雷公藤植物的提取物的加工方法

2023-05-08 15:19:16

雷公藤植物的提取物的加工方法
【專利摘要】本發明提供了源自雷公藤(TwHF)植物的提取物形式的產品，其可用於預防、治療或緩解炎症病症或免疫障礙例如自體免疫疾病的症狀。本發明還提供了凍幹TwHF根和/或根部分的方法、凍幹的TwHF根和/或根部分的去皮方法、自凍幹的去皮的TwHF根和/或根部分製備和/或精製可自由流動的固體形式的提取物的方法、和使用TwHF的可自由流動的固體提取物預防、治療或緩解炎症病症和/或免疫障礙的症狀的方法。
【專利說明】雷公藤植物的提取物的加工方法
[0001]相關申請的交叉引用
[0002]本發明要求2011年3月I日提交的美國臨時申請第61/448,028號和2011年5月9日提交的美國臨時申請第61/484，031號的優先權。各優先權申請的公開整體援引加入本文。
【技術領域】
[0003]本公開的主題總體上涉及植物和植物產品，更具體地涉及雷公藤(Tripterygiumwilforii Hook F.)植物、植物產品以及製備和使用這樣的植物和植物產品的提取物的方法。
【背景技術】
[0004]雷公藤(TwHF)(衛矛科(Celastraceae))，通常被稱為雷公的藤，其是原產於中國和東南亞的多年生灌木。TwHF包含多種有毒的化合物。TwHF植物的部分，例如葉、莖、花、和根的表皮或皮是有毒的且如果被攝入可能會導致死亡。TwHF已被用於傳統中藥中用於治療疾病和病症，但其應用受到其顯著的毒性風險的限制。還已顯示給藥TwHF抑制白細胞介素-2-介導的免疫抑制 。已顯示給藥TwHF提取物或其組分(即獲自TwHF的化合物雷公藤甲素和雷公藤羥內酯)抑制白細胞介素_2(IL-2)。這樣的化合物的純化成本高且耗費時間，但就毒素而言是必需的。使用獲自所述植物的純化較差的物質存在風險，即給藥毒性物質而導致的有害的結果將大於治療益處。
[0005]炎症反應與身體被外來物體侵入或損傷有關。有時，急性的或慢性的炎症反應都在身體並非處於真正的威脅下的情況下發生，並且炎症反應自身成為需要治療的疾病或病症。類似地且密切相關地，炎症反應能夠抵擋外來物體的侵入，但此反應也在不適合的情況下發生，例如當沒有外來物體時。許多疾病的特徵都在於不適合的免疫反應，其實例是人們已知的自身免疫性疾病。人們不斷地努力以期對於涉及免疫反應和/或不適合的炎症反應的病症提供更有效的且更安全的治療。
[0006]出於上述原因，本領域中持續存在對於以下組合物的需要:所述組合物包含TwHF的有益的生物學活性化合物和存在可接受地降低的TwHF毒素，其可用於預防、減輕、治療或緩解不適合的炎症反應和/或不適合的免疫反應的症狀。

【發明內容】

[0007]本發明描述了用於獲得和加工雷公藤(TwHF)植物提取物的改善的方法，其提供了有益的生物學活性化合物以及可接受地降低水平的毒性物質，這改善了安全性特性。所述方法獲得天然產物，其提供了 TwHF的益處，且沒有使用天然植物所特有的對接受者有害的不當風險。
[0008]在一個方面，本發明描述了製備源自TwHF植物的根的凍幹的根部分的方法，其中所述方法包括將多個凍幹的TwHF根部分置於處於凍幹室中的容器中，其中處於容器中的所述根部分彼此足夠接近以促進熱交換，且其中所述室的溫度為-30°C或更低；降低室中的空氣壓力；並將所述容器加熱至足以使根部分中的水升華，由此製備TwHF植物的凍幹的根部分。在一個實施方案中，繼續凍幹過程，直至凍幹的根部分包含不大於20重量％水。在另一個實施方案中，當容器溫度達到約40°C的溫度時完成凍幹過程。還提供了通過本發明描述的凍幹方法製備的TwHF植物的凍幹的根。
[0009]在一些實施方案中，所述根獲自已培植少於30個月的TwHF植物。在一些實施方案中，所述根獲自TwHF var.Shiloh。在一些實施方案中，期望將TwHF的根加工成特定長度、平均長度、或最大長度的根部分。在這些實施方案中的一些中，在開始凍幹過程之前將所述根加工成長度為6英寸或更低的根部分。在一些實施方案中，將所述根加工以將根的支化部分分離成單獨的根部分，例如不同長度的基本上呈直線的根部分。
[0010]在一些實施方案中，容器置於處於凍幹室中的加熱的支持物上。支持物可以被直接地加熱，但所述公開還包括:所述容器的加熱包括逐漸地增加被加熱的支持物的溫度。容器可以為任何大小、形狀和深度。在一些實施方案中，容器的深度不大於2英寸。在一些實施方案中，容器的加熱不會導致凍幹室的加熱。在一些實施方案中，容器為基本上平面的架，例如具有0.125、0.25、0.5、1.0、1.5或2英寸或0.125-2英寸(高度)範圍內的任何尺寸的升高的周緣或公稱高度的平面表面。
[0011]在一些實施方案中，容器中的根部分保持在約20°C -約70°C的溫度範圍內。在一個實施方案中，容器中的根部分保持在約38°C的溫度下。
[0012]在另一個方面，還提供了製備TwHF植物的凍幹的去皮的根部分(即凍幹的根核)的方法。在一些實施方案中，所述方法包括將皮與凍幹的根部分的根核分離，由此製備TwHF植物的凍幹的去皮的根部分。在一些實施方案中，分離步驟包括向凍幹的根部分施加足以使得皮自根核脫除的機械力。在一些實施方案中，所述方法任選地在選自由以下組成的組的裝置中進行:鼓式去皮設備、環狀去皮設備和連枷去皮設備。
[0013]機械力可以通過本領域中已知的任何方式產生。在一些實施方案中，機械力通過使凍幹的根部分與選自由以下組成的組中的研磨劑接觸而產生:凍幹的根部分、金屬物體、玻璃物體、木製物體、陶瓷物體、繩、皮革、砂、巖石、水泥、混凝土、石榴石、氧化鋁、氧化矽、玻璃纖維、金剛石、去皮鼓的內投影、去皮鼓的平坦的或不平坦的內表面、環狀去皮設備的平坦的或不平坦的內表面、多股連枷、或與多股連枷連接的多個物體。在一個實施方案中，研磨劑是磁化的金屬物體。
[0014]在一個實施方案中，所述方法包括使用為鼓形去皮設備的裝置且研磨劑為鬆散的物質，存在的重量比為凍幹的根部分:研磨劑為1:8。在另一個實施方案中，研磨劑為鬆散的物質，存在的重量比為凍幹的根部分:研磨劑為1:2。在一些實施方案中，凍幹的根部分在真空下與研磨劑一起翻轉，其持續時間足以使皮自凍幹的根部分脫除，其中通過真空將脫除的皮除去(例如通過裝置中的口)，由此將皮與根核分離。
[0015]另一個方面提供了通過本發明所述方法製備的TwHF植物的凍幹的去皮的根部分。一些實施方案提供了 TwHF植物的凍幹的根核，其中所述根核基本上沒有皮。在一些實施方案中，根核包含不大於5重量％的水。在一些實施方案中,根核包含的皮少於尺寸相當的TwHF植物的新鮮的根部分的1%。在一些實施方案中，皮的缺乏通過肉眼觀察確定，例如，TwHF植物的去皮的部分上缺乏粉紅色/淺紅色粉末說明皮的缺乏。[0016]在根據公開的此方面的一些實施方案中，根核包含不大於10%的存在於TwHF植物的皮中的化合物。這樣的化合物(例如雷公藤紅素)可以用作用於確定雷公藤的凍幹的去皮的根部分或其提取物配製物中是否存在殘留的皮。因此，本發明還描述了鑑定TwHF植物的凍幹的去皮的根部分的配製物中的殘留皮的方法，其中所述方法包括確定凍幹的去皮的根部分中的皮標誌物(例如雷公藤紅素)的量，其中凍幹的去皮的根部分配製物中較低的標誌物(例如雷公藤紅素)的量證明根部分配製物包含較低量的殘留皮。本領域技術人員應認識到根提取物的皮汙染的適合閾值水平可以根據提取物的性質及其意圖的應用而變化，因此，所述公開考慮具有不大於閾值水平的皮標誌物例如雷公藤紅素的凍幹的去皮的根部分，即使所述閾值高於根部分中的標誌物的可測量或可檢測量也是如此。凍幹的根部分配製物中的標誌物(例如雷公藤紅素)的量通過本領域中已知方法例如NMR或HPLC確定。
[0017]在一些實施方案中，與尺寸相當的TwHF植物的新鮮的根的皮中存在的雷公藤紅素的量相比較，凍幹的去皮的根部分的配製物包含小於10%的雷公藤紅素。在一些實施方案中，與尺寸相當的TwHF植物的新鮮的根的皮中存在的雷公藤紅素的量相比較，凍幹的去皮的根部分的配製物包含小於5%的雷公藤紅素。在其他實施方案中，與尺寸相當的TwHF植物的新鮮的根的皮中存在的雷公藤紅素的量相比較，凍幹的去皮的根部分的配製物包含小於1%的雷公藤紅素。在其他實施方案中，與尺寸相當的TwHF植物的新鮮的根部分的皮中存在的雷公藤紅素的量相比較，凍幹的去皮的根部分的配製物包含小於0.9%、0.8%、0.7%、
0.6%、0.5%、0.4%、0.3%、0.2%、0.1% 或更低的雷公藤紅素。
[0018]本發明中提供的另一個方面是TwHF植物的提取物，任選地為可自由流動的固體的形式，每mg提取物包含不大於2.5yg的雷公藤紅素。在一些實施方案中，提供了(雷公藤甲素+雷公藤羥內酯)/雷公藤紅素的比例為至少1.36的TwHF植物提取物。在一些實施方案中，TwHF提取物中(雷公藤甲素+雷公藤羥內酯)/雷公藤紅素含量的比例為至少
1.46。
