特異性針對肝細胞癌和其他癌的抗體及其用途的製作方法

2023-05-06 11:27:31

專利名稱：：特異性針對肝細胞癌和其他癌的抗體及其用途的製作方法
技術領域：
：本發明涉及與CD147結合的抗體和抗體片段，以及它們用於治療表達CD147的癌細胞的用途。更具體而言，本發明涉及非人類抗體和抗體片段，它們經過了突變從而降低了它們在人體內的免疫原性。
背景技術：
：原發性肝癌——肝細胞癌(HCC)——是全世界第四常見的癌症類型，每年大約造成130萬人死亡(Venook，2000)。死亡例數少則在美國每年有一萬七千例，多則在中國每年超過二十五萬例。由於目前約有四百萬美國人感染流行性C型肝炎，所以預計在未來的10-20年，在美國的死亡例數會急劇增加。由於HCC通常在其晚期才能被檢出，所以它是最具致死性的癌症形式之一，患者在初始症狀出現後平均只能存活3-4個月。因此急需新型的療法。雖然外科手術切除是目前的首選治療手段，但是由於例如轉移或者肝硬變等因素，僅有不到10％的患者適於治療性的切除(為綜述可參見Alsowmely&Hodgson)。一些方法顯示可以縮小腫瘤以使腫瘤可以被切除，例如於經動脈化療栓塞(transarterialchemoembolisation)、化療和放療的結合、化療藥物灌注並進行肝動脈結紮、放射免疫療法等(Lau，2002)。但是這些療法僅對一小部分患者有顯著效果。HCC是已知對化療藥物抵抗性最強的腫瘤類型之一(Alsowmely&Hodgson，2002)。許多藥物已被研究出並投入使用，包括5-氟尿嘧啶、多柔比星、米託蒽醌、順鉑和依託泊苷。然而全身性化療幾乎顯示不出臨床效果，而且所有這些療法都伴隨明顯的毒性。目前還沒有通過FDA認證的專門針對HCC的藥物。正在開發一些用於HCC療法的與毒素或放射性同位素綴合的HCC特異性抗體，這些抗體包括稱作Hab18的鼠類抗體是通過用人HCC組織免疫小鼠而產生的(Chen，1992)。在證實了該抗體的腫瘤特異性後，用表達克隆的方法(Chen，etal.，1999)鑑定該抗原為細胞表面蛋白CD147(亦被稱為Hab18G、basigin、EMMPRIN、neurothelin、5A11、CE9、HT7、M6、OX-47或gp42)。其他描述該抗體的文章包括Xingetal.(2003)、Liuetal.(2003)、Lietal.(2002)、Louetal.(2002)、Yangetal.(2001)、Bianetal.(2000)、Qiuetal.(1998)、Suietal.(1998)、Suietal.(1996)、Sui(1992)和Ji(1991)。正在開發的用於HCC療法的最先進的HCC特異性抗體之一是131I--Hab18綴合抗體，它是特異性結合HCC細胞的放射性碘化小鼠單克隆抗體片段。通過蛋白水解方法將鼠類Hab18抗體處理為F(ab)』2片段，再進行放射性標記並將其給予攜帶人HCC腫瘤的小鼠(Louetal.，2002；Bianetal.，2000；Qiuetal.，1998)。上述研究表明在這種動物模型中腫瘤明顯被吸收，並證實了使用這種抗體(具體而言為F(ab)』2片段)的被標記形式用於人類治療的手段的有效性。還製備了該抗體與葡萄球菌腸毒素A融合的形式，顯示該形式可有效地殺死HCC細胞(Yangetal.，2001)。Hab18的靶標CD147是已知表達最廣泛的癌症抗原之一。其功能並未完全清楚，但是其在癌症中最相關的作用似乎是增加基質金屬蛋白(MMP)的表達，基質金屬蛋白參與基底膜的降解，基底膜的降解是腫瘤細胞游離出來並轉移至新部位的必要步驟。人CD147的胺基酸序列示於SEQIDNO70。CD147由269個胺基酸組成，具有由兩個C2型免疫球蛋白環和三個Asn連接的寡糖組成的187個胺基酸的一個胞外結構域、一個24個胺基酸的跨膜結構域、一個短的單跨膜結構域和一個39個胺基酸的胞質結構域。第一個免疫球蛋白結構域是參與MMP誘導和寡聚化的反受體活性所需要的。第二個免疫球蛋白結構域是與導致細胞表面上自聯作用降低的窖蛋白-1的連接所需要的。基底膜通過基質金屬蛋白酶的降解是包括腫瘤血管發生、腫瘤生長、局部侵襲和後續的遠距離轉移的腫瘤疾病進程的多個時期中的最關鍵步驟之一(Nelsonetal.，2000；Fangetal.，2000；Bergersetal.，2000)。MMP是一個包括25個以上的金屬依賴內肽酶的家族，這些內肽酶都有一個共同的模塊結構域結構。MMP在腫瘤局部環境中過多地產生。這些酶能共同裂解實質和血管基底膜的所有胞外基質成分，實質和血管基底膜通常是腫瘤細胞遷移和侵襲的機械屏障。高水平的MMP與體內和體外腫瘤侵襲能力增加相關(Gillesetal.，1994；Gillesetal.，1996)。MMP與其內源性抑制劑金屬蛋白酶組織抑制劑(TIMP)的產生的不平衡導致腫瘤的血管發生和轉移(Fangetal.，2000；Bergersetal.，2000；Lokeshwaretal.，1993；Powelletal.，1993；Woodetal.，1997；Sehgaletal.，1998；Kuniyasuetal.，2000)。由於CD147可增加MMP的表達，它又被稱為胞外基質金屬蛋白酶誘導劑(EMMPRIN)(Guoetal.，1997；Limetal.，1998)。EMMPRIN最初從癌細胞質膜中以糖蛋白的形式被純化，該糖蛋白的分子量為58000，約一半的質量由碳水化合物形成。由於它能夠刺激成纖維細胞合成膠原酶-1(MMP-1)，它曾被命名為腫瘤膠原酶刺激因子(TCSF)(Biswasetal.，1995；Ellisetal.，1989)。後來的研究證實EMMPRIN還誘導成纖維細胞合成MMP-2、MMP-3，以及膜1型MMP(MT1-MMP)和MT2-MMP，MT1-MMP和MT2-MMP起MMP-2內源性激活劑的作用(Guoetal.，1997；Kataokaetal.，1993；Sameshimaetal.，2000)。因此，EMMPRIN在腫瘤局部環境中起MMP產生的上遊調節因子的作用。EMMPRIN陽性腫瘤細胞刺激周圍的成纖維細胞表達MMP，由此促進腫瘤侵襲和轉移。一些臨床研究表明，EMMPRIN在腫瘤區室中的表達水平比腫瘤周圍間質組織的高。這些腫瘤包括發源於肺(Poletteetal.，1997)、乳房(Poletteetal.，1997)、膀胱(Muraokaetal.，1993；Javadpour&Guirguis1992)和神經膠質瘤(Sameshimaetal.，2000a)的腫瘤。通過對從癌症患者骨髓中分離的個體癌細胞的轉錄組分析和比較基因組雜交技術，顯示EMMPRIN是在原發性腫瘤和微轉移細胞中表達最頻繁的蛋白質(Kleinetal.，2002)，說明它在腫瘤發展和早期轉移中起中心作用。使用重組EMMPRIN或從腫瘤細胞中純化的天然EMMPRIN進行的體外試驗研究了EMMPRIN在腫瘤細胞中表達增加的生物學意義。顯示EMMPRIN刺激由成纖維細胞產生的各種MMP的表達(Guoetal.，1997；Limetal.，1998)。這種誘導發生於轉錄水平並且至少部分地由促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)p38激酶信號傳導途徑介導(Limetal.，1998)。使用EMMPRIN過表達人乳腺癌細胞直接說明了EMMPRIN在腫瘤生長和轉移中的作用。MDAMB463細胞植入裸小鼠時為正常緩慢生長的細胞。然而當這些細胞用EMMPRIN轉染後，它們變為生長速度和轉移表型均加快的更具侵入性的生長形式(Zuckeretal.，2001)。CD147還顯示具有同型粘附特性，目前還不清楚這一特性與其MMP誘導活性如何關聯及關聯程度。CD147還在激活的T細胞和B細胞以及刺激它們的其它附屬細胞中表達(Deegetal.，2001)。因此有建議用靶向該抗原的抗體手段減弱對外源組織移入的免疫反應。急性移植物抗宿主疾病(GVHD)是異基因造血幹細胞移植(HSCT)的主要併發症。GVHD是由將受體組織識別為外源的供體T細胞引發的。產生的細胞激活和細胞因子的釋放導致宿主組織的破壞和GVHD。儘管對GVHD有體內藥物預防，但是還是有多達30％(人類白細胞抗原[HLA]相同的供體)至75％(不相關供體)的移植受體發生需要進行其他治療的急性GVHD。急性GVHD初期治療的標準為甲潑尼龍。初期診斷為更嚴重疾病的患者中通常發生類固醇抗性GVHD。抗CD147抗體ABX-CBL為一種鼠類免疫球蛋白M(IgM)，其描述於公布號為WO99/45031(AbgenixInc.)的PCT申請中。在體外激活的T細胞和B細胞可被ABX-CBL殺死，而靜息淋巴細胞不受影響。ABX-CBL在體外通過補體依賴細胞毒性機制殺死單核細胞、樹突細胞和激活的淋巴細胞，從而抑制混合淋巴細胞反應。在公布的I期/II期試驗(Deegetal.，2001)中，27個類固醇抵抗的急性GVHD患者以每天0.01(認為無效果的劑量)、0.1、0.2或0.3mg/kg的劑量接受ABX-CBL，另外還有32個患者被給予每天0.2或0.15mg/kg的ABX-CBL。所有的患者都經過異基因移植並接受了GVHD預防。在51名可進行有效性評估的患者中，有26人(51％)有反應，其中13人有完全反應(CR)，13人有部分反應(PR)。CR持續14天或以上的患者或PR持續7天或以上的患者共21人(41％；8人CR，13人PR)。肌痛(肌肉疼痛)為劑量限制性的，消退後沒有後遺症，並且可通過麻醉劑的預治療控制。在ABX-CBL療法開始後的6個月，仍有26名(44％)患者存活。Hab18抗體描述於公布號為2005/0176933(ChenZhinanetal.)的美國專利申請中。其它已知的抗CD147的抗體述於下表1996年11月10日至14日在日本神戶召開的第六屆國際人類白細胞分化抗原協作組會議上新指定的CD147特異性Mab。其它CD147特異性參照抗體的選擇目前本領域仍然需要對癌症特別是原發性肝癌有效的治療方法。
發明內容發明人發現，靶向CD147的非人類抗體或抗體片段在該抗體或抗體片段的可變區被突變以降低其對人類的免疫原性時，可作為用於治療人類癌症的潛在可用的藥物。因此，在第一方面，本發明提供一種含有可變區的非人類抗體或抗體片段，該抗體或抗體片段特異性結合CD147，其中所述可變區被突變以降低所述抗體或抗體片段在人體中的免疫原性。本發明的抗體或抗體片段提供了治療癌症特別是肝癌的潛在可用的新方法，該方法可避免目前的抗體治療帶來的不期望的副作用。在第二方面，本發明提供一種綴合物，其包括與細胞毒劑相連接的第一方面的抗體或抗體片段。在第三方面，本發明提供一種藥物組合物，其包括一種可藥用的載體和第一方面的抗體或抗體片段或第二方面的綴合物。在另一方面，本發明提供一種抑制癌細胞生長的方法，所述方法包括將癌細胞與根據第一方面的抗體或抗體片段、根據第二方面的綴合物或根據第三方面的藥物組合物接觸。在另一方面，本發明提供一種治療患有癌症的患者的方法，所述方法包括給予患者有效量的根據第一方面的抗體或抗體片段、根據第二方面的綴合物或根據第三方面的藥物組合物。在另一方面，本發明提供一種診斷疑似患有癌症的受試者的方法，所述方法包括給予受試者一種綴合物，所述綴合物包括與可在受試者體內被檢出的標記相連接的根據第一方面的抗體或抗體片段。在另一方面，本發明提供一種特異性結合CD147的改進的抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段由下述方法製備(a)提供編碼抗體或其片段的DNA，所述DNA包括選自SEQIDNO1至69的至少一段序列；(b)在所述DNA中引入至少一處核苷酸突變、缺失或插入，以使得由所述DNA編碼的所述抗體或抗體片段的胺基酸序列被改變；(c)表達所述抗體或抗體片段；以及(d)篩選具有所述改進的所述表達的抗體或抗體片段，由此製得所述改進的抗體或抗體片段。在另一方面，本發明提供一種結合CD147的抗體或抗體片段，其中所述重鏈可變區為SEQIDNO7的突變形式，在重鏈可變區中含有1至20個之間的突變，這使得其與天然人類重鏈的胺基酸序列的同一性比SEQIDNO7所示重鏈可變區序列的更高。在另一方面，本發明提供一種人源化抗體重鏈，所述重鏈包括一個或多個來源於鼠類抗體Hab18重鏈的CDR，還包括一個來源於人類抗體可變重鏈的框架序列，所述人類抗體可變重鏈具有1型正則結構(canonicalstructure)的CDR1和根據Kabat抗體編號系統長度為19的CDR2。在另一方面，本發明提供一種人源化抗體重鏈，所述重鏈包括一個或多個來源於鼠類抗體Hab18重鏈的CDR，還包括一個來源於人類抗體可變重鏈的框架序列，所述人類抗體可變重鏈具有1型正則結構的CDR1和3型正則結構的CDR2。在另一方面，本發明提供一種人源化抗體輕鏈，所述輕鏈包括一個或多個來源於鼠類抗體Hab18輕鏈的CDR，還包括一個來源於人類抗體可變輕鏈的框架序列，所述人類抗體可變輕鏈具有2型正則結構的CDR1、1型正則結構的CDR2和1型正則結構的CDR3。在另一方面，本發明提供編碼根據本發明各方面的抗體或抗體片段的多核苷酸，以及包含本發明的多核苷酸的載體。圖1(i)顯示Hab18抗體重鏈V區域與具有1型(對CDR1)和4型(對CDR2)正則結構的人類種系可變外顯子的比對。(ii)顯示Hab18抗體CDR3與人JH序列的比對。(iii)顯示具有1型(對CDR1)和4型或「類4型」(對CDR2)正則結構的人類種系可變外顯子根據與Hab18重鏈V區域在CDR區域的同源性的評分。(iv)顯示三種人源化Hab18重鏈可變區序列(h3-72*01、h3-49*01和h3-73*01)與Hab18鼠類可變區重鏈序列的比對。圖2顯示Hab18重鏈可變區序列與具有1型(對CDR1)和3型(對CDR2)正則結構的人類種系V外顯子序列的比對。圖3(i)顯示Hab18抗體輕鏈V區域與具有2型(對CDR1)、1型(對CDR2)和1型(對CDR3)正則結構的人類種系可變外顯子的比對。(ii)顯示具有2型(對CDR1)、1型(對CDR2)和1型(對CDR3)正則結構的人類種系可變外顯子根據與Hab18抗體輕鏈V區域的同源性的評分。(iii)顯示Hab18可變區輕鏈CDR3/J區域與人類種系Jκ(JK)區域的比對。(iv)顯示兩種人源化Hab18輕鏈(h1-6*01和h3-11*01)與Hab18輕鏈可變區的比對。圖4顯示用於超人源化TMscFv抗體的表達的載體構建體，其中LacP＝乳糖啟動子；Ld＝夏因-達爾加諾序列(Shine-Dalgarnosequence)+起始ATG+前導序列；Vheavy＝重鏈可變域；Vlight＝輕鏈可變域；Fl＝Flag標記＝DYKDDDDK；6H＝HHHHHH；T＝框架內終止密碼子(*)；Amp抗性＝編碼抗生素抗性的基因；OR＝複製起點。圖5顯示ELISA結果，表明基於Hab18的人源化抗CD147抗體的特異性結合。序列表說明SEQIDNO1鼠類Hab18的重鏈的CDR1的胺基酸序列。SEQIDNO2鼠類Hab18的重鏈的CDR2的胺基酸序列。SEQIDNO3鼠類Hab18的重鏈的CDR3的胺基酸序列。SEQIDNO4鼠類Hab18的輕鏈的CDR1的胺基酸序列。SEQIDNO5鼠類Hab18的輕鏈的CDR2的胺基酸序列。SEQIDNO6鼠類Hab18的輕鏈的CDR3的胺基酸序列。SEQIDNO7鼠類Hab18的重鏈的V區域的胺基酸序列。SEQIDNO8人類種系的可變區3-15*01的胺基酸序列。SEQIDNO9人類種系的可變區3-15*03的胺基酸序列。SEQIDNO10人類種系的可變區3-49*01的胺基酸序列。SEQIDNO11人類種系的可變區3-72*01的胺基酸序列。SEQIDNO12人類種系的可變區3-73*01的胺基酸序列。SEQIDNO13Hab18的CDR3/JH區域的胺基酸序列。SEQIDNO14人類種系的JH區域(JH1)的胺基酸序列。SEQIDNO15人類種系的JH區域(JH2)的胺基酸序列。SEQIDNO16人類種系的JH區域(JH3)的胺基酸序列。SEQIDNO17人類種系的JH區域(JH4)的胺基酸序列。SEQIDNO18人類種系的JH區域(JH5)的胺基酸序列。SEQIDNO19人類種系的JH區域(JH6)的胺基酸序列。SEQIDNO20基於全部3個鼠類CDR和人類種系可變區序列3-72*01/JH2的人源化Hab18重鏈可變區的胺基酸序列。SEQIDNO21基於全部3個鼠類CDR和人類種系可變區序列h3-49*01/JH2的人源化Hab18重鏈可變區的胺基酸序列。SEQIDNO22基於全部3個鼠類CDR和人類種系可變區序列h3-73*01/JH1的人源化Hab18重鏈可變區的胺基酸序列。SEQIDNO23人類種系可變區1-2*01的胺基酸序列。SEQIDNO24人類種系可變區1-2*02的胺基酸序列。SEQIDNO25人類種系可變區1-3*01的胺基酸序列。SEQIDNO26人類種系可變區1-Q*01的胺基酸序列。SEQIDNO27人類種系可變區1-46*01的胺基酸序列。SEQIDNO28人類種系可變區1-58*01的胺基酸序列。SEQIDNO29人類種系可變區3-07*01的胺基酸序列。SEQIDNO30人類種系可變區3-09*01的胺基酸序列。SEQIDNO31人類種系可變區3-11*01的胺基酸序列。SEQIDNO32人類種系可變區3-20*01的胺基酸序列。SEQIDNO33人類種系可變區3-21*01的胺基酸序列。SEQIDNO34人類種系可變區3-23*01的胺基酸序列。SEQIDNO35人類種系可變區3-23*02的胺基酸序列。SEQIDNO36人類種系可變區3-30*01的胺基酸序列。SEQIDNO37人類種系可變區3-30*02的胺基酸序列。SEQIDNO38人類種系可變區3-30*06的胺基酸序列。SEQIDNO39人類種系可變區3-30*18的胺基酸序列。SEQIDNO40人類種系可變區3-30-3*01的胺基酸序列。SEQIDNO41人類種系可變區3-33*01的胺基酸序列。SEQIDNO42人類種系可變區3-43*01的胺基酸序列。SEQIDNO43人類種系可變區3-48*01的胺基酸序列。SEQIDNO44人類種系可變區3-48*03的胺基酸序列。SEQIDNO45人類種系可變區3-64*01的胺基酸序列。SEQIDNO46人類種系可變區3-74*01的胺基酸序列。SEQIDNO47鼠類Hab18的輕鏈V區域的胺基酸序列。SEQIDNO48人類種系可變區1-6*01的胺基酸序列。SEQIDNO49人類種系可變區1-9*01的胺基酸序列。SEQIDNO50人類種系可變區1-12*01的胺基酸序列。SEQIDNO51人類種系可變區1D-16*01的胺基酸序列。SEQIDNO52人類種系可變區1D-16*02的胺基酸序列。SEQIDNO53人類種系可變區1-17*01的胺基酸序列。SEQIDNO54人類種系可變區1-33*01的胺基酸序列。SEQIDNO55人類種系可變區1-39*01的胺基酸序列。