β澱粉樣蛋白產生的雜環磺醯胺類抑制劑的製作方法

2023-05-06 08:39:21

專利名稱：β澱粉樣蛋白產生的雜環磺醯胺類抑制劑的製作方法
背景技術：
本發明涉及β澱粉樣蛋白產生的抑制劑，它可用於治療阿爾茨海默病。
阿爾茨海默病(AD)是老年痴呆(失去記憶)最常見的形式。在大腦中發現的AD的主要病理損傷包括噬斑和血管病形式的β澱粉樣蛋白的胞外沉積和聚集的超磷酸化τ蛋白的胞內神經原纖維纏結。最近的證據揭示大腦中升高的β澱粉樣蛋白水平不僅在τ病理學之前發生，而且和認知下降有關。最近的研究已經顯示，聚集的β澱粉樣蛋白對細胞培養物中的神經元是有毒的，它進一步說明β澱粉樣蛋白是導致AD的原因。
β澱粉樣蛋白主要由39-42個胺基酸肽構成，並是由稱為澱粉樣蛋白前體蛋白(APP)的大型前體蛋白通過β蛋白酶和γ分泌酶的依次作用產生的。儘管十分罕見，但早期發作的AD與導致總β澱粉樣蛋白或其更有聚集傾向的含42個胺基酸的同種型生產過剩的APP的遺傳突變有關。此外，患有唐氏症候群的患者擁有額外的含有編碼APP的基因的染色體，因此具有升高的β澱粉樣蛋白水平且在晚年不可避免的會患上AD。
可有效抑制β澱粉樣蛋白的產生和治療阿爾茨海默病(AD)的組合物仍無法滿足需要。
發明概要本發明提供了已被發現可特異性抑制從APP產生β澱粉樣蛋白並能通過血腦屏障的2-氨基-1-乙醇的雜環磺醯胺衍生物和相關同系物。這些化合物可有效治療β澱粉樣蛋白水平升高的症狀(如AD、唐氏症候群)。對可能患有或已患有這些疾病的受試者全身施用這些化合物可降低β澱粉樣蛋白水平，從而隨後降低這些患者大腦中的毒性β澱粉樣蛋白聚集物。
一方面，本發明提供了如這裡定義的結構式(I)的化合物、藥學上可接受的鹽、水合物或其前體藥物。在一個實施方案中，結構式(I)的化合物是噻吩磺醯胺。在另一個實施方案中，結構式(I)的化合物是呋喃磺醯胺。在特別合乎需要的化合物中有那些在雜環的5位上含有滷素的化合物(如5-滷代噻吩磺醯胺)和在伯醇的側鏈上有β-分支的化合物。
另一方面，本發明提供了含有一種或幾種結構式(I)的化合物和藥學上可接受的載體的藥物組合物。
仍在另一方面，本發明提供了通過輸遞結構式(I)的化合物在受試者中抑制β澱粉樣蛋白產生的方法。
仍在另一方面，本發明提供了通過以足以減輕AD症狀或發展的量向受試者施用結構式(I)的化合物以在受試者中治療阿爾茨海默病(AD)的方法。
通過閱讀以下本發明的詳細描述，本發明的這些方面和其它方面對於精通此領域的技術人員是顯而易見的。
發明詳述本發明包括結構式(I)的化合物，它們的藥物製劑，以及在可能患有或患有AD或其它因大腦中升高的β澱粉樣蛋白水平而導致的疾病的受試者中調節β澱粉樣蛋白產生的應用。結構式(I)的化合物包括藥學上可接受的鹽和/或水合物或其前體藥物，其中 R1和R2獨立選自氫、烷基、取代的烷基、CF3、鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基、取代的炔基、環烷基、取代的環烷基、苯基、取代的苯基、和(CH2)n(1，3)而噁烷，其中n為2-5；R3選自氫、烷基、取代的烷基；R4選自氫、烷基、取代的烷基、烷基環烷基、取代的烷基環烷基、苯基(取代的)烷基、烷基OH、取代的烷基OH、烷基OBn、取代的烷基OBn、烷基吡啶基、取代的烷基吡啶基、烷基呋喃基、取代的烷基呋喃基、CH(OH)苯基、CH(OH)取代的苯基、鏈烯基、取代的鏈烯基、環烷基、取代的環烷基、N-取代的-哌啶基、哌啶基、取代的哌啶基、四氫噻喃、取代的四氫噻喃、2-二氫化茚、取代的2-二氫化茚、苯基、取代的苯基、烷基NHR7和取代的烷基NHR7；條件是R3和R4不同時是氫；
R7是烷基、取代的烷基、環烷基、取代的環烷基、苄基、取代的苄基、烷基OH、取代的烷基OH、烷基SR8或取代的烷基SR8；R8是烷基、取代的烷基、苄基或取代的苄基；或者R3和R4可以連接形成環；R5選自氫、低級烷基、取代的低級烷基、鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基、取代的炔基、CH2環烷基、取代的CH2環烷基、苄基、取代的苄基、和CH2CH2QR9；Q是O、NH或S；R9是低級烷基、取代的低級烷基、苯基或取代的苯基；R6選自氫、滷素和CF3；T選自 和 W、Y和Z獨立選自C、CR10和N；R10選自氫和滷素，但至少W、Y和Z其中之一是C；X選自O、S、SO2和NR11；R11選自氫、低級烷基、取代的低級烷基、苄基、取代的苄基、苯基和取代的苯基；條件是如果此化合物含有一個或多個手性中心，至少手性中心之一必須為S-立體化學。
本發明不受雜環W-X-Y-Z-C與SO2基團連接點的限制。然而，在一個優選的實施方案中，該環通過碳原子結合到SO2基團上。然而，該環可以通過O、S或N雜原子結合。
本發明的化合物可以含有一個或多個不對稱碳原子，且一些化合物可以含有一個或多個不對稱(手性)中心並因此造成光學異構體和非對映體。雖然在結構式(I)中沒有按照立體化學顯示，當結構式(I)的化合物含有一個或多個手性中心時，至少一個手性中心為S-立體化學。最優選的是，結合有N、T、R3和R4的碳原子是S-立體化學。因此，本發明包括這種光學異構體和非對映體；以及外消旋的和拆分的、對映體純的立體異構體；以及R和S立體異構體的其它混合物；以及藥學上可接受的鹽、水合物和其前體藥物。
這裡使用的術語「烷基」是指直鏈-和支鏈的含有1-10個碳原子，較好的是1-8個碳原子，最好1-6個碳原子的飽和的脂肪族碳氫基團；當用在這裡時，術語「低級烷基」是指直鏈-和支鏈的含有1-6個碳原子的飽和的脂肪族碳氫基團；「鏈烯基」包括直鏈-和支鏈的至少有一個碳碳雙鍵並含有2-8個碳原子，較好的是2-6個碳原子的烷基；「炔基」包括直鏈-和支鏈的至少有一個碳碳三鍵並含有2-8個碳原子，較好的是2-6個碳原子的烷基。
術語「取代的烷基」、「取代的鏈烯基」和「取代的炔基」是指含有1-3個選自滷素、CN、OH、NO2、氨基、芳基、雜環基、取代的芳基、取代的雜環、烴氧基(alkoxy)、取代的烴氧基、芳氧基、取代的烷氧基(烷基oxy)、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基、芳硫基的取代基的上述烷基、鏈烯基和炔基。這些取代基可以連接到烷基、鏈烯基或炔基的任何碳上，只要連接物能構成穩定的化學部分。
術語「芳基」用在這裡是指碳環型的芳環系統，它可以是單環，或是稠合或連接在一起的多個芳香環，使得至少一部分稠合或連接的環形成了共軛的芳香系統。芳基包括但不限於苯基、萘基、聯苯、蒽基、四氫萘基、菲基和二氫化茚。
術語「取代的芳基」是指含有1-4個選自滷素、CN、OH、NO2、氨基、烷基、環烷基、鏈烯基、炔基、烴氧基、芳氧基、取代的烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基和芳硫基的取代基的如上定義的芳基。
術語「取代的苄基」是指有1-5個包括滷素、CN、OH、NO2、氨基、烷基、環烷基、鏈烯基、炔基、烴氧基、芳氧基、取代的烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基和芳硫基的取代基在苯環上發生取代的苄基。
術語「雜環的』』用在這裡是指穩定的4-7元單環的或穩定的多環的雜環，它是飽和的、部分不飽和的或不飽和的，並由碳原子和1-4個選自N、O和S原子的雜原子構成。N和S原子可以被氧化。該雜環也包括任何上述雜環與芳環稠合的任何多重環。雜環可以在任何雜原子或碳原子結合，只要所得結構是化學穩定的。這種雜環包括，例如，四氫呋喃、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌啶基、氮雜基、吡咯烷基、咪唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、噁唑基、異噁唑基、嗎啉基、吲哚基、喹啉基、噻吩基、呋喃基、苯並呋喃基、苯並噻吩基、硫代嗎啉基、硫代嗎啉亞碸、異喹啉基和四氫噻喃。
術語「取代的雜環」用在這裡是指含有1-4個選自滷素、CN、OH、NO2、氨基、烷基、取代的烷基、環烷基、取代的環烷基、鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基、取代的炔基、烴氧基、取代的烴氧基、芳氧基、取代的芳氧基、烷氧基、取代的烷氧基、烷基羰基、取代的烷基羰基、烷基羧基、取代的烷基羧基、烷基氨基、取代的烷基氨基、芳硫基或取代的芳硫基的取代基的如上定義的雜環。
術語「取代的環烷基」用在這裡是指含有3個以上形成穩定環的碳原子並含有1-5個選自滷素、CN、OH、NO2、氨基、烷基、取代的烷基、鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基、烴氧基、芳氧基、取代的芳氧基、烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基、取代的烷基氨基、芳硫基、雜環、取代的雜環、氨基烷基和取代基的氨基烷基的取代基的以碳為基礎的環。
當提到術語「取代的烷基環烷基」、「取代的烷基OBn」、「取代的烷基吡啶基」、「取代的烷基呋喃基」、「取代的烷基NHR7」、「取代的烷基OH」和「取代的烷基SR8」時，取代可以發生在烷基或相應的基礎化合物上。
在定義R4基團時，N-取代的哌啶基可定義為取代的雜環基。特別合乎需要的取代基中有N-烷基、N-芳基、N-醯基和N-磺醯基哌啶基。特別適合的N-醯基-哌啶基是N-叔-丁氧基羰基(BOC)-哌啶。然而，精通此領域的技術人員可以容易的確定其它合適的取代基。
術語「烴氧基』』用在這裡是指OR基團，其中R是烷基或取代的烷基。術語「芳氧基」用在這裡是指OR基團，其中R是芳基或取代的芳基。術語「烷基羰基」用在這裡是指RCO基團，其中R是烷基或取代的烷基。術語「烷基羧基」用在這裡是指COOR基團，其中R是烷基或取代的烷基。術語「氨基烷基」是指仲胺和叔胺，其中含有1-8個碳原子的烷基或取代的烷基可以相同或不同，且連接點在氮原子上。
術語「滷素」是指Cl、Br、F或I。
術語「環」結構，例如當R3和R4形成環結構時，除非對環結構的類型另有說明，包括單環結構、橋接的環結構和稠合的環結構。
本發明的化合物可以衍生自藥物或藥學上可接受的酸或鹼的鹽的形式使用。這些鹽包括但不限於與有機和無機酸形成的下列鹽，如乙酸、乳酸、檸檬酸、琥珀酸、延胡索酸、馬來酸、丙二酸、苦杏仁酸、mallic、鹽酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、甲苯磺酸和類似的已知的可接受的酸及其混合物。其它的鹽包括鹼金屬或鹼土金屬，如鈉(如氫氧化鈉)、鉀(如氫氧化鉀)、鈣或鎂。
這些鹽以及本發明的其它化合物可以是酯、氨基甲酸酯的形式或其它常規的「前體藥物」的形式，當以這種形式施用時，它可以在體內轉化成活性部分。在這裡優選的實施方案中，前體藥物是酯類。參見，例如，B.Testa和J.Caldwell，「Prodrugs RevisitedThe″Ad Hoc″Approach as a Complement to LigandDesign」，Medicinal Research Reviews，16(3)233-241，編輯，John Wiley Sons(1996)。
在一個特別優選的實施方案中，結構式(I)的化合物是噻吩磺醯胺，更好的是5-滷代噻吩磺醯胺，最好是在伯醇的側鏈上有β-分支的5-滷代噻吩磺醯胺。因此，根據結構式(I)，本發明的化合物優選具有這樣的結構，其中X是S，W是C(或CR10)，Y是C(或CR10)且Z是C(或CR10)，且磺醯胺連接到噻吩環的C2上。更好的是，X是S，W是C(或CR10)，Y是C(或CR10)，Z是C(或CR10)，且R6是滷素。最好的是，X是S，X是C，W是C，Y是C，Z是C，R6是滷素，且T是C(OH)R1R2，其中R1和R2是氫，R3是H，R4是S-立體化學構象的低級烷基，R5是H。在體外和體內初步篩選時，這些結構的化合物有未曾預料的良好的β澱粉樣蛋白抑制活性，且在許多情況下，此活性優於含有其它雜環(如呋喃，其中X是O)的結構式(I)的化合物的活性。然而，其它此類結構式(I)的化合物對於這裡所述的目的也是有效的。
例如，在另一個實施方案中，結構式(I)的化合物是呋喃磺醯胺，其中X是O、W是C、Y是C且Z是C。在一個特別優選的實施方案中，結構式(I)的呋喃磺醯胺的特點是在伯胺的側鏈上含有β-分支。因此，根據結構式(I)，在這些化合物中T是C(OH)R1R2，其中R1和R2是是氫，R3是H，R4是S-立體化學構象的低級烷基，R5是H且R6是滷素。
仍在另一個實施方案中，結構式(I)的化合物的特徵為結構式(I)的磺醯胺在伯胺基團的側鏈上有β-分支。因此，根據結構式(I)，在這些化合物中T是C(OH)R1R2，其中R1和R2是是氫，R3是H，R4是S-立體化學構象的低級烷基，R5是H。
本發明的這些和其它化合物是根據下述流程製備的。
合成可以用精通有機合成領域的技術人員熟知的各種方法製備本發明的化合物。精通此領域的技術人員可以用下述方法以及有機合成領域已知的合成方法或這些方法的變異製備本發明的化合物。(通常可以參見，Comprehensive Organicsynthesis，「Selectivity，Strategy Efficiency in Modern OrganicChemistry」，I.Fleming編，Pergamon出版社，紐約(1991)；Comprehensive OrganicChemistry，「The Synthesis和Reactions of Organic Compounds」J.F.Stoddard編，Pergamon出版社，紐約(1979))。優選的方法包括但不限於下面列出的那些。
第一種製備方法包括，在三乙胺(TEA)等鹼性物質存在時，在合適的溶解中使2-氨基醇II與合適的磺醯滷反應以提供結構式III的化合物。對於R2和R1是氫的化合物，用氯鉻酸吡啶(PCC)或在Swern條件下氧化N-磺醯基伯醇以提供相應的醛IV，IV可以和Grignard試劑(RMgX，其中R是有機基，X是滷素)反應以提供仲醇V，V是非對映體的混合物可以用高效液相色譜(HPLC)分離(流程1)。
流程1 第二種製備方法包括，在三乙胺等鹼性物質存在時，在合適的溶解中使α-胺基酸或酯IX與合適的磺醯滷反應以提供結構式X的化合物(流程2)。用LiAlH4、B2H6或氰尿醯氯/NaBH4等標準方法可將中間產物N-磺酸X(RX＝H)轉化成相應的伯醇VIII(R1＝R2＝H)。也可以用LiAlH4等標準方法將中間產物N-磺醯酯X(RX＝烷基、Bn)還原為相應的伯醇VIII(R1＝R2＝H)。或者，可以用DiBAL將中間產物N-磺醯酯X(RX＝烷基、Bn)轉化成醛IV。最後，將中間產物N-磺醯酯X(RX＝烷基、Bn)和2當量的Grignard試劑反應以提供R1＝R2的叔醇III。或者，對於R1不同於R2的叔醇III，可以製備相應的N-磺酸的Weinreb醯胺(見流程10)，然後和R1MgX和R2MgX反應。對於在α-胺基酸碳上有不對稱中心的結構式X的化合物(RX＝H)，通過標準拆分過程，將用各種手性鹼形成的鹽再結晶可以得到純的對映體。
流程2 在第二種製備伯醇的方法的一個變體中，α-胺基酸或酯(或其N-保護的衍生物)VI首先被轉化成相應的伯2-胺醇VII(用前一段中列出的方法)，然後在去保護後(如果需要的話)使其與合適的磺醯滷反應(流程3)以提供結構式VIII的化合物。為製備衍生自在胺基酸側鏈含有β分支的非天然α-胺基酸的化合物，在流程4中列出了基於Hruby的工作(Tet.Lett.385135-5138(1997))的製備方法。這一方法需要將α，β-不飽和酸XI製成Evans手性助劑的α，β-不飽和的醯胺XII，然後共軛加成有機銅酸鹽，用NBS捕獲所得烯醇化物陰離子XIII，用疊氮陰離子(由疊氮化四甲基胍(TMGA)提供)取代溴化物XIV以生產XV，然後還原成2-氨基醇，隨後再磺醯化以提供目標化合物XVI。在流程1-4中，R5是H。
流程3 為製備N-烷基化的磺醯胺VIII(R5＝烷基等)，或者用碳酸鉀等合適的鹼性物質處理再用烷基化試劑R5X處理，或者採用Mitsunobu條件(R5OH/DEAD，TPP)，這樣可以將磺醯胺酯XVII N-烷基化。用LiBH4還原N-烷基化的磺醯胺酯在伯醇VIII系列中提供了N-烷基化的磺醯胺(流程5)。通過上述化學方法可以將這些伯醇VIII轉化成仲醇V或醛IV系列。或者，可以用Grignard試劑處理N-烷基化的磺醯胺酯或其相應的Weinreb醯胺以提供N-烷基化的叔醇III。
流程5 當上述醇中連接到磺醯胺的雜環是噻吩時，可以用MCPBA氧化噻吩化合物XVIII以得到相應的碸衍生物XIX(流程6)流程6 另一種製備衍生自非天然2-氨基醇的磺醯胺的方法使用Strecker α-胺基酸合成法的Bucherer改良法(流程7)。在這個方法中，將醛XX和氰化物陰離子和碳酸銨反應以提供乙內醯胺XXI，它水解成α胺基酸XXII。然後將這一化合物還原成XXIII並磺醯化以提供所需的結構式XXIV的化合物。
流程7 對於衍生自2-氨基醇的在側鏈上含有N或O雜原子的磺醯胺，發明了從D-絲氨酸開始的途徑(流程8)。在這個方法中，D-絲氨酸XXV首先被磺醯化成XXVI，隨後轉化成酮XXVII，XXVII被還原性胺化成結構式XXVIII的目標化合物。
流程8 對於衍生自R1＝H且R2＝CF3的仲醇系列(化合物XXIX)中2-氨基醇的磺醯胺，設計了從醛IV(按流程1製備)開始的合成方法，它列在流程9中。
流程9 如在流程1這一部分中提到的，製備衍生自仲醇系列V中2-氨基醇的磺醯胺會導致形成非對映體的混合物。在流程10中列出了另一種可製得純非對映體的製備這些化合物的方法，以製造衍生自L-異亮氨酸的化合物。這種方法利用了Roux先前採用的化學方法(Tetrahedron 505345-5360(1994))，它包括在Weinreb醯胺XXX(衍生自所必需的α-胺基酸)中加入Grignard試劑，然後使酮XXXI發生立體定向反應以提供單一的非對映的N-保護的2-氨基醇XXXII。使此化合物去保護，然後和磺醯氯反應以提供純的非對映的結構式XXXIII的磺醯胺仲醇。
