方法觀察產品降解情況，見表l。①pH-3.5(醋酸-醋酸鈉緩衝液)，20ramol/LpH=4.5(磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液〉，20mmol/L③pH-5.5(磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液)，20mmol/LPH=6.5(磷酸緩衝液)，20raraol/LRP-HPLC法檢測艾塞那肽注射液的方法如下儀器色譜柱SepaxC44.6X150mm(SepaxTechnologies,Inc.)試劑磷酸緩衝液(PBS):稱取KH2P04U.58g，H3P04(85%)10.9g，加水定容到1000ml。流動相A:PBS468g與乙腈26g混合，過濾脫氣流動相B:PBS536g與乙腈338g混合，過濾脫氣操作方法流速lml/min;檢測波長214nm;柱溫55°Ctableseeoriginaldocumentpage10結果艾塞那肽在pH4.5以下或5.5以上都易降解，而在4.5、5.5時較穩定，兩者以pH4.5為最佳。本發明優選磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液，是因為檸檬酸本身具有殺菌作用，對於製劑的長期貯存具有一定的作用，另外檸檬酸還具有止痛作用，可以減輕本製劑因pH較酸在注射時帶來的痛疼。多肽藥物注射劑組合物中，合適的穩定劑對於多肽藥物的穩定是極其重要的(WangW，Martin-MoeS,PanCetal.Stabilizationofapolypeptideinnon-aqueoussolvents.IntJPharm.2007Sep15)為了達到本發明的目的，發明者還研究了大量不同製劑輔料對艾塞那肽穩定性的影響。一般適合多肽製劑應用的輔料有糖類、胺基酸類、表面活性劑、醇類、金屬螯合劑等。本發明選擇了一些適合於人體應用的輔料進行了篩選。適用於本發明的糖類可選擇多種單糖，寡糖和多糖及磷脂和核苷酸衍生物。典型例子如下三價和更高的蔗糖醇，例如甘油，，赤蘚醇，阿糖醇，木糖醇，山梨醇和甘露糖醇；酸性糖例如葡萄糖醛酸，艾杜糖醛酸，神經氨糖酸，半乳糖醛酸，葡萄糖酮酸，甘露糖醛酸，透明質酸及其鹽，硫酸軟骨素及其鹽，還有肝素，菊粉，幾丁質及其衍生物，糊精，平均分子量為5000~150000的葡聚糖和海藻酸及其鹽。這些糖類，可以單獨添加，也可以聯合使用。適用於本發明的多肽、胺基酸及衍生物可以從下述一組物質中選擇而來的甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸、天冬氨酸、穀氨酸、蘇氨酸、色氨酸、賴氨酸、羥賴氨酸、組氨酸、精氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸等以及它們的衍生物。它們可以單獨添加，也可以聯合使用。適用於本發明的非離子表面活性劑，例如脫水山梨醇脂肪酸酯，甘油脂肪酸酯(如脫水山梨糖醇辛酸單酯，脫水山梨糖醇月桂酸單酯和脫水山梨糖醇棕櫚酸單酯)，聚甘油脂肪酸酯(例如甘油辛酸單酯，甘油肉豆蔻酸單脂霜和甘油硬脂肪酸單酯)，聚氧乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯，聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯，聚氧乙烯甘油脂肪酸酯，聚氧乙烯乙二醇脂肪酸酯，聚氧乙烯烷基醚，聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚，聚氧乙烯苯醚，聚氧乙基化硬蓖麻油，聚氧乙基化蜂蠟衍生物，聚氧乙烯化羊毛脂衍生物或者聚氧乙烯脂肪酸醯胺，陽離子表面活性劑是烷基硫酸鹽(如有一個d。一d8垸基的垸基硫酸鹽)，聚乙烯烷基醚硫酸鹽，磺基琥珀酸酯鹽，天然表面活性劑是卵磷脂，甘油磷脂，神經鞘磷脂，蔗糖脂肪酸酯等。當然這些表面活性劑既可以單獨使用，可以混合用。為了研究在加有不同輔料添加劑條件下艾塞那肽的穩定性，進行了以下實驗，方法如下先配製不同的輔料溶液，然後稱取艾塞那肽，將其加入到不同的輔料溶液中溶解成約IOU8/0.21111的艾塞那肽制^|溶液，每個不同輔料組中都含有20mMpH4.5的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液，並且都用NaOH或HCl調pH至4.5。