SEQIDNO56人類種系可變區1D-43*01的胺基酸序列。SEQIDNO57人類種系可變區3-11*01的胺基酸序列。SEQIDNO58人類種系可變區3-11*02的胺基酸序列。SEQIDNO59人類種系可變區3-15*01的胺基酸序列。SEQIDNO60鼠類Hab18的輕鏈CDR3/J區域的胺基酸序列。SEQIDNO61人類種系的Jκ區域JK1的胺基酸序列。SEQIDNO62人類種系的Jκ區域JK2的胺基酸序列。SEQIDNO63人類種系的Jκ區域JK3的胺基酸序列。SEQIDNO64人類種系的Jκ區域JK4的胺基酸序列。SEQIDNO65人類種系的Jκ區域JK5的胺基酸序列。SEQIDNO66基於人類可變(κ)區輕鏈序列h1-6*01/JK3的Hab18的人源化可變區輕鏈的胺基酸序列。SEQIDNO67基於人類可變(κ)區輕鏈序列h3-11*01/JK3的Hab18的人源化可變區輕鏈的胺基酸序列。SEQIDNO68基於重鏈SEQIDNO20和輕鏈SEQIDNO66的超人源化TM抗體scFv片段scFv-1的胺基酸序列。SEQIDNO69基於重鏈SEQIDNO20和輕鏈SEQIDNO67的超人源化TM抗體scFv片段scFv-2的胺基酸序列。SEQIDNO70CD147的胺基酸序列。具體實施例方式在下文的描述中提到了多種出版物，這些出版物可幫助本領域普通技術人員最大限度的理解和實施本發明。因此，在下文描述中所引用的每一篇參考文獻的全部內容都以援引的方式納入本文。本說明書中包括的所有文件、行為、材料、裝置、文章等的討論，都僅僅是出於為本發明提供背景的目的。並不應看作承認上述事物中的任一項或全部就如本申請每項權利要求的優先權日之前的狀況一樣構成現有技術基礎的一部分或是本發明相關領域的公知常識。定義「成熟抗體基因」為編碼免疫球蛋白的基因序列，所述免疫球蛋白表達於例如下列的經過成熟過程以至於表達特定免疫球蛋白的細胞中例如B細胞等的淋巴細胞、雜交瘤細胞或任何生產抗體的細胞。該術語包括編碼上述成熟基因的成熟基因組、cDNA或其它核酸序列，這些基因是為在其它細胞類型中表達而被分離和/或被基因工程重組改造的。成熟抗體基因經過各種突變和重排，這些突變和重排使得它們在結構上與除淋巴細胞外的所有其它細胞中編碼的抗體基因不同。在人類、嚙齒類和其它許多哺乳動物中的成熟抗體基因是通過下述方式形成的通過V和J基因片段的融合形成抗體輕鏈，通過V、D和J基因片段的融合形成抗體重鏈。許多成熟抗體基因需要在融合後進行點突變，一些這樣的點突變增加了抗體蛋白質對特異性抗原的親和性。「種系抗體基因」或基因片段為非淋巴樣細胞編碼的免疫球蛋白序列，所述非淋巴樣細胞沒有經過為了特定免疫球蛋白的表達導致基因重排和突變的成熟過程。由本發明的各個實施方案提供的有利之處之一來自以下認識種系抗體基因與成熟抗體基因相比更傾向於保留動物種類個體的必需的胺基酸序列結構特性，因此當其用於治療該物種時比較不易被識別為外源物。「CDR」為抗體可變序列內的互補決定區域。在可變重鏈和可變輕鏈每條鏈的序列中有三個CDR，對於每個可變區分別命名為CDR1、CDR2和CDR3。根據不同的系統認定的這些CDR的精確邊界會有所不同，但是它們均具有在可變序列範圍內在組成所謂「高變區」處重疊的殘基。由Kabatetal.(1991)和WuandKabat(1970)描述的系統不但提供了可用於抗體任意可變區的明確的殘基編號系統，還提供了定義三個CDR的精確殘基邊界。這些CDR可被稱為KabatCDR。Chothia及其同事(Chothiaetal.(1987)；Chothiaetal.(1992)；Tomlinsonetal.(1995))發現KabatCDR中的某些亞區域雖然在胺基酸序列水平上差異很大，但是卻具有幾乎相同的肽主鏈構象。這些亞區域被命名為L1、L2和L3或者H1、H2和H3，其中「L」和「H」分別代表輕鏈和重鏈區域。這些區域可被稱為ChothiaCDR，其邊界與KabatCDR重疊。表1示出了根據Kabat殘基編號系統ChothiaCDR和KabatCDR的重疊。表1根據Kabat殘基編號系統ChothiaCDR和KabatCDR的重疊其它的與KabatCDR重疊的定義CDR的邊界描述於Padlanetal.(1995)或MacCallumetal.(1996)。還有其它與上述系統均不完全相同的CDR邊界定義，雖然它們與KabatCDR可能有重疊，但是它們卻可能根據預言或試驗的發現被縮短或延長，所述預言或試驗發現為特定殘基或殘基簇或甚至整個CDR都不會顯著影響抗原結合。根據任何這些系統定義的CDR都可應用於本文所用的方法，但是優選的實施方案使用Kabat或Chothia定義的CDR。「框架」或「框架序列」為可變區除去CDR後剩下的序列。因為CDR序列的精確定義可由不同系統確定，所以框架序列的含義也相應的有不同的解釋。為明確本文使用的含義，框架序列意為在抗體可變區內除了定義為CDR序列之外的那些序列，這樣框架的精確序列就僅僅取決於CDR如何定義。例如，本文提供的方法中所使用的CDR通常為被認為是KabatCDR的一個亞群，但是例如對於重鏈的CDR1，也包括在Kabat系統中被分類為框架殘基的殘基。「CDR正則結構型」是由Chothia命名的結構類型(Chothiaetal.(1987)；Chothiaetal.(1992)；Tomlinsonetal.(1995))。Chothia及其同事發現，許多抗體的CDR的關鍵部分雖然在胺基酸序列水平上差異很大，但是卻具有幾乎相同的肽主鏈構象。因此，Chothia對每條鏈的每個CDR定義了一個或幾個「正則結構」。每種正則結構主要具體指一組肽主鏈的扭轉角從而使連續的一段胺基酸殘基形成一個環。Chothia定義的CDR正則結構型列於表2。表2Chothia定義的CDR正則結構型「對應的CDR」相對地指兩個不同的可變序列間的CDR，它們在這兩個不同的可變序列中的位置是相互對應的。因此，例如小鼠輕鏈CDR1對應人類輕鏈CDR1，反之亦然，因為不論CDR的真實邊界是否按Kabat系統、Chothia系統或其他系統定義，每一個CDR都對應Kabat編號系統中的確定位置。類似地，「對應的」殘基、序列或胺基酸也相對地指由Kabat編號系統規定的兩個不同肽序列間的殘基位置。「基本相同」這一術語在應用於胺基酸序列時在本文中定義為一個序列與另一個胺基酸序列有至少約90％、更優選地有至少約95％的序列同一性，所述同一性是通過根據Pearson和Lipman(1988)的FASTA搜索方法測定的。「非人類抗體」可來自任何來源。優選的它們來源於哺乳動物。更優選地它們來源於鼠類。非人類抗體具有對CD147的結合特異性。如果一種抗體對CD147的結合常數至少為105M-1，並且比它對大多數其它蛋白的親和常數高至少10倍，該抗體被認為是具有CD147的結合特異性；更優選地，它對CD147的結合常數至少為106M-1並且比它對其它大多數蛋白的親和常數高至少10倍；再更優選地，它對CD147的結合常數至少為107M-1並且比它對其它大多數蛋白的親和常數高至少100倍；再更優選地，它對CD147的結合常數至少為108M-1並且比它對其它大多數蛋白的親和常數高至少100倍；再更優選地，它對CD147的結合常數至少為109M-1並且比它對其它大多數蛋白的親和常數高至少1000倍；「抗體片段」或「抗體的片段」優選地具有與其來源的抗體相比相近或相同的對CD147的結合特異性。片段包括具有與抗體可變區的胺基酸序列基本相同的胺基酸序列的多肽。這類片段可含有Fab片段的一個或一對或F(ab』)2片段。優選地，抗體片段含有完整抗體的全部六個互補決定區，然而含有少於上述全部互補決定區的片段——例如含有三個、四個、或五個CDR的片段——也可起作用，並被包涵於本發明之內。片段還包括單鏈抗體片段，具體而言被稱為單鏈可變區片段(scFv)。這些片段含有連接於抗體可變輕鏈序列(VL)的至少一個片段的抗體可變重鏈胺基酸序列(VH)的至少一個片段，可以使用或不使用互連連接物將它們連接。這類連接物可以是選定的短的柔性肽，以保證(VL)和(VH)結構域在連接時發生正確的三維摺疊，從而可保留該單鏈抗體片段來源的完整抗體的對靶分子的結合特異性。通常，可將(VL)或(VH)的羧基端用上述的肽連接物與互補的(VL)和(VH)序列的胺基酸末端共價連接。單鏈抗體片段可用分子克隆、抗體噬菌體展示或類似的技術產生。這些蛋白質可在真核細胞或包括大腸埃希氏菌(E.coli)的原核細胞中產生。scFv可與抗體分子的其它部分相融合。例如，可以通過天然或人造的肽連接物將scFv連接到IgG的CH2-CH3區域，以形成二價的scFv-Fc構建體。非人類抗體或抗體片段包括可變區。非人類抗體或抗體片段至少要含有一個可變區重鏈或輕鏈序列，優選地為重鏈序列。優選地，非人類抗體或抗體片段既含有可變重鏈序列，又含有可變輕鏈序列。非人類抗體或抗體片段有時被稱為受試抗體或抗體片段。「降低」抗體或抗體片段在人體中的「免疫原性」意為製造這樣一種分子，在其被給予至人體時具有減弱的引起免疫反應的趨勢(Hwangetal，2005a)；減弱的趨勢意為對該分子顯示免疫反應的患者比對親本分子顯示免疫反應的患者少，或者某些患者對該分子產生免疫反應的程度比對親本分子產生免疫反應的程度低。免疫反應的程度可以通過在體外分析中測量患者血清中的抗體效價或分子激活T細胞的能力來確定。短語「突變以降低免疫原性」意在涵蓋對非人類抗體可變區進行的任何形式的修飾或改造，所述修飾和改造導致了向人類給藥時引起免疫反應的趨勢減弱。突變可包括例如在可變區的框架區中的一個或多個點突變，或者可包括可變區框架序列的一個或多個區域的置換。應當理解並不是必須產生原始的非人類可變區以用於後續的突變或改造。可以通過合成方式或將CDR環嫁接到選定的人類框架序列上的方法直接產生突變的可變區。可用於降低免疫原性的突變技術的實例包括抗體或抗體片段的去免疫化(deimmunizing)、人源化、超人源化TM和表面重建(resurfacing)。本發明還涵蓋在抗體和抗體片段的可變區中進行突變以降低其對人類的免疫原性的抗體和抗體片段的「功能性等價物」。功能性等價物具有與抗體和抗體片段相近的結合特性，包括例如嵌合抗體和單鏈抗體。生產這類功能性等價物的方法公開於公布號為WO93/21319的PCT申請(CetusOncologyCorp)、公布號為239,400的歐洲專利申請(Winter)、公布號為WO89/09622的PCT申請(ProteinDesignLabsInc)、公布號為338,745的歐洲專利申請(CelltechLtd)和公布號為332,424的歐洲專利申請(HybritechInc)中，以上文獻的全部內容分別以援引的方式納入本文。功能性等價物包括具有與本發明的抗體或抗體片段的可變區或高變區的胺基酸序列基本相同的胺基酸序列的多肽。功能性等價物還包括具有與完整抗體相同或相近的結合特性的抗體的片段。這類片段可含有Fab片段的一個或一對或F(ab』)2片段。優選地，抗體片段含有完整抗體的全部六個互補決定區，然而含有少於上述全部互補決定區的片段——例如含有三個、四個、或五個CDR的片段——也可起作用。此外，功能性等價物可為下列免疫球蛋白種類或其亞類中的任意一員或其組合IgG、IgM、IgA、IgD或IgE。功能性等價物還涵蓋了含有修飾的抗體或抗體片段，所述修飾基本等價於在其序列中進行保守性替換，所述替換不會使抗體或抗體片段的結合特異性有任何明顯程度的改變。示例性的保守性替換此外，如果需要的話，還可以在本發明的多肽中以置換或添加的方式引入非天然存在的胺基酸或化學方法製得的胺基酸類似物。這類胺基酸包括但不限於普通胺基酸的D-異構體、2，4-二氨基丁酸、α-氨基異丁酸、4-氨基丁酸、2-氨基丁酸、6-氨基己酸、2-氨基異丁酸、3-氨基丙酸、鳥氨酸、正亮氨酸、正纈氨酸、羥脯氨酸、肌氨酸、瓜氨酸、高瓜氨酸、半胱磺酸、叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸、苯基甘氨酸、環己基丙氨酸、氟代胺基酸、胺基酸設計物例如(3-甲基)胺基酸、C-α-甲基胺基酸、N-α-甲基胺基酸和通常的胺基酸類似物。功能性等價物還包括抗體和抗體片段的化學修飾衍生物，這可提供例如使多肽的穩定性和循環時間增加等有利之處。衍生的化學部分可選自水溶性聚合物，例如聚乙二醇、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇等等。此外，抗體或抗體片段可在合成過程中或合成後被不同地修飾，例如通過生物素化、苯甲基化、糖基化、乙醯化、磷酸化、醯胺化、用已知保護/封閉基團衍生化、蛋白酶剪切等等。抗體或抗體片段可在分子內隨機位置或者在分子內預定位置被修飾，可包括一個、兩個、三個或多個附加的化學部分。這些修飾例如可增加本發明的結合部分的穩定性和/或生物活性。可以通過在特定系列的CDR側面的可變區和恆定區序列內突變、缺失和/或插入而容易地生產各種抗體和抗體片段以及抗體模擬物。因此例如，可以通過不同重鏈的替換得到具有給定系列的CDR的不同類別抗體，由此可生產例如IgG1-4、IgM、IgA1-2，IgD、IgE抗體型和同種型。類似地，可以如US6,818,418所述，通過將給定系列的CDR嵌入例如人纖連蛋白多肽序列結構域等的完全合成框架中而生產本發明範圍內的人造抗體。術語「可變的」在本文用於描述各個抗體之間序列不相同的可變域的某些部分，這些部分用於每個具體抗體對其抗原的結合和特異性。然而，可變性通常不是平均分布於抗體的整個可變域中。可變性通常集中在重鏈和輕鏈可變域中被稱為互補決定區(CDR)或高變區的三個片段上。可變域中保守性更高的部分被稱為框架(FR)。每條重鏈和輕鏈的可變域包括四個框架區，它們大多具有β-片層構型，由三個CDR相連接，CDR形成環狀連接，有時也構成β-片層的一部分。每條鏈上的CDR都通過FR區域緊密地聚集在一起，並且和另一條鏈上的CDR共同形成抗體的抗原結合位點(Kabatetal.，1991)。恆定區通常不直接參與抗體與抗原的結合，但可具有各種效應子功能，例如參與抗體的抗體依賴細胞毒性作用。降低免疫原性重組DNA方法學的出現使得可以對抗體基因進行結構基因工程改造，並可以產生具有雜交瘤技術無法獲得的屬性的修飾抗體分子。在治療領域，該方法學的一個目的是通過改變鼠類單克隆抗體的一級胺基酸結構來降低其在人體中的免疫原性。降低治療性抗體的免疫原性是合乎需要的，因為產生免疫反應可能在患者體內引起一系列的不良反應，輕者造成治療性抗體的清除加快，療效隨之喪失，重者在極端情況下可導致致命的過敏反應。降低外源單克隆抗體的免疫原性的一個策略是將單克隆抗體的輕鏈和重鏈恆定域用人類來源的相似結構域替換，保留外源抗體完整的可變區結構域。輕鏈和重鏈的可變區結構域負責抗體和抗原之間的相互作用。連接可變域和恆定域的連接結構域位於遠離抗原結合位點的區域，因此，可變域和恆定域之間的連接結構域通常不會干擾抗原結合。具有與人類恆定域相連接的小鼠可變域的嵌合抗體通常以與嵌合抗體來源的小鼠抗體基本相同的親和常數結合抗原。這類嵌合抗體在人體中的免疫原性比與其對應的完整鼠類抗體要低。然而，保留全部鼠類可變域的抗體還是可能在相當一部分患者體內引起免疫反應(Hwangetal.，2005a)。例如INFLIXIMABTM是一種被認為安全的廣泛用於處方的嵌合抗體，但它在47名克羅恩病患者中的7名患者體內引起人抗嵌合抗體的反應(Rutgeertsetal.，1999)。鑑於上述人體內的不期望的免疫反應，研究者們試驗了獲得具有更多人類特徵的可變域的方法。通常被稱為「人源化」的一類方法的目的是將鼠類單克隆抗體的可變域轉化為更接近人類的形式，所述轉化是通過重組構建同時具有小鼠和人類特徵的抗體可變域實現。人源化策略是基於來源於抗體結構資料庫的一些公認的概念。第一，可變域包含在物種內保守但在例如小鼠和人類等的進化上較遠的物種間不同的肽序列的連續部分。第二，其他連續部分在物種內不保守，而且在同一個體內不同的抗體產生細胞之間也不相同。第三，抗體和抗原之間的接觸主要通過可變域的非保守區域發生。第四，抗體可變域的分子構造在各物種間足夠一致，從而各物種間的對應胺基酸殘基的位置可以僅基於位置確定而不必基於實驗數據。人源化策略同樣基於這一前提將具有鼠類序列特徵的胺基酸殘基替換為人類抗體相應位置存在的殘基可降低所得抗體在人體中的免疫原性。支持這一觀點的數據已有公布(Hwangetal.，2005a)。然而，在物種間的序列替換通常導致抗體-抗原結合的減弱。因此，人源化的技術依賴於在替換原始鼠類序列以降低免疫原性和人源化分子保留可用於治療的足夠抗原結合能力的需要之間保持平衡。發明人發現並改進了特異性結合細胞表面的CD147的新抗體。他們成功地降低了靶向CD147的抗體對人體的免疫原性，同時還保持了抗體對CD147有效的親和性。因此，在第一方面，本發明提供一種含有可變區的非人類抗體或抗體片段，該抗體或抗體片段特異性結合CD147，其中所述可變區已被突變以降低所述抗體或抗體片段在人體內的免疫原性。一種被本申請稱為「表面重建」的方法示例性地由美國專利No.5,869,619(Studnicka)以及Padlan(1991)描述，在該方法中，鼠類可變域殘基被人類殘基特徵性替換，所述鼠類可變域殘基被測定為或被預言為(i)在與抗原的相互作用中不起明顯的化學作用和(ii)位於伸出至溶劑中的側鏈處。這樣遠離抗原結合位點的外部殘基為人源化的，而內部殘基抗原結合殘基以及形成可變域之間界面的殘基還保持為鼠類的。這種方法的一個缺陷是需要大量的實驗數據以確定一個殘基是否在抗原的結合中不起明顯的化學作用或其將在特定的三維抗體結構中位於溶劑中。本發明包括用於降低例如鼠類等的非人類抗體的免疫原性的這類方法的用途及其產品。在由美國專利No.5,225,539(Winter)和Jonesetal.(1986)示例性描述的一種更通用的方法中，可將認為是保守的鼠類可變域肽序列的連續部分用來自人類抗體的對應部分替換。在這種更通用的方法中，除了參與抗原結合的非保守區域以外，所有的可變域殘基都被人源化。為確定適於替換的連續部分，可按US5,225,539和Jonesetal.(1986)所述應用WuandKabat(1970)開發的抗體可變域序列的分類方法。Wu和Kabat開創了抗體肽序列比對的先河，他們在這方面的貢獻有以下幾點。第一，他們通過可變域之間的序列相似性研究，確定了在所有脊椎動物物種中的所有抗體均或多或少同源的對應殘基，這是由於它們都具有相類似的三維結構、起到相類似的功能作用、與鄰近的殘基相類似地相互作用及存在於相類似的化學環境中。第二，他們設計了一種肽序列編號系統，在這一系統中相應的免疫球蛋白殘基被指定相同的位置號。本領域技術人員可以清楚地對任何可變域序列指明其通常所稱的Kabat編號，而無需依賴任何序列本身之外的實驗數據。第三，對於每一個Kabat編號的序列位置，Kabat和Wu都計算了其可變性，該可變性意為在可變域序列比對時可能發現的胺基酸種類的多少。他們確定三個高可變性的連續區域嵌入在四個可變性較小的連續區域中。