流程10 當上述醇中連接到磺醯胺的雜環是噻吩時，可以將5-溴-噻吩衍生物XXXIV(如流程1獲得)轉化成5-三烷基錫-噻吩衍生物XXXV，用碘化鈉和氯胺T處理XXXV可將其轉化成5-碘-噻吩(XXXVII)，或用SelectfluorTM(Aldrich Chemical公司)處理XXXV使其變為5-氟-噻吩(XXXVII)，這樣就可以得到相應的5-碘-和5-氟-噻吩衍生物(流程11)。
按照這裡描述的方法可以製備衍生自環己環的4位被烷氧基和氨基取代的環己基甘氨醇的磺醯胺(流程12)。這種方法必需先氫化4-L-羥苯基甘氨酸XXXVIII，然後磺酸化，用乙硼烷還原羧酸並製得N，O-丙酮化合物XXXIX。然後用氫化鈉和烷基或苄基溴化物等烷基化試劑O-烷基化4-羥基丙酮化合物XXXIX。然後用含水酸處理除去保護基團以提供結構式XXXX的4-醚衍生物。或者，4-羥基丙醇化合物XXXIX可被氧化成4-酮，它可被還原性胺化並被去保護以提供相應的結構式XXXXI的4-氨基類似物。
流程11 流程12 另一種製備衍生自α-胺基酸的手性純N-磺醯2-氨基醇的方法列在流程13中。這一方法包括從XXXXII構建Evans噁唑烷酮手性助劑XXXXIII，然後將其轉化成相應的烯醇化物並用三苯甲基疊氮化物將其親電子胺化以提供關鍵的中間產物XXXXIV(J.Am.Chem.Soc.1096881-6883(1987))。然後將疊氮中間產物XXXXIV水解成α-疊氮基酸XXXXV並還原成手性純的α-胺基酸XXXXVI，用上述方法(例如流程2)可將XXXXVI轉化成相應的N-磺醯2-氨基醇。
流程13 最後，也可以用如流程14中列出的Strecker α-胺基酸合成的不對稱變體製備手性純的α-胺基酸XXXXVI-上述手性N-磺醯2-氨基醇的一種可能的合成前體(J.Org.Chem.541055-1062(1989))。
用流程15中所述的標準方面可由相應的醛IV衍生出肟XXXXXIV。
流程15 使用方法結構式(I)的化合物是β澱粉樣蛋白產生的抑制劑。在使用蛋白酶特異性測定的初步研究中，結構式(I)的化合物的範例已對蛋白酶活性顯示了特異的抑制效應。因此，本發明的化合物可有效治療並預防許多症狀，其中對β澱粉樣蛋白水平的調節提供了治療作用。此類症狀包括，例如，澱粉樣蛋白血管病、腦澱粉樣蛋白血管病、全身性澱粉樣變性、阿爾茨海默病(AD)、荷蘭型澱粉樣變性的遺傳性腦出血(包括體肌炎)、唐氏綜合症等。
此外，結構式(I)的化合物可用於製造製劑，這種製劑可有效診斷與β澱粉樣蛋白水平異常有關的症狀。例如，結構式(I)的化合物可用於產生對各種診斷測定有用的抗體。產生單克隆抗體、多克隆抗體、重組體以及合成抗體或其片段的方法是精通此領域的技術人員熟知的。(例如可參見E。Mark和Padlin，「Humanization of Monoclonal Antibodies」，第4章，The Handbook ofExperimental Pharmacology，第113卷，The Pharmacology of MonoclonalAntibodies，Springer-Verlag(1994年6月)；Kohler和Milstein以及許多人知道它的修飾；PCT專利申請第PCT/GB85/00392號；英國專利申請公布第GB2188638A號；Amit等，Science，233747-753(1986)；Queen等，Proc。Nat』l.Acad.Sci.USA，8610029-10033(1989)；國際專利公布第WO90/07861號；以及Riechmann等，Nature，332323-327(1988)；Huse等，Science，2461275-1281(1988))。或者，結構式(I)的化合物自身也可用於此類診斷測定。無論所選試劑(如抗體或結構式(I)的化合物)，例如包括放射免疫測定和酶聯免疫吸附測定(ELISAs)在內的合適的診斷模式是精通此領域的技術人員熟知的，且未對本發明的實施方案造成限制。
用阻遏物釋放測定(RRA)已經確定了本發明許多化合物的β澱粉樣蛋白抑制活性。參見下面的表23。如果一種化合物在20μM時使螢光素酶的活性至少增加了1.5倍且是無毒的，則在RRA中認為它是活性的。
此外，檢測β澱粉樣蛋白產生抑制劑的胞內、無細胞和體內篩選法是此領域已知的。這種測定法中包括放射免疫測定和酶聯免疫吸附測定(ELISA)。例如可參見P.D。Mehta等，Techniques in Diagnostic Pathology，第2卷，Bullock等編，學術出版社，波士頓，第99-112頁(1991)，國際專利公布第WO 98/22493號，歐洲專利第0652009號，美國專利第5,703,129號和美國專利第5,593,846號。本發明沒有限制對合適的體外或體內篩選法的選擇。
藥物製劑考慮到已經選擇的特定的症狀，可以通過任何所需的途徑向受試者施用本發明的化合物。受試者可以是任何合適的哺乳動物，包括人類、家畜(如犬和貓)和牲畜，它們已經被識別為患有或可能患有一種或多種需要對β澱粉樣蛋白水平進行調節的症狀。因此，本發明的化合物可有效治療和/或預防許多人類和獸類症狀。當用在這裡時，「預防」包括在確定為可能患有但還未確診患有這種症狀的受試者和/或還未出現其任何症狀的患者中預防這種症狀。
可以用合適的輸遞途徑輸遞或施用這些化合物，如，口服、靜脈內、皮下、肌肉內、舌下、顱骨內、硬膜外、氣管內、直腸、陰道等。最好的是，這種化合物是通過口服或通過合適的非腸胃途徑施用的。可以和藥學上可接受的常規的藥物載體一起製備該化合物。任選地，可以將一種或多種本發明的化合物和其它活性劑混合。
精通此領域的技術人員可以容易的選擇出合適的藥學上可接受的載體。例如，合適的固體載體其中包括一種或多種可作為潤滑劑、增溶劑、懸浮劑、填充劑、助流劑、濃縮輔助物、粘合劑或片劑崩解劑或成膠囊材料的物質。在粉劑中，載體是細微分散的和細微分散的活性成分混合的固體。在片劑中，活性成分和具有必需的濃縮特性等合適特性的載體混合併被壓製成所需的形狀和尺寸。合適的固體載體包括，例如，澱粉、糖類(例如包括乳糖和蔗糖)、磷酸二鈣、纖維素(例如包括微晶纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉)和高嶺土。
在製備溶液劑、懸浮劑、乳劑、糖漿劑和酏劑時可以使用液體載體。本發明的活性成分可以溶解或懸浮在如水、有機溶劑、這兩者的混合物或藥學上可接受的油或脂等藥學上可接受的載體中。液體載體可以含有其它合適的藥物添加劑，如增溶劑、乳化劑、緩衝劑、懸浮劑、增稠劑、濃度調節劑、穩定劑或滲透壓調節劑。供口服和腸道外施用的液體載體的合適例子包括水(尤其是含有上述添加劑，如纖維素衍生物，較好的是羧甲基纖維素鈉溶液的水)、醇類(包括一元醇和多元醇，如甘油)和它們的衍生物，以及油類(如分餾的椰子油、花生油、玉米油、花生油和芝麻油)。為腸道外施用，這種載體還可以是油脂，如油酸乙酯和肉豆蔻酸異丙酯。在無菌液體中使用了無菌液體載體以供腸道外施用。
任選地，本發明的組合物中可以包括通常用於藥物組合物製備的添加劑。這種成分包括，例如，甜味劑或其它芳香劑、染色劑、防腐劑和抗氧化劑(如維生素E、抗壞血酸、BHT和BHA)。
無菌溶液或懸浮液形式的液態藥物組合物可用在，例如，肌肉內、腹膜內或皮下注射。也可以靜脈內施用無菌溶液。口服施用可以是液體或固體組合物的形式。
優選的藥物組合物為單位劑型，如片劑或膠囊劑。在這種形式中，此組合物被細分成含有合適量活性成分的單位劑量；此單位劑型可以是包裝的組合物，如包裝的粉末、小瓶、安瓿、預裝填的注射器或含有液體的小袋。例如單位劑型可以是其膠囊或片劑，或者它可以是包裝形式的適當量的任何此類組合物。
如此所述，本發明化合物的治療或預防有效量是可減輕疾病(如AD)症狀，或可防止症狀發生或防止更加嚴重的症狀發生的化合物的量。通常，本發明化合物的單獨劑量(即單位量，如片劑)可以在約1μg/kg-約10g/kg的範圍內，更好的是為10mg/kg-約5g/kg，最好是約1mg/kg-約200mg/kg。理想的是，這些量是以日為基礎提供的。然而，可以由主治醫師主觀確定在治療或預防特定認知缺陷或其它症狀中所用的劑量。其中的變化包括特定的認知缺陷和患者的體積、年齡和響應模式。例如，基於本發明化合物的活性曲線和潛能，起始劑量約為每天10mg，然後逐步增加日劑量直至每天約200mg，這可以在人類中提供所需的劑量水平。
或者，可能需要使用持續輸遞裝置，以避免患者以日為基礎的攝取藥物的需要。「持續輸遞」被定義為延遲活性劑(即本發明的化合物)的釋放，直到放置在輸遞環境中以後，然後藥劑在隨後的時間中持續釋放。精通此領域的技術人員知道合適的持續輸遞裝置。例如，合適的持續輸遞裝置的例子包括水凝膠(例如參見例如參見美國專利第5,266,325號；4,959,217號；和5,292,515號)，滲透泵，如Alza(美國專利第4,295,987號和美國專利第5,273,752號)或Merck(歐洲專利第314,206號)等人描述的；疏水膜物質，如乙烯基異丁烯酸酯(EMA)和乙烯乙酸乙烯(EVA)；生物再吸收聚合物系統(例如參見Bioxid和Cellomeda的國際專利公布第WO 98/44964號；美國專利第5,756,127號美國專利第5,854,388號)；還描述了其它的生物再吸收灌輸裝置，例如包括聚酯、聚酐、或乳酸/乙醇酸共聚物(例如參見美國專利第5,817,343號(Alkermes Inc.))。為用在這種持續輸遞裝置中，可以按這裡的描述製備本發明的化合物。
實施例提供了以下實施例以闡明本發明的表化性合物的製造和活性，並闡明了它們在篩選測定中的性能。精通此領域的技術人員應該認識的是，儘管在以下實施例中列出了特定的試劑和條件，但這些試劑和條件不受本發明限制。
實施例13-溴-5-氯-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺 在(S)-+-異亮氨醇(23 mg，0.2mmol)的THF溶液(3mL)中加入三乙胺(46μL，0.24mmol)和3-溴-5-氯噻吩-2-磺醯氯(59.2mg，0.2mmol)。將溶液攪拌8-16小時，然後濃縮。將殘餘物溶解在MeOH(1.5mL)中並通過半製備的RP-HPLC1純化以得到實施例1(20.3mg)。
按照實施例1中列出的方法，用3-溴-5-氯噻吩-2-磺醯氯、5-溴噻吩-2-磺醯氯、3-溴-2-氯噻吩-5-磺醯氯、5-氯噻吩-2-磺醯氯、2，5-二氯噻吩-3-磺醯氯、2，3-二氯噻吩-5-磺醯氯和2-噻吩磺醯氯製造了以下化合物(實施例1-7，表1)。

表1(LCMS2數據分子例子和保留時間)
實施例85-氯-N-[(1S)-1-(羥甲基)-2-甲基丙基]噻吩-2-磺醯胺
在L-纈氨醇(25.8mg，0.25mmol)的THF溶液(3mL)中加入三乙胺(58μL，0.24mmol)和5-氯噻吩-2-磺醯氯(54mg，0.25mmol)。將溶液攪拌8-16小時，然後濃縮。將殘餘物溶解在MeOH(1.5mL)中並通過半製備的RP-HPLC1純化以得到實施例8(19.5mg)。
按照實施例8中列出的方法，用5-噻吩-2-磺醯氯和5-溴噻吩磺醯氯和L-纈氨醇和D-纈氨醇製備以下化合物(實施例8-10，表2)。
表2(LCMS2數據分子離子和保留時間)
實施例114，5-二溴-N-[(1S)-1-(羥甲基)-2-甲基丙基]噻吩-2-磺醯胺
在(S)-(+)-2-氨基-3-甲基-1-丁醇(20.6mg，0.2mmol)的THF溶液(3mL)中加入三乙胺(46μL，0.24mmol)和4，5-二溴噻吩-2-磺醯氯(68mg，0.2mmol)。將溶液攪拌8-16小時，除去溶劑並通過RP-HPLC1純化殘餘物以得到實施例11(49.6mg)。
表3(LCMS2數據分子離子和保留時間)
實施例125-氯-N-[(1S)-1-環己基-2-羥乙基]噻吩-2-磺醯胺
A.步驟1在L-環己基-甘氨酸(48.5mg，0.25mmol)的THF(2mL)中加入氫化鋁鋰(1M的THF溶液)(0.8mL，0.8mmol)，並在60℃將溶液加熱4小時。在25℃將溶液攪拌8-16小時。加入水(45μL)、15％的氫氧化鈉水溶液(45μL)和水(105μL)結束反應，每次加入時劇烈攪拌。然後過濾並濃縮混合物。
B.步驟2在步驟1的殘留物的THF溶液(3mL)中加入三乙胺(69μL，0.50mmol)和5-氯噻吩-2-磺醯氯(54.3mg，0.25mmol)。將溶液攪拌8-16小時，除去溶劑並通過RP-HPLC1純化殘餘物以得到實施例12(25.9mg)。
按照實施例12中列出的方法，用5-氯噻吩-2-磺醯氯和5-溴噻吩-2-磺醯氯以及L-環己基甘氨酸、β-甲基-DL-苯丙氨酸和L-別-異亮氨酸製備了以下化合物(實施例12-17，表4)。
表4(LCMS2數據分子離子和保留時間)
實施例185-溴-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺1，1-二氧化物 A.步驟1在(S)-+-異亮氨醇(58.6mg，0.5mmol)的DCM(5mL)溶液中加入三乙胺(210μL，1.5mmol)和5-溴噻吩-2-磺醯氯(130.8mg，0.5mmol)。將溶液攪拌8-16小時，然後濃縮。
B.步驟2將步驟2的殘餘物(0.5mmol)溶解於二氯甲烷(3mL)並加入間-氯過苯甲酸(2.5mmol)。將溶液攪拌8-16小時，除去溶劑並通過RP-HPLC純化殘餘物以得到實施例18(4.3mg)。LCMS2數據分子離子和保留時間，375.9M+H)；3.37min。
實施例195-氯-N-[1-(羥甲基)-2，3-二甲基戊基]噻吩-2-磺醯胺 A.步驟1在氰化鈉(735.15mg，15mmol)和碳酸銨(1.92g，20mmol)的EtOH/H2O溶液(1∶1，35mL)中加入2，3二甲基戊醛(570.95mg，5mmol)。將溶液在50℃加入20h，然後濃縮。
B.步驟2將步驟1的殘餘物(5mmol)溶解於35mL 3N的氫氧化鈉溶液，並在95℃加熱22h。繼續攪拌8-16小時，然後除去溶劑。
C.步驟3在步驟2的殘餘物(2.5mmol)的THF(10mL)溶液中加入氫化鋁鋰(1M的THF溶液)(5mL，5mmol)，並將溶液在60℃加熱4h。將溶液在25℃攪拌8-16h。加入水(285μL)、15％的氫氧化鈉水溶液(285μL)和水(665μL)以結束反應，每次加入時劇烈攪拌。然後過濾並濃縮混合物。
D.步驟4在步驟3的殘餘物(0.5mmol)的THF(5mL)溶液中加入三乙胺(83.7μL，0.6mmol)和5-氯噻吩-2-磺醯氯(108.54mg，0.5mmol)。將溶液攪拌8-16小時，除去溶劑並通過RP-HPLC1純化殘餘物以得到實施例19(46.1mg)。
按照實施例19中列出的方法，用2，3二甲基戊醛、2-甲基戊醛、2-乙基己醛、2，4，6-三甲基-3-環己烯-1-甲醛、1，2，3，6-四氫-苯甲醛、環戊基甲醛製造了以下化合物(實施例19-24，表5)。
表5(LCMS2數據分子離子和保留時間)
實施例255-溴-N-[(1S)-1-(羥甲基)-1，2-2甲基丙基]噻吩-2-磺醯胺
A.步驟1在(S)-α-甲基纈氨酸(131mg，1mmol)的THF溶液(5mL)中加入氫化鋁鋰(1M的THF溶液)(2mL，2mmol)，並將溶液在60℃加熱4h。將溶液在25℃攪拌8-16h。加入水(114μL)、15％的氫氧化鈉水溶液(114μL)和水(114μL)以結束反應，每次加入時劇烈攪拌。然後過濾並濃縮混合物。
B.步驟2在步驟1殘餘物(0.5mmol)的THF溶液(2mL)中加入三乙胺(83.7μL，0.6mmol)和5-溴噻吩-2-磺醯氯(130.8mg，0.5mmol)。將溶液攪拌8-16小時，除去溶劑並通過RP-HPLC1純化殘餘物以得到實施例25(50.8mg)。
按照實施例25中列出的方法，用5-溴噻吩-2-磺醯氯和5-氯噻吩-2-磺醯氯製備了以下化合物(實施例25-26，表6)。
表6(LCMS2數據分子離子和保留時間)
實施例275-氯-N-[(1S，2R)-1-(羥甲基)-2，4-二甲基戊基]噻吩-2-磺醯胺
A.步驟1將4-甲基-2-戊烯酸(7.6mL，40mmol)的THF溶液(100mL)冷卻至-78℃。用針筒按照順序加入三乙胺(5.85mL，42mmol)和三甲基乙醯氯(新戊醯氯)(5.17mL，42mmol)。用冰浴替代乾冰浴，並將反應物在0℃攪拌1h，然後將反應物冷卻至-78℃。
在一個單獨的燒瓶中將(R)-(+)-4-苄基-2-噁唑烷酮(7.0g，40mmol)溶解於THF(100mL)並冷卻至-78℃，然後通過針筒加入n-丁基鋰(1.6M，25mL)。將混合物攪拌20分鐘，然後通過除去隔膜加入反應混合物並迅速由一個燒瓶倒進另一個燒瓶(注意由於混合物中懸浮的氯化三甲基銨，通過套管轉移反應混合物會失敗)。
將所得混合物在-78℃攪拌30min，然後在25℃加熱1-2h，然後用飽和的NH4Cl水溶液(100mL)終止反應。在旋轉蒸發器中除去揮發性物質並用水(200mL)和乙酸乙酯(2×200mL)稀釋含水漿液。通過無水MgSO4乾燥合併的有機相，過濾並濃縮。產物可以從溶液中結晶出來且為高純度的。如果需要純化，可以用20-30％的乙酸乙酯的己烷溶液通過快速層析純化粗產品。
B.步驟2在冷卻至-40℃的溴化銅(I)/二甲基硫化物複合物(246mg，1.2mmol)的THF/DMS(2∶1，15mL)溶液中加入甲基溴化鎂(2.4mL，1M的THF溶液，2.4mmol)。將溶液攪拌10分鐘並使其升溫至-15℃。將混合物冷卻至-40℃並加入步驟1產物(245mg，1mmol)的THF溶液(6mL)。將溶液在25℃攪拌8-16h。將溶液再冷卻至-78℃並加入N-溴琥珀醯亞胺(356mg，2mmol)的THF溶液(2mL)。使溶液升至0℃並在0℃振蕩3h。用1∶1的飽和的碳酸銨溶液和0.5N的硫酸氫鉀(5mL)終止反應。倒出有機相併濃縮。
