電泳用的聚丙烯醯胺預製凝膠,其製法以及使用該凝膠的電泳法的製作方法
2023-12-09 11:34:06
專利名稱：電泳用的聚丙烯醯胺預製凝膠,其製法以及使用該凝膠的電泳法的製作方法
技術領域：
本發明涉及電泳用的聚丙烯醯胺預製凝膠，其製法以及使用該凝膠的電泳法。
電泳用的聚丙烯醯胺預製凝膠，是蛋白質、糖質、脂質等構成生物體的重要物質的檢測和定量分析試劑，在生物學、醫學、水產學、獸醫學等多個領域中作為基礎研究手段而廣泛使用。特別是，聚丙烯醯胺凝膠，由於是人工合成的物質，通過改變配方，容易製成分離特性不同的凝膠。因此，使用大量生產的預製凝膠，使預先具有各種分離特性，可以大大省略分析的時間，均勻而再現性良好，所以，在該領域，對生產及質量管理的貢獻程度大。大量生產的預製凝膠，在供給它時，可以期待保存穩定性良好。
早先，電泳用的聚丙烯醯胺凝膠，按照噢隆斯達尹〔L.Ornstein，Ann.N.Y.Acad.Sci.121，321～349(1964)〕和戴維斯〔B.J.Davis，Ann.N.Y.Acad.Sci，121，404～427(1964)〕提出的方法，以及，按照萊姆理〔U.K.Laemmli，Nature，227，680(1970)〕提出的方法，廣泛用於蛋白質的生物化學醫藥分析，使用者製造凝膠加以使用。特別是萊姆理的方法，通過往凝膠和電泳用緩衝液中添加十二烷基硫酸鈉(下面稱作SDS)，可簡便地推定蛋白質的分子量，得到廣泛普及。萊姆理的方法，作為凝膠緩衝液，使用三(羥甲基)氨基甲烷(下面稱作Tris)的鹽酸部分中和物，作為電泳緩衝液，使用Tris及甘氨酸鹽(萊姆理的電泳緩衝液)。在該法中，凝膠緩衝液，用鹽酸部分中和Tris的約10～20％(摩爾)溶液，使pH達到8.8(萊姆理的凝酸緩衝液)。然而，在萊姆理的凝膠緩衝液的pH，醯胺基經受隨時間而變的水解反應。凝膠的水解反應，因為即使在低溫條件下也能進行，所以，聚丙烯醯胺凝膠部分具有陰離子基團。結果是，蛋白質的電泳距離變短，同時，分離像變得不鮮明，凝膠不可能長期保存。
其次，粗略看一下核酸的電泳。隨著分子生物學的進展，必須進行DNA、RNA的分析製備，然而，在這種核酸分析中，經常採用瓊脂糖電泳法以及聚丙烯醯胺凝膠電泳法。核酸在中性緩衝液中顯示帶強陰電，其移動度，由於作為支持體的凝膠分子篩的效果，根據作為對象的核酸的大小，經常採用0.3～2％左右的瓊脂糖凝膠或3.5％～20％左右的聚丙烯醯胺凝膠。
瓊脂糖凝膠，因為具有較大的孔徑，可在高分子的核酸作為分離分析對象的場合使用。瓊脂糖凝膠，因其電滲透的強弱、凝膠強度、熔點等的不同而有許多種類。另外，瓊脂糖是天然產物，即使同一公司同一種產品，根據載荷，可以見到各種各樣性狀的差異。另外，在瓊脂糖電泳法用於製備，精製DNA的場合，各種雜質混入瓊脂糖中，限制酶、DNA聚合酶、DNA連接酶等酶活性受到阻礙，所以，要附加苯酚萃取等精製法。
一方面，聚丙烯醯胺凝膠具有較小的孔徑，可用於中分子～低分子核酸作為分離分析對象的場合。聚丙烯醯胺凝膠是合成的物質，具有化學高純度，所以，未發現瓊脂糖凝膠存在問題。另外，聚丙烯醯胺凝膠，通過改變配方，可容易地制出分離特性不同的凝膠。因此，採用大量生產的預製凝膠，使其預先具有各種分離能力，可大大省略分析時間，均勻而再現性良好，所以，在該領域對生產及質量管理的貢獻程度大。大量生產的聚丙烯醯胺凝膠，在供給它時，可以期待保存穩定性良好。在用於DNA電泳的場合，瓊脂糖凝膠以及聚丙烯醯胺凝膠的緩衝液，主要是含有pH7.8～8.3的乙二胺四醋酸(下面稱作EDTA)或乙二胺四醋酸二鈉(下面稱作ETA)的三-醋酸緩衝液(下面稱作TAE)、三-硼酸緩衝液(下面稱作TBE)、三-磷酸緩衝液(下面稱作TPE)，凝膠緩衝液是與電泳用緩衝液的組成相同的連續緩衝液體系。
如上所述，大量生產的預製凝膠，在供給它時，可以期待保存穩定性良好。保存穩定性良好的凝膠的製造方法，是含有由Tris、兩性電解質及酸構成的凝膠緩衝液，長期保存穩定性優良的，並且，可能測定的分子量範圍顯著擴大的聚丙烯醯胺凝膠的製造方法，已在特開平4-184163號公報中公開。採用該製造方法製造的聚丙烯醯胺電泳凝膠，可用於萊姆理電泳用緩衝液的分析，它是其中含有兩性電解質pH4.0～7.5的凝膠緩衝液的凝膠，在其實施例中，舉出pH6.9～7.4凝膠的製造，經過冷藏保存4個月，蛋白質的移動度未發生變化，是穩定的。
凝膠緩衝液，目的是用於抑制聚丙烯醯胺凝膠的水解，將Tris的中和率設定在高值，另外，電泳凝膠中Tris的強酸部分和Tris的弱酸部分在邊界附近的電位坡度變化，由於兩性電解質的添加而變緩，和使用萊姆理的凝膠緩衝液製成的凝膠測定對象具有同等的分級分子量範圍。
然而，含有pH6.9～7.4範圍的凝膠緩衝液的聚丙烯醯胺凝膠，當經過冷藏保存5個月以上時，蛋白質的移動度出現變化。另外，在板狀凝膠的情況下，聚丙烯醯胺凝膠其凝膠形狀發生變化，玻璃極板易發生滑動。結果是，電泳分析時的操作困難，由於玻璃極板的滑動，還產生凝膠的剝離等問題。當凝膠緩衝膠的pH在6.8以下時，可以推測其保存穩定性更加提高。然而會出現電泳時間變長，分離能力惡化的問題，與使用萊姆理的凝膠緩衝液製成的凝膠測定對象具有同等的分級分子量範圍的聚丙烯醯胺凝膠無法得到。