以前也有其他的研究者注意到大致在這些區域(高變區)的可變性，並假定這些高度可變的區域代表了用於抗原結合的胺基酸殘基。Kabat和Wu為構成這些可變部分的殘基正式劃定了邊界，並根據抗體和抗原之間的化學互補性將它們命名為「互補決定區」(CDR)。剩下的低可變區起到可變域中三維摺疊作用而不是起抗原識別作用，該低可變區現在被命名為「框架區」。第四，Kabat和Wu建立了抗體的肽序列和核酸序列的公用資料庫，該資料庫現在還在繼續維持並為本領域技術人員所熟知。由U.S.5,225,539(Winter)和Jonesetal.(1986)公開的使用Kabat分類方法的人源化方法得到了一種包括來源於一種抗體的CDR和來源於另一種抗體的框架區的嵌合抗體，所述兩種原始抗體的物種來源、特異性、亞群或其他特徵均不同。然而並沒有將特定的序列或屬性歸於框架區。實際上，U.S.5,225,539(Winter)教導了任何系列的框架區可與任何系列的CDR相組合。從此認識到框架區序列對於維持抗體可變區的三維結構十分重要，而這種三維結構又是維持足夠的抗原結合性所必需的。那麼由U.S.5,225,539(Winter)和Jonesetal.(1986)所描述的一般人源化的方法就有經常產生無活性抗體的缺陷，因為這些參考文獻沒有提供從許多種可能的人類框架序列中做出合理選擇所需的信息，所選出的人框架序列應最可能有利於來源於非人類抗體的特定CDR區域所需的抗原結合。在本領域中後續的發展是U.S.5,225,539(Winter)範圍內的優化，以處理觀察到的人源化抗體相對其對應的小鼠抗體的抗原親合力損失的情況。親合力是在存在抗原、接近化學平衡的條件下，游離形式和與抗原結合的形式之間的抗體分配的定量量度。對於溶液中的不經過多價結合作用的反應，親合力等於親和力，親和力為一個生化平衡常數。美國專利No.5,693,761(Queenetal.)公開了U.S.5,225,539(Winter)的人源化抗體的一個優化方案，它基於下述前提親合力損失是歸因於人源化框架的結構性基序的問題，由於立體的或其他化學上的不相容性，使該基序幹擾了CDR摺疊成小鼠抗體中存在的可結合構象。為解決這一問題，U.S.No.5,693,761(Queenetal.)教導使用在線性肽序列上與待人源化的小鼠抗體框架序列近似的人類框架序列。因此，U.S.5,693,761(Queenetal.)的方法致力於比較物種間的框架序列。通常將所有可用的人類可變域序列與一個特定的小鼠序列相比較，並計算對應框架殘基之間的同一性百分比。選擇具有最高百分比的人類可變域從而為人源化工程提供框架序列。U.S.5,693,761(Queenetal.)還教導了在人源化框架中保留來自小鼠框架的對於使CDR保持為可結合構象十分關鍵的某些胺基酸殘基是很重要的。潛在的關鍵性通過分子模型測評。可保留的候選殘基通常是那些在線性序列上與CDR鄰近的殘基或者與任意CDR殘基物理距離在6埃以內的殘基。本發明包括U.S.5,693,761(Queenetal.)教導的這類方法用於Hab18抗體的人源化的用途及其產品。在其他方法中，當獲得了低親合力人源化構建體後，可以通過將單個殘基換回為小鼠序列的殘基並用如Riechmannetal.(1988)所述的方法測定抗原結合，從而試驗確定特定的框架胺基酸殘基的關鍵性。另一種確定框架序列中的胺基酸的關鍵性的方法實例公開於美國專利No.5,821,337(Carteretal.)和5,859,205(Adairetal.)。這些參考文獻公開了框架中的具體的Kabat殘基位置，這些位置在人源化抗體中需要用對應的小鼠胺基酸替換以保留親合力。本發明包括這類方法用於Hab18抗體的人源化的用途及其產品。U.S.5,693,761(Queenetal.)所述的優化方案和Riechmannetal.(1988)、U.S.5,821,337(Carteretal.)和U.S.5,859,205(Adairetal.)的方法的一個缺陷是需要相當大量的人類框架序列用於比較，和/或為保留關鍵胺基酸殘基的指導策略不能完全充分地預言功能性。因此，所得的一部分來源於人一部分來源於小鼠的框架構建體仍然經常表現出對人體的免疫原性或較低的抗原結合性，因此，為獲得適用於治療用途的框架還需要在框架構建中進行很多重複試驗。在表面重建技術中，將建立分子模型、統計學分析和誘變相結合以調整可變區的非CDR表面，以使其與目標宿主的已知抗體的表面相像。抗體表面重建的策略和方法以及其他在不同宿主中降低抗體的免疫原性的方法公開於美國專利No.5,639,641(Pedersenetal.)，其全部內容以援引的方式納入本文。抗體或抗體片段的去免疫化可以通過從例如小鼠等的非人類抗體或抗體片段中鑑定和消除潛在免疫原性的鼠類T細胞和B細胞表位的方式實現。T細胞表位的移除可通過從抗體可變區中鑑定這類表位的方式實現。例如，可通過三維「肽穿線(peptidethreading)」方法分析可變區的胺基酸序列以檢測MHCII類結合基序的存在。至少一個或全部B細胞表位從可變區的移除可通過對不會影響抗體識別的表面殘基的「覆蓋」的方式實現。上述方法的任何一項都可用於使特異性結合CD147的抗體或抗體片段的可變區突變，以降低抗體或抗體片段對人體的免疫原性。在一個優選的實施方案中，通過CDR嫁接方法降低免疫原性。CDR嫁接方法提供了一種用於獲得可用於使受試非人類抗體人源化的合適人類框架序列的策略。本發明的優選的CDR嫁接方法是被稱為超人源化TM的方法，所述方法基於公布號為US2003/0039649(Foote)的美國專利申請和公布號為WO04/006955(Foote)的PCT申請的具體描述，並由Tanetal.(2002)和Hwangetal.(2005b)進行了進一步闡釋。公布號為US2003/0039649(Foote)的美國專利申請將這種方法命名為「抗體超人源化TM」，並將由此製備的抗體命名為「超人源化TM抗體」。與基於人類框架與受試(鼠類)框架比較而選擇人源化框架序列的先前的CDR嫁接技術不同，「抗體超人源化TM」的方法是由基於CDR與受試非人類抗體的CDR的相似性的人類抗體提供人源化框架，而不必比較兩種抗體之間的框架序列。對每個結構域都在兩個水平上評價了候選人類抗體CDR序列和受試CDR之間的相似性。首先，尋找CDR肽主鏈的相同的三維構象。試驗測定的受試CDR的原子坐標大多數時候都不可用，因此要通過測定受試CDR的Chothia正則結構型並且不進一步考慮具有不同正則結構型的候選者來近似測得三維相似性。其次，考慮受試CDR和其餘人類候選CDR之間的殘基與殘基的同源性，同源性最高的候選者入選。選擇最高的同源性基於各種標準，這些標準用於對具有與受試非人類可變區相同正則結構的候選人類可變區排序。對選出系列的成員進行排序的標準可以是胺基酸序列同一性或胺基酸同源性或二者兼備。胺基酸同一性只是胺基酸殘基的位置與位置匹配的評分。通過胺基酸同源性得出的相似性是考慮了殘基結構和特性的位置與位置的相似性。例如，可以根據HenikoffandHenikoff(1992)所述的表格和過程或者通過HenikoffandHenikoff(1996)所述的BLOSUM系列來對同源性評分。該方法的步驟如下(i)測定結合CD147的受試抗體的重鏈和輕鏈可變域的肽序列。這可以通過任意一些方法測得，例如在常規cDNA克隆後對各個基因的DNA測序；從反轉錄物或受試雜交瘤細胞系的DNA用聚合酶鏈式反應擴增出克隆產物並對其DNA測序；或者對純化的抗體蛋白質進行肽測序。(ii)將Kabat編號系統(Kabatetal.，1991)應用於受試非人類CD147結合抗體的重鏈和輕鏈序列中。(iii)測定與CD147結合的受試非人類抗體的每一個CDR的正則結構型。這種測定是按照ChothiaandLesk(1987)、Chothiaetal.，(1992)、Tomlinsonetal.(1995)、MacCallumetal.(1996)和A1-Lazikanietal.(1997)中討論的指導策略進行肽序列檢測完成的。每一個CDR的正則結構型測定的顯著特徵列出如下。對於重鏈CDR1，目前已知三種正則結構型。因為每個正則結構型都有不同數目的殘基，所以新序列的指定是簡單易行的。如A1-Lazikanietal.(1997)所述，當指定序列用Kabat編號時，可按下表根據各正則結構分別對殘基31-35編號。對於重鏈CDR2，目前已知四種正則結構型。一些結構型具有與其他結構型不同的殘基數目，可以根據它們52-56位置的唯一Kabat編號容易地將它們區分出來。重鏈CDR2的2型和3型正則結構具有相同的殘基數目，因此必須用Chothiaetal.(1992)中討論的方法根據其序列內的提示來區分它們。2型正則結構在52a位置為Pro或Ser，在55位置為Gly或Ser，其他位置沒有限制。3型正則結構在54位置為Gly、Ser、Asn或Asp，其他位置沒有限制。這些標準在大多數情況下足夠完成正確的指定。此外，對2型正則結構，框架殘基71通常為Ala、Val、Leu、Ile或Thr；對3型正則結構，框架殘基71通常為Arg。重鏈CDR3是所有CDR中最具多樣性的。它是由遺傳方法產生的，具有一些隨機的性質，但是每個淋巴細胞產生的重鏈CDR3是唯一的。因此CDR3的正則結構難以預測。因為人類種系V基因片段終止於Kabat位置94，而位置95至102編碼CDR3；所以在任何情況下，V基因片段不編碼CDR3的任何部分。出於上述理由，在選擇候選人類序列時不考慮CDR3的正則結構。對於輕鏈CDR1，目前已知κ鏈中的CDR1有六種正則結構型。每種正則結構的殘基數目均不一樣，因此根據Kabat編號的殘基位置27-31可以清楚地為新序列指定一種正則結構型。對於輕鏈CDR2，目前已知κ鏈中的CDR2僅有一種正則結構型，因此除了特殊的受試抗體序列之外，可自動進行指定。對於輕鏈CDR3，目前描述過的κ鏈中的CDR3最多有六種正則結構型，但是其中有三種很少見。三種較常見的結構型可根據它們的長度區分，反映到Kabat編號系統中為殘基91-97位置。在確定了受試非人類抗體的CDR正則結構型之後，可確定與受試抗體具有相同正則結構型組合、相同鏈類型(重鏈或輕鏈)的人類基因組成候選的一系列人類序列。在優選的實施方案中，僅考慮將人類種系免疫球蛋白VH和Vk基因片段的肽序列用於比較。這些基因片段的大多數已被發現並且已被指定了正則結構型(Chothiaetal.(1992)；Tomlinsonetal.(1995))。上述參考文獻未公開的其他V基因片段公開於公布號為2003/0039649的美國專利申請(Foote)中。對於重鏈，評估了CDR1和CDR2與小鼠的正則結構型的相符程度，並排除不相符的基因。對於輕鏈，首先評估每個人類序列的CDR1和CDR2與受試抗體的正則結構型的相符程度。通過使候選Vk基因與J區域融合併對融合序列應用用於CDR3的CDR正則結構型確定的標準，藉此評估候選Vk基因的89-95殘基形成與受試抗體正則結構型相同的CDR3的潛能，排除不相符的序列。在另一個實施方案中，當受試抗體的可變域為人類基因組無法產生的正則結構型時，考慮將具有與受試抗體的三維正則結構型相近但不相同的人類種系V基因用於比較是適當的。這種情況在涉及鼠類抗體的κ鏈CDR1時經常發生。在鼠類抗體的這一CDR中已觀察到全部6種可能的正則結構型，而人類基因組僅編碼2、3、4和6型正則結構。在這種情況下，可選擇胺基酸殘基長度與受試非人類序列的胺基酸殘基長度相差在兩個殘基之內的CDR正則結構型用於比較。例如，當發現受試抗體為1型正則結構時，可使用具有2型正則結構的人類Vk序列進行比較。當發現鼠類抗體為5型正則結構時，可使用具有3型或4型正則結構的人類Vk序列進行比較。在另一個實施方案中，可考慮將成熟的重排人類抗體序列用於序列比較。在多種情況下進行上述考慮是適當的，所述情況包括但不限於當成熟人類序列(1)與種系相當接近時；(2)已知在人體中沒有免疫原性時；或(3)含有與受試抗體相同但不存在於人類種系中的正則結構型時。在一個優選的實施方案中，對於每個具有匹配正則結構型的候選V基因，還要評估它與受試序列的殘基對殘基的同一性和/或同源性，以對候選的人類序列排序。在一個具體的實施方案中，被評估的殘基如下所示在優選的實施方案中，首先根據受試序列和候選人類序列之間的相同胺基酸殘基的數目對殘基對殘基同源性進行評分。用於後續轉化抗體構建的人類序列是從得分最高的25％的候選序列中選擇的。在其他實施方案中，當一些候選序列具有相近的同一性得分時，再考慮不相同的胺基酸殘基之間的相似性是適當的。受試殘基和對象殘基之間如果有脂肪族-脂肪族、芳香族-芳香族或極性-極性胺基酸的匹配就可以加分。在另一個實施方案中，可使用例如HenikoffandHenikoff(1992)中的BLOSUM62矩陣的胺基酸替換矩陣來進行序列同源性的定量評估。框架區的C端至CDR3序列間的合適序列選自已知人類種系J片段的系列。通過使用上述具體用於評估候選V基因的評分標準，對每個J片段的CDR3和J重疊的序列位置進行殘基對殘基的同源性評估，從而選出優選的J肽序列。用於後續轉化抗體構建的J基因片段肽序列是從得分最高的25％的候選序列中選擇的。重鏈的CDR3是重鏈JH區域的一部分，從其序列上無法預言出有限數目的三維結構，然而根據本方法，可使用任何JH區域構建人源化重鏈可變區。在所有的實施方案中，人源化分子包括至少一個可變區，優選地為重鏈可變區。優選地該分子還包括另一個輕鏈可變區。優選地，人源化可變區含有至少一個、至少兩個或至少三個來源於受試非人類抗體的CDR區域。在一個實施方案中，抗體或抗體片段包括重鏈可變區和輕鏈可變區時，僅有重鏈可變區的CDR3來源於受試非人類抗體的CDR3或者基本上與受試非人類抗體的CDR3相同，而其餘5個CDR來源於人類抗體序列。在一個更優選的實施方案中，在6個可能的CDR中至少有2個(其中一個是重鏈可變區CDR3)來源於受試非人類抗體的對應CDR或者基本上與受試非人類抗體的對應CDR相同。在一個再更優選的實施方案中，在6個可能的CDR中至少有3個(其中一個是重鏈可變區CDR3)來源於受試非人類抗體的對應CDR或者基本上與受試非人類抗體的對應CDR相同。優選地，在6個可能的CDR中至少有4個或5個(其中一個是重鏈可變區CDR3)來源於受試非人類抗體的對應CDR或者基本上與受試非人類抗體的對應CDR相同。在一個實施方案中，全部6個可能的CDR均來源於受試非人類抗體的對應CDR或者基本上與受試非人類抗體的對應CDR相同。在其他實施方案中，當只有重鏈可變區時，僅有重鏈可變區的CDR3來源於受試非人類抗體的CDR3或者基本上與受試非人類抗體的CDR3相同，而其餘2個CDR來源於人類抗體序列。在其他實施方案中，另兩個CDR中的一個或兩個(CDR1和/或CDR2)也來源於受試非人類抗體。然而，在所有情況下，優選人源化抗體分子在框架序列中含有的與候選人類可變區的框架序列不同的胺基酸殘基不多於10個。優選地，來源於候選人類抗體的抗體或抗體片段的框架序列與天然的候選人類框架序列具有至少65％、更優選至少75％、更優選至少80％、再更優選至少85％、再更優選至少90％和再更優選至少95％的序列同一性。在另一個優選的實施方案中，本發明的人源化抗體與針對CD147產生的受試鼠類抗體(優選Hab18)相比，對CD147的親和力下降不超過100倍，更優選地親和力下降不超過25倍，更優選地親和力下降不超過5倍，更優選地與針對CD147產生的受試鼠類抗體相比，對CD147的親和力基本相等。在另一個優選的實施方案中，本發明的人源化抗體對CD147的親和力至少為Kd1nM、10nM、100nM或1μM。在另一個實施方案中，當需要提高人源化抗體的親和力時，將轉化抗體的CDR中的殘基用其他的胺基酸再進行替換是適當的。通常在一個CDR中被改變的胺基酸殘基不超過4個，最通常在一個CDR中被改變的胺基酸殘基不超過2個，但是重鏈CDR2除外，重鏈CDR2中被改變的殘基可多達10個。類似地，在某些實施方案中，框架序列的一些胺基酸可被改變。優選地，被改變的胺基酸殘基不超過10個。然後可以通過本領域人員已知的基因合成和重組蛋白質表達的方法物理組裝人源化抗體序列。具有通過本文公開的方法製備的嵌合可變鏈的人源化序列的最終形式可有多種形式。最通常地，嵌合抗體可通過構建編碼嵌合可變鏈的核酸序列並在合適類型的細胞中重組表達嵌合可變鏈而製備。最通常地，可將可變區連接至人類免疫球蛋白基因的恆定區，從而使得在表達時產生完整大小的免疫球蛋白。在許多情況下完整大小的IgG是優選的形式。在另一些情況下，IgG、IgM、IgA、IgD或IgE可能是優選的。本發明還包括在本說明書前文所述的抗體的功能性等價物。結合CD147並可被突變以降低對人的免疫原性的優選的非人類抗體或抗體片段為鼠類抗體或抗體片段。一種優選的鼠類抗體為Hab18抗體，該抗體描述於Xingetal.(2003)、Liuetal.(2003)、Lietal.，(2002)、Louetal.(2002)、Yangetal.(2001)、Bianetal.(2000)、Quietal.(1998)、Sui(1992)、Suietal.(1996)、Suietal.(1998)、Chen(1992)和Ji(1991)。Hab18抗體的重鏈和輕鏈可變區的序列均描述於公布號為2005/0176933(ChenZhinanetal.)的美國專利申請中。但是上述專利申請公布的胺基酸序列中有一處錯誤。由該申請中的DNA序列產生的正確的胺基酸序列示於圖1和SEQIDNO7和8。Hab18抗體的鼠類重鏈的可變區示於SEQIDNO7。Hab18抗體的鼠類輕鏈的可變區示於SEQIDNO47。Hab18抗體的CDR序列示於SEQIDNO1-6SEQIDNO1為鼠類重鏈CDR1；SEQIDNO2為鼠類重鏈CDR2；SEQIDNO3為鼠類重鏈CDR3；SEQIDNO4為鼠類輕鏈CDR1；SEQIDNO5為鼠類輕鏈CDR2；SEQIDNO6為鼠類輕鏈CDR3。本發明的抗體或抗體片段還可以通過改變重鏈和輕鏈的CDR1、CDR2、CDR3或框架區的基因序列而產生，所使用的方法例如寡核苷酸介導的定向誘變、盒式誘變、錯配PCR、DNA改組、大腸埃希氏菌(E.coli)增變株(Vaughanetal.，1998；Adeyetal.，1996)或如公布號為WO99/58661的PCT申請(DiatechPtyLtd)所述的例如來自Qβ噬菌體的RNA指導的RNA聚合酶。這些改變抗體一級序列的方法可使得抗體次級結構的親和力提高(Grametal.，1992；Boderetal.，2000；DaviesandRiechmann，1996；Thompsonetal.，1996；Shortetal.，2002；Furukawaetal.，2001)。通過改變抗體的一個或多個胺基酸殘基的相似策略，本發明所述的抗體序列可用於開發具有改進功能的抗CD147抗體。在一個優選實施方案中，本發明的非人類抗體或抗體片段包括重鏈，在所述重鏈中在下述Kabat殘基號的位置進行了一個或多個突變H3、H5、H18、H19、H23、H37、H40、H41、H42、H49、H73、H76、H77、H78、H82b、H83、H84、H88、H89、H93和H105。