C.步驟3在溶解於乙腈(5mL)的步驟3的產物中加入四甲基胍疊氮化物(0.6mL，4mmol)。將溶液攪拌72-120h。將溶液濃縮至幹，再溶解於CH2Cl2並加入1N的HCl(2mL)。分離各層並通過用CH2Cl2(5mL)洗滌的矽膠墊過濾有機層，並濃縮。
D.步驟4在0℃的步驟3產物(131mg，1mmol)的THF溶液中(5mL)加入氫化鋁鋰(1M的THF溶液)(2mL，2mmol)，並將溶液在25℃攪拌4h。加入水(114μL)、15％的氫氧化鈉水溶液(114μL)和水(114μL)以結束反應，每次加入時劇烈攪拌。然後過濾並濃縮混合物。
E.步驟5在步驟4殘餘物(0.5mmol)的THF(2mL)溶液中加入三乙胺(83.7μL，0.6mmol)和5-氯噻吩-2-磺醯氯(108mg，0.5mmol)。將溶液攪拌8-16小時，除去溶劑並按照實施例1的描述純化殘餘物以得到50.8 mg產物。
R＝甲基、乙基、正丙基、異丙基、己基、苯基聯苯基、3-吡啶基、2-呋喃基R』 MgX＝甲基、乙基、異丁基、己基、苯基、4-MeOPh按照實施例27中列出的方法，用5-氯噻吩-2-磺醯氯和巴豆酸、2-戊烯酸、2-己烯酸、2-辛烯酸、肉桂酸、呋喃基丙烯酸、4-甲基-2-戊烯酸、以及4-苯基肉桂酸和甲基、乙基、異丁基、4-甲氧基苯基、己基和苯基溴化鎂製備了以下化合物(實施例27-55，表7)。
表7(LCMS2數據分子離子和保留時間)
按照實施例27中列出的方法，用5-溴噻吩-2-磺醯氯和巴豆酸、2-戊烯酸、2-己烯酸、2-辛烯酸、肉桂酸、β-(3-吡啶基)-丙烯酸、呋喃基丙烯酸、4-甲基-2-戊烯酸以及4-苯基肉桂酸和甲基、乙基、異丁基、4-甲氧基苯基、己基和苯基溴化鎂製備了以下化合物(實施例56-76，表8)。
表8(LCMS2數據分子離子和保留時間)
實施例77A5-氯-N-[(1S，2R)-2-乙基-1-(羥甲基)辛基]噻吩-2-磺醯胺
按照實施例27(步驟1和2)中列出的方法，將2-戊烯酸和4R-4-苄基-2-噁唑烷酮偶聯以製得R-3-(2』-戊烯基)-4-苄基-2-噁唑烷酮。加入的己基溴化鎂隨後被N-溴琥珀醯亞胺捕獲。檢查後，在使用5％的含在己烷中的乙醚的矽膠上進行快速層析，得到了大約2∶1的(1R-2R)-(1R-2S)-3-(2』-溴-3』乙基壬基)-4-苄基-2-噁唑烷酮的混合物。
用實施例27(步驟3-5)中的方法將各個異構體轉變為相應的磺醯化的氨基醇。
表9(LCMS2數據分子離子和保留時間)
實施例795-氯-N-[(1S)-1-(羥甲基)-2-(甲基氨基)丁基]噻吩-2-磺醯胺
A.步驟1在0℃的D-絲氨酸(1.05g，10mmol)的H2O/THF(1∶1，100mL)溶液中加入氫氧化鈉(2.17g，30mmol)和5-氯噻吩-2-磺醯氯(2.17g，10mmol)。將溶液攪拌2-3h，然後濃縮有機相，用1N的HCl酸化含水相併將其提取進乙酸乙酯並濃縮。
B.步驟2-78℃下，在溶解於的THF(25mL)的步驟1的殘餘物中加入乙基溴化鎂(7.5mL，7.5mmol)。將混合物加熱至25℃，然後攪拌48h。然後用1N HCl酸化，提取進乙酸乙酯並濃縮。
C.步驟3在溶解於DMF(500μL)的步驟2的殘餘物(0.1mmol)中加入CH2Cl2(1.5mL)、乙酸(12μL，0.2mmol)和甲基胺(2M的THF溶液)(100μL，0.2mmol)。將反應混合物攪拌5分鐘並加入三乙酸基硼氫化鈉(105.6mg，0.5mmol)。將溶液攪拌8-16h並通過RP-HPLC1純化以得到實施例79(6.8mg)。
按照實施例79中列出的方法，用甲基、乙基或戊基溴化鎂和甲胺(2M的THF溶液)、乙胺(2M的THF溶液)、乙醇胺、苄胺和環戊胺製造了以下化合物(實施例79-86，表10)。
表10(LCMS2數據分子離子和保留時間)
實施例875-氯-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-N-(2-苯氧乙基)噻吩-2-磺醯胺
A.步驟1在L-異亮氨酸甲酯鹽酸鹽(1.82g，10mmol)和5-氯噻吩-2-磺醯氯(1.82g，10mmol)的溶液中加入三乙胺(4.18mL，30mmol)。在60℃將混合物攪拌過夜，然後過濾並濃縮。在使用10％的溶於己烷的乙酸乙酯的矽膠上通過快速層析純化粗產品以得到2.53g 5-氯噻吩-2-磺醯異亮氨酸甲酯。
B.步驟2在溶於DMF(1mL)的5-氯噻吩-2-磺醯異亮氨酸甲酯溶液(103mg，0.25mmol)中加入β-溴苯乙醚(55mg，0.5mmol)和碳酸鉀(103mg，0.75mmol)。將反應物在25℃振蕩過夜，然後濃縮。
C.步驟3將步驟2的殘餘物溶於5％的溶於THE(1mL)的甲醇並加入硼氫化鋰(11mg，0.5mmol)。將反應物在25℃振蕩2天，然後加入水(1mL)終止反應，並提取進乙酸乙酯(3.5mL)。將有機相蒸發並通過RP-HPLC1純化得到實施例87(48mg)。
以下化合物(實施例87-88，表11)是用β-溴苯乙醚和3-氯苄基溴並按照實施例87中列出的方法製造的。
表11(LCMS2數據分子離子和保留時間)
實施例895-氯-N-[(S)-2-羥基-1-苯基乙基]噻吩-2-磺醯胺
在溶於CH3CN(200μL)的(S)-(+)-2-苯基甘氨醇(6.8mg，0.05mmol)溶液中加入Et3N(105μL，1M溶於CH3CN)和5-氯噻吩-2-磺醯氯(10.9mg，0.05mmol)作為CH3CN溶液(200μL)。將小瓶蓋上並在40℃下振蕩8-12h。在真空下除去溶劑，並將殘餘物溶解於1.6mL DMSO(0.03M)。
按照實施例89中列出的方法，用5-氯噻吩-2-磺醯氯和5-溴噻吩-2-磺醯氯和(S)-(+)-2-苯基甘氨醇、L-亮氨醇、DL-2-氨基-1-己醇、2-氨基-2-甲基-1-丙醇、2-氨基-2-乙基-1、3-丙二醇、環亮氨醇、(S)-環己基丙氨醇、L-苯基丙氨醇、L-甲硫氨醇、DL-2-氨基-1-戊醇、L-叔-亮氨醇、氯黴素、(S)-(+)-2-氨基-1-丁醇，(S)-苄基-L-半胱氨醇、苄基-L-蘇氨醇、4-甲基苄基-H-半胱氨醇、苄基-H-酪氨醇和L-蘇氨醇製造了以下化合物(實施例89-117，表12)
表12(LCMS數據分子離子和保留時間)
實施例1185-氯-N-[(S，S)-1-甲醯基2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺
A.步驟1在溶於CH3CN(100mL)的5-氯噻吩-2-磺醯氯(11g，50.7mmol)溶液和(S)-異亮氨醇(6.2g，53mmol)中加入Et3N(11mL，109mmol)。在50℃加入反應混合物並攪拌24h。除去溶劑並將油狀物溶解於EtOAc(100mL)。用水(2×100mL)、鹽水(1×100mL)洗滌溶液並通過Na2SO4上乾燥。除去溶劑以得到13.85g(88％)所需的磺醯胺。
B.步驟2將分子篩(15g，4)在無水CH2Cl2(175mL)中攪拌10min。然後加入吡啶鎓氯鉻酸鹽(8.6g，39.9mmol)和矽膠(9g)的混合物，並再將混合物攪拌10min。在懸液中加入溶於CH2Cl2(15mL)的5-氯噻吩-2-磺醯異亮氨醇(4g，13.4mmol)，並將所得漿液攪拌2h。過濾反應混合物並除去溶劑。將殘餘物用於BiotageTM，用20％ EtOAc/己烷洗脫以得到3.22g(81％)醛(LCMS＝294.21(M-H)，rt＝1.10min)。
實施例1195-氯-N-[(S，S)-1-(1-羥乙基2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺
在溶於THF(400μL)的實施例118的醛溶液(23.7mg，0.08mmol)中加入甲基溴化鎂(400μL，1.0M，溶於THF，5eq)。蓋上瓶子並在50℃振蕩12h。用飽和的NH4Cl水溶液(1.5mL)和EtOAc(1mL)終止反應。將有機層轉移到已稱重的瓶中並用EtOAc(1mL)提取含水層。將合併的有機物濃縮(Savant，中熱)並將得到的非對映體的混合物溶於DMSO以使最終濃度為30mM。
按照實施例119中列出的方法，用5-氯噻吩-2-磺醯異亮氨醇(實施例118)和5-溴噻吩-2-磺醯異亮氨醇(按實施例118製備)甲基溴化鎂、環戊基溴化鎂、己基溴化鎂、戊基溴化鎂、丁基溴化鎂、異丙基溴化鎂、鄰-甲苯基溴化鎂、叔-丁基溴化鎂、異丁基溴化鎂、乙烯基溴化鎂、烯丙基溴化鎂、乙基溴化鎂、4-氟苯基溴化鎂、4-氯苯基溴化鎂、2-甲基-1-丙烯基溴化鎂、異丙烯基溴化鎂、4-甲氧基溴化鎂、1-甲基-1-丙烯基溴化鎂、2-[2-(1，3-二噁烷基)]乙基溴化鎂、3-丁烯基溴化鎂、1-丙炔基溴化鎂、4-硫代苯甲醚溴化鎂和4-N，N-二甲基苯胺溴化鎂製備了以下化合物(實施例119-154，表13)。
表13(LCMS數據分子離子和保留時間)
表13(續表)
實施例1555-氯-N-{(S，S)-1-[(S)-環己-2-烯-1-基(羥基)甲基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺醯胺
在兩個含有懸浮於THF(3mL)的鎂屑(60mg，2.5mmol)的微量瓶中加入2-溴環己烯(288μL，2.5mmol)，然後加入5-氯噻吩-2-磺醯異亮氨醇(1mL 1M的THF溶液，1mmol，實施例118)。蓋上瓶子並在50℃振蕩18h。將瓶子冷卻並加入飽和NH4Cl水溶液(1mL)。將瓶子渦旋振蕩並將有機層轉移到已稱重的瓶中並用EtOAc(1mL)提取含水層。在真空下濃縮合併的有機物並用以下條件對殘餘物進行半製備RP-HPLC。
半製備RP-HPLC條件。
柱子Spring Axial加壓柱；Kromasil C18粒徑10μm；50×150mm溶劑A水(0.1％ TFA)溶劑B乙腈溶劑梯度24分鐘內15-95％，整個循環35min流速60ml/min基於UV(或ELSD)吸收收集產物峰。
按照實施例155中列出的方法用2-溴環己烯、巴豆基溴、1-溴-2-戊烯、3-溴-2-甲基丙烯和肉桂基溴製備了以下化合物(實施例155-161，表14)。
表14(LCMS數據分子離子和保留時間)
實施例162
5-氯-N-[(S，S)-1-(1-羥基-1-甲基乙基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺 A.步驟1在溶於CH3CN(20mL)的5-氯噻吩-2-磺醯氯(1.09g，5mmol)溶液中加入(L)-異亮氨酸甲酯鹽酸鹽(908.5mg，5mmol)作為CH3CN(10mL)和Et3N(1mL，7.2mmol)的溶液。將反應混合物在50℃加熱並振蕩3天。除去溶劑並將油相溶於EtOAc(10mL)。用水(5mL)、飽和的NH4OH(5mL)和鹽水(5mL)洗滌溶液並在MgSO4上乾燥。除去溶劑以得到1.44g(88％)所需的磺醯胺。
B.步驟2在溶於THF(500μL)的步驟1的酯溶液(40.7mg，0.125mmol)中加入甲基溴化鎂(333μL，3.0M溶於THF，8eq)。蓋上瓶子並在50℃振蕩12h。用飽和的NH4Cl水溶液(1.5mL)和EtOAc(1mL)終止反應。將有機層轉移到已稱重的瓶中並用EtOAc(1mL)提取含水層。將合併的有機物濃縮(Savant，中熱)並將得到的非對映體的混合物溶於DMSO以使最終濃度為30mM。
按照實施例162中列出的方法用5-氯噻吩-2-磺醯異亮氨酸甲酯和5-溴噻吩-2-磺醯異亮氨酸甲酯(來自步驟2)和甲基溴化鎂、，戊基溴化鎂、苯基溴化鎂、烯丙基溴化鎂、乙基溴化鎂、4-氯苯基溴化鎂、異丙烯基溴化鎂、4-甲氧基溴化鎂、1-甲基-1-丙烯基溴化鎂、3-丁烯基溴化鎂、1-丙炔基溴化鎂、1-萘基溴化鎂製備了以下化合物(實施例162-176，表15)。
表15(LCMS數據分子離子和保留時間)
實施例1775-氯-N-[1-(羥甲基)環己基]噻吩-2-磺醯胺
A.步驟10℃下。在1-氨基-1-環己烷羧酸(5g，35mmol)和THF(100mL)的懸液中加入硼烷二甲基硫化物(50mL，2M溶於THF)。用冷浴終止反應並在25℃將反應物攪拌過夜。加入NaOH(3M，100mL)並將混合物攪拌4h。用K2CO3使反應混合物飽和並用Et2O(2×100mL)提取。用鹽水(100mL)洗滌合併的有機物並在MgSO4上乾燥以得到4.35g(96％)所需的氨基醇。
B.步驟2按實施例89將氨基醇磺醯化。
按照實施例177中列出的方法，用1-氨基-1-環己烷羧酸、2-氨基-2-降莰烷羧酸、D，L-1-氨基二氫化茚-1-羧酸和2-氨基二氫化茚-2-羧酸鹽酸鹽的氨基醇和5-氯噻吩-2-磺醯氯和5-溴噻吩-2-磺醯氯製備了以下化合物(實施例177-183，表16)。
表16(LCMS 數據分子離子和保留時間)
用實施例119中列出的方法，用5-氯噻吩-2-磺醯異亮氨醇和5-溴噻吩-2-磺醯異亮氨醇與甲基溴化鎂、正丙基氯化鎂和烯丙基溴化鎂製備了用以下化合物(實施例184-195，表17)。按照實施例155中列出的條件通過半製備RP-HPLC分離所得非對映體的混合物。
表17(LCMS Data3分子離子和保留時間)
按以下方法製備純的合成的實施例189的非對映體。
A.步驟1在-78℃的BOC-保護的異亮氨酸(13.17g，48mmol)的Weinreb醯胺溶液(參見F。Roux等，Tetrahedron，1994，50(18)，5345-5360)中加入烯丙基溴化鎂(90mL，1M，溶於THF)。用冷浴終止反應並將反應物在25℃下攪拌過夜。加入冷的HCl水溶液(150mL，1M)終止反應。攪拌30min後，分離各層並用乙酸乙酯(3×75mL)提取含水層。在MgSO4上乾燥合併的有機物，除去溶劑以得到8.41g(69％)所需的酮。
B.步驟2在溶於MeOH(200mL)的步驟1的酮溶液中加入固體NaBH4(1.5g，39.6mmol)。將反應物在25℃攪拌5h，隨後在真空下除去溶劑。將殘餘物溶解於乙酸乙酯(100mL)並用水洗滌(2×50mL)。將粗製品用於BiotageTM，用5-15％ EtOAc/己烷洗脫以得到4.12g(49％)所需的醇。
C.步驟3將步驟2的醇溶液(4.12g，16mmol)、CH2Cl2(75mL)和TFA(15mL)在25℃攪拌15min。用NaOH溶液(15mL，1M)終止反應，然後用NaOH顆粒鹼化至pH 12。用CH2Cl2(2×50mL)提取所得溶液，並用水(25mL)、鹽水(25mL)洗滌合併的有機物，在MgSO4上乾燥以得到2.44g(97％)所需的氨基醇，無需進一步純化即可將其用於步驟4。
D.步驟4按實施例89將此氨基醇磺醯化。用下述方法獲得純的合成的實施例193的非對映體在溶於純EtOH(50mL)的BOC-氨基高烯丙基醇溶液(1.1g，4.27mmol，見實施例188的步驟1-2)中加入Pd/C(110mg)。將燒瓶至於氫氣下(氣球)並在25℃攪拌。完全反應後(2h)，通過Celite墊子過濾混合物並除去溶劑以得到1.16g(定量)丙基類似物。BOC基團被除去，同時按照實施例189中列出的方法將胺磺醯化。
實施例1965-氯-N-[(S，S)-2-甲基-1-(2，2，2-三氟-1-羥乙基)丁基]噻吩-2-磺醯胺 在0℃的溶於THF(5mL)的5-氯噻吩-2-磺醯異亮氨醇(770mg，2.6mmol，參見實施例118，步驟1和2)溶液中加入TMS-CF3(5mL，0.5M溶於THF)。用TBAF(250μL，1M in THF)處理所得混合物。除去冷浴並在25℃將反應物攪拌過夜。用HCl(25mL，2M)終止反應並用乙酸乙酯(3×15mL)提取所得溶液。用水(25mL)和鹽水(25mL)洗滌合併的有機提取物，然後在MgSO4上乾燥。對殘餘物進行RP-HPLC(見實施例155以了解過程)以得到74 mg所需產品(m/z＝364.0(M-H)，rt＝1.23min)。
分別按照實施例177(步驟12)、118(步驟2)和119中列出的方法，用1-氨基-1-環己烷羧酸和5-氯噻吩-2-磺醯氯與烯丙基溴化鎂和2-甲基烯丙基氯化鎂合成了以下化合物(實施例197-198，表18)。
表18(LCMS數據分子離子和保留時間)
實施例199A5-氯-N-[(S)-2-羥基-1-(4-羥基環己基)乙基]噻吩-2-磺醯胺
A.步驟1在溶於NaOH(20mL，3M)的4-羥基-L-苯基甘氨酸(10g，60mmole)溶液中加入水(380mL)和拉尼鎳(30g)。在氫高壓反應器中於60-80℃、約3atm下，將反應混合物氫化36h。通過Celite過濾反應混合物並將體積減至約80-100mL，並加入二噁烷(100mL)。將所得混合物冷卻至0℃並用Et3N(10mL)和5-氯噻吩-2-磺醯氯(16g，72mmoles)處理。使反應物升至25℃並攪拌過夜。除去二噁烷和Et3N並用1N的HCl水溶液稀釋保留的水溶液。收集所得沉澱，用水和乙醚洗滌以得到白色固體狀的所需產物(12g，50％，兩個步驟)(ELSD測得100％純，m/z＝352(M-1))。
B.步驟20℃下，在溶於無水THF的(S)-N-(5-Cl-噻吩-2-磺醯)-4-羥基環己基甘氨酸(12g，33.99mmol，步驟1)懸液中逐滴加入硼烷-THF(110mL，1M，溶於THF，110mmoles)。將所得混合物在25℃下攪拌一周。用0℃的HCl(75mL，1M)終止反應並在25℃攪拌1h。除去THF並收集沉澱，用水(含有少量乙醚)洗滌，並乾燥以得到白色固體狀的所需產品(9g，78％)(ELSD測得100％純，m/z＝338.5(M-1)，HPLC保留時間3＝0.64min)。
實施例1995-氯-N-[(S)-2-羥基-1-(4-甲氧基環己基)乙基]噻吩-2-磺醯胺 A.步驟1將溶於無水苯(120 mL)實施例199A的5-氯-N-[(S)-2-羥基-1-(4-羥基環己基)乙基]噻吩-2-磺醯胺(6.4g，18.83mmol)、2，2-二甲氧基丙烷(7mL，5.65mmol)和TsOH·H2O(72mg，0.38mmol)的混合物回流。1小時後，苯在大氣壓下緩慢蒸餾，最終體積為10mL。加入新鮮的苯(100mL)和2，2-二甲氧基丙烷(5mL)並重複上述操作。將殘餘物分散在乙醚和飽和NaHCO3之間。用乙醚(3×100mL)提取含水層，合併提取物並在MgSO4上乾燥。以1∶5 EtOAc/CH2Cl2的作為洗脫液，通過柱層析純化粗產品以得到N，O-丙酮化合物(5.77g，81％)(100％，m/z＝380(M+1))。