另外，在特表平9-512907號公報中，公開一種用於中性pH長壽命的預製電泳凝膠的體系。該體系的凝膠緩衝液含有pH在中性附近的一價有機胺或取代胺，用鹽酸滴定至pH在約6～7之間。上述體系的電泳用緩衝液含有選自MOPS、MES、ACES、MOPSO、TES、HEPES及TAPSO所組成的族群中的兩性離子，用氫氧化鈉或有機鹼滴定至pH約7。凝膠緩衝液、電泳用緩衝液是同時設定在中性，抑制聚丙烯醯胺凝膠的水解，同時，在蛋白質完全還原的狀態下進行分離的緩衝液體系。上述電泳用體系，可以穩定12個月。
然而，用特表平9-512907號公報中表示的體系，必須採用專用的分子量標記器。另外，特表平9-512907號公報表示的聚丙烯醯胺凝膠，當使用已知的電泳用緩衝液(例如，含有通用的甘氨酸的萊姆理電泳用緩衝液)時，電泳速度變得極慢，不可能在蛋白質的分離分析中使用。
聚丙烯醯胺凝膠，如果pH設定在中性～酸性領域，可以把聚丙烯醯胺凝膠的水解抑制到某種程度，變成保存穩定性良好的電泳凝膠。因此，把pH設定在中性～酸性領域的聚丙烯醯胺凝膠，可把保管的有效期限設定長，作為預製凝膠，可以大量生產使預先具有各種分離特性。也就是說，電泳用的聚丙烯醯胺預製凝膠，與作為蛋白質電泳法使用的電泳用緩衝液加以組合，進行DNA的分離分析，或者，與作為核酸電泳法通用的電泳用緩衝液加以組合，進行DNA的分離分析，如果都可能的話，使用者可以經濟而有效地進行分析。
為了解決上述課題，本發明的第一目的是提供一種冷藏保存6個月以上的蛋白質的分離能力以及凝膠形狀同時穩定，並且與使用萊姆理凝膠緩衝液製成的凝膠測定對象具有同等的分級分子量範圍的聚丙烯醯胺預製凝膠。
為了解決上述課題，本發明的第二目的是提供一種使用冷藏保存6個月以上穩定的電泳用的聚丙烯醯胺凝膠和核酸分離分析通用的電泳用緩衝液，進行DNA鮮明的分離分析的電泳法。
為了解決上述課題，本發明的第三目的是提供一種使用冷藏保存4個月以上穩定的可作為蛋白質分析用的電泳用的聚丙烯醯胺凝膠和蛋白質分析用的電泳用緩衝液，進行DNA鮮明的分離分析的電泳法。
本發明涉及一種電泳用的聚丙烯醯胺預製凝膠，其特徵是，在用於電泳用緩衝液的組成為含有三(羥甲基)氨基甲烷及兩性電解質的水溶液的電泳法的聚丙烯醯胺預製凝膠中，三(羥甲基)氨基甲烷的濃度為0.07mol/l～0.2mol/l的範圍，上述兩性電解質是由甘氨酸和1種以上的共存兩性電解質構成的，上述共存兩性電解質的鹼基解離常數的範圍為8.3＜pKb＜9.6，上述共存兩性電解質的添加量，為上述甘氨酸的0.1～30％(摩爾)，上述共存兩性電解質和上述甘氨酸的總濃度為0.1～0.3mol/l的範圍，另外，採用pH6.0～6.8範圍的緩衝液。
該聚丙烯醯胺預製凝膠，冷藏保存6個月以上，蛋白質的分離能力及凝膠的形狀均穩定，並且，與使用萊姆理的凝膠緩衝液製成的凝膠測定對象具有同等的分級分子量範圍。
上述共存兩性電解質是分子內具有相同數目陰離子性基團和陽離子性基團的胺基酸。
上述共存兩性電解質至少是絲氨酸、穀氨醯胺、色氨酸、消旋蛋氨酸以及苯丙氨酸中的任何一種。
另外，本發明涉及的電泳用的聚丙烯醯胺預製凝膠的製造方法，該法是把由丙烯醯胺、多官能交聯劑、水，以及下述(1)及(2)組成的緩衝液所構成的混合物，在pH6.0～6.8的條件下，在聚合引發劑存在下聚合成的。
(1)三(羥甲基)氨基甲烷的濃度為0.07mol/l～0.2mol/l，(2)兩性電解質是由甘氨酸和1種以上的共存兩性電解質所構成，
(a)上述共存兩性電解質的鹼解離常數為8.3＜pKb＜9.6，(b)上述共存兩性電解質的添加量，相對於上述甘氨酸為0.1～30％(摩爾)(c)上述共存兩性電解質和上述甘氨酸的總濃度為0.1～0.3mol/l。
採用該電泳用的聚丙烯醯胺預製凝膠的製造方法，可有效地製造出保存6個月以上，分離能力及形狀穩定性良好的電泳用聚丙烯醯胺預製凝膠。
另外，本發明涉及的電泳用的聚丙烯醯胺預製凝膠的使用方法，該法是採用含有十二烷基硫酸鹽存在下的三(羥甲基)氨基甲烷及甘氨酸的電泳用緩衝液，進行蛋白質的分離分析。
按照該方法，使用在蛋白質分離分析中通用的萊姆理電泳用緩衝液，與使用萊姆理的凝膠緩衝液製成的凝膠測定對象具有同等的分級分子量範圍是可能的。
另外，本發明涉及一種DNA的電泳方法，該法是採用具有下述(1)及(2)特徵的聚丙烯醯胺預製凝膠和含有三(羥甲基)氨基甲烷的電泳用緩衝液所構成。
(1)含在上述聚丙烯醯胺預製凝膠中的凝膠緩衝液，其中含有上述三(羥甲基)氨基甲烷、以甘氨酸作為必須的一種以上的兩性電解質以及一元酸，pH調節至6.0～7.5。
(2)含在上述凝膠緩衝液中的上述兩性電解質，是其鹼基解離常數為8.3＜pKb＜9.6、分子內具有相同數目的陽離子性基團和陰離子性基團的胺基酸。
上述凝膠緩衝液，其中至少含有一種作為上述一元酸的鹽酸及醋酸，以長期保存穩定性為目的，把pH調至6.0～6.5。
另外，上述凝膠緩衝液，其中至少含有一種作為上述一元酸的鹽酸及醋酸，以長期保存穩定性為目的，把pH調至6.5～7.5。
上述電泳用緩衝液，除三(羥甲基)氨基甲烷外，還含有(1)及(2)，pH調節至7.8～8.3。
(1)醋酸、磷酸及硼酸中的任何一種，以及(2)作為螯合劑的乙二胺四醋酸二鈉。
上述電泳用緩衝液，含有作為上述一元酸的硼酸。