優選地，在下述Kabat殘基號的位置進行一個或多個突變H3、H5、H18、H23、H40、H42、H49、H77、H78、H82a、H84、H88和H89，更優選地，在下述Kabat殘基號的位置進行一個或多個突變H3、H5、H18、H23、H42、H77、H78、H88和H89。在一個優選實施方案中，非人類抗體或抗體片段包括具有SEQIDNO7所示序列的重鏈，所述重鏈中下述殘基的一個或多個已被突變3、5、18、19、23、37、40、41、42、49、76、79、80、81、87、89、90、94、95、99或109。在這些位置上優選的突變如下應當理解這些突變的一個或多個或全部的任意組合都涵蓋於本發明範圍之內。在另一個優選實施方案中，本發明的非人類抗體或抗體片段包括輕鏈，在所述輕鏈中在下述Kabat殘基號的位置進行了一個或多個突變L1、L3、L4、L7、L9、L10、L12、L13、L15、L17、L19、L21、L22、L42、L43、L49、L58、L60、L63、L67、L73、L77、L78、L79、L80、L83、L85、L87、L100、L104和L105。優選地，在下述Kabat殘基號的位置進行一個或多個突變L1、L7、L9、L10、L12、L13、L15、L43、L49、L60、L63、L67、L73、L77、L78、L80、L83和L87，更優選地，在下述Kabat殘基號的位置進行一個或多個突變L7、L9、L10、L12、L15、L49、L63、L67、L73、L77、L83和L87。在一個優選實施方案中，非人類抗體或抗體片段包括具有SEQIDNO47所示序列的輕鏈，所述輕鏈中下述殘基的一個或多個被突變1、3、4、7、9、10、12、13、15、17、19、21、22、42、43、49、58、60、63、67、73、77、78、79、80、83、85、87、100、104或105。在這些位置上優選的突變如下應當理解這些突變的一個或多個或全部的任意組合都涵蓋於本發明範圍之內。應當理解對重鏈的一個或多個突變的任意組合可以與對輕鏈的一個或多個突變的任意組合相組合。優選地，其有一個或多個胺基酸殘基突變的變異的抗體或抗體片段框架與天然受試非人類框架序列相比，有至少65％、更優選至少70％、更優選至少75％、再更優選至少80％、再更優選至少85％以及再更優選至少90％的序列同一性。在一個優選實施方案中，抗體為超人源化TMHab18抗體。Hab18抗體可按下述方法超人源化TM。首先，通過檢測重鏈和輕鏈的CDR的序列確定其正則結構，所述檢測根據公布號為US2003039649(Foote)的美國專利申請和公布號為WO04/006955(Foote)的PCT申請所教導的、由Tanetal.(2002)和Hwangetal.(2005b)和本申請進一步闡釋的方法。重鏈CDR1為1型正則結構，重鏈CDR2為類4型正則結構。由於在殘基52之後插入了三個另外的殘基，重鏈CDR2與4型正則結構非常相像。然而，該正則結構通常在55位置為酪氨酸，54位置為絲氨酸或賴氨酸殘基。Hab18中的55位置為組氨酸，54位置為天冬醯胺，這使得該CDR應被歸類為最接近4型正則結構的一種不規則正則結構(下文稱為「類4型」)。輕鏈CDR1為2型正則結構，輕鏈CDR2為1型正則結構，輕鏈CDR3為1型正則結構。對於重鏈，優選地用CDR1為1型正則結構、CDR2為4型正則結構的人類種系V區域外顯子(Hwangetal.，2005b)進行比對，如圖1所示將這些CDR與Hab18抗體的VH區域進行比對。這些種系序列(如SEQIDNO8至12所示)中的任一個都可為製備人源化重鏈提供框架區。然而具有這一系列正則結構的人類種系可變區的數量是有限的。由於3型正則結構與4型正則結構類似，所以還可用Hab18的CDR與CDR1為1型正則結構、CDR2為3型正則結構的人類種系V序列進行比對(圖2)。這些種系序列(如SEQIDNO23至46所示)中的任一個也都可為製備人源化重鏈提供框架區。在一個優選的實施方案中，選擇命名為3-72*01的人類種系可變區序列(如SEQIDNO11所示)作為合適的製備人源化重鏈的框架區。因此，在一個優選的實施方案中，本發明的抗體或抗體片段包括人源化Hab18抗體重鏈，所述重鏈含有根據SEQIDNO20所示的胺基酸序列。如圖3所示，優選地將Hab18的輕鏈可變區與3個CDR為相同正則結構的人類種系Vκ區域序列進行比對。這些序列(如SEQIDNO48至59所示)中的任一個都可作為使Hab18輕鏈人源化的框架序列，優選地，選擇命名為1-6*01(SEQIDNO48)或3-11*01(SEQIDNO57)的人類種系可變區序列作為製備人源化輕鏈的合適框架區。因此，在一個優選的實施方案中，本發明的抗體或抗體片段包括人源化Hab18抗體輕鏈，所述輕鏈含有根據SEQIDNO66或67所示的胺基酸序列。本發明的範圍並不限於包括改造的Hab18抗體或其片段的抗體和片段。所有特異性結合CD147並被改造以降低其對人的免疫原性的非人類抗體和片段均落入本發明的範圍。因此，與本文所述不同的、使用不同的CDR和/或不同框架區的抗體和抗體片段也包括在本發明中。然而，本文所述的有關Hab18抗體及其人源化變體的胺基酸和核酸序列的知識也可被用於開發其他結合CD147並由此直接或間接導致細胞死亡或減少轉移的抗體。一些研究考察了基於對抗體一級序列的認識在抗體序列的各個位置引入一個或多個胺基酸的改變，從而對其例如結合力和表達水平等的性質的影響(Yangetal.，1995；Raderetal.，1998；Vaughanetal.，1998)。因此，在另一個實施方案中，抗體或抗體片段使用了來源於具有1型正則結構的CDR1和4型正則結構的CDR2的人類抗體可變重鏈的框架序列。具有這類CDR正則結構型的合適的人類種系VH區域基因的實例示於圖1。或者，抗體或抗體片段使用來源於具有1型正則結構的CDR1和3型正則結構的CDR2的人類抗體可變重鏈的框架序列。具有這類CDR正則結構型的合適的人類種系VH區域基因的實例示於圖2。在另一個實施方案中，抗體或抗體片段使用了來源於人類抗體可變輕鏈的框架序列，所述人類抗體可變輕鏈具有2型正則結構的CDR1、1型正則結構的CDR2和1型正則結構的CDR3。具有這類正則結構型的合適的人類種系Vκ區域外顯子的實例示於圖3。本發明的綴合物包括與細胞毒劑連接的本文公開的抗體、片段及其類似物。優選的細胞毒劑為美登類化合物(maytansinoids)、紫杉烷類和CC-1065的類似物。綴合物可用體外方法製備。為將細胞毒劑連接到抗體上，可使用連接基團。合適的連接基團為本領域所熟知，包括二硫基、硫醚基、酸不穩定基團、光不穩定基團、肽酶不穩定基團和酯酶不穩定基團。優選的連接基團為二硫基和硫醚基。例如，可在抗體和細胞毒劑之間使用二硫化物交換反應或形成硫醚鍵而構建綴合物。美登類化合物和美登類類似物是優選的細胞毒劑。合適的美登類化合物的實例包括美登醇和美登醇類似物。合適的美登類化合物公開於美國專利No.4,424,219、4,256,746、4,294,757、4,307,016、4,313,946、4,315,929、4,331,598、4,361,650、4,362,663、4,364,866、4,450,254、4,322,348、4,371,533、6,333,410、5,475,092、5,585,499和5,846,545。紫杉烷類也是優選的細胞毒劑。適用於本發明的紫杉烷類公開於美國專利No.6,372,738和6,340,701。CC-1065及其類似物也是用於本發明的優選的細胞毒性藥物。CC-1065及其類似物公開於美國專利No.6,372,738、6,340,701、5,846,545、5,843,937和5,585,499。用於製備這類細胞毒性綴合物的一個受到關注的候選物是CC-1065，它是從澤耳鏈球菌(Streptomyceszelensis)的培養肉湯中分離的一種有效的抗腫瘤抗生素。CC-1065在體外的效力比例如多柔比星、甲氨蝶呤和長春新鹼等通常使用的抗癌藥物強大約1000倍(Bhuyanetal.，1982)。例如甲氨蝶呤、柔紅黴素、多柔比星、長春新鹼、長春鹼、美法侖、絲裂黴素C、苯丁酸氮芥和刺孢黴素等的細胞毒性藥物也適於製備本發明的綴合物，可通過例如血清清蛋白等中間載體分子將藥物分子連接到抗體分子上。對診斷應用而言，通常可用可檢測的部分標記本發明的抗體。可檢測部分可為任意一種能夠直接或間接產生可檢測信號的部分。例如，可檢測部分可為例如3H、14C、32P、35S或131I等的放射性同位素；例如異硫氰酸螢光素、羅丹明或螢光素等的螢光化合物或者化學發光化合物；或者為例如鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或辣根過氧化物酶等的酶類。也可將放射性同位素用以靶向腫瘤，並通過電離輻射破壞腫瘤，從而達到治療目的。具體而言，已廣泛使用131I和90Y來輔助抗體並增加抗體對被靶向癌細胞的破壞作用。F(ab)』2形式的鼠類Hab18抗體已經以131I綴合抗體的形式被給藥至動物和患者(見
背景技術：
部分)。可使用任何本領域已知的將抗體和可檢測部分綴合的方法，包括Hunteretal.，(1962)、Davidetal.，(1974)、PainandSurolia(1981)和Nygren(1982)中所述的方法。本發明的抗體可適用於任何已知的測定方法，例如競爭性結合測定、直接和間接夾心分析和免疫沉澱分析(Zola，1987)。本發明的抗體也可以用於體內成像，其中將被例如不透射線藥劑或放射性同位素等可檢測部分標記的抗體給予受試者，優選地給藥至血流中，然後分析被標記抗體的存在及存在部位。顯像技術在惡性腫瘤的分期和治療中很有用處。抗體可用任何在宿主中可檢測的部分進行標記，可用本領域已知的核磁共振、放射學或其他檢測手段進行檢測。出於治療應用的目的，將本發明的抗體或綴合物以藥物學上可接受的劑型給予受試者。它們可以以快速濃注或在一段時間內連續輸注的方式靜脈內給藥、可以以肌內、皮下、關節內、滑膜內、鞘內、口服、局部、或吸入的途徑給藥。抗體還可經瘤內、瘤周圍、病灶內或病灶周圍的途徑給予抗體，以發揮局部以及全身性療效。對於肝細胞癌的治療，抗體可通過肝動脈送遞。本領域技術人員可根據臨床情況確定已為其所熟知的合適的可藥用的載體、稀釋劑和賦形劑。合適的載體、稀釋劑和/或賦形劑的實例包括(1)Dulbecco磷酸緩衝鹽溶液，pH約7.4，含有約1mg/ml至25mg/ml人血清清蛋白，(2)0.9％鹽水(0.9％w/vNaCl)，以及(3)5％(w/v)葡萄糖。對於放射性標記的抗體，可加入聚乙烯吡咯烷酮以保護抗體不受輻射分解。本發明的方法可在體外、體內或離體進行。在其他療法中，本發明的抗體、抗體片段或綴合物可與一種或多種其他治療藥劑共同給藥。合適的治療藥劑包括但不限於細胞毒劑或細胞生長抑制劑。癌症治療藥劑是那些欲殺死癌細胞或抑制癌細胞生長但對宿主傷害很小的藥劑。因此，這類藥劑可以充分利用癌細胞與健康宿主細胞性質上的任何差異(例如新陳代謝、血管化作用或細胞表面抗原呈遞)。腫瘤形態學上的差異是介入的潛在位點例如，第二種療法可為例如抗VEGF抗體的一種抗體，它可有效地延緩實體瘤內部的血管化作用，由此減小其生長速度。其他治療藥劑包括但不限於例如鹽酸格拉司瓊等的輔劑、例如醋酸亮丙立德等的雄激素抑制劑、例如多柔比星等的抗生素、例如他莫昔芬等的抗雌激素劑、例如幹擾素α-2a等的抗代謝劑、例如紫杉醇等的細胞毒劑、例如ras法尼基轉移酶抑制劑等的酶抑制劑、例如阿地白介素等的免疫調節劑和例如鹽酸美法侖等的氮芥衍生物等等。當以含水劑型而不是凍幹形式存在時，抗體通常被配製為約0.1mg/ml至100mg/ml的濃度，當然在上述範圍之外的廣泛變化也是允許的。對疾病治療而言，抗體或綴合物的合適劑量取決於如上所述的待治療疾病的類型、嚴重程度和病程、給予抗體的目的是為了預防還是治療、之前療法的過程、病人臨床史和對抗體的反應以及主治醫生的決斷。抗體適於一次給予或者在一系列治療中分次給予患者。根據疾病的類型和嚴重程度，不論是例如一次或分次給藥或連續輸注，給予患者的初始候選劑量為約0.015至15mg抗體/kg患者體重。對於在幾天或更長時間內重複給藥的情況，根據情況可重複治療直至出現所需的對疾病症狀的抑制作用為止。然而也不排除其他可用的劑量方案。參考下列實施例描述本發明，這些實施例僅僅是說明性的，並不意在限制本發明。實施例實施例1鼠類抗體Hab18的人源化根據公布號為US2003/0039649(Foote)的美國專利申請和公布號為WO04/006955(Foote)的PCT申請教導的、並由Tanetal.(2002)和Hwangetal.(2005b)及本申請進一步闡釋的方法，通過確定重鏈和輕鏈的CDR的正則結構對鼠類Hab18抗體進行超人源化TM。首先，根據系列號為10/194975的美國專利申請和美國專利No.6,681,557教導的、並由Tanetal.(2002.J.Immunol.169(2)1119-25)和Hwangetal.(2005b)及本申請(見上文)進一步闡釋的方法，通過檢測重鏈和輕鏈CDR的序列測定它們的正則結構如下。對於下述序列，上一行顯示每一殘基的Kabat編號，下一行顯示每個殘基的單字母胺基酸代碼。重鏈CDR11型正則結構(SEQIDNO1)由於在殘基35之後沒有插入，CDR1具有1型正則結構。重鏈CDR2類4型正則結構(SEQIDNO2)由於在殘基52之後插入了三個另外的殘基，重鏈CDR2與4型正則結構非常相像。然而，該正則結構通常在55位置為酪氨酸，54位置為絲氨酸或賴氨酸。在Hab18中的55位置為組氨酸，54位置為天冬醯胺，這使得該CDR應被歸類為最接近4型正則結構的一種不規則正則結構(下文稱為「類4型」)。輕鏈CDR12型正則結構(SEQIDNO4)由於在殘基27至31之間沒有插入或缺失，CDR1具有2型正則結構。輕鏈CDR21型正則結構(SEQIDNO5)這不是一個特殊的序列，為1型正則結構。輕鏈CDR31型正則結構(SEQIDNO6)基於序列的長度以及90位的穀氨醯胺和95位的脯氨酸，這一序列與1型正則結構相一致。Hab18重鏈V區域的序列示於SEQIDNO7。CDR1為1型正則結構、CDR2為4型或類4型(CDR2中的殘基數目相同但其序列在54和/或55位置不具有典型的「標誌」殘基)正則結構的人類種系VH區域序列被選擇並示於SEQIDNO8至12。如圖1所示，將這些序列與Hab18抗體的VH區域(SEQIDNO7)進行比對。Hab18可變區重鏈的CDR3/JH區域序列示於SEQIDNO13。人類種系JH區域序列(即JH1-JH6)分別示於SEQIDNO14至19。SEQIDNO8至12所示任意種系序列與上述六個可能的任意JH序列(SEQIDNO14至19)相組合，均可以為製備人源化重鏈提供框架區域。將下述序列組合以設計超人源化TM抗體可變區重鏈可變域由來源於Hab18的重鏈KabatCDR序列(SEQIDNO1、SEQIDNO2和SEQIDNO3)和與種系序列3-73*01(SEQIDNO12)、3-49*01(SEQIDNO10)或3-72*01(SEQIDNO11)相同的框架區組成。基於鼠類Hab18CDR和3-72*01(SEQIDNO11)和JH2(SEQIDNO15)種系序列的人源化重鏈可變區的一個實例由SEQIDNO20所示序列構成。基於鼠類Hab18CDR和3-49*01(SEQIDNO10)和JH2(SEQIDNO15)種系序列的人源化重鏈可變區的另一個實例由SEQIDNO21所示序列構成。基於鼠類Hab18CDR和3-73*01(SEQIDNO12)和JH1(SEQIDNO14)種系序列的人源化重鏈可變區的又另一個實例由SEQIDNO22所示序列構成。由於具有這一系列正則結構型的人類種系可變區的數目是有限的，又由於3型正則結構與4型正則結構相類似(見圖2)，因此我們還將Hab18的CDR與具有1型正則結構CDR1和3型正則結構CDR2的人類種系V外顯子進行了比對。上述任意這些種系序列(SEQIDNO23至46所示)與上述六個可能的任意JH序列(SEQIDNO14至19所示)相組合，均可以為製備人源化重鏈提供合適的框架區域。將下述序列組合以設計超人源化TM抗體輕鏈可變區序列Kabat定義的CDR(SEQIDNO4、SEQIDNO5和SEQIDNO6)來源於鼠類Hab18抗體可變區輕鏈，框架來源於與鼠類Hab18輕鏈可變區具有相同正則結構(即在CDR1、CDR2和CDR3分別具有2型、1型和1型正則結構)的人類種系Vκ序列與五種可能的任意Jκ片段的任意組合。Hab18輕鏈的V區域序列示於圖3和SEQIDNO47。選定的與鼠類Hab18輕鏈可變區具有相同正則結構的人類種系Vκ序列也示於圖3以及SEQIDNO48至59。為選擇最優選的人類輕鏈序列來進行操作，我們如圖3所示將選定的人類種系Vκ序列與鼠類Hab18κ輕鏈可變區的CDR進行了比對。然後通過考慮在3個CDR中相同的胺基酸(即在Hab18CDR中的對應位置上相同)的總數或是在3個CDR的可能與抗原相接觸的區域(胺基酸位置的精確列表見圖3)中相同的胺基酸的總數來對它們進行排序。使用這些標準選出了兩個優選的實例，名為1-6*01(SEQIDNO48)和3-11*01(SEQIDNO57)。1-6*01(SEQIDNO48)序列與鼠類Hab18在3個CDR的可能涉及與抗原相接觸的區域具有最高的序列同一性。Hab18可變輕鏈CDR3/J區域的序列示於SEQIDNO60。人類種系Jκ區域(JK1-JK5)的序列分別示於SEQIDNO61至65。由於JK3(SEQIDNO63)在Kabat殘基96和97位與SEQIDNO60相同，因此選擇它作為優選的實施方案。通過將1-6*01(SEQIDNO48)序列與JK3序列(SEQIDNO63)以及鼠類Hab18CDR(如SEQIDNO4至6所示)相組合，產生了SEQIDNO66所代表的人源化Vκ(輕)鏈。由於並不知道Hab18抗體與其靶標抗原結合的精確界面，我們還考慮了與鼠類Hab18在3個CDR中(考慮所有的CDR殘基)具有最高序列同一性的3-11*01序列(SEQIDNO57)。通過將其與JK3序列(SEQIDNO63)以及鼠類Hab18CDR(如SEQIDNO4至6所示)相組合，產生了SEQIDNO67所代表的人源化Vκ(輕)鏈。實施例2人源化Hab18scFv片段的結合親和力為評價超人源化TM過程在改變結合親和力方面成功與否，通過基因合成方法(Stemmeretal.，1995.Gene1649-53)構建了下述超人源化TM單鏈可變區片段scFv-1(SEQIDNO68)將SEQIDNO20所示的人源化重鏈序列與SEQIDNO66所示的人源化輕鏈序列相結合。scFv-2(SEQIDNO69)將SEQIDNO20所示的人源化重鏈序列與SEQIDNO67所示的人源化輕鏈序列相結合。