B.步驟2在0 ℃的溶於THF(7mL)和DMF(2mL)的(S)-2-(5-Cl-噻吩-2-氨磺醯)-2-(4-羥基環己基)-N，O丙酮化合物(379mg，1mmol)溶液中加入NaH(80mg，2mmol)。將所得反應物在0℃攪拌10min，然後加入碘甲烷(311μL，5mmol)。使反應物回復25℃並攪拌18h。除去溶劑並加入乙酸(80％，15mL)。將混合物在25℃下攪拌一周。在真空中除去乙酸後，用MeOH/CH2Cl2(3∶10)洗脫，對殘餘物進行柱層析以得到303 mg(86％)所需產品。
按照實施例199中列出的方法，用(S)-2-(5-Cl-噻吩氨磺醯)-2-(4-羥基環己基)-N，O丙酮化合物(來自實施例199，步驟1)和碘甲烷、1-溴丙烷、烯丙基溴、苄基溴、2-吡啶甲基氯鹽酸鹽和3-吡啶甲基氯鹽酸鹽製備了以下化合物(實施例199-202B，表19)。
表19(LCMS Data3分子離子和保留時間)
實施例203N-[1-乙醯基-4-(羥甲基)哌啶-4-基]-5-氯噻吩-2-磺醯胺。
A.N-[1-Boc-4-(羧酸)哌啶-4-基]-5-氯噻吩-磺醯胺在25℃下將三乙胺(2.28mL，1.66g，16.45mmol)加入溶於乙腈∶水(1∶1)(40mL)的1-Boc-4-氨基哌啶-4-羧酸(2.68g，10.973mmole)漿液中。在添加結束時漿液由淡黃色變為綠色溶液。將漿液微熱(5分鐘)以得到溶液。將混合物冷卻至0℃，逐滴加入溶於乙腈(8 mL)的5-氯噻吩-2-磺醯氯(2.62g，12.07mmol)(5min)。在25℃加熱此溶液過夜。19小時後，取出一份。TLC(9∶1 CH2Cl2∶CH3OH)說明反應進行了約90％。加入水(50mL)、CH2Cl2(50mL)和冰冷的1N HCl(10mL)終止反應。用水和飽和的NaCl洗滌有機層。在MgSO4上乾燥，過濾，並濃縮成黃色油狀物(2.1g)。通過柱層析(230-400目矽膠，洗脫液開始是溶於CH2Cl2的5％MeOH、最後是溶於CH2Cl2的10％ MeOH)純化粗產物，以得到白色無定形固體狀的N-[1-Boc-4-(羧酸)哌啶-4-基]-5-氯噻吩-2-磺醯胺(1.2g，25.7％)。質譜(-ESI)423(M-H)-。
B.N-[1-Boc-4-(羥甲基)哌啶-4-基]-5-氯噻吩-2-磺醯胺在0℃下，在30分鐘內將1N硼烷-THF(1.019g，12.14mL，11.86mmol)逐滴加入溶於無水四氫呋喃(15mL)的N-[1-Boc-4-(羧酸)哌啶-4-基]-5-氯噻吩-2-磺醯胺(1.2g，2.82mmol)溶液。在25℃加熱此溶液過夜，然後加入30mL溶於甲醇的10％的乙酸溶液終止反應。蒸發溶劑後，將粗產物溶於乙酸乙酯並用1M HCl、水和10％ NaHCO3洗滌。在MgSO4上乾燥，過濾，並濃縮以得到粗製的黃色油狀物(1.1g)。通過柱層析(230-400目矽膠，洗脫液開始用1∶3的EtOAc-己烷，最後是1∶1的EtOAc-己烷)純化粗產物，以得到無色油狀的N-[1-Boc-4-(羥甲基)哌啶-4-基]-5-氯噻吩-2-磺醯胺(0.79g，68.2％)。質譜(-ESI)409(M-H)-。
C.N-[4-(羥甲基)哌啶-4-基]-5-氯噻吩-2-磺醯胺鹽酸鹽在攪拌的溶於EtOAc(4mL)的N-[1-Boc-4-(羥甲基)哌啶-4-基]-5-氯噻吩-2-磺醯胺5(0.7g，1.7mmol)溶液中加入4N HCl(5mL)。在25℃攪拌此溶液。30分鐘後形成了絮狀溶液。2h後形成了沉澱。TLC(1∶1 EtOAc-己烷)說明完全反應進行。將溶劑減少至約2-3mL，用乙醚(6mL)稀釋並通過過濾漏鬥過濾。用乙醚(3×5mL)洗滌沉澱以得到無定形白色固體狀的N-[4-(羥甲基)哌啶-4-基]-5-氯噻吩-2-磺醯胺(0.48 g，90.7％)。質譜(+ESI)311(M+H)+。
D.N-[1-乙醯基-4-(羥甲基)哌啶-4-基]-5-氯噻吩-2-磺醯胺在0℃冰冷的溶於CH2Cl2(5 mL)和三乙胺(0.44mL，3.18mmol)的N-[4-(羥甲基)哌啶-4-基]-5-氯-噻吩-2-磺醯胺(0.19g，0.61mmol)溶液中逐滴加入溶於CH2Cl2(1mL)的乙醯氯(0.15g，1.894mmol)。在25℃加熱此溶液過夜(19h)。取出一份，TLC(1∶1 EtOAc-己烷)說明完全反應進行。用CH2Cl2(10mL)稀釋並用1N HCl(50mL)、飽和的NaHCO3水溶液(50mL)和NaCl(50mL)洗滌有機層。過濾，並濃縮以得到粗製的黃色油狀物(175mg)。通過柱層析(230-400目矽膠，洗脫液開始用1∶4的EtOAc-己烷，最後是1∶1的EtOAc-己烷)純化粗產物，以得到黃色油狀的N-[1-乙醯基-4-(羥甲基)-哌啶-4-基]-5-氯噻吩-2-磺醯胺(62mg，28.9％)。
質譜(+ESI)353(M+H)+。分析計算值C12H17ClN2O4S2.1.62 H2OC，37.29；H，5.70；N，7.26。實測值C，37.62；H，5.36；N，7.31。
實施例2045-氯-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-2-呋喃磺醯胺。
A.2-氯呋喃25℃下，在10分鐘內將1.6M nBuLi(15.37g，150mL，0.24mol)逐滴加入溶於無水乙醚(200mL)的呋喃溶液(13.6g，0.20mol)。逐滴加入完成後將反應混合物冷卻至-70℃。在此溫度下，在10分鐘內加入六氯乙烷溶液(49.8g，0.21mol)並使溫度不要超過-55℃。使反應混合物在-70℃保持3h。然後將其加熱至25℃，用冰水水解並用乙醚(100mL)提取水相兩次。合併的乙醚相用NaHCO3溶液(50mL)和水(50mL)分別洗滌一次並在MgSO4上乾燥。通過分級柱蒸餾去乙醚並在78-79℃收集產物以得到無色油狀的2-氯呋喃(20.0g，97.6％)。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.34(d，1H)；6.38(d，1H)；6.21(d，1H)。
B.5-氯呋喃-2-磺醯氯25℃下，在5分鐘內在氯磺酸(56.8g，32.4mL，0.487mol)中一次性加入五氯化磷(40.53g，0.1947mol)並將所得溶液在25℃攪拌10min。然後，一次性加入2-氯呋喃(20.0g，0.1947mol)，將所得黑色懸液加熱至55℃並保持1h，其間會有泡沫產生並破裂。然後將反應混合物倒入冰中並用CH2Cl2(250mL)提取所得懸液。通過硅藻土墊過濾有機物，用鹽水(70mL)洗滌並用MgSO4乾燥。在真空下除去溶劑以得到黑色油狀的5-氯呋喃-2-磺醯氯(14.1g，36.02％)。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ7.05(d，1H)；6.35(d，1H)。
C.5-氯-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-2-呋喃磺醯胺.
在0℃的溶於CH2Cl2(15mL)和三乙胺(2.69mL，19.38mmol)的L-異亮氨醇(1.5g，12.92mmol)溶液中逐滴加入溶於CH2Cl2(10mL)的5-氯呋喃-2-磺醯氯(3.376g，16.79mmol)。將溶液在25℃溫熱過夜(19h)。取出一份，TLC(1∶1 EtOAc-己烷)說明完全反應。用CH2Cl2(100mL)稀釋並用1N HCl(2×50mL)、飽和的NaCl水溶液(50mL)洗滌有機層。並在MgSO4上乾燥有機層，過濾，並濃縮以得到粗製的黑色油狀物(2.69g)。通過柱層析(230-400目矽膠，洗脫液開始用1∶4的EtOAc-己烷，最後是1∶1的EtOAc-己烷)純化粗產物，以得到無定形的白色固態5-氯-N-[(1S，2S-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-2-呋喃磺醯胺(0.98g，26.92％)。質譜(-ESI)280(M-H)-。分析計算值C10H16ClN2O4SC，42.63；H，5.72；N，4.97。
實測值C，42.34；H，5.65；N，4.77。
實施例205N-[(1S)-2-丁基-1-(羥甲基)己基]-5-氯-2-噻吩磺醯胺.

A.(4R)-4-苄基-3-[(E)-2-庚烯醯]-1，3-噁唑烷-2-酮在-78℃溶於THF(80mL)的2-庚烯酸(6 g，46.81mmole)溶液中逐滴加入三乙胺(6.85g，49.15mmol)和三甲基乙醯氯(6.05mL，49.15mmol)。將漿液在-78℃下攪拌5min，然後換成0℃的冷卻系統。在此溫度下攪拌1h。在單獨的燒瓶中將R-(+)-4-苄基-2-噁唑烷酮(8.295g，46.81mmol)溶液冷卻至-78℃並在10min內逐滴加入nBuLi(1.6M，46.8mmol)。在室溫下將無色溶液攪拌45min，並通過套管將其轉移到-78℃的酯溶液中。將黃色漿液在25℃溫熱過夜(19h)。取出一份，TLC(1∶1 EtOAc-己烷)說明完全反應。冷卻至0℃並通過加H2O(20mL)終止反應。用乙酸乙酯(200mL)稀釋並分離有機層。在MgSO4上乾燥有機層，過濾，並濃縮以得到粗製的黃色油狀物(13.69g)。通過柱層析(230-400目矽膠，洗脫液1∶4的EtOAc-己烷)純化粗產物以得到無色油狀的(4R)-4-苄基-3-[(E)-2-庚烯醯]-1，3-噁唑烷-2-酮(12.1g，92.80％)。質譜(-ESI)288(M-H)-。
B.(4R)-4-苄基-3-[(2R)-2-溴-3-丁基庚烯醯]-1，3-噁唑烷-2-酮將以THF(60mL)和二甲基硫化物(30mL)作為共溶劑的溴化銅(I)二甲基硫化物複合物(5.132g，24.967mmol)冷卻至-40℃，在10分鐘內逐滴加入正-丁基氯化鎂(25mL，49.93mmol)並攪拌20min同時加熱至-15℃。將黑色漿液冷卻至-40℃並在10分鐘內逐滴加入-40℃的溶於THF(20mL)的(4R)-4-苄基-3-[(E)-2-庚烯醯]-1，3-噁唑烷-2-酮溶液(6g，20.80mmol)。使反應物在25℃溫熱過夜(20h)。在冷的-78℃的上述黑色漿液中一次性加入N-溴琥珀醯亞胺(7.407g，41.61mmol)。使其回復至0℃並繼續攪拌3h。用1∶1的飽和的碳酸銨溶液和0.5N硫酸氫鉀終止反應。黑色漿液變為藍綠色。形成沉澱(淡藍色)。將其過濾。用乙酸乙酯(150mL)稀釋母液，在MgSO4上乾燥，過濾，濃縮以得到粗製的半固體狀態的(4R)-4-苄基-3-[(2R)-2-溴-3-丁基庚烯醯]-1，3-噁唑烷-2-酮。質譜(-ESI)423(M-H)-。
C.(4R)-3-[(2S)-2-疊氮基-3-丁基庚烯醯]-4-苄基-1，3-噁唑烷-2-酮將四甲基胍疊氮化物(TMGA)(5.398g，37.70mmol)逐滴(5min)加入25℃的溶於乙腈(50mL)的(4R)-4-苄基-3-[(2R)-2-溴-3-丁基庚烯醯]-1，3-噁唑烷-2-酮(4.0g，9.42mmol)溶液。將反應物攪拌4點。取出一份，TLC(1∶4 EtOAc-己烷)說明完全反應。在真空下除去溶劑。將所得黑色半固體溶於CH2Cl2(200mL)並用1N HCl(30mL)終止反應。在MgSO4上乾燥有機相，過濾，並在真空下濃縮以得到粗製的黃色油狀(4R)-3-[(2S)-2-疊氮基-3-丁基庚烯醯]-4-苄基-1，3-噁唑烷-2-酮(3.61g，99.1％)。質譜(-ESI)385(M-H)-。
D.(2S)-2-氨基-3-丁基-1-庚醇0℃下與20分鐘內在溶於THF(60mL)的LAH(1.219g，32.13mmol)漿液中逐滴加入(4R)-3-[(2S)-2-疊氮基-3-丁基庚烯醯]-4-苄基-1，3-噁唑烷-2-酮(3.6g，9.37mmol)。將反應物在36℃加入18h。將反應漿液(棕色)冷卻至0℃，用H2O(15mL)終止反應，並用1N NaOH(30mL)和H2O(15mL)洗滌。持續攪拌2h以得到白色漿液。過濾此漿液並再在MgSO4上乾燥母液，過濾，並在真空下濃縮以得到粗製的黃色油狀(2S)-2-氨基-3-丁基-1-庚醇(1.93g，73.75％)。質譜(+ESI)188(M+H)+。
E.N-[(1S)-2-丁基-1-(羥甲基)己基]-5-氯-2-噻吩磺醯胺。
將溶於CH2Cl2(20 mL)的5-氯噻吩-2-磺醯氯(2.42g，11.55mmol)溶液逐滴(5min)加入0℃的(4R)-3-[(2S)-2-疊氮基-3-丁基庚烯醯]-4-苄基-1，3-噁唑烷-酮(1.9g，10.14mmol)和三乙胺(2.11mL，15.21mmol)溶液。使溶液在25℃下溫熱過夜(19h)。取出一份，TLC(1∶1 EtOAc-己烷)說明完全反應。用CH2Cl2(100mL)稀釋並用1N HCl(2×50mL)和飽和的NaCl水溶液(50mL)洗滌有機層。在MgSO4上乾燥有機層，過濾，並濃縮以得到粗製的油狀物(2.98g)。通過柱層析(230-400目矽膠，洗脫液開始用1∶3的EtOAc-己烷，最後是1∶2的EtOAc-己烷)純化粗產物，以得到無定形白色固體狀的N-[(1S)-2-丁基-1-(羥甲基)己基]-5-氯-2-噻吩磺醯胺(0.630g，16.9％)。質譜(-ESI)366(M-H)-。分析計算值C15H25NClO3S2C，48.96；H，7.12；N，3.81。實測值C，49.08，H，6.83，N，3.82。
實施例206N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-2-呋喃磺醯胺。
A.2-呋喃磺醯氯0℃下於5min內將五氯化磷(15.29g，73.44mmol)一次性(小心，泡沫)加入氯磺酸(21.39g，183.6mmol)並將所得溶液在0℃下攪拌10min。然後，一次性加入呋喃(5.0g，73.44mmol)，將所得黑色懸液在0℃下攪拌15min，其間會有泡沫法並破裂。然後將反應混合物倒進冰中並用CH2Cl2(150mL)提取所得懸液。通過硅藻土墊過濾有機提取物，用鹽水洗滌並在MgSO4上乾燥。在真空下除去溶劑以提供黑色油狀的2-呋喃磺醯氯(1.01g，7.9％)。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 7.4(d，1H)；6.38(d，1H)；6.35(d，1H)。
B.N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-2-呋喃磺醯胺將溶於CH2Cl2(5mL)的2-呋喃磺醯氯(1.01g，8.69mmol)逐滴加入0℃的溶於CH2Cl2(20mL)和三乙胺(2.42mL，17.38mmol)的L-異亮氨醇(0.909g，7.83mmol)溶液。使溶液在25℃下溫熱過夜(19h)。取出一份，TLC(1∶1 EtOAc-己烷)說明完全反應。用CH2Cl2(100mL)稀釋並用1N HCl(2×50mL)和飽和的NaCl水溶液(50mL)洗滌有機層。在MgSO4上乾燥有機層，過濾，並濃縮以得到粗製的黑色油狀物(0.65g)。通過柱層析(230-400目矽膠，洗脫液開始用1∶3的EtOAc-己烷，最後是1∶2的EtOAc-己烷)純化粗產物，以得到無定形白色固體狀的N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-2-呋喃磺醯胺(0.155g，72.12％)。質譜(-ESI)246(M-H)-。分析計算值C10H17ClNO4SC，48.57；H，6.93；N，5.66。實測值C，48.72；H，6.78；N，5.39。
實施例207N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-5-碘-2-噻吩磺醯胺 A.5-溴-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-2-噻吩磺醯胺。
將溶於CH2Cl2(10mL)的5-溴噻吩-2-磺醯氯(5.0g，19.11mmol)逐滴加入0℃的溶於CH2Cl2(15mL)和三乙胺(3.77mL，27.24mmol)的L-異亮氨醇(2.108g，18.16mmol)溶液。使溶液在25℃下溫熱過夜(19h)。取出一份，TLC(1∶1 EtOAc-己烷)說明完全反應。將其稀釋在二氯甲烷(100mL)中並用1N HCl(2×50mL)和飽和的NaCl水溶液(50mL)洗滌有機層。在MgSO4上乾燥有機層，過濾，並濃縮以得到粗製的黃色油狀物(5.2g)。通過柱層析(230-400目矽膠，洗脫液開始用1∶4的EtOAc-己烷，最後是1∶1的EtOAc-己烷)純化粗產物，以得到無定形白色固體狀的5-溴-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-2-噻吩磺醯胺(4.3g，70.49％)。質譜(-ESI)246(M-H)-。
B.N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-5-(三丁基甲錫烷基)-2-噻吩磺醯胺將雙(三丁基錫)(9.28mL，18.52mmol)和四(三苯基膦)合鈀(O)(0.7133g，0.617mmol)加入溶於1，4-二噁烷(42mL)的5-溴-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-2-噻吩磺醯胺溶液(4.2g，12.34mmol)。將此棕色溶液加熱回流過夜(19h)。取出一份，TLC(1∶1 EtOAc-己烷)說明完全反應。然後過濾漿液並在真空下除去溶劑以得到粗製的黃色油狀物(2.1g)。通過柱層析(230-400目矽膠，洗脫液1∶2的EtOAc-己烷)純化粗產物，以得到黃色油狀的N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-5-(三丁基甲錫烷基)-2-噻吩磺醯胺(0.88g，12.9％)。質譜(-ESI)551(M-H)-。