上述電泳用緩衝液，除三(羥甲基)氨基甲烷以外，還含有兩性電解質，pH調節至7.8～8.3的範圍。
含在上述電泳用緩衝液中的上述兩性電解質為甘氨酸。
另外，含在上述電泳用緩衝液中的上述兩性電解質為甘氨酸，上述電泳用的緩衝液還含有十二烷基硫酸鹽。
本發明的具有長期保存穩定性的進行蛋白質分離分析的凝膠，該凝膠中所含的緩衝液的組成是由Tris、甘氨酸以及一種以上的共存兩性電解質構成的，凝膠中Tris的濃度為0.07mol/l～0.2mol/l，理想的為0.08mol/l～0.1mol/l。為了與用萊姆理的凝膠緩衝液製成的凝膠測定對象具有同等的電泳時間，該範圍是，所必須的凝膠中含有的前導離子量的範圍。凝膠中Tris的濃度低於0.07mol/l時，整個電泳緣不鮮明，難以用於蛋白質的分離分析。凝膠中Tris的濃度大於0.2mol/l時，凝膠中的前導離子濃度變高，電泳時間延長，分析作業效率變壞。
上述兩性電解質，是由甘氨酸和一種以上的共存兩性電解質構成的，上述共存兩性電解質的鹼解離常數範圍為8.3＜pKb＜9.6，理想的是9.0＜pKb＜9.6。單獨用甘氨酸時，在凝膠緩衝液的pH小於7的場合，與使用的萊姆理凝膠緩衝液製成的凝膠測定對象不可能具有同等的分級分子量範圍。另外，共存兩性電解質的pKb＜8.3時，由於pKb比Tris的低，使凝膠緩衝液的pH改變，可以大幅增大分級分子量範圍。在共存兩性電解質的pKb＞9.6的場合，由於鹼基解離常數比甘氨酸的高，無助於使凝膠內的電位坡度變化產生減緩作用。在共存兩性電解質中，當使用9.0＜pKb＜9.6的絲氨酸、色氨酸以及苯丙氨酸等時，依次從pKb低的向陽極一側移動，凝膠內的電位坡度變化變緩。因此，本發明的聚丙烯醯胺預製凝膠，與採用萊姆理的凝膠緩衝液製成的凝膠測定對象具有同等的分級分子量範圍。
本發明的共存兩性電解質的添加量，相對於甘氨酸為0.1～30％(摩爾)，理想的為1～20％(摩爾)。上述共存兩性電解質的添加量低於0.1％(摩爾)時，與使用萊姆理的凝膠緩衝液製成的凝膠測定對象具有同等的分級分子量範圍的效果不出現，反之，添加量大於30％(摩爾)時，由於凝膠上的電泳像不鮮明，所以，變得不耐用。
本發明的共存兩性電解質和甘氨酸的總濃度為0.1～0.3mol/l，理想的為0.1～0.2mol/l。兩性電解質濃度低於0.1mol/l，大於0.3mol/l時，凝膠上的電泳像不鮮明，變得不耐用。
本發明所用的兩性電解質，分子內最好具有同等數目的陰離子基團和陽離子基團。在本發明的凝膠緩衝液中，兩性電解質的全部陰離子性基團和全部陽離子性基團發生解離，變成電中性，在pH高於pKb時，只有陰離子性基團解離，陽離子性基團的解離受到抑制，帶負電。因此，上述兩性電解質實際上顯示的是一元弱酸的行為。
本發明的聚丙烯醯胺預製凝膠、其使用方法以及在其製造方法中使用的凝膠緩衝液的pH為6.0～6.8，理想的為6.3。當緩衝液的pH大於6.8時，聚丙烯醯胺凝膠的水解容易進行，保管有效期限不能很長。當凝膠緩衝液的pH低於6.0時，聚丙烯醯胺凝胺的穩定性良好，但蛋白質的電泳像不鮮明，變得不耐用。凝膠緩衝液的pH，在pH6.8時，冷藏保存6個月仍可使用，而在pH6.3時，由於接近丙烯醯胺本身的pH，所以水解速度較pH6.8時顯著減少。結果是，保持1年的長時間，凝膠的形狀及電泳像均未見變化，是穩定的。
本發明的聚丙烯醯胺預製凝膠使用方法，是使用含Tris及兩性電解質的電泳用緩衝液進行蛋白質分離分析的方法，特別是希望使用組成為Tris0.025mol/l、甘氨酸0.192mol/l、SDS 0.1％(重量)的電泳用緩衝液。該電泳用緩衝液其組成是按照萊姆理所提出的凝膠緩衝液，由於作為蛋白質分離分析方法的廣泛普及，使用者可經濟、有效地進行分析。甘氨酸以外的兩性電解質，例如，即使使用含有MOPS的電泳用緩衝液也可以進行蛋白質的分離分析，然而，凝膠的分級分子量範圍比使用廣泛普及的萊姆理凝膠緩衝液製成的分級分子量範圍廣。
本發明的聚丙烯醯胺預製凝膠的製造方法，除了調節凝膠緩衝液的pH以及添加兩性電解質以外，可以按照早先已知的電泳用的聚丙烯醯胺凝膠的製造方法進行製造。例如，作為與丙烯醯胺共存用於交聯目的的水溶性二乙烯化合物，採用最多的是N，N』-亞甲基雙丙烯醯胺(下面簡稱BIS)，另外，N，N』一二烯丙基酒石酸醯胺等一般的二乙烯化合物也可以使用。
在本發明的聚丙烯醯胺預製凝膠製法的單體水溶液中，為了使其對凝膠具有彈力性，提高凝膠強度，可以含有瓊脂糖、聚丙烯醯胺、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚環氧乙烷、聚甲基乙烯醚等水溶性聚合物，還可以與其他的單體共聚。
在本發明的聚丙烯醯胺預製凝膠的製法中，單體的聚合是通過聚合引發劑、紫外線照射以及電離性射線的照射所生成的自由基進行的。作為聚合引發劑，可以採用過硫酸銨(下面稱作APS)等過氧化物以及，N，N，N』，N』-四甲基乙二胺(下面稱作TEMED)等還原劑並用的氧化還原型聚合引發劑，然而，對此未作特別的限定。上述過氧化物及還原劑，相對於全部單體使用0.05～5％(重量/體積)。聚合溫度，只要是能使引發劑發揮作用的溫度即可，未作特別限定，然而，通常15～50℃是理想的.