組裝了一個由超人源化TM重鏈、超人源化TM輕鏈以及連接它們的一個以(G4S3)基序為特徵的15個殘基的連接區域組成的盒(Hustonetal.，1988)，所述組裝在重鏈的起點、連接區域中和輕鏈的終點分別使用了NcoI、BamHI和NotI限制位點(見圖4)。將完整的scFv構建體插入至一個基於pUC18的細菌表達載體中，該載體以N端的信號肽(在周質中裂解)和C端的六組氨酸標籤為特徵，使得產物可在Ni2+-螯合樹脂上純化。在其C端還包括由DYKDDDDK序列組成的FLAG標籤(Slootstraetal.，1997)(見圖5)，以便於使用抗FLAG表位的市售抗體進行檢測或純化。將表達構建體轉化至大腸埃希氏菌HB2151菌株中並驗證了其DNA序列。在添加0.05％葡萄糖的2xYT培養基中在30℃進行蛋白質表達，在對數生長晚期加入0.5mMIPTG誘導表達並過夜使表達增加。通過離心從培養基中分離細胞後，於冰上在添加了1mMEDTA的、30mMTris(pH8)緩衝的20％蔗糖溶液中重懸和培養細胞以進行滲透壓休克而釋放周質部分，然後通過離心分離滲透部分。蛋白質印跡分析確認了單體scFv蛋白質的存在。每一構建體在周質部分中觀察到的scFv的表達量大致相同。根據廠商說明書，使用Ni-NTA超流動(superflow)微球(Qiagen，Doncaster)進一步純化蛋白質，得到的蛋白質經SDSPAGE測定純度＞90％。通過ELISA測定了Hab18與其靶標——細胞表面分子CD147的結合將溶於0.1M碳酸鈉(pH9.5)的重組人類CD147(由AmProx，Carlsbad，CA提供，在大腸埃希氏菌中表達)按100ng/孔的量固定於平板上，4℃過夜。然後洗滌各孔並用4％脫脂乳在室溫培養2小時進行封閉，再用添加0.05％Tween-20(Sigma，StLouis)的磷酸鹽緩衝鹽溶液(pH7.4，PBS)洗滌，然後再與在PBS中系列稀釋的超人源化TMscFv的粗蛋白質周質部分一起在室溫振蕩培養2小時，然後再用添加0.05％Tween-20的PBS洗滌各孔。根據廠商的說明書，將抗FLAG-辣根過氧化物酶綴合物(Sigma，StLouisMO)加至孔中在室溫振蕩培養一小時以檢測結合。用SureBlue過氧化物酶底物(KPL，Gaithersburg)顯示結合。15分鐘後加入0.1MHCl終止酶反應並通過在450nm處的分光吸收度測量過氧化物酶產物。用以Fab片段形式重組表達的親代小鼠抗體作為陽性對照，將平行二次測量的平均值與陽性對照相比較(見圖5)。小鼠Fab片段的表達和周質部分從大腸埃希氏菌中的提取使用的條件與scFv構建體的相似。發現構建體scFv-1(SEQIDNO68)似乎保留了小鼠Fab片段大約30％-50％的結合親和力由於scFv片段通常比對應的Fab片段的親合力要低，所以這種人源化scFv(SEQIDNO68)比鼠類Fab的結合力稍低的原因有一部分應歸於這一因素，並且/或者由於人源化序列本身就比鼠類序列的親合力稍低。存在相同重鏈的scFv-1(SEQIDNO68)和scFv-2(SEQIDNO69)在結合力上的差異說明人源化輕鏈似乎也是很重要的。本領域技術人員應當理解，誠如本發明的說明書所廣泛描述的那樣，可在不背離本發明精神或範圍的條件下可對本發明的具體實施方案作出各種變化和/或改變。因此，上述的實施方案從任何角度來看都應被認為是說明性的而非限制性的。參考文獻Adey，N.B.etal.，(1996).In″PhageDisplayofPeptidesandProteins″，Chapter16，PP.277-291，Eds.Kay，B.K.etal.，AcademicPress.Al-LazikaniB.，Lesk，A.M.，Chothia，C.(1997).Standardconformationsforthecanonicalstructuresofimmunoglobulins.J.Mol.Biol.，273(4)927-48.Alsowmely，A.M.&Hodgson，H.J.F.(2002).Non-surgicaltreatmentofhepatocellularcarcinoma.AlimentPharmacol.Ther.，161-15.Bergers，G.，Brekken，R.，McMahon，G.，Vu，TH.，Itoh，T.，Tamaki，K.，Tanzawa，K.，Thorpe，P.，Itohara，S.，Werb，Z.&Hanahan，D.(2000).Matrixmetalloproteinase-9triggerstheangiogenicswitchduringcarcinogenesis.Nat.Cell.Biol.，2737-744.Bernhard，M.I.，Foon，K.A.，Oeltmann，T.N.，Key，M.E.，Hwang，K.M.，Clarke，G.C.，Christensen，W.L.，Hoyer，L.C.，Hanna，M.G.&Oldham，R.K.(1983).Guineapigline10hepatocarcinomamodelcharacterizationofmonoclonalantibodyandinvivoeffectofunconjugatedantibodyandantibodyconjugatedtodiphtheriatoxinAchain.CancerRes.，434420-4428.Bhuyan，B.K.，Newell，K.A.，Crampton，S.L.&VonHoff，D.D.(1982).CC-1065(NSC-218223)，amostpotentantitumoragentKineticsofinhibitionofgrowth，DNAsynthesisandcellsurvival.CancerRes.，423532-3537.Bian，H.J.，Chen，Z-N.&Deng，J.L.(2000).Directtechnetium-99mlabelingofanti-hepatomamonoclonalantibodyfragmentaradioimmunoconjugateforhepatocellularcarcinomaimaging.WorldJGastroenterol.，6(3)348-352.Biswas，C.，Zhang，Y.，DeCastro，R.，Guo，H.，Nakamura，T.，Kataoka，H.&Nabeshima，K.(1995).Thehumantumorcell-derivedcollagenasestimulatoryfactor(renamedEMMPRIN)isamemberoftheimmunoglobulinsuperfamily.CancerRrs.，55434-439Boder，E.T.，Midelfort，K.S.&Wittrup，K.D.(2000).Directedevolutionofantibodyfragmentswithmonovalentfemtomolarantigen-bindingaffinity.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，9710701-10705.ChenZ-N.(1992).Significanceandapplicationofanti-malignanthepatomaMAbHAb18inradioimmunaldiagnosisofhumanhepatocellularcarcinoma.ZhonghuaZhongLiuZaZhi.，14(1)9-12.Chen，Z-N.，Yang，Z.，Mi，L.，Jiang，J.L.，andGuo，X.N.(1999).J.Cell.Mol.Immunol.，1534Chothia，C.&Lesk，A.M.(1987).Canonicalstructuretypesforthehypervariableregionsofimmunoglobulins.J.Mol.Biol.，96901-917；Chothia，C.，Lesk，A.M.，Gherardi，E.，Tomlinson，I.M.，Walter，G.，Marks，J.D.，Llewelyn，M.B.&Winter，G.(1992).StructuralrepertoireofthehumanVHsegments.J.Mol.Biol.，227799-817.David，G.S.&Reisfeld，R.A.(1974).Proteiniodinationwithsolidstatelactoperoxidase.Biochemistry，131014.Davies，J.&Riechmann，L.(1996).AffiinityimprovementofsingleantibodyVHdomainsresiduesinallthreehypervariableregionsaffectantigenbinding.Immunotechnology，2(3)169-179.Deeg，H.J.，Blazar，B.R.，Bolwell，B.J.，Long，G.D.，Schuening，F.，Cunningham，J.，Rifkin，R.M.，Abhyankar，S.，Briggs，A.D.，Burt，R.，Lipani，J.，Roskos，L.K.，White，J.M.，Havrilla，N.，Schwab，G.&Heslop，H.E.(2001).Treatmentofsteroid-refractoryacutegraft-versus-hostdiseasewithanti-CD147monoclonalantibodyABX-CBL.Blood，982052-2058.Ellis，S.M.，Nabeshima，K.&Biswas，C.(1989).Monoclonalantibodypreparationandpurificationofatumorcellcollagenase-stimulatoryfactor.CancerRes.，493385-3391.Fang，J.，Shing，Y.，Wiederschain，D.，Yan，L.，Butterfield，C.，Jackson，G.，Harper，J.，Tamvakopoulos，G.andMoses.M.A.(2000).Matrixmetalloproteinase-2isrequiredfortheswitchtotheangiogenicphenotypeinatumormodel.PNAS97(8)3884-3889.Fuhrer，J.P.，Xie，H.，Murphy，M.I.Jr.，Ye，J.N.&Yao，Z.(1991).Characterizationofamembrane-associatedglycoprotein(gp43)onhumanhepatocellularcarcinomasbyamonoclonalantibody.CancerRes.，512158-2163.Furukawa，K.，Shirai，H.，Azuma，T.，Nakamura，H.(2001).ARoleoftheThirdComplementarity-determiningRegionintheAffinityMaturationofanAntibody.J.Biol.Chem，27627622-27628.Gilles，C.，Polette，M.，Piette，J.，Birembaut，P.&Foidart，J.M.(1994).Epithelial-to-mesenchymaltransitioninHPV-33-transfectedcervicalkeratinocytesisassociatedwithincreasedinvasivenessandexpressionofgelatinaseA.Int.J.Cancer，59661-666.Gilles，C.，Polette，M.，Piette，J.，Munaut，C.，Thompson，E.W.&Birembaut，P.(1996).HighlevelofMT-MMPexpressionisassociatedwithinvasivenessofcervicalcancercells.Int.J.Cancer，65209-213.Gram，H.，Marconi，L.A.，Barbas，C.F.I.，Collet，T.A.，Lerner，R.A.，&Kang，A.S.(1992).Invitroselectionandaffinitymaturationofantibodiesfromanaivecombinatorialimmunoglobulinlibrary.Proc.Natl.Acad.Sci.USA，893576-3580.Guo，H.，Zucker，S.，Gordon，M.K.，Toole，B.P.&Biswas，C.(1997).StimulationofMatrixMetalloproteinaseProductionbyRecombinantExtracellularMatrixMetalloproteinaseInducerfromTransfectedChineseHamsterOvaryCells.J.Biol.Chem.，27224-27Henikoff，S.&Henikoff，J.G.(1992).Aminoacidsubstitutionmatricesfromproteinblocks.Proc.Natl.Acad.Sci.USA，8910915-10919.Henikoff，S.&Henikoff，J.G.(1996).Usingsubstitutionprobabilitiestoimproveposition-specificscoringmatrices.CABIOS，12135-143.J.G.Henikoff，J.G.&Henikoff，S.(1996).BlocksDatabaseanditsApplications.Meth.Enzymolog，2688-105.Hunter&Greenwood.(1962).Nature，144945.Huston，J.S.，Levinson，D.，Mudgett-Hunter，M.，Tai，M.，Novotny，J.，Margolies，M.N.，Ridge，R.J，Bruccoleri，R.E.，Haber，E.，Crea，R.andOPPermann，H.(1988).ProteinEngineeringofAntibodyBindingSitesRecoveryofSpecificActivityinanAnti-DigoxinSingle-ChainFvAnalogueProducedinEscherichiacoli.PNAS，855879-5883.Hwang，K.M.，Foon，K.A.，Cheung，P.H.，Pearson，J.W.&Oldham，P.K.(1984).SelectiveantitumoreffectonL10hepatocarcmomacellsofapotentimmunoconjugatecomposedoftheAchainofabrinandamonoclonalantibodytoahepatoma-assaciatedantigen.CancerRes.，444578-4586.Hwang，WYK，&Foote，J.(2005a)Immunogenicityofengineeredantibodies.Methods363-10.Hwang，W.Y.，Almagro，J.C.，Buss，T.N.，Tan，P.&Foote，J.(2005b).UseofhumangermlinegenesinaCDRhomology-basedapproachtoantibodyhumanization.Methods，3635-42.Javadpour，N.&Guirguis，R.(1992).Tumorcollagenase-stimulatingfactorandtumorautocrinemotilityfactorastumormarkersinbladdercancer-anupdate.Eur.Urol.，21Suppl.11-4Ji，Y.(1991).Internalizationofmonoclonalantibodiesagainsthumanhepatomainthetargetcells.ZhonghuaYiXueZaZhi.，71(7)369-72，26.Jones，P.T.，Dear，P.H.，Foote，J.，Neuberger，M.S.&Winter，G.(1986).Replacingthecomplementaritydeterminingregionsinahumanantibodywiththosefromamouse.Nature，321522-525.Kabat，E.A.，Wu，T.T.，Reid-Miller，M.，Perry，H.M.，Gottesmann，K.S.&Foeller，C.(1991).SequencesofProteinsofImmunologicalInterest.FifthEdition，BethesdaU.S.Dept.ofHealthandHumanServices，PHS，NIH.Kasinrerk，W.，Fiebiger，E.，Stefanova，I.，Baumruker，T.，Knapp，W.&Stockinger.，H.(1992).HumanleukocyteactivationantigenM6，amemberoftheIgsuperfamily，isthespecieshomologueofratOX-47，mousebasigin，andchickenHT7molecule.J.Immunol.，149847-854.Kataoka，H.，DeCastro，R.，Zucker，S.&Biswas，C.(1993).Tumorcell-derivedcollagenase-stimulatoryfactorincreasesexpressionofinterstitialcollagenase，stromelysin，and72-kDagelatinase.CancerRes.，533154-3158.Klein，C.A.，Seidl，S.，Petat-Dutter，K，Offner，S.，Geigl，J.B.，Schmidt-Kittler，O.，Wendler，N.，Passlick，B.，Huber，R.M.，Schlimok，G.，Baeuerle，P.A.&Riethmüller，G.(2002).Combinedtranscriptomeandgenomeanalysisofsinglemicrometastaticcells.NatureBiotechnology，20(4)387-392.Kuniyasu，H.