C.N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-5-碘-2-噻吩磺醯胺在溶於甲醇(4mL)的N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-5-(三丁基甲錫烷基)-2-噻吩磺醯胺(0.35g，0.633mmol)溶液中連續加入醋酸鈉(0.104g，1.27mmol)、碘化鈉(0.190g，1.27mmol，溶於H2O)和三水合氯胺T(0.36g，1.27mmol，溶於甲醇(0.5mL))。加入氯胺T後微黃的溶液經紅色變為橙色。將反應物在25℃下攪拌2h，然後通過加入1M亞硫酸氫鈉(10mL)終止反應。加入H2O(10mL)後，用乙醚(3×50mL)洗滌水層。在MgSO4上乾燥有機層，過濾，濃縮以得到微黃的油狀物(0.210g)。通過HPLC純化粗製的產物(流速1.0mL/min；洗脫液，6％溶於CH2Cl2的MTBE)以得到白色無定形固體狀的N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-5-碘-2-噻吩磺醯胺(0.125g，51.02％)。質譜(-ESI)388(M-H)-。分析計算值C11H17NIO4S2 0.07EtOAcC，31.58；H，4.21；N，3.64。實測值C，31.22；H，4.22；N，3.54。
實施例2085-氟-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-2-噻吩磺醯胺
A.N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-5-(三甲基甲錫烷基)-2-噻吩磺醯胺將六甲基二錫(5.055g，15.43mmol)和四(三苯基膦)合鈀(O)(0.7133g，0.617mmol)加到溶於1，4-二噁烷(70mL)的5-溴-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-2-噻吩磺醯胺溶液(在實施例199，步驟A中製備)(3.5g，10.27mmol)中。將此棕色溶液加熱回流過夜(19h)。取出一份，TLC(1∶1 EtOAc-己烷)說明完全反應然後過濾漿液並在真空下除去溶劑以得到粗製的黃色油狀物(2.1g)。通過柱層析(230-400目矽膠，洗脫液1∶2的EtOAc-己烷)純化粗產物，以得到黃色油狀的N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-5-(三甲基甲錫烷基)-2-噻吩磺醯胺(3.1g，70.8％)。質譜(-ESI)425(M-H)-。分析計算值C11H17NIO4S2C，36.64；H，5.91；N，3.29。實測值C，36.64；H，5.81；N，3.21。
B.5-氟-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-2-噻吩磺醯胺在氮氣中於25℃下攪拌溶於無水乙腈(20mL)的N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-5-(三甲基甲錫烷基)-2-噻吩磺醯胺溶液(1.0g，2.34mmol)。一次性加入Selectfluor(0.850g，2.40mL)並在25℃下將溶液攪拌19h。3h後開始形成白色沉澱。取出一份，TLC(1∶1 EtOAc-己烷)說明未反應完全。主要是存在起始物質。將反應物在80℃加熱6h。取出一份，TLC(1∶1 EtOAc-己烷)說明完全反應。然後過濾漿液並在真空下除去溶劑以得到粗製的黃色油狀物(0.6g)。通過柱層析(230-400目矽膠，洗脫液1∶2的EtOAc-己烷)純化粗產物，以得到無定形白色固體狀的5-氟-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基-丁基]-2-噻吩磺醯胺(0.102g，15.49％)。質譜(-ESI)280(M-H)-。分析計算值C10H16NFO4S2C，42.69；H，5.73；N，4.98。實測值C，42.47；H，5.74；N，4.87。
實施例2094-[1-(5-氯-噻吩-2-磺醯氨基)-2-羥基-乙基]-哌啶-1-羧酸叔-丁酯 A.4-((1S)-1-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}-2-羥乙基)哌啶-1-羧酸叔-丁酯在溶於DME(40mL)的氰尿醯氯溶液(1.44g，7.80mmol)中加入25℃的N-甲基嗎啉(0.79g，7.80mmol)。有白色沉澱形成，在此混合物中加入溶於DME(20mL)的4-[羧基-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-甲基]-哌啶-1-羧酸叔-丁酯(3.75g，7.80mmol)溶液。5h後，過濾混合物並在冰浴中將液態濾液冷卻至0℃，並通過吸量管加入預先溶解於H2O(15mL)的NaBH4(0.44g，11.63mmol)。再在0℃下將反應混合物攪拌20min。加入乙醚(100mL)然後用1N的HCl溶液酸化。然後分離有機相併用10％的Na2CO3溶液和鹽水洗滌，然後在MgSO4上乾燥。以乙酸乙酯-己烷，1-1作為洗脫液，快速層析過濾和蒸發製成的粗製玻璃狀物質。這樣得到了所需的固體產物(1.03g，28％)。MS(+ESI)367.1([M+H]+)；282.2；189.1。
B.4-[(1S)-1-氨基-2-羥乙基]-1-哌啶羧酸叔-丁酯在4-((1S)-1-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}-2-羥乙基)哌啶-1-羧酸叔-丁酯(0.95g，2.03mmol)中一次性全部加入20％溶於二甲基甲醯胺的哌啶(20mL)。在25℃下將反應物攪拌過夜。蒸發去二甲基甲醯胺並對粗製的殘餘物進行快速層析，以95-5-0.1％的二氯甲烷-甲醇-氫氧化銨作為洗脫液。如此製得了在放置後結晶的油狀物(0.392 g，80％)。MS(+ESI)245.2([M+H]+)；189.2；150.2。
C.4-[1-(5-氯-噻吩-2-磺醯氨基)-2-羥基-乙基]-哌啶-1-羧酸叔-丁酯在攪拌的冷卻至0℃的4-[(1S)-1-氨基-2-羥乙基]-1-哌啶羧酸叔-丁酯(0.107g，0.44mmol)、三乙胺(0.046g，0.46mmol)和二氯甲烷(5mL)的混合物中逐滴或通過吸量管加入溶於2mL二氯甲烷的5-氯噻吩-2-磺醯氯(0.095g，0.44mmol)溶液。15min後，移去冰浴使反應物達到25℃並攪拌過夜。將反應物倒入飽和的碳酸氫鈉溶液(25mL)和額外的二氯甲烷(15mL)以終止反應。分離有機相，然後用1N的HCl溶液、H2O、鹽水洗滌並在MgSO4上乾燥。過濾有機相併蒸發以制出粗製的油狀物，以乙酸乙酯-己烷，1-1作為洗脫液，對此油狀物進行快速層析。這樣製得了固態的標題化合物(0.109g，58％)。MS(+APCI)442.18([M+NH4]+)；386.08；357.01；325.07；307.01；285.06。分析計算值C16H25ClN2O5S2C，45.22；H，5.93；N，6.59；實測值C，45.31；H，5.87；N，6.44。
實施例210N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺 在溶於CH2Cl2(5mL)和(S)-異亮氨醇(642mg，5.48mmol)的2-噻吩磺醯氯溶液(1g，5.48mmol)中加入Hunig’s鹼(1.05mL，6.02mmol)。在25℃將反應混合物攪拌24h。除去溶劑並將油狀物溶於EtOAc(100mL)。用水(2×100mL)、鹽水(1×100mL)洗滌此溶液並在Na2SO4上乾燥。用實施例195中列出的條件，通過半製備RP-HPLC分離所需的磺醯胺(m/z＝264.0(M+H)，rt＝0.79min)。
實施例2115-氯-N-[(S)-2-羥基-1-(4-苄基氨基環己基)乙基]噻吩-2-磺醯胺 A.步驟1將溶於CH2Cl2(50mL)(S)-2-(5-Cl-噻吩氨磺醯基)-2-(4-羥基環己基)-N，O-丙酮化合物(4.8g，12.7mmol，見實施例199步驟1-3)的溶液加入溶於CH2Cl2(30mL)的PCC(5.46g，25.3mmol)、矽膠(5.46g)和醋酸鈉(1g，12.2mmol)的漿液中。將所得反應混合物在25℃攪拌過夜。用Et2O稀釋此混合物並過濾。用二乙醚(3×50mL)洗滌固體並在MgSO4上乾燥合併的有機提取物。在真空下除去溶劑，以1∶1 EtOAc/己烷作為洗脫液，通過柱層析純化殘餘物以得到白色固體狀的酮(4g，84％)(100％純)。
B.步驟2在溶於1，2-二氯乙烷(6mL)的(S)-2-(5-Cl-噻吩氨磺醯基)-2-(4-環己酮)-N，O-丙酮化合物(340mg，0.9mmol)溶液中加入苄胺(118μL，1.08mmol)、三乙酸基硼氫化鈉(286mg，1.35mmol)和乙酸(52μL，0.9mmol)。將反應物在25℃攪拌過夜並加入NaHCO3水溶液終止反應，用乙醚提取並蒸發。在所得殘餘物中緩慢加入乙酸(10mL of 80％)，並將反應物在40℃加入9天。除去乙酸並通過柱層析(MeOH/CH2Cl2/0.5-1％NH4OH)純化殘餘物以得到所需化合物(254mg，66％)，它是非對映體的混合物。
按照實施例211中列出的流程，用(S)-2-(5-C1-噻吩氨磺醯)-2-(4-環己酮)-N，O-丙酮化合物(來自實施例211，步驟1)和苄胺、甲胺、乙胺、丙胺、烯丙胺、3-(氨基甲基)吡啶、嗎啉、4-(氨基甲基)吡啶、2-(氨基甲基)吡啶和甘氨酸乙酯製備了以下化合物(實施例211-220，表20)。
表20(LCMS Data3分子離子和保留時間)
實施例221A方法15-氯-N-[(S)-2-乙基-1-甲醯基丁基]噻吩-2-磺醯胺
A.5-(1-乙基-丙基)-咪唑烷-2，4-二酮將氰化鈉(12.0g，244.8mmol)和2-乙基丁醛(10.0mL，81.3mmol)加入溶於H2O(300mL)的碳酸銨(25.4g，325.3mmol)。加入乙醇(300mL)並有鹽沉澱出來。將反應混合物加熱至90℃。1h後，混合物變得均勻，並在90℃攪拌18h。冷卻至25℃後，在真空下除去約500mL溶劑。加入濃縮的HCl以將混合物酸化至pH1-2，並有沉澱形成。過濾並使沉澱從EtOAc中結晶出來以得到白色固體狀的5-(1-乙基-丙基)-咪唑烷-2，4-二酮(12.9g，93％)。質譜(-ESI)169(M-H)-。
B.N-[(5-氯-2-噻吩基)磺醯基]-3-乙基降纈氨酸將5-(1-乙基-丙基)-咪唑烷-2，4-二酮(12.3g，72.3mmol)溶於150mL NaOH的水溶液(11.6g，289.2mmol)。在密閉容器中通過微波爐將溶液加熱1h。(微波條件15min@100％功率，150℃，50psi，然後5min 0％功率，然後15min@100％功率，150℃，50psi，然後重複。)在真空中從反應混合物中除去水和氫氧化銨，將得到的粗製的胺基酸和NaOH的混合物用於下一步驟而無需進一步純化。
將粗製的胺基酸和NaOH的混合物溶於300mL水。在冰浴中將混合物冷卻至0℃。將5-氯噻吩-2-磺醯氯(17.3g，79.5mmol)溶於100mL THF並在0.5h內將其逐滴加入反應混合物。1h後，將反應混合物逐漸加熱到25℃並攪拌16h，在真空下除去THF，然後用1N HCl將混合物酸化至pH 1。大約15min後乳白色的溶液中開始有沉澱出現。1h後，將混合物在冰箱中冷卻1h，然後過濾。用1 N HCl洗滌沉澱物以得到白色固體狀的N-[(5-氯-2-噻吩基)磺醯]-3-乙基正纈氨酸(18.5g，78％)。質譜(-ESI)325(M-H)-。
C.N-[(5-氯-2-噻吩基)磺醯基]-3-乙基-L-降纈氨酸將(+)-(1S，2R)-半水合麻黃鹼(16.7g，95.6mmol)加入溶於185mL EtOH的N-[(5-氯-2-噻吩基)磺醯基]-3-乙基降纈氨酸懸液(31.2g，95.6mmol)。稍許加熱混合物以溶解固體並有沉澱形成。在5℃冷卻18h後，過濾所得懸液，並用冷的EtOH和EtOAc洗滌沉澱以得到產率為27％的非對映鹽。該鹽從沸騰的EtOAc(420mL)中再結晶出來，然後過濾。然後將所得白色固體溶解於300mL EtOAc和300mL1N HCl。將各個層分離並用1N HCl(2×200mL)洗滌有機提取物，用無水(Na2SO4)乾燥，並濃縮以得到白色固體狀的N-[(5-氯-2-噻吩基)磺醯]-3-乙基-L-降纈氨酸(5.6g，18％)。手性HPLC[chiralpak AD(25×0.46cm)，8∶2己烷(0.1％ TFA)異丙醇，在9.6min用L-異構體洗脫，在13.1min用D-異構體洗脫]證明手性純度為96％。D25＝+44.5°(c＝1％ SOLUTION，MeOH)。質譜(-ESI)325(M-H)-。分析計算值C11H16ClNO4S2C，40.55；H，4.95；N，4.30。實測值C，40.30；H，4.78；N，4.16。
D.5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(羥甲基)丁基]-2-噻吩磺醯胺在溶於0℃THF(150mL)的N-[(5-氯-2-噻吩基)磺醯基]-3-乙基-L-降纈氨酸(5.6g，17.2mmol)中逐滴或通過加料漏鬥加入溶於THF(69mL，69mmol)的1M硼烷四氫呋喃複合物溶液。15min後，將反應混合物加熱至25℃並攪拌18h。然後緩慢加入90mL 10％的溶於MeOH的AcOH終止反應。在真空下除去揮發性物質。然後將殘餘物溶於EtOAc(300mL)並用飽和的NaHCO3水溶液(3×200mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，並濃縮成白色沉澱(5.1g，產率96％，手性純度96％)。用庚烷/EtOAc(4∶1)再結晶沉澱以得到光學純白色針狀的5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(羥甲基)丁基]-2-噻吩磺醯胺(4.4g，81％ yield)。[α]D25＝+4.5°(c＝1％溶液，DMSO)。質譜(-ESI)310(M-H)-。分析計算值C11H18ClNO3S2C，42.37；H，5.82；N，4.49。實測值C，42.37；H，5.79；N，4.38。
E.5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-甲醯基丁基]噻吩-2-磺醯胺將重鉻酸吡啶(2.4 g，6.4mmol)加入5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(羥甲基)丁基]-2-噻吩磺醯胺(0.5g，1.6mmol)的CH2Cl2溶液(20mL)。18h後，通過硅藻土墊過濾反應混合物。濃縮濾液並通過矽膠柱層析(洗脫液1∶4 EtOAc-己烷)純化所得殘餘物以得到白色固體狀的5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-甲醯基丁基]噻吩-2-磺醯胺(303mg，61％)。D25＝+136.76°(c＝1％SOLUTION，CHCl3)。質譜(-ESI)308(M-H)-。分析計算值C11H16ClNO3S2C，42.64；H，5.21；N，4.52。實測值C，42.57；H，5.24；N，4.52。
實施例221B方法25-氯-N-[(S)-2-乙基-1-甲醯基丁基]噻吩-2-磺醯胺A.(S)-3-乙基-2-{[(S)-1-苯基乙基]氨基}戊腈在溶於80mL 1∶1 MeOH/H2O的(S)-(-)-α-甲基苄胺鹽酸鹽(1.2g，7.6mmol)中加入氰化鉀(0.5g，7.6mmol)和2-甲基丁醛(0.94mL，7.6mmol)。在30min後形成沉澱。20h後，過濾懸液並用H2O洗滌以得到白色粉末狀的(S)-3-乙基-2-{[(S)-1-苯基乙基]氨基}戊腈(1.29g，74％)。質譜(+ESI)310(M+H)+。分析計算值C15H22N2C，78.21；H，9.63；N，12.16。實測值C，77.90；H，9.75；N，12.32。
B.3-乙基-N2-[(S)-1-苯基乙基]-L-降正纈氨醯胺(norvalinamide)在25mL 0℃的硫酸中分幾次加入(S)-3-乙基-2-{[(S)-1-苯基乙基]氨基}戊腈(2.7g，11.6mmol)。將混合物加熱至25℃。2天後，將反應混合物倒進約100g碎冰中。加入濃NH4OH中和酸。用EtOAc(3×100mL)提取此混合物，用Na2SO4乾燥，過濾並濃縮以得到3-乙基-N2-[(S)-1-苯基乙基]-L-降纈氨醯胺(2.6g，90％)，它被用於下一步驟而無需純化。質譜(+ESI)249(M+H)+。分析計算值C15H24N2OC，72.54；H，9.74；N，11.28。實測值C，72.24；H，10.04；N，11.01。
C.3-乙基-L-降纈氨醯胺在Parr裝置中與3atm的H2下將3-乙基-N2-[(S)-1-苯基乙基]-L-降纈氨醯胺(2.6g，10.5mmol)和5％ Pd/C(800mg)的混合物振蕩24h。通過硅藻土塞過濾混合物並在真空下除去溶劑以得到白色固體狀的3-乙基-L-降纈氨醯胺(1.4g，93％)，它被用於下一步驟而無需進一步純化。質譜(+ESI)145(M+H)+.