配製完後放入40'C烘箱中進行加速試驗，每周取樣用HPLC檢測，觀察產品降解情況，具體結果見下表。表2:輔料組成表組別處方濃度1葡萄糖5%2蔗糖6%3甘露醇4%4甘氨酸2.3%5甲硫氨酸3%6EDTA5腿ol/L7吐溫-800.005%8甲硫氨酸+吐溫-803%，0.005%9甘露醇+EDTA4%，5,1/110無輔料以下為不同配方穩定性實驗結果(1)樣品的澄明度表3顯示樣品在40'C條件下存放4周後，沒有渾濁現象產生。表3:樣品在40。C條件下存放4周澄明度檢測結果組別T-O周T-1周T-2周T-3周T-4周1無色澄清無色澄清無色澄清無色澄清無色澄清2無色澄清無色澄清無色澄清無色澄清無色澄清3無色澄清無色澄清無色澄清無色澄清無色澄清4無色澄清無色澄清無色澄清無色澄清無色澄清5無色澄清無色澄清無色澄清無色澄清無色澄清6無色澄清無色澄清無色澄清無色澄清無色澄清7無色澄清無色澄清無色澄清無色澄清無色澄清8無色澄清無色澄清無色澄清無色澄清無色澄清9無色澄清無色澄清無色澄清無色澄清無色澄清10無色澄清無色澄清無色澄清無色澄清無色澄清(2)RP-HPLC檢測利用RP-HPLC的方法，每周取樣檢測。表4、5顯示樣品在4(TC加速條件下，只有含有甘露醇與甲硫氨酸的樣品的有關物質與肽含量沒有發生大的變化，其它樣品的有關物質都有較大的增加，肽含量明顯降低。表4:樣品在40。C條件下存放4周，每一周用RP-HPLC檢測有關物質tableseeoriginaldocumentpage13綜合以上實驗結果可得出以下結論糖類(包括葡萄糖、蔗糖、甘露醇)的添加，對艾塞那肽能起一定的穩定作用；表面活性劑不能減少其有關物質的增加；EDTA對製劑的穩定也沒有什麼影響；而胺基酸類中甘氨酸或甲硫氨酸能對對製品的穩定性起作用，特別是甲硫氨酸能對製劑有最好的保護作用，甲硫氨酸在製劑中起著抗氧化劑和等滲調節劑雙重作用，可以減少有關物質的增加，並能使艾塞那肽在製劑中的肽含量保持穩定，因此最終優選甲硫氨酸作為艾塞那肽製劑的輔料。由於考慮到注射給藥製劑的滲透壓應與人體生理滲透壓相近，從而選擇3%(W/V)的濃度作為製劑中甲硫氨酸最優用量。通過以上的研究，發明者認為如下的藥劑組合是理想的10-500ug/ml的艾塞那肽，優選的為30-150ug/ml，最佳濃度為50ug/ml;合適濃度的甲硫氨酸、甘氨酸、葡萄糖、蔗糖或甘露醇，優選1%-6%濃度(w/v)甲硫氨酸，較優選2%-4%濃度(w/v)甲硫氨酸，最優選甲硫氨酸濃度為3%。所選緩衝液可為可任選自磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液、磷酸緩衝液、醋酸緩衝液、巴比妥鈉緩衝液或檸檬酸緩衝液，濃度為5-100nraiol/L,優選10-30mmol/L，最優選20mmol/L;緩衝液的pH範圍在3.0-7.0，優選4.0-6.0，最優選pH為4.5。其中，緩衝液優選磷酸緩衝液、磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液或醋酸-醋酸鈉緩衝液，最優選的是磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液，濃度為5-100mmol/L，優選10-30mmol/L，最優選的濃度為20mmol/L，溶液的pH範圍在3.0-7.0之間，優選4.0-6.0，最優選pH為4.5。作為一種選擇，實施例1公開了一種較為合適的艾塞那肽製劑處方，其中exendin-4的濃度為50ug/ml，甲硫氨酸的濃度(w/v)為3%，磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液的濃度為20mmol/L,溶液的pH為4.5，以0.2ml/支灌裝於lml的預灌封注射器中。根據需要，可將上述的藥物製劑製備為凍乾粉針。上述的藥物製劑可用於對單獨使用二甲雙胍、磺脲類藥物或二甲雙胍和磺脲類藥物聯用治療未能獲得良好控制的2型糖尿病患者的輔助治療，臨床使用時為皮下注射。一種優選的臨床給藥方案為每天兩次皮下注射，每次5-10iig的艾塞那肽。