[0019] 本發明提供的其他方面包括將TwHF植物的提取物例如醇提取物加工成可自由流動的固體的方法。一個方面提供了包括以下的方法:獲得TwHF植物的醇提取物，將醇提取物中的醇置換為極性有機溶劑例如乙酸乙酯以形成提取物/乙酸乙酯混合物；將所述提取物/乙酸乙酯混合物與賦形劑在真空下在不高於50°C的溫度下組合，以製備濃縮的混合物；並且在不高於55°C的溫度下乾燥所述濃縮的混合物，由此製備可自由流動的固體形式的醇提取物。在一些實施方案中，提取物通過一次或多次乙醇提取自TwHF的根獲得。在一些實施方案中，所述根為TwHF植物的凍幹的去皮的根。在另外的實施方案中，所述根為TwHF植物的新鮮的去皮的根。通過本發明描述的方法加工TwHF植物的提取物可以對來自任何雷公藤根或根配製物的製備的提取物進行，包括自去皮的雷公藤根製備的提取物。此外，這樣的根可以通過本領域中已知的任何方式去皮，並且因此不需要通過任何具體的方法例如如本發明中的一些實施方案中所述的涉及鼓式去皮設備、環形去皮設備、或連枷去皮設備的方法去皮。例如，對於實踐本公開中描述的提取物加工方法，預期通過使用壓輥、剝皮或其他施加機械力去皮的TwHF植物的根製備的提取物。當然，在凍乾雷公藤根和根部分的方法中，在由去皮的根製備提取物的方法和加工已有的雷公藤提取物的方法中，不需要或不涉及去皮方法。[0020]在另一個方面，所述方法包括將天然的TwHF植物提取物與醇混合，以製備提取物/醇混合物；將所述提取物/醇混合物與賦形劑在真空下在不高於50°C的溫度下組合，以製備濃縮的混合物；並且在不高於55°C的溫度下乾燥所述濃縮的混合物，由此製備可自由流動的固體形式的醇提取物。在一些實施方案中，所述醇為乙醇，在一些實施方案中，所述乾燥步驟在不高於0.2個大氣壓(atm)的壓力下進行。
[0021]適用於本發明所述的方法的賦形劑包括選自由以下組成的組的賦形劑:微晶纖維素(MCC)、麥芽糊精、Aerosil? (熱解矽石)、玉米澱粉、和Neusilin (偏矽酸鋁鎂)。在一些實施方案中，所述賦形劑為微晶纖維素。
[0022]本發明描述的另一個方面是將TwHF植物的醇提取物加工成可自由流動的固體的方法，其中所述方法包括:獲得TwHF植物的醇提取物，將醇提取物中的醇置換為極性有機溶劑例如乙酸乙酯以形成提取物/乙酸乙酯混合物；將所述提取物與非極性有機溶劑組合以製備提取物/非極性有機溶劑混合物；過濾所述提取物/非極性有機溶劑混合物以分離固體沉澱；並乾燥所述固體沉澱，由此製備可自由流動的固體形式的醇提取物。適用於所述方法中的非極性有機溶劑包括選自由以下組成的組中的非極性有機溶劑:直鏈烷烴(包括但不限於戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷、和癸烷)和支鏈的烷烴(包括但不限於異戊烷、異己烷、異庚烷、異辛烷、異壬烷和異矽烷)。在一些實施方案中，非極性有機溶劑為庚烷。
[0023]在另一個方面，本發明描述了將TwHF植物的天然提取物加工成可自由流動的固體的方法，所述方法包括將所述天然提取物與非極性有機溶劑組合以製備其混合物；過濾所述混合物以分離固體沉澱；和乾燥所述固體沉澱，由此製備可自由流動的固體形式的天然提取物。 [0024]本公開還提供了通過任意上述加工方法製備的可自由流動的固體形式的TwHF植物的提取物。
[0025]以下編號的段落各自簡潔地定義本發明的一個或多個示例性的變體。
[0026]1.雷公藤(TwHF)植物的提取物，每mg所述提取物包含不大於2.5 μ g雷公藤紅素。
[0027]2.如段落I所述的提取物，其中所述提取物的(雷公藤甲素+雷公藤羥內酯)/雷公藤紅素(T+Td)/C)的比例為至少1.46。
[0028]3.如段落2所述的提取物，其中所述提取物的(T+Td)/C的比例為至少1.36。
[0029]4.如段落I所述的提取物，其中所述提取物為可自由流動的固體的形式。
[0030]5.由雷公藤(TwHF)植物的根製備凍幹的根部分的方法，包括:
[0031](a)將冷凍的TwHF根部分置於處於凍幹室中的容器中，其中所述室的溫度為-30°C或更低；
[0032](b)降低室中的壓力；和
[0033](c)將所述容器加熱至足以使根部分中的水升華，由此製備TwHF植物的凍幹的根部分。
[0034]6.如段落5所述的方法，其中使用多個根部分，且其中處於容器中的所述多個根部分彼此足夠接近以促進根部分之間的熱交換。
[0035]7.如段落5所述的方法，其中所述根獲自已培植小於30個月的TwHF植物。
[0036]8.如段落5所述的方法，其中在凍幹之前將所述根加工成長度為6英寸或更低的根部分。
[0037]9.如段落8所述的方法，其中將所述根加工成基本上呈直線的根部分。
[0038]10.如段落5所述的方法，其中將所述容器置於處於凍幹室中的加熱的支持物上。
[0039]11.如段落5所述的方法，其中所述容器的加熱不包括所述凍幹室的直接加熱。
[0040]12.如段落5所述的方法，其中所述容器為基本上平面的架。
[0041]13.如段落5所述的方法，其中將所述容器中的所述根部分保持在約20°C -約70°C的溫度範圍內。
[0042]14.如段落5所述的 方法，其中持續進行所述凍幹方法直至所述凍幹的根部分包含不大於20重量％水。
[0043]15.如段落5所述的方法，其中所述根獲自雷公藤Var.Shiloh。
[0044]16.通過段落5的方法製備的雷公藤植物的凍幹的根部分。
[0045]17.製備雷公藤(TwHF)植物的凍幹的去皮的根部分的方法，包括將皮與凍幹的根部分的根核分尚，由此製備TwHF植物的凍幹的去皮的根部分。
[0046]18.如段落17所述的方法，其中所述分離步驟包括向TwHF植物的凍幹的根部分施加足以使得皮自根核脫除的機械力。
[0047]19.如段落18所述的方法，其中所述機械力通過使凍幹的根部分與選自由以下組成的組中的研磨劑接觸而產生:凍幹的根部分、金屬物體、玻璃物體、木製物體、陶瓷物體、繩、皮革、砂、巖石、水泥、混凝土、石榴石、氧化鋁、氧化矽、玻璃纖維、金剛石、去皮鼓的內投影、去皮鼓的平坦的或不平坦的內表面、環狀去皮設備的平坦的或不平坦的內表面、多股連枷、或與多股連枷連接的多個物體。
[0048]20.如段落17所述的方法，其中所述分離步驟包括選自由以下組成的組的裝置:鼓式去皮設備、環狀去皮設備和連枷去皮設備。
[0049]21.通過如段落17所述的方法製備的TwHF植物的凍幹的去皮的根部分或凍幹的根核。
[0050]22.TwHF植物的凍幹的根核，其中所述根核基本上不含皮。
[0051]23.如段落22所述的凍幹的根核，其中所述根核包含的皮少於尺寸相當的TwHF植物的新鮮的根部分的1%。
[0052]24.如段落22所述的凍幹的根核，其中所述根核包含不大於10%的雷公藤紅素。
[0053]25.將TwHF植物的天然提取物加工以製備可自由流動的固體形式的提取物的方法，所述方法包括:
[0054](a)將天然的TwHF植物提取物與醇混合，以製備其混合物；
[0055](b)將所述混合物與賦形劑在真空下在不高於50°C的溫度下組合，以製備濃縮的混合物；和
[0056](c)在不高於55°C的溫度下乾燥所述濃縮的混合物以除去剩餘的乙醇，由此製備可自由流動的固體形式的提取物。
[0057]26.如段落25所述的方法，其中所述提取物通過一次或多次乙醇提取自TwHF植物的根獲得。
[0058]27.如段落25所述的方法，其中所述天然提取物獲自TwHF植物的凍幹的去皮的根部分或凍幹的根核。[0059]28.如段落25所述的方法，其中所述賦形劑選自由以下組成的組:微晶纖維素、麥芽糊精、Aerosil'? (熱解矽石)、玉米澱粉、和Neusilin (偏矽酸鋁鎂)。
[0060]29.如段落28所述的方法，其中所述賦形劑為微晶纖維素。
[0061]30.如段落25所述的方法，其中所述乾燥步驟在建立不大於0.2atm的空氣壓力的真空下進行。
[0062]31.將TwHF植物的天然提取物加工以製備可自由流動的固體形式的提取物的方法，所述方法包括:
[0063](a)將所述天然提取物與非極性有機溶劑組合以製備其混合物；
[0064](b)過濾所述混合物以分離固體沉澱；和
[0065](C)乾燥所述固體沉澱，由此製備可自由流動的固體形式的提取物。
[0066]32.如段落31所述的方法，其中所述天然提取物通過一次或多次乙醇提取自TwHF植物的根獲得。
[0067]33.如段落31所述的方法，其中所述非極性有機溶劑選自由以下組成的組:直鏈C5-C10烷烴和支鏈C5-C10烷烴。 [0068]34.如段落33所述的方法，其中所述非極性有機溶劑為庚烷。
[0069]35.如段落31所述的方法，其中所述提取物獲自TwHF植物的凍幹的去皮的根部分。
[0070]36.通過如段落35所述的方法製備的可自由流動的固體形式的TwHF植物的提取物。
[0071]37.如段落36所述的提取物，其中每mg所述提取物包含不大於2.5 μ g的雷公藤紅素。
[0072]38.如段落36所述的提取物，其中所述提取物的(雷公藤甲素+雷公藤羥內酯)/雷公藤紅素((T+Td)/C)的比例為至少1.46。
[0073]39.如段落36所述的提取物，其中所述提取物的(T+Td)/C比例為至少1.36。
[0074]40.通過如段落31所述的方法製備的可自由流動的固體形式的TwHF植物的提取物。
[0075]41.如段落40所述的提取物，其中每mg所述提取物包含不大於2.5 μ g的雷公藤紅素。
[0076]42.如段落40所述的提取物，其中所述提取物的(雷公藤甲素+雷公藤羥內酯)/雷公藤紅素((T+Td)/C)的比例為至少1.46。