下面，使用在核酸的分離分析中通用的電泳用緩衝液，採用保存穩定性良好的本發明聚丙烯醯胺預製凝膠，對DNA的電泳法加以說明。
凝膠緩衝液含有包括Tris、及甘氨酸在內的一種或二種以上的兩性電解質及一元酸，理想的是Tris、甘氨酸、鹼基解離常數為8.3＜pKb＜9.6的分子內具有同樣數目的陽離子性基團和陰離子性基團的胺基酸、鹽酸及醋酸。如果其中不含包括甘氨酸在內的一種或二種以上的兩性電解質，通過把凝膠緩衝液的pH設定在酸性一側，Tris的中和率提高，電泳凝膠中Tris的強酸部分和Tris的弱酸部分邊界附近的電位坡度變化變得非常大。因此，在邊界附近，分離對象易於收縮，凝膠的分級分子量範圍變得非常窄。另外，由於電泳時間非常長，從作業效率看，是不理想的。
甘氨酸，即使在凝膠緩衝液pH下降的場合，在電泳凝膠中Tris的強酸部分和Tris的弱酸部分的邊界附近，電位坡度的變化緩慢，與使用TBE以及噢隆斯特尹·戴維斯的凝膠緩衝液的凝膠具有同樣的分級分子量範圍是必要的。然而，凝膠緩衝液的pH愈接近酸性側時，單獨用甘氨酸，電位坡度變化的調節力愈不充分。這樣，在凝膠緩衝液中，由於甘氨酸和鹼基解離常數為8.3＜pKb＜9.6的分子內具有相同數目的陽離子性基團和陰離子性基團的胺基酸共存，則電泳凝膠中的電位坡度可能變得更加平緩。
與甘氨酸共存的胺基酸的pKb為8.3＜pKb＜9.6，理想的為9.0＜pKb＜9.6。當與甘氨酸共存的胺基酸pKb＜8.3時，由於pKb比Tris的低，從而使凝膠緩衝液的pH改變，另外，凝膠的分級分子量範圍大幅度增大。當與甘氨酸共存的胺基酸pKb＞9.6時，由於pKb比Tris的高，所以，無助於凝膠內電位坡度變化變緩的作用。當在凝膠緩衝液中使用9.0＜pKb＜9.6的胺基酸時，則從pKb低的，依次向陽極側移動，電泳凝膠內的電位坡度變平緩。9.0＜pKb＜9.6的胺基酸包括絲氨酸，色氨酸和苯丙氨酸等，然而，理想的是絲氨酸。
另外，與甘氨酸共存的胺基酸，其分子內最好具有相同數目的陰離子性基團和陽離子性基團。胺基酸，在pH較pKb稍低時，全部的陰離子性基團和全部的陽離子性基團發生解離，變成電中性，在pH較pKb高時，只有陰離子性基團解離，而陽離子性基團的解離受到抑制，帶負電。因此，上述胺基酸，顯示的實際上是一元弱酸的行為，可作為假弱酸使用。預先在緩衝液中添加假弱酸，可以使電泳凝膠中Tris的弱酸部分電阻值降低，而且，在強酸根存在下，由於pH降低，變成電中性，無助於電導。
另外，凝膠緩衝液的pH為6.0～7.5，理想的為6.0～6.5。在pH大於7.5的場合，聚丙烯醯胺凝膠經受隨時間變化的水解，則預製凝膠的保管有效期限不可能長。在pH低於6.0的場合，聚丙烯醯胺凝膠的穩定性變好，然而，當Tris的中和率過高時，損害了作為緩衝液的功能。凝膠緩衝液的pH，為了使在聚丙烯醯胺預製凝膠中具有長期保存穩定性，希望接近丙烯醯胺本身的pH值。
另外，電泳用緩衝液，含有Tris及螯合劑和醋酸、磷酸及硼酸的任何一種酸，理想的是硼酸。凝膠緩衝液的pH設定在6.0～6.5時，當使用噢隆斯特尹·戴維斯的電泳用緩衝液時，電泳像不鮮明，不能進行DNA的分離分析。本發明中使用的TBE的組成為0.0892mol/l(Tris)、0.0890mol/l(硼酸)以及0.0025mol/l(ETA)，pH希望在8.3。上述組成的緩衝液，由於在核酸的分離分析中廣泛使用TBE，使用者可以有效地進行分析。另外，可在短時間完成電泳，得到非常鮮明的電泳像。即使使用TAE或TPE，也可以進行DNA的分離分析，然而，要花費電泳時間，與TBE相比，分析效率變差。
下面，採用本發明的在蛋白質電泳法中通用的電泳用緩衝液和本發明使用的保存穩定性良好的聚丙烯醯胺預製凝膠，對NDA的電泳法進行說明。
凝膠緩衝液含有Tris和甘氨酸，或者，含有Tris和包括甘氨酸在內的一種或二種以上的兩性電解質及一元酸，理想的是Tris、甘氨酸、鹼基解離常數範圍為8.3＜pKb＜9.6的分子內具有相同數目陽離子性基團和陰離子性基團的胺基酸、鹽酸及醋酸。在凝膠緩衝液中，如不含有包括甘氨酸在內的一種或二種以上的兩性電解質，通過把凝膠緩衝液的pH設定在酸性一側，則Tris的中和率提高，在電泳凝膠中Tris的強酸部分和Tris的弱酸部分的邊界附近，電位坡度的變化非常大。因此，在邊界附近，分離對象易收縮，分級分子量範圍變得非常窄。另外，由於電泳時間變得非常長，從作業效率考慮，是不理想的。
即使凝膠緩衝液的pH下降，在電泳凝膠中Tris的強酸部分和Tris的弱酸部分的邊界附近，電位坡度的變化變緩，為了與採用TBE及噢隆斯特尹·戴維斯的凝膠緩衝液的凝膠，具有同樣的分級分子量範圍，甘氨酸必須在凝膠緩衝液中。然而，凝膠緩衝液的pH愈達到酸性一側，單獨用甘氨酸，調節電位坡度變化的力愈不充分。這樣，在凝膠緩衝液中，通過使甘氨酸和鹼基解離常數的範圍為8.3＜pKb＜9.6的分子內具有相同數目的陽離子性基團和陰離子性基團的胺基酸共存，可能使電泳凝膠中的電位坡度更加變緩.