D.N-[(5-氯-2-噻吩基)磺醯基]-3-乙基-L-降纈氨酸將3-乙基-L-降纈氨醯胺(1.2g，4.8mmol)溶於濃HCl(10mL)並在100℃加熱16 h。將反應混合物濃縮成含有胺基酸鹽酸鹽和等量NH4Cl的白色固體，它被用於下一步驟而無需進一步純化。
將胺基酸鹽酸鹽和等量的NH4Cl(0.28g，1.19mmol)溶於6mL H2O，然後加入(0.24g，6.00mmol)。將溶液冷卻至0℃，然後逐滴加入溶於6mL THF的5-氯噻吩-2-磺醯氯(0.29g，1.32mmol)。將混合物加熱至25℃。19h後，在真空下除去THF。用10mL H2O稀釋剩餘的溶液並用EtOAc(2×10mL)洗滌。用1N HCl酸化此溶液並有沉澱形成。將其過濾以得到白色固體狀的N-[(5-氯-2-噻吩基)磺醯基]-3-乙基-L-降纈氨酸(0.17g，44％)。手性HPLC說明只有S對映體存在。
然後按照實施例221A，由N-[(5-氯-2-噻吩基)磺醯基]-3-乙基-L-降纈氨酸製備了5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(羥甲基)丁基]-2-噻吩磺醯胺和5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-甲醯基丁基]噻吩-2-磺醯胺。
實施例221C5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(羥甲基)丁基]-2-噻吩磺醯胺在裝有氮氣輸入管、機械攪拌器和具塞加料漏鬥的3L 3-頸燒瓶中放入硼氫化鋰(145mL，2 M的THF溶液，0.29mol)。將溶液置於氮氣下並冷卻至0℃。在30分鐘內逐滴加入氯三甲基矽烷(73.8mL，0.58mol)。移去冰浴並將所得漿液在室溫下攪拌30min。將反應混合物冷卻至0℃，然後在15min內分批加入按流程13製備的2-(S)-氨基-3-乙基-戊酸(21.1g，0.145mol)。隨冰浴融化使反應混合物緩慢升至室溫。室溫下3天後，將反應混合物冷卻至0℃並在80min內小心加入甲醇(217mL)。在室溫下將溶液再攪拌40min，然後在60℃的水浴中減壓濃縮。用20％的氫氧化鈉(37.5mL)使所得漿液成為鹼性。加入水(37.5mL)，並用二氯甲烷(300mL)提取整個水層，並乾燥(Na2SO4)。減壓濃縮得到了油狀的2(S)-氨基-3-乙基戊醇(17.3g，91％)，它被立即使用或在冰箱中保存過夜Opt.Rot.[α]D25＝-3.7°(1％溶液，DMSO)；1H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ 4.38(s譜帶，1H)，3.35(dd和譜帶s在δ3.32處重疊，J＝4.5，10.3Hz，3H)，3.14(dd，J＝7.9，10.2Hz，1H)，2.63(m，1H)，1.45-1.05(m，5H)，0.82和0.81(兩個重疊的三峰，J＝7.4Hz，6H)；MS(+ESI)[M+H]+，132(60％)。
將2(S)-氨基-3-乙基戊醇(34.1g，0.26mol)和二氯甲烷(700mL)的混合物置於氬氣下，並冷卻至0℃。加入三乙胺(36.2mL，0.26mol)，然後逐滴加入溶於二氯甲烷(400mL)的5-氯噻吩-2-磺醯氯(56.4g，0.26mol)。隨冰浴融化使反應混合物緩慢回復室溫。室溫下3天後，將反應混合物分成兩部分，每份0.6L。用乙酸乙酯(1L)稀釋每一份，用飽和的一水磷酸鉀(200mL)洗滌三次，用鹽水(200mL)洗滌一次，並乾燥(Na2SO4)。減壓濃縮以得到白色固體(74.5g，92％)。將若干次處理的產物(87.98g)合併並從熱的庚烷∶乙酸乙酯(4∶1，775mL)中再結晶以得到晶體狀的標題化合物(74.9g，85％)mp 115-117.6℃；Opt.Rot.[α]D25＝+10.81°(1％溶液，MeOH)；1H NMR(DMSO-d6，500MHz)δ 7.71(d，J＝8.1Hz，1H)，7.44(d，J＝4.1Hz，1H)，7.22(d，J＝4.1Hz，1H)，4.56(t，J＝5.2 Hz，OH)，3.31-3.15(m，3H)，1.40-1.15(m，4H)，1.07(m，1H)，0.79和0.76(兩個重疊的三峰，J＝7.3Hz，6H)；13C NMR(DMSO-d6，100MHz)δ 141.75，133.73，130.95，127.60，60.41，56.89，41.57，21.31，20.80，11.79，11.51；MS(-ESI)[M-H]-，1氯同位素模式，310(100％)，312(30％)；Anal.Calc.C11H18ClNO3S2C，42.37，H，5.82，N，4.49。實測值C，42.34，H，5.65，N，4.43。手性HPLC(Chiralpak AD，25×0.46cm，洗脫液含0.1％TFA的8∶2己烷/異丙醇，流速0.5mL/min，在254nm處進行UV檢測，S和R異構體的保留時間分別為10.95min和11.95min)說明S/R比例為100.0∶0.0。
實施例2225-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(1-羥乙基)丁基]噻吩-2-磺醯胺 將溶於甲苯/THF(75∶25)的甲基溴化鎂(1.4M，7.0mL，9.7mmol)溶液加入0℃的5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-甲醯基丁基]噻吩-2-磺醯胺(實施例221，1.0g，3.2mmol)的THF溶液(30 mL)。將混合物加熱至25℃，並在2h後小心地用飽和的氯化銨水溶液(25mL)終止反應。用EtOAc(3×25mL)提取混合物。在Na2SO4上乾燥有機提取物，過濾並濃縮以得到無色油狀物。通過柱層析(Biotage)(洗脫液1∶4EtOAc-己烷)純化產物以得到白色固體狀的5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(1-羥乙基)丁基]噻吩-2-磺醯胺(876mg，83％)。該產物是比例為3∶7的非對映混合物。熔點95-98℃.分析計算值C12H20ClNO3S2C，44.23；H，6.19；N，4.30。實測值C，44.25；H，6.35；N，4.29。質譜(-ESI)324(M-H)-。
實施例2235-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(1-羥基-1-甲基乙基)丁基]噻吩-2-磺醯胺 A.N-[(5-氯-2-噻吩基)磺醯基]-3-乙基-L-降纈氨酸甲酯將三甲基甲矽烷基重氮甲烷(3.1mL，6.1mmol)加入溶於THF(20mL)和MeOH(5mL)的N-[(5-氯-2-噻吩基)磺醯基]-3-乙基-L-降纈氨酸(1.0g，3.1mmol)溶液。2h後濃縮混合物以得到白色固體狀的N-[(5-氯-2-噻吩基)磺醯基]-3-乙基-L-降纈氨酸甲酯(1.0g，99％)。質譜(-ESI)338.00(M-H)-。
B.5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(1-羥基-1-甲基乙基)丁基]噻吩-2-磺醯胺將溶於甲苯/THF(75∶25)的甲基溴化鎂(1.4M，9.5mL，13.2mmol)溶液加入0℃的N-[(5-氯-2-噻吩基)磺醯基]-3-乙基-L-降纈氨酸甲酯(0.90g，2.65mmol)的THF(26 mL)溶液。使溶液升溫至25℃，然後加熱至55℃並攪拌18h。然後冷卻至0℃並緩慢加入飽和的NH4Cl水溶液終止反應。加入EtOAc(75mL)並分離各相。用Na2SO4乾燥有機相，過濾並濃縮以得到黃色油狀物。通過柱層析(Biotage)(洗脫液1∶4 EtOAc-己烷)純化產物以得到無色油狀的5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(1-羥基-1-甲基乙基)丁基]噻吩-2-磺醯胺(0.72g，80％)。質譜(-ESI)338(M-H)-。分析計算值C13H22ClNO3S2C，45.94；H，6.52；N，4.12。實測值C，46.10；H，6.63；N，4.04。
實施例2245-氯-N-(2-羥基-1-四氫-H-噻喃-4-基乙基)噻吩-2-磺醯胺 A.(5-氯-噻吩-2-磺醯氨基)-(四氫-噻喃-4-基)-乙酸將氫氧化鈉(0.20g，5.04mmol)加入25℃溶於MeOH∶水(2∶1)的N-Fmoc-氨基-(4-四氫噻喃基)乙酸(0.50g，1.26mmol)的混合物。將反應混合物攪拌20h。TLC(1∶9 MeOH/CHCl3)說明完全反應。用水稀釋混合物並用EtOAc洗滌。將水層濃縮以得到殘留有NaOH的白色固體。將此白色固體溶於H2O∶THF(1∶2，15mL)並冷卻至0℃。將5-氯噻吩-2-磺醯氯(0.683g，3.15mmol)溶於THF(2mL)並將其逐滴加入混合物中，然後在25℃溫熱過夜。加入1N HCl水溶液以將混合物酸化至pH 1。加入EtOAc並分離各層。用1N HCl和H2O洗滌有機提取物，用Na2SO4乾燥，過濾並濃縮以得到紅黑色固體狀的(5-氯-噻吩-2-磺醯氨基)-(四氫-噻喃-4-基)-乙酸(0.14，31％)，無需純化即可將其用於下一步驟。質譜(+ESI)357(M+H)+B.5-氯-N-(2-羥基-1-四氫-H-噻喃-4-基乙基)噻吩-2-磺醯胺將(5-氯-噻吩-2-磺醯氨基)-(四氫-噻喃-4-基)-乙酸(0.14g，0.40mmol)溶於THF(2mL)並冷卻至0℃。逐滴加入溶於THF的硼烷四氫呋喃複合物(1M，3.2mL，3.2mmol)溶液並使此混合物在25℃溫熱過夜。在真空下除去揮發性溶劑，用EtOAc稀釋所得橙色油狀物並用H2O、1N HCl和飽和的NaHCO3水溶液洗滌。在Na2SO4上乾燥有機提取物，過濾並濃縮。通過柱層析(Biotage)(洗脫液1∶1 EtOAc∶己烷)純化所得殘餘物以得到白色固體狀的5-氯-N-(2-羥基-1-四氫-H-噻喃-4-基乙基)噻吩-2-磺醯胺(40 mg，30％)。mp 108-110℃。質譜(-ESI)340(M-H)-。分析計算值C11H16ClNO3S3C，38.64；H，4.72；N，4.10。實測值C，38.80；H，4.69；N，3.88。
實施例2255-氯-N-[(S)-2-羥基-1-哌啶-4-基乙基]噻吩-2-磺醯胺 在溶於0℃二氯甲烷(2 mL)的4-[1-(5-氯-噻吩-2-磺醯氨基)-2-羥基-乙基]-哌啶-1-羧酸叔-丁酯(0.204g，0.48mmol(見實施例209))溶液中加入三氟乙酸(0.5mL)。將反應加熱至25℃並攪拌過夜。然後濃縮此混合物，加入二氯甲烷並蒸發6次以得到粗製固體。通過HPLC(C-18柱(21×75mm)，洗脫系統60-100％乙腈-水+0.1％TFA，20min梯度)純化得到了油狀產物(0.0166g，11％)。MS(ESI)m/z325([M+H]+)。
實施例226N-[(S)-2-乙基-1-(羥甲基)丁基]噻吩-2-磺醯胺 A.N-[(1S)-2-乙基-1-(羥甲基)丁基]-5-(三甲基甲錫烷基)噻吩-2-磺醯胺.
在氮氣下將5-溴-N-[(1S)-2-乙基-1-(羥甲基)丁基]噻吩-2-磺醯胺(0.71g，2.0mmol)、六甲基二錫(0.983g，3.0mmol)、四(三苯基膦)合鈀(0.115g，0.10mmol)和1，4-二噁烷(15mL)溶液回流16h。冷卻至25℃後，加入二氯甲烷(10mL)，過濾混合物並蒸發以製得粗製的油狀物(0.49g)，無需純化即可將其用於下一步驟，步驟B。MS(-ESI)439.20([M-H]-)。
B.N-[(S)-2-乙基-1-(羥甲基)丁基]噻吩-2-磺醯胺在攪拌的無水乙腈(6mL)和N-[(1S)-2-乙基-1-(羥甲基)丁基]-5-(三甲基甲錫烷基)噻吩-2-磺醯胺(0.24g，0.56mmol)的混合物中一次性加入所有的Selectfluor(Aldrich)(0.204g，0.57mmol)。在氮氣下將混合物加熱至75℃，攪拌16h，冷卻至25℃並過濾。蒸發去溶劑以製得粗製的油狀物，將其加到乙酸乙酯中並再次過濾以除去不溶性固體。以己烷-乙酸乙酯(2-1)作為洗脫液，通過快速層析純化蒸發去殘留溶劑而製得的油狀物，由此製得的產物主要是標題化合物(0.051g，33％)。MS(-ESI)276.20([M-H]-)。
實施例227N-[(S)-2-乙基-1-(羥甲基)丁基]-5-氟噻吩-2-磺醯胺 此化合物是用實施例226(步驟A和B)中發現的方法作為副產物合成的，並是由同樣的快速層析柱作為固體分離的(0.024g，15％)。MS(-ESI)294.20([M-H]-)。
實施例2285-氯-N-[(1S)-1-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-2-羥乙基]噻吩-2-磺醯胺 A.9H-芴-9-基甲基-(1S)-1-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-2-羥乙基氨基甲酸酯基0℃下，在30min內將1N硼烷-THF(24.18mL)逐滴加入(2S-2，3-二氫-1H-茚-2-基[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基)乙酸(2.0g，4.84mmol)的無水四氫呋喃溶液(20mL)。使反應物在25溫熱過夜，然後加入10.0mL 10％乙酸的甲醇溶液終止反應。蒸發去溶劑後，將粗製產物溶於乙酸乙酯並用1N HCl、水和10％NaHCO3洗滌。在MgSO4上乾燥有機層，過濾並濃縮以得到粗製的黃色油狀物(1.8g)。通過柱層析(230-400目矽膠，洗脫液1∶2的EtOAc-己烷)純化粗產物。這樣製得了無定形固體狀的標題化合物(1.05g，54.4％)。質譜(-ESI)398(M-H)-.(+ESI)400(M+H)+。
B.(2S)-2-氨基-2-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)乙醇將20％的哌啶DMF溶液(15mL)加入9H-芴-9-基甲基-(1S)-1-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-2-羥乙基氨基甲酸酯(1.05g，2.63mmol)的DMF溶液(5mL)。將反應混合物在25℃攪拌19h。蒸發去溶劑後，將粗製產物溶於乙酸乙酯(50mL)並在MgSO4上乾燥，過濾並濃縮以得到粗製的黃色油狀物(1.05g)。質譜(+ESI)179(M+H)+。
C.5-氯-N-[(1S)-1-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-2-羥乙基]噻吩-2-磺醯胺將5-氯噻吩-2-磺醯氯(0.856g，3.94mmol)的CH2Cl2溶液(5mL)逐滴加入0℃溶於CH2Cl2(5mL)和三乙胺(3.8mL，5.26mmol)的(2S)-2-氨基-2-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)乙醇(0.46g，2.63mmol)溶液。將溶液在25℃溫熱過夜(19h)。取出一份，TLC(1∶1 EtOAc-己烷)說明完全反應。用CH2Cl2(50mL)稀釋並用1NHCl(2×50mL)和飽和的NaCl水溶液(50mL)洗滌有機層。在MgSO4上乾燥有機層，過濾並濃縮以得到粗製油狀物(0.89g)。通過柱層析(230-400目矽膠，洗脫液1∶4的EtOAc-己烷)純化粗產物以製得無定形白色固體狀的5-氯-N-[(1S)-1-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)-2-羥基乙基]噻吩-2-磺醯胺(0.361 g，38.4％)。質譜(-ESI)356(M-H)-。分析計算值C15H10ClNO3S2C50.34 H4.51 N3.91實測值C50.28 H4.36 N3.77。
實施例2295-氯-N-{(1S，2S)-1-[(Z)-(肟基)甲基]-2-甲基丁基噻吩-2-磺醯胺 將溶於甲醇(10mL)的5-氯-N-[(1S，2S)-1-甲醯-2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺(實施例118，1.0g，3.4mmol)、鹽酸羥胺(0.464g，6.78mmol)和醋酸鈉(0.556g，6.78mmol)溶液回流攪拌19h。蒸發去溶劑後，用K2CO3水溶液(20mL)稀釋殘餘物，然後用CH2Cl2(2×40mL)提取。用鹽水洗滌合併的反應提取物，在MgSO4上乾燥，過濾並濃縮以得到粗製油狀物(0.89g)。通過柱層析(230-400目矽膠，洗脫液1∶4的EtOAc-己烷)純化粗產物。這樣製得了無定形白色固體狀的標題化合物(Z-異構體)(32mg，3.1％)。質譜(-ESI)309(M-H)-。分析計算值C10H15ClN2O3S2·0.10C4H8O2C39.08 H4.98 N8.76實測值C38.72 H4.67N8.43。
實施例2305-氯-N-{(S，S)-1-[(E)-(肟基)甲基]-2-甲基丁基噻吩-2-磺醯胺 將溶於甲醇(10mL)的5-氯-N-[(1R，2S)-1-甲醯-2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺(實施例118，1.0g，3.4mmol)、鹽酸羥胺(0.464g，6.78mmol)和醋酸鈉(0.556g，6.78mmol)溶液回流攪拌19h。蒸發去溶劑後，用K2CO3水溶液(20mL)稀釋殘餘物，然後用CH2Cl2(2×40mL)提取。用鹽水洗滌合併的反應提取物，在MgSO4上乾燥，過濾並濃縮以得到粗製油狀物(0.89g)。通過柱層析(230-400目矽膠，洗脫液1∶4的EtOAc-己烷)純化粗產物。這樣製得了無定形白色固體狀的標題化合物(E-異構體)(300mg，28.3％)。質譜(-ESI)309(M-H)-。分析計算值C10H15ClN2O3S2·0.40 C4H8O2C40.26 H5.30 N8.09實測值C39.78 H5.23N7.77A.二乙基-3-乙基-5-氧代吡咯烷-2，2-二羧酸酯在150mg溶於150mL純乙醇的鈉中加入乙醯氨基丙二酸二乙酯(5.3g，25mmol)和乙基-(2E)-戊-2-烯酯(3.5g，27.3mmol)。然後將反應混合物回流20h。然後加入2mL冰醋酸，在壓力下通過水流抽氣管和加熱浴的幫助除去揮發性揮發性物質。通過冷卻使殘餘物固化。將殘餘物溶於50mL甲苯並在其中加入20mL石油醚。當混合物冷卻時有產物沉澱。收集晶體並用水洗滌，在真空下進一步乾燥以得到白色固體(5.6g，79.77％)。質譜(+ESI)258(M+H)+。
B.3-乙基穀氨酸將5.6g二乙基-3-乙基-5-氧代吡咯烷-2，2-二羧酸酯(21.76，84.67mmol)在80mL 49％的發煙HBr中回流4h。然後，將內含物放在真空下並除去揮發性成分。將膠狀殘餘物溶於25mL蒸餾水並像上面那樣除去水。將此過程重複一次。將殘餘物溶於20mL水並用濃縮的氨(2mL)溶液將溶液的pH調至3。此時可通過冰浴冷卻或用含100mL純乙醇的水溶液稀釋以得到乙基穀氨酸沉澱。水-乙醇混合物沉澱在48h內完成。要小心地慢慢加入乙醇以避免不需要的產物沉澱。通過水-乙醇(1∶1)混合物結晶純化此混合物。這樣製得的標題化合物為無定形白色固體(3.5g，99％)。質譜(+ESI)176(M+H)+。
C.3-乙基-2-甲基戊-1，5-二醇0℃下，在20分子內在溶於THF(60mL)的LAH(2.06g，54.29mmol)漿液中逐滴加入3-乙基穀氨酸(3.5g，21.71mmol)。將反應物在36℃加熱18h。將反應漿液(灰色)冷卻至0℃並用H2O(3mL)終止反應，然後用1N NaOH(9mL)和H2O(3mL)洗滌。然後在25℃下攪拌6h以得到白色漿液。將此漿液過濾並在MgSO4上進一步乾燥母液，過濾並在真空下濃縮以得到粗製的黃色油狀3-乙基-2-甲基戊-1，5-二醇(2.85g，89.17％)。質譜(+ESI)170(M+Na)+。
D.5-氯-N-[2-乙基-4-羥基-1-(羥甲基)丁基]噻吩-2-磺醯胺將溶於CH2Cl2(5mL)的5-氯噻吩-2-磺醯氯(6.4g，24.48mmol)逐滴加入0℃溶於CH2Cl2(30mL)和三乙胺(5.66mL，40.81mmol)的3-乙基-2-甲基戊-1，5-二醇(2.85g，19.34mmol)溶液。將此溶液在25℃下溫熱過夜(19h)。取出一份，TLC(1∶1 EtOAc-己烷)說明完全反應。用CH2Cl2(50mL)稀釋並用1N HCl(2×50mL)和飽和的NaCl水溶液(50mL)洗滌有機層。在MgSO4上乾燥有機層，過濾並濃縮以得到粗製油狀物(4.9g)。通過柱層析(230-400目矽膠，洗脫液1∶4的EtOAc-己烷)純化粗產物以製得無定形白色固體狀的5-氯-N-[2-乙基-4-羥基-1-(羥甲基)丁基]噻吩-2-磺醯胺(0.450g，7.3％)。質譜(-ESI)326(M-H)-。
1.半製備RP-HPLC條件Gilson半製備HPLC系統和Unipoint軟體。
ColumnPhenomenex C18 Luna 21.6mm×60mm，5μ溶劑A水(0.02％ TFA緩衝液)溶劑B乙腈(0.02％ TFA buffer)溶劑梯度時間010％ B；2.5min10％ B；14 min90％ B.