[0077]43.如段落40所述的提取物，其中所述提取物的(T+Td)/C比例為至少1.36。
[0078]44.將TwHF植物的醇提取物加工成可自由流動的固體形式的提取物的方法，包括:
[0079](a)獲得TwHF植物的醇提取物；
[0080](b)將醇提取物中的醇置換為極性有機溶劑以形成提取物/極性有機溶劑混合物；
[0081](C)將所述提取物/極性有機溶劑混合物與賦形劑組合，以形成摻合物(admixture)；
[0082](d)將所述摻合物在真空下在不高於50°C的溫度下濃縮；和[0083](e)在不高於55°C的溫度下乾燥所述濃縮的混合物，由此製備可自由流動的固體形式的提取物。
[0084]45.如段落44所述的方法，其中所述極性有機溶劑為乙酸乙酯。
[0085]46.將TwHF植物的醇提取物加工以製備可自由流動的固體形式的提取物的方法，包括:
[0086](a)獲得TwHF植物的醇提取物；
[0087](b)將醇提取物中的醇置換為極性有機溶劑以形成提取物/極性有機溶劑混合物；
[0088](C)將所述醇提取物與非極性有機溶劑組合以形成摻合物；
[0089](d)過濾所述摻合物以分離固體沉澱；和
[0090](e)乾燥所述固體沉澱，由此製備可自由流動的固體形式的提取物。
[0091]47.如段落46所述的方法，其中所述非極性有機溶劑為庚烷。
[0092]將參考以下包括實施例的詳細的描述更好地理解本發明的其他特徵和優勢。
【具體實施方式】
[0093]本發明基於以下發現:TwHF植物的根的凍幹有助於皮自根核的全面去除，這允許製備基本上不含存在於皮中的毒性化合物(例如雷公藤紅素)的提取物。
[0094]本發明還基於以下發現:非極性有機溶劑和製劑賦形劑能夠將TwHF的常規的提取物轉化為可自由流動的固體。通過本領域已知的方法(例如不使用其他加工步驟的TwHF植物的醇提取)製備的TwHF植物的常規的提取物為蠟狀的、無定型的組合物(即天然提取物形式)，具有不佳的流動特性，其要求特別的方式進行操作和製備可用的藥品產品。通過本發明中所述的加工方法製備的可自由流動的固體包含可用水平的提取物化合物(例如雷公藤甲素和雷公藤羥內酯)，並且可以將這些提取物化合物配製成為用於多種病症的治療的藥品產品，所述病症包括抗炎病症例如風溼性關節炎。
[0095]1.定義
[0096]與其在本領域中的含義一致，術語「提取物」指從物質的組合物中抽提出的物質，例如通過流體物理地抽提，或擠壓，或通過至少部分地溶於能夠接觸且優選地滲透所述物質的組合物的溶劑。提取物還被用於指經過提取或隨後的操作例如用於製備固體而存在的抽提的物質。因此，提取物可以為溶液、混合物、濃縮物或精華的形式。提取物的固體形式基本上不含且通常不含提取中使用的流體例如溶劑。本發明中定義的提取物包括獲自一個或多個提取步驟的單一的提取物以及多個單獨的提取或一系列提取的產物的組合，各提取包括至少一個提取步驟。
[0097]本發明中使用的術語「TwHF植物的醇提取物」指通過一次或多次醇提取而不經過其他加工步驟從TwHF植物(例如TwHF植物的根部分)抽提出的物質，所述其他加工步驟包括例如使用極性有機溶劑(例如乙酸乙酯)的溶劑置換和/或醇提取物中的固體顆粒的分離。醇提取物可以為溶液、混合物、濃縮物或精華的形式。通常，醇提取物不是蠟狀的、無定型的固體且不包含蠟狀的、無定型的固體，但醇的部分去除或完全去除可以製備蠟狀的、無定型的固體的提取物或包含蠟狀的、無定型的固體的提取物，其在本發明中被稱為天然提取物的一個形式。[0098]本發明中使用的術語「TwHF植物的天然提取物」包括通過本領域中已知的方法製備的蠟狀的、無定型形式的固體形式的TwHF植物的提取物。因此，天然提取物的一個形式為蠟狀的、無定型固體的醇提取物或包含蠟狀的、無定型固體的醇提取物。TwHF植物的其他醇提取物不必須為天然植物或植物部分的提取物，並且因此可以不含蠟狀的、無定型固體。
[0099]本發明中使用的術語「濃縮的過濾物」是將在本發明中描述的提取方法期間製備的一種或多種過濾物濃縮的結果。
[0100]本發明中使用的術語「TwHF植物的新鮮的根」指未經過乾燥例如凍幹的TwHF植物的根。
[0101]本發明中使用的術語「根部分」是指TwHF植物的根的一部分或全部根部分，其具有適於置於凍幹室中的大小。為了獲得此適合的大小，可以將TwHF根加工或研磨至與在凍幹室中凍幹相容的長度(或直徑)。
[0102]本發明中使用的術語「研磨劑」指能夠通過摩擦和/或通過機械衝擊磨損或侵蝕物質(例如TwHF植物的根上的皮)的試劑。
[0103]術語「基本上不含皮的根部分」具有其在本領域中普通的且習慣的含義，即大體上沒有皮的根部分。具體而言，預期基本上不含皮的根部分包含的皮少於尺寸相當的TwHF植物的新鮮的根部分的2%(通過肉眼觀察)。
[0104]術語「可自由流動的固體」和「經加工的TwHF」提取物在本發明中可互換地使用。在一些實施方案中，將 天然提取物與非極性有機溶劑組合以製備適於配製成藥品產品和/或營養補充劑的可自由流動的固體提取物。不期望受理論限制，人們認為非極性有機溶劑(例如己烷、庚烷)去除天然提取物中存在的使之難以操作和配製成可被遞送的形式(藥品產品或營養補充劑)的蠟、脂肪和油。在一些實施方案中，通過將提取物(例如已經過使用極性有機溶劑例如乙酸乙酯進行溶劑置換的醇提取物)與賦形劑接觸而將提取物加工，以形成易於操作和配製成藥品產品和營養補充劑的提取物的可自由流動的固體形式。
[0105]I1.凍幹TwHF植物的根的方法
[0106]如在本發明中提供的實施例中所證明的，與常規方法相比較，在去除皮之前將TwHF植物的根或根部分凍幹允許容易地、定量地去除皮。凍幹為脫水方法，其中將水自TwHF植物的根去除，而不將植物物質暴露於對於液體水和/或過量的熱的可能有害的作用的延長的暴露期。凍幹方法可以使用本領域已知的任何方法實施，並且可以在本領域已知的任何凍幹設備中實施。
[0107]本公開的一個方面提供了由TwHF植物的根製備凍幹的根部分的方法，其中所述方法包括將多個凍幹的TwHF根部分置於處於凍幹室中的容器中，其中處於容器中的所述根彼此足夠接近以促進熱交換；降低室中的壓力；並將所述容器加熱至足以使根部分中的水升華，由此製備TwHF植物的凍幹的根部分。
[0108]凍幹方法的第一步是根部分的冷凍。TwHF植物的根可以生長至多至12米的長度，這對於與大多數的商業凍幹室相匹配而言過大。因此，在一些實施方案中，期望在開始凍幹方法之前將TwHF植物的根加工或研磨，以製備更易處理的大小的根部分。在冷凍之前或之後，但在冷凍乾燥之前，將TwHF根加工至期望的長度或長度範圍。例如，在一些實施方案中，將TwHF植物的根加工以製備長度為約24英寸或更低的根部分。在一些實施方案中，將TwHF植物的根加工以製備長度為約12英寸、約11英寸、約10英寸、約9英寸、約8英寸、約7英寸、約5英寸、約4英寸、約3英寸、約2英寸、約I英寸、約1/2英寸或更低的根部分。在一些實施方案中，將TwHF植物的根加工以製備長度為約6英寸的根部分。
[0109]在一些實施方案中，TwHF植物的根的直徑為約1/2英寸或更低。在一些實施方案中，根的直徑為約1/3英寸、1/4英寸、1/8英寸、1/16英寸或更低。在其他實施方案中，TwHF植物的根的直徑為約I英寸或更高。在一個實施方案中，將TwHF植物的根加工以製備長度為約6英寸且直徑為約1/2英寸的根部分。典型地，TwHF根未進行加工以改變其平均直徑，但本公開預期期望(或至少非不希望)使用任何減小直徑和增加表面的常規的研磨技術的這樣的加工，以更有效地凍幹所述配製物。考慮到對根或根部分進行提取，各種長度和直徑的根和根部分是可以接受的，包括研磨的、浸軟的或粉碎的根和根部分。
[0110]在一些實施方案中，TwHF植物的根為支化的。在一些實施方案中，將TwHF植物的支化的根加工，以分離根的支化的部分，以製備基本上呈直線的根部分。
[0111]待用於本發明所述的冷凍乾燥方法中的根部分獲自任何年份和來源的TwHF植物。在一些實施方案中，根部分獲自來源於中國的TwHF植物，且在一些實施方案中，根部分獲自來源於美國的TwHF植物。在一些實施方案中，根部分獲自於TwHF var.Shiloh。本發明中使用的術語「來源於中國的TwHF植物」指獲自中國來源的TwHF植物。此定義包括收穫自在中國種植的植物的根部分、收穫自中國生長的野外植物的根部分、以及收穫自在除中國以外的國家種植的植物的根部分，但所述植物為中國來源(例如自中國TwHF植物的插枝(或種子)生長)。本發明中使用的術語「來源於美國的TwHF植物」指獲自美國來源的TwHF植物。此定義包括收穫自在美國種植的植物的根部分、收穫自美國生長的野外植物的根部分、以及收穫自在除美國以外的國家種植的植物的根部分，但所述植物為美國來源(例如自美國TwHF植物的插枝(或種子)生長)。