與甘氨酸共存的胺基酸的pKb為8.3＜pKb＜9.6，理想的為9.0＜pKb＜9.6。當胺基酸的pKb為pKb＜8.3的場合，由於pKb比Tris的低，使凝膠緩衝液的pH改變，另外，分級分子量範圍大大變寬。當胺基酸的pKb為pKb＞9.6的場合，因為pKb比甘氨酸高，無助於凝膠內電位坡度的變化變緩。當使用9.0＜pKb＜9.6的胺基酸時，從pKb低的依次往陽極一側移動，則電泳凝膠內的電位坡度變緩。在9.0＜pKb＜9.6的胺基酸中有絲氨酸、色氨酸和苯丙氨酸等，理想的是絲氨酸。
另外，與甘氨酸共存的胺基酸，希望其分子內具有相同數目的陰離子性基團和陽離子性基團。與甘氨酸共存的胺基酸，在pH較pKb稍低時，全部陰離子性基團和全部陽離子性基團解離，變成電中性，在pH較pKb高時，只有陰離子性基團解離，由於陽離子基團受到抑制，從而帶負電。因此，上述胺基酸顯示出實際上是作為一元弱酸的行為，可作為假弱酸使用。在凝膠緩衝液中預先添加假弱酸，可使電泳凝膠中Tris的弱酸部分的電阻值降低，並且，在強酸根存在下，由於pH降低，達到電中性，無助於電導。
凝膠緩衝液的pH為6.5～7.5，理想的為6.5～7.0。當凝膠緩衝液的pH高於7.5時，聚丙烯醯胺凝膠發生隨時間變化的水解，預製凝膠的保管有效期限不可能長。當凝膠緩衝液的pH低於6.5時，聚丙烯醯胺凝膠的穩定性變好，然而，電泳像不鮮明，不耐用。
本發明所用的電泳用緩衝液，是含有Tris及甘氨酸的噢隆斯特尹·戴維斯的電泳用緩衝液。噢隆斯特尹·戴維斯的電泳用緩衝液的組成為0.025mol/l的Tris、0.192mol/l的甘氨酸，pH為8.3。上述組成的緩衝液，是蛋白質的分離分析中廣泛使用的電泳用緩衝液，作業者可以有效地進行分析，另外，可以得到非常鮮明的電泳像。
另外，也可以使用電泳用的緩衝液組成為0.025mol/l的Tris、0.192mol/l的甘氨酸、0.1％(w/v)SDS的作為蛋白質分析法所通用的萊姆理電泳用緩衝液。在DNA的分離分析和蛋白質的分離分析中可使用同樣的電泳用緩衝液，使作業效率提高、成本降低。
下面通過實施例說明本發明，然而，本發明又不受這些實施例所局限。
實施例1在橫向寬12cm、縱向寬10cm的長方形玻璃板和上部具有凹狀切口的同尺寸的玻璃板之間，插入厚度1mm的隔板和用來防止單體液體漏失的矽密封墊，組成玻璃極板。往丙烯醯胺的濃度10％(％T；液中的單體濃度總和。下同)、BIS濃度5％(％C；BIS濃度。下同)，以及表1中記載濃度的緩衝液的組成所構成的單體溶液中，分別添加APS以及TEMED並混合後，使APS達到0.0025mol/l以及使TEMED達到0.0075mol/l，把該溶液注入極板內，於25℃使其聚合，得到電泳用的聚丙烯醯胺凝膠。
採用上述得到的電泳用的聚丙烯醯胺凝膠，用從市場購得的蛋白質分子量標記器進行電泳，測定移動距離。蛋白質分子量標記器，用2-巰基乙醇、SDS進行處理，再添加7％(重量)的甘氨酸以及0.05％(重量)的溴酚藍(下面稱作BPB)供作試驗。電泳用的緩衝液的組成為Tris0.025mol/l、甘氨酸0.192mol/l、SDS為0.1％(重量)的萊姆理配方。電泳，用20mA的恆電流進行，BPB的電泳末端在離下部5mm的地方停上通電。染色，在0.25％(體積)的科麥西亮藍(クマシ-ブリリアントブル-、下面稱作CBB)G-250、10％(體積)的醋酸、30％(體積)的甲醇溶液中，用振蕩機進行45分鐘振蕩；脫色，在7％(體積)的醋酸、3％(體積)的甲醇溶液中，用振蕩機進行90分鐘振蕩。表2為製造後不久的移動度，而表3為於5℃保存6個月後的移動度。所謂移動度，即用參數表示的蛋白質移動距離。
(移動度％)＝(從池的下端至各帶位置的距離)/(從池的下端至BPB電泳末端的距離)×100
表1電泳凝膠緩衝液的組成
表2製造後不久的移動度(％)
表3 5℃保存6個月後的移動度(％)
使用凝膠緩衝液的酸中和率低的萊姆理凝膠緩衝液製成的凝膠，由於pH高，在長期保存時移動度降低，分離能力惡化。Tris的中和率升高，在凝膠緩衝液中只添加作為兩性電解質的甘氨酸時，長期保存時未發現移動度降低，然而，低分子區域未被檢出。另外，凝膠緩衝液的pH達到6.8時，添加聯甲苯胺(8.3＞pKb)作為甘氨酸和共存兩性電解質時，分級分子量範圍大幅度增大。
反之，作為甘氨酸和共存兩性電解質，當使用9.0＜pKb＜9.6的絲氨酸時，從pKb低的一側依次向陽極一側移動，凝膠內的電位坡度變化平緩。因此，Tris的中和率上升，即使緩衝液的pH達到6.8或6.3，仍與採用萊姆理凝膠緩衝液製成的凝膠測定對象具有同等的分級分子量範圍，另外，凝膠的長期保存，未見移動度降低。
實施例2採用與實施例1同樣的玻璃極板，使用丙烯醯胺濃度10％(％T)、BIS濃度5％(％C)以及表4中記載的濃度的緩衝液組成構成的單體溶液緩衝液組成，製造10％聚丙烯醯胺凝膠，把製成的凝膠於5℃下保存12個月。保存後，用騰西隆(テンシロン)萬能試驗機(株式會社ォリェンテツク，型式U-2129)把玻璃極板上下拉伸，測定其拉伸強度。結果示於表5。
表4電泳凝膠緩衝液的組成
表5玻璃極板的拉伸強度(kgf)