，Troncoso，P.，Johnston，D.，Bucana，C.D.，Tahara，E.，Fidler，I.J.&Pettaway，C.A.(2000).RelativeExpressionofTypeIVCollagenase，E-cadherin，andVascularEndothelialGrowthFactor/VascularPermeabilityFactorinProstatectomySpecimensDistinguishesOrgan-confinedfromPathologicallyAdvancedProstateCancers.Clin.CancerRes.，62295-2308.LauW.Y.(2002).ClinicalReviewManagementofhepatocellularcarcinoma.J.R.Coll.Surg.Edinb，47389-399.Li，Y.，Cai，M.，Wang，Z.，Liu，X.&Liang，Z.(2002).Preparationandinvitrokillingeffectofadriamycin-loadedimmunonanosphereagainsthepatomaledbyF(ab′)2Fragmentofmonoclonalantibodies.HuaXiYiKeDaXueXueBao.，33(1)8-11.Lim，M.，Martinez，T.，Jablons，D.，Cameron，R.，Guo，H.，Toole，B.，Li，J.D.&Basbaum，C.(1998).Tumor-DerivedEMMPRIN(ExtracellularMatrixMetalloproteinaseInducer)StimulatesCollagenaseTranscriptionThroughMAPKp38.FEBSLett，44188-92.LiuX.，Shang，B.&Liu，X.(2001).InhibitionofthegrowthofhepatomaandhepaticmetastasisbypingyangmycinconjugatedwithFab』fragmentofmonoclonalantibody.ZhonghuaYiXueZaZhi，81201-201.Liu，X.，Wang，X.，Wei，D.，Cai，M.&Li，G.(2003).Internalizationofantibody-targetedimmunonanoparticlesintohumanhepatomacellsanditsreversaleffectonMDR.SichuanDaXueXueBaoYiXueBan.，34(3)431-4.Lokeshwar，B.L.，Selzer，M.G.，BlockN.L.&Gunja-Smith，Z.(1993).Secretionofmatrixmetalloproteinasesandtheirinhibitors(tissueinhibitorofmetalloproteinases)byhumanprostateinexplantculturesreducedtissueinhibitorofmetalloproteinasesecretionbymalignanttissues.CancerRes.，534493-4498.Lou，C.，Chen，Z-N.，Bian，H.J.，Li，J.&Zhou，S.B.(2002)Pharmacokineticsofradio-immunotherapeuticagentofdirectlabelingmAb188Re-HAb18.WorldJGastroenterol.，8(1)69-73.MacCallum，R.M.，Martin，A.C.R.&Thornton，J.M.(1996).Antibody-antigeninteractionscontactanalysisandbindingsitetopography.J.Mol.Biol.，262，732-745.Muraoka，K.，Nabeshima，K.，Murayama，T.，Biswas，C.&Koono，M.(1993).Enhancedexpressionofatumor-cell-derivedcollagenase-stimulatoryfactorinurothelialcarcinomaitsusefulnessasatumormarkerforbladdercancers.Int.J.Cancer，5519-26.Nelson，A.R.，Fingleton，B.，Rothenberg，M.L.&Matrisian，L.M.(2000).Matrixmetalloproteinasesbiologicactivityandclinicalimplications.J.Clin.Oncol.，181135-1139.Nygren，H.(1982)..ConjugationofhorseradishperoxidasetoFabfragmentswithdifferenthomobifunctionalandheterobifunctionalcross-linkingreagents.Acomparativestudy.J.Histochem.Cytochem.，30407-412.Padlan，E.A.(1991).Apossibleprocedureforreducingtheimmunogenicityofantibodydomainswhilepreservingtheirligand-bindingproperties.Mol.Immunol.，28489-498.Padlan，E.A.，Abergel，C.&Tipper，J.P.(1995).Identificationofspecificity-determiningresiduesinantibodies.FASEBJ.，9133-139.Pain，D.&Surolia，A.(1981).PreparationofproteinA-peroxidasemonoconjugateusingaheterobifunctionalreagent，anditsuseinenzymeimmunoassays.J.Immunol.Meth.，40219-220.Pearson，W.R.&Lipman，D.J.(1988).Improvedtoolsforbiologicalsequencecomparison.Proc.Natl.Acad.Sci.USA，852444-2448.Polette，M.，Gilles，C.，Marchand，V.，Lorenzato，M.，Toole，B.，Tournier，J-M.，Zucker，S.&Birembaut，P.(1997).TumorCollagenaseStimulatoryFactor(TCSF)ExpressionandLocalizationinHumanLungandBreastCancers.J.Histochem.Cytochem.，45703-710.Powell，W.C.，Knox，J.D.，Navre，M.，Grogan，T.M.，Kittelson，J.，Nagle，R.B.&Bowden，G.T.(1993).ExpressionofthemetalloproteinasematrilysininDU-145cellsincreasestheirinvasivepotentialinseverecombinedimmunodeficientmice.CancerRes.，53417-422.Qiu，K.，Wang，B.C.，Chen，Z-N.，Fang，P.，Liu，CG.，Wan，W.X.&Liu，Y.F.(1998).99mTc-labeledHAb18McAbFabfragmentforradioimmunoimaginginnudemicebearinghumanhepatocellularcarcinoma.WorldJGastroenterol.，4(2)117-120.Rader，C.，Cheresh，D.A.&Barbas，C.F.，III.(1998).AphagedisplayapproachforrapidantibodyhumanizationdesignedcombinatorialVgenelibraries.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，958910-8915.Riechmann，L.，Clark，M.，Waldmann，H.&Winter，G.(1988).Reshapinghumanantibodiesfortherapy.Nature，332323-327.Rutgeerts，P.，D′Haens，G.，Targan，S.(1999).Efficacyandsafetyofretreatmentwithanti-tumornecrosisfactorantibody(INFLIXIMAB)tomaintainremissioninCrohn′sdisease.Gastroenterology，117，761-769.Sameshima，T.，Nabeshima，K.，Toole，B.P.，Yokogami，K.，Okada，Y.，Goya，T.，Koono，M.&Wakisaka，S.(2000).Gliomacellextracellularmatrixmetalloproteinaseinducer(EMMPRIN)(CD147)stimulatesproductionofmembrane-typematrixmetalloproteinasesandactivatedgelatinaseAinco-cultureswithbrain-derivedfibroblasts.CancerLett.，157177-184.Sameshima，T.，Nabeshima，K.，Toole，B.P.，Yokogami，K.，Okada，Y.，Goya，T.，Koono，M.，&Wakisaka，S.(2000a).Expressionofemmprin(CD147)，acellsurfaceinducerofmatrixmetalloproteinases，innormalhumanbrainandgliomas.Int.J.Cancer，8821-27.Sehgal，G.，Hua，J.，Bemhard，E.J.，Sehgal.I.，Thompson，T.C.&Muschel，R.M.(1998).Requirementformatrixmetalloproteinase-9(gelatinaseB)expressioninmetastasisbymurineprostatecarcinoma.Am.J.Pathol.，152591-596.Short，M.K.，Krykbaev，R.A.，Jeffrey，P.D.&Margolies，M.N.(2002).ComplementaryCombiningSiteContactResidueMutationsoftheAnti-digoxinFab26-10PermitHighAffinityWild-typeBinding.J.BiolChem.，277(19)16365-16370.Slootstra，J.W.，Kuperus.D.，Pluckthun，A.andMeloen，R.H.(1997).Identificationofnewtagsequenceswithdifferentialandselectiverecognitionpropertiesfortheanti-FLAGmonoclonalantibodiesM1，M2andM5.MolDivers.2(3)156-64.Stein，R.，Wang，Z.F.，Sharkey，R.M.，Klein，K.M.&Golderberg，D.M.(1991).Anewmurinemonoclonalantibodyagainsthumanhepatoma.Hybridoma，10255-267.Stemmer，W.P.C.，Crameri，A.，Ha，K.D.，Brennan，T.M.&Heyneker，H.L.(1995).Single-stepassemblyofageneandentireplasmidfromlargenumbersofoligodeoxyribonucleotides.Gene，164(1)49-53.Sui，Y.(1992).Targetingtherapywithadriamycin-monoclonalantibody(HAb18)conjugateinnudemicewithhumanhepatocellularcarcinomaxenografts.ZhonghuaYiXueZaZhi，72(7)397-400，445.Sui，Y.，Sun，Z.&ChenZ-N.(1996).Theinternalizationofimmunotargetingdrugsforhepatocellarcarcinomaanditssignificance.ZhonghuaYiXueZaZhi.，76(11)845-7.Sui，Y.，He，F.&ChenZ-N.(1998).Radioimmunoimagingofhepatocellularcarcinomawith131IlabeledantihepatomamonoclonalantibodyFabfragment.ZhonghuaYiXueZaZhi.，78(7)537-9.Tan，P.，Mitchell，D.A.，Buss，T.N.，Holmes，M.A.，Anasetti，C.&Foote，J.(2002).「Superhumanized″AntibodiesReductionofImmunogenicPotentialbyComplementarity-DeterminingRegionGraftingwithHumanGermlineSequencesApplicationtoanAnti-CD28.J.Inmunol.，1691119-1125.Thompson，J.，Pope，T.，Tung，J.S.，etal.(1996).Affinitymaturationofahigh-affinityhumanmonoclonalantibodyagainstthethirdhypervariableloopofhumanimmunodeficiencyvirususeofphagedisplaytoimproveaffinityandbroadenstrainreactivity.J.Mol.Biol.，25677-88.Tomlinson，I.M.，Cox，J.P.L.，Gherardi，E.，Lesk，A.M.&Chothia，C.(1995).ThestructuralrepertoireofthehumanVkdomain.EMBOJ.，144628-4638.Vaughan，T.J.，Osbourn，J.K.&Tempest，P.R.(1998).Humanantibodiesbydesign.NatureBiotechnology．16535-539.Venook，A.P.(2000).Hepatocellularcarcinoma.Curr.Treat.OptionsOncol.，1407-15.Wang，Q-c.，Ying，W-b.，Xie，H.，Zhang，Z-c.，Ya1g，Z-h.&Ling，L-q.(1991).Trichosanthin-monoclonalantibodyconjugatespecificallycytotoxictohumanhepatomacellsinvitro.CancerRes.，513353-3355Wood，M.，Fudge，K.，Mohler，J.L.，Frost，A.R.，Garcia，F.，Wang，M.&Stearns，M.E.(1997).Insituhybridizationstudiesofmetalloproteinases2and9andTIMP-1andTIMP-2expressioninhumanprostatecancer.Clin.Exp.Metastasis，15246-258.Wu，T.T.&Kabat，E.A.(1970).AnanalysisofthesequencesofthevariableregionsofBenceJonesproteinsandmyelomalightchainsandtheirimplicationsforantibodycomplementarity.J.Exp.Med.，132211-250.XingJL.，Wang，YQ.，Yang，XM.，Song，F.&Chen，Z-N.(2003).CloningandexpressionofFabgeneofmAbHAb18againsthumanhepatocellularcarcinoma.XiBaoYuFenZiMianYiXueZaZhi，19(6)570-3.Yang，W.P.，Green，K.，Pinz-Sweeney，S.，Briones，A.T.，Burton，D.R.&Barbas，C.F.I.(1995).CDRwalkingmutagenesisfortheaffinitymaturationofapotenthumananti-HIV-1antibodyintothepicomolarrange.J.Mol.Biol.，254392-403.Yang，L.J.，Sui，Y.F.&Chen，Z-N.(2001).PreparationandactivityofconjugateofmonoclonalantibodyHab18againsthepatomaF(ab』)(2)frfragmentandstaphylococcalenterotoxinA.WorldJ.Gastroenterol.，7(2)216-221.Zeng，Z-C.，Tang，Z-Y.，Liu，K-D.，Lu，J-Z.，Xie，H.&Yao，Z.(1998).Improvedlong-termsurvivalforunresectablehepatocellularcarcinoma(HCC)withacombinationofsurgeryandintrahepaticarterialinfusionof131I-anti-HCCmAb.PhaseI/IIclinicaltrials.J.CancerRes.Clin.Oncol.，124275-280.Zola(1987).MonoclonalAntibodiesAManualofTechniques，pp.147-158，CRCPress，Inc.Zucker，S.