[0112]根部分獲自任意年份的TwHF植物。在一些實施方案中，根部分獲自生長了小於約30個月的TwHF植物。在相關的實施方案中，根部分獲自種植了約29個月、28個月、27個月、26個月、25個月、24個月、23個月、22個月、21個月、20個月、19個月、18個月、17個月、16個月、15個月、14個月、13個月、12個月、11個月、10個月、9個月、8個月、6個月或更少的TwHF植物。在其他實施方案中，根部分獲自生長了至少30個月或更長的TwHF植物。在這樣的實施方案中，根部分獲自種植了約31個月、32個月、33個月、34個月、35個月、36個月、37個月、38個月、39個月、40個月、41個月、42個月、43個月、44個月、45個月、46個月、47個月、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年或更多的TwHF植物。
[0113]多個方法適於冷凍TwHF根或根部分(由其製備提取物)。在一些實施方案中，冷凍方法通過在開始冷凍乾燥過程之前將根部分置於容器中並將容器置於專用的冷凍裝置(即與凍幹室分離的冷凍裝置)過夜而實施。在冷凍乾燥過程中，將處於容器中的所述根部分放置得彼此足夠接近以促進熱交換。優選地，根部分與至少一個其他的根部分接觸，和/或與容器接觸，以通過傳導促進熱交換。容器可以包含任意一種或多種物質，優選地包含傳導性物質。容器為與凍幹室相容的任意形狀或基座(footprint)。容器為與凍幹室的內部尺寸相容的任意深度；在一些實施方案中，容器的深度為不大於2英寸，例如約0.125-約2英寸範圍內的深度，或公稱高度。在一些實施方案中，將根部分冷卻至其共晶點，以確保無論壓力如何都不存在液相的物質。
[0114] 特別地預期使用能夠將根部分的溫度降低至-10°C _70°C範圍內的溫度的任何商業的冷凍裝置(例如冷凍器)。在一些實施方案中，將根部分的溫度降低至_20°C -約-70°C範圍內的溫度。在一些實施方案中，將根部分的溫度降低至約_20°C、_25°C、_30°C、_35°C、_40 V、-45 V、-50 °C、-55 °C、-60 °C、-65 °C、或約-70 V的溫度。在一些實施方案中，將根部分的溫度降低至約_20°C的溫度。一旦根已在期望的溫度下冷凍，則將包括所述冷凍的根部分的容器置於凍幹室中，將其溫度保持在約-20 V或更低的溫度。
[0115]在其他實施方案中，冷凍過程在凍幹室中實施，而不是用專用的、另外的冷凍裝置。在這樣的實施方案中，將根部分直接地置於凍幹室中並且將室的溫度降至約-20°C或更低。
[0116]一旦凍幹室已達到期望的溫度且已將根部分置於凍幹室中，則將凍幹室中的空氣壓力降低以使得根部分中的水升華。在一些實施方案中，將熱施加至根部分以促進水自根部分的去除。在此過程中，根部分中的水的至少50%升華。在一些實施方案中，根部分中的水的至少約 60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99% 或更高升華。在一些實施方案中，通過逐漸地將凍幹室的溫度自約10°C增加至約70°C，產生對根部分的輻射加熱以及一些傳導加熱，從而間接地將熱施加至根部分。在一些實施方案中，首先將室的溫度升至約10°C，然後將溫度在約10°C下穩定整夜。隨後將室的溫度升至約35°C，持續約8小時，隨後升至約50°C，持續約8小時。在一些實施方案中，在凍幹過程的最後，凍幹的根部分中的最終的殘留水含量為約20%或更低。在一些實施方案中，凍幹的根部分包含不大於15%水。在其他實施方案 中，凍幹的根部分包含不大於10%水。在其他實施方案中，凍幹的根部分包含不大於5%水或更低。在其他實施方案中，凍幹的根部分包含不大於2%水或更低。
[0117]在其他實施方案中，通過逐漸地將凍幹室中的支持物的溫度自約10°C增加至約70°C，導致主要(如果不是唯一地)對根部分的傳導加熱，從而直接地將熱施加至根部分。在這些實施方案中的一些實施方案中，將冷凍的根部分置於處於凍幹室中的加熱的支持物上的導熱容器中，並逐漸地增加加熱的支持物的溫度。儘管凍幹室的溫度可以以供應至處於室中的支持物的熱量的副產物的形式而升高，但凍幹室自身沒有被直接地加熱。在一些實施方案中，將加熱的支持物的溫度升高至約10°c，持續整夜，隨後再次升高(約20°C至約400C )，持續約6-12小時，並再次升高(約30°C至約60°C )，再持續6_12小時。將處於室中的根部分的溫度保持在約38°C。在一些實施方案中，將加熱的支持物間歇地加熱，由此為根部分提供間歇的熱。在這樣的實施方案中，典型地以2-3秒的間隔將熱提供至根部分。在一些實施方案中，加熱的支持物以5秒、10秒、15秒、20秒、25秒、30秒、35秒、40秒、45秒、50秒、55秒、I分鐘、5分鐘、10分鐘、15分鐘、20分鐘、25分鐘、30分鐘、35分鐘、40分鐘、45分鐘、50分鐘、55分鐘、I小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時或更高的間隔時間為根部分提供間歇的熱。儘管在上述實施方案中典型地不加熱凍幹室，但預期TwHF根部分可以在凍幹室中凍幹，除加熱含根部分的容器的支持物外，其也被加熱。在一些實施方案中，在凍幹過程的最後，凍幹的根部分中的最終的殘留水含量為約20%或更低。在一些實施方案中，凍幹的根部分包含不大於15%水、不大於10%水、不大於5%水或更低。
[0118]通過應用真空控制凍幹室的壓力。真空用於促進升華。在一些實施方案中，凍幹室中的壓力範圍為約3-約10毫巴。在一些實施方案中，凍幹室中的壓力不大於0.01atm0
[0119]在一些實施方案中使用冷凝室和/或冷凝器板以提供在上面包含或收集水蒸氣的表面。通過利用冷凝器，防止了水蒸氣達到真空泵，其可能會降低泵的性能。冷凝器保持在本領域技術人員已知的可用於除溼的溫度。在一些實施方案中，冷凝器的溫度保持在_50°C或更低。在一些實施方案中，冷凝器的溫度保持在_30°C或更低。
[0120]所得的TwHF植物的凍幹的根部分包括根核和皮，其中皮與根核的附著被改變，因此相對於尺寸相當的新鮮的TwHF根部分，降低了皮對於根核的附著強度。不期望受具體理論的限制，預期例如根據本發明所述的凍幹方法製備的完全乾燥的TwHF植物的根部分允許皮自根核的 更為定量的去除。與獲自其中已通過常規的方法去除皮但未首先凍幹的根核的提取物相或獲自凍幹的但其中凍幹過程未使得根部分中的水基本上升華的根核的提取物相比較，期望獲自這樣的凍幹的去皮的根核的提取物包含顯著更低水平的毒性化合物(例如雷公藤紅素)。
[0121]II1.TwHF植物的根的去皮方法
[0122]本公開涉及TwHF根的去皮方法的方面不同於本公開的其他方面，例如TwHF根的凍幹方法、製備TwHF提取物的方法，和將這樣的提取物加工成為可自由流動的固體的方法。但是，本公開的這些方面是模塊化的，並且以不同的組合預期，例如包括凍幹方法、去皮方法和提取物製備方法的製備提取物的方法。
[0123]因此，本公開的另一個方面是自TwHF植物的根去除皮的方法，所述方法與使用去皮刀例如彎刀、小刀或蔬菜去皮器自所述根剝去皮或切掉皮相比較需要較少的勞動強度。這些抑制的方法是費力的且不適於商業製造。本發明所述的方法適於轉化為商業製造環境並且包括將皮與凍幹的根部分的根核分尚，由此製備TwHF植物的凍幹的去皮的根部分。儘管預期去皮方法可用於去皮TwHF植物部分(例如根)，但還預期本發明公開的去皮方法可用於具有期望自植物或植物部分去除的皮的多種裸子植物和被子植物的植物部分(例如根或莖)。
[0124]通過本領域已知的任何方法將凍幹的根部分的皮與根核分離。例如，在一些實施方案中，將皮與根核分離包括通過機械力將凍幹的皮與根核的附著機械地破壞。在一些實施方案中，通過將凍幹的根部分與壓輥或其他壓縮根部分的工具接觸而產生機械力。在一些實施方案中，通過將凍幹的根部分與研磨劑接觸產生機械力。示例性的研磨劑包括但不限於凍幹的根部分、金屬物體、玻璃物體、木製物體、陶瓷物體、繩、皮革、砂、巖石、水泥、混凝土、石榴石、玻璃纖維、氧化鋁、氧化矽、金剛石和本領域中已知的任何其他研磨劑。在一些實施方案中，研磨劑為金屬物體例如螺栓、螺釘、釘子或金屬碎片。這樣的金屬物體可以獲自任何五金商店。在一個實施方案中，研磨劑為螺栓。在一些實施方案中，螺栓為至少3英寸長。在其他實施方案中，螺栓的長度小於I英寸，例如長度為1/2英寸或更低的螺栓。在一個實施方案中，螺栓的長度為1/2英寸，具有3/8英寸頭。
[0125]製備凍幹的去皮的根的方法可以在本領域中已知的任何裝置中進行。在一些實施方案中，所述裝置為包括壓輥的任何適合的大小的設備，優選地，其中可施加至根部分的壓力的大小是可調的。在其他實施方案中，所述裝置為選自由以下組成的組的設備:鼓式去皮設備、環狀去皮設備和連枷去皮設備。在某些實施方案中，所述裝置為鼓式去皮設備且所述研磨劑為鬆散的物質，存在的重量比為研磨劑:凍幹的根部分為12:1.在一些實施方案中，研磨劑與凍幹的根部分的重量比為11:1、10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1或1:1。研磨劑與凍幹的根部分的重量比取決於根部分的大小和研磨劑的密度，並且可以由本領域技術人員確定。在一些實施方案中，研磨劑不是單獨的試劑，而是去皮鼓的內投影、去皮鼓的平坦的或不平坦的內表面、環狀去皮設備的平坦的或不平坦的內表面、多股連枷、或與多股連枷連接的多個物體。