通過降低凝膠緩衝液的pH，不僅蛋白質的移動度，而且，預製凝膠的形狀也保持穩定。聚丙烯醯胺凝膠，當水解時，易發生膨潤，預製凝膠的玻璃極板易於滑動。在pH7.5時，凝膠的水解易於進行，錯開玻璃極板所必須的力(拉伸強度)，於5℃保存2個月後變成約1/3。反之，在凝膠緩衝液的pH6.8時，玻璃極板的拉伸強度，於5℃保存6個月時，與製造後不久保持相同的程度，另外，凝膠緩衝液的pH在6.3時，由於接近丙烯醯胺自身的pH，與pH6.8相比，凝膠的水解速度顯著減少。結果是，保存1年的長時間，未見凝膠形狀發生變化，是穩定的。
實施例3在橫向寬12cm、縱向寬10cm的長方形玻璃板和上部具有凹狀切口的同尺寸的玻璃板之間，插入厚1mm的隔板，組成玻璃極板。往丙烯醯胺濃度10％(％T)、BIS濃度5％(％C)以及表6記載的濃度的緩衝液組成所構成的單體溶液中，添加APS400ppm以及四甲基乙二胺(下面稱作TEMED)400ppm，混合後，把該溶液注入極板內，用常規方法使其聚合，得到電泳用的聚丙烯醯胺凝膠。
採用上述聚丙烯醯胺凝膠，使分子量已知的市場購得的標記DNA進行電泳，確認移動距離和帶的鮮明度。標記DNA是，30％(w/v)的蔗糖、含著色BPB的10mmol/l的Tris、以及1mmol/l的ETA、以及20mmol/l的氯化鈉溶液，用經鹽酸把pH調至7.9的緩衝液稀釋100倍，用於試驗。電泳用的緩衝液的組成是0.0892mol/l的Tris、0.0890mol/l的硼酸、2.5mmol/l的ETA。於200V的恆電壓進行電泳，把經BPB著色的電極液放入上部電極槽。BPB的電泳末端達到隔板下端時，通電中止。採用銀染色法進行染色。電泳後的凝膠，在50％(v/v)甲醇、5％(w/v)三氯醋酸、3.5％(w/v)磺基水揚酸水溶液中，浸透20分鐘，固定DNA，然後，用純淨水進行水洗15分鐘，進行2次。然後，把凝膠在8％碳酸鈉水溶液和1％(w/v)矽鎢酸、0.02％(w/v)硝酸銀、0.02％(w/v)硝酸銨、0.28％(v/v)甲醛水溶液以1∶1的比例加以混合的溶液中浸透，進行染色。7分鐘後，凝膠上出現帶，棄去染色液，於1％(v/v)醋酸中浸15分鐘，停止染色。結果是，可以檢出鮮明的DNA帶。各種DNA斷片的電泳距離對BPB電泳距離的相對位置作為移動度，記入表7中。
(移動度％)＝(從池的下端至各帶位置的距離)/(從池的下端至BPB電泳末端的距離)×100另外，各種凝膠的電泳時間記入表8中。
表6電泳凝膠緩衝液的組成
表7 DNA斷片的移動度(製造後不久)
表8電泳時間200V恆電壓
如表6、表7及表8所示，用凝膠緩衝液pH為6.3、6.8及7.5的各種聚丙烯醯胺凝膠，使用TBE對DNA斷片電泳的場合，任何一種均可得到鮮明的電泳像，DNA斷片的移動度以及電泳時間也幾乎相同。
比較例1採用與實施例3同樣的玻璃極板，使用由丙烯醯胺濃度10％(％T)、BIS濃度5％(％C)以及表9中記載的濃度的緩衝液組成構成的單體溶液，與實施例3同樣，製造電泳用的聚丙烯醯胺凝膠。用該聚丙烯醯胺凝膠，把分子量已知的市場購得的標記DNA進行電泳，確認移動距離和帶的鮮明度。電泳用緩衝液是使用了組成為0.025mol/l的Tris以及0.192mol/l的甘氨酸的噢隆斯特尹·戴維斯的電泳用緩衝液。各DNA斷片的電泳距離對BPB電泳距離之比作為移動度，示於表10。另外電泳時間示於表11。
表9電泳凝膠緩衝液的組成
表10 DNA斷片的移動度(製造後不久)
表11電泳時間20mA恆電流
如表9、表10及表11所示，採用凝膠緩衝液的pH為6.3的聚丙烯醯胺凝膠，使用噢隆斯特尹·戴維斯的電泳用緩衝液，進行DNA斷片電泳，DNA帶不鮮明，不可能檢出。
實施例4採用與實施例3同樣的玻璃極板，使用由丙烯醯胺濃度10％(％T)、BIS濃度5％(％C)以及表12中記載的濃度的緩衝液組成所構成的單體溶液，與實施例3同樣，製造電泳用的聚丙烯醯胺凝膠。把上述聚丙烯醯胺凝膠保管在5℃下，隔一定時間取出，使用與實施例3同樣的TBE，進行DNA斷片的電泳。電泳在200V的恆電壓下進行，在經過50分鐘時停止電泳，確認移動距離和帶的鮮明度。其結果示於表13、表14及表15。
表12電泳凝膠緩衝液的組成
表13 5℃下長期保存時，DNA斷片的移動度變化(試樣-8)
表14 5℃下長期保存時，DNA斷片的移動度變化(試樣-9)
表15 5℃下長期保存時，DNA斷片的移動度變化(試樣-10)
如表13所示，凝膠緩衝液的pH為7.5的聚丙烯醯胺凝膠，即使在5℃下也要發生隨時間變化的水解，由於產生陰離子基團，DNA的移動速度也變慢。當經過6個月時，低分子斷片不可能檢出。如表14所示，凝膠緩衝液的pH為6.8的聚丙烯醯胺凝膠，與pH7.5時相比，水解速度降低，然而，還是在5℃下，也是經過6個月，發現DNA的移動速度有大的變化。
與其相比，如表15所示，凝膠緩衝液的pH為6.3的聚丙烯醯胺凝膠，於5℃下，即使經過7個月，DNA的移動度、電泳像也未發現變化，是穩定的。