，Hymowitz，M.，Rollo，E.E.，Mann，R.，Conner，C.E.，Cao，J.，Foda，H.D.，Tompkins，D.C.&Toole.B.P.(2001).TumorigenicPotentialofExtracellularMatrixMetalloproteinaseInducer.Am.J.Pathol.，1581921-1928.序列表EvoGenixLtdEvoGenix，Inc.特異性針對肝細胞癌和其他癌的抗體及其用途50380570PatentInversion3.315PRT小鼠1AspAlaTrpMetAsp15219PRT小鼠2GluIleArgSerLysAlaAsnAsnHisAlaProTyrTyrThrGluSer151015ValLysGly36PRT小鼠3AspSerThrAlaThrHis15411PRT小鼠4LysAlaSerGlnSerValIleAsnAspValAla151057PRT小鼠5TyrAlaSerAsnArgAsnThr1569PRT小鼠6GlnGlnAspTyrSerProProPheThr157117PRT小鼠7GluValLysLeuGluGluSerGlyGlyGlyLeuValGlnProGlyGly151015SerMetLysLeuSerCysValAlaSerGlyPheThrPheSerAspAla202530TrpMetAspTrpValArgGlnSerProGluLysGlyLeuGluTrpVal354045AlaGluIleArgSerLysAlaAsnAsnHisAlaProTyrTyrThrGlu505560SerValLysGlyArgPheThrIleSerArgAspAspSerLysSerIle65707580IleTyrLeuGlnMetAsnAsnLeuArgAlaGluAspThrGlyIleTyr859095TyrCysThrArgAspSerThrAlaThrHisTrpGlyGlnGlyThrLeu100105110ValThrValSerSer1158100PRT人8GluValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyLeuValLysProGlyGly151015SerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSerGlyPheThrPheSerAsnAla202530TrpMetSerTrpValArgGlnAlaProGlyLysGlyLeuGluTrpVal354045GlyArgIleLysSerLysThrAspGlyGlyThrThrAspTyrAlaAla505560ProValLysGlyArgPheThrIleSerArgAspAspSerLysAsnThr65707580LeuTyrLeuGlnMetAsnSerLeuLysThrGluAspThrAlaValTyr859095TyrCysThrThr1009100PRT人9GluValGlnLeuValGluSerAlaGlyAlaLeuValGlnProGlyGly151015SerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSerGlyPheThrCysSerAsnAla202530TrpMetSerTrpValArgGlnAlaProGlyLysGlyLeuGluTrpVal354045GlyArgIleLysSerLysAlaAsnGlyGlyThrThrAspTyrAlaAla505560ProValLysGlyArgPheThrIleSerArgValAspSerLysAsnThr65707580LeuTyrLeuGlnMetAsnSerLeuLysThrGluAspThrAlaValTyr859095TyrCysThrThr10010100PRT人10GluValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyLeuValGlnProGlyArg151015SerLeuArgLeuSerCysThrAlaSerGlyPheThrPheGlyAspTyr202530AlaMetSerTrpPheArgGlnAlaProGlyLysGlyLeuGluTrpVal354045GlyPheIleArgSerLysAlaTyrGlyGlyThrThrGluTyrThrAla505560SerValLysGlyArgPheThrIleSerArgAspGlySerLysSerIle65707580AlaTyrLeuGlnMetAsnSerLeuLysThrGluAspThrAlaValTyr859095TyrCysThrArg10011100PRT人11GluValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyLeuValGlnProGlyGly151015SerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSerGlyPheThrPheSerAspHis202530TyrMetAspTrpValArgGlnAlaProGlyLysGlyLeuGluTrpVal354045GlyArgThrArgAsnLysAlaAsnSerTyrThrThrGluTyrAlaAla505560SerValLysGlyArgPheThrIleSerArgAspAspSerLysAsnSer65707580LeuTyrLeuGlnMetAsnSerLeuLysThrGluAspThrAlaValTyr859095TyrCysAlaArg10012100PRT人12GluValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyLeuValGlnProGlyGly151015SerLeuLysLeuSerCysAlaAlaSerGlyPheThrPheSerGlySer202530AlaMetHisTrpValArgGlnAlaSerGlyLysGlyLeuGluTrpVal354045GlyArgIleArgSerLysAlaAsnSerTyrAlaThrAlaTyrAlaAla505560SerValLysGlyArgPheThrIleSerArgAspAspSerLysAsnThr65707580AlaTyrLeuGlnMetAsnSerLeuLysThrGluAspThrAlaValTyr859095TyrCysThrArg1001317PRT小鼠13AspSerThrAlaThrHisTrpGlyGlnGlyThrLeuValThrValSer151015Ser1417PRT人14AlaGluTyrPheGlyHisTrpGlyGlnGlyThrLeuValThrValSer151015Ser1517PRT人15TyrTrpTyrPheAspLeuTrpGlyArgGlyThrLeuValThrValSer151015Ser1615PRT人16AlaMetAspValTrpGlyGlnGlyThrMetValThrValSerSer1510151715PRT人17TyrPheAspTyrTrpGlyGlnGlyThrLeuValThrValSerSer1510151816PRT人18AsnTrpPheAspSerTrpGlyGlnGlyThrLeuValThrValSerSer1510151920PRT人19TyrTyrTyrTyrTyrGlnMetAspValTrpGlyGlnGlyThrThrVal151015ThrValSerSer2020117PRT人源化重鏈20GluValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyLeuValGlnProGlyGly151015SerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSerGlyPheThrPheSerAspAla202530TrpMetAspTrpValArgGlnAlaProGlyLysGlyLeuGluTrpVal354045GlyGluIleArgSerLysAlaAsnAsnHisAlaProTyrTyrThrGlu505560SerValLysGlyArgPheThrIleSerArgAspAspSerLysAsnSer65707580LeuTyrLeuGlnMetAsnSerLeuLysThrGluAspThrAlaValTyr859095TyrCysAlaArgAspSerThrAlaThrHisTrpGlyArgGlyThrLeu100105110ValThrValSerSer11521117PRT人源化重鏈21GluValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyLeuValGlnProGlyArg151015SerLeuArgLeuSerCysThrAlaSerGlyPheThrPheGlyAspAla202530TrpMetAspTrpPheArgGlnAlaProGlyLysGlyLeuGluTrpVal354045GlyGluIleArgSerLysAlaAsnAsnHisAlaProTyrTyrThrGlu505560SerValLysGlyArgPheThrIleSerArgAspGlySerLysSerIle65707580AlaTyrLeuGlnMetAsnSerLeuLysThrGluAspThrAlaValTyr859095TyrCysThrArgAspSerThrAlaThrHisTrpGlyArgGlyThrLeu100105110ValThrValSerSer11522117PRT人源化重鏈22GluValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyLeuValGlnProGlyGly151015SerLeuLysLeuSerCysAlaAlaSerGlyPheThrPheSerAspAla202530TrpMetAspTrpValArgGlnAlaSerGlyLysGlyLeuGluTrpVal354045GlyGluIleArgSerLysAlaAsnAsnHisAlaProTyrTyrThrGlu505560SerValLysGlyArgPheThrIleSerArgAspAspSerLysAsnThr65707580AlaTyrLeuGlnMetAsnSerLeuLysThrGluAspThrAlaValTyr859095TyrCysThrArgAspSerThrAlaThrHisTrpGlyGlnGlyThrLeu100105110ValThrValSerSer1152398PRT人23GlnValGlnLeuValGlnSerGlyAlaGluValLysLysProGlyAla151015SerValLysValSerCysLysAlaSerGlyTyrThrPheThrGlyTyr202530TyrMetHisTrpValArgGlnAlaProGlyGlnGlyLeuGluTrpMet354045GlyArgIleAsnProAsnSerGlyGlyThrAsnTyrAlaGlnLysPhe505560GlnGlyArgValThrSerTh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aThrTyrTyrCysGlnGlnTyrAsnSerTyrProPro859095Thr5397PRT人53AspIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly151015AspArgValThrIleThrCysArgAlaSerGlnGlyIleArgAsnAsp202530LeuGlyTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProLysArgLeuIle354045TyrAlaAlaSerSerLeuGlnSerGlyValProSerArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrGluPheThrLeuThrIleSerSerLeuGlnPro65707580GluAspPheAlaThrTyrTyrCysLeuGlnHisAsnSerTyrProPro859095Thr5497PRT人54AspIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly151015AspArgValThrIleThrCysGlnAlaSerGlnAspIleSerAsnTyr202530LeuAsnTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProLysLeuLeuIle354045TyrAspAlaSerAsnLeuGluThrGlyValProSerArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspPheThrPheThrIleSerSerLeuGlnPro65707580GluAspIleAlaThrTyrTyrCysGlnGlnTyrAspAsnLeuProPro859095Thr5597PRT人55AspIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly151015AspArgValThrIleThrCysArgAlaSerGlnSerIleSerSerTyr202530LeuAsnTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProLysLeuLeuIle354045TyrAlaAlaSerSerLeuGlnSerGlyValProSerArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerSerLeuGlnPro65707580GluAspPheAlaThrTyrTyrCysGlnGlnSerTyrSerThrProPro859095Thr5697PRT人56AlaIleArgMetThrGlnSerProPheSerLeuSerAlaSerValGly151015AspArgValThrIleThrCysTrpAlaSerGlnGlyIleSerSerTyr202530LeuAlaTrpTyrGlnGlnLysProAlaLysAlaProLysLeuPheIle354045TyrTyrAlaSerSerLeuGlnSerGlyValProSerArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspTyrThrLeuThrIleSerSerLeuGlnPro65707580GluAspPheAlaThrTyrTyrCysGlnGlnTyrTyrSerThrProPro859095Thr5797PRT人57GluIleValLeuThrGlnSerProAlaThrLeuSerLeuSerProGly151015GluArgAlaThrLeuSerCysArgAlaSerGlnSerValSerSerTyr202530LeuAlaTrpTyrGlnGlnLysProGlyGlnAlaProArgLeuLeuIle354045TyrAspAlaSerAsnArgAlaThrGlyIleProAlaArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerSerLeuGluPro65707580GluAspPheAlaValTyrTyrCysGlnGlnArgSerAsnTrpProPro859095Thr5897PRT人58GluIleValLeuThrGlnSerProAlaThrLeuSerLeuSerProGly151015GluArgAlaThrLeuSerCysArgAlaSerGlnSerValSerSerTyr202530LeuAlaTrpTyrGlnGlnLysProGlyGlnAlaProArgLeuLeuIle354045TyrAspAlaSerAsnArgAlaThrGlyIleProAlaArgPheSerGly505560SerGlySerGlyArgAspPheThrLeuThrIleSerSerLeuGluPro65707580GluAspPheAlaValTyrTyrCysGlnGlnArgSerAsnTrpProPro859095Thr5997PRT人59GluIleValMetThrGlnSerProAlaThrLeuSerValSerProGly151015GluArgAlaThrLeuSerCysArgAlaSerGlnSerValSerSerAsn202530LeuAlaTrpTyrGlnGlnLysProGlyGlnAlaProArgLeuLeuIle354045TyrGlyAlaSerThrArgAlaThrGlyIleProAlaArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrGluPheThrLeuThrIleSerSerLeuGlnSer65707580GluAspPheAlaValTyrTyrCysGlnGlnTyrAsnAsnTrpProPro859095Thr6013PRT小鼠60PheThrPheGlySerGlyThrLysLeuGluIleLysArg15106113PRT人61TrpThrPheGlyGlnGlyThrLysValGluIleLysArg15106213PRT人62TyrThrPheGlyGlnGlyThrLysLeuGluIleLysArg15106313PRT人63PheThrPheGlyProGlyThrLysValAspIleLysArg15106413PRT人64LeuThrPheGlyGlyGlyThrLysValGluIleLysArg15106513PRT人65IleThrPheGlyGlnGlyThrArgLeuGluIleLysArg151066108PRT人工序列基於1-6*01和JK3的人源化Hab18輕鏈66AlaIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerValGly151015AspArgValThrIleThrCysLysAlaSerGlnSerValIleAsnAsp202530ValAlaTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaProLysLeuLeuIle354045TyrTyrAlaSerAsnArgAsnThrGlyValProSerArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerSerLeuGlnPro65707580GluAspPheAlaThrTyrTyrCysGlnGlnAspTyrSerProProPhe859095ThrPheGlyProGlyThrLysValAspIleLysArg10010567108PRT人工序列基於3-11*01和JK3的人源化Hab18輕鏈67GluIleValLeuThrGlnSerProAlaThrLeuSerLeuSerProGly151015GluArgAlaThrLeuSerCysLysAlaSerGlnSerValIleAsnAsp202530ValAlaTrpTyrGlnGlnLysProGlyGlnAlaProArgLeuLeuIle354045TyrTyrAlaSerAsnArgAsnThrGlyIleProAlaArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerSerLeuGluPro65707580GluAspPheAlaValTyrTyrCysGlnGlnAspTyrSerProProPhe859095ThrPheGlyProGlyThrLysValAspIleLysArg10010568260PRT人工序列基於重鏈SEQIDNO20和輕鏈SEQIDNO66的超人源化抗體scFv片段68GluValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyLeuValGlnProGlyGly151015SerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSerGlyPheThrPheSerAspAla202530TrpMetAspTrpValArgGlnAlaProGlyLysGlyLeuGluTrpVal354045GlyGluIleArgSerLysAlaAsnAsnHisAlaProTyrTyrThrGlu505560SerValLysGlyArgPheThrIleSerArgAspAspSerLysAsnSer65707580LeuTyrLeuGlnMetAsnSerLeuLysThrGluAspThrAlaValTyr859095TyrCysAlaArgAspSerThrAlaThrHisTrpGlyArgGlyThrLeu100105110ValThrValSerSerGlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGly115120125GlyGlyGlySerAlaIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSer130135140AlaSerValGlyAspArgValThrIleThrCysLysAlaSerGlnSer145150155160ValIleAsnAspValAlaTrpTyrGlnGlnLysProGlyLysAlaPro165170175LysLeuLeuIleTyrTyrAlaSerAsnArgAsnThrGlyValProSer180185190ArgPheSerGlySerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSer195200205SerLeuGlnProGluAspPheAlaThrTyrTyrCysGlnGlnAspTyr210215220SerProProPheThrPheGlyProGlyThrLysValAspIleLysArg225230235240AlaAlaAlaAspTyrLysAspAspAspAspLysAlaAlaAlaHisHis245250255HisHisHisHis26069260PRT人工序列基於重鏈SEQIDNO20和輕鏈SEQIDNO67的超人源化抗體scFv片段69GluValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyLeuValGlnProGlyGly151015SerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSerGlyPheThrPheSerAspAla202530TrpMetAspTrpValArgGlnAlaProGlyLysGlyLeuGluTrpVal354045GlyGluIleArgSerLysAlaAsnAsnHisAlaProTyrTyrThrGlu505560SerValLysGlyArgPheThrIleSerArgAspAspSerLysAsnSer65707580LeuTyrLeuGlnMetAsnSerLeuLysThrGluAspThrAlaValTyr859095TyrCysAlaArgAspSerThrAlaThrHisTrpGlyArgGlyThrLeu100105110ValThrValSerSerGlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGly115120125GlyGlyGlySerGluIleValLeuThrGlnSerProAlaThrLeuSer130135140LeuSerProGlyGluArgAlaThrLeuSerCysLysAlaSerGlnSer145150155160ValIleAsnAspValAlaTrpTyrGlnGlnLysProGlyGlnAlaPro165170175ArgLeuLeuIleTyrTyrAlaSerAsnArgAsnThrGlyIleProAla180185190ArgPheSerGlySerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSer195200205SerLeuGluProGluAspPheAlaValTyrTyrCysGlnGlnAspTyr210215220SerProProPheThrPheGlyProGlyThrLysValAspIleLysArg225230235240AlaAlaAlaAspTyrLysAspAspAspAspLysAlaAlaAlaHisHis245250255HisHisHisHis26070269PRT人70MetAlaAlaAlaLeuPheValLeuLeuGlyPheAlaLeuLeuGlyThr151015HisGlyAlaSerGlyAlaAlaGlyThrValPheThrThrValGluAsp202530LeuGlySerLysIleLeuLeuThrCysSerLeuAsnAspSerAlaThr354045GluValThrGlyHisArgTrpLeuLysGlyGlyValValLeuLysGlu505560AspAlaLeuProGlyGlnLysThrGluPheLysValAspSerAspAsp65707580GlnTrpGlyGluTyrSerCysValPheLeuProGluProMetGlyThr859095AlaAsnIleGlnLeuHisGlyProProArgValLysAlaValLysSer100105110SerGluHisIleAsnGluGlyGluThrAlaMetLeuValCysLysSer115120125GluSerValProProValThrAspTrpAlaTrpTyrLysIleThrAsp130135140SerGluAspLysAlaLeuMetAsnGlySerGluSerArgPhePheVal145150155160SerSerSerGlnGlyArgSerGluLeuHisIleGluAsnLeuAsnMet165170175GluAlaAspProGlyGlnTyrArgCysAsnGlyThrSerSerLysGly180185190SerAspGlnAlaIleIleThrLeuArgValArgSerHisLeuAlaAla195200205LeuTrpProLeuLeuGlyIleValAlaGluValLeuValLeuValThr210215220IleIlePheIleTyrGluLysArgArgLysProGluAspValLeuAsp225230235240AspAspAspAlaGlySerAlaProLeuLysSerSerGlyGlnHisGln245250255AsnAspLysGlyLysAsnValArgGlnArgAsnSerSer26026權利要求1.一種含有可變區的非人類抗體或抗體片段，該抗體或抗體片段特異性結合CD147，其中受試抗體或抗體片段可變區已被突變以降低所述抗體或抗體片段在人體中的免疫原性。2.根據權利要求1的抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段為去免疫化的。3.根據權利要求1或權利要求2的抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段為人源化的。4.根據權利要求3的抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段為超人源化TM的。5.根據前述權利要求任意一項的抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段經過表面重建。6.根據前述權利要求任意一項的抗體或抗體片段，其中所述可變區包括重鏈可變區，並且只有重鏈可變區的CDR3來源於受試非人類抗體或抗體片段或者與受試非人類抗體或抗體片段基本相同。7.根據權利要求6的抗體或抗體片段，其中所述重鏈的CDR3來源於SEQIDNO3或者具有與SEQIDNO3基本相同的序列。8.根據權利要求6或權利要求7的抗體或抗體片段，其中所述僅存的可變區為重鏈可變區。9.根據權利要求9的抗體或抗體片段，其中所述CDR1和CDR2中的一個或兩個來源於受試非人類抗體或抗體片段或者與受試非人類抗體或抗體片段基本相同。10.根據權利要求1至7任意一項的抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段含有重鏈可變區和輕鏈可變區。11.根據權利要求10的抗體或抗體片段，其中所述可變區的六個CDR中的至少兩個來源於受試抗體或抗體片段的對應CDR或者與受試抗體或抗體片段對應CDR基本相同，其中至少有一個CDR是重鏈可變區CDR3。12.根據權利要求11的抗體或抗體片段，其中所述可變區的六個CDR中的至少三個、至少四個、至少五個或全部六個來源於受試抗體或抗體片段的對應CDR或者與受試抗體或抗體片段的對應CDR基本相同。13.根據權利要求10的抗體或抗體片段，包括選自下列的至少1個、2個、3個或4個CDRSEQIDNO1的重鏈CDR1、SEQIDNO2的重鏈CDR2、SEQIDNO4的輕鏈CDR1、SEQIDNO5的輕鏈CDR2和SEQIDNO6的輕鏈CDR3。14.根據權利要求10的抗體或抗體片段，包括SEQIDNO1的重鏈CDR1、SEQIDNO2的重鏈CDR2、SEQIDNO4的輕鏈CDR1、SEQIDNO5的輕鏈CDR2和SEQIDNO6的輕鏈CDR3。15.根據權利要求3任意一項的抗體或抗體片段，其中所述可變區含有根據SEQIDNO20的重鏈胺基酸序列。16.根據權利要求3任意一項的抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段含有根據SEQIDNO66或SEQIDNO67的輕鏈胺基酸序列。17.根據權利要求3的抗體或抗體片段，其中所述可變區含有與SEQIDNO20表示胺基酸序列具有至少90％的序列同一性的重鏈胺基酸序列。18.根據前述權利要求任意一項的抗體或抗體片段，其中可變區已被突變的抗體或抗體片段在框架序列中含有不超過10個與候選人類可變區框架序列不同的胺基酸殘基。19.根據前述權利要求任意一項的抗體或抗體片段，其中可變區已被突變的抗體或抗體片段與針對CD147產生的受試鼠類抗體相比，對CD147的親和力下降不超過100倍。20.根據前述權利要求任意一項的抗體或抗體片段，其中可變區已被突變的抗體或抗體片段對CD147的親和力至少為Kd1nM、10nM、100nM或1μM。21.根據權利要求3的抗體或抗體片段，其中可變區已被突變的抗體或抗體片段含有框架序列，所述框架序列來源於人類抗體可變重鏈的框架序列或者與人類抗體可變重鏈的框架序列基本相同，所述人類抗體可變重鏈具有1型正則結構的CDR1和4型正則結構的CDR2。22.根據權利要求3的抗體或抗體片段，其中所述可變區已被突變的抗體或抗體片段含有框架序列，所述框架序列來源於人類抗體可變輕鏈的框架序列或者與人類抗體可變輕鏈的框架序列基本相同，所述人類抗體可變輕鏈具有2型正則結構的CDR1、1型正則結構的CDR2和1型正則結構的CDR3。23.一種藥物組合物，包括根據權利要求1至22任意一項的抗體或抗體片段和可藥用的載體。24.一種綴合物，包括與細胞毒劑相連接的根據權利要求1至22任意一項的抗體或抗體片段。25.根據權利要求24的綴合物，其中所述細胞毒劑為放射性核素。26.根據權利要求25的綴合物，其中所述放射性核素選自131I和90Y。27.一種藥物組合物，包括根據權利要求24至26任意一項的綴合物和可藥用的載體。28.一種抑制癌細胞生長的方法，包括將所述細胞與根據權利要求1至22任意一項的抗體或抗體片段相接觸。29.一種治療癌症患者的方法，包括給予所述患者有效量的根據權利要求1至22任意一項的抗體或抗體片段。30.根據權利要求29的方法，還包括給予所述患者另一種治療藥劑。31.根據權利要求30的方法，其中所述治療藥劑為細胞毒劑。32.一種診斷疑似患有癌症的受試者的方法，所述方法包括給予受試者一種綴合物，所述綴合物包括與可檢測標記相連接的根據權利要求1至22任意一項的抗體或抗體片段；並檢測所述受試者體內的所述標記綴合物的分布。33.根據權利要求28至32任一項的方法，其中所述癌症為癌。34.根據權利要求33的方法，其中所述癌為肝細胞癌。35.一種可特異性結合CD147的改進的抗體或抗體片段，所述抗體或抗體片段由下述方法製備(a)提供編碼抗體或其片段的DNA，所述DNA包括選自SEQIDNO1至69的至少一段序列；(b)在所述DNA中引入至少一處核苷酸突變、缺失或插入，以使得由所述DNA編碼的所述抗體或抗體片段的胺基酸序列被改變；(c)表達所述抗體或抗體片段；以及(d)篩選具有所述改進的所述表達的抗體或抗體片段，由此製得所述改進的抗體或抗體片段。36.根據權利要求35的抗體或抗體片段，其中所述改進為對CD147親和力的提高。37.根據權利要求35或權利要求36的抗體或抗體片段，其中所述至少一處核苷酸突變、缺失或插入通過選自下列的方法製備寡核苷酸介導的定向誘變、盒式誘變、簡併寡核苷酸引物PCR、錯配PCR、DNA改組和細菌增變株的使用。38.根據權利要求35至37任意一項的抗體或抗體片段，其中所述至少一處突變位於CDR中。39.一種多核苷酸，包括編碼根據權利要求1至22任意一項的抗體或抗體片段的核酸序列。40.一種載體，包括根據權利要求39的多核苷酸。41.根據權利要求40的載體，其中所述載體為一種能夠表達所述抗體或抗體片段的表達載體。42.一種結合CD147的抗體或抗體片段，包括重鏈可變區，其中所述重鏈可變區為SEQIDNO7的突變形式，在重鏈可變區中含有1至20個之間的突變，這使得其與天然人類重鏈的胺基酸序列的同一性比SEQIDNO7所示重鏈可變區序列的更高。43.根據權利要求42的抗體或抗體片段，還包括輕鏈可變區，其中所述輕鏈可變區具有選自SEQIDNO4-6的一個、兩個或三個CDR。44.根據權利要求42的抗體或抗體片段，還包括輕鏈可變區，其中所述輕鏈包括選自SEQIDNO50的輕鏈的突變形式，其中所述突變形式在輕鏈可變區中含有1至20個之間的突變，這使得它具有更高的與天然人類輕鏈的胺基酸序列同一性。45.一種結合CD147的表位的抗體，所述表位與Hab18的表位重疊，並且所述抗體與Hab18相比含有較少的非人類胺基酸。46.根據權利要求45的抗體，所述抗體與Hab18相比具有較弱的免疫原性。47.一種人源化抗體重鏈，所述重鏈包括一個或多個來源於鼠類抗體Hab18重鏈的CDR，還包括一個來源於人類抗體可變重鏈的框架序列，所述人類抗體可變重鏈具有1型正則結構的CDR1和根據Kabat抗體編號系統長度為19的CDR2。48.根據權利要求47的人源化抗體重鏈，其中所述人類抗體可變重鏈具有與SEQIDNO8至12的任意一個基本相同的序列。49.一種人源化抗體重鏈，所述重鏈包括一個或多個來源於鼠類抗體Hab18重鏈的CDR，還包括一個來源於人類抗體可變重鏈的框架序列，所述人類抗體可變重鏈具有1型正則結構的CDR1和3型正則結構的CDR2。50.根據權利要求49的人源化抗體重鏈，其中所述人類抗體可變重鏈具有與SEQIDNO23至46的任意一個基本相同的序列。51.根據權利要求47至50任意一項的人源化抗體重鏈，包括選自下列的至少1個CDRSEQIDNO1的CDR1、SEQIDNO2的CDR2和SEQIDNO3的CDR3。52.一種人源化抗體輕鏈，所述輕鏈包括一個或多個來源於鼠類抗體Hab18輕鏈的CDR，還包括一個來源於人類抗體可變輕鏈的框架序列，所述人類抗體可變輕鏈具有2型正則結構的CDR1、1型正則結構的CDR2和1型正則結構的CDR3。53.根據權利要求52的人源化抗體輕鏈，其中所述人類抗體可變輕鏈具有與SEQIDNO48至59的任意一個基本相同的序列。54.根據權利要求52或權利要求53的人源化抗體輕鏈，其中所述重鏈包括選自下列的至少1個CDRSEQIDNO4的CDR1、SEQIDNO5的CDR2和SEQIDNO6的CDR3。55.一種人源化抗體，包括根據權利要求47至51任意一項的重鏈和/或根據權利要求52至54任意一項的輕鏈。全文摘要提供了抗體、人源化抗體、超人源化TM抗體、表面重建抗體、抗體片段、衍生抗體和所述抗體帶有或不帶有細胞毒劑的綴合物，它們都特異性結合肝細胞癌和其他癌的細胞並減少所述靶細胞的存活。所述抗體及其片段可用於對例如肝細胞癌等的抗原表達水平升高的腫瘤患者的治療。文檔編號A61K39/395GK101076542SQ20058003054公開日2007年11月21日申請日期2005年9月13日優先權日2004年9月13日發明者V·巴特瑞,D·S·威爾森申請人:伊沃詹尼克斯有限公司,伊沃詹尼克斯股份有限公司