[0126]在一些實施方案中，分離步驟包括在真空下將凍幹的根部分與研磨劑混合(commingling),持續時間足以使皮自凍幹的根部分釋放,其中釋放的皮通過真空自排出口去除，由此將皮與根核分離。在一些實施方案中，凍幹的根部分與研磨劑一起翻轉，持續至少5分鐘、10分鐘、15分鐘、20分鐘、25分鐘、30分鐘、35分鐘、40分鐘、45分鐘、50分鐘、55分鐘、I 小時、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12 小時或更高。
[0127]無論使用何裝置或設備將皮自根部分去除，當通過肉眼觀察根部分上明顯沒有皮時完成去皮過程。任選地，去皮過程的持續時間通過對於TwHF根皮的標誌物例如雷公藤紅素的分析測定，如下所述。
[0128]在一些實施方案中，所述方法還包括將研磨劑與去皮的根部分分離。在一些實施方案中，對於將研磨劑與去皮的根部分分離，期望利用可磁化(例如鐵磁)的金屬物體作為研磨劑。在這樣的實施方案中，一旦去皮過程完成，則裝置內部或外部的磁鐵通過磁鐵去除金屬物體。在一些實施方案中，一旦去皮過程完成，則將滾筒磁化，可磁化的金屬物體保留在滾筒中，而去皮的根部分自滾筒去除。
[0129]本發明還提供了TwHF 植物例如雷公藤(Tripterygiumwilforii Hook F.var.Shiloh)植物的凍幹的去皮的根部分,其中所述根部分基本上不含皮。在一些實施方案中，TwHF植物的凍幹的去皮的根部分包含的皮少於尺寸相當的TwHF植物的新鮮的根部分的2%或1%。皮的存在可以通過肉眼確定，或通過使用如下所述的皮標誌物測定。在一些實施方案中，凍幹的根部分包 含的皮少於尺寸相當的TwHF植物的新鮮的根部分的1%。在一些實施方案中，凍幹的去皮的根部分包含的皮少於尺寸相當的TwHF植物的新鮮的根部分的0.9%、0.8%、0.7%、0.6%、0.5%、0.4%、0.3%、0.2%、0.1% 或更低。
[0130]存在於TwHF植物的皮中的化合物可以用作用於確定是否有可檢測的量的皮存在於凍幹的去皮的根部分中的標誌物。雷公藤紅素為存在於TwHF植物的皮中的三萜抗氧化劑化合物。因此，在一些實施方案中，鑑定TwHF植物的凍幹的去皮的根部分的配製物中的殘留的皮的方法包括測定凍幹的去皮的根部分的配製物中皮標誌物(例如雷公藤紅素)的量，其中在凍幹的去皮的根部分的配製物中較低量的皮標誌物將所述配製物鑑定為包含較低量的殘留的皮。凍幹的根部分中的雷公藤紅素的量可以通過本領域中已知的方法例如NMR、HPLC或Annexin V/PT染色分析(雷公藤紅素為NF- κ β抑制劑)測定。
[0131]在一些實施方案中，與尺寸相當的TwHF植物的新鮮的根部分的皮中存在的雷公藤紅素的量相比較，凍幹的去皮的根部分包含小於10%的雷公藤紅素。在一些實施方案中，與尺寸相當的TwHF植物的新鮮的根部分的皮中存在的雷公藤紅素的量相比較，凍幹的去皮的根部分包含小於 5%、4%、3%、2%、1%、0.9%、0.8%、0.7%、0.6%、0.5%、0.4%、0.3%、0.2%、0.1%或更低的雷公藤紅素。在一些實施方案中，如果去除皮的步驟包括使用鼓和研磨劑且已在根上鑑定出殘留的皮，則重複翻轉過程直至雷公藤紅素不能被檢測到。
[0132]IV.TwHF植物的提取物的製備方法
[0133]由TwHF植物的根製備提取物的方法是本領域中已知的。常規的提取方法包括將植物物質(例如TwHF植物的去皮的根)磨、研磨、或粉碎；在包含足量的提取劑流體(例如醇)的溶液中提取所述植物物質；和收集所述流體以獲得提取物混合物(例如醇提取物)。提取物混合物還可以通過自提取物混合物去除固體物質而進一步被加工。通過本領域中已知的任何方法將固體物質自提取物去除，所述方法包括但不限於過濾和離心。在一些實施方案中，使用本發明中描述的凍幹和去皮方法將TwHF植物的根或根部分去皮。在其他實施方案中，TwHF植物的根或根部分為已使用本領域中已知的方法去皮的新鮮的根或部分。
[0134]可以通過任何常規的研磨方法實施TwHF植物的去皮的根的磨、研磨或粉碎，以增加暴露於提取劑流體的根核的表面積。
[0135]在一些實施方案中，用於提取方法中的提取劑流體為溶劑。適合的提取劑流體包括但不限於水、醇、水溶液、滷代烴、酯、和超臨界流體。適合的醇包括伯醇例如乙醇、正丙醇、正丁醇、正戊醇、正己醇、正辛醇、正壬醇和正癸醇，以及仲醇例如異丙醇、異丁醇、和例如丁烷至癸烷之一的仲醇衍生物。對於在室溫和約一個大氣壓(atm)下為氣體的那些較低分子量的化合物，預期使用其中所述化合物為液體狀態的加壓提取。在一個實施方案中，提取劑流體為乙醇。在提取過程期間引入醇流體的益處是醇流體與可攝取的產品相容，並且因此適用於製備用於引入丸劑、膠囊劑、片劑、和本領域中已知的其他可攝入的形式的提取物。
[0136]在一個方面，所述提取步驟包括將任選地經研磨的去皮的根部與過量的提取劑流體組合，例如每單位體積的經研磨的根2-20體積的提取劑流體，將組合的物質攪拌,持續時間足以將所關注的化合物自經研磨的根提取出來。在一些實施方案中，將包含提取劑流體和經研磨的根的混合物攪拌約30分鐘、I小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時或更長。任選地，將混合物在回流下攪拌。提取過程在室溫和提取劑流體的沸點之間的溫 度下進行。
[0137]在一些實施方案中，將混合物過濾並將濾液濃縮，直至濃縮的濾液為初始的濾液的體積的一部分。在一些實施方案中，相對於初始的濾液，濃縮的濾液小於1、0.9,0.8,0.7、
0.6,0.5,0.4,0.3,0.2、0.1或更低的體積。在一些實施方案中，使用提取劑流體對任選地經研磨的根進行一系列的提取。在這樣的實施方案中，將根再次與過量的提取劑流體組合併且重複提取過程。隨後將獲自各提取的濾液組合併如下所述濃縮。
[0138]通過本領域中已知的方法實現濾液的濃縮，例如通過使用真空去除揮發性流體例如溶劑。濾液的濃縮在任何溫度下發生。在一些實施方案中，溫度不超過50°C。還預期在約 20°C、25°C、30°C、35°C、40°C、45°C、55°C、60°C、65°C、或 70°C 的溫度下將濾液濃縮。
[0139]在一些實施方案中，溶劑置換包括在所述提取中(美國專利第5，294，443號；第5，550，340號;第5，580，562號；第5，846，742號；第5，916，564號，其公開整體援引加入本文)。在這樣的實施方案中，提取步驟包括將濃縮的濾液與相對於初始的根質量過量(體積比)的極性有機溶劑(例如乙酸乙酯)組合以製備提取物混合物，其也可以被如上所述濃縮。極性有機溶劑(例如乙酸乙酯)與在提取步驟中用於製備提取物的醇溶劑不同。重複此步驟直至溶劑置換將提取物混合物中的提取劑流體的濃度降低至15重量％或更低。在一些實施方案中，重複此步驟,直至提取物混合物中的提取劑流體的濃度為10重量％、9重量％、8重量％、7重量％、6重量％、5重量％、4重量％、3重量％、2重量％、I重量％或更低。提取劑流體的濃度可以通過本領域已知的方法(例如NMR)測定。
[0140]在一些實施方案中，將提取物混合物過濾以除去不溶的組分，且進一步通過本發明中所述的方法之一加工經過濾的提取物溶液。
[0141]V.將TwHF植物的醇提取物加工成為可自由流動的固體的方法
[0142]在另一個方面，本發明描述了將TwHF植物的醇提取物加工成為可自由流動的固體的方法。在一些實施方案中，所述方法包括獲得TwHF植物的醇提取物，將所述醇提取物與非極性有機溶劑組合以製備提取物/非極性有機溶劑混合物；過濾所述提取物/非極性有機溶劑混合物以分離固體沉澱並乾燥所述固體沉澱，由此將所述醇提取物加工成為可自由流動的固體形式。在一些實施方案中，所述醇提取物為在組合步驟之前經過溶劑置換的混合物，其中所述溶劑置換包括將所述醇提取物中的醇置換為極性有機溶劑(例如乙酸乙酯)。在這樣的實施方案中，在組合步驟中將提取物/乙酸乙酯混合物與非極性有機溶劑組合。 [0143]適合的非極性有機溶劑包括C4-C10直鏈的或支鏈的烷烴和環烷烴。在一些實施方案中，非極性有機溶劑為直鏈的烷烴例如戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷或癸烷。在一些實施方案中，非極性有機溶劑為庚烷。在其他實施方案中，非極性有機溶劑為支鏈的烷烴例如異戊烷、異己烷、異庚烷、異辛烷、異壬烷或異癸烷。在一些實施方案中，非極性有機溶劑為異辛烷。
[0144]組合步驟包括將醇提取物(或提取物/乙酸乙酯混合物)與相對於原始根質量過量體積例如2-20體積的非極性有機溶劑接觸、混合、或置於一起，以製備摻合物。在一些實施方案中，組合步驟在真空下發生。在一些實施方案中，重複組合步驟直至摻合物中非極性有機溶劑的水平不能被檢測到。將摻合物過濾以分離或收集固體沉澱物質，並使用非極性有機溶劑進行一次或多次洗滌。摻合物的過濾可以通過本領域中已知的常規方法進行，並且可以任選地被重複。
[0145]在可選的方面，所述方法包括在真空下將提取物與賦形劑組合，以製備提取物/賦形劑混合物；並乾燥濃縮的混合物，由此製備可自由流動的固體形式的提取物。組合步驟包括將提取物與適量的例如0.5-20倍(重量/重量)的賦形劑(與提取物中的總固體含量相比較)接觸、混合、或置於一起，並任選地攪拌，持續時間足以使賦形劑與提取物混合。還預期使用相對於提取物的固體含量為約I倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19倍(重量)過量的賦形劑。適