實施例5在橫向寬12cm、縱向寬10cm的長方形玻璃板和上部具有凹狀切口的同尺寸的玻璃板之間，插入厚度1mm的隔板，組成玻璃極板。往由丙烯醯胺濃度10％(％T)、BIS濃度5％(％C)以及表16中記載的濃度的緩衝液組成所構成的單體溶液中，添加APS 400ppm及TEMED 400PPm加以混合後，把該溶液注入極板內，用常規方法進行聚合，得到電泳用的聚丙烯醯胺凝膠。把分子量已知的市場購得的標記DNA，用上述聚丙烯醯胺凝膠進行電泳，確認移動距離和帶的鮮明度。標記DNA是把含30％(w/v)的蔗糖、含著色BPB的10mmol/l的Tris、1mmol/l的ETA以及20mmol/l的氯化鈉溶液，用經鹽酸調至pH7.9的緩衝液稀釋100倍，用於試驗。電泳用緩衝液是使用了0.025mol/l的Tris以及0.192mol/l的甘氨酸的噢隆斯特尹·戴維斯的電泳用緩衝液。電泳在20mA的恆電流下進行，把經BPB著色的電極液放入上部電極槽內。BPB的電泳末端達到隔板的下端時中止通電。用銀染色法染色。電泳後的凝膠，用50％(v/v)甲醇、5％(w/v)三氯醋酸、3.5％(w/v)磺基水揚酸水溶液浸透20分鐘使DNA固定，然後，用純淨水洗滌15分鐘，進行2次。然後，把凝膠浸透在8％碳酸鈉水溶液和1％(w/v)矽鎢酸、0.02％(w/v)硝酸銀、0.02％(w/v)硝酸銨、0.28％(v/v)甲醛水溶液以1∶1的比例加以混合的溶液中，進行染色。7分鐘後，帶呈現，棄去染色液，在1％(v/v)醋酸中浸15分鐘，使染色停止。結果是，可以檢出鮮明的DNA帶。各種DNA斷片電泳距離對BPB電泳距離的相對位置作為移動度，記入表17中。
(移動度％)＝(從池的下端至各帶位置的距離)/(從池的下端至BPB電泳末端的距離)×100另外，各種凝膠的電泳時間記入表18中。
表16電泳凝膠緩衝液的組成
表17 DNA斷片的移動度(製造後不久)
表18電泳時間20mA恆電流
如表16、表17及表18所示，用凝膠緩衝液的pH為7.5及6.8的各種聚丙烯醯胺凝膠，使用噢隆斯特尹·戴維斯的電泳用緩衝液對DNA斷片進行電泳的場合，均可得到鮮明的電泳像，DNA斷片的移動度及電泳時間，也與使用pH8.8的噢隆斯特尹·戴維斯的凝膠緩衝液的凝膠相同。
另外，試樣-12及試樣-13，於5℃保存時的移動度變化，示於表19及20。
表19 5℃下長期保存時，DNA斷片的移動度變化(試樣-12)
表20 5℃下長期保存時，DNA斷片的移動度變化(試樣-13)
比較例2採用與實施例5同樣的的玻璃極板，使用由丙烯醯胺濃度10％(％T)、BIS濃度5％(％C)以及表21中記載的濃度的緩衝液組成所構成的單體溶液，與實施例5同樣，製造電泳用的聚丙烯醯胺凝膠。使用上述聚丙烯醯胺凝膠，把分子量已知的市場購得的標記DNA進行電泳，確認移動距離與帶的鮮明度。電泳用緩衝液是使用了組成為0.025mol/l的Tris、以及0.192mol/l的甘氨酸的噢隆斯特尹·戴維斯的電泳用緩衝液。各種DNA斷片的電泳距離對BPB電泳距離之比作為移動度示於表22，電泳時間示於表23。
表21電泳凝膠緩衝液的組成
表22 DNA斷片的移動度(製造後不久)
表23電泳時間20mA恆電流
如表21、表22及表23所示，凝膠緩衝液，因其溶液中不含甘氨酸，在用Tris及鹽酸調節pH至7.5的情況下，電泳凝膠中Tris的強酸部分和Tris的弱酸部分的電位坡度上升，因分離對象在邊界附近易於收縮，故分級分子量範圍變得非常窄。另外，電泳時間也變得非常長，分析效率變差。
另外，比較試樣-6於5℃保存時的移動度變化示於表24。
表24 5℃下長期保存時，DNA斷片的移動變化(比較試樣-6)
實施例6用與實施例5同樣的玻璃極板，採用由丙烯醯胺濃度10％(％T)、BIS濃度5％(％C)以及實施例5的表16中記載的試樣-12、試樣-13濃度的緩衝液組成所構成的單體溶液，與實施例5同樣，製造電泳用的聚丙烯醯胺凝膠。採用電泳凝膠，把分子量已知的市場購得的標記DNA進行電泳，確認移動距離和帶的鮮明度。電泳用緩衝液是使用了0.025mol/l的Tris、0.192mol/l的甘氨酸以及0.1％(w/v)SDS的萊姆理電泳用緩衝液，用20mA的恆電流進行電泳。各種DNA斷片的電泳距離對BPB電泳距離之比作為移動度，記入表25。另外，電泳時間記入表26。
表25 DNA斷片的移動度(製造後不久)
表26電泳時間20mA恆電流
如表25及表26所示，作為電泳用緩衝液，即使使用含SDS的蛋白質分析通用的萊姆理的電泳用緩衝液，也可以進行DNA斷片鮮明的分離分析。
比較例3用與實施例6同樣的玻璃極板，使用由丙烯醯胺濃度10％(％T)、BIS濃度5％(％C)以及表27中記載的濃度的緩衝液組成所構成的單體溶液，與實施例6同樣，製造電泳用的聚丙烯醯胺凝膠。用上述聚丙烯醯胺凝膠，把分子量已知的從市場購得的標記DNA進行電泳，確認移動距離和帶的鮮明度。電泳用緩衝液是採用了組成為0.025mol/l的Tris、0.192mol/l的甘氨酸以及0.1％(重量/體積)SDS的萊姆理電泳用緩衝液。各種DNA斷面的電泳距離對BPB電泳距離之比作為移動度，示於表28，另外，電泳時間示於表29。
表27電泳凝膠緩衝液的組成
表28 DNA斷片的移動度(製造後不久)
表29電泳時間20mA恆電流
如表27、表28及表29所示，凝膠緩衝液中不含甘氨酸，使用含Tris以及經鹽酸調至pH7.5的電泳凝膠，採用萊姆理的電泳用緩衝液使DNA斷片電泳的場合，與採用噢隆斯特尹·戴維斯的電泳用緩衝液的場合同樣，分級分子量的範圍變得非常窄。另外，電泳時間也變得非常長，分析效率變壞。