根據本發明製備的艾塞那肽注射液製劑與現有的技術方案(美國專利US6902744和US7115569)進行了不同條件下穩定性的比較。從實例2的實驗結果中可看到在4'C條件下本發明的製劑處方能使高濃度與低濃度的艾塞那肽在肽含量與有關物質上都能保持穩定；在4。C條件下根據美國專利(US6902744和US7115569)已開發上市的8丫1丁八@製劑處方可使高濃度的艾塞那肽在製劑中保持穩定(即肽含量與有關物質沒有大的變化)，但其不能使低濃度的艾塞那肽在製劑中保持穩定，主要是肽含量有較大降低；在25'C條件下本發明的製劑處方在6個月內能使高濃度與低濃度的艾塞那肽在肽含量與有關物質上都能保持穩定；在25。C條件下根據美國專利(US6902744和US7115569)已開發上市的8丫^厶@製劑處方不能使艾塞那肽在製劑中保持穩定，不論是高濃度還是低濃度的艾塞那肽，特別低濃度的艾塞那肽在製劑中變化尤其明顯(肽含量有較大減少，有關物質大量增加)。從這個對照實驗中可得，本發明的製劑處方在室溫條件下對保持艾塞那肽在製劑中的穩定性是明顯優於根據美國專利(US6902744和US7115569)已開發上市的8￥^八@製劑處方，特別在使用低濃度的艾塞那肽時，優勢更加明顯。本發明還研究了不同包裝容器對製劑的影響，結果見實例3。研究結果顯示使用一次性的lml預灌封注射器(預裝針)作為本製劑的貯存容器，不僅使用方便，可減少中間過程的汙染；而且與常規的安瓿或西林瓶包裝相比較，在極低藥液濃度下更體現了穩定更高的優點。在本發明藥物組合的基礎上改變其中組分的濃度或加入其他物質，但對提高艾塞那肽穩定性沒有顯著改變，仍被視為本發明的一部分。為了進一步闡明本發明，提供了下列例子，這些例子僅僅是為了進一步說明本發明，並不意味著作為一種限制。圖1為艾塞那肽藥物製劑的製備工藝路線示意圖具體實施方式實例一含有艾塞那肽的注射用藥物製劑的製備取一定量的艾塞那肽原料藥，根據現有艾塞那肽的重量計算將其稀釋至50Pg/ml時製劑最終體積(Vl)。根據V1稱取適量的甲硫氨酸加入到適量的無菌水中溶解，使甲硫氨酸在最終製劑中的含量為3%(W/V)。再加入適量pH為4.5的高濃度磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液，使緩衝液在製劑中終濃度為20mmol/L。再將稱好的艾塞那肽原料藥投入溶解，用lmo1/1HCL或10%Na0H調節pH至4.5。最後加入適量的無菌水進行稀釋使製劑最終體積達到VI，並使用0.22微米的濾膜對該製劑進行無菌過濾(製備流程見圖1)。以0.2ml/支灌裝於lml的預灌封注射器中。實例二含有艾塞那肽的注射用水劑不同處方的穩定性對比。1)製劑處方l(參考根據美國專利(US6902744和US7115569)已開發上市的艾塞那肽的諾U劑產品BYTTA⑧的製劑處方)分別稱取40g甘露醇和2.2g間甲酚加入到700ml的無菌水中溶解，加入150mlpH為4.5的0.2M醋酸-醋酸鈉緩衝液，將稱好的50mg艾塞那肽原料藥加入入溶解，用lmo1/1HCL或l(mNaOH調節pH至4.5。最後加入適量的無菌水進行稀釋使製劑最終體積達到1000ml，艾塞那肽最終濃度為50Mg/ml。並使用O.22微米的濾膜對該製劑進行無菌過濾。以0.2ml/支灌裝於lml的預裝針中，批號為01批。用上述同樣的方法配製艾塞那肽濃度為200Pg/ml的製劑1000ml，並使用0.22微米的濾膜對該製劑進行無菌過濾。以0.2ml/支灌裝於lml的預裝針中，批號為02批。2)製劑處方2(本發明的製劑處方)稱取30g甲硫氨酸加入到700ral的無菌水中溶解，加入100mlpH為4.5的0.2M磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液，將稱好的5(tag艾塞那肽原料藥投入溶解，用lmo1/1HCL或l(mNaOH調節pH至4.5。最後加入適量的無菌水進行稀釋使製劑最終體積達到1000ml，艾塞那肽最終濃度為50Pg/ml。並使用O.22微米的濾膜對該製劑進行無菌過濾。以0.2ml/支灌裝於lml的預裝針中，批號為03批。用上述同樣的方法配製艾塞那肽濃度為20(mg/ml的製劑1000ml，並使用0.22微米的濾膜對該製劑進行無菌過濾。