用於本發明中所述的方法中的賦形劑包括微晶纖維素(MCC)、麥芽糊精、Aerosil? (熱解矽石)、玉米澱粉、和Neusi I in (偏矽酸鋁鎂)。在一些實施方案中，所述賦形劑為MCC。在一些實施方案中，組合步驟包括在完全真空下，在不超過50°C (例如約20°C、3(TC、35°C、36。。、37。。、38。。、39。。、40。。、41。。、42。。、43。。、44。。、45。。、46。。、47。。、48。。、或約 49 °C )的溫度下將提取物/賦形劑混合物濃縮，直至濃縮的賦形劑混合物中達到約80%的幹固體含量。
[0146]上述加工方法的乾燥步驟包括將經洗滌的固體或濃縮的賦形劑混合物乾燥，持續時間足以將溶劑自經洗滌的固體或濃縮的賦形劑混合物去除。在一些實施方案中，乾燥步驟進行約8-24小時的時長。特別地，預期將經洗滌的固體或濃縮的賦形劑混合物乾燥約9小時、10小時、11小時、12小時、13小時、14小時、15小時、16小時、17小時、18小時、19小時、20小時、21小時、22小時、23小時、24小時或更高。還預期將經洗滌的固體或濃縮的賦形劑混合物乾燥小於8小時。經洗滌的固體或濃縮的賦形劑混合物可以在本領域已知的任何乾燥設備中乾燥，所述乾燥設備包括但不限於盤式乾燥器、真空烘箱或烘箱。在一些實施方案中，經洗滌的固體(或濃縮的賦形劑混合物)在約20 0C、25 °C、30 °C、35 °C、40 °C、45 °C、或約50°C的溫度下乾燥。在乾燥過程完成之後，乾燥的固體為可自由流動的固體的形式。
[0147]TwHF的提取物包含大於200種化合物，包括二萜、三萜、倍半萜、β -谷固醇、衛矛醇、和糖苷。示例性的化合物包括但不限於雷公藤甲素、雷公藤羥內酯、美登木酸(雷公藤春鹼)及其甲酯、雷酚內酯、雷酚內酯甲醚、雷酚萜醇、雷公藤鹼己、雷公藤次鹼、雷公藤晉鹼、和雷公藤增鹼。在一些實施方案中，期望測定自由流動的固體中這些化合物中的一種或多種的量。樣品中的化合物的測定可以通過本領域已知的方法例如NMR或HPLC測定。
[0148]通過本發明中描述的方法製備的可自由流動的固體包含濃縮水平的雷公藤甲素和雷公藤羥內酯。在一些實施方案中，通過本發明描述的方法製備的可自由流動的固體包含以每克可自由流動的固體計濃度為至少100 μ g、至少200 μ g、至少300 μ g、至少400 μ g、至少 500 μ g、600μ g、700 μ g、800 μ g、900 μ g、1000 μ g、1100 μ g、1200 μ g、1300 μ g、1400 μ g, 1500 μ g, 1600 μ g, 1700 μ g, 1800 μ g,2000 μ g 或更高的雷公藤甲素。在一些實施方案中，可自由流動的固體包含以每克可自由流動的固體計濃度為SOOygAOOyg、700 μ g>800 μ g>900 μ g>1000 μ g>1100 μ g>1200 μ g>1300 μ g>1400 μ g>1500 μ g>1600 μ g、1700 μ g、1800 μ g、2000 μ g或更高的雷公藤羥內酯。
[0149]通過本發明所述的方法(使用凍幹的去皮的根部分、或凍幹的去皮的根核、作為提取過程中的起始原料)製備的可自由流動的固體包含低水平的皮化合物例如雷公藤紅素。因此，可自由流動的固體具有低水平的任何皮毒素。在一些實施方案中，通過本發明所述的方法製備的可自由流動的固體包含以每mg可自由流動的固體計不大於2.5 μ g的雷公
藤紅素。
[0150]在一些實施方案中，可自由流動的固體的(雷公藤甲素+雷公藤羥內酯的總重量)/(雷公藤紅素的總重量)的比例為I或更高。在一些實施方案中，所述比例高於1.3(例如 1.35,1.36,1.37,1.38,1.39,1.4,1.41,1.42,1.43,1.44,1.45,1.46,1.47,1.48,1.49、
1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10 或更
高)。在一些實施方案中，(雷公藤甲素+雷公藤羥內酯)/(雷公藤紅素)的重量比為至少1.46。在一些實施方案中，(雷公藤甲素+雷公藤羥內酯)/(雷公藤紅素)的重量比為至少 1.36。
[0151]V1.將TwHF植物的天然提取物加工成為可自由流動的固體的方法
[0152]TwHF植物的天然提取物為蠟狀的、無定型的固體，要求特殊的方式以製備可用的藥品產品。本發明描述了將TwHF的天然提取物加工成為可自由流動的固體(例如可流動的粉末)的方法。
[0153] 在一個方面，所述方法包括將天然提取物與非極性有機溶劑組合以製備其混合物；將混合物過濾以分離或收集固體沉澱並將所述固體沉澱乾燥，由此製備可自由流動的固體形式的提取物。適合的非極性有機溶劑包括任意C4-C10直鏈的或支鏈的烷烴和環烷烴。在一些實施方案中，非極性有機溶劑為直鏈的烷烴例如戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷或癸烷。在一些實施方案中，非極性有機溶劑為庚烷。在其他實施方案中，非極性有機溶劑為支鏈的烷烴例如異戊烷、異己烷、異庚烷、異辛烷、異壬烷或異癸烷。在一些實施方案中，非極性有機溶劑為異辛烷。[0154]在一些實施方案中，將非極性有機溶劑/提取物混合物過濾以分離或收集固體沉澱物質。非極性有機溶劑/提取物混合物的過濾可以通過本領域已知的常規方法實施。一旦收集，則將所述固體用非極性有機溶劑進行一次或多次洗滌。
[0155]在另一個實施方案中，所述方法包括將TwHF植物的天然提取物與極性有機溶劑(例如醇)混合以製備提取物/極性有機溶劑混合物；在真空下在不高於50°C的溫度下將所述提取物/極性有機溶劑混合物與賦形劑組合，以製備濃縮的混合物；和在適於自混合物去除剩餘的極性溶劑的溫度下乾燥所述濃縮的混合物，由此製備可自由流動的固體形式的天然提取物。適用於此加工方法中的極性有機溶劑包括但不限於乙醇、乙酸乙酯、異丙醇、正丁醇、正丙醇和甲醇。在一些實施方案中，極性有機溶劑為乙醇。
[0156]在一些實施方案中，添加步驟包括將過量的例如0.5-20倍的賦形劑(重量/體積)引入極性溶劑/提取物混合物中並任選地攪拌，其持續時間足以將賦形劑混合入極性溶劑/提取物混合物以製備賦形劑混合物。還預期混合相對極性溶劑/提取物混合物約I倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19倍過量(重量/體積)的量的賦形劑。適用於本發明中所述的方法中的賦形劑包括微晶纖維素(MCC)、麥芽糊精、Aerosil?'(熱解矽石)、玉米澱粉、和Neusilin (偏矽酸鋁鎂)。在一些實施方案中，所述賦形劑為MCC。
[0157]在其中將賦形劑添加至有機溶劑/提取物混合物的實施方案中，未實施過濾步驟。
[0158]隨後將經洗滌的固體或賦形劑混合物乾燥，持續時間足以將有機溶劑分別地自所述固體或賦形劑混合物去除。在一些實施方案中，乾燥步驟進行約8-24小時的時長。特別地，預期將經洗滌的固體或賦形劑混合物乾燥約9小時、10小時、11小時、12小時、13小時、14小時、15小時、16小時、17小時、18小時、19小時、20小時、21小時、22小時、23小時、24小時或更高。還預期將經洗滌的固體或賦形劑混合物乾燥小於8小時。經洗滌的固體或賦形劑混合物可以在空氣中乾燥或在本領域已知的任何乾燥設備中乾燥，所述乾燥設備包括但不限於盤式乾燥器、真空烘箱或烘箱。在一些實施方案中，經洗滌的固體或賦形劑混合物在約20°C、25°C、30°C、35°C、40°C、45°C、或約50°C的溫度下在乾燥裝置中乾燥。
[0159]VI1.TwHF提取物的藥物組合物和給藥途徑
[0160]本公開預期經壓片、包囊、或另外配製用於口服給藥的包含通過本發明描述的方法製備的可自由流動的固體的組合物。所述組合物可以以如美國食品和藥物管理局所定義的藥物組合物、保健品組合物(即膳食補充劑)、或食品或飲料添加劑的形式提供。上述組合物的劑型沒有具體地限制。例如，混懸劑、乳劑、片劑、丸劑、膠囊劑、緩釋的製劑、散劑、栓劑、脂質體、微顆粒劑、微膠囊劑等全部預期作為適合的劑型。
[0161]所述組合物典型地包括一種或多種適合的稀釋劑、填充劑、鹽、崩解劑、粘結劑、潤滑劑、助流劑、潤溼劑、控釋的基質、著色劑、調味劑、載體、賦形劑、緩衝劑、穩定劑、增溶劑、商業佐劑、和/或本領域已知的其他添加劑。
[0162]可以使用用作藥用運載體、賦形劑、或介質的任何藥學上可接受的(即如本領域已知的無菌的和可接受地無毒的)液體、半固體、或固體稀釋劑。示例性的稀釋劑包括但不限於聚氧化乙烯山梨聚糖單月桂酸酯、硬脂酸鎂、磷酸鈣、礦物油、可可脂、和可可屬的油、羥基苯甲酸甲酯和羥基苯甲酸丙酯、滑石、褐藻酸鹽、碳水化合物，特別是甘露醇、α -乳糖、無水乳糖、纖維素、蔗糖、右旋糖、山梨糖醇、改性的右旋糖酐、阿拉伯膠、和澱粉。這樣的組合物可以影響功能性化合物的物理狀態、體內釋放率和體內清除率。