本發明的電泳用的聚丙烯醯胺預製凝膠，其凝膠緩衝液中含有三(羥甲基)氨基甲烷和兩性電解質，由於把凝膠的pH設定在中性～酸性範圍，所以，聚丙烯醯胺凝膠的水解可抑制到某種程度，是保存穩定性良好的電泳凝膠。
因此，本發明的電泳用的聚丙烯醯胺預製凝膠，其保管有限期限可設定長時間，作為預製凝膠可預先大量生產使具有各種分離特性。也就是說，與本發明的聚丙烯醯胺預製凝膠加以組合，可用作蛋白質的電泳法使用的電泳用緩衝液，進行蛋白質及DNA的分離分析，另外，採用核酸電泳法通用的電泳用緩衝液，使DNA的分離分析成為可能。
因此，本發明的電泳用的聚丙烯醯胺預製凝膠，使用者可經濟而有效地進行分析，在工業上使用有很大的可能性。
權利要求
1.一種電泳用的聚丙烯醯胺預製凝膠，在該用於電泳法的預製凝膠中，含有的電泳用緩衝液是其組成為含三(羥甲基)氨基甲烷及兩性電解質的水溶液，其特徵是，(1)三(羥甲基)氨基甲烷的濃度為0.07mol/l～0.2mol/l，(2)兩性電解質由甘氨酸和1種以上的共存兩性電解質所構成，(a)上述共存兩性電解質的鹼基解離常數範圍為8.3＜pKb＜9.6(b)上述共存兩性電解質的添加量，相對於上述甘氨酸為0.1～30％(摩爾)，(c)上述共存兩性電解質和上述甘氨酸的總濃度為0.1～0.3mol/l，以及，(3)採用pH6.0～6.8範圍的緩衝液進行配製。
2.如權利要求1所述的電泳用聚丙烯醯胺預製凝膠，其特徵是，上述共存兩性電解質的分子內具有同樣數目的陰離子性基團和陽離子性基團。
3.如權利要求1或2所述的電泳用的聚丙烯醯胺預製凝膠，其特徵是，上述共存兩性電解質為絲氨酸、穀氨醯胺、色氨酸，消旋蛋氨酸以及苯丙胺酸中的任何一種。
4.一種電泳用的聚丙烯醯胺預製凝膠使用方法，其特徵是，採用權利要求1～3中記載的電泳用預製凝膠和含有三(羥甲基)氨基甲烷及甘氨酸的電泳緩衝液，進行蛋白質的分離分析。
5.一種電泳用的聚丙烯醯胺預製凝膠的製造方法，其把丙烯醯胺、多官能團交聯劑、水以及下述(1)及(2)組成的緩衝液構成的混合物，在pH6.0～6.8的條件下，在聚合引發劑存在下進行聚合，(1)三(羥甲基)氨基甲烷的濃度為0.07mol/l～0.1mol/l，以及(2)兩性電解質是由甘氨酸和1種以上的共存兩性電解質所構成，(a)上述共存兩性電解質的鹼基解離常數為8.3＜pKb＜9.6，(b)上述共存兩性電解質的添加量，相對於上述甘氨酸為0.1～30％(摩爾)，以及(c)上述共存兩性電解質和上述甘氨酸的總濃度為0.1～30％(摩爾)。
6.一種電泳用的聚丙烯醯胺預製凝膠的使用方法，採用含有十二烷基硫酸鹽的三(羥甲基)氨基甲烷以及甘氨酸的電泳用緩衝液，進行蛋白質的分離分析。
7.一種DNA的電泳法，其中，採用具有下述(1)及下述(2)特徵的聚丙烯醯胺預製凝膠和含有三(羥甲基)氨基甲烷的電泳用緩衝液，(1)在上述聚丙烯醯胺預製凝膠中所含的凝膠緩衝液，含有三(羥甲基)氨基甲烷、甘氨酸作為必須的一種以上的兩性電解質以及一元酸，pH調至6.0～7.5，以及(2)上述凝膠緩衝液中所含的上述兩性電解質，是含有鹼基解離常數為8.3＜pKb＜9.6的分子內具有同等數目的陽離子性基團和陰離子性基團的胺基酸。
8.如權利要求7所述的DNA電泳法，其中，上述凝膠緩衝液，至少含有一種作為上述一元酸的鹽酸以及醋酸，把作為長期保存穩定性目的的pH調節至6.0～6.5。
9.如權利要求7所述的DNA電泳法，其中，上述凝膠緩衝液，至少含有一種作為上述一元酸的鹽酸以及醋酸，把作為長期保存穩定性目的的pH調節至6.5-7.5。
10.如權利要求7所述的DNA電泳法，其中，上述電泳用的緩衝液，除三(羥甲基)氨基甲烷以外，還含有下述(1)及下述(2)，pH調至7.8～8.3。(1)醋酸、磷酸及硼酸中的任何一種，以及(2)作為螯合劑的乙二胺四醋酸二鈉。
11.如利要求7或10所述的DNA電泳法，其中，上述電泳用的緩衝液含有作為上述一元酸的硼酸。
12.如權利要求7、10及11中任何一項所述的DNA電泳法，其中，上述電泳用的緩衝液，除含有三(羥甲基)氨基甲烷以外，還含有兩性電解質，pH調至7.8～8.3。
13.如權利要求7、10、11及12中任何一項所述的DNA電泳法，其中，上述電泳用的緩衝液中含有的上述兩性電解法為甘氨酸。
14.如權利要求7、10、11及12中任何一項所述的DNA電泳法，其中，上述電泳用緩衝液中含有的上述兩性電解質是甘氨酸，而上述電泳用的緩衝液還含有十二烷基硫酸鹽。
全文摘要
本發明的電泳用的聚丙烯醯胺預製凝膠,含有Tris和甘氨酸,或Tris、甘氨酸和一種以上的兩性電解質以及一元酸,還含有調整至特定pH範圍的凝膠緩衝液。上述凝膠,即使冷藏保存6個月以上,在用通用的萊姆理緩衝液進行蛋白質電泳的場合,或者在DNA電泳時採用含通用的Tris、以及螯合劑,和醋酸、磷酸、硼酸中的任何一種酸的電泳用緩衝液,使DNA進行電泳時,可以得到與製造後不久同樣的分離能力和鮮明的電泳像。
文檔編號G01N27/447GK1327537SQ00802294
公開日2001年12月19日 申請日期2000年11月30日 優先權日1999年12月2日
發明者鈴木美香 申請人:海茂株式會社