以0.2ml/支灌裝於lml的預裝針中，批號為04批。3)兩種不同處方製劑的穩定性對比將上述不同處方的四批製劑存放於25t:與4'C環境下在25'C環境下放置6個月，在0、1、2、3、6取樣用RP-HPLC進行檢測；在4。C環境下放置18個月，在0、3、6、9、12、18個月時取樣用RP-HPLC進行檢測。表14:二種處方製劑在25'C條件下貯藏6個月，RP-HPLC檢測結果lil^蔬FkH、SV曰、檢測項目批號J(!L鵬H、Jl日八月J肽含量(％)有關物質(％)0105.20.331104.40.592100.21.4701395.21.87687.23.520104.60.391103.40.472103.20.63023100.11,15698.82.930104.80.371104.40.472103.20.43033104.10.756102.80.930104,20.351103.70.382102.20.52043103.10.856101.21.13表15:二種處方製劑在4'C條件下貯藏18個月，RP-HPLC檢測結果貯藏時間(月)檢測項目批號穽《有關物質(％)0105.20.333105.40.436103.40.67019102.20.8812跳21.211895.91.530104.60.393103.60.476103.10.53029102.10.7512100.80..9318100.61.020104.80.373105.10.466105.70.55039104.20.6412104.30.6318103.80.750104.20.353103.80.496103.20.63049102.40.6912101.90.7818101.20.95從實例2的實驗結果中可看到在4t;條件下本發明的製劑處方能使高濃度與低濃度的艾塞那肽在肽含量與有關物質上都能保持穩定；在4'C條件下根據美國專利(US6902744和US7115569)已開發上市的BYTTA⑧製劑處方可使高濃度的艾塞那肽在製劑中保持穩定(即肽含量與有關物質沒有大的變化)，但其不能使低濃度的艾塞那肽在製劑中保持穩定，主要是肽含量有較大降低；在25'C條件下本發明的製劑處方在6個月內能使高濃度與低濃度的艾塞那肽在肽含量與有關物質上都能保持穩定；在25。C條件下根據美國專利(US6902744和US7115569)已開發上市的8￥^八@製劑處方不能使艾塞那肽在製劑中保持穩定，不論是高濃度還是低濃度的艾塞那肽，其中低濃度的艾塞那肽在製劑中變化尤其明顯(肽含量有較大減少，有關物質大量增加)。從這個對照實驗中可得，本發明的製劑處方在室溫條件下對保持艾塞那肽在製劑中的穩定性是明顯優於根據美國專利(US6902744和US7115569)已開發上市的8丫11八@製劑處方，特別在使用低濃度的艾塞那肽時，優勢更加明顯。實例三艾塞那肽注射液貯存容器的篩選實驗將艾塞那肽注射液以0.2ml/支分別灌裝於lml的預裝針、西林瓶與安瓿瓶中，分別放置於-20'C、4'C條件下進行考察，放置兩周，每周取樣一次。通過容器對艾塞那肽注射液的吸附作用與容器對藥液的使用率這兩項指標來進行考察。1、容器對艾塞那肽注射液的吸附作用用RP-HPLC檢測，得到肽含量，來計算容器對艾塞那肽注射液的吸附率。2、容器對藥液的使用率不同容器裝的艾塞那肽注射液各取二十支，先分別稱它們的總重(Wl)，將藥液打出後，再分別稱它們的總重(W2)，可使用藥液的總重(W3=Wl-W2)，20X0.2ml艾塞那肽注射液重量為W4，則使用率=(W3/W4)X100%。tableseeoriginaldocumentpage20表13:三種不同容器對艾塞那肽注射液使用率情況tableseeoriginaldocumentpage21從上述結果可得，艾塞那肽灌裝於上述三種不同容器中，在-20'C的條件下三種容器對藥物的吸附作用差不大，但在4'C條件下本發明所用的lml的預裝針相對另兩種容器對艾塞那肽注射液的吸附明顯減少；容器對艾塞那肽注射液使用率對本產品來說尤為重要，因為本產品的用量體積較小，在注射過程中藥液少量損失可能相對於藥液總量會佔有較大的比重，從而會影響治病療效，從表13的實驗結果分析可得，用預裝針能降低藥液在容器中的殘留，因而能減少藥液在注射過程中的損失，使藥液能被充分利用。