[0163]藥學上可接受的填充劑可以包括例如乳糖、微晶纖維素、磷酸二鈣、磷酸三鈣、硫酸鈣、右旋糖、甘露醇、和/或蔗糖。在藥物組合物中也可以使用包括磷酸三鈣、碳酸鎂、和氯化鈉的鹽作為填充劑。
[0164]粘結劑可用於將包含可自由流動的固體的組合物固定，以形成硬片劑。示例性的粘結劑包括來自有機產品的物質例如阿拉伯膠、西黃蓍膠、澱粉和明膠。其它適合的粘結劑包括甲基纖維素(MC)、乙基纖維素(EC)和羧甲基纖維素(CMC)。
[0165]經加工的TwHF提取物的量和給藥方案基於與給藥目的相關的多種因素，例如人或動物的年齡、性別、體重、激素水平、或人或動物的營養需要。在一些實施方案中，TwHF提取物以約0.001mg/kg體重至約10g/kg體重的量每日給藥至動物。在一些實施方案中，經加工的TwHF提取物以每天約0.005mg/kg體重、或每天約0.01、或約0.05、或約0.1、或約
0.2、或約0.3、或約0.4、或約0.5、或約0.6、或約0.7、或約0.8、或約0.9、或約1、或約2、或約3、或約4、或約5、或約6、或約7、或約8、或約9、或約10mg/kg體重的量給藥至動物。
[0166]典型的方案可以包括多次給藥經加工的TwHF提取物。在一個實施方案中，經加工的TwHF提取物每天給藥一次。在另一個實施方案中，經加工的TwHF提取物每天給藥兩次或三次。經加工的TwHF提取物可以在任何時間給藥至對象。在一些實施方案中，在餐前或餐後同時地給藥經加工的TwHF提取物。
[0167]使用經加工的TwHF提取物的治療繼續至少約I周。還預期持續約2周、3周、I個月、2個月、3個月、4個 月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、I年、5年、
或多至終生治療的治療持續期間。
[0168]本領域技術人員應理解，本發明所述的經加工的TwHF提取物可用於人用藥物和獸用藥物領域，以向需要其的對象提供例如雷公藤甲素或雷公藤羥內酯(或可獲自TwHF植物的去皮的根的其他治療化合物)。因此，待治療的對象或個體可以為哺乳動物例如人類。其它適合的對象包括例如家畜例如奶牛、綿羊、豬、馬和山羊；與人作伴的動物例如狗和貓；外來動物和/或動物園動物；實驗室動物包括小鼠、大鼠、兔、豚鼠、和倉鼠；和家禽例如雞、火雞、鴨、和鵝。
[0169]提供以下實施例以更詳細地描述本發明，並意圖解釋，而非限制，所附的權利要求。實施例1描述了示例性的凍幹方法以及用於隨後的自TwHF植物的根去除皮的示例性的方法以及示例性的裝置。實施例2描述了凍幹TwHF植物的根的可選的方法。實施例3描述了使用己烷作為加工劑由初始的基於流體的TwHF植物的提取物製備可自由流動的固體的形式的提取物。實施例4描述了使用庚烷作為加工劑由TwHF植物的提取物製備可自由流動的固體。實施例5描述了使用己烷作為加工劑由TwHF植物的乙醇提取物製備可自由流動的固體的方法。實施例6描述了使用庚烷作為共加工劑由TwHF植物的乙醇提取物大規模製備可自由流動的固體。實施例7描述了使用製劑賦形劑作為加工劑由TwHF的提取物製備可自由流動的固體的方法。實施例8公開了使用微晶纖維素作為加工劑由TwHF植物的乙醇提取物製備可自由流動的固體的可選方法。實施例9公開了包含實施例5中製備的可自由流動的固體的藥物組合物。
[0170]實施例[0171]實施例1:TwHF植物的凍幹的去皮的根的製備
[0172]由於具有改善的流動性質並顯示出由來自雷公藤皮組分的毒素的汙染降低而導致的改善的安全特性，因此根據本公開的改善的TwHF提取物更易於操作。毒素含量的降低通過以有助於以有效的方式定量或接近定量地去除皮的方式製備雷公藤根和根部分而實現。更具體地，將用於去皮的配製物中的TwHF根和/或根部分凍幹。
[0173]將總計308g新鮮的TwHF根物質(91g中等根(長度3_10mm)、15g小根(長度
1.00-3.00mm)、29g根毛(長度1.00或更低)、30g殘根和143g大根(長度10.0Omm))置於Pyrex盤中，並且在_20°C下冷凍整夜。將凍幹(Labconco)室調節至_50°C，並允許平衡整夜。隨後將根物質置於凍幹室中，並將真空度設定為3-10毫巴的壓力。將室溫升至10°C，持續4小時，隨後升高至25°C，持續額外的四小時，隨後最終地升至35°C，持續整夜。將生成的凍幹的根物質自凍幹室去除。
[0174]根物質的凍幹導致皮自根核開裂，其通過對凍幹的根物質進行肉眼觀察而觀察到。為了去除皮，將凍幹的根物質在平坦的表面上或在壓縮設備(例如pasta iOller)中使用中等的壓力擠壓或輥壓，以自根核去除皮。去除皮的過程產生細小的米色至粉色的粉塵或粉末，這由皮導致。獲得17g乾燥的去皮的根物質。
[0175]中等的壓力不會將TwHF根和/或根部分粉碎，且這些物質可以容易地與任何殘留的粉塵或粉末分離，確保在任何隨後的根提取物中僅能找到最小量的皮毒素。對於本領域技術人員而言顯而易見的是許多其他機械的或電機械的操作將被證明適於自凍幹的根和/或根部分去除皮，並 且本公開預期本領域中已知的所有這樣的操作。
[0176]上述實施例證明本領域已知的任何已知的冷凍TwHF根部分的方法都適用於本發明中所述的方法。此外，凍幹過程可以涉及能夠立即控制圍繞TwHF根部分的大氣壓的任何裝置。此外，當使用大多數凍幹方法時，初始地冷凍的TwHF根部分暴露於凍幹過程的時間的長度可以改變，條件是時間足以將根部分的水含量降低至可接受的水平，例如小於2%。
[0177]實施例2:製備TwHF植物的凍幹的根的可選方法。
[0178]與上述討論及其說明一致，凍幹TwHF根和/或根部分的可選方法涉及使用加熱架，根部分位於其上。如凍幹領域的技術人員應理解的，具有足以使水處於與物質的自由表面一定距離處的尺寸的物質的凍幹可以受益於將待被凍幹的物質(即TwHF根和/或根部分)相對溫和地加熱，而不削弱有效地凍幹所述物質的能力。不期望受理論的限制，人們認為溫和的加熱促進水分自物質的內部遷移至表面，在所述表面可以發生並確實發生升華。
[0179]此時實例描述了製備TwHF植物的凍幹的根一個這樣的可選的方法。簡而言之，將凍幹室(Labconco)的溫度設為_20°C，並允許平衡整夜。將~1000g新鮮的根物質(長度為~30cm且直徑為~1-1Omm)置於容器中，並在常規的冷凍器(Frigidaire)中冷凍整夜，直至根的溫度為約_20°C。第二天，將包含冷凍的根的容器置於處於加熱的架上的凍幹室中，並將凍幹室的壓力設為3-10毫巴。將加熱的架的溫度升高至10°C，持續整夜，升高至35°C，持續8小時，隨後升高至50°C，再持續8小時。將凍幹的根部分自凍幹室去除。通過乾燥失重測定(LOD)，凍幹的根部分包含小於20%水。
[0180]此實施例中提供的數據證明在凍幹過程期間對TwHF根部分的溫和加熱是容許的，導致產生凍幹的TwHF根部分。人們認為與在凍幹過程期間不施加溫和加熱的凍幹相比較，此凍幹TwHF根部分的方法提供了更快速的且相似地有效的凍幹TwHF根部分的方法。[0181]實施例3:使用非極性有機流體作為共加工劑自TwHF植物的天然提取物製備可自由流動的固體。
[0182]由於有效且通過去皮使得可能汙染TwHF提取物的皮毒素最小化或消除所述毒素，因此根據本公開去皮的TwHF根部分為提取物製備提供了期望的基礎。除了通過提供改善的去皮步驟解決毒素的問題以外，本公開還提供了改善由去皮的TwHF根部分製備的提取物的流動特性的方法。此實施例描述了使用非極性有機流體(例如己烷)作為共加工劑由TwHF植物的提取物製備可自由流動的固體的方法。
[0183]簡而言之，在250mL燒杯中將獲自中國TwHF植物(即中國生長的TwHF植物)的去皮的根的IOg天然提取物與IOOmL己燒(Fisher試劑等級)組合。使用不鏽鋼糹產將提取物破碎成片。隨後在室溫下將己烷/提取物混合物超聲30分鐘。隨後將己烷/提取物混合物置於BUchner漏鬥中，過濾，並用IOOmL己烷洗滌以製備包含己烷洗滌流經物的濾液(其顏色為黃色/橙色)和包含己烷/提取物混合物中的固體的滲餘物(其顏色為棕色/紅色)。將己烷/提取物混合物過濾直至滲餘物乾燥。隨後使用IOOmL己烷對滲餘物進行重複洗滌，直至觀察到無色的濾液。在真空烘箱(100毫巴，40°C)中將滲餘物乾燥整夜，以自滲餘物去除任何殘留的己烷。乾燥的滲餘物為可自由流動的固體的形式，產率為6.7g。
[0184]為了評價所述方法放大至商業量的可放大性，還將所述方法用於更大量的天然提取物。在500mL燒杯中將獲自中國TwHF植物的去皮的根的50g乙醇提取物與250mL己烷組合。TwHF的簡單提取物例如乙醇提取物為難以操作的粘稠的、近似於焦油的、無定型物料。使用不鏽鋼鏟將提取物破碎成片。隨後在室溫下將己烷/提取物混合物攪拌30分鐘。隨後將己烷/提取物混合物置於BUchner漏鬥中，過濾，並用IOOmL己烷洗滌以製備包含己烷洗滌流經物的濾液(其顏色為黃色/橙色)和包含己烷/提取物混合物中的固體的滲餘物(其顏色為棕色/紅色)。將己烷/提取物混合物過濾直至滲餘物乾燥。隨後使用IOOmL己烷對滲餘物進行重複 洗滌，直至觀察到無色的濾液。在室溫下，在真空烘箱(CascadeTek ；100毫巴)中將滲餘物乾燥整夜，以自滲餘物去除任何殘留的己烷。乾燥的滲餘物為可自由流動的固體的形式，產率為35.5g。所述結果證明所述方法可以被放大至商業上可用的量。