流速22.5mL/min基於UV吸收收集產物峰並濃縮。
2.分析型LCMS條件Hewlett Packard 1100 MSD和ChemStation軟體柱YMC ODS-AM 2.0mm×50mm 5μ柱，23℃；3μL注射；溶劑A水(0.02％ TFA緩衝液)溶劑B乙腈(0.02％ TFA緩衝液)梯度時間095％ A；0.3 min95％ A；4.7 min10％ A；4.9 min95％ A。
流速1.5mL/min；檢測254 nm DAD；API-ES掃描模式Positive 150-700；Fragmentor 70mV.
3.分析型LCMS條件ZMD(Waters)或Platform(Micromass)或LCZ(Micromass)柱Zorbax SB-C8溶劑乙腈+H2O含0.1％TFA或0.1％FA梯度梯度2.5min 15％乙腈-95％乙腈流速3ml\min檢測ELSD檢測(SEDEX 55)UV 253檢測(Schimadzu)實施例233-阻抑物釋放測定(RRA)根據公布的技術[Shuey，D.J.，Sheiffele，P.，Jones，D.，Cockett，M.I.，和Quinet，E.M.(1999)，「Repressor releasea useful tool for monitoringamyloid precursor protein(APP)proteolysis in mammalian cells」，Society forNeuroscience Abstracts，第25卷，神經科學協會第29界年會，邁阿密灘，佛羅裡達州，1999年10月23-28日]檢測了按實施例1-220的描述製得的化合物。簡單地說，這種測定是如下進行的。
A.細胞培養在37℃和5％CO2下將CHO-K1細胞培養在完全DMEM培養基(DMEM-含有10％胎牛血清、1％非必需胺基酸和1％青黴素-鏈黴素的高葡萄糖)中。轉染前24小時將2百萬個細胞塗布到10-cm培養皿上。
按照Gibco BRL的建議用他們的Lipofectamine Plus系統完成瞬時轉染。首先，在460μL-的Opti-Mem轉染培養基中加熱6μg pRSVO-luc和6μg APP-lacI組成型DNA，並和30μL Plus試劑共培養15分鐘。在溫育DNA-脂類時，將CHO-K1細胞洗滌一次並將其置於沒有青黴素-鏈黴素的DMEM培養基中。然後將DNA-脂類製劑放在這些細胞上並在37℃溫育過夜。
將每個孔(總體積100μL)中一百萬和一百五十萬個轉染的細胞放在置于澄清DMEM完全培養基(無酚紅的DMEM)中的無菌且不透明的Packard 96-孔培養板中，並在37℃和5％CO2下溫育3-5小時。
B.化合物稀釋用兩種不同的方法稀釋化合物；一種方法用於淨提供的化合物(小瓶中的稱重粉末)，另一種方法用於溶液中的化合物(20mM，在96孔板中的DMSO中)。這兩種方法都新鮮製備了用作洗脫液的25mM Hepes和25mM Hepes/1％DMSO。Hepes/DMSO在所有實驗平板中都被用作洗脫對照。
下表描述了化合物稀釋的步驟(請注意，最後一步僅適用於組織培養平板中的細胞/培養基化合物)表21
由於一些化合物以20mM的濃度存在於96孔板中，以下代表了它們的稀釋方法(注意，這些化合物的平均分子量被用來計算這些稀釋液，而且和上面一樣，最後一步僅適用於組織培養平板中的細胞/培養基化合物)表22
一旦化合物被稀釋，它們就可用來在組織培養平板(上面製備)中複製細胞。將細胞和化合物在37℃和5％CO2下在溫育36-48小時。
C.分析測量進行螢光素酶測定(LucLite試劑，Packard)並在Packard TopCount裝置上讀數。將96孔板中的培養基除去並換成每孔100μL PBS(含有Mg2+和Ca2+)。在各個孔中加入等量的(100μL)的LucLite溶解/底物緩衝液，密封平板並在室溫下在黑暗中於旋轉振蕩器上混合15-30分鐘。然後在TopCount裝置上進行螢光素酶閱讀。測量結果是以相對光度單位(RLU)表示的，並如下所述在MS Excel中進行計算和分析。
D.數據分析下表提供了與這裡列舉的化合物相對應的測量結果。如果一種化合物在20μM時使螢光素酶的活性至少增加1.5倍且無毒(以信號損失(增加≤0.75倍)確定)，則認為它在RRA中是活躍的。增加的倍數是螢光素酶活性(以相對光度單位測量)和稀釋對照的比值。所有被試驗的化合物都是無毒的。
表23
在此併入此說明書中提到的所有出版物以供參考。由於已經根據特別優選的實施方案描述了本發明，應該感謝的是，在不背離本發明精神的情況下可對其做出修改。這種修改應在附加權利要求的範圍內。
權利要求
1.結構式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽，其特徵在於，所述結構式(I)有以下結構 其中R1和R2獨立選自氫、烷基、取代的烷基、CF3、鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基、取代的炔基、環烷基、取代的環烷基、苯基、取代的苯基和(CH2)n(1，3)二噁烷，其中n是2至5；R3選自氫、烷基和取代的烷基；R4選自氫、烷基、取代的烷基、烷基環烷基、取代的烷基環烷基、苯基(取代的)烷基、烷基OH、取代的烷基OH、烷基OBn、取代的烷基OBn、烷基吡啶基、取代的烷基吡啶基、烷基呋喃基、取代的烷基呋喃基、CH(OH)苯基、CH(OH)取代的苯基、鏈烯基、取代的鏈烯基、環烷基、取代的環烷基、N-取代的-哌啶基、哌啶基、取代的哌啶基、四氫噻喃、取代的四氫噻喃、2-二氫化茚、取代的2-二氫化茚、苯基、取代的苯基、烷基NHR7和取代的烷基NHR7；條件是R3和R4不同時是氫；R7是烷基、取代的烷基、環烷基、取代的環烷基、苄基、取代的苄基、烷基OH、取代的烷基OH、烷基SR8或取代的烷基SR8；R8是烷基、取代的烷基、苄基或取代的苄基；或者R3和R4可以連接成環；R5選自氫、低級烷基、取代的低級烷基、鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基、取代的炔基、CH2環烷基、取代的CH2環烷基、苄基、取代的苄基和CH2CH2QR9；Q是O，NH或S；R9是低級烷基、取代的低級烷基、苯基或取代的苯基；R6選自氫、滷素和CF3；T選自 和 W，Y和Z獨立選自C，CR10和N；R10選自氫和滷素，條件是至少W、Y和Z之一必須是C；X選自O，S，SO2和NR11；R11選自氫、低級烷基、取代的低級烷基、苄基、取代的苄基、苯基和取代的苯基；條件是當化合物含有一個或多個手性中心時，至少一個手性中心必須是S-立體化學。
2.結構式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽，其特徵在於，所述結構式(I)有以下結構 其中R1和R2獨立選自氫、烷基、取代的烷基、CF3，鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基、取代的炔基、環烷基、取代的環烷基、苯基、取代的苯基和(CH2)n(1，3)二噁烷，其中n是2至5；R3選自氫、烷基和取代的烷基；R4選自氫、烷基、取代的烷基、烷基環烷基、取代的烷基環烷基、苯基(取代的)烷基、烷基OH、取代的烷基OH、烷基OBn、取代的烷基OBn、烷基吡啶基、取代的烷基吡啶基、烷基呋喃基、取代的烷基呋喃基、CH(OH)苯基、CH(OH)取代的苯基、鏈烯基、取代的鏈烯基、環烷基、取代的環烷基、N-取代的-哌啶基、哌啶基、取代的哌啶基、四氫噻喃、取代的四氫噻喃、2-二氫化茚、取代的2-二氫化茚、苯基、取代的苯基、烷基NHR7和取代的烷基NHR7；條件是R3和R4不同時是氫；R7是烷基、取代的烷基、環烷基、取代的環烷基、苄基、取代的苄基、烷基OH、取代的烷基OH、烷基SR8或取代的烷基SR8；R8是烷基、取代的烷基、苄基或取代的苄基；或R3和R4可以連接成環；R5選自氫、低級烷基、取代的低級烷基、鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基、取代的炔基、CH2環烷基、取代的CH2環烷基、苄基、取代的苄基和CH2CH2QR9；Q是O，NH或S；R9是低級烷基、取代的低級烷基、苯基或取代的苯基；R6選自氫、滷素和CF3；T是 W是C，其中W提供了與SO2基團的連接點；X是S；Y和Z獨立為C或CR10；R10選自氫和滷素；條件是當化合物含有一個或多個手性中心時，至少一個手性中心必須是S-立體化學。
3.結構式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽，其特徵在於，所述結構式(I)有以下結構 其中R1和R2獨立選自氫、烷基、取代的烷基、CF3，鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基、取代的炔基、環烷基、取代的環烷基、苯基、取代的苯基和(CH2)n(1，3)二噁烷，其中n是2至5；R3選自氫、烷基和取代的烷基；R4選自氫、烷基、取代的烷基、烷基環烷基、取代的烷基環烷基、苯基(取代的)烷基、烷基OH、取代的烷基OH、烷基OBn、取代的烷基OBn、烷基吡啶基、取代的烷基吡啶基、烷基呋喃基、取代的烷基呋喃基、CH(OH)苯基、CH(OH)取代的苯基、鏈烯基、取代的鏈烯基、環烷基、取代的環烷基、N-取代的-哌啶基、哌啶基、取代的哌啶基、四氫噻喃、取代的四氫噻喃、2-二氫化茚、取代的2-二氫化茚、苯基、取代的苯基、烷基NHR7和取代的烷基NHR7；條件是R3和R4不同時是氫；R7是烷基、取代的烷基、環烷基、取代的環烷基、苄基、取代的苄基、烷基OH、取代的烷基OH、烷基SR8或取代的烷基SR8；R8是烷基、取代的烷基、苄基或取代的苄基；或者R3和R4可以連接成環；R5選自氫、低級烷基、取代的低級烷基、鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基、取代的炔基、CH2環烷基、取代的CH2環烷基、苄基、取代的苄基和CH2CH2QR9；Q是O，NH或S；R9是低級烷基、取代的低級烷基、苯基或取代的苯基；R6是滷素；T是 W是C，其中W提供了與SO2基團的連接點；X是S；Y和Z獨立為C或CR10；R10選自氫和滷素；條件是當化合物含有一個或多個手性中心時，至少一個手性中心必須是S-立體化學。
4.結構式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽，其特徵在於，所述結構式(I)有以下結構其中 R1和R2是氫；R3是氫；R4是S-立體化學的低級烷基；R5是氫；R6是滷素；T是 X是S；W，Y和Z是C，其中W提供了與SO2基團的連接點.
5.結構式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽，其特徵在於，所述結構式(I)有以下結構 其中R1和R2是氫；R3是氫；R4是S-立體化學的低級烷基；R5是氫；R6是氫或滷素；T是 X是O；W，Y和Z是C，其中W提供了與SO2基團的連接點.