從上述的容器吸附實驗與藥液使用率情況看，本發明採用預裝針作為容器是符合本產品特點的最佳選擇。實例四艾塞那肽注射製劑的長期穩定性考察以處方50ng/ml+3%甲硫氨酸+20咖ol/L磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液(pH為4.5)按實例一的方法製備三批製劑，每批分成兩份一份放置於溫度25。C、相對溼度60%±10%條件下進行加速試驗，分別於0、1、2、3、6月取樣檢測；另一份放置於溫度4'C恆溫環境長期試驗，分別於0、3、6、9、12、18月取樣檢測。表8:艾塞那肽注射液穩定性考察記錄(貯藏條件:25'C)貯藏檢測項目及結論批號時間(月)澄明度PH肽含量(％)有關物質(％)結論0無色澄清4.5藍20.37合格11無色澄清4.6跳40.43合格2無色澄清4.6104.40.45合格3無色澄清4.5106.21.18合格6無色澄清4.6103.21.52合格0無色澄清4.6108.80.77合格21無色澄清4.5105.40.78合格2無色澄清4.5107.20.41合格3無色澄清4.5104.2O.卯合格6無色澄清4.6102.81.53合格0無色澄清4.5108.20.40合格31無色澄清4.5109.80.44合格2無色澄清4.5106.80.39合格3無色澄清4.6104.21.30合格6無色澄清4.6101.51.82合格表9:艾塞那肽注射液穩定性考察記錄(貯藏條件:4'C)tableseeoriginaldocumentpage23從上述實驗結果中可見，3批的艾塞那肽注射液在25'C加速試驗條件下6個月內各項考察指標均在合格範圍內，長期考察18個月內各項考察指標均在合格範圍內。權利要求1.一種含有艾塞那肽的藥物製劑，其特徵在於所述的藥物製劑含有艾塞那肽、能夠維持製劑在水溶液狀態下pH值為3.0-7.0的緩衝液及增強艾塞那肽穩定性的輔料，所述的輔料可任選自葡萄糖、蔗糖、甲硫氨酸、甘露醇或甘氨酸的一種或幾種。2、根據權利要求1所述的藥物製劑，其特徵在於所述的緩衝液可任選自磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液、磷酸緩衝液、醋酸緩衝液、巴比妥鈉緩衝液或檸檬酸緩衝液，濃度為5-100mmol/L，pH範圍在3.0-7.0。3、根據權利要求2所述的藥物製劑，其特徵在於所述的緩衝液為磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液，濃度為5-100腿ol/L，pH範圍在4.0-6.0。4、根據權利要求1所述的藥物製劑，其特徵在於所述的增強艾塞那肽穩定性的輔料為甲硫氨酸，濃度(重量/溶液體積，w/v)為1%-6%。5、根據權利要求4所述的藥物製劑，其特徵在於所述的增強艾塞那肽穩定性的輔料為甲硫氨酸，濃度(重量/溶液體積，w/v)為3%。6、根據權利要求1所述的藥物製劑，其特徵在於艾塞那肽在液體製劑中的濃度為10-500ug/ml。7、根據權利要求1所述的藥物製劑，其特徵在於艾塞那肽在液體製劑中濃度i50ug/ml，甲硫氨酸的濃度(重量/溶液體積，w/v)為3%，磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液的濃度為20mmol/L，溶液的pH為4.5。8、根據權利要求l-7任一項所述的藥物製劑，其特徵在於所述藥物製劑的貯存容器為預灌封注射器、西林瓶或安瓿瓶。9、根據權利要求1-7任一項所述的藥物製劑，其特徵在於所述藥物製劑可製備為凍乾粉針。10、艾塞那肽在製備權利要求.1-7任一項所述的藥物製劑的用途，所述藥物製劑用於治療2型糖尿病。全文摘要本發明公開了一種含有艾塞那肽(exenatide)的藥物製劑。該藥物製劑除了艾塞那肽作為有效成分外，還含有pH約3-7的10-100mm的緩衝液以及增加艾塞那肽穩定性的輔料。本發明的優點在於通過添加一些能被人體接受的成分，從而製備出一種適合於臨床使用，特別是注射使用而且能穩定保存的艾塞那肽製劑。文檔編號A61K38/17GK101444618SQ20071015716公開日2009年6月3日申請日期2007年11月26日優先權日2007年11月26日發明者劉曉妮,孫漢棟,徐飛虎,玲沈,王同映,馬國昌,黃巖山申請人:杭州九源基因工程有限公司