[0185]這些結果顯示通過暴露於非極性有機流體例如己烷而經加工的TwHF提取物將生成易於操作以將提取物配製為適於營養補充或醫學治療的形式的可自由流動的固體形式的TwHF提取物，所述形式包括但不限於例如膠囊劑、片劑、凝膠劑、乳膏劑、等的形式。期望任何C4-C10直鏈的或支鏈的烷烴或烯烴將適於將TwHF提取物加工以生成可自由流動的提取物固體。
_6] 實施例4:使用另外的非極性有機流體作為共加工劑由TwHF植物的天然提取物製備可自由流動的固體。
[0187]與實施例3中所述一致，預期任何C4-C10直鏈的或支鏈的烷烴或烯烴可用於製備可自由流動的固體形式的TwHF提取物，此實施例描述了使用非極性有機流體(例如庚烷)作為共加工劑由TwHF植物的提取物製備可自由流動的固體的方法。
[0188]在250mL燒杯中將獲自中國TwHF植物的根的IOg天然提取物與IOOmL庚烷(Fisher試劑等級)組合。使用不鏽鋼鏟將提取物破碎成片。隨後在室溫下將庚烷/提取物混合物攪拌約20-30分鐘，直至提取物溶解。隨後將庚烷/提取物混合物置於BUchner漏鬥中，過濾，並用IOOmL庚烷洗滌以製備包含庚烷洗滌流經物的濾液(其顏色為黃色/淺橙色)和包含庚烷/提取物混合物中的固體的滲餘物。將庚烷/提取物混合物過濾直至滲餘物乾燥。隨後使用IOOmL庚烷對滲餘物進行重複洗滌，直至觀察到無色的濾液。在真空烘箱(100毫巴；50°C )中將滲餘物乾燥整夜，以自滲餘物去除任何殘留的庚烷。乾燥的滲餘物為可自由流動的固體的形式，產率為6.4g。
[0189]隨後將所述實驗放大並重複。在500mL燒杯中將獲自中國TwHF植物的去皮的根的天然提取物(50g)與300mL庚烷組合。使用不鏽鋼鏟將提取物破碎成片。隨後在室溫下將庚烷/提取物混合物攪拌約20-30分鐘，直至提取物溶解。隨後將庚烷/提取物混合物置於BUchner漏鬥中，過濾，並用IOOmL庚烷洗滌以製備包含庚烷洗滌流經物的濾液(其顏色為黃色/淺橙色)和包含庚烷/提取物混合物中的固體的滲餘物。將庚烷/提取物混合物過濾直至滲餘物乾燥。隨後使用IOOmL庚烷對滲餘物進行重複洗滌，直至觀察到無色的濾液。在真空烘箱(CascadeTek ;100毫巴；50°C )中將滲餘物乾燥整夜，以自滲餘物去除任何殘留的庚烷。乾燥的滲餘物為可自由流動的固體的形式，產率為30.0g，結果證明所述方法應適於商業上可用的量。
[0190]使用己烷(實施例3)或庚烷(實施例4)加工的TwHF提取物的可自由流動的特性證明將TwHF提取物與非極性有機流體例如C4-C10直鏈的或支鏈的烷烴接觸將產生易於被配製為營養補充劑或治療劑的可自由流動的固體形式的提取物。
[0191]實施例5:使用庚烷作為共加工劑由TwHF的根的乙醇提取物製備可自由流動的固體的可選的方法。
[0192]此實施例描述了由TwHF植物的乙醇提取物製備可自由流動的固體的可選的方法。將TwHF植物的凍幹的去皮的根研磨並隨後與相對於根的體積為8體積的乙醇組合，並在回流下(78°C)攪拌6小時。隨後將乙醇提取物過濾以製備第一濾液，並移至儲罐。隨後在第二次乙醇提取中將去皮的且經研磨的根與另外的8體積的乙醇組合，並在回流下(78°C)攪拌6小時。將第二乙醇提取物過濾以製備第二濾液。將第一濾液和第二濾液組合，隨後在室溫下在真空下濃縮，以製備濃縮的濾液混合物。相對於原始的根質量，生成的濃縮的濾液混合物為約0.9體積。
[0193]隨後將濃縮的濾液混合物與相對於原始的根體積為1.2體積的乙酸乙酯組合，並在真空下濃縮，通過蒸餾去除乙醇。重複所述過程直至所述溶劑置換將乙醇濃度降低至小於15重量％(通過NMR測定)，產生乙酸乙酯混合物。將乙酸乙酯混合物與相對於原始的根體積為3.3體積的庚烷組合，以製備庚烷混合物，並將混合物在真空下濃縮，通過蒸餾去除乙酸乙酯。重複此過程，直至所述溶劑置換將乙酸乙酯的濃度降低至無法檢測到的水平(通過NMR測定)。隨後將庚烷混合物過濾並收集固體。用庚烷洗滌所述固體，直至流經物為無色。隨後在盤式乾燥器中在約40°C下將經洗滌的固體乾燥約8-12小時。
[0194]乾燥的物質為可自由流動的固體。此實施例確認了使用直鏈的C4-C10烷烴即庚烷加工TwHF植物的提取物能夠生成適於治療製劑或營養製劑的可自由流動的固體。此外，所述實施例證明存在將TwHF提取物暴露於非極性有機溶劑以製備可自由流動的固體形式的提取物的可選的方法。
[0195] 實施例6:使用庚烷作為共加工劑由TwHF植物的根的乙醇提取物大規模製備可自由流動的固體。
[0196]使用量為約 100kg(n=3)、250.4kg(n-2)、250.2kg(n=3)、211.5kg(n=l)和286.6kg (η=I)的獲自中國TwHF植物的去皮的根部分將實施例5中所述的過程重複多次，以製備可自由流動的固體。起始的根物質和生成的可自由流動的固體物質通過HPLC分析，以將提取物的組分分級並測定經測試的各樣品中雷公藤甲素和雷公藤羥內酯的濃度。實驗的結果列於表1中。
[0197]表1
[0198]
【權利要求】
1.將雷公藤(TwHF)植物的天然提取物加工以製備可自由流動的固體形式的提取物的方法，所述方法包括: (a)將所述天然提取物與醇混合，以製備提取物/醇混合物； (b)將所述提取物/醇混合物與賦形劑在真空下在不高於50°C的溫度下組合，以製備濃縮的混合物；和 (c)在不高於55°C的溫度下乾燥所述濃縮的混合物以除去剩餘的乙醇，由此製備可自由流動的固體形式的提取物。
2.如權利要求1所述的方法，其中所述天然提取物是通過一次或多次乙醇提取自所述TwHF植物的根而獲得的。
3.如權利要求1所述的方法，其中所述天然提取物獲自所述TwHF植物的凍幹的去皮的根部分。
4.如權利要求1所述的方法，其中所述賦形劑選自由以下組成的組:微晶纖維素、麥芽糊精、Aerosil? (熱解矽石)、玉米澱粉和Neusilin (偏矽酸鋁鎂)。
5.如權利要求4所述的方法，其中所述賦形劑為微晶纖維素。
6.如權利要求1所述的方法，其中所述乾燥步驟在建立不大於0.2大氣壓(atm)的空氣壓力的真空下進行。
7.將雷公藤(TwHF)植物的天然提取物加工以製備可自由流動的固體形式的提取物的方法，所述方法包括: (a)將所述天然提取物與非極性有機溶劑組合以製備其混合物； (b)過濾所述混合物以分離固體沉澱；和 (c)乾燥所述固體沉澱，由此製備可自由流動的固體形式的提取物。
8.如權利要求7所述的方法，其中所述天然提取物是通過一次或多次乙醇提取自所述TwHF植物的根而獲得的。
9.如權利要求7所述的方法，其中所述非極性有機溶劑選自由以下組成的組:直鏈C5-C10烷烴和支鏈C5-C10烷烴。
10.如權利要求9所述的方法，其中所述非極性有機溶劑為庚烷。
11.如權利要求7所述的方法，其中所述天然提取物獲自TwHF植物的凍幹的去皮的根部分。
12.通過如權利要求1所述的方法製備的可自由流動的固體形式的TwHF植物的提取物。
13.如權利要求12所述的提取物，其中每mg所述提取物包含不大於2.5μ g的雷公藤紅素。
14.如權利要求12所述的提取物，其中所述提取物的(雷公藤甲素+雷公藤羥內酯)/雷公藤紅素((T+Td)/C)的比例為至少1.46。
15.如權利要求12所述的提取物，其中所述提取物的(T+Td)/C的比例為至少1.36。
16.通過如權利要求7所述的方法製備的可自由流動的固體形式的TwHF植物的提取物。
17.如權利要求16所述的提取物，其中每mg所述提取物包含不大於2.5 μ g的雷公藤紅素。
18.如權利要求16所述的提取物，其中所述提取物的(雷公藤甲素+雷公藤羥內酯)/雷公藤紅素((T+Td)/C)的比例為約1.46。
19.如權利要求16所述的提取物，其中所述提取物的(T+Td)/C的比例為約1.36。
20.將雷公藤(TwHF)植物的醇提取物加工以製備可自由流動的固體形式的提取物的方法，包括: (a)獲得TwHF植物的醇提取物；(b)將所述醇提取物中的醇置換為極性有機溶劑以形成提取物/極性有機溶劑混合物； (c)在真空下在不高於50°C的溫度下將所述提取物/極性有機溶劑混合物與賦形劑組合，以製備濃縮的混合物；和 (d)在不高於55°C的溫度下乾燥所述濃縮的混合物，由此製備可自由流動的固體形式的醇提取物。
21.如權利要 求20所述的方法，其中所述極性有機溶劑為乙酸乙酯。
22.將雷公藤(TwHF)植物的醇提取物加工以製備可自由流動的固體形式的提取物的方法，包括: (a)獲得TwHF植物的醇提取物；(b)將所述醇提取物中的醇置換為極性有機溶劑以形成提取物/極性有機溶劑混合物； (C)將所述提取物/極性有機溶劑混合物與非極性有機溶劑組合以製備提取物/非極性有機溶劑混合物； (d)過濾所述提取物/非極性有機溶劑混合物以分離固體沉澱；和 (e)乾燥所述固體沉澱，由此製備可自由流動的固體形式的醇提取物。
23.如權利要求22所述的方法，其中所述非極性有機溶劑為庚烷。
【文檔編號】A61K36/18GK103998050SQ201280011112
【公開日】2014年8月20日 申請日期:2012年3月1日 優先權日:2011年3月1日
【發明者】G·帕芬多夫, C·西馬魯斯蒂 申請人:植物藥品有限公司