6.結構式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽，其特徵在於，所述結構式(I)有以下結構 其中R1和R2獨立選自氫、烷基、取代的烷基、CF3，鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基、取代的炔基、環烷基、取代的環烷基、苯基、取代的苯基和(CH2)n(1，3)二噁烷，其中n是2至5；R3選自氫、烷基和取代的烷基；R4選自氫、烷基、取代的烷基、烷基環烷基、取代的烷基環烷基、苯基(取代的)烷基、烷基OH、取代的烷基OH、烷基OBn、取代的烷基OBn、烷基吡啶基、取代的烷基吡啶基、烷基呋喃基、取代的烷基呋喃基、CH(OH)苯基、CH(OH)取代的苯基、鏈烯基、取代的鏈烯基、環烷基、取代的環烷基、N-取代的-哌啶基、哌啶基、取代的哌啶基、四氫噻喃、取代的四氫噻喃、2-二氫化茚、取代的2-二氫化茚、苯基、取代的苯基、烷基NHR7和取代的烷基NHR7；條件是R3和R4不同時是氫；R7是烷基、取代的烷基、環烷基、取代的環烷基、苄基、取代的苄基、烷基OH、取代的烷基OH、烷基SR8或取代的烷基SR8；R8是烷基、取代的烷基、苄基或取代的苄基；或R3和R4可以連接成環；R5選自氫、低級烷基、取代的低級烷基、鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基、取代的炔基、CH2環烷基、取代的CH2環烷基、苄基、取代的苄基和CH2CH2QR9；Q是O，NH或S；R9是低級烷基、取代的低級烷基、苯基或取代的苯基；R6選自氫、滷素和CF3；T是 W，Y和Z獨立選自C，CR10和N；R10選自氫和滷素，條件是至少W、Y和Z之一必須是C；X選自O，S，SO2和NR11；R11選自氫、低級烷基、取代的低級烷基、苄基、取代的苄基、苯基和取代的苯基；條件是當化合物含有一個或多個手性中心時至少一個手性中心必須是S-立體化學。
7.結構式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽，其特徵在於，所述結構式(I)有以下結構 其中R1和R2獨立選自氫、烷基、取代的烷基、CF3，鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基、取代的炔基、環烷基、取代的環烷基、苯基、取代的苯基和(CH2)n(1，3)二噁烷，其中n是2至5；R3選自氫、烷基和取代的烷基；R4選自氫、烷基、取代的烷基、烷基環烷基、取代的烷基環烷基、苯基(取代的)烷基、烷基OH、取代的烷基OH、烷基OBn、取代的烷基OBn、烷基吡啶基、取代的烷基吡啶基、烷基呋喃基、取代的烷基呋喃基、CH(OH)苯基、CH(OH)取代的苯基、鏈烯基、取代的鏈烯基、環烷基、取代的環烷基、N-取代的-哌啶基、哌啶基、取代的哌啶基、四氫噻喃、取代的四氫噻喃、2-二氫化茚、取代的2-二氫化茚、苯基、取代的苯基、烷基NHR7和取代的烷基NHR7；條件是R3和R4不同時是氫；R7是烷基、取代的烷基、環烷基、取代的環烷基、苄基、取代的苄基、烷基OH、取代的烷基OH、烷基SR8或取代的烷基SR8；R8是烷基、取代的烷基、苄基或取代的苄基；或R3和R4可以連接成環；R5選自氫、低級烷基、取代的低級烷基、鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基、取代的炔基、CH2環烷基、苄基、取代的苄基和CH2CH2QR9；Q是O，NH或S；R9是低級烷基、取代的低級烷基、苯基或取代的苯基；R6選自氫、滷素和CF3；T是 W，Y和Z獨立選自C，CR10和N；R10選自氫和滷素，條件是至少W、Y和Z之一必須是C；X選自O，S，SO2和NR11；R11選自氫、低級烷基、取代的低級烷基、苄基、取代的苄基、苯基和取代的苯基；條件是當化合物含有一個或多個手性中心時，至少一個手性中心必須是S-立體化學。
8.如權利要求1、2或5-7中任一項所述的化合物，其中R6是滷素。
9.如權利要求1-8中任一項所述的化合物，其中R6是氯或溴。
10.如權利要求1-3中任一項所述的化合物，其中T是C(OH)R1R2，R1和R2都是氫。
11.如權利要求1-7中任一項所述的化合物，其中W和Z都是C。
12.如權利要求1-3、6或7中任一項所述的化合物，其中R4是S-立體化學的低級烷基。
13.如權利要求1-3或5-7中任一項所述的化合物，其中X是S，W是C，Z是C，R6是滷素，R4是S-立體化學的低級烷基，R3是氫、R5是氫和R1和R2都是氫。
14.如權利要求1-3、6或7中任一項所述的化合物，其中R3CR4是環己基。
15.如權利要求1-3、6或7中任一項所述的化合物，其中R3CR4是哌啶或N-取代的哌啶。
16.如權利要求1-3、6或7中任一項所述的化合物，其中X是S和W，Y和Z獨立為C或CR10。
17.如權利要求1所述的化合物，其中的化合物選自3-溴-5-氯-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺；4-溴-5-氯-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺；2，5-二氯-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]噻吩-3-磺醯胺；4，5-二氯-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺；N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S)-1-(羥甲基)-2-甲基丙基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S)-1-(羥甲基)-2-甲基丙基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1R)-1-(羥甲基)-2-甲基丙基]噻吩-2-磺醯胺；4，5-二溴-N-[(1S)-1-(羥甲基)-2-甲基丙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S)-1-環己基-2-羥乙基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S)-1-環己基-2-羥乙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[1-(羥甲基)-2-苯基丙基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[1-(羥甲基)-2-苯基丙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2R)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2R)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺1，1-二氧化物；5-氯-N-[1-(羥甲基)-2，3-二甲基戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[1-(羥甲基)-2-甲基戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[2-乙基-1-(羥甲基)己基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[2-羥基-1-(2，4，6-三甲基環己-3-烯-1-基)乙基]噻吩2-磺醯胺；5-氯-N-(1-環己-3-烯-1-基-2-羥乙基)噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-(1-環戊基-2-羥乙基)噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S)-1-(羥甲基)-1，2-二甲基丙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S)-1-(羥甲基)-1，2-二甲基丙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2R)-1-(羥甲基)-2，4-二甲基戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2R)-1-(羥甲基)-2-(4-甲氧基苯基)丙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2R)-1-(羥甲基)-2-甲基辛基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S)-2-乙基-1-(羥甲基)丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2R)-2-乙基-1-(羥甲基)-4-甲基戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2R)-1-(羥甲基)-2-(4-甲氧基苯基)丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2S)-2-乙基-1-(羥甲基)戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2R)-1-(羥甲基)-4-甲基-2-丙基戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2R)-1-(羥甲基)-2-(4-甲氧基苯基)戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2R)-1-(羥甲基)-2-丙基辛基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2R)-1-(羥甲基)-2-苯基戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基庚基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S)-2-丙基-1-(羥甲基)戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2S)-2-乙基-1-(羥甲基)庚基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2R)-1-(羥甲基)-2-異丁基庚基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2R)-1-(羥甲基)-2-(4-甲氧基苯基)庚基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2R)-1-(羥甲基)-2-戊基辛基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2R)-1-(羥甲基)-2-苯基庚基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-苯基丙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-4-甲基-2-苯基戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2R)-2-(2-呋喃基)-1-(羥甲基)丙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2R)-2-(2-呋喃基)-1-(羥甲基)丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2R)-2-(2-呋喃基)-1-(羥甲基)-4-甲基戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2R)-2-(2-呋喃基)-1-(羥甲基)辛基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-異丙基辛基]噻吩-2-磺醯胺；N-[(1S，2S)-2-[1，1』-聯苯]-4-基-1-(羥甲基)丙基]-5-氯噻吩-2-磺醯胺；N-[(1S，2S)-2-[1，1』-聯苯]-4-基-1-(羥甲基)丁基]-5-氯噻吩-2-磺醯胺；N-[(1S，2S)-2-[1，1』-聯苯]-4-基-1-(羥甲基)-4-甲基戊基]-5-氯噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2R)-1-(羥甲基)-2，4-二甲基戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2R)-1-(羥甲基)-2-甲基辛基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S)-2-乙基-1-(羥甲基)丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2R)-2-乙基-1-(羥甲基)-4-甲基戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2S)-2-乙基-1-(羥甲基)戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2R)-1-(羥甲基)-4-甲基-2-丙基戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2S)-2-乙基-1-(羥甲基)庚基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2R)-1-(羥甲基)-2-異丁基庚基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2R)-1-(羥甲基)-2-(4-甲氧基苯基)庚基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2R)-1-(羥甲基)-2-戊基辛基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-苯基丙基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-苯基丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-4-甲基-2-苯基戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-4-甲基-2-吡啶-3-基戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2R)-2-(2-呋喃基)-1-(羥甲基)丙基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2R)-2-(2-呋喃基)-1-(羥甲基)丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2R)-2-(2-呋喃基)-1-(羥甲基)-4-甲基戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2R)-2-(2-呋喃基)-1-(羥甲基)辛基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2S)-2-乙基-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-異丙基-4-甲基戊基]噻吩-2-磺醯胺；N-[(1S，2S)-2-[1，1』-聯苯]-4-基-1-(羥甲基)丁基]-5-溴噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2R)-2-乙基-1-(羥甲基)辛基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2S)-2-乙基-1-(羥甲基)辛基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2R)-2-乙基-1-(羥甲基)辛基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(1S，2S)-2-乙基-1-(羥甲基)辛基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(1S)-1-(羥甲基)-2-(甲基氨基)丁基]-2-噻吩磺醯胺；5-氯-N-[(1S)-2-(乙基氨基)-2-(羥甲基)丙基]-2-噻吩磺醯胺；5-氯-N-[(1S)-2-[(2-羥乙基)氨基]-1-(羥甲基)丙基]-2-噻吩磺醯胺；5-氯-N-[(1S)-2-[(2-羥乙基)氨基]-1-(羥甲基)丁基]-2-噻吩磺醯胺；5-氯-N-[(1S)-2-[(2-羥乙基)氨基]-1-(羥甲基)庚基]-2-噻吩磺醯胺；N-[(1S)-2-(苄基氨基)-1-(羥甲基)丙基]-5-氯-2-噻吩磺醯胺；N-[(1S)-2-(苄基氨基)-1-(羥甲基)丁基]-5-氯-2-噻吩磺醯胺；5-氯-N-[(1S)-2-(環戊基氨基)-1-(羥甲基)丙基]-2-噻吩磺醯胺；5-氯-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-N-(2-苯氧乙基)噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-(3-氯苄基)-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-2-羥基-1-苯基乙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[1-(羥甲基)戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-(2-羥基-1，1-二甲基乙基)噻吩-2-磺醯胺；N-[1，1-二(羥甲基)丙基]-5-氯噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[1-(羥甲基)環戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-2-環己基-1-(羥甲基)乙基]噻吩-2-磺醯胺；N-[(S)-1-苄基-2-羥乙基]-5-氯噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[1-(羥甲基)丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-1-(羥甲基)-2，2-二甲基丙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(R，R)-2-羥基-1-(羥甲基)-2-(4-硝基苯基)乙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-1-(羥甲基)丙基]噻吩-2-磺醯胺；N-[R-2-(苄基硫代)-1-(羥甲基)乙基]-5-氯噻吩-2-磺醯胺；N-[(R，S)-2-(苄氧基)-1-(羥甲基)丙基]-5-氯噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(R，R)-2-羥基-1-(羥甲基)丙基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(S)-2-羥基-1-苯基乙基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(S)-1-(羥甲基)-3-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[1-(羥甲基)戊基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-(2-羥基-1，1-二甲基乙基)噻吩-2-磺醯胺；N-[1，1-二(羥甲基)丙基]-5-溴噻吩-2-磺醯胺5-溴-N-[1-(羥甲基)環戊基]噻吩-2-磺醯胺5-溴-N-[(S)-2-環己基-1-(羥甲基)乙基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(S)-1-(羥甲基)-3-(甲基硫代)丙基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[1-(羥甲基)丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(S)-1-(羥甲基)-2，2-二甲基丙基]噻吩-2-磺醯胺；N-[R-2-(苄基硫代)-1-(羥甲基)乙基]-5-溴噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-(R-2-羥基-1-{[(3-甲基苄基)硫代]甲基}乙基)噻吩-2-磺醯胺；N-{(S)-1-[4-(苄氧基)苄基]-2-羥乙基}-5-溴噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[(R，R)-2-羥基-1-(羥甲基)丙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S，S)-1-甲醯基-2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S，S)-1-(1-羥乙基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S，S)-1-[環戊基(羥基)甲基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]辛基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]庚基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]己基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S)-2-羥基-3-甲基-1-[(S)-1-甲基丙基]丁基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S)-2-羥基-3，3-二甲基-1-[(S)-1-甲基丙基]丁基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S)-2-羥基-4-甲基-1-[(S)-1-甲基丙基]戊基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]丁-3-烯基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]戊-4-烯基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]丁基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S，S)-1-[(4-氟苯基)(羥基)甲基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N{(S，S)-1-[(4-氯苯基)(羥基)甲基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S)-2-羥基-4-甲基-1-[(S)-1-甲基丙基]戊-3-烯基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S)-2-羥基-3-甲基-1-[(S)-1-甲基丙基]丁-3-烯基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S，S)-1-[羥基(4-甲氧基苯基)甲基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S，E)-2-羥基-3-甲基-1-[(S)-1-甲基丙基]戊-3-烯基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S)-4-(1，3-二噁烷-2-基)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]丁基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]己-5-烯基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-((S，S)-1-{羥基[4-(甲基硫代)苯基]甲基}-2-甲基丁基)噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S，S)-1-[[4-(二甲基氨基)苯基](羥基)甲基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺醯胺；N-{(S，S)-1-[環戊基(羥基)甲基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺醯胺；N-{(S)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]辛基}噻吩-2-磺醯胺；N-{(S)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]庚基}噻吩-2-磺醯胺；N-{(S)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]己基}噻吩-2-磺醯胺；N-{(S，S)-1-[羥基(2-甲基苯基)甲基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺醯胺；N-{(S)-2-羥基-3，3-二甲基-1-[(S)-1-甲基丙基]丁基}噻吩-2-磺醯胺；N-{(S)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]丁-3-烯基}噻吩-2-磺醯胺；N-{(S)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]戊-4-烯基}噻吩-2-磺醯胺；N-{(S)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]丁基}噻吩-2-磺醯胺；N-{(S，S)-1-[羥基(4-甲氧基苯基)甲基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺醯胺；N-{(S)-4-(1，3-二噁烷-2-基)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]丁基}噻吩-2-磺醯胺；N-{(S)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]己-5-烯基}噻吩-2-磺醯胺；N-{(S)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]pent-3-ynyl}噻吩-2-磺醯胺；N-((S，S)-1-{羥基[4-(甲基硫代)苯基]甲基}-2-甲基丁基)噻吩-2-磺醯胺；N-{(S，S)-1-[[4-(二甲基氨基)苯基](羥基)甲基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S，S)-1-[(S)-環己-2-烯-1-基(羥基)甲基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S，S，E)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]己-4-烯基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S，R，E)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]己-4-烯基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S，R，E)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]庚-4-烯基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S，S)-2-羥基-4-甲基-1-[(S)-1-甲基丙基]戊-4-烯基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S，R)-2-羥基-4-甲基-1-[(S)-1-甲基丙基]戊-4-烯基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S，E)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]-5-苯基戊-4-烯基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S，S)-1-(1-羥基-1-甲基乙基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]-2-戊基庚基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S，S)-[羥基(二苯基)甲基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺醯胺；N-{(S)-2-烯丙基-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]戊-4-烯基}-5-氯噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S)-2-乙基-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]丁基}噻吩-2-磺醯胺；N-{(S，S)-1-[二(4-氯苯基)(羥基)甲基]-2-甲基丁基}-5-氯噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S)-2-羥基-2-異丙烯基-3-甲基-1-[(S)-1-甲基丙基]丁-3-烯基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-((S，S)-1-{羥基[二(4-甲氧基苯基)]甲基}-2-甲基丁基)噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S，E)-2-羥基-3-甲基-2-[(E)-1-甲基丙-1-烯基]-1-[(S)-1-甲基丙基]戊-3-烯基}噻吩-2-磺醯胺；N-{(S)-2-丁-3-烯基-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]己-5-烯基}-5-氯噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-((S，S)-1-{羥基[二(1-萘基)]甲基}-2-甲基丁基)噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-{(S)-2-乙基-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]丁基}噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-{(S)-2-羥基-2-異丙烯基-3-甲基-1-[(S)-1-甲基丙基]丁-3-烯基}噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-{(S，E)-2-羥基-3-甲基-2-[(E)-1-甲基丙-1-烯基]-1-[(S)-1-甲基丙基]戊-3-烯基}噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-{(S)-2-丁-3-烯基-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]己-5-烯基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[1-(羥甲基)環己基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[2-(羥甲基)二環[2.2.1]庚-2-烯基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[1-(羥甲基)-2，3-二氫-H-茚-1-基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[2-(羥甲基)-2，3-二氫-H-茚-2-基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[1-(羥甲基)環己基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[2-(羥甲基)二環[2.2.1]庚-2-烯基]噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-[2-(羥甲基)-2，3-二氫-H-茚-2-基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S，S)-1-[(S)-1-羥乙基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S，S)-1-[R-羥1-乙基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S，S)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]戊基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S，R)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]戊基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S，S)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]戊-4-烯基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S，R)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]戊-4-烯基}噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-{(S，S)-1-[(S)-1-羥乙基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-{(S，S)-1-[R-1-羥乙基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-{(S，S)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]戊基}噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-{(S，R)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]戊基}噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-{(S，S)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]戊-4-烯基}噻吩-2-磺醯胺；5-溴-N-{(S，R)-2-羥基-1-[(S)-1-甲基丙基]戊-4-烯基}噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S，S)-2-甲基-1-(2，2，2-三氟-1-羥乙基)丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[1-(1-羥基丁-3-烯基)環己基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[1-(1-羥基-3-甲基丁-3-烯基)環己基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-2-羥基-1-(4-甲氧基環己基)乙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-2-羥基-1-(4-丙氧基環己基)乙基]噻吩-2-磺醯胺；N-{(S)-1-[4-(烯丙氧基)環己基]-2-羥乙基}-5-氯噻吩-2-磺醯胺；N-{(S)-1-[4-(苄氧基)環己基]-2-羥乙基}-5-氯噻吩-2-磺醯胺；N-[1-乙醯基-4-(羥甲基)哌啶-4-基]-5-氯噻吩-2-磺醯胺；N-[(1S)-2-丁基-1-(羥甲基)己基]-5-氯-2-噻吩磺醯胺；N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-5-碘-2-噻吩磺醯胺；5-氟-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-2-噻吩磺醯胺；N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-2-羥基-1-(4-苄基氨基環己基)乙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-2-羥基-1-(4-甲基氨基環己基)乙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-2-羥基-1-(4-乙基氨基環己基)乙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-2-羥基-1-(4-正丙基氨基環己基)乙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-2-羥基-1-(4-烯丙基氨基環己基)乙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-2-羥基-1-(4-(3-吡啶基)甲基氨基環己基)乙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-2-羥基-1-(4-嗎啉代環己基)乙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-2-羥基-1-(4-(4-吡啶基)甲基氨基環己基)乙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-2-羥基-1-(4-(2-吡啶基)甲基氨基環己基)乙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-2-羥基-1-(4-(乙氧羰基甲基)氨基環己基)乙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-2-羥基-1-(4-羥基環己基)乙基]噻吩-2-磺醯胺5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-甲醯基丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(1-羥乙基)丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-2-乙基-1-(1-羥基-1-甲基乙基)丁基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-(2-羥基-1-四氫-H-噻喃-4-基乙基)噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-2-羥基-1-哌啶-4-基乙基]噻吩-2-磺醯胺；N-[(S)-2-乙基-1-(羥甲基)丁基]噻吩-2-磺醯胺；N-[(S)-2-乙基-1-(羥甲基)丁基]-5-氟噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-[(S)-1-(2，3-二氫-H-茚-2-基)-2-羥乙基]噻吩-2-磺醯胺；5-氯-N-{(S，S)-1-[(Z)-(肟基)甲基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺醯胺；以及5-氯-N-{(S，S)-1-[(E)-(肟基)甲基]-2-甲基丁基}噻吩-2-磺醯胺。
18.如權利要求1所述的化合物，其中是化合物是5-氯-N-[(1S)-2-乙基-1-(羥甲基)丁基]噻吩-2-磺醯胺。
19.如權利要求1或5所述的化合物，其中，X是O和W，Y和Z獨立選自C和CR10。
20.如權利要求19所述的化合物，其中，R6是滷素，R4是S-立體化學的低級烷基，R3是氫、R5是氫和R1和R2都是氫。
21.如權利要求1所述的化合物，其中，此化合物選自N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-2-呋喃磺醯胺和5-氯-N-[(1S，2S)-1-(羥甲基)-2-甲基丁基]-2-呋喃磺醯胺。
22.如權利要求1所述的化合物，其中，此化合物是4-[1-(5-氯-噻吩-2-磺醯氨基)-2-羥基-乙基]-哌啶-1-羧酸叔-丁酯。
23.如權利要求1-22中任一項所述的化合物，其中，藥學上可接受的鹽選自乙酸、乳酸、檸檬酸、酒石酸、琥珀酸、延胡索酸、馬來酸、丙二酸、苦杏仁酸、蘋果酸、鹽酸、溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、甲苯磺酸的鹽，鹼的鹽和它們的混合物。
24.含有如權利要求1-23中任一項所述化合物和藥學上可接受載體的藥物組合物。
25.在受試者中抑制β澱粉樣蛋白產生的方法，其特徵在於，所述方法包括輸遞如權利要求1-23中任一項所述化合物的步驟。
26.如權利要求25所述的方法，其中，所述化合物是口服或通過注射輸遞的。
27.在受試者中治療選自阿爾茨海默病、澱粉樣蛋白血管病、腦澱粉樣蛋白血管病、全身性澱粉樣變性、荷蘭型澱粉樣變性的遺傳性腦出血(包括體肌炎)和唐氏綜合症的疾病的方法，其特徵在於，所述方法包括以足以減輕所述疾病症狀或發展的量向所述受試者施用如權利要求1-23中任一項是化合物的步驟。
28.如權利要求1-23中任一項所述化合物或所述其可接受的鹽在製造治療劑中的應用。
29.如權利要求1-23中任一項所述化合物或所述可接受的鹽在製造可有效施用於哺乳類受試者以抑制β澱粉樣蛋白產生的治療劑中的應用。
30.如權利要求29所述的應用，其中，所述化合物是口服或通過注射施用的。
31.如權利要求1-23中任一項所述化合物或所述可接受的鹽在製造可有效施用於哺乳類受試者以治療選自阿爾茨海默病、澱粉樣蛋白血管病、腦澱粉樣蛋白血管病、全身性澱粉樣變性、荷蘭型澱粉樣變性的遺傳性腦出血(包括體肌炎)和唐氏綜合症的疾病中的應用，其中所述化合物是以足以減輕所述疾病症狀或發展的量施用的。
全文摘要
結構式(I)的化合物，其中和藥學上可接受的鹽、水合物和/或其前體藥物一起提供了R
文檔編號C07D277/32GK1503790SQ01820518
公開日2004年6月9日 申請日期2001年12月11日 優先權日2000年12月13日
發明者A·F·克雷夫特, D·C·科爾, K·R·沃勒, J·R·斯託克, G·迪亞馬尼蒂斯, D·M·庫爾布雷克, K·M·庫特雷爾, W·J·莫爾, D·S·卡斯貝爾, A F 克雷夫特, 卡斯貝爾, 庫爾布雷克, 庫特雷爾, 斯託克, 沃勒, 科爾, 莫爾, 鍬砟岬偎 申請人:惠氏, 亞魁裡公司, 惠 氏